CN101611051A - 治疗或预防骨疾病的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明在此提供了一种治疗，预防或改善骨或软骨疾病的药物组合物，其制备方法以及使用方法。

Description

治疗或预防骨疾病的药物组合物
技术领域
本发明涉及一种药物组合物，具体涉及一种治疗或预防骨疾病的药物组合物。
背景技术
本发明一般涉及治疗或预防骨疾病的药物组合物。这些药物组合物可用于损伤愈合和组织修复时诱导骨和/或软骨的形成。
整形外科和颅面骨损伤的治疗费用造成很大的生物医学负担。根据2002年美国健康费用和利用工程的报道，医院仅花费在颅盖骨外科(大骨瓣开颅术和颅盖骨切除术)和颅面外伤修复的费用，估计分别为近5.49亿和近4亿美元(Steiner，C.，A.Elixhauser，and J.Schnaier，Eff Clin Pract，2002.5(3)：p.143-51)。医院花费在整形外科(外伤和非外伤)的费用可能还要高，据2002年仅整型外科销售额估计近13亿美元(Medical Technology Fundamentals，MerrillLynch，2003.p.11)。
总之，在整形外科和颅面骨损伤的治疗中，遇到的主要问题是骨和/或软骨形成的调节。更适宜地是，在以下情况下可以使骨形成增加：作为某些疾病治疗(例如，整形外科或颅面骨折修复，脊柱融合手术，关节融合手术，损伤的骨质疏松的骨)的一部分，或某些疾病预防(预防骨质疏松骨的骨折)的一部分，人们希望有更多的或加速的骨形成。对于长骨骨折，通过加速软骨增生并被骨替代来加速软骨内成骨是人们所希望的。甚至于更适宜地，在以下情况下还可以使骨形成减少或抑制：作为某些疾病的治疗或预防(例如，颅缝早闭，新生儿颅盖过度生长宽约骨缝导致过早的骨缝融合；异位骨化，异位部骨不正常形成)的一部分，人们希望骨形成减少或抑制。相似地，在以下情况下人们期望软骨形成增加：在此情况下增加或加速软骨形成有利的(例如，关节面重建，颞下颌关节重建，关节盘修复，椎间盘的修复颌再生)。
许多组合物已被描述用于骨疾病的治疗(见表1)。大部分，如非全部，描述了组合物通过骨传导和/或骨诱导特性促进骨形成。在本领域中，具有骨诱导特性的组合物在骨形成方面比具有骨传导特性的组合物更有效已经形成共识。然而，对于最佳的骨形成二者均为必要的(见表1)。目前，治疗多种骨疾病的“金标准”组合物是自体同源骨移植，其具有骨诱导和骨传导的双重特性。然而，自体移植物的采集可伴随主要供体部位病态表现，包括疼痛，步态紊乱，髋骨顶部提供移植后引起的大腿感觉异常(Laurie，S.W.，et al.Plast Reconstr Surg，1984.73(6)：p.933-8.)。因此，急需更好的自体移植物替代物。在具有骨诱导功能的复合物中，骨形态发生蛋白(BMPs)，已被广泛的阐述。在治疗多种骨疾病过程中，当BMPs与骨传导载体同时使用时，对于许多骨骼疾病的治疗能够提供与自体移植物相同，甚至与超过自体移植物的治疗效果(Valentin-Opran，A.，et al.Clin Orthop，2002(395)：p.110-20)。
然而，已知的BMPs功能不均一性(Ducy，P.and G.Karsenty，Kidney Int，2000.57(6)：p.2207-14；Wang，S.，et al.，Kidney Int，2003.63(6)：p.2037-49)和骨诱导所需高剂量的BMPs可能会限制它的应用，这是因为费用方面的考虑和不可预知的副作用如，形成上颌窦脓肿(van den Bergh，J.P.，et al.，J Clin Periodontol，2000.27(9)：p.627-36)。因此，目前在临床和商业上均需要替代或补充BMPs的骨诱导分子以促进骨和/或软骨的形成。此外，目前在临床和商业上均需要在特殊情况下抑制骨和/或软骨形成，而这是BMPs无法解决的。
下述实施例解决了上述存在的问题和需要。
发明内容
本发明目的之一，就是提供一种含有一种或多种药剂(如，一种或多种NELL肽或NELL核糖核酸)的药物组合物。在一个实施例中，药物组合物含有有效量的一种或多种NELL肽，用于通过促进损伤后骨的增殖来治疗骨骼的疾病，例如：长骨损伤的愈合，脊髓融合和颅面骨的修复。在另一个实施例中，药物组合物含有有效量的一种或多种NELL肽，通过促进骨的生成来治疗或预防没有必要的明显骨损伤证据的疾病(如，骨质疏松症，臀部坏疽，和齿槽脊骨的再吸收)。
在一些实施例中，在此描述的组合物是有效的，并能够用于治疗，预防，改善，减轻或减少疾病的症状，这些疾病涉及骨骼代谢为次级作用的多重症状。这些疾病的例子包括但不限于，慢性肾病，其可导致很多全身性的影响，包括肾病性骨营养不良和血管钙化。Nell可增加骨形成但不会伴随非期望的刺激性成骨，因此，它只促进骨间隙的成骨而不会刺激人体内非骨细胞(如癌前期细胞)的增殖，因此目标的骨形成减少了因为肾脏损伤引起的骨流失。NELL诱导的矿化作用也消耗掉钙和磷酸盐离子，否则这些离子会在正常非钙化的组织(如，血管)形成病理性的钙化。其它病理性钙化的形式有多因子参与的原因(细菌，旁分泌，自分泌等等)。Nell调节骨沉积和骨再吸收之间的平衡的能力使所述组合物能够维持骨间隙内的必需离子，而降低了他们在非骨组织的生物利用度，从而减少了异位软组织钙化，胆结石，肾结石，松果体钙化，白内障，涎石，心脏瓣膜和/或前裂腺结石的风险。
本发明的另一方面，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物含有有效量的抑制骨生成(如颅缝早闭或异位骨化，骨硬化病)的NELL肽的抑制剂。本发明又一方面，提供了一种药物组合物，其含有充分高，足够剂量的NELL肽用于抑制骨生成。本发明再一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其含有有效量的NELL1或NELL2肽受体的调节剂，用于促进骨生成(如，颅面骨或长骨的生成)。调节剂可以是NELL1或NELL2肽受体的激动剂。在另一个实施例中，该药物组合物含有有效量的NELL1或NELL2肽受体的调节剂，在治疗或预防降低骨质量的骨病(如骨质疏松症和齿槽脊骨再吸收)中，该药物组合物促进骨的生成。调节剂可以是NELL1或NELL2肽受体的激动剂。
本发明进一步的一个方面，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物含有有效量的NELL1或NELL2肽受体的调节剂，用于抑制骨生成(如，颅面骨或长骨的生成)。调节剂可以是NELL1或NELL2肽受体的拮抗剂。在一个实施例中，该药物组合物含有有效量的NELL1或NELL2肽受体的调节剂，在治疗或预防增加骨质量的骨病(如，骨骼石化症)中，该药物组合物抑制骨的生成。该调节剂剂可以是NELL1或NELL2肽受体的拮抗剂。
本发明的进一步的一个方面，本发明提供了一种用于骨生成的药物组合物，它包括一种或多种NELL肽的增强剂。
本发明进一步的一个方面，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物含有有效量的至少一种药剂，在治疗或预防软骨相关的骨病(例如，关节再生，颞下颌关节重建，关节炎修复，或椎骨板的修复)中，该试剂或直接或间接地促进软骨生成。直接促进软骨生成的药剂之一可以是应用于软骨生成细胞(如，但不限于成软骨细胞，软骨细胞，或软骨前体细胞，干细胞，骨髓细胞，骨髓基质细胞，成纤维细胞，或脂肪来源细胞)的NELL肽。间接促进软骨生成的药剂(例如，通过诱导成软骨细胞/软骨细胞分化)可以是，例如，NELL肽，或NELL肽受体激动剂的一种。
在某些特殊条件下，当需要抑制软骨内成骨以阻止软骨被骨进一步替代时，药物组合物可包含例如一种或多种NELL肽受体的抑制剂或拮抗剂，高剂量的NELL肽，或者他们的组合。这样的组合物能够通过抑制潜在的，定型的骨生成细胞(例如，但不限于，成骨细胞，骨生成细胞，干细胞，骨髓细胞，成纤维细胞，硬脑(脊)膜细胞，骨膜细胞，基底细胞，和/或肌肉细胞)有效的抑制成骨细胞的分化。
在本发明进一步一个方面中，能够通过调节NELL启动子的小分子诱导骨形成。
上述药物组合物可任选地包括药理学上可接受的载体，作为进行全身或局部递送的合适的递送模式。例如，药理学上可接受的载体可以是用于口腔递送，肺部递送，非肠道递送或移植的载体。
在本发明的进一步一个方面，本发明提供了一种治疗或预防骨骼疾病的方法。该方法通常包括给予哺乳动物上述药物组合物。
药物组合物可根据适当的递送模式而制备成多种配方。
附图说明
图1显示了为大鼠NELL1蛋白和小鼠血栓收缩蛋白(TSP)-1的结构示意图。显示了：信号肽区段(实心的黑框)，TSP-N端(TSP-N，阴影框)，半胱氨酸富集(CR)区段(CR，实心白框)，表皮生长因子(EGF)样区段(E，带阴影线的框)，盘旋的螺旋区(CC，杆)，钙离子结合型表皮生长因子样区段(*)，和RGD肽区段(RGD，实心白框)。
图2A显示了野生型小鼠骨骼模型，示范了正常骨骼模型，骨骼着色(上，中部)和断层扫描(CT)(底部)。图2A也显示了矿化的典型边界(浅蓝色点线)和前(红箭头)和后(蓝箭头)囟门的位置。能够看到模糊的右冠状缝轮廓(绿色箭头所指)。冠状缝通常很难看清楚，因为冠状缝是交迭的而不是对接缝。中间的图也显示了锁骨的正常尺寸(黑色箭头)。断层扫描显示了典型颅面骨的形态。冠状缝(绿色箭头)和前囟门(红色星号)是高亮度的。图2B显示了杂合核心结合因子1敲除的动物(Cbfa1+/-)的骨骼模型。Cbfa1缺失的动物存在成骨缺陷。这些小鼠广泛地说明了显著的中缝和囟门。在中线颅顶缺陷侧面的着色弱的组织(在黄色和浅蓝点线之间)，可见缺陷的矿化和成骨。在冠状缝区域(绿色箭头，顶端和底部的图片)可见透明区域。在中间的图片，显示了锁骨发育不全的明显程度(黑色箭头)。图2C显示了Cbfa+/-动物与NELL过度表达动物交配后的子代的骨骼模型。在骨着色和X线断层扫描中，该Cbfa+/-+NELL过度表达的动物显示了与Cbfa+/-单倍体缺陷动物比较明显增加的锁骨形成。在中间的图片，有较轻微的锁骨发育不全(黑色箭头)。该图片还显示了在冠状缝上的多骨交迭修复(绿色箭头，顶部和底部照片)。图2D显示了，当NELL1过度表达或加入NELL1蛋白时，在体外颅盖骨组织培养中，颅盖骨的过度生长或异位成骨。图2E显示了加入NELL1蛋白的正常小鼠颅盖骨的移植物。绿色荧光代表新骨的生长。NELL1蛋白诱导骨过度生长(红色箭头)，和正位成骨(黄箭头)。总之，图2显示出在颅面区域(例如，头顶)和轴向骨区域(例如，锁骨)由于NELL的过度表达而增加了的骨生成。
图3A显示了腺病毒NELL1(AdNELL1)转导的长骨来源的骨髓间质细胞的Von Kossa’s染色情况。细胞培养至80％汇合后用50个斑点形成单位(pfu)/细胞的AdNELL1进行感染(右)。对照组时用50pfu/细胞的Adβ-Gal感染(左)。在第11天时，计数Von Kossa’s染色的骨小结，骨小结数表示为平均值+SEM。每个实验重复三次。典型的染色后的骨小结样本已被指出(绿色箭头)。AdNELL1转导的BMSCs具有明显更多的矿化和成骨。图3B、3C和3D显示了转导的BMSCs注射入裸鼠肌肉。。图3B显示了具有片状模式的更成熟的骨的组织学形态。图3C用放射照相术显示了具有更成熟的骨骼的AdNELL1转导的BMSCs。图3D用放射照相术显示了具有更多骨形成的AdNELL1转导的BMSCs。总之，图3A-3D显示了，由于NELL1的过度表达，而导致非颅盖骨来源的细胞中增加的骨矿化和骨形成。
图4是NELL1或BMP2处理的颅盖骨缺陷的容积分析，表明在控制线(蓝线)以上NELL1(绿线)和BMP2(红线)骨形成的明显增加。这表明NELL1能再生/修复骨。
图5A-D是治疗4周后的颅盖骨CT图像。图5A是4周的用负载NELL1的膜(绿色为最初缺陷的轮廓)和负载BMP2的PLGA膜(红色为最初缺陷的轮廓)治疗的颅盖切片(内头盖视图)。图5B是同图5A同样的标本(外头盖视图)。图5C是4周的用负载NELL1的PLGA膜(绿色为最初缺陷轮廓)治疗的颅盖骨切片(内头盖视图)。也可见到对侧的没有治疗过的对照(黄色为最初缺失的轮廓)。图5D代表的是同图5C一样的样本(外头盖视图)。条的尺寸为3mm(黄色，左下)。总之，图5A-5D显示了用NELL1和BMP2治疗后相似的骨矿化和骨形成的增加。
图6A-C显示了治疗4周时的颅盖骨组织切片。切片用Masson’strichome.染色。图6A是4周的用负载NELL1的膜治疗的颅盖骨切片。可看到跨越缺失的完全的骨再生。图6B是4周的用负载BMP2膜治疗的颅盖骨切片，同样可看到跨越缺失的完全的骨再生。图6C是用无负载的膜治疗的颅盖骨的切片，只有极少的跨越缺失的骨再生。总之，图6A-C也显示了用NELL1和BMP2治疗后相似的骨形成增加。
图7A-D显示了在不同的微环境下，NELL1诱导的软骨形成和软骨内骨形成。图7A显示了包括关节软骨部位(上版面)和软骨内长成骨部位(下板面)整个胫骨内NELL1的表达。上版面显示了在关节软骨部位，NELL1可调节并增加软骨的分化。因而，这些数据表明，增加的NELL肽的活性直接(例如，通过加入NELL肽或增加NELL肽的表达)或间接(例如，加入NELL肽的增强剂和/或NELL肽受体的激动剂和/或活化剂)能够促进软骨的形成。在下板面，在软骨内骨形成起始的长骨轴部位，增加的NELL1促成软骨形成然后变肥大，还使软骨内骨形成增加。然而，在Cbfa1敲除的模型中，NELL1的缺失只能保持分化程度较低的成软骨细胞/软骨细胞表型，而没有软骨内骨形成。因而，这些数据表明增加的NELL肽的活性直接(例如，通过加入NELL肽或增加NELL肽的表达)或间接(例如，通过加入NELL肽增强剂和/或NELL肽受体激动剂和/或活化剂)可促进软骨的形成，软骨肥大和软骨内骨化。这对软骨内骨形成(如，骨折)是有用的。外源性NELL1的缺失与受控制的关节成软骨细胞/软骨细胞表型及肥大的抑制有关联，这对阻止关节软骨被骨替代是很重要的。因此，抑制NELL肽的活性可直接(通过降低NELL肽的表达或使用NELL肽抑制剂)或间接(通过NELL肽受体拮抗剂和/或抑制剂)阻止软骨肥大和软骨内骨形成，并促进关节软骨表型的维持。总之，这些数据不是用于限制，而是为了表明NELL对软骨前体细胞类型有着广泛的影响，NELL肽诱导的具体的表型依赖于应用NELL肽的量和时间、具体细胞的类型、细胞分化状态，和微环境之间的复杂的相互作用。图7B显示了在腭裂模型中，NELL蛋白诱导软骨形成(蓝色染色)。图7C通过增加的Sox 9染色显示了NELL1增加成软骨细胞增殖。Sox 9是软骨细胞增殖的标记物。图7D通过增加的X型胶原质染色显示了NELL1诱导软骨进一步的分化。此外，图7D还显示了NELL可加速软骨分化/形成和软骨基的软骨内骨形成。总之，图7A-D显示了NELL可调节软骨分化和肥大。增加的NELL1促使软骨形成和肥大，并增加了在不同微环境下软骨内骨形成，而NELL1缺失仅能维持较少量的关节成软骨细胞/软骨细胞表型。
图8显示了NELL1和BMP2在体外(A)和体内(B，C)的协同作用。这些数据表明NELL1和BMPs在诱导成骨细胞分化标记物的表达和诱导骨形成是协同作用的。
