CA2239807A1 - Procede pour reduire la reactivite de surface de copolymeres obtenus par polymerisation electrochimique - Google Patents
Procede pour reduire la reactivite de surface de copolymeres obtenus par polymerisation electrochimique Download PDFInfo
- Publication number
- CA2239807A1 CA2239807A1 CA002239807A CA2239807A CA2239807A1 CA 2239807 A1 CA2239807 A1 CA 2239807A1 CA 002239807 A CA002239807 A CA 002239807A CA 2239807 A CA2239807 A CA 2239807A CA 2239807 A1 CA2239807 A1 CA 2239807A1
- Authority
- CA
- Canada
- Prior art keywords
- treatment
- polymer
- electrochemical
- process according
- copolymer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Abandoned
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G61/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbon-to-carbon link in the main chain of the macromolecule
- C08G61/12—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule
- C08G61/122—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides
- C08G61/123—Macromolecular compounds containing atoms other than carbon in the main chain of the macromolecule derived from five- or six-membered heterocyclic compounds, other than imides derived from five-membered heterocyclic compounds
Abstract
L'invention est relative à un procédé de préparation d'un copolymère de formule générale (I) par copolymérisation électrochimique d'un composé de formule générale (II) avec un composé, ¢A! représentant une unité monomère d'un polymère susceptible d'être obtenu par copolymérisation électrochimique, ¢B! représentant un groupe latéral qui peut être un monomère ou un polymère, lié à l'unité ¢A! par liaison covalente, ou par l'intermédiaire d'un bras espaceur, et x et y représentant des nombres entiers égaux ou supérieurs à 1, lequel procédé comprend un traitement permettant de réduire la réactivité de surface dudit copolymère.
Description
W O 97n2648 PCT/FR96/02003 PROCEDE POUR REDUIRE LA REA~llv l-L15 DE S~.RFACE DE
COPOLYM~ O~L~NUS PAR POLYMERISATION ELECT~OCHIMIQUE.
La présente Invention est relative au traite-ment de polymères synthétisés par voie électrochimique, en vue de leur utilisation pour la construction de matri-ces adressées.
La construction de matrices de composés ayant une a~inité pour des produits biologiques, par exemple des matrices de peptides, d'oliyonucléotides, de récep-teurs, etc... peut être réalisée de plusieurs ~açons.Trois méthodes ont été principalement décrites : le dépôt photochimiquement dirigé [FODOR S. et al., Science, 251, 767-773, (1991)], le dépôt mécanique [KHR~PKO K.R. et al., DNA Sequencing and Mapping, 1, 375-338, (1991)] ou le dépôt électrochimiquement dirigé [D~m~n~ internatio-nale PCT publiée sous le numéro WO 94/22889 ; LIVACHE et al., Nucl. Acids. Res. 22, 15, 2615-2921 (19g4)3.
Les dépôts d'oligonucléotides sur les di~é-rents points du support peuvent être réalisés soit par synthèse nucléotidique in situ [FODOR S. et al. ; DPm~n~
PCT WO 94/22889], soit par ~ixations successives d'oligonucléotides synthétisés préalablement [FODOR S. et al. ; KHRAPKO K.R. et al. ; D~m~n~P PCT WO 9~/22889].
Dans le premier cas, l'on procède à un lavage de toute la sur~ace du support après chaque addition de nucléotide. Ce lavage sert simplement à éliminer l'excès de r~acti~ présent sur le support ; il n'est en rien lié
à la nature même du support.
Dans le second cas (~ixations successives d'oligonucléotides) deux types de traitement sont dé-crits ; certains auteurs [(SAIKI R.K. et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 89, 6230-6234, (1989), KRAPKO et al (déjà
cité) ou LAMTUR~ et al., Mucl. Acids. Res., 22, 2121-212~, (1994)] procèdent à un seul lavage ~inal du support après la ~ixation de tous les oligonucléotides. Ce lavage à l'eau, ou dans un tampon d'hybridation permet
COPOLYM~ O~L~NUS PAR POLYMERISATION ELECT~OCHIMIQUE.
La présente Invention est relative au traite-ment de polymères synthétisés par voie électrochimique, en vue de leur utilisation pour la construction de matri-ces adressées.
La construction de matrices de composés ayant une a~inité pour des produits biologiques, par exemple des matrices de peptides, d'oliyonucléotides, de récep-teurs, etc... peut être réalisée de plusieurs ~açons.Trois méthodes ont été principalement décrites : le dépôt photochimiquement dirigé [FODOR S. et al., Science, 251, 767-773, (1991)], le dépôt mécanique [KHR~PKO K.R. et al., DNA Sequencing and Mapping, 1, 375-338, (1991)] ou le dépôt électrochimiquement dirigé [D~m~n~ internatio-nale PCT publiée sous le numéro WO 94/22889 ; LIVACHE et al., Nucl. Acids. Res. 22, 15, 2615-2921 (19g4)3.
Les dépôts d'oligonucléotides sur les di~é-rents points du support peuvent être réalisés soit par synthèse nucléotidique in situ [FODOR S. et al. ; DPm~n~
PCT WO 94/22889], soit par ~ixations successives d'oligonucléotides synthétisés préalablement [FODOR S. et al. ; KHRAPKO K.R. et al. ; D~m~n~P PCT WO 9~/22889].
Dans le premier cas, l'on procède à un lavage de toute la sur~ace du support après chaque addition de nucléotide. Ce lavage sert simplement à éliminer l'excès de r~acti~ présent sur le support ; il n'est en rien lié
à la nature même du support.
Dans le second cas (~ixations successives d'oligonucléotides) deux types de traitement sont dé-crits ; certains auteurs [(SAIKI R.K. et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 89, 6230-6234, (1989), KRAPKO et al (déjà
cité) ou LAMTUR~ et al., Mucl. Acids. Res., 22, 2121-212~, (1994)] procèdent à un seul lavage ~inal du support après la ~ixation de tous les oligonucléotides. Ce lavage à l'eau, ou dans un tampon d'hybridation permet
2 PCT/FR96/02003 d'eliminer les sondes n'ayant pas reagi sur le support.
Dans le même but, LIVACHE et al. rincent le support à
l'eau entre chaque fixation d'oligonucléotide ; il y a donc, dans ce cas autant de rinçages qu'il y a de coupla-ges d'oligonucléotides.
