CN100389828C

CN100389828C - 含Rho激酶抑制剂的药物制剂

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Publication number: CN100389828C
Application number: CNB971987386A
Authority: CN
Inventors: 上畑雅义; 小野孝; 佐藤裕行; 山上圭司; 川原利雄
Original assignee: Mitsubishi Pharma Corp
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp; Tanabe Seiyaku Co Ltd
Priority date: 1996-08-12
Filing date: 1997-08-08
Publication date: 2008-05-28
Anticipated expiration: 2017-08-08
Also published as: ATE359822T1; KR100595740B1; BG63992B1; CA2263425C; ES2286834T3; BR9711154A; CA2263425A1; WO1998006433A1; AU738620B2; HUP9903694A3; BG103246A; HUP9903694A2; NO990622L; NZ513800A; US20030134775A1; CN1233188A; KR20050055022A; DE69737631T2; PT956865E; DK0956865T3

Abstract

本发明提供了作为新药物制剂的Rho激酶抑制剂，具体地讲，这些药物制剂是高血压治疗剂、心绞痛的治疗剂、脑血管痉孪抑制剂、哮喘的治疗剂、末梢循环紊乱的治疗剂、早产的预防剂、动脉硬化的治疗剂、抗癌药、抗炎药、免疫抑制剂、自身免疫性疾病的治疗剂、抗AIDS药、避孕药、消化道感染的预防剂、骨质疏松的治疗剂、视网膜病的治疗剂及脑功能改善药物。此外，提供了作为试剂和诊断试剂的Rho激酶抑制剂。

Description

含Rho激酶抑制剂的药物制剂

发明领域

本发明涉及用Rho激酶抑制剂作药物制剂治疗多种疾病的方法。此外，本发明涉及Rho激酶抑制剂作为治疗剂或诊断试剂的用途。

发明背景

自从1981年发现Ras，已发现了若干与Ras相似的小GTP结合蛋白(小G蛋白)，并已对它们具有的很多生理功能进行了研究。这些小G蛋白分子量为20000-30000且无亚单位结构。它们都特异性结合GDP和GTP，并水解如此结合的GTP(GTP酶活性)(Hall，A.，Science，249，635-640，1990；Bourne，H.R.等，Nature，349，117-127，1991)。

至今，由酵母至哺乳动物中已发现超过50种基因编码这些小G蛋白，从而形成了一个超家族。按照氨基酸序列的相似性，这些小G蛋白大致分为5组：Ras、Rho、Rab、Arf及其它。

其中，Rho如此命名是因为由海兔属神经肌肉分离的其基因编码一种多肽，该多肽与Ras具有约35％的同源性(Ras同源物)(Madaule，P.，Cell，41，31-40，1985)。

Rho是被一种肉毒杆菌毒素C3酶和葡萄球菌毒素EDIN特异性ADP核糖基化并被灭活(Narumiya，S.and Morii，S.，Cell Signal，5，9-19，1993；Sekine，A.等，J.Biol.Chem.，264，8602-8605，1989)。因此，C3酶和EDIN用于从多方面研究Rho参与的细胞功能。

例如，由肌球蛋白轻链(MLC)激酶磷酸化使肌动蛋白和肌球蛋白相互作用并引起平滑肌的收缩，而将MLC脱磷酸化的平滑肌肌球蛋白磷酸酶的结构业已明确(Shimizu H.等，J.Biol.Chem.，269，30407-30411，1994)。已明确肌球蛋白磷酸酶的活性类似MLC激酶，是在细胞内信号转导系统的控制下，且Rho参与了此机制。此外，已发现结合有GTP的活化Rho提高平滑肌去皮纤维样本中钙离子依赖性收缩(Hirata，K.，J.Biol.Chem.，267，8719-8722，1992)，因此暗示平滑肌收缩中钙离子敏感性的增加是由通过Rho对肌球蛋白磷酸酶活性的抑制引起的。

此外，在Swiss 3T3细胞和3Y1细胞中，酪氨酸磷酸化的Rho依赖性启动(Kumagai，N.等，J.Biol.Chem.，270，8466-8473，1993)及多种丝氨酸/苏氨酸激酶的活化(Kumagai，N.等，FEBS Lett.，366，11-16，1995)是已知的。由此，暗示在通过Rho的信号启动途径中的Rho下游中存在多种蛋白激酶，且实际上当Rho活化伴随丝氨酸/苏氨酸激酶(Rho激酶)活化时，已报告了ROCα(Leung，T.等，J.Biol.Chem.，270，29051-29054，1995)(另一个名称为Rho激酶，ROCK-II)和p160ROCK(Ishizaki，T.等，The EMBO J.，15(8)，1885-1893，1996)(另一个名称为ROCβ，ROCH-I)。也已报道了这两种酶的生物分布不同(Nakagawa，O.等，FEBS Lett.392 189-193，1996)。此外，还报道了此Rho激酶对肌球蛋白磷酸酶直接进行磷酸化并抑制其活性(Kimura，K.等，Science，273，245-248，1996)。

已发现Rho不仅对蛋白激酶的活化起作用，对脂激酶的活化也起作用(Zang，J.等，J。Biol.Chem.，268，22251-11154，1993)，而且还暗示存在Rho活化的磷脂酶(PLD)(Siddiqi，A.R.等，J.Biol.Chem.，268，24535-24538，1995)。

已报告了用Rho控制在血清中的Swiss 3T3成纤维细胞的迁移性，HGF和TPA(12-O-十四酰基佛波醇-13-乙酸酯)控制的成角质细胞303R的迁移性，自动发生及化学诱导物介导的嗜中性白细胞的迁移性(Takai，Y.等，Trends Biochem.Sci.，20，227-231，1995)，并且也报道了通过活化Rho控制肿瘤转移模型之一即肝癌细胞(MM1细胞)经培养的间皮层的透过(Yoshioka，K.等，REBS Lett.，372，25-28，1995)，由此暗示了Rho参与了细胞的迁移性。

同时，在来源于神经的细胞如成神经细胞瘤、PC-12细胞等中，由溶血磷脂酸引起的轴突退缩和细胞球形化是已知的，而溶血磷脂酸是Rho的活化刺激剂。由于此退缩可被C3酶治疗抑制(Jalink，K.等，J.Cell Biol.，126，801-810，1994)并足体环状结构的形成被C3酶处理抑制，该环状结构分离了溶解骨和在破骨细胞的透明区域发生的从周围吸收骨的位点(Zhang，D.等，J.Cell Sci.，108，2285-2292，1995)，暗示细胞形态变化中有Rho的深度参与。

此外，C3酶处理抑制粘着分子如LFA(白细胞功能相关抗原)的活化，且C3酶处理抑制Swiss 3T3成纤维细胞的增殖(Yamamoto，M.等，Oncogene，8，1449-1455，1993)。因此，Rho通过肌动蛋白细胞支架控制细胞粘着和细胞分裂，并还涉及c-fos基因的转录控制(Hill，C.S.等，Cell，81，1159-1170，1995)和细胞的转化(Khosravi-Far，R.等，Mol.Cell Biol.，15(11)，6443-6453，1995)。

基于C3酶抑制痢疾杆菌对上皮细胞的侵入，最近有报告称Rho深度参与了细菌感染(Adam，T.等，The EMBO J.，15(13)，3315，1996)。

此外，怀孕鼠与非怀孕鼠比较，其Rho和Rho激酶水平较高(Niiro，N.等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，230，356-359，1997)，已知Rho和Rho激酶深度参与了生产时子宫的肌肉收缩。进而，认为整联蛋白(Sueoka，K.等，Fertility & Sterility，67(5)799-811，1997)在受精、胚胎产生和胚胎化阶段参与了细胞-细胞和细胞-细胞内基质粘着，该蛋白已知被Rho活化(Morii，N.等，J.Biol.Chem.，267，20921-20926，1992)。

因此，现已清楚表明在接收来自多种细胞膜受体的信号后Rho被活化，并且活化的Rho通过肌动球蛋白系统成为范围很广的如平滑肌收缩、细胞流动、细胞粘着、细胞形态变化、细胞生长等细胞现象的分子开关。

平滑肌收缩明显牵涉高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、外周循环紊乱、早产等疾病；细胞迁移性在癌症的转移、动脉硬化、视网膜病、免疫反应等中扮演重要角色；细胞粘着深度涉及癌症的转移、炎症、自身免疫疾病、AIDS、受精和受精卵的着床等；细胞的形态变化极大地牵涉了脑功能紊乱、骨质疏松、消化道的细菌感染等；而细胞生长高度涉及了癌症、动脉硬化等。因此，阻断Rho功能的药物被当成了Rho扮演重要角色的这些疾病的治疗剂。

但是，目前只有C3酶和EDIN可抑制Rho的作用。这些蛋白不能透过细胞质，这妨碍了将其开发为药物制剂。

另一方面，Rho激酶的抑制被认为导致对多种与Rho有关细胞现象的反应的抑制。该激酶存在于通过Rho信号转导途径的下游。但是，至今尚不知Rho激酶的特异性抑制剂。

因此，寄希望寻找到一种抑制Rho激酶的化合物，这些Rho激酶抑制剂可以作为预防和或治疗与Rho有关的上述疾病和现象，例如，高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、外周循环紊乱、早产、动脉硬化、癌症、炎症、自身免疫疾病、AIDS、受精和受精卵的着床、骨质疏松、视网膜病、脑功能紊乱、消化道的细菌感染等。

已知式(I)化合物已用作预防和治疗冠状动脉、脑、肾和外周动脉等中循环紊乱的预防和治疗剂(例如，一种治疗高血压、心绞痛、肾和外周循环紊乱的强效和长效治疗剂，及脑血管痉孪等的抑制剂)，以及哮喘的治疗剂(日本未审查专利No.62-89679，日本未审查专利No.3-218356，日本未审查专利No.4-273821，日本未审查专利No.5-194401，日本未审查专利No.6-41080和WO95/28387等)。

已知式(II)化合物已用作血管舒张剂、高血压治疗剂、脑功能改善剂、抗哮喘剂、心脏保护剂、血小板凝集抑制剂、精神症状治疗剂、抗炎剂及粘滞性过高症状的预防和治疗剂(日本未审查专利No.57-20036，日本未审查专利N.61-227581，日本未审查专利N.2-256617，日本未审查专利No.4-264030，日本未审查专利No.6-56668，日本未审查专利No.6-80569，日本未审查专利No.6-293643，日本未审查专利No.7-41424和日本未审查专利No.7-277979)。

但是，尚不知道式(I)或(II)的这些化合物具有阻断Rho功能或Rho激酶抑制作用。

发明概述

本发明旨在以一种新的药物制剂提供Rho激酶抑制剂。作为深入研究的结果，本发明发现抑制Rho激酶的化合物具有抗高血压作用、抗心绞痛作用、脑血管痉孪抑制作用、抗哮喘作用、改善外周循环作用、防止早产作用、抗动脉硬化作用、抗癌作用、抗炎作用、免疫抑制作用、改善自身免疫疾病作用、抗AIDJ作用、防止受精和受精卵着床作用、治疗骨质疏松作用、治疗视网膜病作用、脑功能改善作用、预防消化道细菌感染作用，并且Rho激酶抑制剂可用作药物制剂，特别是高血压的治疗剂、心绞痛的治疗剂、脑血管痉孪的抑制剂、哮喘的治疗剂、外周循环紊乱的治疗剂、早产的预防剂、动脉硬化的治疗剂、抗癌药、抗炎剂、免疫抑制剂、自身免疫性疾病的治疗剂、抗AIDS药、骨质疏松的治疗剂、视网膜病的治疗剂、改进脑功能药、避孕药及消化道感染的预防剂。

还发现抑制Rho激酶的化合物可抑制Rho和Rho激酶研究用试剂及与其有关疾病的诊断试剂，这样就完成了本发明。

因此，本发明提供了如下方面：

(1)含Rho激酶抑制剂的药物制剂。

(2)含Rho激酶抑制剂的药物制剂，它至少选自下列之一：高血压的治疗剂、心绞痛的治疗剂、脑血管痉孪的抑制剂、哮喘的治疗剂、外周循环紊乱的治疗剂、早产的预防剂、动脉硬化的治疗剂、抗癌药、抗炎剂、免疫抑制剂、自身免疫性疾病的治疗剂、抗AIDS药、骨质疏松的治疗剂、视网膜病的治疗剂、改进脑功能药、早产预防剂、避孕药及消化道感染的预防剂。

(3)含治疗有效量的Rho激酶抑制剂和一种药用添加剂的药物组合物。

(4)含Rho激酶抑制剂的试剂。

(5)含Rho激酶抑制剂的诊断试剂。

(6)含式(I)酰胺化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐的Rho激酶抑制剂，

其中Ra是下式基团

在式(a)和(b)中，

R是氢原子、烷基或环烷基、环烷基烷基、苯基或芳烷基，其环上可选择性带有取代基，或R是下式的基团，

其中R⁶是氢原子、烷基或式-NR⁸R⁹，其中R⁸和R⁹可相同或不同并各表示氢原子、烷基、芳烷基或苯基，R⁷是氢原子、烷基、芳烷基、苯基、硝基或氰基，或R⁶和R⁷一起形成杂环基团，在其环上选择性含有氧原子、硫原子或选择性取代的氮原子；

