CN101374912B - 显色剂的液体试剂及其稳定化方法 - Google Patents

显色剂的液体试剂及其稳定化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101374912B
CN101374912B CN200780003267.4A CN200780003267A CN101374912B CN 101374912 B CN101374912 B CN 101374912B CN 200780003267 A CN200780003267 A CN 200780003267A CN 101374912 B CN101374912 B CN 101374912B
Authority
CN
China
Prior art keywords
developer
reagent
quaternary ammonium
methylenum coeruleum
liquid reagent
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN200780003267.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101374912A (zh
Inventor
米原聪
稻村范郎
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Arkray Inc
Original Assignee
Arkray Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Arkray Inc filed Critical Arkray Inc
Publication of CN101374912A publication Critical patent/CN101374912A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101374912B publication Critical patent/CN101374912B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B69/00—Dyes not provided for by a single group of this subclass
    • C09B69/02—Dyestuff salts, e.g. salts of acid dyes with basic dyes
    • C09B69/04—Dyestuff salts, e.g. salts of acid dyes with basic dyes of anionic dyes with nitrogen containing compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B67/00—Influencing the physical, e.g. the dyeing or printing properties of dyestuffs without chemical reactions, e.g. by treating with solvents grinding or grinding assistants, coating of pigments or dyes; Process features in the making of dyestuff preparations; Dyestuff preparations of a special physical nature, e.g. tablets, films
    • C09B67/0071—Process features in the making of dyestuff preparations; Dehydrating agents; Dispersing agents; Dustfree compositions
    • C09B67/0075—Preparations with cationic dyes
    • C09B67/0076—Preparations of cationic or basic dyes in liquid form
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
    • G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/17—Nitrogen containing
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/17—Nitrogen containing
    • Y10T436/173845—Amine and quaternary ammonium
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
    • Y10T436/2525—Stabilizing or preserving

Abstract