Cependant, les Inventeurs ont constaté que lorsque plusieurs depôts de polymères obtenus de façon electrochimique sont e~fectués en des points di~ferents d'une même matrice d'électrode, des contaminations spora-diques inter-électrodes peuvent avoir lieu. En effet, lors de la synthèse d'un polymère sur l'électrode numéro n en presence de l'oligonucléotide n, une contamination par l'oligonucleotide n sur l'electrode n-l, dejà recou-verte par un oligonucleotide ~-1 peut être observee. Il s'en suit un signal faiblement positi~ du spot n-l lors de l'hybridation avec l'oligonucléotide n. Ce phenomène peut être illustre par les résultats de quatre hybrida-tions croisees citees dans la publication de LIVACHE et al., Nucl. Acids. Res. 22, 15, 2615-2921 (lg94). Sur les quatre depôts, deux cont~m;n~tions legères (environ 10 du signal m~mllm) sont visi~les. Elles avaient ete in-terpretees à l'epoque comme étant des hybridations non specifiques ; cependant, des expériences ultérieures des Inventeurs, impliquant des sequences oligonucléotidiques differentes ont montre ~u'il s'agissait en fait de conta-minations.
Il est important, pour une utilisation diag-nostique d'une matrice d'oligonucleotides couples à un support, que ce type de contaminations soit totalement elimine. Or, les traitements de lavage habituellement mis en oeuvre sont insu~isants pour obtenir ce résultat.
La présente Invention s'est ~ixe pour but le traitement spécifique de polymères obtenus de façon élec-trochimique, afin de ~;m;nner, voire d'annuler, les phé-nomènes de contamination sporadiques.
Dans le même but, LIVACHE et al. rincent le support à
l'eau entre chaque fixation d'oligonucléotide ; il y a donc, dans ce cas autant de rinçages qu'il y a de coupla-ges d'oligonucléotides.
Cependant, les Inventeurs ont constaté que lorsque plusieurs depôts de polymères obtenus de façon electrochimique sont e~fectués en des points di~ferents d'une même matrice d'électrode, des contaminations spora-diques inter-électrodes peuvent avoir lieu. En effet, lors de la synthèse d'un polymère sur l'électrode numéro n en presence de l'oligonucléotide n, une contamination par l'oligonucleotide n sur l'electrode n-l, dejà recou-verte par un oligonucleotide ~-1 peut être observee. Il s'en suit un signal faiblement positi~ du spot n-l lors de l'hybridation avec l'oligonucléotide n. Ce phenomène peut être illustre par les résultats de quatre hybrida-tions croisees citees dans la publication de LIVACHE et al., Nucl. Acids. Res. 22, 15, 2615-2921 (lg94). Sur les quatre depôts, deux cont~m;n~tions legères (environ 10 du signal m~mllm) sont visi~les. Elles avaient ete in-terpretees à l'epoque comme étant des hybridations non specifiques ; cependant, des expériences ultérieures des Inventeurs, impliquant des sequences oligonucléotidiques differentes ont montre ~u'il s'agissait en fait de conta-minations.
Il est important, pour une utilisation diag-nostique d'une matrice d'oligonucleotides couples à un support, que ce type de contaminations soit totalement elimine. Or, les traitements de lavage habituellement mis en oeuvre sont insu~isants pour obtenir ce résultat.
La présente Invention s'est ~ixe pour but le traitement spécifique de polymères obtenus de façon élec-trochimique, afin de ~;m;nner, voire d'annuler, les phé-nomènes de contamination sporadiques.
3 PCT~R96/02003 ~ans ce but les Inventeurs ont étudié le méca-nisme de polymérisation électrochimique. On sait que cette polymérisation ~ait intervenir en particulier des reactions radicalaires [GENIES et al., J. Electroanal.
Chem., 14~, 101-113, (1993)], et lorsqu'un polymère n-l est synthétisé, il peut éventuellement garder en sur~ace pendant un certain temps, des espèces réactives capables de capter des produits lors de la polymérisation sur l'électrode n.
Les Inventeurs ont émis l'hypothese qu'en ré-duisant la réactivité de sur~ace du polymère, l'on par-viendrait à él; m; n~ les contaminations observées lors de la synthèse adressée de molécules biologiques en sur~ace dudit polymère.
lS La présente Invention a pour objet un procédé
de synthèse d'un copolymère par copolymérisation électro-chimique, caractérisé en ce qu'il comprend un traitement permettant de réduire la réactivité de sur~ace dudit co-polymère.
En particulier, la présente Invention a pour objet un procédé de préparation d'un copolymère de ~or-mule générale (I) suivante :
- [A] x- [A] y~
[B] (I) par copolymérisation électrochimique d'un co~pose de ~or-mule génerale (II) suivante :
[A]
[E3] (II~
~ avec un composé [A], [A] représentant une unité monomère d'un poly-mère susceptible dlêtre obtenu par copolymérisation élec-trochimique, [B] représentant un groupe latéral qui peut W O 97/22648 4 PCT~R96/02003 être un monomère ou un polymère, lié a l'unité ~A] par liaison covalente, ou par l'intermédiaire d'un bras espa-ceur, et x et y représentant des nombres entiers égaux ou supérieurs à l, lequel procédé est caracterisé en ce qu'il comprend, à l'issue de ladite copolymérisation electrochimique, au moins une étape où l'on soumet le co-polymère obtenu à un traitement permettant de réduire sa réactivite de surface.
Au sens de la présente Invention, on entend par "réactivité de sur~ace" la persistance, à la sur~ace du copolymère ~ormé, d'espèces réactives capables de ~ixer une unité de ~ormule (II), et par "r~duction de la reactivite de sur~ace", on entend l'inactivation au moins partielle de ces espèces réactives, ce qui ne permet la ~ixation que d'une quantité nulle ou ~aible d'unités de ~ormule (II). Les contaminations résultant de cette ~ixa-tion sont ainsi supprimées ou réduites jusqu'à ne plus être detectables, ou à ne produire qu'un signal negligea-ble, ~acilement distinguable d'un signal positif.
Selon un mode de mise en oeuvre pre~éré de la présente Invention, rA] représente un monomère de poly-mère conducteur electronique ; de pré~érence ledit poly-mère conducteur électronique est choisi parmi le polyacé-tylène, la polyazine, le poly(p-phénylène), le poly(p-phénylène vinylène), le polypyrène, le polypyrrole, le polythiophène, le poly~uranne, le polyselenophène, la polypyridazine, le polycarbazole, la polyaniline, et leurs derives substitués (les substituants peuvent être par exemple des chaînes d'hydrocarbures saturés ou non, (de pré~erence des c~fnes en Cl3),des cycles aromatiques ou non, ou des heterocycles, etc...) ; ledit polymère conducteur electronique peut egalement être un copolymère de deux ou plusieurs monomères [A] di~erents, par exem-ple des monomères de pyrrole et des monomeres de thio-3~ phene.
Avantageusement, [A] est une unité pyrrole.
Selon un mode de mise en oeuvre pré~éré de la présente Invention, [B] représente un nucléotide, un oli-gonucléotide ou un de leurs dérivés ou analogues.