R¹是氢原子、烷基或环烷基、环烷基烷基、苯基或芳烷基，其环上可选择性带有取代基，或

R和R¹与相邻的氮原子一起形成杂环基团，在其环上选择性含有氧原子、硫原子或选择性取代的氮原子；

R²是氢原子或烷基；

R³和R⁴可相同或不同并各表示氢原子、烷基、芳烷基、卤原子、硝基、氨基、烷基氨基、酰氨基、羟基、烷氧基、芳烷氧基、氰基、酰基、巯基、烷基硫基、芳烷基硫基、羧基、烷氧羰基、氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基或叠氮基，且

A是下式基团

其中R¹⁰和R¹¹相同或不同并各表示氢原子、烷基、卤代烷基、芳烷基、羟基烷基、羧基或烷氧羰基，或R¹⁰和R¹¹结合在一起表示环烷基，而l、m和n各表示0或1-3的整数，

在式(c)中，

L是氢原子、烷基、氨基烷基、单或二烷基氨基烷基、四氢呋喃甲基、氨基甲酰基烷基、苯二酰亚氨基烷基、脒基或下式基团

其中B是氢原子、烷基、烷氧基、芳烷基、芳烷氧基、氨基烷基、羟基烷基、烷酰氧基烷基、烷氧羰基烷基、α-氨基苄基、呋喃基、吡啶基、苯基、苯氨基、苯乙烯基或咪唑并吡啶基，

Q¹是氢原子、卤原子、羟基、芳烷氧基或噻吩甲基，

W是亚烷基，

Q²是氢原子、卤原子、羟基或芳烷氧基，

X是亚烷基，

Q³是氢原子、卤原子、羟基、烷氧基、硝基、氨基、2，3-二氢呋喃基或5-甲基-3-氧-2，3，4，5-四氢哒嗪-6-基；而Y是单键、亚烷基或亚烯基，并且

在式(c)中，

虚线是单键或双键，且

R⁵是氢原子、羟基、烷氧基、烷氧羰基氧基、烷酰氧基或芳烷氧羰基氧基；

Rb是氢原子、烷基、芳烷基、氨基烷基或单或二烷基氨基烷基；且

Rc是选择性取代的含氮杂环。

(7)含式(I)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐的药物制剂，它是至少下列一种疾病的治疗剂：高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘和外周循环紊乱，这些疾病是Rho引起的。

(8)含式(I)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐的药物制剂，它是至少下列一种治疗剂：动脉硬化的治疗剂、抗癌药、抗炎药、免疫抑制剂、自身免疫性疾病的治疗剂、抗AIDS药、骨质疏松的治疗剂、视网膜病的治疗剂、脑功能改善药物、早产的预防剂、避孕药及消化道感染的预防剂。

(9)具有Rho激酶抑制活性的试剂，其中含有式(I)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐。

(10)Rho激酶引起疾病的诊断试剂，其中含有式(I)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐。

(11)含式(II)的取代的异喹啉磺酰胺衍生物、其异构体和/或其药用酸加成盐的Rho激酶抑制剂，

其中

R¹²是氢原子、氯或羟基，而

当R¹²是氢原子时，

Alk是含2至6个碳原子的亚烷基，它选择性带有含1至10个碳原子的烷基，芳基或芳烷基取代基；

R¹³是氢原子；

R¹⁴是氢原子，或含1至6个碳原子的直链或支链烷基，芳基或芳烷基；

R¹⁵是氢原子，含1至6个碳原子的直链或支链烷基，芳基或芳烷基，苯甲酰基，肉桂基、肉桂酰基、呋喃甲酰基或下式基团，

其中R¹⁶是含1至6个碳原子的直链或支链烷基或下式基团，

其中R¹⁷和R¹⁸为氢原子或直接连接形成含2至4个碳原子的亚烷基；或者

R¹³和R¹⁴直接连接形成含4个或少于4个碳原子的亚烷基，该基团可选择性被含1至10个碳原子的烷基、苯基或苄基取代，或

R¹⁴和R¹⁵直接或通过氧原子结合并与相邻的氮原子一起形成杂环，并且

当R¹²是氯原子或羟基时，

Alk是含2至6个碳原子的亚烷基，它与碳原子连接的氢原子位置上选择性地取代有含1至6个碳原子的烷基，

R¹³和R¹⁴各为氢原子、含1至6个碳原子的直链或支链烷基或直接互相连接为亚乙基或1，3-亚丙基，其中与碳原子连接的氢原子位置是选择性地取代有含1至6个碳原子的烷基；或者

R¹⁵是氢原子、含1至6个碳原子的直链或支链烷基或脒基。

(12)含式(II)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐的药物制剂，它是至少下列一种疾病的治疗剂：高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、炎症和脑功能紊乱，这些疾病是Rho引起的。

(13)含式(II)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐的药物制剂，它是至少下列一种治疗剂：外周循环紊乱的治疗剂、动脉硬化的治疗剂、抗癌药、免疫抑制剂、自身免疫性疾病的治疗剂、抗AIDS药、骨质疏松的治疗剂、视网膜病的治疗剂、早产的预防剂、避孕药及消化道感染的预防剂。

(14)具有Rho激酶抑制活性的试剂，其中含有式(II)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐。

(15)Rho激酶引起疾病的诊断试剂，其中含有式(II)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐。

(16)式(III)的化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐，

其中Rc’是选择性取代的含氮杂环，它是除吡啶之外的Rc，而其它符号定义如上。

(17)上述(1)的药物制剂，其中含有式(III)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐作为Rho激酶抑制剂。

(18)含式(III)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐的药物制剂，它是至少下列一种治疗剂：高血压治疗剂、心绞痛的治疗剂、脑血管痉孪抑制剂、哮喘的治疗剂、外周循环紊乱的治疗剂、动脉硬化的治疗剂、抗癌药、抗炎药、免疫抑制剂、自身免疫性疾病的治疗剂、抗AIDS药、骨质疏松的治疗剂、视网膜病的治疗剂、脑功能改善药物、早产的预防剂、避孕药及消化道感染的预防剂。

(19)上述(3)的药物组合物，其中含有式(III)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐作为Rho激酶抑制剂。

(20)具有Rho激酶抑制活性的试剂，其中含有式(III)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐作为Rho激酶抑制剂。

(21)Rho激酶引起疾病的诊断试剂，其中含有式(III)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐。

(22)基于抑制Rho激酶的治疗疾病的方法，其中包括给患者使用药学有效量的Rho激酶抑制剂。

(23)上述(22)的治疗方法，其中通过抑制Rho激酶治疗的疾病至少选自下列之一：高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、外周循环紊乱、动脉硬化、癌症、炎症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨质疏松、视网膜病、脑功能紊乱、早产、受精及受精卵着床及消化道感染。

(24)治疗至少一种选自如下疾病的方法：高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、外周循环紊乱，以上这些疾病是Rho激酶引起的，以及动脉硬化、癌症、炎症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨质疏松、视网膜病、早产、受精及受精卵着床及消化道感染，其中包括使用药学有效量的式(I)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐。

(25)治疗至少一种选自如下疾病的方法：高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、炎症及脑功能紊乱，以上这些疾病是Rho激酶引起的，以及外周循环紊乱、动脉硬化、癌症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨质疏松、视网膜病、早产、受精及受精卵着床及消化道感染，其中包括使用药学有效量的式(II)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐。

(26)治疗至少一种选自如下疾病的方法：高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、外周循环紊乱、动脉硬化、癌症、炎症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨质疏松、视网膜病、脑功能紊乱、早产、受精及受精卵着床及消化道感染，其中包括使用药学有效量的式(III)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐。

(27)Rho激酶抑制剂在制备通过抑制Rho激酶可治疗疾病的治疗剂方面的用途。

(28)上述(27)的Rho激酶抑制剂的用途，其中通过抑制Rho激酶可治疗的疾病至少选自下列疾病之一：高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、外周循环紊乱、动脉硬化、癌症、炎症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨质疏松、视网膜病、脑功能紊乱、早产、受精及受精卵着床及消化道感染。

(29)式(I)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐在制备选自至少下列疾病之一的治疗剂方面的用途，所述疾病包括高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、Rho激酶引起的外周循环紊乱、动脉硬化、癌症、炎症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨质疏松、视网膜病、脑功能紊乱、早产、受精及受精卵着床及消化道感染。

(30)式(II)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐在制备选自至少下列疾病之一的治疗剂方面的用途，所述疾病包括高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、炎症、Rho激酶引起的脑功能紊乱、外周循环紊乱、动脉硬化、癌症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨质疏松、视网膜病、早产、受精及受精卵着床及消化道感染。

(31)式(III)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐在制备选自至少下列疾病之一的治疗剂方面的用途，所述疾病包括高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、外周循环紊乱、动脉硬化、癌症、炎症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨质疏松、视网膜病、脑功能紊乱、早产、受精及受精卵着床及消化道感染。

(32)一种商业试剂盒，其中包括Rho激酶抑制剂和说明书，该说明书陈述Rho激酶抑制剂可或应用于治疗至少下列疾病之一：高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、外周循环紊乱、动脉硬化、癌症、炎症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨质疏松、视网膜病、脑功能紊乱、早产、受精及受精卵着床及消化道感染。

(33)一种商业试剂盒，其中包括式(I)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐以及一份说明书，该说明书陈述该化合物可或应用于治疗至少下列疾病之一：高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、外周循环紊乱，这些疾病是由Rho激酶引起的，以及动脉硬化、癌症、炎症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨质疏松、视网膜病、脑功能紊乱、早产、受精及受精卵着床及消化道感染。

(34)一种商业试剂盒，其中包括式(II)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐以及一份说明书，该说明书陈述该化合物可或应用于治疗至少下列疾病之一：高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、炎症和脑功能紊乱，这些疾病是由Rho激酶引起的，以及外周循环紊乱、动脉硬化、癌症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨质疏松、视网膜病、脑功能紊乱、早产、受精及受精卵着床及消化道感染。

(35)一种商业试剂盒，其中包括式(III)化合物、其异构体和/或其药用酸加成盐以及一份说明书，该说明书陈述该化合物可或应用于治疗至少下列疾病之一：高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、外周循环紊乱、动脉硬化、癌症、炎症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、骨质疏松、视网膜病、脑功能紊乱、早产、受精及受精卵着床及消化道感染。

发明详述

本发明的Rho激酶抑制作用、抗高血压作用、抗心绞痛作用、脑血管痉孪抑制作用、抗哮喘作用、改善外周循环作用、防止早产作用、抗动脉硬化作用、抗癌作用、抗炎作用、免疫抑制作用、改善自身免疫疾病作用、抗AIDS作用、防止受精和受精卵着床作用、预防消化道细菌感染作用、治疗骨质疏松作用、治疗视网膜病作用及脑功能改善作用可通过Rho激酶抑制活性、血管减压作用、气管松弛作用、外周血流增加作用、细胞粘着诱导抑制作用、噁性肿瘤转移抑制作用、骨吸收抑制作用、小鼠同种异体MLR抑制活性、肿瘤细胞增殖抑制作用、血管生成抑制作用、血管平滑肌细胞增殖抑制作用等证实。

本发明Rho激酶抑制剂治疗有效的、与Rho有关的疾病包括，例如，高血压、心绞痛、脑血管痉孪、哮喘、外周循环紊乱、早产、动脉硬化、癌症、炎症、免疫性疾病、自身免疫性疾病、AIDS、消化道细菌感染、骨质疏松、视网膜病、脑功能紊乱等，以及生理现象如受精及受精卵着床。

在本文中，本发明的Rho激酶指同Rho一起活化的活化丝氨酸/苏氨酸激酶，例如上述ROCα(ROCKII)、p160ROCK(ROCβ，ROCK-I)及具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的其它蛋白。

癌症包括骨髓白血病、淋巴细胞性白血病、胃癌、直肠癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、食道癌、卵巢癌、乳腺癌、皮肤癌、宫颈癌、睾丸瘤、成神经细胞瘤、尿道上皮癌、多发性骨髓瘤、子宫癌、黑素瘤、脑瘤等，而抗癌指抑制这些肿瘤的形成、侵润、转移、生长等。

免疫性疾病包括过敏反应、器官移植排斥等。

自身免疫性疾病包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、干燥综合征、多发性硬化、重症肌无力、I型糖尿病、内分泌眼病、原发性胆汁肝硬变、节段性回肠炎、肾小球性肾炎、肉样瘤病、牛皮癣、天疱疮、再生不良性贫血、自发性血小板减少紫癜等。

呼吸道细菌感染指由沙门氏菌、痢疾杆菌、肠道病原性大肠杆菌等侵入肠粘膜上皮细胞引起的多种疾病。

视网膜病指血管病视网膜病、动脉硬化视网膜病、中枢血管痉挛视网膜病、中枢严重视网膜病、环形视网膜病、血内蛋白异常视网膜病、高血压视网膜病、白血病视网膜病、脂血症视网膜病、肾病性视网膜病、增殖性补网膜病、镰刀贫血性视网膜病、孕妇的毒血症性视网膜病等。