图9显示了以软化骨基质作为载体的NELL1脊骨融合图，及6周的NELL处理的融合脊骨(A，B and C)和非结合对照样本(D，Eand F)的放射图像和微型CT三维立体再构建图。(A)红色箭头识别在L4和L5脊骨两侧的放射不透明组织块。每一组织块的中间线(绿色箭头)表现出的最高密度类似于皮层骨。(B)微型CT的三维图像显示了密度类似于骨，很好界定的的组织块(红箭头)，该组织块被包裹在两个横突的背侧面和他们之间的空间内(绿箭头)；(C)在CT三维扫描图像的冠状面显示了桥骨(绿箭头)和两个横突(黄箭头)清楚的连接；在此放射图中，可见低放射-不透明的，稍小的组织块(红色箭头)；(E)在L4和L5区域上方的组织块(红色箭头)不与横突物紧密连接；(F)CT三维扫描的冠状面，可见裂缝(粉色箭头)。这一数据显示NELL1可通过形成桥来诱导脊骨融合。
图10显示了6周的由NELL1融合的样本(A，B，C，G和H)和非融合对照(D，E，F，I和J)的组织学表现。(A)绿色箭头表示皮层骨样连接两个横突的桥骨(H&E染色切片中的点线)；(B)和(C)为(A)中桥骨限定区域薄片骨的放大；(D)H&E染色显示靠近横突的较小的骨块，以点线表示；(E和F)是(D)限定区域未成熟骨的放大图；(G和H)Masson trichrome染色切片中骨细胞形成粘合线显示了新的骨生长；(I和J)更多的软骨组织出现再造骨的DBMDBM碎片中(箭头)。A和D 9.8倍放大；B，E，G和I 100倍放大；C，F，H和J200倍放大。这一数据表明NELL1可通过形成桥骨诱导脊骨融合。
图11A和11B显示了人，小鼠和大鼠包含多OSE2共有基序的NELL1启动子。图11显示假定的OSE2结合位点，A，B和C沿着相对于转录起始位点的序列和位置示出。隐藏的OSE2位点以有条纹的盒子表示。图11B为人，小鼠和大鼠的NELL启动子概括的比较(没有画刻度)。小鼠和大鼠的两个OSE2位点在一个区域内为81％同源。隐藏位点以有条纹的盒子表示。这一数据显示NELL启动子的序列可用于药物筛选来诱导NELL的表达。
具体实施方式
本发明的另一个方面提供了一种药物组合物，该药物组合物含有一种或多种药剂(如一种或多种NELL肽)用来治疗或预防骨病。在一个实施例中，药物组合物含有有效量的一种或多种NELL肽，用于调节(例如，促进骨的生成，例如，颅面骨的生成。牙齿移植的整合，牙周骨的生成，牙齿或整形外科移植的整合，长骨骨折的治疗，脊骨融合或结合)。在另一实施例中，药物组合物含有有效量的一种或多种NELL肽，用于治疗或预防骨病(如，骨质疏松症)。本发明的另一个方面，提供了药物组合物，含有有效量的NELL1或NELL2肽的抑制剂，用来治疗或预防跨越头颅骨缝的骨性过渡生长。
本发明进一步的一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物含有有效量的NELL1或NELL2肽受体调节剂，用来促进骨生长(如，颅面骨生长)。该调节剂可以是NELL1或NELL2的受体的激动剂或拮抗剂。调节剂本身可刺激或抑制该受体。在另一个实施例中，药物组合物含有有效量的NELL1或NELL2肽的受体调节剂，用来治疗或预防骨病(如，骨质疏松症)。
在本发明进一步的一个方面中，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物含有有效量的至少一种药剂，用来促进软骨的生成，用于治疗或预防与软骨相关的骨疾病。该药剂可以是NELL肽抑制剂、NELL肽受体的拮抗剂、和他们的组合的一种。
上述药物组合物可任选择包括一种药理学上可接受的载体，用于全身或局部递送的合适的递送药物模式。例如，药理学上可接受的载体可为口腔递送，非肠胃道递送或移植的载体。
在本发明进一步一个方面中，本发明提供了一种治疗或预防骨病的方法。该方法一般包括给哺乳动物使用所述药物组合物。
在本发明进一步一个方面中，所述组合物与骨基质联合可用于诱导骨形成。骨基质可以是去矿化的骨基质或矿化的基质。
在本发明进一步一个方面中，所述药物组合物通过干细胞与组合物接触，可用于诱导干细胞分化为成骨细胞。。干细胞可以是胚胎干细胞或成年干细胞。进一步的，所述药物组合物通过使骨基质间质细胞与所述组合物接触，可用于诱导骨基质间质细胞以形成骨。
在本发明进一步一个方面中，所述药物组合物是有效的，可用于治疗，预防，改善，减轻，或减少疾病的相关症状例如，因微重力，组织萎缩，长期卧床引起的骨流失等。
在一些实施例中，所述组合物是有效的，可用于治疗，预防，改善，减轻，或减少疾病/病况的症状，这些疾病和病况涉及骨代谢为次级作用的多重症状。这些疾病/病况包括，但不限于，可导致许多全身性作用(包括肾病性骨营养不良和血管钙化)的慢性肾脏疾病。Nell可增加骨形成而不会刺激非期望的骨形成，从而，Nell仅刺激骨间隔的骨形成而不会刺激身体其它非骨细胞的增殖(如，癌前细胞)，因而目标的骨形成减轻了由于肾损伤引起的骨流失。NELL诱导的矿化也消耗钙和磷酸盐离子，否则这些钙和磷酸盐离子会在正常的非钙化组织(例如，血管)形成病理性的钙化。其它病理性钙化的形式具有多因素的根源(细菌，旁分泌，自分泌等)。NELL有利平衡骨沉积和骨再吸收的能力使得所述组合物在维持骨间隔必需离子和降低他们在非骨组织的生物利用度方面是有效的组合物，因而可以减少异位软组织钙化，胆结石，肾结石，松果体钙化，白内障，涎石，心脏瓣膜和/或前裂腺结石的风险。
在一些实施例中，本发明提供一种药物组合物，用于促进哺乳动物细胞的骨的形成，这些哺乳动物细胞包括，但不限于，干细胞，骨髓基质细胞，成纤维细胞，或脂肪来源的细胞。
在此使用的术语“Nell肽(Nel样分子-1，Nel(一种蛋白质，高表达于神经组织编码的表皮生长因子样的结构域))”可以是NELL1或NELL2多肽，或者他们的片段；NELL1或NELL2相关的多肽，或他们的片段；任何与“NELL肽”高度同源的多肽或其片段。高度同源可以解释为，与“NELL肽”的同源性大于50％，例如，与“NELL肽”的同源性大于60％，与“NELL肽”的同源性大于70％，或与“NELL肽”的同源性大于80％。肽可以是天然和/或与非突变的野生型序列的重组NELL肽，或与仍旧含有与NELL肽高度同源的突变野生型序列的重组NELL肽。另外，NELL肽可以来源于，但不限于，生物体，如：人的细胞，细菌，酵母，或昆虫或植物细胞。在一些实施例中，术语“NELL肽”包括NELL肽的结构同等物，功能同等物或构象同等物。于此使用的NELL肽结构同等物指含有与NELL肽或NELL肽功能域结构同等的蛋白或肽，或实质上与NELL肽或NELL肽功能域结构相似的蛋白或肽。NELL肽的功能同等物是指具有与NELL肽或NELL肽功能域同等物功能相同的蛋白质或肽，或与NELL肽或NELL肽功能域功能相似的蛋白或肽。肽的构象等同物是指具有与NELL肽或NELL肽功能域的构象相同的蛋白或肽，或NELL肽或NELL肽功能域的构象基本上相似的蛋白或肽。
在一些实施例中，所述NELL肽可以是NELL肽的衍生物。这里所用的术语“衍生物”指由NELL肽或其结构等同物，或构象等同物衍生而来的化学或生物的化合物或物质。例如：这些衍生物可包括，前药形式，聚乙二醇化的形式，或任何其它形式的能够使NELL肽更稳定或具有更好的亲骨性或亲油性的NELL肽。在一些实施例中，衍生物可以是连接在聚乙二醇、，聚氨基酸、具有C1-C20的烃基短链，或生物相容性聚合物上的NELL肽。在一些实施例中，术语“衍生物”可包括NELL肽模仿物。肽模仿物的合成在本技术领域中已有很好的介绍。接下来描述肽(包括肽模仿物)合成的基本程序。
在开始肽合成前，氨基酸(启始材料)的胺末端可用FMOC(9-氟甲基氨基甲酸酯)或其它保护基团予以保护，并使用固体载体，如：Merrifield树脂(游离胺)作为起始剂。然后，进行步骤(1)至步骤(3)的反应，重复反应直到获得期望的肽：(1)用碳二亚胺化学使游离胺与羧基末端反应，(2)纯化氨基酸序列，和(3)在温和的酸性条件下去除保护基团(例如：FMOC保护基团)产生游离胺。然后肽从树脂上断裂下来，生成独立的肽或肽模仿物。
在一些实施例中，所述肽衍生物包括被物理或化学修饰的NELL肽。物理修饰的肽可以是，例如通过离子力的修饰(例如形成带平衡离子的离子对)、通过氢键的修饰、通过pH调节的修饰、，通过溶剂选择修饰、或通过使用不同的蛋白折叠/解折叠序列的修饰，这些修饰可涉及折叠/解折叠温度，pH值，溶剂，和在不同折叠/解折叠时期的持续时间的选择。
在一些实施例中，肽衍生物可包括化学修饰的NELL肽。例如：短烃基团(例如，甲基或乙基)可被选择性地连接到NELL肽分子的一个或多个位点上，以修肽的化学和/或物理的特性。在一些实施例中，单-，寡-或聚(乙二醇)(PEG)基团可被选择性地连接到NELL肽分子的一个或多个位点上，通过普遍了解的蛋白质PEG化程序修饰肽的化学和/或物理的特性(参见Mok，H.，et al.，Mol.Ther.，11(1)：66-79(2005))。
术语“NELL肽的抑制剂”指能够抑制NELL肽活性的化学或生物化合物。此术语也包括能够抑制NELL肽表达的化学或生物化合物。NELL肽的抑制剂可直接或间接地与NELL肽转录物或翻译产物相互作用。例如：相互作用的方法可包括(但不限于)，降低NELL肽的转录或翻译，降低NELL肽转录物或蛋白产物的稳定性，减低NELL肽转录物或蛋白产物的活性，和增加NELL肽转录物或蛋白产物的降解。术语“NELL肽的增强剂”指能够增强NELL肽活性的化学或生物化合物。该术语还包括能够增加NELL肽表达的化学或生物化合物。例如：相互作用的方法包括但不限于增加NELL肽的转录或翻译，增加NELL肽转录物或蛋白产物的稳定性，增加NELL肽转录物或蛋白产物的活性，和降低NELL肽转录物或蛋白产物的降解。
术语“NELL肽受体的调节剂”指能够促进或抑制NELL肽受体与NELL肽结合(或被NELL肽结合)的化学或生物化合物，或指无论是否有NELL肽存在都能够调节NELL肽受体活性的化学或生物化合物。促进NELL肽受体与NELL肽结合(或被NELL肽结合)和/或促进NELL肽受体激活的调节剂是指受体的“激动剂”。抑制NELL肽受体与NELL肽结合(或被NELL肽结合)和/或NELL肽受体激活的调节剂是指受体的“拮抗剂”。无论是否有NELL肽存在都促进NELL肽受体激活的调节剂是指受体的“激活剂”，而无论是否有NELL肽存在都抑制NELL肽受体激活的调节剂是指受体的“抑制剂”。
术语“NELL肽”，“NELL肽的抑制剂”或“NELL肽受体的“调节剂”在整个说明书中也称为“药剂”。
术语“骨病况”可包括，但不限于，：1)通过增加或降低骨形成调节骨愈合和骨再生，如：意外的或医源性的整形外科损伤(例如，外伤(如长骨骨折)(见图7B-D)，或外科手术(如，脊骨融合)(见图2、9和10)；2)通过增加或降低骨形成调节骨质量，而没有明显的整形外科损伤指征【如：股骨头坏死，骨质疏松症(骨质量降低)，骨骼石化症(骨质量增加)】；3)通过增加或降低骨形成调节骨愈合和骨再生，如意外或医源性颅面骨和/或牙周损伤【例如，外伤(如，颅面骨骨折)，外科手术(如，唇裂/腭裂的修复，头盖骨缺损的修复)(见图4，5和6)或牙齿校正(例如，拔牙，种牙)】4)通过增加或降低骨形成调节骨质量，而没有没有明显的颅面骨和/或牙周损伤(例如或上颌和下颌牙槽脊的再造和/或保存；抑制未成熟的颅盖骨跨越骨缝过度生长)；5)通过增加在硬体移植位点的骨形成，调节骨愈合和骨再生，以促进骨整合(例如：整个膝盖骨的移植，牙移植，脊骨移植)；6)通过调节肥大软骨形成来调节软骨的愈合和软骨的再生(例如：在所期望的是非肥大的软骨的骨病中，防止软骨肥大，如，引起严重关节损伤的关节内骨折，严重的骨关节炎或伴有进行性关节表面损失的风湿性关节炎；在人们期望的是肥大的软骨的骨病中，促进软骨肥大，，例如：加速软骨内骨化；在人们不希望肥大的软骨的骨病中，防止软骨肥大，例如：膜内骨化。)
术语“干细胞”可包括，但不限于，成人干细胞，胎儿干细胞，胚胎干细胞，间质干细胞，和骨髓干细胞。
成骨细胞的形成和功能
成骨细胞的形成和功能构成骨生物学的两个重要方面(Aubin，J.E.，Rev Endocr Metab Disord，2001.2(1)：p.81-94；Ducy，P.，et al.，Genes Dev，1999.13(8)：p.1025-36).这两个概念是骨诱导和骨再生的中心。根据Aubin的报道(Aubin，2001)，成骨细胞的形成包括几个分化阶段，包括起始的基质干细胞定型为成骨祖细胞谱系，然后分化为成骨细胞，并最终分化成为骨细胞和凋亡细胞。另一方面，成骨细胞的功能涉及在基质沉积中已分化的成骨细胞的活性和骨形成。既需要成骨细胞的形成又需要成骨细胞功能的骨形成可发生在胚胎发育，生长，骨再塑，骨折修复过程中，以及实验上通过脱钙骨基质的移植和添加纯化的BMP(Id.)而发生。因此，就适当的成骨细胞功仅能发生在适当的成骨细胞分化过程中而言，成骨细胞的分化和功能是两个没有必然分界的过程。
未分化的基质干细胞定型为骨祖细胞谱系的首要标志是Cbfa1的表达(Nakashima，K.and B.de Crombrugghe，Trends Genet，2003.19(8)：p.458-66；Yamaguchi，A.，T.Komori，and T.Suda，Endocr Rev，2000.21(4)：p.393-411)。Cbfa1对于成骨细胞的形成和功能是必需的。Cbfa1(Cbfa1-/-)裸鼠表现出成骨细胞和骨生成的完全缺失，在产期阶段，因缺少硬肋架无法维持呼吸而导致呼吸功能不全，最终死亡(Komori，T.，et al.，Cell，1997.89(5)：p.755-64；Otto，F.，et al.，Cell，1997.89(5)：p.765-71；Ducy，P.，et al.，Cell，1997.89(5)：p.747-54)。同时，杂合子的(Cbfa1+/-)功能缺失小鼠显示出锁骨发育不全，膜成骨发育延迟和颅骨成骨延迟，进而引起引起开放的前囟门和后囟门，较小的颅骨和颅骨间顶骨，多发的沃姆(氏)骨(骨缝间的小骨)，这是一种类似于人锁骨发育不全的表形(CCD)(Otto，F.，等人，Cell，1997，89(5)：p.765-71；Mundlos，S.，等人，Cell，1997，89(5)：p.773-9)。Cbfa1+/-小鼠表型表明膜内成骨可能对Cbfa1单倍型机能不全特别敏感。
根据已公开的研究，大多数所描述的骨诱导因子出现在Cbfa1功能区上游(表1)。例如：已知正调节Cbfa1转录的有，BMP2，BMP7，胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和转化生长因子-β1(TGF-β1)(Nakashima，K.and B.de Crombrugghe，Trends Genet，2003.19(8)：p.458-66；Tou，L.，N.Quibria，and J.M.Alexander，Mol CellEndocrinol，2003.205(1-2)：p.121-9；Pei，Y.，et al.，Acta PharmacolSin，2003.24(10)：p.975-84；Lee，M.H.，et al.，J Cell Biochem，1999.73(1)：p.114-25)。表1表明了一些被文献记载的骨诱导因子：成纤维细胞生长因子-2(FGF2)，甲状旁腺激素(PTH)(Franceschi，R.T.and G.Xiao，J Cell Biochem，2003.88(3)：p.446-54；Kim，H.J.，et al.，J Biol Chem，2003.278(1)：p.319-26)，成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)(Zhou，Y.X.，et al.，Hum Mol Genet，2000.9(13)：p.2001-8)，血管内皮生长因子(VEGF)，它是血管源性的因子(Zelzer，E.，et al.，Mech Dev，2001.106(1-2)：p.97-106)和血小板来源的生长因子(PDGF)，它是一种多功能生长因子，与Cbfa1在生长板血管化中协同作用(Himeno，M.，et al.，J Bone Miner Res，2002.17(7)：p.1297-305)。