Dans le cadre de l'exposé de la presente In-vention, on entend par exemple par derive ou analogue denucléotide, des nucléotides modi~iés, tels que ceux dé-crits par UHLMANN, [Chemical Review, 90:4, 543-584 (l990)] ; des d'analogues de nucléotides entrant dans la composition d'oligonucléotides synthétiques ; des dérives de nucléotides portant des ~onctions protégées qui sont couramment utilisés pour la synthèse des acides nucléi-ques.
[B] peut aussi etre un composé non naturel pouvant s'hybrider avec les acides nucléiques, tels que ceux décrits par UHLMANN (publication précitee).
Les Inventeurs ont constate que trois types de traitement pouvaient etre mis en oeuvre pour réduire la réactivité des polymeres :
- Un traitement chimique, à base de produits connus pour leur activité antiradicalaire ou leur activi-té inhibitrice de la polymérisation radicalaire ;
- Un traitement électrochimique permettant de réduire ou de suroxyder le polymere ;
- Un rinçage en présence de produits capables d'éliminer les courtes rh~fn~s de polymere en croissance adsorbées sur le support.
Selon un mode de mise en oeuvre pré~éré de la présente Invention, le traitement mis en oeuvre pour ré-duire la réactivité de sur~ace du copolymère comprend au moins :
- un traitement chimi~ue antiradicalaire ; ou bien - un traitement électrochimique permettant de modi~ier le degré d'oxydation dudit polymère ; ou bien 35- un traitement comportant au moins un rinçage en présence d'un agent tensio-acti~, ou bien une combi-W O 97~2648 6 PCT~R96/02003 naison d'au moins deux parmi les trois traitements ci-dessus.
Un traitement chimique con~orme à l'Invention peut être mis en oeuvre de ~açon simple en procédant à un rincage du polymère par une solution contenant un produit antiradicalaire.
Avantageusement, les antioxydants tels que les dérivés du tocophérol (~amille de la vitamine E) sont utilisés. Il est également avantageux d'utiliser des in-hibiteurs ou des retardants de polymérisation radica-laire, tels que par exemple le nitrobenzène ou les benzo-quinones, qui sont des retardants classiques de la poly-mérisation du styrène [ODIAN G., Principles o~ polymeri-zation, JOHN WILEY ~ Sons, Interscience Publication, (1981)]. Ces produits, dissous dans un solvant adéquat (par exemple l'eau, l'acétonitrile, l'éthanol, ou un mé-lange de ces solvants), se sont en e~et avérés également acti~s vis-a-vis de la réactivité des polymeres fabriqués de ~açon électrochimique (polypyrrole par exemple).
Le traitement électrochimique peut être mis en oeuvre en réduisant ou en oxydant le polymère conducteur de ~açon contrôlée, par exemple dans un système electro-chimique à 3 ~lectrodes. On choisira, pour la mise en oeuvre de ce traitement, une gamme de potentiel dans ~5 laquelle [~3] est stable (par exemple de -1 à +lV/ECS pour les acides nucléiques).
Le rinçage en présence d'agents tensioacti~s permet d'él;m;nPr les r.h~n~s courtes de polymère conduc-teur encore réactives. De pré~érence, chaque rinçage par une solution contenant un agent tensioacti~ doit être suivie d'un ou plusieurs rinçages visant à éliminer les traces de tensioacti~. Lorsque l'on travaille sur des po-lymeres chargés (comme par exemple du polypyrrole sous sa ~orme oxydée), on choisira de pré~érence des agents ten-sioacti~s non-ioniques qui seront plus ~aciles à élimi-ner.
Le procédé conforme à la présente Invention est plus particulièrement destiné à être mis en oeuvre lors de la synthèse dlun ensemble de copolymères de for-mule générale (I) dont deux au moins comprennent un groupe latéral [B] différent, sur un même support dont la surface est constituée d'électrodes disposées en matrice, les copolymères comprenant un groupe latéral tB] diffé-rent étant portés par des électrodes différentes. Dans ce cadre, les copolymères de formule générale (I) sont syn-thétisés llun après llautre, chacun sur son électrode-support respective, en mettant en oeuvre un procédé con-forme à llInvention, tel que dé~ini ci-dessus~ En d'au-tres termes, après la synthèse de chaque copolymère, est effectué un traitement ayant pour but de reduire sa réac-tivité de surface, et permettant dléviter .sa contAm;n~-tion par des réactifs utilisés dans la synthèse du poly-mere suivant.
La mise en oeuvre d'une méthode de traitement conforme à l'Invention permet ainsi, contrairement aux rincages à l'eau ou avec un tampon, d'éliminer les conta-minations inter-électrodes, et d'obtenir une matrice de plots parfaitement individualisés. Les traitements con-~ormes a l'Invention sont ~aciles à mettre en oeuvre et peuvent être automatisés.
Dans tous les cas, le support de polymère con-ducteur portant la molécule d'intérêt biologique est fa-briqué par exemple selon le procédé décrit dans le Brevet WO 94/22889. Seuls les traitements réalisés apres la syn-these de chaque dépôt di~ferent.
La présente I~vention sera mieux comprise a l'aide du complément de description qui va suivre, qui se ré~ere a des exemples de mise en oeuvre du procédé con-forme a l'Invention.
Il doit être bien entendu toute~ois que ces exemples sont donnés uniquement a titre d'i]lustration de WO 97/22648 8 PCT~R96/02003 l'objet de l'Invention dont ils ne constituent en aucune manière une limitation.
EXEMPLE 1 : MISE EN O~uv~E DE Il~-l~O~ES DE DE-CONT~MTN~TION CONFORMES A L'l~v~LlON LORS DE LA PREPARA-S TION DE MATRICES DE POLYPYRROLE PAR COPOLYMERISATION
1) Synthese des oligonucleotides Le support de synthèse consiste en une plaque de silicium portant 48 électrodes d'or indépendantes et isolées les unes des autres. Chaque électrode est un car-ré dont la ~;mPn~ion du caté est soit 25, 50, 100 ou 200~m.
On procède a la synthèse localisée, sur chaque électrode, d'un polymère de polypyrrole sur lequel est gref~e, de façon covalente, un oligonucléotide, par copo-lymerisation de noyaux de pyrrole oxydé, dont certainsportent ledit oligonucléotide.
La polymérisation est conduite, selon le pro-cedé décrit dans la demande PCT W0 94/22889 dans une so-lution contenant 2.10 2 M de pyrrole, 6.10 M de pyrrole substitué (oligonucléotide porteur d'un groupe pyrrole noté pyr par la suite) et 0,1 M de ~iC104.