脑功能紊乱包括由于如下原因引起的精神病状态，其病因包括脑出血、脑血栓、脑检塞、蛛网膜下出血、暂时性脑局部缺血性休克、高血压脑病、脑动脉硬化、硬膜下血肿、硬膜外血肿、脑缺氧症、脑水肿、大脑炎、脑肿瘤、脑外伤、精神病、代谢物中毒、药物中毒、暂时性呼吸抑制、手术过程中深度麻醉、身体紊乱等，以及上述疾病引起的后遗症、注意力下降、机能亢进、言语障碍、智力发育迟缓、记忆缺失、痴呆(包括与痴呆有关的游动、夜游、侵犯行为等)。

因此，本发明的Rho激酶抑制剂是有效的药物制剂，特别是预防和治疗Rho引起的这些疾病的药物制剂，例如高血压的治疗剂、心绞痛的治疗剂、脑血管痉孪的抑制剂、哮喘的治疗剂、外周循环紊乱的治疗剂、早产的预防剂、动脉硬化的治疗剂、抗癌药、抗炎剂、免疫抑制剂、自身免疫性疾病的治疗剂、抗AIDS药、避孕药及消化道感染的预防剂/骨质疏松的治疗剂、视网膜病的治疗剂及改进脑功能药。

式(I)和式(II)化合物对Rho激酶具有高度亲和力。因此，其放射活性物质(放射配体)可在产业上用作Rho激酶的选择性放射配体。式(I)和式(II)化合物及其修饰后化合物(如这些化合物的放射配体等)为Rho激酶的抑制剂，可用作研究Rho和Rho激酶的试剂，及与其有关疾病的诊断试剂。

本发明的用作Rho激酶抑制剂的化合物可以是具有Rho激酶抑制剂作用的任何一个。例如，使用式(I)和式(II)的化合物。

在本说明书中，式(I)的每个符号定义如下。

R和R¹位的烷基是含1至10个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等，优选含1至4个碳原子的烷基。

R和R¹位的环烷基含3至7个碳原子，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。

R和R¹位的环烷基烷基中环烷基部分为上述含3至7个碳原子的环烷基，而烷基部分是含1至6个碳原子的直链或支链烷基(例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、戊基、己基等)，例如，环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环己基甲基、环庚基甲基、环丙基乙基、环戊基乙基、环己基乙基、环庚基乙基、环丙基丙基、环戊基丙基、环己基丙基、环庚基丙基、环丙基丁基、环戊基丁基、环己基丁基、环庚基丁基、环丙基己基、环戊基己基、环己基己基、环庚基己基等。

R和R¹位的芳烷基中烷基部分含1至4个碳原子，例如苯基烷基如苄基、1-苯乙基、2-苯乙基、3-苯丙基、4-苯丁基等。

R和R¹位上选择性取代的环烷基、环烷基烷基、苯基和芳烷基环上的取代基为卤原子(例如，氯原子、溴原子、氟原子和碘原子)、烷基(与R和R¹烷基相同)、烷氧基(含1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等)、芳烷基(与R和R¹芳烷基相同)或卤代烷基(即被1-5个卤原子取代的R和R¹烷基，例如氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、2，2，3，3，3-五氟丙基等)、硝基、氨基、氰基、叠氮基等。

R和R¹与相邻氮原子一起形成基团，所形成的杂环在环中选择性地含有氧原子、硫原子或选择性取代的氮原子，该杂环优选为5或6元环及其结合的环。其实例包括1-吡咯烷基、哌啶子基、1-哌嗪基、吗啉代、硫代吗啉代、1-咪唑基、2，3-二氢噻唑-3-基等。选择性取代氮原子的取代基例如是烷基、芳烷基、卤代烷基等。此处，烷基、芳烷基和卤代烷基定义如R和R¹。

R²烷基定义如R和R¹。

R³和R⁴卤原子、烷基、烷氧基和芳烷基定义如R和R¹。

R³和R⁴酰基为含2至6个碳原子的烷酰基(如乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、新戊酰基等)、苯甲酰基或苯基烷酰基，其中烷酰基部分含2至4个碳原子(例如苯乙酰基、苯丙酰基、苯丁酰基等)。

R³和R⁴烷基氨基中烷基部分含1至6个碳原子的直链或支链烷基。其实例包括甲氨基、乙氨基、丙氨基、异丙氨基、丁氨基、异丁氨基、仲丁氨基、叔丁氨基、戊氨基、己氨基等。

R³和R⁴酰氨基中酰基部分为含2至6个碳原子的烷酰基、苯甲酰基或烷酰基部分含2至4个碳原子的苯基烷酰基等，例如乙酰基氨基、丙酰基氨基、丁酰基氨基、戊酰基氨基、新戊酰基氨基、苯甲酰基氨基、苯乙酰基氨基、苯丙酰基氨基、苯丁酰基氨基等。

R³和R⁴烷硫基中的烷基部分为含1至6个碳原子的直链或支链烷基，例如甲硫基、乙硫基、丙硫基、异丙硫基、丁硫基、异丁硫基、仲丁硫基、叔丁硫基、戊硫基、己硫基等。

R³和R⁴芳烷氧基中，烷基部分是含1至4个碳原子的烷基，例如苄氧基、1-苯基乙氧基、2-苯基乙氧基、3-苯基丙氧基、4-苯基丁氧基等。

R³和R⁴芳烷基硫基中，烷基部分为含1至4个碳原子的烷基，例如苄硫基、1-苯基乙硫基、2-苯基乙硫基、3-苯基丙硫基、4-苯基丁硫基等。

R³和R⁴烷氧羰基中，烷氧基部分为含1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，例如甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、异丙氧羰基、丁氧羰基、异丁氧羰基、仲丁氧羰基、叔丁氧羰基、戊氧羰基、己氧羰基等。

R³和R⁴烷基氨基甲酰基为含1至4个碳原子的烷基单或二取代的氨基甲酰基，例如甲基氨基甲酰基、二甲基氨基甲酰基、乙基氨基甲酰基、二乙基氨基甲酰基、丙基氨基甲酰基、二丙基氨基甲酰基、丁基氨基甲酰基、二丁基氨基甲酰基等。

R⁵烷氧基定义如R和R¹。

R⁵烷氧羰基氧基中，烷氧基部分是含1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，例如，甲氧羰基氧基、乙氧羰基氧基、丙氧羰基氧基、异丙氧羰基氧基、丁氧羰基氧基、异丁氧羰基氧基、仲丁氧羰基氧基、叔丁氧羰基氧基、戊氧羰基氧基、己氧羰基氧基等。

R⁵烷酰氧基中，烷酰基部分为含2至6个碳原子的烷酰基，例如乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、戊酰氧基、新戊酰氧基等。

R⁵芳烷氧羰基氧基中，芳烷基部分为含C₁-C₄烷基的芳烷基，例如，苄氧羰基氧基、1-苯乙氧羰基氧基、2-苯乙氧羰基氧基、3-苯丙氧羰基氧基、4-苯丁氧羰基氧基等。

R⁶烷基定义如R和R¹；R⁸和R⁹烷基定义如R和R¹；而R⁸和R⁹芳烷基也定义如R和R¹。

R⁷烷基定义如R和R¹，R⁷芳烷基定义如R和R¹。

R⁶和R⁷结合形成的基团，其形成环中选择性含有氧原子、硫原子或选择性取代的氮原子的杂环，是咪唑-2-基、噻唑-2-基、噁唑-2-基、咪唑啉-2-基、3，4，5，6-四氢吡啶-2-基、3，4，5，6-四氢嘧啶-2-基、1，3-噁唑啉-2-基、1，3-噻唑啉-2-基或选择性取代的苯并咪唑-2-基、苯并噻唑-2-基、苯并噁唑-2-基等，其中取代基如卤原子、烷基、烷氧基、卤代烷基、硝基、氨基、苯基、芳烷基等。此处，卤原子、烷基、烷氧基、卤代烷基及芳烷基定义如R和R¹。

上述选择性取代的氮原子的取代基如烷基、芳烷基、卤代烷基等。此处，烷基、芳烷基和卤代烷基定义如R和R¹。

R¹⁰和R¹¹的羟基烷基中，烷基部分含1至6个碳原子的直链或支链烷基，该烷基被1至3个羟基取代，例如，羟甲基、2-羟乙基、1-羟乙基、3-羟丙基、4-羟丁基等。R¹⁰和R¹¹烷基定义如R和R¹；R¹⁰和R¹¹卤代烷基及烷氧羰基定义如R和R¹；R¹⁰和R¹¹芳烷基定义如R和R¹；R¹⁰和R¹¹结合形成的环烷基与R和R¹形成的相同。

L烷基定义如R和R¹。

L氨基烷基是被氨基取代的含1至6个碳原子的直链或支链烷基，例如氨基甲基、2-氨基乙基、1-氨基乙基、3-氨基丙基、4-氨基丁基、5-氨基戊基、6-氨基己基等。

L位上的单或二烷基氨基烷基是用含1至4个碳原子的烷基单或二取代的氨基烷基，例如甲基氨基甲基、二甲基氨基甲基、乙基氨基甲基、二乙基氨基甲基、丙基氨基甲基、二丙基氨基甲基、丁基氨基甲基、二丁基氨基甲基、2-二甲基氨基乙基、2-二乙基氨基乙基等。

L位的氨基甲酰基烷基为用氨基甲酰基取代的、含1至6个碳原子的、直链或支链烷基，例如，氨基甲酰基甲基、2-氨基甲酰基乙基、1-氨基甲酰基乙基、3-氨基甲酰基丙基、4-氨基甲酰基羰基、5-氨基甲酰基戊基、6-氨基甲酰基己基等。

L位的苯二酰亚氨基烷基是被邻苯二甲酰亚胺取代的、含1至6个碳原子的、直链或支链烷基。其实例包括苯二酰亚氨基甲基、2-苯二酰亚氨基乙基、1-苯二酰亚氨基乙基、3-苯二酰亚氨基丙基、4-苯二酰亚氨基丁基、5-苯二酰亚氨基戊基、6-苯二酰亚氨基己基等。

B烷基定义如R和R¹。

B烷氧基定义如R和R¹。

B芳烷基定义如R和R¹。

B芳烷氧基定义如R³和R⁴。

B氨基烷基定义如L。

B羟基烷基定义如R¹⁰和R¹¹。

B位烷酰氧基烷基中，直链或支链烷基含1至6个碳原子，该烷基被具有含2至6个碳原子的烷酰基部分的烷酰氧基取代，例如乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基、丁酰氧基甲基、戊酰氧基甲基、新戊酰氧基甲基、乙酰氧基乙基、丙酰氧基乙基、丁酰氧基乙基、戊酰氧基乙基、新戊酰氧基乙基等。

B位烷氧羰基烷基中，直链或支链烷基含1至6个碳原子，该烷基被具有含1至6个碳原子的烷氧基部分的烷氧羰基取代，例如甲氧羰基甲基、乙氧羰基甲基、丙氧羰基甲基、异丙氧羰基甲基、丁氧羰基甲基、异丁氧羰基甲基、仲丁氧羰基甲基、叔丁氧羰基甲基、戊氧羰基甲基、己氧羰基甲基、甲氧羰基乙基、乙氧羰基乙基、丙氧羰基乙基、异丙氧羰基乙基、丁氧羰基乙基、异丁氧羰基乙基、仲丁氧羰基乙基、叔丁氧羰基乙基、戊氧羰基乙基、己氧羰基乙基等。

Q¹、Q²和Q³卤原子定义如R和R¹。

Q¹和Q²芳烷氧基定义如R³和R⁴。

Q³烷氧基定义如R和R¹。

W、X和Y亚烷基为含1至6个碳原子的直链或支链亚烷基，例如亚甲基、亚乙基、1，3-亚丙基、1，2-亚丙基、1，4-亚丁基、1，5-亚戊基、1，6-亚己基等。

Y亚烯基为含2至6个碳原子的直链或支链亚烯基，例如1，2-亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、亚戊烯基等。