Figure A20068001270700211
Cbfa1的骨诱导特性也已被研究。用腺病毒Cbfa1(Ad Cbfa1)转导的骨髓基质细胞(BMS)表现出体外矿化作用的增加和临界尺寸颅盖骨缺失小鼠中骨形成的增加(Zheng，H.，et al.，Calcif TissueInt，2004.74(2)：p.194-203)。而且，AdCbfa1和AdBMP2共转导的C3H10T1/2细胞(一种鼠科的多能间质细胞系)能在体外协同刺激成骨细胞分化，显著增加皮下移植转导C3H10T1/2细胞的免疫缺陷小鼠体内的骨形成(Franceschi，R.T.，et al.，Cells Tissues Organs，2004.176(1-3)：p.95-108；Yang，S.，et al.，J Bone Miner Res，2003.18(4)：p.705-15).这些研究结果表明骨祖细胞群对BMPs的反应性能够通过Cbfa1(骨祖细胞谱系的主要调节因子)在体外和体内得到增加(Franceschi，R.T.，et al.，Cells Tissues Organs，2004.176(1-3)：p.95-108)。
NELL肽作为Cbfa1的下游靶标
NELL可以是Cbfa1的下游靶标(Kuroda，S.，et al.，Biochem.Biophys Res Commun，1999.265：79-86；Ting，K.，et al.，J Bone MinerRes，1999.14：80-89).。已知，Cbfa1通过结合在启动子区域中的成骨细胞特异性的顺式作用元件(OSE2)来增强许多目的基因(如I型胶原(Col1-1)，骨涎蛋白(Bsp)，骨桥蛋白(Op)，和Oc)的转录(Ducy，P.，et al.，Genes Dev，1999.13(8)：p.1025-36)。已有研究表明，在人的NELL1基因上存在3个功能的OSE2应答成分，这肯定了NELL1是受Cbfa1调控的基因(见图11)。
NELL1首次被认为与骨的形成有关，是因为发现腺病毒NELL1的体外过度表达能够选择性地显著增强成骨细胞的分化和矿化，而对非成骨细胞(如NIH3T3成纤维细胞)并无这种作用(Zhang，X.，et al.，J Clin Invest，2002.110(6)：p.861-70)，并且，体内过表达NELL1的转基因动物过早的骨形成和颅骨跨越骨缝的过度生长均显著地增加。正如前段所陈述，NELL1的表达处于下游，并被成骨细胞形成和发挥功能的关键介体Cbfa1/Runx2直接调控，这表明NELL1能更特异性地或优先地作用于进一步分化的成骨细胞谱系的细胞(即定型的成骨细胞)。
NELL1是种属间高度保守的。大鼠和人NELL1共有93％的预见的氨基酸同源性(Ting，K.，et al.，J Bone Miner Res，1999.14：80-89)。NELL1有几个高度保守的结构域，包括一个分泌信号肽，一个NH2-端TSP-1样模块，5个chordin样CR区和6个EGF样区(图1)(Kuroda，S.，et al.，Biochem Biophys Res Commun，1999.265(1)：p.79-86)。大鼠NELL1作为400KD蛋白分泌到基质中，其在长时间变性后转变为130KD的蛋白(Id.)。这130KD的单体被假定通过盘旋的-螺旋区或CR域缔合成同质3聚体(Voorberg，J.，etal.，Journal of Cell Biology，1991.113(1)：p.195-205)。研究显示NELL1可能关键性地介调Cbfa1的下游作用，如：维持成骨细胞的分化和功能。
在体内，内源性的NELL1表达已鉴定出与延伸着的融合骨缝的骨前沿时空上相对应。过度表达NELL1的转基因小鼠也显示出病理性的骨性颅盖骨跨越颅缝的过度生长(Zhang，X.，et al.，JClin Invest，2002.110(6)：p.861-70)。
NELL1对Cbfa1缺陷后的某些方面的功能性补偿进一步证明了，在成骨细胞分化和功能方面NELL1是Cbfa1的下游介体。在一项研究中，检测了NELL1过度表达的小鼠(NELL1overexp)与Cbfa1+/-小鼠交的F2子代。在推测会缺失定型的成骨细胞的NELL1overexp+Cbfa1-/-小鼠中，，观察到成骨细胞表型最小程度地补救。此外，NELL1overexp Cbfa1-/-小鼠显示出增加的软骨细胞肥大(见图7)，这提示NELL1在软骨内成骨相关过程中发挥重要作用。应该含有定型的但功能还不完善的成骨细胞的NELL1overexpCbfa1+/-小鼠，11只中有9只，显示出由正常的CCD样表型确定的挽救(Otto，F.，et al.，Cell，1997.89(5)：p.765-71)。通过茜素红和阿尔新蓝染色及显微CT分析，确认了NELL1overexpCbfa1+/-小鼠与非补救性的Cbfa1+/-小鼠相比，其囟门的尺寸和缝的宽度相当地小，并伴有程较小的发育不全的锁骨。
这些研究的结果还显示：1)Cbfa上调NELL1的表达；2)在易感细胞类型中，NELL1的过度表达可选择性地增强成骨细胞样的分化(即：增强的ALP活性，增加的OP和OC的表达)3)NELL1过度表达作用于进一步分化的成骨细胞的细胞；4)NELL1过度表达增加了跨越骨缝的骨性过度生长；5)NELL1过度表达可对Cbfa1缺失的某些方面予以功能性的补偿；6)NELL1过度表达选择性地增强了与软骨内骨形成相关的过程(如软骨细胞肥大)。
NELL肽对非颅面骨的骨生成同样有作用。例如：已研究了转导的(Ad NELL1对由长骨分离的骨髓基质细胞(BMSC)的体外效应和在裸鼠中注射Ad NELL1的体内效应。该研究发现AdNELL1转导的BMSC细胞跟Adβ-半乳糖苷酶(Adβ-Gal)对照相(图3)比，显示出钙化骨节的形成明显增强。Ad NELL1注射导致在肌肉组织中有异位钙化节的形成，说明NELL1可增强非颅面成骨细胞的分化和骨形成。
此外，NELL肽还可上调成骨细胞分化的标记物，并与BMP蛋白，TGFβ蛋白，FGF，IGF(胰岛素样生长因子)，VEGF，或它们的组合协同作用，提高体外骨分化标记物的表达(例如：ALP，OC)和体内的骨形成(见图8)。比如，NELL2和BMP2可协同性作用诱导成骨细胞分化。图8显示的例子表明NELL肽，如NELL2和NELL1，能够调节成骨细胞的分化以促进骨的形成。
因此，在一些实施例中，本发明提供了鉴别诱导NELL肽表达的分子的方法。方法包括：(1)用测试化合物接触NELL启动基因，(2)检测NELL1启动基因表达的水平，(3)比较用测试化合物的与不用测试化合物的NELL1启动基因的表达水平(4)如果用测试化合物的与不用测试化合物的NELL1启动基因的表达水平不同，则指定测试该化合物为NELL肽表达的调节剂。在一些实施例中，方法步骤还包括：(5)如果使用测试化合物的NELL1启动基因的表达水平低于不使用测试化合物的NELL1启动基因的表达水平，则指定该调节剂为抑制剂，或者(6)如果使用测试化合物的NELL1启动基因的表达水平高于不使用测试化合物的NELL1启动基因的表达水平，则指定该调节剂为增强剂。根据本方法鉴定的调节剂可用于调节哺乳动物中NELL肽表达水平。
表达NELL肽的系统
NELL1肽是可由NELL1基因，或cDNA或RNA或他们的片断表达的一种蛋白。这样的NELL基因，cDNA，RNA或他们的片段包括编码人的NELL1肽或者其片段的SEQ ID NO：1-11，编码小鼠的NELL1肽或其片段的；SEQ ID NO：17-71，编码大鼠的NELL1肽或其片段的SEQ ID NO：75和76。NELL1肽可包括NELL1肽的片断，NELL1肽可包括仍保持着诱导骨细胞分化，成骨细胞分化骨形成，或软骨的再生的能力的NELL1肽片段。
NELL2肽是可由NELL2基因，cDNA或RNA或他们的片段表达的一种蛋白。这种NELL2基因，cDNA或RNA或他们的片段包括编码人NELL2肽或其片段的SEQ ID NO：12-16，编码小鼠NELL肽或其片段的SEQ ID NO：72-74，编码大鼠NELL肽或其片段的SEQ ID NO：77-81。NELL2肽可包括仍保持着与所述NELL2肽相似的活性的NELL2肽片段。
NELL1或NELL2肽可表达于核酸构造物，这些核酸结构包括上述NELL1或NELL2基因。在一个实施例中，本发明包括一种使用昆虫细胞系表达功能性NELL肽(如：NELL1或NELL2肽)的方法。在一个实施例中，昆虫细胞可以是高五细胞(high five cell)，Sf9和其他Sf细胞。
在一个实施例中，本方法可包括提供一种编码所述NELL1或NELL2肽的核酸序列。该核酸序列也可以包括一些序列，例如：具有基本相似性的序列(如：具有与上述序列的任何部分至少75％序列相似的序列)。
在一些实施例中，核酸可包括表达编码NELL肽(如：NELL1或NELL2肽)的核酸的表达载体。例如，表达载体可以是pIZT/V5-His(Invitrogen)，和包括杀稻瘟和新霉素的选择性标记物。
在一些实施例中，核酸序列还可以包括附加的核酸，该附加的核酸编码报告基因产物以监测基因的表达水平，或者编码能够使用本领域已知方法使其直观可视的肽标记，以监测肽的表达水平。可选择附加序列，使其不影响核酸的表达或表达的肽产物的功能性。
核酸构造物可包括编码信号肽的核酸序列。这样的信号肽可以是任何NELL信号肽。这些信号肽可以是人，大鼠，小鼠或狗NELL信号肽。其他一些NELL信号肽包括但不限于，由核酸SEQ ID NO：88编码的人NELL2信号肽SEQ ID NO：89，核酸SEQ ID NO：90编码的大鼠NELL2信号肽SEQ ID NO：91，核酸SEQ ID NO：92编码的小鼠NELL2信号肽SEQ ID NO：93和核酸SEQ ID NO：94编码的狗NELL2信号肽SEQ ID NO：95。核酸可包括用于表达编码NELL肽的核酸序列的表达载体。而且，这些核酸序列可包括编码报告基因产物以监测基因表达水平的附加核酸。或者编码能够通过本领域已知方法使其直观可视的肽标志，以监测肽表达的水平。
核酸构造物可包括表达载体和克隆载体，载体应该包含一个选择基因，也称为可选标记物，如：编码对于转化了载体的宿主细胞存活或生长是必要的基因。这一基因的存在保证了任何删除该载体的宿主细胞不会获得在生长和再生上超过转化的宿主的优势。典型的选择基因编码(a)赋予对抗抗生素或其他毒素(例如：氨苄西林，新霉素，氨甲喋呤，四环素)的抗性；(b)补充营养缺陷的蛋白。
核酸构造物可以包括一个启动子，该启动子能够被宿主生物识别，并可被可操作地连接到编码NELL的核酸上。启动子是位于结构基因起始密码子上游(通常在100到1000个bp以内)的非翻译序列，启动子控制他们所控制的核酸的转录和翻译，包括可诱导的启动子和组成启动子。可诱导的启动子是启动被其控制的DNA转录水平增加的启动子，该转录水平的增加是对培养条件的某些改变的反应(如：有营养因子或缺乏营养因子或温度的变化)。现在已知可被多种潜在的宿主细胞识别的大量启动子。一些NELL启动子核酸序列的例子包括，但不限于，分别编码人NELL1启动子，小鼠NELL1启动子和大鼠NELL1启动子的SEQ ID NO：82，84和86。一些NELL2启动子核酸序列的例子，但不限于，包括分别编码人NELL2启动子，小鼠NELL2启动子和大鼠NELL2启动子的SEQ IDNO：83，85，和87。
当核酸与另一个核酸序列有功能性的关系时，核酸可被操作性地连接。例如：一个DNA如果它表达参与多肽分泌的前体蛋白，用于前序列或分泌先导的DNA可与一个用于多肽的DNA连接；如果一个启动子或增强子影响序列的转录，它可被操作性地与编码序列连接；或如果它被定位来促进翻译，就可使一个核糖体结合位点操作性地连接到一个编码序列上。
在一个实施例中，本发明可包括一个核酸结构用来表达NELL肽，例如：在哺乳动物细胞(如：中国仓鼠细胞CHO细胞)中表达NELL1和/或NELL2肽。核酸序列可以是一个编码至少一个NELL肽功能段的cDNA，基因组DNA或RNA。例如：核酸序列可包括上述NELL1或NELL2基因。在一些实施例中，核酸序列还可包括一些序列，例如：具有基本的序列相似性的序列(如，与上面所列序列任何部分具有至少75％相似性的序列)。
在一些实施例中，为在哺乳动物细胞(例如：CHO细胞)中获得NELL1和/或NELL2肽产物，NELL1和/或NELL2的表达系统可包括表达内源性信号肽的核酸或cDNA。在一些实施例中，表达NELL1和/或NELL2的系统可包括表达NELL2信号肽的核酸或cDNA。NELL2信号核酸或cDNA整合入表达NELL1肽的系统中，可使NELL1肽的产剩更有效。
在一个实施例中，本发明可包括表达功能性NELL肽的细胞。在一个实施例中，这一细胞可以使昆虫细胞。在一个实施例中，昆虫细胞可以是高五细胞。
在一个实施例中，细胞可被编码NELL肽的核酸构造物转染。例如：细胞系可用编码NELL肽的核酸构造物瞬时转染或稳定转染。在一个实施例中，表达NELL的核酸(例如：cDNA)可被克隆到基因表达载体或病毒颗粒中，该基因表达载体或病毒颗粒能够转染细胞(例如：昆虫细胞或中国仓鼠细胞(CHO细胞))。在一些实施例中，此构造物可包括诸如使用信号肽(前胰岛素原(Preprotrypsin)，人tPA，免疫球蛋白Ig的轻链和Fc段，白介素等的任何一个)的pTB701的载体。pTB701载体已在文献(Kurodaet al.，Biochemical&Biophysical Research Communications，265：79-86(1999))中报道。
该核酸序列也可包括一个编码NELL肽(如，NELL1或NELL2肽)的核酸序列，该序列和编码昆虫分泌信号肽的核酸序列整合。
在一个实施例中，本发明可包括表达功能性NELL肽，并能分泌功能性蛋白的细胞。
在一个实施例中，本发明可包括一种包含NELL肽(如：NELL1或NELL2肽)的多肽，也可包括分泌信号肽。
在一些实施例中，表达NELL肽或蛋白的基因序列可包括任何表达整个NELL分子或其片段的的基因序列。这样的基因序列可任选地包括非编码序列。通常，基因组序列可粗略地分为：(1)编码功能蛋白的基因组序列(可包括不同的mRNA拼接变异体)，(2)可调控功能蛋白表达的非编码，非转录基因组序列(启动子域，其他非转录DNA域等等)，(3)可调控功能蛋白表达的非编码，转录基因组序列(如，tRNA，rRNA，内含子，5′和3′末端非翻译区，易位因子，基因间区和数千的具有反义或不具有反义功能的不同的小而稳定的RNA).