Les oligonucléotides portant le pyrrole en 5' (oligonucléotides G-pyr, T1-pyr, T2-pyr) ont été synthé-tisés selon la méthode décrite dans la ~e~n~ PCT
25 W0 94/22889, et purifiés par HPLC sur phase inverse.
Séquence des oligonucléotides utilisés Oligo G-pyr 5'Pyrrole-CTCCAAGAAAGGACCC 3' Oligo T1-pyr 5'Pyrrole-CTCCAGGCATTGAGC 3' Oligo T2-pyr 5'Pyrrole-CAACCCAACGCTACT 3' Le modèle de matrice qui a été utilisé pour étudier les contaminations est constitué par une pla-quette de 5 électrodes portant chacune un dépôt diffé-rent, à savoir, dans l'ordre des synthèses :
- Electrode 1 : un dépôt de polypyrrole pur (témoin négatif) ;
W O 97/22648 9 PCT~R96/02003 - Electrode 2 : un dépôt d'un copolymère de polypyrrole et de l'oligonucléotide G-pyr, - Electrode 3 : un dépôt d'un copolymère de polypyrrole et de l'oligonucléotide T1-pyr, - Electrode 4 : un dépôt d'un copolymère de polypyrrole et de l'oligonucléotide T2-pyr ;
- Electrode ~ : un dépôt de polypyrrole pur.
Après le bran~h~m~nt de l'électrode sur laquelle va être opéré le dépôt, la plaquette est intro-duite dans la cellule réactionnelle en présence d'une contre-électrode de platine et d'une électrode de ré~é-rence au calomel (ECS) et de 600 ~1 de milieu réactionnel comprenant éventuellement les oligonucléotides-pyrrole désirés. Les reactions d'oxydation du monomère et de ré-duction du polymère sont assurées par une variation cy-clique du potentiel entre - 0,35 et + 0,85 V/ECS.
L'intégration du courant par rapport au temps (quantité d'électrons consommée) permet une evaluation de la masse de polymère forme sur la sur~ace de l'electrode et donc de l'épaisseur du ~ilm. Cela assure une bonne re-productibilité des synthèses.
Après chaque synthèse, la cellule et la pla-quette sont rincées selon les di~érentes procedures de-crites ci-dessous, puis l'electrode precédemment utilisée est deconnectée, et l'électrode suivante est connectée.
La plaquette est alors plongée dans un milieu réactionnel comprenant un autre couple oligonucléotide-pyrrole.
Après le dernier lavage spéci~ique, la pla-quette est déconnectée puis rincée à l'eau distillée.
2) Hybridation et détection des oligonucleoti-de~
Le contrôle de la spéci~icité des dépôts est réalisé par hybridation de sondes complémentaires aux oligonucléotides ~ixés sur le support.
- -W O 97/22648 10 PCT~R96102003 Hybridation :
Les réactions d'hybridation sont conduites successivement à 40~C durant 15 mn, dans un volume final de 10 ~L1 d'un tampon phosphate 20mM pH 7,4, NaCl 300mM, EDTA 2mM, SDS 0,5~, en présence de 0,06 pmole d'oligonucléotide biotinylé en 5', respectivement complé-mentaire à la séquence G, T1 ou T2.
Détection :
Après l'hy~ridation, la plaquette est lavée a temperature ambiante dans le tampon d'hybridation dilué 4 ~ois. Apres un rinçage dans du PBS-NaCl 0,4 M, Tween 20 à
0,5~, la plaquette est incubée 15 mn à temperature am-~iante dans ce même tampon en présence de 2,5 ~g/ml de conjugué streptavidine-phycoerythrine. Un ultime rinçage lS au PBS-NaCl-Tween est réalisé puis la plaquette est mon-tee sur une lame de microscope puis recouverte par une lamelle.
La matrice est alors observee par microscopie à ~luorescence, et l'intensite de fluorescence de chaque point est evaluee.
3) In~luence du traitement sur la speci~icite de la localisation du sig~al fluorescent.
&éneralités :
Tous les lavages sont réalisés sur la pla-2s quette et la cellule, à température ambiante et après chaque synthèse de polymère (sauf mention contraire), se-lon l'un des protocoles suivants :
l) rinçage à l'eau (identique a celui décrit dans la ~m~n~e PCT W0 94/22889) 2) rinçage long à l'eau : cinq rinçages à
l'eau successifs 3) traitement électrochimique 1 : Suroxydation du dépôt à 1,2 V/ECS pendant 1 mn puis rinçage à l'eau
Chem., 14~, 101-113, (1993)], et lorsqu'un polymère n-l est synthétisé, il peut éventuellement garder en sur~ace pendant un certain temps, des espèces réactives capables de capter des produits lors de la polymérisation sur l'électrode n.
Les Inventeurs ont émis l'hypothese qu'en ré-duisant la réactivité de sur~ace du polymère, l'on par-viendrait à él; m; n~ les contaminations observées lors de la synthèse adressée de molécules biologiques en sur~ace dudit polymère.
lS La présente Invention a pour objet un procédé
de synthèse d'un copolymère par copolymérisation électro-chimique, caractérisé en ce qu'il comprend un traitement permettant de réduire la réactivité de sur~ace dudit co-polymère.
En particulier, la présente Invention a pour objet un procédé de préparation d'un copolymère de ~or-mule générale (I) suivante :
- [A] x- [A] y~
[B] (I) par copolymérisation électrochimique d'un co~pose de ~or-mule génerale (II) suivante :
[A]
[E3] (II~
~ avec un composé [A], [A] représentant une unité monomère d'un poly-mère susceptible dlêtre obtenu par copolymérisation élec-trochimique, [B] représentant un groupe latéral qui peut W O 97/22648 4 PCT~R96/02003 être un monomère ou un polymère, lié a l'unité ~A] par liaison covalente, ou par l'intermédiaire d'un bras espa-ceur, et x et y représentant des nombres entiers égaux ou supérieurs à l, lequel procédé est caracterisé en ce qu'il comprend, à l'issue de ladite copolymérisation electrochimique, au moins une étape où l'on soumet le co-polymère obtenu à un traitement permettant de réduire sa réactivite de surface.
Au sens de la présente Invention, on entend par "réactivité de sur~ace" la persistance, à la sur~ace du copolymère ~ormé, d'espèces réactives capables de ~ixer une unité de ~ormule (II), et par "r~duction de la reactivite de sur~ace", on entend l'inactivation au moins partielle de ces espèces réactives, ce qui ne permet la ~ixation que d'une quantité nulle ou ~aible d'unités de ~ormule (II). Les contaminations résultant de cette ~ixa-tion sont ainsi supprimées ou réduites jusqu'à ne plus être detectables, ou à ne produire qu'un signal negligea-ble, ~acilement distinguable d'un signal positif.