Rb烷基定义如R和R¹。

Rb芳烷基定义如R和R¹。

Rb氨基烷基定义如L。

Rb单或二烷基氨基烷基定义如L。

当Rc位含氮原子单环是吡啶、嘧啶、哒嗪、三嗪、吡唑、三唑等时，并当杂环为稠环时，该杂环例如是吡咯并吡啶(如1H-吡咯并[2，3-b]吡啶、1H-吡咯并[3，2-b]吡啶、1H-吡咯并[3，4-b]吡啶等)、吡唑并吡啶(如1H-吡唑并[3，4-b]吡啶、1H-吡唑并[4，3-b]吡啶等)、咪唑并吡啶(如1H-咪唑并[4，5-b]吡啶等)、吡咯并嘧啶(如1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶、1H-吡咯并[3，2-d]嘧啶、1H-吡咯并[3，4-d]嘧啶等)、吡唑并嘧啶(如1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶、1H-吡唑并[1，5-a]嘧啶、1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶等)、咪唑并嘧啶(如1H-咪唑并[1，2-a]嘧啶、1H-咪唑并[4，5-d]嘧啶等)、吡咯并三嗪(如吡咯并[1，2-a]-1，3，5-三嗪、吡咯并[2，1-f]-1，2，4-三嗪)、吡唑并三嗪(如吡唑并[1，5-a]-1，3，5-三嗪等)、三唑并吡啶(如1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶等)、三唑并嘧啶(如1，2，4-三唑并[1，5-a]嘧啶、1，2，4-三唑并[4，3-a]嘧啶、1H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶等)、邻二氮萘、喹唑啉、喹啉、吡啶并哒嗪(如吡啶并[2，3-c]哒嗪等)、吡啶并吡嗪(如吡啶并[2，3-b]吡嗪等)、吡啶并嘧啶(如吡啶并[2，3-d]嘧啶、吡啶并[3，2-d]嘧啶等)、嘧啶并嘧啶(如嘧啶并[4，5-d]嘧啶、嘧啶并[5，4-d]嘧啶等)、吡嗪并嘧啶(如吡嗪并[2，3-d]嘧啶等)、萘啶(如1，8-萘啶等)、四唑并嘧啶(如四唑并[1，5-a]嘧啶等)、噻吩并吡啶(如噻吩并[2，3-b]吡啶等)、噻吩并嘧啶(如噻吩并[2，3-d]嘧啶等)、噻唑并吡啶(如噻唑并[4，5-b]吡啶、噻唑并[5，4-b]吡啶等)、噻唑并嘧啶(如噻唑并[4，5-d]嘧啶、噻唑并[5，4-d]嘧啶等)、噁唑并吡啶(如噁唑并[4，5-b]吡啶、噁唑并[5，4-b]吡啶等)、噁唑并嘧啶(如噁唑并[4，5-d]嘧啶、噁唑并[5，4-d]嘧啶等)、呋喃并吡啶(如呋喃并[2，3-b]吡啶、呋喃并[3，2-b]吡啶等)、呋喃并嘧啶(如呋喃并[2，3-d]嘧啶、呋喃并[3，2-d]嘧啶等)、2，3-二氢吡咯并吡啶(如2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶、2，3-二氢-1H-吡咯并[3，2-b]吡啶等)、2，3-二氢吡咯并嘧啶(如2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-d]嘧啶、2，3-二氢-1H-吡咯并[3，2-d]吡嘧啶)、5，6，7，8-四氢吡啶并[2，3-d]嘧啶、5，6，7，8-四氢-1，8-萘啶、5，6，7，8-四氢喹啉等。当这些环形成氢化芳香环时，环中碳原子可以是羰基，并包括，例如，2，3-二氢-2-氧代吡咯并吡啶、2，3-二氢-2，3-二氧代吡咯并吡啶、7，8-二氢-7-氧代-1，8-萘啶、5，6，7，8-四氢-7-氧代-1，8-萘啶等。

这些环可被如下取代基取代，例如，卤原子、烷基、烷氧基、芳烷基、卤代烷基、硝基、氨基、烷基氨基、氰基、甲酰基、酰基、氨基烷基、单或二烷基氨基烷基、叠氮基、羧基、烷氧羰基、氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基、烷氧基烷基(如甲氧基甲基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、乙氧基丙基等)、选择性取代的肼基等。

在本文中，选择性取代的肼基的取代基包括烷基、芳烷基、酰基、氰基等，其中烷基和芳烷基定义如R和R¹，例如甲基肼基、乙基肼基、苄基肼基等。

在本说明书中，式(II)中的每个符号定义如下。

R¹³、R¹⁴、R¹⁵和R¹⁶位的含1至6个碳原子的、直链或支链烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。

R¹⁴和R¹⁵位上的芳基为苯基、萘基等。

R¹⁴和R¹⁵芳烷基定义如R和R¹。

R¹³和R¹⁴直接彼此键合形成的含有4个或4个以下碳原子的亚烷基，为亚甲基、亚乙基、1，3-亚丙基、1，2-亚丙基、1，4-亚丁基等。

含1至10个碳原子的、取代R¹³和R¹⁴直接彼此键合形成的含有4个或4个以下碳原子的亚烷基的烷基，是含1至10个碳原子的直链或支链烷基。其实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。

含1至6个碳原子的、取代R¹³和R¹⁴直接彼此键合形成的亚乙基的烷基，是含1至6个碳原子的直链或支链烷基，其与R¹³为烷基时相同。

R¹⁴和R¹⁵直接或通过氧原子键合在一起与相邻的氮原子形成的杂环，是吡咯烷子基、哌啶子基、吗啉代、高哌啶子基、高吗啉代等。

由R¹⁷和R¹⁸直接彼此键合形成的含2至4个碳原子的亚烷基，是亚乙基、1，3-亚丙基、1，2-亚丙基、1，4-亚丁基等。

Alk上含2至6个碳原子的亚烷基是亚乙基、1，3-亚丙基、1，2-亚丙基、1，4-亚丁基、1，5-亚戊基、1，6-亚己基等。

Alk上含2至6个碳原子的亚烷基的取代基，即含1至6个碳原子的烷基和含1至10个碳原子的烷基，与R¹³定义相同。

Alk是含2至6个碳原子的亚烷基的取代基，即芳基和芳烷基的定义如R¹⁴。

可用作本发明Rho激酶抑制剂的化合物，例如，是式(I)的化合物，比如下列化合物。

(1)4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(2)1-苄氧羰基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(3)1-苯甲酰基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(4)1-丙基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(5)1-[3-(2-(2-噻吩基甲基)苯氧基)-2-羟丙基]-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)-哌啶

(6)4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(7)1-苄基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)-1，2，5，6-四氢吡啶

(8)3-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(9)1-苄基-3-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(10)1-(2-(4-苄氧基苯氧基)乙基)-4-(N-(2-吡啶基)-N-苄基氨基甲酰基)哌啶

(11)1-甲酰基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(12)4-(3-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(13)1-异丙基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(14)1-甲基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(15)1-己基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(16)1-苄基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(17)1-(2-苯乙基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(18)1-(2-(4-甲氧基苯基)乙基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(19)1-(2-(4-甲氧基苯基)乙基)-4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(20)1-(2-(4-氯苯基)乙基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(21)1-联苯基甲基-4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(22)1-[2-(4-(5-甲基-3-氧代-2，3，4，5-四氢哒嗪-6-基)苯基)乙基]-4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(23)1-(4-(4，5-二氢-2-呋喃基)苯基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(24)1-(2-硝基苯基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(25)1-(2-氨基苯基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(26)1-烟酰基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(27)1-异烟酰基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(28)1-(3，4，5-三甲氧基苯甲酰基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(29)1-乙酰基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(30)1-(3-(4-氟苯甲酰基)丙基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(31)1-(3-(4-氟苯甲酰基)丙基)-4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(32)1-(1-(4-羟基苯甲酰基)乙基)-4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(33)1-(1-(4-苄氧基苯甲酰基)乙基)-4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(34)1-(2-(4-羟基苯氧基)乙基)-4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(35)1-(4-(4-氟苯基)-4-羟基丁基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(36)1-(1-甲基-2-(4-羟基苯基)-2-羟乙基)-4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(37)1-肉桂基-4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(38)1-(2-羟基-3-苯氧基丙基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(39)1-(2-羟基-3-苯氧基丙基)-4-(3-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(40)1-(2-羟基-3-苯氧基丙基)-4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(41)1-(2-苯乙基)-4-[N-(2-吡啶基)-N-(2-(N，N-二甲基氨基)乙基)-氨基甲酰基]哌啶

(42)1-苄氧羰基-4-(2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(43)1-(3-氯苯基)氨基甲酰基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(44)4-[N-(2-吡啶基)-N-(2-(N，N-二甲基氨基)乙基)-氨基甲酰基]哌啶

(45)1-甲基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)-1，2，5，6-四氢吡啶

(46)1-烟酰基-3-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(47)1-[2-(4-氟苯甲酰基)乙基]-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(48)1-(6-氯-2-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-羰基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(49)1-(4-硝基苄基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(50)1-己基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(51)1-苄氧羰基-4-(2-氯4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(52)4-(2-氯-4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(53)1-(2-氯烟酰基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(54)3-(2-氯-4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(55)1-(4-苯二酰亚氨基丁基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(56)1-(3，5-二叔丁基-4-羟基肉桂酰基)-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(57)1-氨基甲酰基甲基-4-(4-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(58)1-苄氧羰基-4-(5-硝基-2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(59)4-(5-硝基-2-吡啶基氨基甲酰基)哌啶

(60)反式-4-苄氧基甲酰氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(61)反式-4-氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(62)反式-4-甲酰氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(63)反式-4-二甲基氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(64)N-亚苄基-反式-(4-吡啶氨基甲酰基)环己基甲胺

(65)反式-4-苄基氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(66)反式-4-异丙基氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(67)反式-4-烟酰基氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(68)反式-4-环己基氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(69)反式-4-苄氧基甲酰氨基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(70)反式-4-氨基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(71)反式4-(1-氨基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(72)反式-4-氨基甲基-顺式-2-甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(73)(+)-反式-4-(1-苄氧基甲酰氨基丙基)-1-环己烷甲酸

(74)(+)-反式-4-(1-苄氧基甲酰氨基丙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(75)(-)-反式-4-(1-苄氧基甲酰氨基丙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(76)(+)-反式-4-(1-氨基丙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(77)(-)-反式-4-(1-氨基丙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(78)(-)-反式-4-(1-苄氧基甲酰氨基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(79)(+)-反式-4-(1-苄氧基甲酰氨基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(80)(+)-反式-4-(1-氨基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(81)(-)-反式-4-(1-氨基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(82)反式-4-(4-氯苯甲酰基)氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(83)反式-4-氨基甲基-1-(2-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(84)反式-4-苄氧基甲酰氨基甲基-1-(2-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(85)反式-4-甲基氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(86)反式-4-(N-苄基-N-甲基氨基)甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(87)反式-4-氨基甲基-1-(3-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(88)反式-4-氨基甲基-1-[(3-羟基-2-吡啶基)氨基甲酰基]环己烷

(89)反式-4-苄氧基甲酰氨基甲基-1-(3-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(90)反式-4-苄氧基甲酰氨基甲基-1-[(3-苄氧基-2-吡啶基)氨基甲酰基]环己烷

(91)反式-4-苯二酰亚氨基甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(92)反式-4-苄氧基甲酰氨基甲基-1-(3-甲基-4-吡啶基氨基甲酰基)环己烷

(93)反式-4-氨基甲基-1-(3-甲基-4-吡啶基氨基甲酰基)环己烷

(94)4-(反式-4-苄氧基甲酰氨基甲基环己基羰基)氨基-2，6-二甲基吡啶-N-氧化物

(95)4-(反式-4-氨基甲基环己基羰基)氨基-2，6-二甲基吡啶-N-氧化物

(96)反式-4-氨基甲基-1-(2-甲基-4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(97)反式-4-(1-苄氧基甲酰氨基乙基)-1-(4-吡啶基氨基甲酰基)环己烷

(98)反式-4-(1-氨基-1-甲基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(99)反式-4-(2-氨基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(100)反式-4-(2-氨基-1-甲基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(101)反式-4-(1-氨基丙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(102)反式-4-氨基甲基-反式-1-甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(103)反式-4-苄基氨基甲基-顺式-2-甲基-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(104)反式-4-(苄氧基甲酰氨基-1-甲基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(105)反式-4-苄氧基甲酰氨基甲基-1-(N-甲基-4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(106)反式-4-(1-乙酰氨基-1-甲基乙基)-1-(4-吡啶氨基甲酰基)环己烷

(107)反式-N-(6-氨基-4-嘧啶基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(108)反式-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(109)(+)-反式-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(氨基乙基)环己烷甲酰胺

(110)反式-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基-1-甲基乙基)环己烷甲酰胺

(111)反式-N-(1H-吡咯并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(112)(+)-反式-N-(1H-吡咯并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)环己烷甲酰胺

(113)反式-N-(1H-吡咯并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基-1-甲基乙基)环己烷甲酰胺

(114)(+)-反式-N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)环己烷甲酰胺

(115)反式-N-(1H-吡咯并[3，4-d]嘧啶-4-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(116)(+)-反式-N-(1H-吡咯并[3，4-d]嘧啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)环己烷甲酰胺

(117)反式-N-(1H-吡咯并[3，4-d]嘧啶-4-基)-4-(1-氨基-1-甲基乙基)环己烷甲酰胺

(118)反式-N-(4-嘧啶基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(119)反式-N-(3-氨基-4-吡啶基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(120)反式-N-(7H-咪唑并[4，5-d]嘧啶-6-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(121)反式-N-(3H-1，2，3-三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(122)反式-N-(1-苄基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(123)反式-N-(1H-5-吡唑基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(124)反式-N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(125)反式-N-(4-哒嗪基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(126)反式-N-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(127)反式-N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(128)反式-N-(噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(129)反式-N-(5-甲基-1，2，4-三唑并[1，5-a]嘧啶-7-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(130)反式-N-(3-氰基-5-甲基吡唑唑并[1，5-a]嘧啶-7-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(131)反式-N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基-1-甲基乙基)环己烷甲酰胺