每一个DNA分子包含许多基因——遗传基本的结构和功能单位。一个基因是一个特殊的核苷碱基序列，序列中携带着构造蛋白质所需要的信息，蛋白质提供了细胞和组织的结构组分以及生化反应所必需的酶。人类基因组估计包含3万多个基因。
人类基因长度相差非常大，通常延长数千个碱基，但是只有约10％的基因组已知是包括编码蛋白序列基因(外显子)。在许多基因间散在分布着许多没有编码功能的内含子序列。基因组的平衡被认为包含其他非编码区域(例如，控制序列和基因间区)，这些非编码区域的功能尚不清楚。所有活的生物体都由大量的蛋白质组成。人类可合成至少10万种不同的蛋白质。蛋白质是大而复杂的分子，由称为氨基酸的亚单位长链构成。通常组成蛋白质的氨基酸有二十种。在基因中，每一个特殊的三个DNA碱基序列(密码子)指导细胞蛋白质合成器加入特殊的氨基酸。例如，碱基序列ATG编码甲硫氨酸。因为三个碱基编码一个氨基酸，所以由平均大小的基因(3000碱基)编码的蛋白质包含1000个氨基酸。因此，遗传密码是一套密码子，它具体决定需要用哪一个氨基酸来制造特定的蛋白质。
基因中编码蛋白质的结构信息通过信使RNA(mRNA)被间接传递，mRNA是与单链DNA相似的一种短暂的中间分子。为了表达基因中的信息，从细胞核中的DNA模板产生一种互补的RNA单链(这一过程称为转录)。这个mRNA从细胞核转移到细胞质，在细胞质中mRNA作为蛋白质合成的模板。然后，细胞的蛋白质合成器将密码子翻译成氨基酸链，这一氨基酸链将组成密码子所编码的蛋白质分子。在实验室，mRNA分子可被分离并用于合成互补DNA(cDNA)单链的模板，然后cDNA可被用于染色体图上相关基因的定位。
在一些实施例中，所述组合物可通过与其他化学药品结合或纳入纳米笼或生物材料中来使组合物稳定化，直至其成功递送。在人类，非编码区域比编码区域要多。基因组中的非编码部分扮演着重要的调节角色。至少一半的人类基因组被转录。约95％的转录产物是非编码RNA(ncRNA)，它不仅仅包括tRNA，rRNS还有内含子，5′和3′末端非翻译区，易位因子，基因间区和数千个不同的小而稳定的RNA.纳米笼或生物材料可作为下述的载体或框架。
在人和啮齿动物之间，大量的这些转录区域是进化保守的(人和小鼠间有近95％的保守)，提示了保留的功能。大部分这些非编码RNA的的首要特征是他们的反义功能：他们能通过或多或少的延伸碱基配对互补性寻找到另一个RNA。这已被snoRNA和miRNA说明。ncRNA实现着一些意料之外的功能。他们在调节细胞过程(包括发育，异染色质形成，转录，选择性剪接和编辑，核酸的化学修饰和真核生物基因组稳定性)中扮演着重要的角色。虽然大多数具有被精确描述功能的ncRNA是普遍存在的，但大多数新确定的ncRNA被发现是被发育调节的，即，以性别，组织或细胞特异的方式表达。在反义ncRNA中，正迅速出现一个大家族：微小RNA(miRNA).他们在高级生物体中高度保守，，参与暂时的细胞谱系决定和组织特异性基因调节，并调节各种发育和生理过程。他们共同的行为模式是靶向定位于mRNA以便破坏或抑制翻译。
NELL肽的抑制剂
本发明的一个方面，所述药物组合物可包括NELL肽活性抑制剂，用来治疗，预防或改善伴随未成熟的或过度的骨形成的骨病。这些药剂可以是但不限于，NELL1抑制剂或NELL2抑制剂或他们的组合。术语“NELL肽抑制剂”已在发明概述部分描述。
任何用来筛选生物活性化合物(如，蛋白质)抑制剂的化验方法都可用来筛选NELL肽抑制剂。一些化验方法在PCT/2003/029281(WO 2004/024893)中已有描述。
典型的NELL1或NELL2抑制剂包括任何能够在转录期(如，Cbfa1特异性的siRNA，抗体，因为NELL1或NELL2在启动子中包含Cbfa1的结合位点)和/或翻译期(如，NELL1特异性的siRNA，NELL2特异性的siRNA，或结合NELL1或NELL2的受体比如，NELL1或NELL2特异性的抗体)特异性地抑制NELL1或NELL2的药剂。
NELL肽的增强剂
在另一实施例中，提供了一种包含一个或多个NELL肽增强剂的药物组合物。
NELL肽受体的调节剂
本发明的进一步一个方面，所述药物组合物可包含NELL肽受体的调节剂。NELL1和NELL2蛋白是结合在膜结合的受体上的分泌分子(Kuroda，S.，等人，Biochem.Biophys Res Commun，265(1)：p.79-86)(1999)。
NELL肽受体调节剂可用任何已确定的筛选受体调节剂的方法来鉴别。在一个实施例中，NELL肽受体调节剂可通过竞争性的结合来筛选。例如，一种筛选这种调节剂的方法，可包括以下步骤：(1)使NELL肽受体分子与试验化合物接触，(2)使NELL肽与受体分子和试验化合物接触，(3)检测NELL肽与受体分子在有试验化合物时的结合程度，(4)对比NELL肽与受体分子，在有试验化合物时结合的程度和对照的结合程度，其中对照是通过检测NELL肽在没有试验化合物时与受体分子结合程度得来的，(5)如果有试验化合物时NELL肽与受体分子的结合程度不同于对照组的结合程度，则认为该试验化合物是NELL肽的调节分子。调节剂可被认为是受体的拮抗剂或激动剂。如果有试验化合物时的NELL肽与受体分子结合的程度低于对照组，则调节剂是NELL肽受体的拮抗剂。如果有试验化合物时的NELL肽与受体分子的结合程度高于对照组，则调节剂是NELL肽受体的激动剂。
在一些实施例中，所述的NELL调节剂可包括稳定或降解NELL和/或NELL肽受体的分子，还有在最初的受体连接后参与NELL受体复合体的稳定化和磷酸化作用的分子。在一些实施例中，所述调节剂可包括上述激动剂和拮抗剂的激动剂和拮抗剂。例如，包含NELL拮抗剂的抑制剂的组合物可增加骨的代谢。在所有案例中，请将临床应用扩展到包括之前段落讨论的那些。
NELL肽受体的调节剂可通过人工筛选或自动化系统(如，基于组合化合的系统)来筛选。基于组合化合的检测系统的一个例子在PCT/2003/029281(WO 2004/024893)有描述。
软骨的再生
关节软骨由大部分水(60-80％重量百分比)构成，其余的ECM主要含有II型胶原质(干重的50-90％)和蛋白多糖(5-10％)。仅有少量的其他胶原质和次要的ECM分子。正是ECM进入不同区域的组织，以及不同区域中水与ECM的相互作用提供了韧性，跨关节的生物机械力的吸收和传送需要这一韧性，同时无摩擦的关节表面是关节运动所需要的。据报道，人的髋关节在平时走路和跳跃时的压力分别达到4MPa和20Mpa！同关节软骨一样令人惊异的是，它表现出非常不幸的最小的修复能力。超过2000万的美国人经受着关节炎和退行性关节病的折磨，每年承担的相关费用超过了600亿美元。各种各样的支架，细胞因子和生长因子在软骨组织工程中被研究(参见Frenkel，S.R.，et al.，Ann.Biomed.Eng.32：26-34(2004)；Tuli，R.，et al.，Arthritis Res.Ther.5：235-238(2003)；and Ashammakhi，N.and Reis，RL.Topics in Tissue Engineering，Vol.2，2005)关于静态对动态的压缩，切应力，流体静力学压力，流体流动，电流动电势，生物反应器，加载在软骨细胞上生物应答的复合物和组织重建已经被广泛地研究，关于其动力传导途径的综述见(Ashammakhi，N.and Reis，RL Tissue Engineering，Vol.2，2005图7A-D)
因此，本发明进一步的一个方面，这里提供的药物组合物包括了至少一种NELL肽或一种NELL肽受体的激动剂，其量为诱导成软骨细胞和软骨细胞形成软骨的有效的量。在有或无细胞，有或无机械刺激，有或无附加生长因子的情况下，NELL蛋白，肽，DNA，RNA，NELL激动剂和拮抗剂的抑制剂可单独地使用或与支架联合使用。例如，在一个实施例中，药物组合物可在椎间盘的再生软骨，关节软骨修复和再生中发挥有效的作用。在另一实施例中，在组织工程中，药物组合物在通过体外(ex vivo)基因治疗形成软骨和在有或无支架存在情况下将蛋白质应用到细胞中有效地发挥作用。
依赖于递送方法和局部环境，包括一种NELL肽(如，一种NELL1肽)的组合物可用于诱导骨原细胞(如，软骨细胞或成软骨细胞)，分化和只形成软骨。例如，在关节软骨缺损时，此处所述的组合物可诱导软骨形成细胞(如，软骨细胞/成软骨细胞)只形成软骨。组合物作为一种支架或载体应用于缺失的软骨部位。在一些实施例中，组合物可任选地包括细胞(干细胞，成软骨细胞等)。在一些实施例中，组合物可应用于基因治疗。
还在一些实施例中，组合物可用于软骨组织工程。例如，当成软骨细胞培养于一种振荡的间歇性压力环境中时，NELL1肽可包括成软骨细胞以便分化并形成软骨。在这些实施例中，振荡压力的持续时间也发挥着重要的作用。例如，如果振荡压力持续应用，含NELL1肽的组合物可诱导软骨内的骨形成。。因此，应该间歇性地实施振荡压力，以便骨原细胞(如，软骨细胞/成软骨细胞)的分化停留在软骨阶段，这就防止了细胞分化为软骨内的骨形成。。
因此，在一些实施例中，此处所述组合物可用于软骨再生/修复，如，关节软骨盘和椎间盘的修复。
此处公开的药物组合物可用于治疗，预防或改善其他软骨病的例子，包括但不限于，软骨钙质沉着病，骨关节炎，和/或以病理性软骨退化为特征的其他疾病。
其他药剂
在一些实施例中，此处所述药物组合物可包括NELL肽和其他能够有效促进骨生成的药剂。这种其他要剂包括，如，骨形态发生蛋白(BMP)如，BMP-1，BMP-2，BMP-3，BMP-4，BMP-5，BMP-6，BMP-7，BMP-8，BMP-9，BMP-10，BMP-11，BMP-12，BMP-13，BMP-14，BMP-15，BMP-16，BMP-17，BMP-18，BMP-19，BMP-20，BMP-21，FGF(成纤维细胞生长因子，如，FGF1，FGF2，FGF4，FGF7，FGF10，FGF19，FGF21，FGF23)，TGF-β(转化生长因子-β，如TGF-β1)，IGF(胰岛素样生长因子，如，IGF-I)，VEGF(血管内皮生长因子)，PDGF(血小板源性生长因子)，PTH(甲状旁腺激素)/PTHrp(甲状旁腺激素调节蛋白)，氧化型胆固醇，亲脂抑制素，生长/分化因子5(GDF5)；和至少存在三种剪切体的LIM矿化蛋白(LMPs)。一些关于这些因子和他们发挥作用机制的研究参见文献：Nakashima，K.and B.de Crombrugghe，Trends Genet，2003.19(8)：p.458-66；Tou，L.，N.Quibria，and J.M.Alexander，Mol CellEndocrinol，2003.205(1-2)：p.121-9；Pei，Y.，et al.，Acta PharmacolSin，2003.24(10)：p.975-84；Lee，M.H.，et al.，J Cell Biochem，1999.73(1)：p.114-25；Franceschi，R.T.and G.Xiao，J Cell Biochem，2003.88(3)：p.446-54；Kim，H.J.，et al.，J Biol Chem，2003.278(1)：p.319-26；Zelzer，E.，et al.，Mech Dev，2001.106(1-2)：p.97-106；Himeno，M.，et al.，J Bone Miner Res，2002.17(7)：p.1297-305；Kha，H.T.et al.J Bone Miner Res 19，830-40，2004；Izumo，N.et al.Methods Find Exp Clin Pharmacol 23，389-94，2001；Hatakeyama，Y.et al.J Cell Biochem 91，1204-17，2004；Pola，E.et al.Gene Ther11，683-93，2004).一项研究报道说，激活突变的FGF受体1(FGFR1)显著增加小鼠体内Cbfa1的表达，成骨细胞的增殖和分化，以及骨性颅骨跨越骨缝的过度生长(Zhou，Y.X.，et al.，Hum Mol Genet，2000.9(13)：p.2001-8).
在一个实施例中，药物组合物含有NELL1肽和BMP肽。作为例子，人的骨肉瘤细胞株，(Saos-2)(McQuillan，D.J.，et al.，Bone，1995.16(4)：p.415-26；Fedde，K.N.，Bone Miner，1992.17(2)：p.145-51)，分别与100ng/ml和200ng/ml剂量的重组NELL1和BMP2蛋白培养。试验结果显示，相对于BMP2培养，NELL1/BMP2联合培养使ALP的活性增加了5倍，这一结果表明NELL1可增加成骨细胞样细胞群对BMPs的应答。
在一些实施例中，此处所述组合物可任选地包括诱导LIM蛋白。
在一些实施例中，此处所述组合物可特定地排除一种或多种上述药剂。
剂量
NELL肽和其他药剂的剂量可根据本领域已知的方法，基于药剂的类型，疾病和其他因素(如年龄和性别)来决定。
在一个实施例中，在有或无特殊载体或支架的情况下，骨形成所需NELL肽的剂量，其范围通常在0.001Pg/mm2到1Pg/mm2之间，或更优选的在0.001ng/mm2到1ng/mm2之间，或更优选的在0.001μg/mm2到1μg/mm2之间，或更适宜的在0.001mg/mm2到1mg/mm2之间，或更优选的在0.001g/mm2到1g/mm2之间。在另一实施例中，在有或无特殊载体或支架情况下，骨形成所需NELL肽的剂量，其范围通常在0.001pg/ml到1pg/ml之间，或更优选的在0.001ng/ml到1ng/ml之间，或更优选的在0.001μg/ml到1μg/ml之间，或更优选的在0.001mg/ml到1mg/ml之间，或更优选的在0.001g/ml到1g/ml之间。在另一实施例中，在有或无特殊载体或支架的情况，骨形成所需NELL肽的剂量，其范围通常在0.001pg/kg到1pg/kg之间，或更优选的在0.001ng/kg到1ng/kg之间，或更优选的在0.001μg/kg到1μg/kg之间，或更优选的在0.001mg/kg到1mg/kg之间，或更优选的在0.001g/kg到1g/kg之间。而且，可以理解，，所有剂量可以是连续给药或按一个特定的时间段分别给药。时间段的例子包括，但不限于，每一小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时24小时、48小时、72小时、或每1周、2周、4周、或每1个月、2个月、4个月等等。
然而，因为NELL肽可能影响体外成骨细胞调亡(Zhang，X.，et al.，J Bone Miner Res，2003.18(12)：p.2126-34)，所以显著高于最佳范围的NELL(如NELL1)剂量不能够增加骨的形成。因此，更优选的NELL肽剂量不应该明显高于最佳的剂量范围。可根据一些因素调整更优选的最佳NELL肽的剂量范围，如，哺乳动物类受治疗的主体的类型，年龄，部位，性别，使用的载体或支架的材料，以及不同NELL肽的纯度和强度。在一个实施例中，更优选的NELL肽的剂量范围包括，但不限于，从1ng/mm2到100ng/mm2，或更优选的从100ng/mm2到1000ng/mm2，或更优选的从1μg/mm2到100μg/mm2，或更优选的从100μg/mm2到1000μg/mm2。在另一实施例中，更优选的NELL肽的剂量范围包括，但不限于从1ng/ml到100ng/ml，或更优选的从100ng/ml到1000ng/ml，或更优选的从1μg/ml到100μg/ml，或更优选的从100μg/ml到1000μg/ml。但在另一实施例中，在有或无特殊的载体或支架的情况下，更优选的NELL肽的剂量范围通常为从1μg/kg到100μg/kg，或更优选的从100μg/kg到1000μg/kg，或更优选的从1mg/kg到100mg/kg。而且，可以理解，，所有剂量可以是连续给药或按一个特定的时间段分段给药。时间段的例子包括，但不限于，每一小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时24小时、48小时、72小时、或每1周、2周、4周、或每1个月、2个月、4个月等等。此处所述的“显著高于最佳的范围”是指，例如，高于最佳范围大约1％到大约50％，大约5％到大约50％，大约10％到大约50％，大约20％到大约50％，大约30％到大约50％，或大约40％到大约50％。
根据抑制剂种类，需要治疗、预防或需要改善的骨或软骨病的情况，以及接受含此抑制剂的药物组合物的哺乳动物主体的年龄，部位和性别等因素调整NELL肽抑制剂的剂量。通常，在有或无特殊的载体或支架情况下，NELL肽抑制剂的剂量范围从，但不限于，0.001pg/mm2到1pg/mm2，或更优选从0.001ng/mm2到1ng/mm2，或更优选的从0.001μg/mm2到1μg/mm2，或更优选的从0.001mg/mm2到1mg/mm2，或更优选的从0.001g/mm2到1g/mm2。在另一个实施例中，在有或无特殊的载体或支架情况下，NELL肽抑制剂的剂量范围通常从0.001pg/ml到1pg/ml，或更优选地从0.001ng/ml到1ng/ml，或更优选地从0.001μg/ml到1μg/ml，或更优选地从0.001mg/ml到1mg/ml，或更优选地从0.001g/ml到1g/ml。但在另一个实施例，在有或无特定的载体或支架情况下，NELL肽抑制剂剂量范围通常从0.001pg/kg到1pg/kg，或更优选从0.001ng/kg到1ng/kg，或更优选从0.001ug/kg到1ug/kg，或更优选从0.001mg/kg到1mg/kg，或更优选从0.001g/kg到1g/kg，或更优选从0.001kg/kg到1kg/kg。而且，可以理解，，所有的剂量可持续地给药或按一个特定的时间段分段给药。时间段的例子包括但不限于，每1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、24小时、48小时、或72小时、或每周、每2周、4周，或每1个月，2月，4月等等。