Selon un mode de mise en oeuvre pre~éré de la présente Invention, rA] représente un monomère de poly-mère conducteur electronique ; de pré~érence ledit poly-mère conducteur électronique est choisi parmi le polyacé-tylène, la polyazine, le poly(p-phénylène), le poly(p-phénylène vinylène), le polypyrène, le polypyrrole, le polythiophène, le poly~uranne, le polyselenophène, la polypyridazine, le polycarbazole, la polyaniline, et leurs derives substitués (les substituants peuvent être par exemple des chaînes d'hydrocarbures saturés ou non, (de pré~erence des c~fnes en Cl3),des cycles aromatiques ou non, ou des heterocycles, etc...) ; ledit polymère conducteur electronique peut egalement être un copolymère de deux ou plusieurs monomères [A] di~erents, par exem-ple des monomères de pyrrole et des monomeres de thio-3~ phene.
Avantageusement, [A] est une unité pyrrole.
Selon un mode de mise en oeuvre pré~éré de la présente Invention, [B] représente un nucléotide, un oli-gonucléotide ou un de leurs dérivés ou analogues.
Dans le cadre de l'exposé de la presente In-vention, on entend par exemple par derive ou analogue denucléotide, des nucléotides modi~iés, tels que ceux dé-crits par UHLMANN, [Chemical Review, 90:4, 543-584 (l990)] ; des d'analogues de nucléotides entrant dans la composition d'oligonucléotides synthétiques ; des dérives de nucléotides portant des ~onctions protégées qui sont couramment utilisés pour la synthèse des acides nucléi-ques.
[B] peut aussi etre un composé non naturel pouvant s'hybrider avec les acides nucléiques, tels que ceux décrits par UHLMANN (publication précitee).
Les Inventeurs ont constate que trois types de traitement pouvaient etre mis en oeuvre pour réduire la réactivité des polymeres :
- Un traitement chimique, à base de produits connus pour leur activité antiradicalaire ou leur activi-té inhibitrice de la polymérisation radicalaire ;
- Un traitement électrochimique permettant de réduire ou de suroxyder le polymere ;
- Un rinçage en présence de produits capables d'éliminer les courtes rh~fn~s de polymere en croissance adsorbées sur le support.
Selon un mode de mise en oeuvre pré~éré de la présente Invention, le traitement mis en oeuvre pour ré-duire la réactivité de sur~ace du copolymère comprend au moins :
- un traitement chimi~ue antiradicalaire ; ou bien - un traitement électrochimique permettant de modi~ier le degré d'oxydation dudit polymère ; ou bien 35- un traitement comportant au moins un rinçage en présence d'un agent tensio-acti~, ou bien une combi-W O 97~2648 6 PCT~R96/02003 naison d'au moins deux parmi les trois traitements ci-dessus.
Un traitement chimique con~orme à l'Invention peut être mis en oeuvre de ~açon simple en procédant à un rincage du polymère par une solution contenant un produit antiradicalaire.
Avantageusement, les antioxydants tels que les dérivés du tocophérol (~amille de la vitamine E) sont utilisés. Il est également avantageux d'utiliser des in-hibiteurs ou des retardants de polymérisation radica-laire, tels que par exemple le nitrobenzène ou les benzo-quinones, qui sont des retardants classiques de la poly-mérisation du styrène [ODIAN G., Principles o~ polymeri-zation, JOHN WILEY ~ Sons, Interscience Publication, (1981)]. Ces produits, dissous dans un solvant adéquat (par exemple l'eau, l'acétonitrile, l'éthanol, ou un mé-lange de ces solvants), se sont en e~et avérés également acti~s vis-a-vis de la réactivité des polymeres fabriqués de ~açon électrochimique (polypyrrole par exemple).
Le traitement électrochimique peut être mis en oeuvre en réduisant ou en oxydant le polymère conducteur de ~açon contrôlée, par exemple dans un système electro-chimique à 3 ~lectrodes. On choisira, pour la mise en oeuvre de ce traitement, une gamme de potentiel dans ~5 laquelle [~3] est stable (par exemple de -1 à +lV/ECS pour les acides nucléiques).
Le rinçage en présence d'agents tensioacti~s permet d'él;m;nPr les r.h~n~s courtes de polymère conduc-teur encore réactives. De pré~érence, chaque rinçage par une solution contenant un agent tensioacti~ doit être suivie d'un ou plusieurs rinçages visant à éliminer les traces de tensioacti~. Lorsque l'on travaille sur des po-lymeres chargés (comme par exemple du polypyrrole sous sa ~orme oxydée), on choisira de pré~érence des agents ten-sioacti~s non-ioniques qui seront plus ~aciles à élimi-ner.
Le procédé conforme à la présente Invention est plus particulièrement destiné à être mis en oeuvre lors de la synthèse dlun ensemble de copolymères de for-mule générale (I) dont deux au moins comprennent un groupe latéral [B] différent, sur un même support dont la surface est constituée d'électrodes disposées en matrice, les copolymères comprenant un groupe latéral tB] diffé-rent étant portés par des électrodes différentes. Dans ce cadre, les copolymères de formule générale (I) sont syn-thétisés llun après llautre, chacun sur son électrode-support respective, en mettant en oeuvre un procédé con-forme à llInvention, tel que dé~ini ci-dessus~ En d'au-tres termes, après la synthèse de chaque copolymère, est effectué un traitement ayant pour but de reduire sa réac-tivité de surface, et permettant dléviter .sa contAm;n~-tion par des réactifs utilisés dans la synthèse du poly-mere suivant.
La mise en oeuvre d'une méthode de traitement conforme à l'Invention permet ainsi, contrairement aux rincages à l'eau ou avec un tampon, d'éliminer les conta-minations inter-électrodes, et d'obtenir une matrice de plots parfaitement individualisés. Les traitements con-~ormes a l'Invention sont ~aciles à mettre en oeuvre et peuvent être automatisés.
Dans tous les cas, le support de polymère con-ducteur portant la molécule d'intérêt biologique est fa-briqué par exemple selon le procédé décrit dans le Brevet WO 94/22889. Seuls les traitements réalisés apres la syn-these de chaque dépôt di~ferent.
La présente I~vention sera mieux comprise a l'aide du complément de description qui va suivre, qui se ré~ere a des exemples de mise en oeuvre du procédé con-forme a l'Invention.
Il doit être bien entendu toute~ois que ces exemples sont donnés uniquement a titre d'i]lustration de WO 97/22648 8 PCT~R96/02003 l'objet de l'Invention dont ils ne constituent en aucune manière une limitation.
EXEMPLE 1 : MISE EN O~uv~E DE Il~-l~O~ES DE DE-CONT~MTN~TION CONFORMES A L'l~v~LlON LORS DE LA PREPARA-S TION DE MATRICES DE POLYPYRROLE PAR COPOLYMERISATION
1) Synthese des oligonucleotides Le support de synthèse consiste en une plaque de silicium portant 48 électrodes d'or indépendantes et isolées les unes des autres. Chaque électrode est un car-ré dont la ~;mPn~ion du caté est soit 25, 50, 100 ou 200~m.
