CN101587237B - 显微切割标本收集管清洗再利用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种显微切割标本收集管清洗再利用方法，可按如下步骤依次实施：(1)向收集管中加入二甲苯，盖上管盖，并振荡，弃去二甲苯；(2)向收集管中加入混悬液A，振荡，倒空收集管；(3)向收集管中加入双蒸水，同时加入二氧化硅颗粒，振荡，倒空收集管；(4)依次重复步骤(2)及步骤(3)两次；(5)采用双蒸水对收集管进行冲洗；(6)将收集管开盖，置入冰箱内，直至液体完全蒸发；(7)取出收集管，往管盖内表面黏性模块表面涂抹多聚赖氨酸，放回冰箱，静置；(8)重复步骤(7)。本发明能有效保持和修复收集管管盖内表面黏性模块黏附性，且能有效去除残留在收集管内的多余物质，从而使其多次循环使用，节约大量实验经费。
Description
技术领域
本发明涉及显微切割标本耗材清洗技术领域，具体的说是一种显微切割标本收集管清洗再利用方法。
背景技术
激光捕获显微切割(Laser Capture Microdissection)技术及其系统的出现，使得相关科研工作者可以精确分离待研究的目的组织标本、细胞(体外培养的活细胞及固定在切片中组织细胞)、细胞器甚至染色体区带，用于后续研究，其控制样本的精确性受到全世界科研工作者的青睐，目前多数有实力的研究机构均已配备此技术及相关设施。
用组织切片进行显微切割时，需要用到一种专用的耗材，该耗材为带盖的管形容器(以下简称收集管)，其特征为收集管盖的内表面上携带表面光滑的特殊黏性模块，利用模块的黏性吸附力可收集显微切割时膜性载玻片上被激光切割分离的带有目标组织的膜。这种收集管耗材价格非常昂贵；同时，由于用于研究的目的标本需要富集足够的数量，使得研究过程中该耗材使用数量较大，就单个标本而言，DNA、RNA相关的基因水平研究一般需要2-3个，蛋白水平的甚至需要数十个。目前，国内仍没有制造商能够生产这种专用耗材，重复利用该耗材不失为一个好方法。由于实验过程中激光会烧灼黏性模块表面致使出现焦痕，从而降低其黏附性；同时，粘在盖子上的组织、核酸、蛋白及其他小分子物质会在后续分子生物学实验中造成污染。因此，如何能有效去除收集管管盖上的组织、核酸、蛋白及其他小分子物质，又不损伤收集管管盖特殊黏性模块的黏附性，且又能修复黏性模块表面在实验过程中被激光烧灼的焦痕，是重复利用该收集管的难题。常规机械洗涤、高温高压洗涤、强酸强碱洗涤等都会损伤收集管的黏附性，紫外线、钴60照射也只能灭活微生物，不能清除小分子物质。
发明内容
本发明旨在克服现有技术的不足之处而提供一种能有效保持和修复收集管管盖内表面黏性模块黏附性，且能有效去除残留在收集管内的组织、核酸、蛋白及其他小分子物质，从而使收集管得以多次循环使用，节约大量实验经费的显微切割标本收集管清洗再利用方法。
为达到上述目的，本发明是这样实现的：
显微切割标本收集管清洗再利用方法，可按如下步骤依次实施：
(1)向收集管中加入占收集管容积1/2～2/3的二甲苯，盖上收集管管盖，并振荡2～5分钟，打开管盖，弃去二甲苯；
(2)向步骤(1)所述收集管中加入占收集管容积1/2～2/3的混悬液A，盖上管盖，并振荡2～3分钟，打开管盖，倒空收集管；
(3)向步骤(2)所述收集管中加入占收集管容积1/2～2/3的双蒸水，同时加入50mg直径小于0.1mm的二氧化硅颗粒，盖上管盖，并振荡2～3分钟，打开管盖，倒空收集管；
(4)依次重复步骤(2)及步骤(3)两次；
(5)采用双蒸水对步骤(4)所得收集管进行冲洗3～5分钟；
(6)将收集管开盖，置入2～8℃冰箱内，直至收集管盖及管内液体完全蒸发；
(7)取出收集管，在超净台内，往收集管管盖内表面黏性模块表面涂抹浓度为4～8％的多聚赖氨酸，迅速将收集管放回冰箱，静置；
(8)重复步骤(7)一次。
作为一种优选方案，本发明所述混悬液A由盐酸、酒精及EDTA混配，并加入50mg直径小于0.1mm的二氧化硅颗粒制成。
作为另一种优选方案，本发明所述盐酸的浓度为1.5％；所述酒精的浓度为30％；所述EDTA的浓度为0.25mol/L。
进一步地，本发明所述盐酸、酒精及EDTA的体积比为0.5～1.5∶(96.5～99)∶0.5～2。
更进一步地，本发明所述步骤(7)中静置时间t≥24h。
本发明与现有技术相比具有如下特点：
1、本发明整个操作流程中不涉及损伤暴力、高温高压、强酸碱等对膜有损害的因素；
2、本发明通过使用混悬液A，使黏性模块得到充分清洗，同时充分保护了模块的黏附性；
3、本发明通过往表面涂抹多聚赖氨酸，可以很好的修复激光在黏性模块表面造成的烧痕，并在一定程度上恢复烧痕部位的黏附性；
4、本发明清洗后的收集管不含有对实验有影响的成分；
5、本发明所需试剂均为生物实验室常规试剂，且价格低廉，可批量操作；
6、本发明重复利用率高，可节省10-20倍的收集管数量，节省大量科研经费。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步说明。本发明的保护范围不仅局限于下列内容的表述。
图1为验证收集管是否清洗干净而进行的2％的琼脂糖电泳图。
具体实施方式
实施例1
显微切割标本收集管清洗再利用方法，可按如下步骤依次实施：
(1)向收集管中加入占收集管容积1/2的二甲苯，盖上管盖，涡旋器振荡3分钟，打开管盖，弃去二甲苯；