根据抑制剂类型，受体的类型，需要治疗、预防或需要改善的骨或软骨病的情况，以及接受含此受体调节剂的药物组合物的哺乳动物主体的年龄，部位和性别等因素调整NELL肽受体调节剂的剂量。通常，在有或无特殊的载体或支架情况下，NELL肽受体调节剂的剂量范围从，但不限于，0.001pg/mm2到1pg/mm2，或更优选从0.001ng/mm2到1ng/mm2，或更优选的从0.001μg/mm2到1μg/mm2，或更优选的从0.001mg/mm2到1mg/mm2，或更优选的从0.001g/mm2到1g/mm2。在另一个实施例中，在有或无特殊的载体或支架情况下，NELL肽受体调节剂的剂量范围通常从0.001pg/ml到1pg/ml，或更优选地从0.001ng/ml到1ng/ml，或更优选地从0.001μg/ml到1μg/ml，或更优选地从0.001mg/ml到1mg/ml，或更优选地从0.001g/ml到1g/ml。但在另一个实施例，在有或无特定的载体或支架情况下，NELL肽受体调节剂的剂量范围通常从0.001pg/kg到1pg/kg，或更优选从0.001ng/kg到1ng/kg，或更优选从0.001ug/kg到1ug/kg，或更优选从0.001mg/kg到1mg/kg，或更优选从0.001g/kg到1g/kg，或更优选从0.001kg/kg到1kg/kg。而且，可以理解，，所有的剂量可持续地给药或按一个特定的时间段分段给药。时间段的例子包括但不限于，每1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、24小时、48小时、或72小时、或每周、每2周、4周，或每1个月，2月，4月等等。
配方载体
此处所述药物组合物可用于需要通过多种给药途径治疗的个体，给药途径包括口服，胃肠道外给药(如，静脉注射，皮下注射，骨髓内注射)以鼻内给药，用作栓剂或使用“闪释”配方(即，使药物无需用水就在口腔中溶解)，局部给药，皮下给药，皮内给药和/或以液态或固态形式通过粘膜途径给药。药物组合物可配制成多种剂型，如，提取物，丸剂，片剂，微颗粒，胶囊，口服液。
还可以包括作为药物组合物一部分的药理学兼容的粘合剂和/或佐剂材料。活性材料可与其他活性材料混合，包括抗生素，抗真菌药，其他杀病毒药和免疫兴奋剂，这些材料不会削弱预期的疗效和/或补充预期的疗效。
在一个实施例中，此处所述药物组合物的给药途径是口服。口服的组合物通常包括惰性的稀释剂或可食用的载体。他们可密封于明胶胶囊中或压缩成片剂。为了通过口服治疗给药，上述组合物可掺入赋形剂，以片剂，含片，胶囊，酏剂，悬浮液，糖浆剂，薄脆饼和口香糖等形式使用。然而，依赖于被治疗主体的情况，必要时可改变用药剂量。这些药剂应产生活性成分血清浓度从大约0.01nM到1,000,000nM，例如，从大约0.2到40μM。优选的浓度范围从0.2到20μM，更优选的大约从1到10μM。然而，药物组合物中的活性成分的浓度依赖于药物的生物利用度和其他本领域已知的因素。
在另一实施例中，此处所述药物组合物的给药方式是局部或粘膜给药。一种特殊的首选粘膜给药方式是通过女性生殖道给药。另一首选的粘膜给药方式是直肠给药。
多种多样的聚合和/或非聚合材料可作为提高此处所述药物组合物粘膜附着性的佐剂。作为佐剂的适宜的聚合材料可以是天然的或合成聚合物。。典型的天然聚合物包括，如，淀粉，壳聚糖，胶原质，糖，明胶，果胶，藻酸盐，karya胶，甲基纤维素，羧甲基纤维素，甲基乙基纤维素和羟丙纤维素。典型的合成聚合物包括，例如，聚(丙烯酸)，黄芪胶，聚(甲基乙烯基醚-共-顺丁烯二酸酐)，聚(环氧乙烷)，聚羧乙烯，，聚(乙烯基吡咯烷)，聚(乙二醇)，聚(乙烯醇)，聚(甲基丙烯酸2-羟基乙酯)，聚卡波非。也可以使用本领域其他可获得的生物黏附材料(参见，Bioadhesion-Possibilities and Future Trends，Gurny and Junginger，eds.，1990)
需要注意的是，使用的剂量也可随将要减缓的疾病的严重程度而改变。进步理解便是：对于任何特殊的主体，应该根据个体的需要以及根据执行或监督上述组合物给药的专业人员的判断来调整特殊的给药方案。更进一步的理解是，上述浓度范围仅用来举例，并不能限制本发明的范围或实施。活性成分可以一次性给药，或者也可以分割成小剂量不同时段给药。
药物的配方可含有下述成分：粘合剂(如微晶纤维素，黄芪胶或明胶)，赋形剂(如淀粉或乳糖)，崩解剂(如海藻酸，羧甲淀粉钠，玉米淀粉等)，润滑剂(如硬脂酸镁或氢化植物油(Sterotes))，助流剂(如胶体的二氧化硅)，甜味剂(如蔗糖或糖精)或调味剂(如薄荷油，水杨酸甲酯或橙味调味剂)都可以加入。当剂型的单位是胶囊时，，它可含有，除了上述类型的材料外，液态载体如脂肪油。其他的剂型单位可含有修饰剂型单位的物理形状的其他各种材料，例如，胞衣。。因此，片剂或丸剂可涂敷糖，虫胶或其他肠溶包衣剂。用于制备这些组合物的材料应该具有药学纯净度并且在所用的量是无毒性的。
溶液或悬浮液也可包括下述成分：无菌稀释剂(如注射用水，盐水溶液，不挥发性油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其他合成溶剂)，抗生剂(如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯)，抗氧化剂(如抗坏血酸或亚硫酸氢钠)，鳌合剂(如乙二胺四乙酸)，缓冲剂(如醋酸盐，柠檬酸盐或磷酸盐)，张力调节剂(如氯化钠或葡萄糖)。胃肠道外给药的药剂可装入安瓿瓶，一次性注射器或盛装倍剂量的玻璃或塑料小瓶中。
本发明的药物组合物可用药学可接受的载体制备而成。优选的这些载体是能够保护活性成分不被迅速从体内排出的载体，如控制释放的配方，，包括埋植剂和微囊递药系统。可使用生物降解，生物相容性聚合物，如聚酐，聚乙醇酸，胶原质和聚乳酸。本领域技术人员可以很容易的实施制备这些配方的方法。
脂质体悬浮液(包括带有对抗病毒抗原的单克隆抗体的靶向感染细胞的脂质体)也是优选的药理学可接受的载体。关于包装或参合组合物到脂质体的方法参见Cozzani，I.；Jori，G.；Bertoloni，G.；Milanesi，C.；Sicuro，T.Chem.Biol.Interact.53，131-143(1985)andby Jori，G.；Tomio，L.；Reddi，E.；Rossi，E.Br.J.Cancer 48，307-309(1983)这些药剂也可通过本领域技术人员已知的方法来制备，如，美国专利4,522,811的描述(该文献以全文引用的方式并入本申请中)。例如，可通过在无机溶剂中溶解适当的脂质(如，硬脂酰磷脂酰乙醇胺，硬脂酰磷脂酰胆碱，花生酰卵磷脂和胆固醇)，然后蒸发，在容器表面形成干燥的脂质薄膜，然后将活性化合物的水溶液放入容器中，用手摇动容器使脂质材料从容器壁上脱落下来，分散脂质凝聚物，从而形成脂质体悬液。
其他将化合物装入脂质体及递送至身体目的部位的方法已记述在Sicuro，T.；Scarcelli，V.；Vigna，M.F.；Cozzani，I.Med.Biol.Environ.15(1)，67-70(1987)and Jori，G.；Reddi，E.；Cozzani，I.；Tomio，L.Br.J.Cancer，53(5)，615-21(1986)。
此处所述药物组合物可通过单剂量(如每日一次)的或多剂量或持续输液的方式给药。本发明的化合物也可以通过单剂量的或多剂量的方式，单独或与药学上可接受的载体，运载工具或稀释剂联合给药。合适的药物载体，运载工具和稀释剂包括惰性的固态稀释剂，充填剂，无菌水溶液和多种有机溶剂。由本发明的化合物与药学上可接受的载体，运载工具或稀释剂形成药物组合物后，迅速以多种剂型，如片剂，粉末，锭剂，糖浆剂，注射液等等给药。如果需要，药物组合物根据特殊的剂型可包含附加成分，如调味剂，粘合剂，赋形剂等等。
因此，例如，口服给药时，含有不同赋形剂(如，柠檬酸钠，碳酸钙和/或磷酸钙)的片剂与粘合剂(如聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖，凝胶和/或阿卡胶)一起，与多种崩解剂(如淀粉，海藻酸和/或复杂的硅酸盐)一同使用。此外，润滑剂(如硬脂酸镁，十二烷基硫酸钠，滑石)通常对于压片是有用的。相似的固态组合物也可以作为填充剂在软和硬明胶胶囊中使用。优选的材料包括乳糖，高分子量聚乙二醇。当希望把水(制)混悬液或酏剂用于口服给药时，所述活性药物试剂可与多种甜味剂或调味剂，色素或染料一同使用，如果需要还可以加入乳化剂或悬浮剂，稀释剂如水，乙醇，丙二醇，甘油和/或他们的组合。
为了胃肠道外给药，可将本发明化合物溶解到芝麻油，花生油，水性丙二醇，或无菌水溶液中。必要时应该将这些水性溶剂进行合适的缓冲，液体稀释剂首先用足够的盐或葡萄糖赋予渗透压。这些特殊的液体溶剂特别适合于静脉内，肌肉内，皮下和腹膜内给药。。所用的这些无菌的水性介质都可以通过本领域技术人员已知的标准技术获得。
鼻内给药或吸入给药时，可以很方便通过病人挤压或打气喷雾器以溶液或悬液的形式实现本发明化合物的给药，或通过发射药(如二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷，二氯四氟乙烷，二氧化碳或其他合适的气体)提供推进力从一个加压容器或喷雾器喷出以气溶胶的形式实现本发明化合物的给药。使用加压气溶胶时，可以通过阀门传送一定定量的药剂来控制给药剂量。加压容器或喷雾器可含有本发明化合物的溶液或悬浮液。吸入器或吹入器使用的胶囊或药筒(由，如明胶成的)可含有本发明的化合物粉末和合适基质的粉末，如乳糖或淀粉的粉末混合物。
此处提供的药物组合物也可与其他对疾病(如，神经紊乱，心血管病，肿瘤，艾滋病，抑郁症和/或I型和II型糖尿病)有效的药理活性剂联合使用。这些附加的药剂可以是，如，抗病毒剂，抗生素，抗抑郁剂，抗肿瘤剂，免疫抑制剂，抗真菌药以及他们的联合。
此处所述药物配方可可以是单独或与其他药剂一起，制成单剂型或分次剂型。对于本领域技术人员而言，使用一定量的活性成分制备多种药物配方的方法是已知的，或与公开的内容相似。准备药物配方的方法可参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，MackPublishing Company，Easton，Pa.，19th Edition(1995)。
支架
在一个实施例中，发明包括将NELL肽结合到载体中或基质中的方法以及形成基材的方法。。
在一个实施例中，用于诱导骨形成的组合物可包括有效量的诱导骨形成的第一药剂，选自但不限于NELL肽，如：NELL1肽，NELL2肽，改变NELL1肽表达的药剂，改变NELL1肽活性的药剂，改变NELL2肽表达的药剂，改变NELL2肽活性的药剂，和任选的载体。
组合物可包含第二药剂，包括，但不限于，TGF-β，BMP2，BMP4，BMP7，bFGF，FGF，IGF(胰岛素样生长因子)，VEGF，胶原质，骨，骨基质，腱基质，韧带基质，骨原性细胞和/或成骨细胞。
在一个实施例中，载体为可生物降解的，如，可通过酶或水解机制降解的。载体的例子包括但不限于合成的可吸收的聚合物例如，但不限于聚(α-羟酸)如聚(L-丙交酯)(PLLA)，聚(D，L-丙交酯)(PDLLA)，聚(乙醇酸交酯(PGA)，聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)，聚(己内酯)，聚(碳酸亚丙酯)，聚(对二氧杂环己酮)(poly(p-dioxanone))，聚(己内酯-共-乙交酯)，聚(乙交酯-碳酸亚丙酯)，聚(D，L-丙交酯-共-碳酸亚丙酯)，聚芳酯，聚β-羟基丁酸酯(PHB)，聚酐，聚(酐-共-酰亚胺)，丙稀共-延胡索酸酯，聚内酯，聚酯，聚碳酸酯，聚阴离子聚合物，聚酐，聚酯-酰胺，聚(氨基酸)，同多肽，聚磷腈，聚glaxanone，多糖，聚(原酸酯)，羟乙酸乳酸聚酯(polyglactin)，羟乙酸乳酸聚酯酸(polyglactic acid)，聚糖醛酸，聚丙烯酸，，聚烷酸酯；他们的共聚物和混合物，衍生物，和修饰物。例子可见美国专利4,563,489，和PCT国际申请WO/03024316，此处该2篇文献联合作为参考文献。其他载体的例子包括纤维类的聚合物，，例如，但不限于，烷基纤维素，羟烷基纤维素，纤维素甲醚，乙基纤维素，羟乙基纤维素，羟丙纤维素，羟丙基-甲基纤维素，羧甲基纤维素和他们的阳离子盐。其他载体的例子包括合成的和天然的生物陶瓷例如，但不限于，碳酸钙，磷酸钙，磷石灰，生物活性的玻璃材料以及珊瑚衍生的碳灰石。参见美国专利申请2002187104，PCT国际申请WO/9731661和PCT国际申请WO/0071083，这些文献以引用的方式并入本申请中。
在一个实施例中，载体可进一步用组合物涂敷，这些组合物包括生物玻璃和/或由固态成溶胶-凝胶技术或浸没技术衍生而来的磷灰石例如，但不限于，含浓度从大约1.5到7倍于天然血清浓度并且通过多种方法调整成为pH大约在2.8-7.8，温度在大约15-65oC的钙和磷酸盐溶液的模拟体液，参见美国专利6,426,114和6,013,591，PCT国际申请WO/9117965，以引用的方式并入本申请中。
其他载体的例子包括胶原质(如，胶质素(Collastat)，Helistat胶原海绵)，透明质烷，纤维蛋白，脱乙酰壳多糖，藻酸盐和ming2胶或他们的混合物。参见PCT国际申请WO/9505846，WO/02085422，其内容以引用的方式并入本申请中。
在一个实施例中，载体可包括结合肝素的药剂，包括，但不限于，肝素样聚合物(如硫酸右旋糖酐，磷酸软骨素，硫酸肝素，墨角藻多糖，藻酸盐，或他们的衍生物)和通过氨基酸修饰以提高肝素亲和力的肽片段，参见Journal of Biological Chemistry(2003)，278(44)，p.43229-43235，其内容以引用方式并入本申请中。
在一个实施例中，基质可以是液体，固态或凝胶的形式。
在一个实施例中，基质可包括一可流动凝胶的载体。为了可以注射，可对凝胶进行选择，如通过注射器注射到需要骨形成的部位。凝胶可以是化学的凝胶，此化学凝胶由基本的键合形成，可通过pH，离子基团和/或溶剂浓度来控制该凝胶。凝胶也可以是由次级键合形成的物理凝胶，此凝胶可以通过温度和粘度来控制。凝胶的例子包括，但不限于，普流罗尼类(pluronics)，明胶，透明质烷，胶原质，聚丙交酯-聚乙二醇溶液和缀合物，脱乙酰壳多糖，脱乙酰壳多糖-b-磷酸甘油(BST-凝胶)，藻酸盐，琼脂糖，羟丙纤维素，甲基纤维素，聚氧化乙烯，聚丙交酯/乙交酯在N-甲基-2-吡咯(烷)酮中。参见Anatomical Record(2001)，263(4)，342-349，其内容以引用的方式并入本申请中。
在一个实施例中，载体可以是可光聚合的，如，通过波长至少大约250nm的电磁辐射。可光聚合的聚合物包括聚乙烯(PEG)丙烯酸酯衍生物，PEG甲基丙烯酸衍生物，延胡索酸丙二醇酯-共-乙二醇，聚乙烯醇衍生物，PEG-共-聚(-羟基酸)二丙烯酸酯大单体，和修饰的多糖，如透明质酸衍生物和葡萄糖甲基丙烯酸酯，参见美国专利5,410,016，以引用的方式并入本申请。
在一个实施例中，基质可包含一温度敏感性载体。例子包含由以下材料制成的载体：N-异丙基丙烯酰胺(NiPAM)，用降低的低临界溶液温度修饰的NiPAM，和用甲基丙烯酸乙酯和N-丙烯酰琥珀酰亚胺粘合的增强的肽(如，NELL1)，或甲基丙烯酸烷基酯，如甲基丙烯酸丁酯，甲基丙烯酸己酯和甲基丙烯酸十二烷酯(PCT国际申请WO/2001070288；美国专利5,124,151，以引用方式并入本申请中)。
在一个实施例中，载体可有一个表面，该表面由以下物质修饰和/或固定：细胞黏附分子，粘合肽和粘合肽类似物，这些物质可通过受体介导的机制促进细胞-基质粘连，和或分子的一部分，该部分可通过非受体介导机制促进粘连，如，但不限于，聚阳离子的聚氨基酸-肽(如，聚赖氨酸)，聚阴离子的聚氨基酸肽，Mefp类黏附分子和其他DOPA-富集的肽(如，聚赖氨酸-DOPA)，多糖，和蛋白聚糖。参见，如PCT国际申请WO/2004005421；WO/2003008376；WO/9734016，以引用方式并入本申请中。
在一个实施例中，载体可包含由鳌合剂组成的载体，例如，但不限于，胶原质，明胶，透明质酸，海藻酸，聚(乙二醇)，烷基纤维素(包括羟基烷基纤维素)，包括甲基纤维素，乙基纤维素，羟基乙基纤维素，羟基丙基纤维素，羟基丙基-甲基纤维素和羧甲基纤维素，血液，纤维蛋白，聚氧乙烯氧化物，硫酸钙半水合物，碳灰石，羧基乙烯基聚合物，以及聚(乙烯醇)，参见，美国专利6,620,406，以引用方式并入本申请。
在一个实施例中，载体可包含表面活性剂来促进NELL1或NELL2的稳定性和/或在载体材料中的分布例如，但不限于，聚氧酯(如，聚山梨酸酯80，聚山梨酸酯20或泊洛沙姆F-68)。
在一个实施例中，载体可包含缓冲剂，例如，但不限于，甘氨酸，谷氨酸盐酸盐，氯化钠，胍，肝素，谷氨酸盐酸盐，乙酸，琥珀酸，聚山梨酸酯，硫酸葡聚糖，蔗糖，和氨基酸。参见，美国专利5,385,887，以引用方式并入本申请。在一个实施例中，载体可包含材料的组合，如，上述材料的组合。
作为例子，载体可以是PLGA/胶原质载体膜。该膜可以浸入一种药剂的溶液中，该药剂包括，NELL1肽，NELL2肽，或他们的混合物。
在一个实施例中，用于人体的植入片可包含一种基质，该基质包含上述的一种或多种足够量的可诱导植入片最近的骨形成的药剂，比如包含NELL1肽，NELL2肽，或他们的混合物。
在一个实施例中，用于人体的植入片可包含具有一表面的基质，该表面包含足够量的可诱导植入片最近的骨形成的一种药剂，例如NELL1肽，NELL2肽，或他们的混合物。
在一个实施例中，用于人体的植入片可包含具有一表面的基质，该表面包含足够量的诱导骨形成的骨原细胞，和例如NELL1或NELL2。在一个实施例中，植入片可种植细胞，这些细胞包括，但不限于，自体细胞，骨原性细胞或成骨细胞，表达NELL肽(如NELL1肽，NELL2肽或他们的混合或其他骨原性分子)的细胞。
植入片可包含一种基质，该基质被制成网，栓，螺丝，板，或假关节形状。作为例子，一种基质可以是牙齿形或矫正植入片形，而且可以含有药剂例如NELL1肽，NELL2肽或他们的混合物用来提高植入片最近的骨整合。植入片可包含一种基质，该基质是可再吸收的，例如一种含有胶原质的基质。
在一个实施例中，本发明的组合物包含在一个时间缓释片剂中。
一种试剂，例如NELL肽(如，NELL1肽，NELL2肽或他们的混合物)可于药学可接受的载体结合，形成药物组合物。可接受的载体可包含生理学可接受的化合物，其具有稳定化合物或增加或降低药剂的吸收的作用。生理学可接受化合物可包括，例如，糖类，(如葡萄糖，蔗糖，或葡聚糖，)抗氧化剂(如，抗坏血酸或谷胱甘肽)，鳌合剂，低分子量蛋白质，降低抗有丝分裂剂清除或水解的组合物，或赋形剂或其他稳定剂和/或缓冲剂。
其他生理学上可接受的化合物包括保湿剂，乳化剂，分散剂或防腐剂，防腐剂对于防止微生物的生长和活动有特效。各种各样的防腐剂是已知的，其包括，例如苯酚和抗坏血酸。本领域技术人员能够理解，载体(包括生理学上可接受的化合物)的选择依赖于如，给药途径