本发明提供在液体状态下稳定地保存亚甲蓝显色剂的液体试剂以及在液体状态下使亚甲蓝系显色剂稳定化的方法。通过在液体介质中使亚甲蓝系显色剂与具有碳原子数为12以上的烃基的季铵或其盐共存，使其稳定化。亚甲蓝系显色剂例如可以举出10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪。

Description

显色剂的液体试剂及其稳定化方法
技术领域
本发明涉及亚甲蓝系显色剂的液体试剂及其稳定化方法。
背景技术
作为被氧化而显色的底物，例如已知有10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪等亚甲蓝系显色剂。该亚甲蓝系显色剂由于作为显色团的亚甲蓝难以退色，因此能够进行高灵敏度的检测，期待在各种分析中的使用。
这种显色剂例如可以用于下述情况：使其与通过氧化还原酶生成的过氧化氢等氧化物质发生反应，通过对其发色量进行吸光度测定，从而确定上述氧化物质的量。供于这种酶反应时，显色剂通常溶解在水中，将所制备的溶液作为液体试剂来使用。
但是，由于这种亚甲蓝系显色剂在水等溶剂中不稳定，因此具有自然发色的问题。因此，当使用以液体状态保存的显色剂时，吸光度测定的背景提高，测定精度有可能降低。特别是，亚甲蓝系显色剂的作为发色团的亚甲蓝如上所述具有难以退色的性质，因此即便具有高灵敏度的优点，但与其它发色团相比，由于自然氧化而游离的发色团(亚甲蓝)也难以退色，因此存在难以回避其影响的问题。例如，10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪以水溶液的状态保存时，在约1天左右可见影响测定的自然发色，约3天左右作为分析用试剂的使用变得困难(参照专利文献1或该专利文献1的对应美国专利US4,916,058)。
为了防止这种自然发色所造成的影响，有必要在每次测定时制备液体试剂，但这样操作变得繁杂、成本也提高。
专利文献1：日本特公平4-27839号公报
发明内容
因此，本发明的目的在于提供即便在液体状态下也可以稳定地保存的亚甲蓝系显色剂的液体试剂以及在溶剂中将上述显色剂稳定化的方法。
为了达成上述目的，本发明的液体试剂含有亚甲蓝系显色剂、具有碳原子数为12以上的烃链的季铵或其盐以及液体介质。
另外，本发明的含有亚甲蓝系显色剂的液体试剂的稳定化方法包括在液体介质中使上述显色剂与具有碳原子数为12以上的烃链的季铵或其盐共存。
这样，在含有亚甲蓝系显色剂的液体试剂中，通过使具有碳原子数为12以上的烃链的季铵或其盐(以下也统称为“季铵”)共存，虽然机理不明，但可以抑制亚甲蓝显色剂的自然发色。由此，上述显色剂可以在液体状态下保存，例如不必在每次测定时制备显色剂的液体试剂，因此测定等操作变得容易，低成本化也成为可能。而且，即便使用保存的本发明的显色剂的液体试剂作为显色反应的显色试剂，由于可以抑制吸光度测定中的背景提高，因此测定精确度也可以提高。
具体实施方式
本发明的亚甲蓝系显色剂的液体试剂如上所述，其特征在于至少含有亚甲蓝显色剂，并含有具有碳原子数为12以上的烃链的季铵或其盐以及液体介质。
这种本发明的液体试剂通过亚甲蓝系显色剂与上述季铵的共存，抑制了自然发色而被稳定化，因此可以在液体状态下保存。其保存温度并无特别限定，例如为0～40℃的范围、优选为0～25℃的范围、更优选为0～10℃的范围。
具体地说，当未在亚甲蓝系显色剂的液体试剂中添加季铵时，如果在10℃下保存，则例如在亚甲蓝系显色剂的浓度为0.05mmol/L时，亚甲蓝在吸收波长658nm下的吸光度在保存10天时例如增加至180mAbs.。与此相对，本发明的液体试剂即便在10℃下保存，即便至少保存3天、例如保存4、5、6、7、8、9、10天时，也可以防止和/或抑制亚甲蓝系显色剂的自然发色，20～300天左右时也可作为显色剂的试剂充分地使用。
作为本发明的亚甲蓝系显色剂的液体试剂的用途，并无特别限定，例如如上所述可作为氧化还原反应中的显色底物等的液体试剂来使用。
本发明中，亚甲蓝系显色剂是亚甲蓝系氧化显色剂，是指通过氧化将作为发色团的亚甲蓝游离的化合物，例如可以举出10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪(以下称作“DA-67”)、10-(乙酰基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪、10-(苯基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪(日本特公平4-27839记载的化合物No.20)、10-(3-(甲基羧基氨基)-六甲基-氨基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪(日本特公昭60-33479记载的化合物No.II-4)、10-(((3-(甲基羧基氨基)-4-甲基)-苯基)-氨基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪(日本特公昭60-33479的化合物No.II-5)、10-((3-(甲基羧基氨基甲基)-苯基)-甲基氨基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪(日本特公昭60-33479的化合物No.II-6)、10-(1-萘氨基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪(日本特公昭60-33479的化合物No.II-7)、10-(甲基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪(日本特公昭60-33479的化合物No.II-8)、10-(苯基氨基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪(日本特公昭60-33479的化合物No.II-9)、10-(甲基氨基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪(日本特公昭60-33479的化合物No.II-11)等。
本发明的季铵的烃链的碳原子数为12以上即可，例如为13、14、15、16、17、18、19、20，优选为14以上、15以上、16以上、17以上、14～18的范围、16～18的范围、17、18。本发明中，“季铵的烃链的碳原子数”优选是指季铵的4个基团的任一烃基的碳原子数。
上述烃基例如可以举出直链或支链的烷基、环状烷基、直链或支链或者环状的具有取代基的烷基、具有取代基的芳基等，上述取代基可以相互相同或不同，上述取代基例如为卤素、直链或支链烷基、苯基、羟基、直链或支链C1～C6烷氧基，上述芳基例如为苯基或环己基。另外，还可以取代它们，为直链或支链烷基羰基。
本发明的季铵的具体例子例如可以举出苄索氯铵(benzethoniumchloride)、硬脂酰基三甲基氯化铵、鲸蜡基三甲基溴化铵、鲸蜡基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基氯化铵、苯扎氯铵、苄基二甲基十四烷基氯化铵、十四烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基氯化铵、椰子胺醋酸酯、十二烷基三甲基氯化铵等。这些化合物可以为任意一种，还可以使用两种以上。另外，上述季铵即便为不同烃链的碳原子数的季铵的混合物也行，只要它们的任一个为上述范围的碳原子数，就可以使用。另外，本发明中，季铵盐的盐种类并无特别限定。
本发明的液体试剂中上述显色剂的浓度例如为1～10000μmol/L的范围、优选为5～1000μmol/L的范围。上述液体试剂中上述季铵的浓度例如为2～100000μmol/L的范围、优选为50～30000μmol/L的范围、特别优选为100～10000μmol/L的范围。另外，本发明的液体试剂中的上述显色剂以及上述季铵的含量并无特别限定，例如添加于试样或反应液等中时，按照达到所需浓度的方式设定即可。
本发明的液体试剂中，上述季铵或其盐相对于上述显色剂0.1mmol的的添加比例例如为10～100000μmol的范围、优选为100～10000μmol的范围、更优选为500～10000μmol。
上述液体试剂所含的液体介质并无特别限定，通常为水性溶剂，例如可以举出水、缓冲液等。缓冲液可以使用普通的缓冲液，例如可以举出ADA缓冲液、Bis-Tris缓冲液、PIPES缓冲液、磷酸缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液、柠檬酸缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液、甘氨酰替甘氨酸缓冲液、甘氨酰胺缓冲液、Tris-HCl缓冲液等。上述缓冲液的浓度例如为1～500mM的范围、优选为5～100mM的范围。
制备后的本发明的液体试剂的pH并无特别限定，例如为pH3～11的范围、优选为pH4.5～9。
本发明的液体试剂例如优选进一步使选自乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙撑三胺五醋酸(DTPA)、反式-1，2-二氨基环己烷-N，N，N’，N’-四醋酸(CyDTA)、O，O’-双(2-氨基乙基)乙二醇-N，N，N’，N’-四醋酸(GEDTA)和三乙酸胺(NTA)中的至少一个螯合剂或叠氮化钠等共存。通过使这些物质共存，可以进一步抑制自然发色。另外，这些物质可以为一种，还可以共存两种以上。
另外，本发明的液体试剂还可以根据用途适当含有例如氧化还原反应所需的添加剂。
接着，本发明的稳定化方法为至少含有亚甲蓝系显色剂的液体试剂的稳定化方法，其特征在于，在上述液体介质中使上述显色剂与上述季铵共存。另外，只要无特别说明，则上述显色剂、上述季铵和溶剂的种类或添加比例等与上述相同。本发明中，“显色剂的液体试剂的稳定化”是指液体介质中的亚甲蓝系显色剂的自身发色的抑制得以继续或就指该状态，例如包括“液体介质中的上述显色剂和/或上述液体试剂的保存”和“液体介质中的上述显色剂和/或上述液体试剂的维持”的意义。如果是本发明的稳定化方法，则可以在防止和/或抑制自然发色的状态下稳定化、保存和/或维持液体试剂中的亚甲蓝系显色剂至少3天，例如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14天以上或者20～300天左右，经过这些天数后，也优选可以使用本发明的液体试剂作为显色反应的试剂。