On procède a la synthèse localisée, sur chaque électrode, d'un polymère de polypyrrole sur lequel est gref~e, de façon covalente, un oligonucléotide, par copo-lymerisation de noyaux de pyrrole oxydé, dont certainsportent ledit oligonucléotide.
La polymérisation est conduite, selon le pro-cedé décrit dans la demande PCT W0 94/22889 dans une so-lution contenant 2.10 2 M de pyrrole, 6.10 M de pyrrole substitué (oligonucléotide porteur d'un groupe pyrrole noté pyr par la suite) et 0,1 M de ~iC104.
Les oligonucléotides portant le pyrrole en 5' (oligonucléotides G-pyr, T1-pyr, T2-pyr) ont été synthé-tisés selon la méthode décrite dans la ~e~n~ PCT
25 W0 94/22889, et purifiés par HPLC sur phase inverse.
Séquence des oligonucléotides utilisés Oligo G-pyr 5'Pyrrole-CTCCAAGAAAGGACCC 3' Oligo T1-pyr 5'Pyrrole-CTCCAGGCATTGAGC 3' Oligo T2-pyr 5'Pyrrole-CAACCCAACGCTACT 3' Le modèle de matrice qui a été utilisé pour étudier les contaminations est constitué par une pla-quette de 5 électrodes portant chacune un dépôt diffé-rent, à savoir, dans l'ordre des synthèses :
- Electrode 1 : un dépôt de polypyrrole pur (témoin négatif) ;
W O 97/22648 9 PCT~R96/02003 - Electrode 2 : un dépôt d'un copolymère de polypyrrole et de l'oligonucléotide G-pyr, - Electrode 3 : un dépôt d'un copolymère de polypyrrole et de l'oligonucléotide T1-pyr, - Electrode 4 : un dépôt d'un copolymère de polypyrrole et de l'oligonucléotide T2-pyr ;
- Electrode ~ : un dépôt de polypyrrole pur.
Après le bran~h~m~nt de l'électrode sur laquelle va être opéré le dépôt, la plaquette est intro-duite dans la cellule réactionnelle en présence d'une contre-électrode de platine et d'une électrode de ré~é-rence au calomel (ECS) et de 600 ~1 de milieu réactionnel comprenant éventuellement les oligonucléotides-pyrrole désirés. Les reactions d'oxydation du monomère et de ré-duction du polymère sont assurées par une variation cy-clique du potentiel entre - 0,35 et + 0,85 V/ECS.
L'intégration du courant par rapport au temps (quantité d'électrons consommée) permet une evaluation de la masse de polymère forme sur la sur~ace de l'electrode et donc de l'épaisseur du ~ilm. Cela assure une bonne re-productibilité des synthèses.
Après chaque synthèse, la cellule et la pla-quette sont rincées selon les di~érentes procedures de-crites ci-dessous, puis l'electrode precédemment utilisée est deconnectée, et l'électrode suivante est connectée.
La plaquette est alors plongée dans un milieu réactionnel comprenant un autre couple oligonucléotide-pyrrole.
Après le dernier lavage spéci~ique, la pla-quette est déconnectée puis rincée à l'eau distillée.
2) Hybridation et détection des oligonucleoti-de~
Le contrôle de la spéci~icité des dépôts est réalisé par hybridation de sondes complémentaires aux oligonucléotides ~ixés sur le support.
- -W O 97/22648 10 PCT~R96102003 Hybridation :
Les réactions d'hybridation sont conduites successivement à 40~C durant 15 mn, dans un volume final de 10 ~L1 d'un tampon phosphate 20mM pH 7,4, NaCl 300mM, EDTA 2mM, SDS 0,5~, en présence de 0,06 pmole d'oligonucléotide biotinylé en 5', respectivement complé-mentaire à la séquence G, T1 ou T2.
Détection :
Après l'hy~ridation, la plaquette est lavée a temperature ambiante dans le tampon d'hybridation dilué 4 ~ois. Apres un rinçage dans du PBS-NaCl 0,4 M, Tween 20 à
0,5~, la plaquette est incubée 15 mn à temperature am-~iante dans ce même tampon en présence de 2,5 ~g/ml de conjugué streptavidine-phycoerythrine. Un ultime rinçage lS au PBS-NaCl-Tween est réalisé puis la plaquette est mon-tee sur une lame de microscope puis recouverte par une lamelle.
La matrice est alors observee par microscopie à ~luorescence, et l'intensite de fluorescence de chaque point est evaluee.
3) In~luence du traitement sur la speci~icite de la localisation du sig~al fluorescent.
&éneralités :
Tous les lavages sont réalisés sur la pla-2s quette et la cellule, à température ambiante et après chaque synthèse de polymère (sauf mention contraire), se-lon l'un des protocoles suivants :
l) rinçage à l'eau (identique a celui décrit dans la ~m~n~e PCT W0 94/22889) 2) rinçage long à l'eau : cinq rinçages à
l'eau successifs 3) traitement électrochimique 1 : Suroxydation du dépôt à 1,2 V/ECS pendant 1 mn puis rinçage à l'eau
4) traitement chimique : ~mélange S ~ est un solvant comportant 68~ d'acétonitrile, 16~ d'éthanol et 16~ d'eau) ; ~mélange S+vitE ~ est une dilution d'une .
WO 97~2648 11 PCT~R~ 2~3 solution alcoolique à 50 mM d'alpha-tocophérol à 1 mM
dans le solvant ~ S ~ ; le traitement est suivi d'un rin-cage a l'eau ; la cuve est simplement rincée à l'eau
WO 97~2648 11 PCT~R~ 2~3 solution alcoolique à 50 mM d'alpha-tocophérol à 1 mM
dans le solvant ~ S ~ ; le traitement est suivi d'un rin-cage a l'eau ; la cuve est simplement rincée à l'eau
5) rinçage en présence d'un détergent anioni-que : rinçage à l'eau, puis dans une solution de dodecyl-sul~ate de sodium (SDS) à 0,5~, suivi d'un autre rinçage à l'eau.
6) rin,cage en présence d'un détergent non-ionique : rinçage à l'eau puis dans une solution de Tween 20 à 0,3~, suivi d'un autre rin,cage a l'eau.
b) Résultats :
Chaque matrice obtenue est hybridée successi-vement avec les trois sondes biotinylées complémentaires des oligonucléotides G, T1 et T2. L'hybridation est dé-tectée par détermination de l'intensité de fluorescence, comme indi~ué ci-dessous.
Les résultats sont reportés dans les tableaux lA a lF ci-dessous, qui reproduisent respectivement les résultats des expérimentations 1 a 6.
Dans ces tableaux, chaque colonne correspond a l'une des électrodes 1 a 5 ; chaque ligne correspond a l'une des sondes complémentaires respectivement de G, T1 et T2. L'intensité de ~luorescence de chaque point est notée de 0 a +++, ou V(*,*) si le résultat est variable 2s et non reproductible entre les deux limites précisées en-tre parenthèses.