根据给药方法，组合物可以多种单位剂型给药。例如，合适的单位剂型可包括粉末剂，片剂，丸剂，胶囊。
本发明组合物可包含一种药剂溶的液例如，一种可溶解于药理学上可接受的载体中的NELL肽(如，NELL1肽，NELL2肽，或他们的混合物)，该载体，例如，用于水溶性肽的水性载体。可使用各种各样的载体，例如，缓冲盐水等等。这些溶液是无菌的通常不会引起意外的麻烦。这些组合物可以通过传统的，熟知的方法灭菌。组合物可包含药学上可接受的辅助物质用以接近需要的生理学条件，如调节pH调节剂和缓冲剂，毒性调整剂等等，例如，醋酸钠，氯化钠，氯化钾，氯化钙，乳酸钠等等。
这些配方中药剂如NELL肽(如NELL1肽，NELL2肽或其混合物)的浓度可大范围的改变，主要根据与具体选定的给药方式和病人需要选择相应的液体的体积，粘度，体重等等。
在一些实施例中，支架可包括其他载体的例子，这些载体包含合成的和天然的生物陶瓷例如，但不限于，碳酸钙，磷酸钙，磷灰石，生物活性的玻璃材料，和珊瑚衍生的磷灰石。参见，美国专利申请2002187104；PCT国际申请WO/9731661；，和PCT国际申请WO/0071083，在此以引用方式并入本申请中。另外的生物陶瓷载体的例子包括自体的，同基因的，和异基因的移植骨片，这些移植骨片可以是完整的或被去蛋白化的，或去矿物质的。其他载体的例子包括合成的和天然的生物陶瓷和聚合物以及他们的复合材料，，当局部微环境中钙和磷酸盐的浓度分别在，钙0.01-10mM，磷酸盐0.01-3mM时，这些材料可使成骨细胞或他们的前体细胞的骨桥基因表达量增加至少1.5倍；当局部微环境中磷酸盐和钙的浓度分别在，磷酸盐0.01-10mM，钙0.01-3mM时，这些材料可使成骨细胞或他们的前体细胞的骨桥基因表达量增加至少1.5倍。
在一个实施例中，载体可进一步地用组合物涂敷，这些组合物包括生物玻璃和/或由溶胶-凝胶技术，或浸入技术获得的磷灰石，例如，但不限于，根据载体的材料，用0.1-10倍与自然血清浓度的钙和磷酸盐制得的，再通过多种方法调整其pH约2.8-9.8，温度约15-65oC的模拟体液。参见，美国专利6,426,114和6,013,591；和国际申请WO/9117965，以引用方式并入本申请。其他涂层材料的例子包括合成和天然的生物陶瓷和聚合物以及他们的复合材料，当局部微环境中钙和磷酸盐的浓度分别在，钙0.01-10mM，磷酸盐0.01-3mM时，这些材料可使成骨细胞或他们的前体细胞的骨桥基因表达量增加至少1.5倍；当局部微环境中磷酸盐和钙的浓度分别在，磷酸盐0.01-10mM，钙0.01-3mM时，这些材料可使成骨细胞或他们的前体细胞的骨桥基因表达量增加至少1.5倍。
药物组合物的使用
根据本发明的实施例，为了治疗或预防骨病或与骨相关的病况，可对哺乳动物使用所描述的多个实施例中的药物组合物。此处所用的术语“哺乳动物”包含所有哺乳动物个体包括人类和动物。
在一个实施例中，药物组合物可被给予哺乳动物，用于治疗，预防，或改善哺乳动物的期望骨生成的骨性病变。
在另一实施例中，此处提供的药物组合物可被给予哺乳动物，用于治疗，预防或改善，哺乳动物骨生长过度或意外骨生长的骨性病变。在进一步的实施例中，此处提供的药物组合物可被给予哺乳动物，用于治疗，预防或改善哺乳动物的一种骨性病变。
上述的药物组合物可用于治疗，预防，和/或改善各种骨性病变。
具体实施例
本发明实施方式将由下述本发明的实施例说明。所有的参数和数据并不会不适当地限制本发明实施方式的范围。
实施例1.通过颅骨损伤模型来研究骨形成
一般程序(全身用药)
在一个实施例中，骨不连接模型中缺损的临界大小可用于确定NELL1在颅骨修复中的合适浓度。颅骨缺损已被用做在无负荷情况下检测骨再生的模型。(Hollinger，J.O.and J.C.Kleinschmidt，JCraniofac Surg，1990.1(1)：p.60-8)。示例性的程序叙述如下。
标准化为了使骨修复特征标准化，5个月大的骨骼成熟的雄性SD大鼠而不是发育中的动物(骨骼未成熟的哺乳动物)被用于存活外科手术(Allen，M.R.and S.A.Bloomfield，J Appl Physiol，2003.94(2)：p.642-50)。麻醉后，剃去成年大鼠头皮，准备3x的乙醇和聚烯吡酮碘，然后用无菌布单包裹。切开整个头皮，暴露两侧的颅骨。用环钻钻孔的同时不断的浇注无菌盐水以防止骨的边缘被过度加热。每侧的颅骨都全部切除，同时注意不要损伤下面的硬脑膜[即，每个大鼠两侧顶骨缺损；每个缺损的直径＝5mm(临界尺寸)].，表2提供了估计的两侧愈合率，未处理的5mm缺损。
Figure A20068001270700431
制备好后，用盐水冲洗每处缺损，清除骨碎片，然后植入对照组的与无菌盐溶液混合的陶瓷载体或者与不同剂量NELL1混合的陶瓷载体来测定NELL1的最佳处理浓度。根据缺损的面积来标准化NELL1的浓度(即NELL1蛋白的量(ng)/mm2)(表2，I组)。在I组(N＝35只大鼠，总数)中每个干预小组使用5只大鼠(N＝10个缺损)。此外，在5mm缺损模型中不同浓度的BMP2和BMP7以相同的方式使用(表2，II组)(N＝45只大鼠)。检测NELL1的浓度是基于之前的研究。检测BMP的浓度基于已发表的关于8mm直径的大鼠颅骨缺损的研究，该研究中BMP的浓度范围从～20ng/mm2到～600ng/mm2(表3)。
Figure A20068001270700441
I组和II组(表2)的每个干预小组的5只大鼠，用已确定的程序微CT连续8周扫描，进行现场连续的每周成像(Cowan，C.M.，et al.，Adipose-derived adult stromal cells heal critical-size mousecalvarial defects.Nat Biotechnol，2004.22(5)：p.560-7)。现场微型断层CT扫描提供了不同的干预小组中的骨密度，骨再生面积和体积的精确实时的定量数据以及骨形态学的定性数据。在第8周，动物被处死，用于高分辩率的尸体微型断层扫描分析和组织学研究。尸体切片经苏木精和曙红(H&E)染色，用以对骨形成进行定量的组织学评定。。如果观察到软骨，进一步用阿辛兰确定该发现。在第8周，最佳的NELL1，BMP2，和BMP7的浓度将会被定义为诱导最大的CT扫描产生的组织学确认的骨的面积。如果在某一浓度以外观察到一个骨形成的平台，那么达到这个平台的最低浓度将认为是“最佳的”。
器材来自于μCT40(Scanco，PA)的使用最近的9-20um分辨率技术的高分辩率的微型CT扫描仪，如早先已发表的(Zhang，X.，et al.，J Clin Invest，2002.110(6)：p.861-70)。在50kVp和和160μA收集微型-CT扫描数据，用随同微型CT扫描仪的由Scanco供应的锥-束分析系统对其进行重建。取得并分析2D和3D数据以确保生物行为的最佳特性。数据的可视化和重建可用MetaMorph
Figure A20068001270700451
成像系统(对2D)(Universal Imaging Corporation，Downingtown，PA)，Image Pro Plus 5.0版(Media Cybernetics，Carlsbad，CA)(对2D)，和AmiraTM(对3D)(Visual Concepts GmbH，Berlin，Germany)进行。
许多已知的骨特异性的三维结构参数的CT形态测定分析包括：1)骨体积/组织体积----在感兴趣的体积(VOI)中的骨象素(voxel)的数量除以VOI中组织像素的总数量；2)矿化密度---骨质量的射线不透性除以骨质量的体积；3)横隔片厚度，横隔片数量以及横隔片的分离(来源于骨体积和表面积)(Borah，B.D.，T.E.et al.，JBMR，2000.15(9)：p.1786-1797)。
支架的制造MTF提供的陶瓷载体以Synthacer的名字推向市场。可以得到块状的圆筒状(95％羟磷灰石；200-800微米孔径，65-80％多孔)的和疏松的粉末状的Synthacer。实验中将使用块状的Synthacer盘来拟合相应的缺损，由MTF提供。关于磷灰石载体最初的研究证明了，相对于不加胶原的对照组，涂敷了胶原/生长因子的磷灰石产生更快的骨诱导反应时间。因此，所有生长因子都将被结合在I型胶原溶液中。该溶液可以通过在0℃将生长因子加入pH调整过的胶原溶液中制得。将预先确定量的胶原/生长因子溶液加到每一个圆盘，按配方制造的支架放到20℃环境中，形成凝胶，然后空气中干燥形成一薄层胶原/生长因子。必要时，其他生物陶瓷(透明质烷，纤维蛋白，或藻酸盐)可用以代替胶原成分。
用优化的NELL1，BMP2和BMP7浓度的颅面骨形成的分析以上述临界缺损(骨不连接)模型进行动物的外科手术。将优化的NELL1，BMP2，和BMP7浓度施加在陶瓷载体上(表4)。对照组使用陶瓷载体和无菌盐溶液。为了暂时性描述组织学上新形成的骨，对动物进行体内的连续荧光标记，分别在第0天(手术后立即操作)腹腔注射钙黄绿素蓝(30mg/kg体重)，在第14天腹腔注射二甲酚橙黄(90mg/kg体重)，在第28天腹腔注射钙黄绿素(10mg/kg体重)。钙黄绿素蓝(发蓝光)，二甲酚橙黄(发橙光)和钙黄绿素(发绿光)均为对放射性标记的钙具有相同的分布方式的鳌合的荧光染料，放射性标记的钙沉积在活性骨的位点内或软骨基质矿化作用的位点中。(参见Lee，T.C.，et al.，J Anat，2003.203(2)：p.161-72)。不同的荧光生色带之间的距离的量度除以给予的时间间隔，使得能够计算矿物质沉积率(MAR)，就如Iwamoto等人所叙述的(Iwamoto，J.，J.K.Yeh，and J.F.Aloia，J Bone Miner Res，2000.15(9)：p.1842-9)。
此外，通过微型-CT和微型-PET使用确定的程序连续数周对每一个动物进行现场成像，直至其被处死(Cowan，C.M.et al.，NatBiotechnol，2004.22(5)：p.560-7；Berger，F.，et al.，Eur J Nucl MedMol Imaging，2002.29(9)：p.1225-36)。.NELL1，BMP2，或BMP7的加入如何在时空上影响骨代谢活性的定量分析，可通过微型-PET很方便的完成。小组中的动物在1，2，4和8周处死。取自每个动物的同样处理的成对的颅盖骨样本进行不同的收取和加工。取一个带有大边缘的正常组织的样本，用4％多聚甲醛固定，用做组织学分析和后继的II期细胞分析。取其他的带小边缘(＜2mm)的正常组织的样本，立即在液氮中冷冻，储存在-70oC用于II期更详细的分子方面的分析。
Figure A20068001270700461
使固定的样本首先使用高分辨率的微型-CT和上述图像软件进行形态学分析。然后，该固定的样本被分割两段。该样本的一半被去矿物质化，脱水，包埋在石蜡中，切片(5μm厚度)，然后H&E染色；另一半经加工但未脱钙处理，植入甲基丙烯酸甲酯中。用四个未染色的，未脱钙的，不连续的切片(10μm厚)通过荧光显微技术观察体内标记情况。额外的切片用Masson-Goldner′s三色染色，用于组织测量分析，例如，Hollinger等所述的骨小梁的体积和表面浓度(Hollinger，J.O.，D.Buck，and J.P.Schmitz，Clin Plast Surg，21(3)：p.463-75)(1994)。
微型-PET提供了详细的，关于是在钻口边缘或是在缺损中心代谢活性最强的信息，以及加入的最佳化的NELL1或BMP如何影响该活性。在钻孔边缘和缺损中心NELL1和BMP都增加了骨代谢的活性。此外，不同的鳌合荧光染料的使用使得能将计算的MAR与在微-CT观察到的骨形成，和在微-PET获得的代谢活性相关联，也更准确的确定了新沉积的骨的时空顺序(例如，中心对边缘骨沉积的比率，硬脑膜对骨膜骨沉积比率)。
通过NELL1促进颅盖骨的再生
建立颅盖的缺损临界尺寸的颅盖骨缺损代表了非骨愈合模型(定义为通过3个月的三维体积测试确定为＜10％愈合)，而次临界尺寸颅盖骨缺损显示了延迟的骨愈合模型(定义为通过3个月的三维体积测试确定为≤15％愈合)。表5显示了在大鼠模型中，未处理的临界尺寸(5mm直径)和次临界尺寸(3mm直径)颅盖骨缺损的双侧估计愈合率。其他文献报道了少于10％的5mm缺损的愈合(Bosch，C.，et al.，J Craniofac Surg，1998.9(4)：p.310-6)。尽管一些大鼠临界尺寸缺损模型包含超出矢状缝缺损中心8mm直径(Kenley，R.，et al.，J Biomed Mater Res，1994.28(10)：p.1139-47；Schmoekel，H.，et al.，J Orthop Res，2004.22(2)：p.376-81)，但选择双侧模型(其可适应达5mm的双重缺损)是由于下列原因：1)特别避免矢状缝中纤维状的组织；2)使中央矢状窦的损伤减小到最低限度；3)能够进行成对的实验设计((Bosch，C.，et al.，J CraniofacSurg，1998.9(4)：p.310-6)。
延迟闭合模型(即3mm直径的次临界尺寸缺损)使用了骨骼未成熟的动物(小于3个月)。对于大鼠而言，5个月左右骨骼成熟(Allen，M.R.and S.A.Bloomfield，J Appl Physiol，2003.94(2)：p.642-50)。聚丙交酯-共-乙交酯(PLGA)/胶原载体膜用于结合生物活性分子，是因为PLGA：1)已经证明的生物相容性，并用于目前FDA认可的装置中；2)相对的惰性(非骨诱导性)；3)操作容易并容易得到，用来控制生物活性分子释放的动力学(Dhiman，N.，et al.，Indian J Exp Biol，2000.38(8)：p.746-52；Panyam，J.and V.Labhasetwar，Adv Drug Deliv Rev，2003.55(3)：p.329-47)；and 4)degradation profile(Bessho，K.，et al.，J Biomed Mater Res，2002.61：p.61-65)。
PLGA支架是根据前述方法制备的(Cowan，C.M.，et al.，NatBiotechnol，2004.22(5)：p.560-7)。制备好支架后，用I型胶原(Vitrogen；Cohesion，Palo Alto，CA)涂敷，I型胶原已预先混合适量的NELL1，BMP2或无菌眼溶液对照。在初步研究中，每3mm直径的PLGA支架用重量200ng的NELL1和BMP2涂敷支架，装置在钻孔缺损处。对照组只单独使用了PLGA膜。动物分别在0周，1周，2周，3周，和4周处死，用于颅盖骨的微-CT和组织学分析。
在这些研究中，初始剂量200ng是根据经验从体外NELL1细胞培养数据和体内BMP2的临界缺损数据得来的(见前面表3)。体外使用5-50ng/ml浓度的NELL1同时导致凋亡的增加和骨小结形成的增加，而浓度超过100ng/ml时凋亡是增加的，但骨小结的形成却降低了，浓度超过200ng/ml时伴随着调亡的增加的是最小量的骨小结形成(Zhang，X.，et al.，J Bone Miner Res，2003.18(12)：p.2126-34)。因此，这一结果表明过度剂量的NELL1会降低骨形成。在已发表的关于BMP2的研究中，相对较低的总量1μg的剂量用于3周的8mm直径缺损可达到46％-74％闭合(Schmoekel，H.，etal.，J Orthop Res，2004.22(2)：p.376-81)。在归一化为总缺损面积时，1μg剂量相当于20ng/mm2.(标准化为缺损面积而不是体积更适用于此实施例与已公布研究的对比，在公布的研究中通常很难得到用以体积计算的颅盖骨的厚度)。此处使用的200ng总量，除以3mm直径缺损的总面积(即7mm2＝总面积)，相当于28ng/mm2。
由NELL1诱导的颅盖骨再生在用总剂量200ng(28ng/mm2)的NELL1和BMP2添加到PLGA膜的研究中，与没有添加物质的PLGA对照相比，NELL1和BMP2处理的样本表现出显著的骨形成(每一个时间点，每一个处理亚组的缺损为4-6个)。体积分析结果显示，在4周的研究期中，相对于对照组，NELL2和BMP2显著的增加了骨形成(见图4)。如图4所示，在第1周，NELL1比BMP2更显著的诱导了骨形成。
总之，约在3个月时骨体积再生不超过15％。在2周时，据表面分析，使用NELL1和BMP2的实验显示约70-80％的缺损闭合，据体积分析有35-45％的体积再生(见图4)。组织学切片证实了骨的存在。在NELL1和BMP2之间，骨样的沉积和小梁分叉的图象没有显著的不同。图5显示，在4周时，通过表面分析，NELL1和BMP2处理的样本接近于90-100％的缺损闭合，这相当于通过三维体积分析的45-50％体积再生。组织学切片证实了骨的存在(见图6A-6C)。此外，在诱导骨形成上，NELL1和BMP2之间没有明显的组织学差别(见图6A-6C)。
需注意的是，表面分析的标准差显著高于体积分析的标准差。这强调了2维为基础的线性测量不必定能反映三维生物体的全部组织事件。确实，从组织学样本(见图6A-6C)可以看到，虽然对于NELL1和BMP2处理过的颅盖骨的二维基础的“缺损闭合”已经发生，缺陷中再生骨的横断层面的厚度不如未受损的骨那样厚。因此，二维基础测量的缺损“闭合”并不必然地相当于三维测量的缺损“重建”。Gosain等人已指出了在临界评估，特别是在次临界尺寸缺损评估中，横断层面的或“三维”基础的数据采集以及参数分析的重要性Gosain，A.K.，et al.，Plast Reconstr Surg，2000.106(2)：p.360-71；discussion 372).。
这些研究显示，重组NELL1具有体内骨诱导性，并且在4周时NELL1与BMP2诱导的骨之间没有显著的差异。
实施例2.表达重组人NELL1(rhNELL1)的哺乳动物系统
为了研究NELL1/NELL2蛋白/肽的功能，成功地制备和纯化
Figure A20068001270700491
了该蛋白。本发明中，用非病毒DNA传递来表达rhNELL1的哺乳动物系统可包括，但不限于，表6所列出的这些常用的稳定表达系统。详细的方案包括：载体的设计，宿主细胞株的培养，稳定细胞株的转染和选择，以及在HEK293和CHO系统中rhNELL1的纯化，这将在以下叙述以作为参考。
表6.表达rhNELL1的哺乳动物系统
Figure A20068001270700492
DHFR：二氢叶酸(diydrofolate)还原酶；MTX：氨甲喋呤GS：谷氨酰胺合成酶MSX：甲硫氨酸砜亚胺.