本发明的稳定化方法例如通过将亚甲蓝系显色剂和上述季铵溶解或悬浮在上述液体介质中来进行。如此制备的液体可以作为本发明的液体试剂使用。
本发明的另一方式提供一种试剂盒，其为用于进行本发明的稳定化方法的试剂盒，其含有亚甲蓝系显色剂和上述季铵。上述试剂盒优选根据需要进一步含有上述液体介质和/或操作说明书。上述操作说明书中例如优选记载下述内容：当是利用上述试剂盒进行的本发明的稳定化方法时，可以在防止和/或抑制自然发色的状态下稳定化、保存和/或维持至少3天，例如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14天以上或者20～300天左右，可以作为显色反应的试剂来使用。
另外，又一方式中，本发明提供一种试剂盒，其为用于检测和/或测定的试剂盒，其含有亚甲蓝系显色剂、上述季铵、在使亚甲蓝系显色剂显色的反应中使用的试剂、以及用于进行本发明的稳定化方法的操作说明书。上述试剂盒优选根据需要含有上述液体介质。本方式中，“检测和/或测定”并无特别限定，例如包括过氧化氢的检测和/或测定、或者介由以往公知的过氧化氢的产生进行的化学物质的检测和/或测定。本方式中，“在使亚甲蓝系显色剂显色的反应中使用的试剂”并无特别限定，例如可以举出各种过氧化物酶(POD)等。上述试剂还可以进一步包括与底物发生反应而产生过氧化氢的氧化还原酶，例如各种氧化酶、脱氢酶等以及作用于底物的蛋白酶等。因此，作为本方式的具体例子，可以举出一种试剂盒，其为糖化蛋白质的检测/测定试剂盒，其含有亚甲蓝系显色剂、上述季铵、POD、果糖基氨基酸氧化酶(FAOD)、上述操作说明书和根据需要的各种蛋白酶。上述处理说明书中例如优选记载下述内容：当是利用本方式的试剂盒进行的本发明的稳定化方法时，可以在防止和/或抑制自然发色的状态下稳定化、保存和/或维持至少3天，例如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14天以上或者20～300天左右，可以用于检测和/或测定。
实施例1
研究在溶剂中使DA-67与季铵共存时的稳定性(吸光度变化)。
表1
<第1试剂：R1-1>
 MOPS   30mmol/L(pH7.5)
 FAOD(商品名FPOX-CE、Kikkoman公司制、以下相同)   2.5KU/L*
 POD   2KU/L*
<第2试剂：R2-1>
 添加剂(下述表2记载)   1g/L
 亚甲蓝系显色试剂(商品名DA-67、和光纯药工业公司制、以下相同)   0.25mmol/L
 金属蛋白酶(爱科来株式会社制)   2400KU/L*
 CaCl2   5mmol/L
 MOPS   30mmol/L(pH6.5)
*KU：103×U(酶单位)
<测定方法>
在4℃下保存了12天的上述第1试剂(R1-1)78μL中添加同样在4℃下保存了12天的上述第2试剂(R2-1)26μL，并在37℃下孵育5分钟。然后，利用生物化学自动分析装置(商品名JCA-BM8：日本电子公司制、以下相同)来测定刚要添加第2试剂前的反应液在波长658nm的吸光度(A0)和添加第2试剂5分钟后的反应液在波长658nm的吸光度(A5)，求得其差(A5-A0)。将它们的结果示于下述表2。
表2
  添加剂   A5-A0
  实施例1   苄索氯铵   0.026
  比较例1-1   无添加   0.117
  比较例1-2   D-(+)-海藻糖   0.095
  比较例1-3   戊二醛   0.083
比较例1-4   胶原肽商品名：ニツピペプタイドPRA 0.099
  比较例1-5   果胶   0.094
  比较例1-6   肝素钠   0.080
比较例1-7   聚乙二醇商品名：聚乙二醇6000 0.093
  比较例1-8   商品名：聚乙二醇4000000   0.093
比较例1-9   聚丙二醇商品名：三醇型1500 0.089
比较例1-10   聚乙二醇商品名：聚乙二醇#1000 0.113
  比较例1-11   藻酸钠(300-400cps)   0.093
比较例1-12   聚乙烯吡咯烷酮商品名：聚乙烯吡咯烷酮25 0.207
  比较例1-13   商品名：聚乙烯吡咯烷酮K-30   0.220
  比较例1-14   商品名：聚乙烯吡咯烷酮K-90   0.197
  比较例1-15   藻酸丙二醇酯   0.092
比较例1-16   普鲁兰多糖商品名：普鲁兰多糖PF-20 0.095
比较例1-17   羟丙基纤维素商品名：HPC-SL 0.102
  比较例1-18   商品名：HPC TC-5E   0.097
比较例1-19   聚乙烯醇商品名：PVA103 0.093
  比较例1-20   商品名：PVA210   0.097
  比较例1-21   商品名：PVA403   0.098
  比较例1-22   商品名：PVA105   0.093
  比较例1-23   商品名：PVA203   0.095
  比较例1-24   商品名：PVA205   0.092
比较例1-25   羧甲基纤维素商品名：CMC1105 0.096
  比较例1-26   商品名：CMC1205   0.130
  比较例1-27   商品名：CMC1330   0.098
单位：Abs.