TABLEAU lA
compl. G V(0,+) +++ 0 0 0 30 compl. T1 0 V(0,++) +++ 0 0 compl. T2 0 0 V(0,+) +++ 0 .
TABLEAU lB
compl. GV(O,+) +++ O O 0 compl. Tl 0 V(O,++) +t+ O O
compl. T2 O O V(O,+) +++ o TABLEAU lC
compl. G O + O O O
0 compl . Tl 0 O ++ O O
compl. T2 O O O + o TABLEAU lD
compl. G O +++ O O O
COmpl. Tl 0 O
compl. T2 O O O +++ 0 TABLEAU lE
compl. G 0 ++ O 0 O
compl. Tl 0 0 ++ 0 0 compl. T2 O 0 O + 0 TABLEAU lF
compl. G O +++ O O ~
compl. Tl 0 0 +++ 0 0 compl. T2O O 0 O +++ 0 Ces résultats montrent que 3 types de traite-ment sont plus ef~icaces que le traitement initial (n~ 1) 30 pour diminuer les réactions non spéci~iques dues aux con-taminations:
- Le traitement impliquant une suroxydation (traitement n~ 3) W O 97/22648 13 PCT~R96/02003 - Le rinçage en présence d'un produit antira-dicalaire : la vitamine E (traitement n~ 4) - Les rinçages en présence de tensioactifs (traitement n~ 5 et 6).
b) Résultats :
Chaque matrice obtenue est hybridée successi-vement avec les trois sondes biotinylées complémentaires des oligonucléotides G, T1 et T2. L'hybridation est dé-tectée par détermination de l'intensité de fluorescence, comme indi~ué ci-dessous.
Les résultats sont reportés dans les tableaux lA a lF ci-dessous, qui reproduisent respectivement les résultats des expérimentations 1 a 6.
Dans ces tableaux, chaque colonne correspond a l'une des électrodes 1 a 5 ; chaque ligne correspond a l'une des sondes complémentaires respectivement de G, T1 et T2. L'intensité de ~luorescence de chaque point est notée de 0 a +++, ou V(*,*) si le résultat est variable 2s et non reproductible entre les deux limites précisées en-tre parenthèses.
TABLEAU lA
compl. G V(0,+) +++ 0 0 0 30 compl. T1 0 V(0,++) +++ 0 0 compl. T2 0 0 V(0,+) +++ 0 .
TABLEAU lB
compl. GV(O,+) +++ O O 0 compl. Tl 0 V(O,++) +t+ O O
compl. T2 O O V(O,+) +++ o TABLEAU lC
compl. G O + O O O
0 compl . Tl 0 O ++ O O
compl. T2 O O O + o TABLEAU lD
compl. G O +++ O O O
COmpl. Tl 0 O
compl. T2 O O O +++ 0 TABLEAU lE
compl. G 0 ++ O 0 O
compl. Tl 0 0 ++ 0 0 compl. T2 O 0 O + 0 TABLEAU lF
compl. G O +++ O O ~
compl. Tl 0 0 +++ 0 0 compl. T2O O 0 O +++ 0 Ces résultats montrent que 3 types de traite-ment sont plus ef~icaces que le traitement initial (n~ 1) 30 pour diminuer les réactions non spéci~iques dues aux con-taminations:
- Le traitement impliquant une suroxydation (traitement n~ 3) W O 97/22648 13 PCT~R96/02003 - Le rinçage en présence d'un produit antira-dicalaire : la vitamine E (traitement n~ 4) - Les rinçages en présence de tensioactifs (traitement n~ 5 et 6).
Claims (8)
1) Procédé pour réduire la réactivité de surface d'un copolymère obtenu par copolymérisation électrochimique, caractérisé en ce qu'il comprend un traitement d'inactivation totale ou partielle des espèces réactives présentes à la surface dudit copolymère.
2) Procédé selon la revendication 1, pour réduire la réactivité de surface d'un copolymère de formule générale (I) suivante :
caractérisé en ce qu'il comprend :
- la copolymérisation électrochimique, d'un composé de formule générale (II) suivante :
avec un composé, [A]
[A] représentant une unité monomère d'un polymère susceptible d'être obtenu par copolymérisation électrochimique, [B] représentant un groupe latéral qui peut être un monomère ou un polymère, lié à l'unité [A]
par liaison covalente, ou par l'intermédiaire d'un bras espaceur, et x et y représentant des nombres entiers égaux ou supérieurs à 1 ; et - le traitement du copolymère obtenu, pour inactiver totalement ou partiellement les espèces réactives capables de fixer une unité de formule (II), présentes à sa surface.
caractérisé en ce qu'il comprend :
- la copolymérisation électrochimique, d'un composé de formule générale (II) suivante :
avec un composé, [A]
[A] représentant une unité monomère d'un polymère susceptible d'être obtenu par copolymérisation électrochimique, [B] représentant un groupe latéral qui peut être un monomère ou un polymère, lié à l'unité [A]
par liaison covalente, ou par l'intermédiaire d'un bras espaceur, et x et y représentant des nombres entiers égaux ou supérieurs à 1 ; et - le traitement du copolymère obtenu, pour inactiver totalement ou partiellement les espèces réactives capables de fixer une unité de formule (II), présentes à sa surface.
3) Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que [A] représente un monomère de polymère conducteur électronique.
4) Procédé selon une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le traitement mis en oeuvre pour inactiver lesdites espèces réactives comprend au moins :
- un traitement chimique antiradicalaire ; ou bien - un traitement électrochimique permettant de modifier le degré d'oxydation dudit polymère ; ou bien - un traitement comportant au moins un rinçage en présence d'un agent tensio-actif, ou bien une combinaison d'au moins deux parmi les trois traitements ci-dessus.
- un traitement chimique antiradicalaire ; ou bien - un traitement électrochimique permettant de modifier le degré d'oxydation dudit polymère ; ou bien - un traitement comportant au moins un rinçage en présence d'un agent tensio-actif, ou bien une combinaison d'au moins deux parmi les trois traitements ci-dessus.
5) Procédé selon une quelconque des revendications 3 ou 4, caractérisé en ce que [A]
représente un monomère de polymère conducteur électronique choisi parmi le polyacétylène, la polyazine, le poly(p-phénylène), le poly(p-phénylène vinylène), le polypyrène, le polypyrrole, le polythiophène, le polyfuranne, le polysélénophène, la polypyridazine, le polycarbazole, la polyaniline, et les dérivés substitués de ces polymères.
représente un monomère de polymère conducteur électronique choisi parmi le polyacétylène, la polyazine, le poly(p-phénylène), le poly(p-phénylène vinylène), le polypyrène, le polypyrrole, le polythiophène, le polyfuranne, le polysélénophène, la polypyridazine, le polycarbazole, la polyaniline, et les dérivés substitués de ces polymères.