(2)向收集管中加入占收集管容积2/3的混悬液A(由1.5％盐酸、30％酒精、0.25mol/L EDTA按体积比1∶97∶1混合，并加入50mg直径小于0.1mm的二氧化硅颗粒配制而成)。盖上管盖，涡旋器振荡2.5分钟，打开管盖，倒空收集管；
(3)向收集管中加入占收集管容积1/2的双蒸水，同时加入50mg直径小于0.1mm的二氧化硅颗粒，盖上管盖，涡旋器振荡2.5分钟，打开管盖，倒空收集管；
(4)重复步骤(2)及步骤(3)两次；
(5)大量双蒸水充分冲洗4分钟；
(6)将收集管开盖，放入洁净的5℃冰箱，静置直至收集管盖及管内液体完全蒸发；
(7)取出收集管，在超净台内，往收集管管盖内表面黏性模块表面涂抹浓度为4-8％的多聚赖氨酸，迅速将收集管放回冰箱，静置28h；
(8)重复步骤(7)一次。
实施例2
显微切割标本收集管清洗再利用方法，可按如下步骤依次实施：
(1)向收集管中加入占收集管容积2/3的二甲苯，盖上收集管管盖，并振荡4分钟，打开管盖，弃去二甲苯；
(2)向步骤(1)所述收集管中加入占收集管容积1/2的混悬液A，盖上管盖，并振荡3分钟，打开管盖，倒空收集管；混悬液A由盐酸、酒精及EDTA混配，并加入50mg直径小于0.1mm的二氧化硅颗粒制成；其中盐酸的浓度为1.5％；所述酒精的浓度为30％；所述EDTA的浓度为0.25mol/L；盐酸、酒精及EDTA的体积比为0.5∶97∶2。
(3)向步骤(2)所述收集管中加入占收集管容积1/2的双蒸水，同时加入50mg直径小于0.1mm的二氧化硅颗粒，盖上管盖，并振荡2～3分钟，打开管盖，倒空收集管；
(4)依次重复步骤(2)及步骤(3)两次；
(5)采用双蒸水对步骤(4)所得收集管进行冲洗4分钟；
(6)将收集管开盖，置入6℃冰箱内，直至收集管盖及管内液体完全蒸发；
(7)取出收集管，在超净台内，往收集管管盖内表面黏性模块表面涂抹浓度为4～8％的多聚赖氨酸，迅速将收集管放回冰箱，静置48h；
(8)重复步骤(7)一次。
为了验证本清洗再利用方法的有益效果，取两支收集管，一支经过本方法清洗，一支未经本方法清洗，进行以下实验。分别向两支管中加入80ul双蒸水，37℃孵育1小时。分别取出4ul液体作为模板，配制50ul标准体系(dNTP：0.5ul，Taq酶：0.5ul，10nmol/ul上下游引物：各0.5ul，10×buffer：5ul，ddH2O：43.5ul)，进行多聚酶链反应(PCR)，经40个循环扩增后，分别取6ul液体放入2％琼脂糖凝胶进行电泳如图1，泳道1为Marker标志；泳道2为经本方法处理后的样本，未扩增出任何条带，表明经本方法清洗后的收集管已经没有核酸污染，该收集管经多聚赖氨酸处理后，有效保持和修复了收集管管盖内表面黏性模块黏附性，可以继续用于显微切割；泳道3为未经处理的样本，明显有核酸模板存在。
可以理解地是，以上关于本发明的具体描述，仅用于说明本发明而并非受限于本发明实施例所描述的技术方案，本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换，以达到相同的技术效果；只要满足使用需要，都在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.显微切割标本收集管清洗再利用方法，其特征在于，按如下步骤依次实施：
(1)向收集管中加入占收集管容积1/2～2/3的二甲苯，盖上收集管管盖，并振荡2～5分钟，打开管盖，弃去二甲苯；
(2)向步骤(1)所述收集管中加入占收集管容积1/2～2/3的混悬液A，盖上管盖，并振荡2～3分钟，打开管盖，倒空收集管；所述混悬液A由盐酸、酒精及EDTA混配，并加入50mg直径小于0.1mm的二氧化硅颗粒制成；所述盐酸的浓度为1.5％；所述酒精的浓度为30％；所述EDTA的浓度为0.25mol/L；所述盐酸、酒精及EDTA的体积比为0.5～1.5∶(96.5～99)∶0.5～2；
(3)向步骤(2)所述收集管中加入占收集管容积1/2～2/3的双蒸水，同时加入50mg直径小于0.1mm的二氧化硅颗粒，盖上管盖，并振荡2～3分钟，打开管盖，倒空收集管；
(4)依次重复步骤(2)及步骤(3)两次；
(5)采用双蒸水对步骤(4)所得收集管进行冲洗3～5分钟；
(6)将收集管开盖，置入2～8℃冰箱内，直至收集管盖及管内液体完全蒸发；
(7)取出收集管，在超净台内，往收集管管盖内表面黏性模块表面涂抹浓度为4～8％的多聚赖氨酸，迅速将收集管放回冰箱，静置；
(8)重复步骤(7)一次。
2.根据权利要求1所述的显微切割标本收集管清洗再利用方法，其特征在于：所述步骤(7)中静置时间t≥24h。
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| US6813008B2 (en) * | 2002-06-10 | 2004-11-02 | Palantyr Research, Llc | Microdissection optical system |
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2009
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| JP特开2005-15642A 2005.01.20 |
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