(132)反式N-(2-(1-吡咯烷基)-4-吡啶基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(133)反式-N-(2，6-二氨基-4-嘧啶基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(134)(+)-反式-N-(7-甲基-1，8-萘啶-4-基)4-(氨基乙基)环己烷甲酰胺

(135)反式-N-(1-苄氧基甲基吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(136)(+)-反式-N-(1-甲基吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)环己烷甲酰胺

(137)反式-N-苄基-N-(2-苄基氨基-4-吡啶基)4-(1-氨基-1-甲基乙基)环己烷甲酰胺

(138)反式-N-(2-叠氮基-4-吡啶基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(139)反式-N-(2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(140)反式-N-(2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基-1-甲基乙基)环己烷甲酰胺

(141-1)反式-N-(2-羧基-4-吡啶基)-4-氨基甲基环己烷甲酰胺

(141-2)R-(+)-反式-N-(3-溴-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)环己烷甲酰胺

(142)反式-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-胍基甲基环己烷甲酰胺

(143)反式-N-(1H-吡唑并[3，4-b]-4-基)-4-胍基甲基环己烷甲酰胺

(144)反式-N-(4-吡啶基)-4-胍基甲基环己烷甲酰胺

(145)反式-N-(1-甲基吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-胍基甲基环己烷甲酰胺

(146)反式-N-(1-甲基吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(2-咪唑啉-2-基)氨基甲基环己烷甲酰胺

(147)反式-N-(1-苄氧基甲基吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-胍基甲基环己烷甲酰胺

(148)反式-N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-胍基甲基环己烷甲酰胺

(149)反式-N-(1-苄氧基甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(2-咪唑啉-2-基)氨基甲基环己烷甲酰胺

(150)反式-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)4-(3-苄基胍基甲基)环己烷甲酰胺

(151)反式-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)4-(3-苯基胍基甲基)环己烷甲酰胺

(152)反式-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)4-(3-丙基胍基甲基)环己烷甲酰胺

(153)反式-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(3-辛基胍基甲基)环己烷甲酰胺

(154)反式-N-(1-苄氧基甲基吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(2-苄基-3-乙基胍基甲基)环己烷甲酰胺

(155)反式-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)4-(咪唑-2-基)氨基甲基环己烷甲酰胺

(156)反式-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(噻唑-2-基)氨基甲基环己烷甲酰胺

(157)(R)-(+)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)苯甲酰胺

(158)N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基-1-甲基乙基)苯甲酰胺

(159)N-(4-吡啶基)-4-氨基甲基-2-苄氧基苯甲酰胺

(160)N-(4-吡啶基)-4-氨基甲基-2-乙氧基苯甲酰胺

(161)(R)-(-)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-3-硝基苯甲酰胺

(162)(R)-(-)-N-(4-吡啶基)-3-氨基-4-(1-氨基乙基)苯甲酰胺

(163)(R)-(+)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-3-氯苯甲酰胺

(164)N-(4-吡啶基)-3-氨基甲基苯甲酰胺

(165)(R)-(+)-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)苯甲酰胺

(166)(R)-(+)-N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)苯甲酰胺

(167)N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-胍基甲基苯甲酰胺

(168)N-(4-吡啶基)-4-胍基甲基苯甲酰胺

(169)(R)-(+)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-3-氟苯甲酰胺

(170)N-(4-吡啶基)-4-氨基甲基苯甲酰胺

(171)N-(4-吡啶基)-4-氨基甲基-2-羟基苯甲酰胺

(172)N-(4-吡啶基)-4-(2-氨基乙基)苯甲酰胺

(173)N-(4-吡啶基)-4-氨基甲基-3-硝基苯甲酰胺

(174)N-(4-吡啶基)-3-氨基-4-氨基甲基苯甲酰胺

(175)(S)-(-)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)苯甲酰胺

(176)(S)-(-)-N-(4-吡啶基)-2-(1-氨基乙基)苯甲酰胺

(177)(R)-(-)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-2-氯苯甲酰胺

(178)(R)-(+)-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(1-(丙基胍基)乙基)苯甲酰胺

(179)(R)-(-)-N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)-3-叠氮基苯甲酰胺

(180)(R)-(+)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-2-硝基苯甲酰胺

(181)(R)-(+)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-3-乙氧基苯甲酰胺

(182)(R)-(+)-N-(3-碘-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)苯甲酰胺

(183)(R)-(+)-N-(3-碘-1H-吡咯并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)-3-叠氮基苯甲酰胺

(184)(R)-(-)-N-(4-吡啶基)-4-(1-氨基乙基)-3-羟基苯甲酰胺

(185)N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-胍基甲基-3-硝基苯甲酰胺

(186)(R)-N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-(1-胍基甲基)-3-硝基苯甲酰胺

(187)(R)-N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)-2-硝基苯甲酰胺

(188)N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-胍基苯甲酰胺

(189)(R)-N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)-3-硝基苯甲酰胺

(190)(R)-N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-(1-胍基乙基)苯甲酰胺

(191)N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基-2-羟乙基)苯甲酰胺

(192)N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-氨基甲基-3-硝基苯甲酰胺

(193)N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺

(194)N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺

(195)N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-1-氨基乙酰基-4-哌啶甲酰胺

(196)N-(1-甲氧基甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺

(197)N-(2，3-二氢-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺

(198)N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-(2-苯乙基)-4-哌啶甲酰胺

(199)N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-脒基-4-哌啶甲酰胺

(200)N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-(3-苯丙基)-4-哌啶甲酰胺

(201)N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-苄基-4-哌啶甲酰胺

(202)N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-1-(2-苯乙基)-4-哌啶甲酰胺

(203)N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-1-(3-苯丙基)-4-哌啶甲酰胺

优选化合物为(80)、(109)、(110)、(112)、(115)、(142)、(143)、(144)、(145)、(153)、(157)、(163)、(165)、(166)和(179)。

例如式(II)的化合物用作本发明的Rho激酶抑制剂，例如以下化合物。

(204)1-(5-异喹啉基磺酰基)高哌嗪

(205)1-(5-异喹啉基磺酰基)-2-甲基高哌嗪

(206)1-(5-异喹啉基磺酰基)-3-甲基高哌嗪

(207)1-(5-异喹啉基磺酰基)-6-甲基高哌嗪

(208)1-(5-异喹啉基磺酰基)-2，3-二甲基高哌嗪

(209)1-(5-异喹啉基磺酰基)-3，3-二甲基高哌嗪

(210)1-(5-异喹啉基磺酰基)-3-乙基高哌嗪

(211)1-(5-异喹啉基磺酰基)-3-丙基高哌嗪

(212)1-(5-异喹啉基磺酰基)-3-异丁基高哌嗪

(213)1-(5-异喹啉基磺酰基)-3-苯基高哌嗪

(214)1-(5-异喹啉基磺酰基)-3-苄基高哌嗪

(215)1-(5-异喹啉基磺酰基)-6-乙基高哌嗪

(216)1-(5-异喹啉基磺酰基)-6-丙基高哌嗪

(217)1-(5-异喹啉基磺酰基)-6-丁基高哌嗪

(218)1-(5-异喹啉基磺酰基)-6-戊基高哌嗪

(219)1-(5-异喹啉基磺酰基)-6-己基高哌嗪

(220)1-(5-异喹啉基磺酰基)-6-苯基高哌嗪

(221)1-(5-异喹啉基磺酰基)-6-苄基高哌嗪

(222)1-(5-异喹啉基磺酰基)-4-甲基高哌嗪

(223)1-(5-异喹啉基磺酰基)-4-乙基高哌嗪

(224)1-(5-异喹啉基磺酰基)-4-丙基高哌嗪

(225)1-(5-异喹啉基磺酰基)-4-丁基高哌嗪

(226)1-(5-异喹啉基磺酰基)-4-己基高哌嗪

(227)N-(2-氨基乙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(228)N-(4-氨基乙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(229)N-(2-氨基-1-甲基乙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(230)N-(2-氨基-1-甲基戊基)-1-氯-5-异喹啉

(231)N-(3-氨基-2-甲基丙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(232)N-(3-二正丁基氨基丙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(233)N-(N-环己基-N-甲基氨基乙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(234)N-(2-胍基乙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(235)N-(2-胍基丁基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(236)N-(2-胍基-1-甲基乙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(237)N-(2-胍基甲基戊基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(238)N-(2-胍基-3-甲基丁基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(239)N-(3-胍基-2-甲基丙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(240)N-(4-胍基-3-甲基丁基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(241)2-甲基-4-(1-氯-5-异喹啉磺酰基)哌嗪

(242)2-乙基-4-(1-氯-5-异喹啉磺酰基)哌嗪

(243)2-异丙基-4-(1-氯-5-异喹啉磺酰基)哌嗪

(244)2，5-二甲基-4-(1-氯-5-异喹啉磺酰基)哌嗪

(245)1-甲基-4-(1-氯-5-异喹啉磺酰基)哌嗪

(246)1-脒基-4-(1-氯-5-异喹啉磺酰基)哌嗪

(247)1-脒基-4-(1-氯-5-异喹啉磺酰基)高哌嗪

(248)1-脒基-3-甲基-4-(1-氯-5-异喹啉磺酰基)哌嗪

(249)1-脒基-2，5-二甲基-4-(1-氯-5-异喹啉磺酰基)哌嗪

(250)N-(2-氨基乙基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(251)N-(4-氨基丁基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(252)N-(2-氨基-1-甲基乙基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(253)N-(2-氨基-1-甲基庚基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(254)N-(3-氨基-2-甲基丁基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(255)N-[3-(N，N-二丁基氨基)丙基]-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(256)N-[2-(N-环己基-N-甲基氨基)乙基]-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(257)N-(2-胍基乙基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(258)N-(4-胍基丁基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(259)N-(2-胍基-1-甲基乙基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(260)N-(1-胍基甲基戊基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(261)N-(2-胍基-3-甲基丁基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(262)N-(3-胍基-2-甲基丙基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(263)N-(4-胍基-3-甲基丁基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(264)2-甲基-4-(1-羟基-5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(265)2-乙基-4-(1-羟基-5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(266)2-异丁基-4-(1-羟基-5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(267)2，5-二甲基-4-(1-羟基-5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(268)1-甲基-4-(1-羟基-5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(269)1-脒基-4-(1-羟基-5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(270)1-脒基-4-(1-羟基-5-异喹啉基磺酰基)高哌嗪

(271)1-脒基-3-甲基-4-(1-羟基-5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(272)1-脒基-2，5-二甲基-4-(1-羟基-5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(273)N-(2-甲基氨基乙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(274)N-(2-乙基氨基乙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(275)N-(2-丙基氨基乙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(276)N-(2-丁基氨基乙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(277)N-(2-己基氨基乙基)-1-氯-5-异喹啉磺酰胺

(278)1-(1-氯-5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(279)1-(1-氯-5-异喹啉基磺酰基)高哌嗪

(280)N-(2-甲基氨基乙基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(281)N-(2-乙基氨基乙基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(282)N-(2-丙基氨基乙基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(283)N-(2-丁基氨基乙基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(284)N-(2-己基氨基乙基)-1-羟基-5-异喹啉磺酰胺

(285)1-(1-羟基-5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(286)1-(1-羟基-5-异喹啉基磺酰基)高哌嗪

(287)1-(5-异喹啉基磺酰基)-4-甲基哌嗪

(288)1-(5-异喹啉基磺酰基)-4-正己基哌嗪

(289)1-(5-异喹啉基磺酰基)-4-肉桂基哌嗪

(290)1-(5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(291)N-(2-氨基乙基)-5-异喹啉磺酰胺

(292)N-(4-氨基丁基)-5-异喹啉磺酰胺

(293)N-(3-二正丁基氨基丙基)-5-异喹啉磺酰胺

(294)1-(5-异喹啉基磺酰基)-3-甲基哌嗪

(295)1-(5-异喹啉基磺酰基)-3-异丁基哌嗪

(296)1-(5-异喹啉基磺酰基)-2，5-二甲基哌嗪

(297)N-(3-胍基-2-苯丙基)-5-异喹啉磺酰胺

(298)N-(6-胍基-1-甲基庚基)-5-异喹啉磺酰胺

(299)2-[2-(5-异喹啉磺酰胺)乙基氨基]-2-咪唑啉

(300)2-脒基-1-(5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(301)4-脒基-2，5-二甲基-(5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(302)4-脒基-1-(5-异喹啉基磺酰基)高哌嗪

(303)4-(N1，N2-二甲基脒基)-1-(5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(304)4-脒基-3-丁基-1-(5-异喹啉基磺酰基)哌嗪