6) Procédé selon la revendication 5 caractérisé en ce que [A] est une unité pyrrole.
7) Procédé selon une quelconque des revendications 2 à 6 caractérisé en ce que [B] représente un nucléotide, un oligonucléotide ou un de leurs dérivés ou analogues.
8 ) procédé synthèse d'un ensemble de copolymères de formule générale (I) dont deux au moins comprennent un groupe latéral [B] différent, sur un même support dont la surface est constituée d'électrodes disposées en matrice, les copolymères comprenant un groupe latéral [B] différent étant portés par des électrodes différentes, et étant synthétisés l'un après l'autre, chacun sur son électrode-support respective, en mettant en oeuvre un procédé selon une quelconque des revendications 1 à 7.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9515044A FR2742451B1 (fr) | 1995-12-19 | 1995-12-19 | Procede pour reduire la reactivite de surface de copolymeres obtenus par polymerisation electrochimique |
| FR95/15044 | 1995-12-19 | ||
| PCT/FR1996/002003 WO1997022648A1 (fr) | 1995-12-19 | 1996-12-13 | Procede pour reduire la reactivite de surface de copolymeres obtenus par polymerisation electrochimique |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CA2239807A1 true CA2239807A1 (fr) | 1997-06-26 |
Family
ID=9485639
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CA002239807A Abandoned CA2239807A1 (fr) | 1995-12-19 | 1996-12-13 | Procede pour reduire la reactivite de surface de copolymeres obtenus par polymerisation electrochimique |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6207797B1 (fr) |
| EP (1) | EP0868464B1 (fr) |
| JP (1) | JP3924588B2 (fr) |
| AT (1) | ATE267222T1 (fr) |
| CA (1) | CA2239807A1 (fr) |
| DE (1) | DE69632543T2 (fr) |
| FR (1) | FR2742451B1 (fr) |
| WO (1) | WO1997022648A1 (fr) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2750136B1 (fr) * | 1996-06-25 | 1998-08-14 | Cis Bio Int | Conjugues d'un oligonucleotide/polymere conducteur electronique avec une molecule d'interet, et leurs utilisations |
| FR2789401B1 (fr) * | 1999-02-08 | 2003-04-04 | Cis Bio Int | Procede de fabrication de matrices de ligands adresses sur un support |
| US6987139B2 (en) * | 2001-10-19 | 2006-01-17 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Polymer composition |
| US20040011650A1 (en) * | 2002-07-22 | 2004-01-22 | Frederic Zenhausern | Method and apparatus for manipulating polarizable analytes via dielectrophoresis |
| FR2849038B1 (fr) | 2002-12-19 | 2005-03-11 | Apibio | Nouveaux pyrroles substitues avec des oligonucleotides, polymeres electroactifs et leurs utilisations |
| WO2017129472A1 (fr) * | 2016-01-26 | 2017-08-03 | Unilever Plc | Savonnettes d'acide gras préparées à partir d'une réserve d'huile de faible indice d'iode comprenant du savon de potassium |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2703359B1 (fr) * | 1993-03-31 | 1995-06-23 | Cis Bio Int | Copolymère nucléotide(s)/polymère conducteur électronique ; son procédé de préparation et son utilisation . |
| FR2720832A1 (fr) * | 1994-04-22 | 1995-12-08 | Francis Garnier | Electrodes et membranes électroactives à base de peptides bioactifs, pour la reconnaissance, l'extraction ou le relargage d'espèces biologiquement actives. |
-
1995
- 1995-12-19 FR FR9515044A patent/FR2742451B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-12-13 JP JP52254497A patent/JP3924588B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-13 DE DE69632543T patent/DE69632543T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-13 US US09/091,397 patent/US6207797B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-12-13 CA CA002239807A patent/CA2239807A1/fr not_active Abandoned
- 1996-12-13 EP EP96942407A patent/EP0868464B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-13 WO PCT/FR1996/002003 patent/WO1997022648A1/fr active IP Right Grant
- 1996-12-13 AT AT96942407T patent/ATE267222T1/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3924588B2 (ja) | 2007-06-06 |
| ATE267222T1 (de) | 2004-06-15 |
| JP2000503688A (ja) | 2000-03-28 |
| US6207797B1 (en) | 2001-03-27 |
| EP0868464B1 (fr) | 2004-05-19 |
| WO1997022648A1 (fr) | 1997-06-26 |
| DE69632543T2 (de) | 2005-05-25 |
| FR2742451B1 (fr) | 1998-03-20 |
| EP0868464A1 (fr) | 1998-10-07 |
| DE69632543D1 (de) | 2004-06-24 |
| FR2742451A1 (fr) | 1997-06-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0691978B1 (fr) | Copolymere nucleotide(s)/polymere conducteur electronique, son procede de preparation et son utilisation | |
| AU758328B2 (en) | Photoactivatable nucleic acid derivatives | |
| EP0524864B1 (fr) | Procédé d'immobilisation d'un fragment d'acide nucléique par fixation passive sur un support solide, support solide ainsi obtenu et son utilisation | |
| JP2004534013A (ja) | 水溶性でカチオン性のポリチオフェン誘導体を使用する、負に荷電したポリマーの検出 | |
| Miller et al. | Versatile 5 ‘-Functionalization of Oligonucleotides on Solid Support: Amines, Azides, Thiols, and Thioethers via Phosphorus Chemistry | |
| CA2239807A1 (fr) | Procede pour reduire la reactivite de surface de copolymeres obtenus par polymerisation electrochimique | |
| CA2475696A1 (fr) | Nouveau procede de preparation de biopuces a adn et leurs applications | |
| JP4803851B2 (ja) | オリゴヌクレオチド／電子伝導性ポリマーの興味ある分子との複合体、およびその使用 | |
| EP1391519B1 (fr) | Inhibiteurs d'hybridation non specifiques, reactifs de diagnostic clinique et procede d'analyse clinique | |
| JP4744054B2 (ja) | シラン化固体支持体上で核酸を合成および固定化するための方法 | |
| JPWO2004092377A1 (ja) | 新規な機能性ペプチド核酸およびその製法 | |
| EP0902788B1 (fr) | Derives de nucleosides, et leur utilisation pour la synthese d'oligonucleotides | |
| MXPA00008098A (en) | Photoactivatable nucleic acid derivatives | |
| WO2002010132A1 (fr) | Derive de succinimide utile en tant que monomere bifonctionnel polymerisable | |
| JP2006158400A (ja) | Ｐｎａオリゴマー誘導体化合物 | |
| JP2007275071A (ja) | 新規な機能性ペプチド核酸およびその製法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FZDE | Discontinued |