如上述表2所示，对照(比较例1-1)中，由于保存12天，发生了自然发色，因此可见吸光度的增加。与此相对，实施例1中，由于第1试剂中共存有DA-67和季铵，因此可以将吸光度的增加抑制在对照(比较例1-1)的约1/5。另外，由于显色剂等的稳定性低时，通常考虑与聚合物等稳定化剂共存，但与共存有各种聚合物的比较例1-2～比较例1-27相比，通过实施例1也可以显著地防止吸光度的增加。由此结果可知，通过在DA-67等亚甲蓝系显色剂中共存季铵，即便在液体状态下也可以防止上述显色剂的自然发色，从而可以抑制背景的提高。
实施例2
研究在溶剂中使DA-67与各种季铵共存时的稳定性(吸光度变化)。
表3
<第1试剂：R1-2A>
  精制水
<第1试剂：R1-2B>
  PIPES   30mmol/L(pH7.5)
  月桂酰基麦芽糖苷   3g/L
  FAOD   2.5KU/L*
  POD   2KU/L*
<第2试剂：R2-2>
  季铵   0.2g/L或1g/L
  DA-67   0.05mmol/L
  金属蛋白酶(爱科来株式会社制)   2400KU/L*
  CaCl2   5mmol/L
  MOPS   30mmol/L(pH6.5)
*KU：103×U(酶单位)
<添加于第2试剂中的季铵>
 硬脂酰基三甲基氯化铵(商品名，Nacalai tesque公司制)
 鲸蜡基三甲基溴化铵
 十六烷基三甲基溴化铵
 苯扎氯铵
 苄基二甲基十四烷基氯化铵
 十四烷基三甲基溴化铵
 椰子胺醋酸酯(商品名アャタミン24：花王株式会社制)
 十二烷基三甲基氯化铵(商品名コ一タミン24P：花王株式会社制)
 四乙基氯化铵
 苄基三乙基溴化铵
 苄基三甲基溴化铵
在4℃下保存了14天的上述第1试剂(R1-2A或R1-2B)78μL中添加同样在4℃下保存了14天的上述第2试剂(R2-2)26μL，并在37℃下孵育5分钟。然后，利用生物化学自动分析装置(商品名JCA-BM8：日本电子公司制、以下相同)来测定刚要添加第2试剂前的反应液在波长658nm的吸光度(A0)和添加第2试剂5分钟后的反应液在波长658nm的吸光度(A5)，并求得其差(A5-A0)。另外，将使用精制水代替上述第2试剂(R2-2)的季铵而得到的结果作为对照(比较例2-1)。将它们的结果示于下述表4。此外，通过使用R1-2A(精制水)作为第1试剂，确认了第2试剂所含DA-67的自然发色的抑制。另外，通过使用R1-2B(酶试剂)，即便在用于糖化蛋白质(HbAlc)测定体系中时，也确认了DA-67的自然发色被抑制。
表4
Figure S2007800032674D00091
单位：Abs.