(305)4-己基-1-(5-异喹啉基磺酰基)亚乙基二胺

(306)N-(4-胍基丁基)-5-异喹啉磺酰胺

(307)N-(2-胍基丁基)-5-异喹啉磺酰胺

(308)1-(5-异喹啉基磺酰基)-2-甲基哌嗪。

优选化合物为(204)和(308)。

本发明的用作Rho激酶抑制剂的化合物可以是酸加成盐的形式。例如，该酸可以是无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸等，以及有机酸如甲磺酸、富马酸、马来酸、扁桃酸、枸橼酸、酒石酸、水杨酸等。带有羧基的化合物可用金属转变为盐，这些金属如钠、钾、钙、镁、铝等，或与氨基酸如赖氨酸等形成盐。此外，它们的一水合物、二水合物、1/2水合物、1/3水合物、1/4水合物、2/3水合物、3/2水合物等也包括在本发明的范围内。

按照日本未审专利No.62-89679、日本未审专利No.3-218356、日本未审查专利No.5-194401、日本未审专利No.6-41080、WO95/28387等公开的方法可合成式(I)化合物。

按照日本未审专利No.57-156463、日本未审专利No.57-200366、日本未审专利No.58-121278、日本101279未审专利No.58-121279、日本未审专利No.59-93054、日本未审专利No.60-81168、日本未审专利No.61-152658、日本未审专利No.61-227581、日本未审专利No.62-103066、USP-4678783等公开的方法可制备式(II)的化合物。

式(I)化合物中，其中Ra是式(c)基团而Rc是Rc′的化合物，即式(III)的酰胺化合物，

其中Rc′是除吡啶外的上述Rc中的选择性取代的含氮杂环，而其它符号定义如上，该化合物为新化合物，可通过如下方法合成。

方法1

式(IV)化合物

Rc′-NH-Rb (IV)

其中各符号定义如上，与式(V)化合物

其中各符号定义如上，或其反应性衍生物反应得到此化合物。羧酸化合物的反应性衍生物如酰卤、酯、酸酐、混合酸酐等。

通过在对本反应呈惰性的溶剂中搅拌进行该反应是有利的，这些溶剂如四氢呋喃、二噁烷、氯仿、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、苯、甲苯、乙醇等。通过本领域已知方法，例如共沸蒸馏、形成复合物、转变为盐等，将反应过程中释放的水、醇或酸由反应混和物中除去。

方法2

式(III)的化合物中，L带有氢以外的取代基的化合物可通过L为氢的化合物与式(VI)化合物反应制备。

L¹-M (VI)

其中L¹上述L基团中的氢原子外的取代基而M是反应原子，反应按照本领域已知的N-烷基化或N-酰基化反应进行。

方法3

式(III)的化合物中，L是烷基或带有式(i)取代基的化合物，可通过L是氢原子的化合物和式(VII)的化合物进行还原氨基化制备，

L²＝C＝O (VII)

其中L²是可通过还原氨基化反应转变为烷基的基团或式(I)的基团。

方法4

式(III)的化合物中，L是式(1)基团的化合物，

其中Q¹定义如上而W¹是W取代基中的羟基-1，3-亚丙基，可通过其中L是氢原子的式(III)化合物与式(VIII)化合物反应制备，

其中Q¹定义如上。

此反应在适当溶剂中进行是有利的，该溶剂应不影响反应，例如醇(如甲醇、乙醇、2-丙醇等)、脂族或脂环族酮(如2-丙酮、2-丁酮、环己烷等)等。加入碱如碱金属碳酸盐、碳酸氢盐等可加速该反应。该反应温度较高，优选该反应混和物的回流温度。

方法5

式(III)的化合物中，其中L是氢原子的化合物可由式(III-a)的化合物制备，

其中B¹是上述取代基B中的烷氧基或芳烷氧基，而其它符号定义如上。

化合物(III-a)中，B¹是烷氧基的化合物在不影响反应的适当的有机溶剂中搅拌，例如醇(如甲醇、乙醇、2-丙醇等)及醚(如四氢呋喃等)，该反应中存在适当的碱，如碱金属或碱土金属氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐(如氢氧化钠、碳酸钾、碳酸氢钠等)，在必要时进行加热以得到L为氢原子的式(III)。

在化合物(III-a)中，B¹是芳烷氧基的化合物在不影响反应的适当溶剂中，在适当的催化剂如钯碳等的存在下，用氢气、肼、甲酸、甲酸铵等氢来源，在室温或需要时的压力下进行还原分解反应。

此外，化合物(III-a)在5-35％，优选15-30％乙酸中在溴化氢的存在下搅拌，此化合物可转化。式(III-b)的化合物进行催化氢解反应，

其中Y¹是上述取代基Y中的亚甲基，而其它符号定义如上。该反应在不影响反应的适当溶剂中、在适当催化剂如钯碳等的存在下、在氢气中得到L为氢的式(III)化合物。

可用本领域已知的如重结晶、色谱等方法从反应混和物中分离并纯化这样得到的式(III)化合物。

此外，式(III)化合物通过常规方法可形成药周盐。用于形成盐的酸可适当地选自无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸等，有机酸如甲磺酸、富马酸、马来酸、扁桃酸、枸橼酸、酒石酸、水杨酸等，氨基酸如赖氨酸等，以及金属钠、钾、钙、镁、铝等。通过与碱如氢氧化钠、氢氧化钾等按照已知方法反应可将这些酸加成盐转变为相应的游离碱。此盐还可转化为季铵盐。

式(III)的化合物可存在旋光异构体、其外消旋体或顺反异构体，所有这些包括在本发明的范围内。这些异构体可通过常规方法分离或用不同的起始化合物制备。

当本发明的Rho激酶抑制剂用作药物制剂，特别是高血压治疗剂、心绞痛的治疗剂、脑血管痉孪抑制剂、哮喘的治疗剂、外周循环紊乱的治疗剂、早产的预防剂、动脉硬化的治疗剂、抗癌药、抗炎药、免疫抑制剂、自身免疫性疾病的治疗剂、避孕药、消化道感染的预防剂、抗AIDS药、骨质疏松的治疗剂、视网膜病的治疗剂或脑功能改善药物时，可制备为一般药物制剂。例如，本发明的Rho激酶抑制剂与药用载体(如赋形剂、粘合剂、崩解剂、矫味药、乳化剂、稀释剂、助溶剂等)混合得到药物组合物或药物制剂，其形式为片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊、锭剂、糖浆、溶液剂、乳液、混悬剂、注射剂(如液体、悬液等)、栓剂、吸入剂、透皮吸收剂、滴眼剂、眼药膏等，它们适于口服或非肠道给药。

当制备固体制剂时，可使用添加剂如蔗糖、乳糖、纤维素、D-甘露醇、麦芽糖醇、葡聚糖、淀粉、琼脂、藻酸盐、壳多糖、壳聚糖、果胶、黄蓍胶、阿拉伯胶、明胶、胶原、酪蛋白、白蛋白、磷酸钙、山梨醇、甘氨酸、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、甘油、聚乙二醇、碳酸氢钠、硬脂酸镁、滑石等。如果需要片剂可进行典型的包衣，得到糖包衣片剂、肠溶衣片剂、膜包衣片剂、双层片剂和多层片剂。

当制备半固体制剂时，可使用动物脂肪和植物油(例如橄榄油、玉米油、蓖麻油等)、矿物油(如凡士林、白凡士林、固体石蜡等)、蜡(西蒙得木油、巴西棕榈蜡、蜂蜡等)、部分或全部合成甘油脂肪酸酯(如月桂酸、豆蔻酸、棕榈酸等)等。其可商购产品的例子包括Witepsol(Dynamitnovel Ltd.制造)、Farmazol(NOF Corporation)等。

当制备液体制剂时，使用添加剂如氯化钠、葡萄糖、山梨醇、甘油、橄榄油、丙二醇、乙醇等。具体地讲，当制备注射剂时，使用灭菌水溶液如生理盐水、等渗液体、油状液体(如芝麻油和大豆油等)等。如果需要，通常可使用适当的助悬剂如羧甲基纤维素钠、非离子表面活性剂，稳定剂(如苯甲酸苄基酯和苄醇)等。此外，当制备滴眼剂时，使用含水液体或水溶液，特别是灭菌注射用水溶液。滴眼剂液体可适当含有多种添加剂如缓冲剂(优选刺激小的硼酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、碳酸盐缓冲剂等)、等渗剂、稳定剂、防腐剂、增稠剂、螯合剂、pH调节剂(优选pH一般为约6-8.5)和芳香剂。

这些制剂中的活性组分的含量为制剂重量的0.1-100％，优选1-50％。当根据患者的病情、体重、年龄等进行变化时，对成人来说，一般以单剂量或多剂量形式每天口服活性组分约1-500mg。

实施例

本发明通过实施例、制剂实施例和药学作用详述如下，而本发明不限于此。

在下文中，参照实施例描述了本发明式(III)新化合物的合成方法。

实施例1

(a)将N-苄氧羰基异哌啶甲酰氯(5g)加入到4-氨基-1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶(3g)和二亚丙基乙胺(2.16g)的乙腈(40ml)溶液中，并将此混和物室温搅拌2小时。将此反应混和物倒入冰水中并用氯仿萃取。将用水洗涤、干燥并减压浓缩得到的残余物通过硅胶柱色谱进行纯化得到6.3g N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-苄氧羰基-4-哌啶甲酰胺。

PMR(CDCl₃)：1.67(9H，s)，1.79(2H，m)，1.95(2H，m)，2.53(1H，m)，2.89(2H，m)，4.29(2H，m)，5.15(2H，s)，6.48(1H，d，J＝4.4Hz)，7.36(5H，m)，7.59(1H，br)，7.61(1H，d，J＝4.4Hz)，7.99(1H，d，J＝5.4Hz)，8.43(1H，d，J＝5.4Hz)

(b)将N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-苄氧羰基-4-哌啶甲酰胺(2g)溶解于甲醇(30ml)中并加入10％钯碳氢氧化物(0.5g)进行氢化(常压)。反应完毕后，滤出催化剂并减压浓缩此滤液得到1.2g N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺。

PMR(DMSO-d₆)：1.59(9H，s )，1.83(2H，m )，2.01(2H，m)，2.89(2H，m)，3.01(1H，m)，3.32(2H，m)，7.19(1H，d，J＝4.4Hz)，7.68(1H，d，J＝4.4Hz)，7.97(1H，d，J＝5.4Hz)，8.24(1H，d，J＝5.4Hz)，8.81(1H，br)，10.45(1H，s)

(c)将甲酸(10ml)加到N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺(1g)中并将此混和物室温搅拌2小时。用1N氢氧化钠水溶液中和此混和物并用氯仿萃取。将用水洗涤、干燥并然后减压浓缩得到的结晶溶解于15％盐酸-甲醇(5ml)中。通过将所得溶液浓缩得到的结晶在乙醇-乙酸乙酯中重结晶得到650mg N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺单盐酸盐一水合物，熔点为273℃(分解)。

PMR(DMSO-d₆)：1.52(2H，m)，1.69(2H，m)，2.51(2H，m)，2.70(1H，m)，2.97(2H，m)，3.32(1H，br)，6.79(1H，d，J＝3.4Hz)，7.31(1H，d，J＝3.4Hz)，7.79(1H，d，J＝5.4Hz)，8.04(1H，d，J＝5.4Hz)，9.82(1H，s)，11.54(1H，br)

实施例2

(a)将N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺(0.6g)、乙氧苯基溴(390mg)和碳酸钾(290mg)在二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液在80℃搅拌2小时。将此反应混和物倒入冰水中并用氯仿萃取。将用水洗涤、干燥并减压浓缩得到的残余物通过硅胶柱色谱进行纯化得到550mg N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-(2-苯乙基)-4-哌啶甲酰胺。

PMR(DMSO-d₆)：1.59(9H，s)，1.66(2H，m)，1.80(2H，m)，1.98(2H，m)，2.50(2H，m)，2.56(1H，m)，2.74(2H，m)，3.01(2H，m)，7.05(1H，d，J＝4.4Hz)，7.23(5H，m)，7.68(1H，d，J＝4.4Hz)，7.97(1H，J＝5.4Hz)，8.23(1H，d，J＝5.4Hz)，10.03(1H，s)

(b)将甲酸(5ml)加到N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-(2-苯乙基)-4-哌啶甲酰胺(550mg)中并将此混和物室温搅拌2小时。用1N氢氧化钠水溶液中和此混和物并用氯仿萃取。将用水洗涤、干燥并然后减压浓缩得到的结晶溶解于15％盐酸-甲醇(1ml)中。通过将所得溶液浓缩得到的结晶在乙醇-乙酸乙酯中重结晶得到250mg N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-(2-苯乙基)-4-哌啶甲酰胺二盐酸盐1/4水合物，熔点为272℃(分解)。

PMR(DMSO-d₆/TMS)：2.00-2.19(4H，m)，2.93-3.41(7H，m)，3.63-3.68(2H，m)，7.22-7.37(5H，m)，7.50(1H，d，J＝2.0Hz)，7.56(1H，t，J＝2.0Hz)，8.25(1H，d，J＝6.8Hz)，8.33(1H，d，J＝6.8Hz)，10.86(1H，br)，11.36(1H，s)，12.77(1H，br)

实施例3

(a)将N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺(500mg)、苄基溴(370mg)和碳酸钾(300mg)在二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液在80℃搅拌4小时。将此反应混和物倒入冰水中并用氯仿萃取。将用水洗涤、干燥并减压浓缩得到的残余物通过硅胶柱色谱进行纯化得到300mg N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-苄基-4-哌啶甲酰胺。

PMR(CDCl₃)：1.65(9H，s)，1.91(4H，m)，2.04(2H，m)，2.35(1H，m )，2.97(2H，m)，3.51(2H，s)，6.44(1H，d，J＝3.9Hz)，7.30(5H，m)，7.49(1H，br)，7.57(1H，d，J＝3.9Hz)，7.99(1H，d，J＝5.4Hz)，8.41(1H，d，J＝5.4Hz)

(b)将甲酸(4ml)加到N-(1-叔丁氧羰基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-苄基-4-哌啶甲酰胺(300mg)中并将此混和物室温搅拌1小时。用1N氢氧化钠水溶液中和此混和物并用氯仿萃取。将用水洗涤、干燥并然后减压浓缩得到的结晶溶解于15％盐酸-甲醇(1ml)中。通过将所得溶液浓缩得到的结晶在乙醇-乙酸乙酯中重结晶得到120mg N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-苄基-4-哌啶甲酰胺二盐酸盐一水合物，熔点为260℃(分解)。

PMR(DMSO-d₆/TMS)：2.00-2.15(4H，m)，2.92-2.98(2H，m)，3.13-3.19(1H，m)，3.36-3.43(2H，m)，4.32(2H，s)，7.55(1H，br)，7.63(2H，m)，8.20(1H，d，J＝6.4Hz)，8.31(1H，d，J＝6.4Hz)，10.76(1H，br)，11.25(1H，br)，12.69(1H，br)

可用与上述实施例相同的方式制备下列化合物。

实施例4

N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺二盐酸盐3/2水合物，熔点为277℃(分解)。

实施例5

N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-1-氨基乙酰基-4-哌啶甲酰胺二盐酸盐1/2水合物，熔点为264℃(分解)。

实施例6

N-(1-甲氧基甲基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺一水合物，熔点为240-241℃。

实施例7

N-(2，3-二氢-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-4-哌啶甲酰胺二盐酸盐3/2水合物，熔点为235℃(分解)。

实施例8

N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-脒基-4-哌啶甲酰胺二盐酸盐5/4水合物，熔点为246℃(分解)。

实施例9

N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-1-(3-苯丙基)-4-哌啶甲酰胺二盐酸盐，熔点为276℃(分解)。

实施例10

N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-1-(2-苯乙基)-4-哌啶甲酰胺二盐酸盐一水合物，熔点为259-261℃(分解)。

实施例11

N-(1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基)-1-(3-苯丙基)-4-哌啶甲酰胺二盐酸盐1/2水合物，熔点为240-244℃(分解)。

本发明药物制剂的制备方法解释如下。

制剂实施例1：片剂

本发明化合物 10.0mg

乳糖 50.0mg

玉米淀粉 20.0mg

结晶纤维素 29.7mg

聚乙烯吡咯烷酮K30 5.0mg

滑石 5.0mg

硬脂酸镁 0.3mg

120.0mg

将本发明的化合物、乳糖、玉米淀粉和结晶纤维素混合，用聚乙烯吡咯烷酮K30糊溶液揉和并通过20目筛制粒。在50℃干燥2小时后，将此颗粒通过24目筛，并加入滑石和硬脂酸镁。用φ7mm冲压机制备每片重120mg的片剂。

制剂实施例2：胶囊

本发明化合物 10.0mg

乳糖 70.0mg

玉米淀粉 35.0mg

聚乙烯吡咯烷酮K30 2.0mg

滑石 2.7mg

硬脂酸镁 0.3mg

120.0mg

将本发明的化合物、乳糖、玉米淀粉混合，用聚乙烯吡咯烷酮K30糊溶液揉和并通过20目筛制粒。在50℃干燥2小时后，将此颗粒通过24目筛，并加入滑石和硬脂酸镁。将此混和物装入硬胶囊(4号)得到重120mg的胶囊。

本发明药物制剂的药学作用通过实验实施例解释如下。

实验实施例1：Rho激酶抑制作用(对牛胸主动脉Rho激酶的抑制)

通过如下方法部分纯化由牛胸主动脉制备Rho激酶。用9倍量的50mM Tris-羟甲基氨基甲烷(Tris)(pH＝7.4)、1mM二硫苏糖醇、1mMEGTA、1mM EDTA、100μM对脒基苯甲基磺酰氟、5μM E-64、5μM亮抑蛋白酶肽和5μM抑胃酶肽将动脉切碎并均浆化。将均浆离心(10000×g，30分钟)得到上清液。在羟磷灰石上吸收此上清液。用0.2M磷酸缓冲液(pH＝6.8)洗涤此柱。用0.4M磷酸缓冲液(pH＝6.8)洗脱Rho激酶标准产物。将Rho激酶测试如下。

含50mM Tris、1mM EDTA、5mM氯化镁、50μg/ml组蛋白、10μMGTPγS、100μg/ml Rho、2μM[³²P]ATP、上述制备的Rho激酶(3μl)和被测化合物的反应混和物在30℃反应15分钟。加入25％三氟甲酸(TCA)溶液(1ml)停止反应并将此混和物在4℃放置30分钟。然后，通过膜过滤器(HAWP型，Millipore)将此混和物过滤，并在液体闪烁计数器上检测过滤器的放射活性。用下式计算被测化合物的抑制作用，该式基于与无被测化合物样品(对照组)的放射活性的比较。结果见表1。

抑制率(％)＝[(对照组的每分钟计数-存在被测化合物组的每分钟计数)/对照组的每分钟计数]×100

表1

被测化合物	抑制率(％)
被测化合物	抑制率(％)	化合物109.2HCl (1μM)(10μM)	81100
化合物165.2HCl.3/2H<sub>2</sub>O(10μM)	100	化合物109.2HCl (1μM)(10μM)	81100
化合物165.2HCl.3/2H<sub>2</sub>O(10μM)	100	化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O (10μM)	100
化合物204.2HCl (10μM)	93	化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O (10μM)	100

实验实施例2：Rho激酶抑制作用(对人血小板Rho激酶(p160ROCK)的抑制)

用Ishizaki等的方法(Ishizaki等，The EMBO J.，15(8)，1885-1893，1996)分离人血小板p160ROCK。

激酶测试包括如下步骤。含50mM Hepes-NaOH(pH＝7.4)、10mM氯化镁、5mM MnCl₂、2mM二硫苏糖醇、0.02％Brij 35、1μM[γ-³²P]ATP、330μg/ml组蛋白、Ishizaki等的方法分离的p160ROCK(2μl)和被测化合物的反应混和物在30℃孵育20分钟。将此溶液与1/3量的4×Laemmli样品缓冲液混和，煮沸5分钟开加到SDS-PAGE上。将此胶用考马斯亮蓝染色并干燥。将组蛋白带切除并测定放射活性。以与实验实施例1相似的方法评价被测化合物，并计算50％抑制时需要的每个被测化合物浓度，即IC50(μM)。结果见表2。

表2

被测化合物	IC<sub>50</sub>(μM)
被测化合物	IC<sub>50</sub>(μM)	化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O	1.5
化合物109.2HCl	0.11	化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O	1.5
化合物109.2HCl	0.11	化合物143.2HCl.H<sub>2</sub>O	1.6
化合物204.2HCl	3.8	化合物143.2HCl.H<sub>2</sub>O	1.6
化合物204.2HCl	3.8	化合物308.2HCl	5.0

实验实施例3：Rho激酶抑制作用(对p160ROCK和ROCKII的抑制)

用下列方法得到p160ROCK(Ishizaki T等，The EMBO J.，15(8)，1885-1893，1996)和ROCKII(Nakagawa O等，FEBS Lett.392 189-193，1996)的标准酶产物。将COS细胞植于3.5cm碟上并培养过夜。用脂质转染胺试剂，将p160ROCK和ROCKII的表达载体(pCAG-myc-p160ROCK和pCAG-myc-ROCKII：见Ishizaki T等，The EMBO J.，15(8)，1885-1893，1996和Nakagawa O等，FEBS Lett.392189-193，1996)转染。孵育20小时后，用冰冷的PBS将此细胞洗涤一次，并用裂解缓冲液(20mM Tris-HCl(pH＝7.5)、1mM EDTA、1mM EGTA、5mM氯化镁、5mM NaF、10mM β-甘油磷酸酯、5mM焦磷酸钠、0.2mM苯甲基磺酰氟、2mM二硫苏糖醇、0.2mM钒酸钠、0.05％Triton X-100、0.1μM花萼海绵诱癌素)在冰上将此细胞裂解20分钟。将此裂解物以10000×g离心10分钟并回收上清液。向此上清液中加入9E10抗-myc-抗体(见Ishizaki T等，The EMBO J.，15(8)，1885-1893，1996)并将此混和物摇动2小时。然后，加入G蛋白琼脂糖凝胶并将此混和物再摇动2小时。以1000×g将此混悬液离心5分钟并用裂解缓冲液将所得到的颗粒洗涤3次，用激酶缓冲液(50mM Hepes-NaOH(pH＝7.4)、10mM氯化镁、5mM MnCl₂、2mM二硫苏糖醇、0.02％Brij35)洗涤一次。将此颗粒悬浮于激酶缓冲液中得到标准酶产物。按照实验实施例2所示方法进行激酶实验，其中用此实验实施例获得的标准酶产物代替人血小板Rho激酶(p160ROCK)。并计算50％抑制时需要的每个被测化合物浓度，即IC50(μM)。结果见表3。

表3

实验实施例4：舒张作用

用戊巴比妥钠麻醉雄性兔(体重1.9-3.0kg)并将其放血至死，此后分离出胸主动脉。制备约2mm宽的主动脉环样本并悬于Magnus浴(40ml)中，加入2g Krebs-Henseleit溶液(37℃，氯化钠117mM、氯化钾4.7mM、氯化钙2.5mM、硫酸镁1.2mM、碳酸氢钠24.8mM、磷酸二氢钾1.2mM、葡萄糖11.0mM)。并将混和气体(95％氧气+5％二氧化碳)不断通入Magnus浴中。用异构转导器(TB-611T，Nippon Koden)测定制备样本的张力。用去氧肾上腺素(10^-6M)引起制备样本的收缩，收缩稳定后，逐渐加入被测化合物，观察到了舒张作用。此被测化合物的舒张作用以对去氧肾上腺素引起的收缩为100％计算50％舒张时需要的被测化合物浓度，即IC50(μM)。结果见表4。

实验实施例5：乙酰胆碱对从豚鼠中分离的气管样本的收缩作用

通过腹膜内注射戊巴比妥钠(100mg/kg)将雄性Hartley豚鼠(体重260-390g)麻醉并放血至死，此后分离出气管。打开气管的前软骨并将此带切出3mm宽的条得到样本。将此样本悬于Magnus浴(40ml)中，加入1g Krebs-Henseleit溶液(37℃，氯化钠117mM、氯化钾4.7mM、氯化钙2.5mM、硫酸镁1.2mM、碳酸氢钠24.8mM、磷酸二氢钾1.2mM、葡萄糖11.0mM)。并将混和气体(96％氧气+5％二氧化碳)不断通入Magnus浴中。用异构转导器(TB-611T，Nippon Koden)测定制备样本的张力并记录于记录器(Ti-102，Tokai Irika)上。用乙酰胆碱(10^-6M)引起此条的收缩，收缩稳定后，逐渐加入被测化合物，观察到了舒张作用。此被测化合物的舒张作用以对罂粟碱(10^-4M)引起的最大反应为100％计算50％舒张时需要的被测化合物浓度，即IC50(μM)。结果见表4。

表4

被测化合物	血管舒张作用(μM)	气管舒张作用(μM)
被测化合物	血管舒张作用(μM)	气管舒张作用(μM)	化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O	0.70	0.56
化合物109.2HCl	0.1	0.043	化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O	0.70	0.56
化合物109.2HCl	0.1	0.043	化合物165.2HCl.3/2H<sub>2</sub>O	0.051	0.066
化合物179.2HBr.1/2H<sub>2</sub>O	0.03	0.029	化合物165.2HCl.3/2H<sub>2</sub>O	0.051	0.066

实验实施例6：外周血流的增加作用

链脲霉素(STZ，65mg/kg)给雄性SD鼠(体重200-300g)静脉注射制备糖尿病鼠。一个月后，用戊巴比妥钠将STZ诱导的糖尿病鼠麻醉并用激光血液流动计(ALF21R，Advance)检测后腿皮肤中的血流。通过颈动脉插管静脉使用被测化合物，并观察后腿皮肤血流的增加作用。被测化合物对血流的增加作用通过较给药前血流增加的百分率表示。结果如表5。