A.CHO系统
载体设计：将cDNA片段连接到表达载体p3XFlag-CMV(Sigma)中。产生的表达构成物pCMV-rhNell-3Xflag包括一个早期前胰蛋白酶引导序列，成年人NELL1编码区域的cDNA片段和C末端的3X标记序列。
宿主细胞株：CHO-K1是一个黏附细胞株，适合无血清培养基的悬浮培养。通过脂质体(Invitrogen)或磷酸钙转染pCMV-rhNELL1-3Xflag。通过在细胞培养基中加入G418(400-600ug/ml)2个星期，来选择稳定的细胞株。通过限制性稀释法进一步筛选稳定的转化细胞以得到具有rhNELL1高表达性的单克隆。选择后的稳定细胞株可用于实验室或工业规模的生产rhNELL1的生物反应器。
纯化步骤：在rhNELL1的自然条件下，通过抗标记抗体M2(Sigma)亲和层析柱纯化含有自然状态的rhNELL1肽的培养基或细胞溶解物，再用3X标记肽洗脱。
B.HEK293系统
载体设计将cDNA片段连接到表达载体pSecTagA(Invitrogen)中。合成表达结构pSec-hNELL1-Tag包括一个鼠的免疫球蛋白κ链引导序列，成年人NELL1编码区域的cDNA片段和C末端的Myc和His双标记序列。
宿主细胞：人胚肾细胞株，HEK-293(适合无血清培养基，并在悬浮状态生长)用NELL1肽表达载体pSec-hNELL1-Tag转染。细胞或在收集用于纯化的条件培养基前培养2天作为瞬时转染，或用Zeocin处理(250ug/ml)用于选择稳定表达细胞株。通过限制性稀释法筛选稳定的转化细胞以便得到rhNELL1高生产性的单克隆。选择后的稳定细胞株可用于实验室或工业规模的生产rhNELL1的生物反应器。
纯化步骤：通过Ni2+亲和层析柱纯化含有自然状态rhNELL1肽的培养基，再用1M的咪唑洗脱。40oC，至少1000体积PBS(pH7.4)充分透析20小时后，检测rhNELL1的完整性，纯度和生物活性。
此外，通过用新的序列例如大鼠血清白蛋白，CD33，tPA和人白介素-2引导序列替换现有的引导序列，或将基因放大目标序列例如DHFR或GS到骨架序列中，对亲代载体进行修饰，从而得到一个新的表达载体和系统。本发明中，天然的人NELL1信号肽不能有效地引导蛋白质的分泌，甚至有时外源性的引导序列也不能很好地发挥作用。因此，就需要通过含有蛋白内His标记和蛋白水解切割位点“MPHHHHHHGGGDDDDKDPM”的间隔序列，构件在框架融合中带有小的天然分泌蛋白(如人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF))的表达载体，，。用于纯化NELL1的表位标记可以是下列其中之一：6X组氨酸(6XHistidines)，3XFlag，Myc，GST(谷胱甘肽S-转移酶)，EGFP or CTHS(SOMO的C末端一半，SUMO代表小的泛素修饰蛋白)等等，但是也可以是如表6中列出的质粒pSecTag，双重的His加Myc。
而且，在某些情况下，可以构建使用IRES的二顺反子或多顺反子载体，用于调节或诱导rhNELL1的表达。为了改进rhNELL1的生产，可以对宿主细胞株进行遗传修饰，以延长增殖持续的时间或延迟凋亡或使其与特殊的要求相容，例如四环素可诱导的体系和Flp-In特异性的位点整合体系。
除了上述稳定表达rhNELL1的系统，大规模的使用数毫克纯化的质粒载体(pREP4)瞬时转染(LST)的方法，可用于转染HEK293H或BHK悬浮细胞，以阳离子聚合物PEI作为备用的选择或补充到稳定系统中。
已说明和描述了本发明的特殊例子，在不脱离本发明的概括方面，本领域技术人员所做的改变和修改是显而易见的。因此，这些改变和修改都落入本申请精神和所附权利要求书的范围之内。
序列表
<110>宋嘉
     丁淦
     苏立奇  科罗达
     胡恩明
<120>治疗或预防骨疾病的药物组合物
<130>39370.28
<140>
<141>
<150>60/653,722
<151>2005-02-16
<160>95
<170>PatentIn Ver.3.3
<210>1
<211>3329
<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>1
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<213>Mus musculus
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<212>DNA
<213>Homo sapiens
<400>88
atggagtctc gggtcttact gagaacattc tgtttgatct tcggtctcgg agcagtttgg 60
gggcttggtg tg                                                     72
<210>89
<211>24
<212>PRT
    <213>Homo sapiens
<400>89
Met Glu Ser Arg Val Leu Leu Arg Thr Phe Cys Leu Ile Phe Gly Leu
  1               5                  10                  15
Gly Ala Val Trp Gly Leu Gly Val
             20
<210>90
<211>72
<212>DNA
<213>Rattus norvegicus
<400>90
atggaatccc gggtattact gagaacgttc tgcgtgatcc tcgggctcga agcggtttgg 60
ggacttggtg tg                                                     72
<210>91
<211>24
<212>PRT
<213>Rattus norvegicus
<400>91
Met Glu Ser Arg Val Leu Leu Arg Thr Phe Cys Val Ile Leu Gly Leu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Trp Gly Leu Gly Val
             20
<210>92
<211>72
<212>DNA
<213>Mus musculus
<400>92
atggaatccc gggtgttact gagaacgttc tgcgtgatcc tcggccttgg agcggtttgg 60
gggcttggtg tg                                                     72
<210>93
<211>24
<212>PRT
<213>Mus musculus
<400>93
Met Glu Ser Arg Val Leu Leu Arg Thr Phe Cys Val Ile Leu Gly Leu
  1               5                  10                  15
Gly Ala Val Trp Gly Leu Gly Val
             20
<210>94
<211>72
<212>DNA
<213>Canis familiaris
<400>94
atggagcctc gggtcttgct gagaaccttc tgtttgatct tcggtctcgg agcagtctgg 60
gggctcggtg tg                                                     72
<210>95
<211>24
<212>PRT
<213>Canis familiaris
<400>95
Met Glu Pro Arg Val Leu Leu Arg Thr Phe Cys Leu Ile Phe Gly Leu
  1               5                  10                  15
Gly Ala Val Trp Gly Leu Gly Val
             20

Claims (75)

1.一种用于治疗，预防，或改善哺乳动物骨相关疾病的药物组合物，包含有效量的NELL肽，或NELL RNA。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述NELL肽的剂量没有实质上超过NELL肽的最佳剂量范围。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述NELL肽选自：NELL1，NELL2，NELL1肽的片段，NELL2肽的片段以及他们的组合。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述与骨相关的疾病选自：颅面骨产生，非颅面鼓产生，长骨产生，牙周骨产生，膜内骨产生，软骨内骨产生，软骨再生，软骨肥大以及他们的组合。
5.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述骨相关疾病选自：骨质疏松症，因微重力导致的骨丢失，废用性萎缩，长期卧床，以及骨代谢为次级效应的涉及多症状的疾病。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述涉及多症状的疾病导致病理性钙化。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述涉及多症状的疾病是导致肾性骨营养不良和/或血管钙化的慢性肾脏疾病。
8.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述骨相关疾病是异位的软组织钙化，胆结石，肾结石，松果体钙化，白内障，涎石，心脏瓣膜或前列腺的结石。
9.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述NELL RNA是mRNA，非编码RNA，微小RNA，dsRNA，或他们的组合。
10.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述NELL RNA通过一种化学药品稳定化或将NELL RNA掺入一种纳米笼或生物材料中稳定化。
11.一种药物组合物，包含有效量的用于治疗，预防，或改善哺乳动物跨越颅骨缝的骨性过度生长的药剂，其特征在于，该药剂选自：NELL肽，NELL肽的抑制剂，NELL肽受体的拮抗剂，和他们的组合。
12.一种用于治疗或预防哺乳动物软骨相关骨病的药物组合物，该药物组合物包含有效量的至少一种对于软骨再生有效的药剂，其特征在于，所述药剂选自：NELL肽，NELL肽的抑制剂，NELL肽受体的拮抗剂，NELL肽的增强剂，NELL RNA和他们的组合。
13.如权利要求12所述的药物组合物，其特征在于，所述NELL肽选自：NELL1，NELL2，NELL1肽的片段，NELL2肽的片段，和他们的组合。
14.如权利要求12所述的药物组合物，其特征在于，所述NELL RNA是mRNA，非编码RNA，微小RNA，dsRNA，或他们的组合。
15.如权利要求12所述的药物组合物，其特征在于，所述NELL RNA通过一种化学药品稳定化或将NELL RNA掺入一种纳米笼或生物材料中稳定化。
16.如权利要求12所述的药物组合物，其特征在于，所述药剂对于关节面重建，颞下颌关节重建，关节炎修复，或椎间盘修复是有效的。
17.一种药物组合物，包含有效量的用于治疗，预防或改善骨相关疾病的NELL肽受体调节剂。
18.如权利要求17所述的药物组合物，其特征在于，所述调节剂选自：NELL肽受体的激动剂或拮抗剂，稳定化或降解NELL肽的分子，稳定化或降解NELL肽受体的分子，初始的受体连接后参与NELL肽和受体的复合物的稳定化和磷酸化作用的分子，NELL肽受体激动剂或拮抗剂的激动剂，NELL肽受体激动剂或拮抗剂的拮抗剂，和他们的组合。
19.如权利要求17所述的药物组合物，其特征在于，所述骨相关疾病选自：骨质疏松症，因微重力导致的骨丢失，废用性萎缩，长期卧床，和涉及以骨代谢为次级效应的多症状的疾病。
20.如权利要求17所述的药物组合物，其特征在于，所述涉及多症状的疾病导致病理性钙化。
21.如权利要求17所述的药物组合物，其特征在于，所述涉及多症状的疾病是导致肾性骨营养不良和/或血管钙化的慢性肾脏疾病。
22.如权利要求17所述的药物组合物，其特征在于，所述骨相关疾病是异位的软组织钙化，胆结石，肾结石，松果体钙化，白内障，涎石，心脏瓣膜或前列腺的结石。
23.一种用于治疗，预防或改善哺乳动物骨相关疾病，的药物组合物，该药物组合物含有有效量的NELL肽衍生物。
24.如权利要求23所述的药物组合物，进一步含有药学上可接受的载体。
25.如权利要求24所述的药物组合物，其特征在于，所述药学上可接受的载体是一种用于某种递送模式的载体，所述递送模式选自：口服给药，外用给药，原位植入，静脉内给药，胃肠外给药，局部给药，动脉内注射，骨折部位注射，和用生物可降解的基质递送。
26.如权利要求23所述的药物组合物，其特征在于，所述骨相关疾病选自与下列组，包括：因微重力导致的骨丢失，废用性萎缩，长期卧床，和引起骨代谢为副反应的多症状的疾病。
27.如权利要求26所述的药物组合物，其特征在于，所述涉及多症状的疾病导致病理性钙化。
28.如权利要求26所述的药物组合物，其特征在于，所述涉及多症状的疾病是导致肾性骨营养不良和/或血管钙化的慢性肾脏疾病。
29.如权利要求23所述的药物组合物，其特征在于，所述骨相关疾病是，异位软组织钙化，胆结石，肾结石，松果体钙化，白内障，涎石，心脏瓣膜或前列腺的结石。
30.如权利要求23所述的药物组合物，其特征在于，所述NELL肽衍生物是物理修饰的NELL1肽或NELL2肽。
31.如权利要求23所述的药物组合物，其特征在于，所述NELL肽衍生物是化学修饰的NELL1肽或NELL2肽。
32.如权利要求31所述的药物组合物，其特征在于，所述NELL肽衍生物选自于：聚乙二醇修饰的NELL1肽，聚乙二醇修饰的NELL2肽，至少含有一个短烃基的NELL1肽，或至少含有一个短烃基的NELL2肽。
33.如权利要求31所述的药物组合物，其特征在于，所述化学修饰的NELL肽是NELL肽类似物或NELL2肽类似物。
34.如权利要求1-33任意一项所述的药物组合物，进一步含有药学上可接受的载体。
35.如权利要求1-33任意一项所述的药物组合物，进一步含有一种第二药剂，其特征在于所述药物组合物对于治疗，预防，或改善与骨相关的疾病是有效的。
36.如权利要求35所述的药物组合物，其特征在于，所述第二药剂选自：BMP蛋白，TGFβ蛋白，FGF蛋白，IGF(胰岛素样生长因子)，VEGF，和他们的组合。
37.如权利要求36所述的药物组合物，其特征在于，所述与骨相关的疾病选自：骨折，脊柱融合，长骨骨折，颅面骨愈合或形成，牙齿或整形整合，牙齿植入整合，或他们的组合。
38.如权利要求35所述的药物组合物，进一步含有一种药学上可接受的载体。
39.如权利要求1-33任意一项所述的药物组合物，为一种适合于以下递送模式的配方，该递送模式选自：口服递送，胃肠外给药，肺部给药，和移植。
40.一种治疗，预防，或改善与骨相关的疾病的方法，包括将根据权利要求1-33任意一项所述的药物组合物给予哺乳动物。
41.一种诱导成骨细胞或骨形成的方法，包括使细胞与含有NELL肽，NELL RNA和任选的一种第二药剂的组合物接触。
42.如权利要求41所述的方法，其特征在于所述细胞是哺乳动物细胞。
43.如权利要求41所述的方法，其特征在于NELL肽选自：NELL1，NELL2，NELL1肽片段，NELL2肽片段，和他们的组合，
其特征在于，所述第二药剂选自：BMP蛋白，GFβ蛋白，FGF蛋白，IGF，VEGF，，和他们的组合
其中，所述细胞是干细胞，骨髓细胞，成纤维细胞，或脂肪衍生细胞。
44.如权利要求41所述的药物组合物，其特征在于，NELL RNA是mRNA，非编码RNA，微小RNA，dsRNA，或他们的组合。
45.如权利要求41所述的药物组合物，其特征在于，所述NELL RNA通过化学药品稳定化或将NELL RNA掺合在纳米笼或生物材料中稳定化。
46.一种诱导骨形成的方法，包括使骨基质与一种含有NELL肽，NELLRNA和任选的第二药剂的组合物接触。
47.如权利要求46所述的方法，其特征在于所述NELL肽选自：NELL1，NELL2，NELL1肽片段，NELL2肽片段，和他们的组合
其特征在于，所述第二药剂选自：BMP蛋白，GFβ蛋白，FGF蛋白，IGF，VEGF，，和他们的组合
其中，所述骨基质是去矿化的骨基质或矿化的骨基质。
48.如权利要求46所述的药物组合物，其特征在于，所述NELL RNA是mRNA，非编码RNA，微小RNA，dsRNA，或他们的组合。
49.如权利要求46所述的药物组合物，其特征在于，所述NELL RNA通过化学药品稳定化或将NELL RNA掺合在纳米笼或生物材料中稳定化。
50.一种鉴别NELL相关的肽受体调节剂的方法，包括：
使NELL肽的受体分子与试验复合物接触，
使NELL肽与受体分子和试验化合物接触，
检测NELL肽与加入了试验化合物的受体分子的结合程度，
对比加入了试验化合物的NELL肽与受体分子的结合程度，和对照组的没有加试验化合物的NELL肽与受体分子的结合程度，和
如果加试验化合物的NELL肽与受体的结合程度与对照组的结合程度不同，则指定该试验化合物为NELL肽受体的调节剂。
51.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述指定步骤进一步包括：
如果加试验化合物的NELL肽与受体的结合程度低于对照组，则指定该调节剂是NELL肽受体的拮抗剂，或
如果加试验化合物的NELL肽与受体的结合程度高于对照组，则指定该调节剂是NELL肽受体的激动剂。
52.一种制备NELL肽的方法，包括在宿主细胞中表达编码NELL基因的核酸构成物。
53.如权利要求52所述的方法，其特征在于，所述核酸构成物进一步含有一个信号肽基因。
54.如权利要求52所述的方法，其特征在于，所述构成物含有一个具有选自SEQ ID NO：1-81的序列的基因。
55.如权利要求54所述的方法，其特征在于，所述构成物含有一个选自SEQ ID NO：82-87的启动基因和/或一个编码选自SEQ ID NO：88-95信号肽的基因。
56.如权利要求54所述的方法，其特征在于，所述核酸构成物进一步含有一个位于NELL肽基因组DNA的非编码基因。
57.如权利要求56所述的方法，其特征在于，所述NELL肽是NELL1肽。
58.如权利要求52所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞是中国仓鼠卵巢细胞。
59.如权利要求54所述的方法，其特征在于，所述构成物进一步含有一个表达利于分泌的肽的基因。
60.一种根据权利要求52-59任意一项制备的重组NELL肽。
61.一种鉴别诱导NELL肽表达的分子的方法，包括：
将NELL1启动基因与试验化合物接触，
检测NELL1启动基因的表达水平，
比较加入试验化合物的NELL1启动基因的表达水平与不加试验化合物的NELL1启动基因的表达水平，和
如果加入试验化合物的NELL1启动基因的表达水平与不加试验化合的NELL1启动基因表达水平不同，则指定该试验化合物为NELL肽表达的调节剂。
62.如权利要求50所述的方法，其特征在于，指定步骤进一步包括：
如果加入了试验化合物的NELL1启动基因表达水平低于不加试验化合物的NELL1启动基因表达水平，则指定该调节剂为NELL肽表达的抑制剂，或
如果加入了试验化合物的NELL1启动基因表达水平高于不加试验化合物的NELL1启动基因表达水平，则指定该调节剂为NELL肽表达的增强剂。
63.一种调节哺乳动物NELL肽表达的方法，包括用根据权利要求61-62任意一项鉴定的调节剂对哺乳动物给药。
64.一种药物组合物，其特征在于含有根据权利要求61-62任何一项所鉴定的调节剂。
65.一种支架，其特征在于含有有效量的NELL肽，或NELL RNA。