如上述表4所示可知，根据使用了具有碳原子数为12以上的烃链的季铵的实施例2-1～2-8，与未添加季铵的对照(比较例2-1)以及使用了不满足上述碳原子数的季铵的比较例2-2～2-4相比，可以抑制保存时的自然发色。
实施例3
研究在溶剂中使DA-67与季铵共存时的pH的稳定性(吸光度变化)。
表5
<第1试剂：R1-3>
  精制水
<第2试剂：R2-3A(实施例3)>
  十六烷基三甲基铵   0.2g/L
  DA-67   0.05mmol/L
  缓冲液   50mmol/L
<第2试剂：R2-3B(比较例3)>
 DA-67   0.25mmol/L
 缓冲液)   50mmol/L
<添加于第2试剂中的季铵>
  柠檬酸-KOH   pH4.6
  柠檬酸-KOH   pH5.5
  MES-KOH   pH5.5
  MES-KOH   pH6.1
  MES-KOH   pH7.0
  HEPES-KOH   pH6.8
  HEPES-KOH   pH7.4
  HEPES-KOH   pH8.2
  TAPS-KOH   pH7.7
  TAPS-KOH   pH8.4
  TAPS-KOH   pH9.1
  咪唑-HCl   pH6.3
  咪唑-HCl   pH7.0
  咪唑-HCl   pH7.7
  Tris-HCl   pH7.0
  Tris-HCl   pH8.0
  Tris-HCl   pH9.0
  GlyAmid(甘氨酰胺)   pH7.5
  GlyAmid   pH8.2
  GlyAmid   pH9.0
<测定方法>
分别在5℃下保存第2试剂(R1-3A、R2-3B)2天。混合上述第1试剂(R1-3)78μL和精制水13μL，并在37℃下孵育5分钟。进而在该混合液中添加保存后的上述第2试剂19.5μL，并在37℃下孵育5分钟，进行显色反应。然后，利用生物化学自动分析装置(商品名JCA-BM8)来测定刚要添加第2试剂前的反应液在波长658nm的吸光度(A0)和添加第2试剂5分钟后的反应液在波长658nm的吸光度(A5)，并求得其差(A5-A0)。使用R2-3A作为第2试剂的结果为实施例3、使用R2-3B作为第2试剂的结果为比较例3。另外，求得实施例3和比较例3的结果之差。将它们的结果一并示于下述表6。
表6
  缓冲液   pH   实施例3(R2-3A)   比较例3(R2-3B)   比较例3-实施例3
  柠檬酸-KOH   pH4.6   0.005   0.008   0.003
  柠檬酸-KOH   pH5.5   0.004   0.010   0.005
  MES-KOH   pH5.5   0.005   0.017   0.012
  MES-KOH   pH6.1   0.005   0.014   0.009
  MES-KOH   pH7.0   0.006   0.014   0.008
  HEPES-KOH   pH6.8   0.008   0.012   0.003
  HEPES-KOH   pH7.4   0.006   0.013   0.007
  HEPES-KOH   pH8.2   0.006   0.018   0.012
  TAPS-KOH   pH7.7   0.006   0.017   0.011
  TAPS-KOH   pH8.4   0.028   0.177   0.149
  TAPS-KOH   pH9.1   0.030   0.234   0.205
  咪唑-HCl   pH6.3   0.046   0.328   0.282
  咪唑-HCl   pH7.0   0.033   0.210   0.177
  咪唑-HCl   pH7.7   0.017   0.208   0.191
  Tris-HCl   pH7.0   0.007   0.025   0.018
  Tris-HCl   pH8.0   0.005   0.021   0.016
  Tris-HCl   pH9.0   0.004   0.011   0.006
  GlyAmid   pH7.5   0.005   0.013   0.008
  GlyAmid   pH8.2   0.004   0.013   0.009
  GlyAmid   pH9.0   0.003   0.009   0.006
单位：Abs.