表5

被测化合物	皮肤血流增加±标准误差(％)
被测化合物	皮肤血流增加±标准误差(％)	化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O (1μg)	135.0±13.4
化合物157.HCl.H<sub>2</sub>O (1μg)	211.6±13.6	化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O (1μg)	135.0±13.4
化合物157.HCl.H<sub>2</sub>O (1μg)	211.6±13.6	化合物165.2HCl.3/2H<sub>2</sub>O(0.03μg)(0.1μg)	135.8±0.0144.7±0.0
化合物166.2HCl.H<sub>2</sub>O (0.3μg)(1μg)	143.2±25.4165.9±42.5	化合物165.2HCl.3/2H<sub>2</sub>O(0.03μg)(0.1μg)	135.8±0.0144.7±0.0

实验实施例7：VLA(极迟抗原)整联蛋白活化的抑制

作为VLA整联蛋白活化的指数，检测佛波醇酯诱导的CEM细胞(人T细胞型建立细胞)对纤连蛋白的粘着，纤连蛋白是VLA整联蛋白的配体。通过下列方法确定被测化合物对诱导粘着的抑制作用。

用含0.5％胎牛血清白蛋白(BSA)、10mm HEPES、2mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、60μg/ml硫酸卡那霉素和1.5mg/ml碳酸氢钠的RPMI1640培养基(下文中将此培养基称为培养溶液)洗涤CEM细胞并悬浮于此培养基中用于下面的实验。向包被有人纤连蛋白的96孔板的每个孔中加入CEM细胞(5×10⁴)并将此被测化合物溶解于该培养溶液中(最终浓度1-100μM)至100μl，并将此板在37℃放置1小时。然后，加入PMA(12-O-十四烷酰佛波醇-13乙酸酯，TPA；最终浓度为10ng/ml)和被测化合物至200μl，并将此板在37℃放置30分钟。在37℃用培养溶液(200μl)将每个孔洗涤两次，并检测粘着在板上细胞的LDH(乳酸脱氢酶)活性。根据上述方法获得的结果，被测化合物对诱导粘着作用的抑制作用通过下式计算。结果见表6。

粘着诱导的抑制率(％)＝(a-b)/(a-c)×100

a＝加入PMA时的粘着细胞数

b＝加入被测化合物和PMA时的粘着细胞数

c＝不刺激时的粘着细胞数

表6

被测化合物	浓度(μM)	粘着诱导抑制率(％)
被测化合物	浓度(μM)	粘着诱导抑制率(％)	化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O	100	70
化合物109.2HCl	100	67	化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O	100	70
化合物109.2HCl	100	67	化合物143.2HCl.H<sub>2</sub>O	100	77
化合物165.2HCl.3/2H<sub>2</sub>O	10	40	化合物143.2HCl.H<sub>2</sub>O	100	77
化合物165.2HCl.3/2H<sub>2</sub>O	10	40	化合物204.2HCl	100	82
抗-β1抗体	20μg/ml	118	化合物204.2HCl	100	82
抗-β1抗体	20μg/ml	118	IgG1	20μg/ml	-25

实验实施例8：骨吸收的抑制(体外)

用小鼠股骨按照下列方法测定骨吸收的体外抑制。

将3-6周龄雄性ICR的股骨无菌移出，用含10％热灭活的胎牛血清、青霉素G钙(100单位/ml)、硫酸卡那霉素(60μg)和0.15％碳酸氢钠的F12培养基(下文中称为培养溶液)洗涤骨髓腔。洗涤骨髓腔并除去附在骨上的软组织后，培养此骨。将被测化合物一次溶解于二甲基亚砜(DMSO)中得到10mg/ml溶液，用培养溶液将其稀释1000倍得到10μl/ml溶液。并将此被测化合物分别加到表7的浓度中，并用此培养溶液(1.2ml)，在5％二氧化碳和95％空气中将此鼠股骨于24孔板中培养6天。培养完成后，回收此培养上清液，并用邻甲酚酞通过螯合方法定量测定培养上清液中悬浮的钙离子的量。以不加被测化合物的股骨作为对照用下式计算被测化合物的骨吸收抑制作用。

骨吸收抑制率(％)＝(不加被测化合物时游离钙的量-加入被测化合物时游离钙的量)/(不加被测化合物时游离钙的量-培养基中钙的量)×100

此实验每组进行4例。作为对照，单独使用与加入被测化合物时相同量的DMSO。结果见表7。

实验实施例9：鼠同种异体混合淋巴细胞反应的抑制

将BALB/c小鼠的脾细胞作为反应细胞而用丝裂霉素C处理的C57BL/6小鼠的脾细胞作为刺激细胞，通过将二者混合培养(等比例)进行小鼠同种异体混合淋巴细胞反应(下文中称为小鼠同种异体MLR)。

通过下面的方法制备反应细胞。由5-6周龄BALB/c小鼠中取出脾并用RPMI1640培养基(含硫酸卡那霉素(60μg/ml)、青霉素G钾(100单位/ml)、N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸盐(10mM)、0.1％碳酸氢钠和L-谷氨酰胺(2mM))处理，该培养基中还加有热灭活的5％胎牛血清(FBS)，得到脾细胞的单细胞悬液。溶血处理后，用含10^-4M 2-巯基乙醇和10％FBS的RPMI1640培养基将此悬液调整至10⁷细胞/ml，并用作反应细胞悬液。

将上述方法制备的反应细胞悬液(50μl)、刺激细胞悬液(50μl)和用含10％FBS的RPMI1640培养基制备的被测化合物样品(100μl)加入96孔板中并在5％二氧化碳和95％空气中在37℃培养4天。

用溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓(MTT)进行显色实验以测定淋巴细胞变形反应。

培养完成后，除去每孔中的上清液(100μl)，并向每孔中加入5mg/ml MTT溶液(20μl)，然后在37℃培养4小时。然后，加入含10％十二烷基硫酸钠的0.01N盐酸溶液(100μl)并将此混合物在37℃培养过夜。将所得紫色甲

结晶溶解并用微量板吸收计检测550nm的吸收值，将此值作为小鼠同种异体MLR淋巴细胞变形反应的指数。用下式通过计算抑制率评价下式同种异体MLR的抑制。结果见表7。

抑制率(％)＝{1-[(加入被测化合物时的MLR吸收值-反应细胞的吸收值)/(不加被测化合物时的MLR吸收值-反应细胞的吸收值)]}×100

表7

被测化合物	骨吸收抑制率％(μM)	小鼠同源性MLR抑制活性IC<sub>50</sub>(μM)
被测化合物	骨吸收抑制率％(μM)	小鼠同源性MLR抑制活性IC<sub>50</sub>(μM)	化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O	40.9(100)	9.6
化合物109.2HCl	42.6(100)	1.6	化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O	40.9(100)	9.6
化合物109.2HCl	42.6(100)	1.6	化合物112.2HCl	75.7(100)	4.4
化合物110.2HCl.H<sub>2</sub>O	74.0(100)	1.1	化合物112.2HCl	75.7(100)	4.4
化合物110.2HCl.H<sub>2</sub>O	74.0(100)	1.1	化合物142.2HCl.H<sub>2</sub>O	44.2(100)
化合物143.2HCl.H<sub>2</sub>O	39.4(100)		化合物142.2HCl.H<sub>2</sub>O	44.2(100)
化合物143.2HCl.H<sub>2</sub>O	39.4(100)		化合物308.2HCl		13.9

实验实施例10：对SK-Mel-28黑素瘤细胞生长的抑制

将人SK-Mel-28黑素瘤(10⁴细胞)和被测化合物悬浮于含100μl10％FBS的RPMI1640培养基中，并在5％二氧化碳中在37℃在96孔板中孵育72小时。孵育后，向每个孔中加入10μl MTT(5mg/ml)并将此细胞在37℃在5％二氧化碳中孵育4小时。然后，向每个孔中加入10％十二烷基硫酸钠和0.01N盐酸溶液10μl。将此板放置过夜后，用微量板读数计测定570nm的吸收值并用下式计算抑制百分率(％细胞毒性)。结果见表8。

用溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓(MTT)通过显色实验确定对人培养肿瘤细胞的细胞毒性(Carmichael等，Cancer Res.，47，936-942，1987；Mosman，J.Immunol.Methods，65，55-63，1983)。

将此被测化合物溶解于二甲基亚砜中并在使用前用RPMI1640培养基稀释。二甲基亚砜的最终浓度不高于0.25％。

抑制率(％)＝[1-加入被测化合物时的吸收值/不加被测化合物时的吸收值]×100

表8

被测化合物	细胞生长抑制率IC<sub>50</sub>(μM)
被测化合物	细胞生长抑制率IC<sub>50</sub>(μM)	化合物115.2HBr.1/4H<sub>2</sub>O	9
化合物109.2HCl	58	化合物115.2HBr.1/4H<sub>2</sub>O	9
化合物109.2HCl	58	化合物142.2HCl.H<sub>2</sub>O	59
化合物145.2HCl.H<sub>2</sub>O	62	化合物142.2HCl.H<sub>2</sub>O	59

实验实施例11：血管生成的抑制

用血管内皮细胞中管腔形成的抑制作为指数评价血管生成的抑制。具体地说，将正常人脐带血管内皮细胞(KURABO INDUSTRIES LTD.)悬浮于E-GMUV培养基中，其浓度为5.5×10⁴细胞/ml，并将其中400μl加入基质凝胶(matrigel)板(EHS肉瘤来源的重组基膜，Coll aborative Biomedical Products)。然后，加入被测化合物(1mM溶液，4μl)并将此细胞在5％二氧化碳中在37℃孵育18小时。孵育完成后，在显微镜下计数每个预定区域中管腔数。因为管腔形成抑制时管腔数增加，故与对照组的管腔数比较评价被测化合物。结果见表9。

表9

被测化合物	管腔数(10μM)
被测化合物	管腔数(10μM)	化合物109.2HCl	153％
化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O	174％	化合物109.2HCl	153％
化合物80.2HCl.H<sub>2</sub>O	174％	化合物110.2HCl.H<sub>2</sub>O	203％
化合物165.2HCl.3/2H<sub>2</sub>O	222％	化合物110.2HCl.H<sub>2</sub>O	203％
化合物165.2HCl.3/2H<sub>2</sub>O	222％	化合物204.2HCl	133％

实验实施例12：血管平滑肌细胞生长的抑制

按照Ross的移植方法(Ross，R.and Glomset，J.A.，N.Engl.J.Med.，295，369-420，1976)进行鼠动脉分离和平滑肌细胞(SMC)的培养。用割颈总动脉的方法将雄性Wistar鼠(10周龄)处死并取出胸主动脉。除去外膜周围的脂肪组织并剥下外膜，将此动脉切碎并在5％二氧化碳中在37℃培养于含10％胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中。几天后，用胰蛋白酶处理分离长出的细胞，用磷酸缓冲盐水(PBS)清洗并在80平方厘米烧瓶中用含10％FBS的DMEM培养基孵育。将传代培养物2的细胞悬浮于含10％FBS的DMEM培养基，其浓度为5×10⁴细胞/ml，并向96孔胶原包被板的每孔中加入该悬浮液100μl，将其在37℃在5％二氧化碳中孵育1天。用二甲基亚砜(DMSO)适当稀释被测化合物并将其加入96孔板中。培养基中DMSO的浓度调节为1％。48小时后，加入10μl MTT溶液(5mg/ml)，4小时后，加入10％十二烷基硫酸钠-0.01N盐酸(50μl)。通过免疫读数器检测第二天在570nm的吸收值。用下式计算抑制百分数来表示被测化合物的SMC生长抑制作用。结果见表10。

表10

被测化合物	IC<sub>50</sub>(μM)
被测化合物	IC<sub>50</sub>(μM)	化合物153.2HCl	27
化合物157.2HCl.H<sub>2</sub>O	55	化合物153.2HCl	27
化合物157.2HCl.H<sub>2</sub>O	55	化合物165.2HCl.3/2H<sub>2</sub>O	38
化合物163.2HBr	63	化合物165.2HCl.3/2H<sub>2</sub>O	38

实验实施例13：急性毒性

分别给ddY小鼠腹膜内注射化合物109·2HCl和化合物143·2HCl，并对小鼠监控5天。结果，腹膜内注射30mg/kg不引起死亡。

上述制剂实施例和药学实验表明式(I)和式(II)化合物具有强Rho激酶抑制作用。这些Rho激酶抑制剂具有血管舒张作用、气管扩张作用、外周血流增加作用、细胞粘着诱导抑制作用、肿瘤细胞转移抑制作用、骨吸收抑制作用、小鼠同种异体MLR抑制活性、肿瘤细胞生长抑制作用及其它多种作用。因此，它们可用作药物制剂，特别是高血压的治疗剂、心绞痛的治疗剂、脑血管痉孪的抑制剂、哮喘的治疗剂、外周循环紊乱的治疗剂、早产的预防剂、动脉硬化的治疗剂、抗癌药、抗炎剂、免疫抑制剂、自身免疫性疾病的治疗剂、抗AIDS药、避孕药、消化道感染的预防剂、骨质疏松的治疗剂、视网膜病的治疗剂及改进脑功能药。

此外，因为本发明的Rho激酶抑制剂具有强Rho激酶抑制活性，故它们也可用作与Rho和Rho激酶有关的研究试剂及与其有关疾病的诊断试剂。

此申请基于日本专利申请No.212409/1996，将其内容引为参考。