66.如权利要求65所述的支架，其特征在于，所述NELL肽的剂量没有实质上超过NELL肽的最佳剂量范围。
67.如权利要求65所述的支架，其特征在于，所述NELL肽选自：NELL1，NELL2，NELL1肽片段，NELL2肽片段，和他们的组合。
68.如权利要求65所述的支架，其特征在于所述与骨相关的疾病选自：颅面骨生成，，非颅面骨生成，长骨生成，牙槽骨生成，膜内骨生成，软骨内骨生成，关节修复，关节肥大和他们的组合。
69.如权利要求65所述的支架，其特征在于所述与骨相关的疾病选自：骨质疏松症，因微重力导致的骨丢失，废用性萎缩，长期卧床，和涉及骨代谢为次级效应的多症状的疾病。
70.如权利要求69所述的支架，其特征在于所述涉及多症状的疾病导致病理性钙化。
71.如权利要求70所述的支架，其特征在于，所述涉及多症状的疾病是导致肾病性骨营养不良和/或血管钙化的慢性肾脏疾病。
72.如权利要求69所述的支架，其特征在于，所述骨相关疾病是异位软组织钙化，胆结石，肾结石，松果体钙化，白内障，涎石，心脏瓣膜或前列腺结石。
73.如权利要求65所述的支架，其特征在于，所述NELL RNA是mRNA，非编码RNA，微小RNA，dsRNA，或他们的组合。
74.如权利要求65所述的支架，其特征在于，所述NELL RNA通过化学药品稳定化或将NELL RNA掺合在纳米笼或生物材料中稳定化。
75.一种治疗，预防，或改善骨相关疾病的方法，包括将根据权利要求1-33任意一项的支架给予哺乳动物。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102579145A (zh) * 2012-02-23 2012-07-18 中国人民解放军第四军医大学 一种牙科种植体及其制备方法
CN102892776A (zh) * 2010-06-30 2013-01-23 因首太克株式会社 新型肽及其用途
CN104363832A (zh) * 2012-04-19 2015-02-18 "Parafarm"有限责任公司 骨质疏松诊断方法,用于评估不同骨骼促进剂的效果的闭合孔隙结构动态测定法
CN106687602A (zh) * 2014-06-13 2017-05-17 维也纳自然资源与生命科学大学 用于诊断和治疗骨折和骨病的组合物及方法
CN110607365A (zh) * 2019-05-22 2019-12-24 昌乐县人民医院 核酸分子在制备诊断骨科疾病的产品中的应用
CN112236440A (zh) * 2018-05-28 2021-01-15 江阴贝瑞森制药有限公司 新的药物用途
CN114836535A (zh) * 2022-06-24 2022-08-02 四川大学 基于LncRNA和miRNA信号调控开发用于检测原发性骨质疏松症的标记物的方法

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7687462B2 (en) * 1999-10-05 2010-03-30 The Regents Of The University Of California Composition for promoting cartilage formation or repair comprising a nell gene product and method of treating cartilage-related conditions using such composition
US7884066B2 (en) * 1999-10-05 2011-02-08 The Regents Of The University Of California NELL-1 enhanced bone mineralization
US7691607B2 (en) * 2004-02-09 2010-04-06 The Regents Of The University Of California Expression system of NELL peptide
WO2010042654A2 (en) 2008-10-07 2010-04-15 The Regents Of The University Of California Recombinant nell protein production
CN101611051A (zh) * 2005-02-16 2009-12-23 加州大学董事会 治疗或预防骨疾病的药物组合物
EP2194782B1 (en) * 2007-09-28 2015-11-04 UT-Battelle, LLC Methods for promoting wound healing and muscle regeneration with the cell signaling protein nell 1
EP2214697A4 (en) * 2007-10-30 2011-05-18 Univ California COMPOSITIONS OF NELL-1
JP2011016723A (ja) * 2007-11-02 2011-01-27 Katayama Kagaku Kogyo Kk 骨及び軟骨形成タンパク質を含有する医薬品及び医療器具
JP5320183B2 (ja) * 2008-06-26 2013-10-23 国立大学法人 岡山大学 顎顔面インプラント治療のための骨質検査方法
KR20110076874A (ko) 2008-08-04 2011-07-06 각코 호징 쇼와 다이가쿠 Ｎｅｌｌ―１에 의한 조직·장기 이소재생 제어기술
EP2411406B1 (en) * 2009-03-25 2017-03-01 The Regents of The University of California Isoform nell-1 peptide
WO2011022071A2 (en) * 2009-08-20 2011-02-24 The Regents Of The University Of California Cardiac compositions
US9352003B1 (en) 2010-05-14 2016-05-31 Musculoskeletal Transplant Foundation Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same
US8614190B2 (en) 2010-06-30 2013-12-24 Industrial Technology Research Institute Thermal responsive composition for treating bone diseases
WO2012024573A2 (en) 2010-08-19 2012-02-23 The Regents Of The University Of California Compositions comrpising perivascular stem cells and nell-1 protein
US20150037436A1 (en) 2013-07-30 2015-02-05 Musculoskeletal Transplant Foundation Acellular soft tissue-derived matrices and methods for preparing same
CA2986702C (en) 2015-05-21 2023-04-04 David Wang Modified demineralized cortical bone fibers
US10912864B2 (en) 2015-07-24 2021-02-09 Musculoskeletal Transplant Foundation Acellular soft tissue-derived matrices and methods for preparing same
US10973953B1 (en) 2016-08-18 2021-04-13 Musculoskeletal Transplant Foundation Methods and compositions for preparing transplant tissue
US10752663B2 (en) 2016-08-29 2020-08-25 NellOne Therapeutics, Inc. Methods and compositions for regenerating tissues
KR101991624B1 (ko) * 2018-04-11 2019-06-20 서울대학교산학협력단 당뇨병 개체 유래의 형질전환체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 세포치료제
EP3852823A4 (en) 2018-09-17 2022-05-04 Rejuvablast LLC COMBINED GRAFTS FOR TISSUE REPAIR OR REGENERATION APPLICATIONS
US11090412B2 (en) 2018-12-21 2021-08-17 Zavation Medical Products Llc Bone repair composition and kit
EP3744356A1 (en) 2019-05-31 2020-12-02 Musculoskeletal Transplant Foundation Acellular soft tissue-derived matrices and methods for preparing same
US11793452B2 (en) 2019-10-03 2023-10-24 Johnson & Johnson Consumer Inc. Method of visualizing and quantifying remineralization
CN112891559B (zh) * 2021-02-07 2022-04-15 首都医科大学附属北京口腔医院 促进牙髓干细胞增殖和成骨分化的多肽共修饰柚皮苷纳米脂质体及其制备方法和用途
WO2024071848A1 (ko) * 2022-09-27 2024-04-04 경북대학교 산학협력단 혈관석회화 치료제 스크리닝 방법

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4394370A (en) 1981-09-21 1983-07-19 Jefferies Steven R Bone graft material for osseous defects and method of making same
US4409332A (en) 1982-01-12 1983-10-11 Jefferies Steven R Collagen-enzyme conjugates that exhibit no inflammatory response and method for making the same
US5486359A (en) 1990-11-16 1996-01-23 Osiris Therapeutics, Inc. Human mesenchymal stem cells
US5674844A (en) 1991-03-11 1997-10-07 Creative Biomolecules, Inc. Treatment to prevent loss of and/or increase bone mass in metabolic bone diseases
US5674725A (en) 1991-07-11 1997-10-07 British Technology Group Limited Implant materials having a phosphatase and an organophosphorus compound for in vivo mineralization of bone
US5385887A (en) 1993-09-10 1995-01-31 Genetics Institute, Inc. Formulations for delivery of osteogenic proteins
US5763416A (en) 1994-02-18 1998-06-09 The Regent Of The University Of Michigan Gene transfer into bone cells and tissues
US5942496A (en) 1994-02-18 1999-08-24 The Regent Of The University Of Michigan Methods and compositions for multiple gene transfer into bone cells
US6083690A (en) 1995-06-02 2000-07-04 Osteoscreen, Inc. Methods and compositions for identifying osteogenic agents
US6352972B1 (en) 1995-06-06 2002-03-05 Marcel E. Nimni Bone morphogenetic proteins and their use in bone growth
US6008208A (en) 1995-10-23 1999-12-28 Osteoscreen, Inc. Compositions and methods for treating bone deficit conditions
US6048964A (en) 1995-12-12 2000-04-11 Stryker Corporation Compositions and therapeutic methods using morphogenic proteins and stimulatory factors
US6200606B1 (en) 1996-01-16 2001-03-13 Depuy Orthopaedics, Inc. Isolation of precursor cells from hematopoietic and nonhematopoietic tissues and their use in vivo bone and cartilage regeneration
US6005088A (en) 1996-03-19 1999-12-21 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Human NPIK gene
US5700774A (en) 1996-03-26 1997-12-23 Genetics Institute, Inc. Compositions comprising bone morphogenic proteins and truncated parathyroid hormone related peptide, and methods of inducing cartilage by administration of same
US6077987A (en) 1997-09-04 2000-06-20 North Shore-Long Island Jewish Research Institute Genetic engineering of cells to enhance healing and tissue regeneration
US6462019B1 (en) 1998-07-10 2002-10-08 Osteoscreen, Inc. Inhibitors of proteasomal activity and production for stimulating bone growth
US7052856B2 (en) * 1999-10-05 2006-05-30 The Regents Of The University Of California NELL-1 enhanced bone mineralization
WO2004072100A2 (en) 2003-02-07 2004-08-26 The Regents Of The University Of California Nell peptide expression systems and bone formation activity of nell peptide
US7687462B2 (en) * 1999-10-05 2010-03-30 The Regents Of The University Of California Composition for promoting cartilage formation or repair comprising a nell gene product and method of treating cartilage-related conditions using such composition
KR20050084550A (ko) * 2002-09-13 2005-08-26 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 Ｎｅｌｌ-1 향상 골 무기질화
EP1447413A3 (en) * 2003-02-14 2006-01-04 Research Association for Biotechnology Full-length human cDNA
US20060053503A1 (en) * 2004-07-30 2006-03-09 Ut-Battelle, Llc Cranial and vertebral defects associated with loss-of-function of Nell
CN101611051A (zh) 2005-02-16 2009-12-23 加州大学董事会 治疗或预防骨疾病的药物组合物

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102892776A (zh) * 2010-06-30 2013-01-23 因首太克株式会社 新型肽及其用途
US8772241B2 (en) 2010-06-30 2014-07-08 Ensoltek Co., Ltd. Peptide and use thereof
CN102892776B (zh) * 2010-06-30 2014-07-16 因首太克株式会社 新型肽及其用途
CN102579145A (zh) * 2012-02-23 2012-07-18 中国人民解放军第四军医大学 一种牙科种植体及其制备方法
CN102579145B (zh) * 2012-02-23 2014-05-14 中国人民解放军第四军医大学 一种牙科种植体及其制备方法
CN104363832A (zh) * 2012-04-19 2015-02-18 "Parafarm"有限责任公司 骨质疏松诊断方法,用于评估不同骨骼促进剂的效果的闭合孔隙结构动态测定法
CN106687602A (zh) * 2014-06-13 2017-05-17 维也纳自然资源与生命科学大学 用于诊断和治疗骨折和骨病的组合物及方法
CN112236440A (zh) * 2018-05-28 2021-01-15 江阴贝瑞森制药有限公司 新的药物用途
CN110607365A (zh) * 2019-05-22 2019-12-24 昌乐县人民医院 核酸分子在制备诊断骨科疾病的产品中的应用
CN110607365B (zh) * 2019-05-22 2020-06-30 昌乐县人民医院 核酸分子在制备诊断骨科疾病的产品中的应用
CN114836535A (zh) * 2022-06-24 2022-08-02 四川大学 基于LncRNA和miRNA信号调控开发用于检测原发性骨质疏松症的标记物的方法

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