由上述表6所示可知，根据添加了季铵的实施例3，与未添加季铵的比较例3相比，即便改变各种缓冲剂的pH，也可以抑制保存时的自然发色。
如上所述，根据本发明的亚甲蓝系显色剂的液体试剂，可以在液体状态下保存上述显色剂，由于例如不必在每次测定时制备液体试剂，因此测定等操作变得容易，低成本化也成为可能。而且，即便使用保存后的本发明的液体试剂作为显色反应的试剂，由于抑制了吸光度测定的背景提高，因此也可以提高测定精确度。

Claims (8)

1.一种液体试剂，其特征在于，其含有亚甲蓝系显色剂、具有碳原子数为12以上的烃链的季铵或其盐、以及液体介质，其中，所述亚甲蓝系显色剂为10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪。
2.根据权利要求1所述的液体试剂，其中，所述季铵的至少一个基团是碳原子数为12以上的烃基。
3.根据权利要求2所述的液体试剂，其中，所述碳原子数为14～18的范围。
4.根据权利要求1或2所述的液体试剂，其在制备后至少保存3天。
5.一种含有亚甲蓝系显色剂的液体试剂的稳定化方法，其特征在于，在液体介质中使所述显色剂与具有碳原子数为12以上的烃基的季铵或其盐共存，其中，所述亚甲蓝系显色剂为10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述共存持续至少3天。
7.一种试剂盒，其为用于进行权利要求5或6所述的含有亚甲蓝系显色剂的液体试剂的稳定化方法的试剂盒，其含有亚甲蓝系显色剂和具有碳原子数为12以上的烃基的季铵或其盐，其中，所述亚甲蓝系显色剂为10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪。
8.一种试剂盒，其为用于检测和/或测定的试剂盒，其含有亚甲蓝系显色剂、具有碳原子数为12以上的烃基的季铵或其盐、在使亚甲蓝系显色剂显色的反应中使用的试剂、以及用于进行权利要求5或6所述的稳定化方法的操作说明书，其中，所述亚甲蓝系显色剂为10-(羧甲基氨基羰基)-3，7-双(二甲基氨基)吩噻嗪。
CN200780003267.4A 2006-01-18 2007-01-18 显色剂的液体试剂及其稳定化方法 Active CN101374912B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP010372/2006 2006-01-18
JP2006010372 2006-01-18
PCT/JP2007/050697 WO2007083703A1 (ja) 2006-01-18 2007-01-18 発色剤の液体試薬、及び、その安定化方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101374912A CN101374912A (zh) 2009-02-25
CN101374912B true CN101374912B (zh) 2013-06-05

Family

ID=38287655

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200780003267.4A Active CN101374912B (zh) 2006-01-18 2007-01-18 显色剂的液体试剂及其稳定化方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US7838304B2 (zh)
EP (1) EP1985670B1 (zh)
JP (1) JP5255283B2 (zh)
CN (1) CN101374912B (zh)
WO (1) WO2007083703A1 (zh)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5131955B2 (ja) 2004-08-05 2013-01-30 旭化成ファーマ株式会社 プロテアーゼ反応促進剤及び／又は色素の安定化剤を含む試薬
WO2008093722A1 (ja) * 2007-01-30 2008-08-07 Arkray, Inc. フェノチアジン誘導体色素の検出方法およびそれに用いる発色剤試薬
JP4697809B2 (ja) 2007-02-22 2011-06-08 旭化成ファーマ株式会社 ロイコ色素の安定化方法
EP2543706B1 (en) * 2008-03-19 2021-05-26 ARKRAY, Inc. Method for stabilizing of color developer and use thereof
FI20085609A0 (fi) * 2008-06-18 2008-06-18 Valtion Teknillinen Happi-indikaattori
US20120003746A1 (en) * 2009-01-30 2012-01-05 Mistral Detection Ltd. Method and kit for identification of an explosive substance which contains an oxidant
JP5955220B2 (ja) * 2010-08-11 2016-07-20 協和メデックス株式会社 糖化ヘモグロビンの測定方法
KR20130138718A (ko) 2010-08-11 2013-12-19 교와 메덱스 가부시키가이샤 류코형 색원체 함유 수용액의 보존 방법
JP5902098B2 (ja) 2010-12-13 2016-04-13 協和メデックス株式会社 ロイコ型色原体含有水溶液の保存方法
RU2452562C1 (ru) * 2011-04-05 2012-06-10 Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Башкирский государственный университет" ГОУ ВПО "БашГУ" Способ получения сорбента
CN105403657B (zh) * 2014-05-28 2017-06-13 天津大学 一种测试红磷阻燃聚合物材料中磷化氢释放量的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1372637A (zh) * 2000-06-30 2002-10-02 日拉公司 亚甲蓝诊断剂及上皮癌检测的诊断方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6033479B2 (ja) 1980-07-30 1985-08-02 協和醗酵工業株式会社 過酸化水素の定量方法
US4290769A (en) 1980-10-14 1981-09-22 Miles Laboratories, Inc. Stabilized Romanowsky stain solution
JPS59182361A (ja) 1983-03-31 1984-10-17 Kyowa Medetsukusu Kk 過酸化水素の定量方法
JPS6033479A (ja) 1983-08-04 1985-02-20 松下電器産業株式会社 真空断熱材
JPH079390B2 (ja) 1990-01-31 1995-02-01 タツタ電線株式会社 ポリオレフィン絶縁ケーブルの絶縁体観察用試料作製方法
EP0860695B1 (en) * 1995-10-30 2006-01-04 Arkray, Inc. Method for measuring an analyte and corresponding device
JP2000241405A (ja) * 1999-02-24 2000-09-08 Toppan Printing Co Ltd 酸素インジケーター用組成物及び酸素インジケーター
US6743597B1 (en) 2000-06-13 2004-06-01 Lifescan, Inc. Compositions containing a urea derivative dye for detecting an analyte and methods for using the same
JP4078539B2 (ja) * 2001-10-26 2008-04-23 三菱瓦斯化学株式会社 酸素検知剤組成物
ATE423309T1 (de) 2001-10-26 2009-03-15 Mitsubishi Gas Chemical Co Zusammensetzung zur bestimmung von sauerstoff
GB2423360A (en) * 2005-02-22 2006-08-23 Sun Chemical Ltd Time/Temperature Indicator, Preparation and Use

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1372637A (zh) * 2000-06-30 2002-10-02 日拉公司 亚甲蓝诊断剂及上皮癌检测的诊断方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
何锡文 等.新光敏剂亚甲蓝的溶液状态研究.《分析科学学报》.1995,第11卷(第4期),第1-6页. *
解治霞 等.表面活性剂增敏动力学光度法测定痕量铁.《长春师院学报(自然科学版)》.1998,(第2期),第40页图1的溶液1. *

Also Published As

Publication number Publication date
EP1985670A1 (en) 2008-10-29
CN101374912A (zh) 2009-02-25
EP1985670B1 (en) 2014-01-08
WO2007083703A1 (ja) 2007-07-26
JP5255283B2 (ja) 2013-08-07
US7838304B2 (en) 2010-11-23
EP1985670A4 (en) 2011-06-22
JPWO2007083703A1 (ja) 2009-06-11
US20090053823A1 (en) 2009-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101374912B (zh) 显色剂的液体试剂及其稳定化方法
EP2543706B1 (en) Method for stabilizing of color developer and use thereof
US8268017B2 (en) Method for stabilizing leuco-type colorant
CN101595386B (zh) 吩噻嗪衍生物色素的检测方法及用于该方法的显色剂试剂
CN106461682B (zh) HbA1c的酶促测定
EP0127179A1 (en) Stabilization of tetrazolium salt with cyclodextrin
EP2069446B1 (en) Color change cyanoacrylate adhesives
JP5698904B2 (ja) 色素及びデキストリンを含むタンパク質検出試薬及び方法
CN103069003A (zh) 糖化血红蛋白的测定方法
CN104245952A (zh) 血液样品中的物质的测定法
CN1257942C (zh) 氧化发色剂的稳定化方法
CN103857690A (zh) 蛋白质检测
JP7061283B2 (ja) ロイコ型色素の安定化方法
JP3797603B2 (ja) 試薬組成物の安定化方法
US6365341B1 (en) Stabilization of highly sensitive nucleic acid stains in aqueous solutions
JP2018158317A (ja) 難水溶性物質の可溶化剤
JP7202559B2 (ja) 基質溶液
CN104321428B (zh) 抗坏血酸氧化酶的稳定化方法
JP7329808B2 (ja) 基質溶液
JP2022103479A (ja) ロイコ型色原体の安定化方法
JP6059546B2 (ja) 糖化タンパク質測定用試薬組成物及び糖化タンパク質測定方法
WO2023085323A1 (ja) 溶血ヘモグロビンによる測定誤差を低減する方法
CN103261331A (zh) 含有无色型色原体的水溶液的保存方法
JPWO2003029229A1 (ja) テトラゾリウム化合物の保存方法、それに用いる安定化剤、および前記方法を用いたテトラゾリウム化合物試薬溶液
JPS61177999A (ja) β−Ｎ−アセチル−Ｄ−ヘキソサミニダ−ゼ活性測定試薬

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant