CN101861165A - 疫苗纳米技术 - Google Patents

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O·C·法罗科泽德
R·S·兰格
T·容特
A·莫斯曼
张良方
P·巴斯托
M·扬纳科内
F·亚历克西
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Abstract

本发明提供了用于将纳米载体输送至免疫系统的细胞的组合物和系统。本发明提供了能够刺激T细胞和/或B细胞中免疫应答的疫苗纳米载体，在一些具体实施方式中，所述疫苗纳米载体包含至少一个免疫调节试剂，可选地包含至少一个靶半体和可选的至少一个免疫刺激试剂。本发明提供了包含本发明的疫苗纳米载体的药物组合物。本发明提供了设计、制备和使用本发明的疫苗纳米载体及其药物组合物的方法。本发明提供了预防和/或治疗疾病、失调和病症的方法，所述方法包括向有需要的个体施用至少一个本发明的疫苗纳米载体。

Description

疫苗纳米技术
相关申请
本申请根据35U.S.C.§119要求申请日为2007年10月12日的美国临时申请系列号60/979,596的优先权。其完整内容通过引用并入本文。
政府支持
美国政府提供了本发明的研究所使用的资金支持。特别地，National Institutesof Health(合同号AI069259、AI072252、CA119349和HL56949)和National Institutesof Health/National Institute of Biomedical Imaging and BioEngineering(合同号EB003647)支持了本发明的研究。美国政府具有本发明的一些权利。
背景技术
现在很多的针对微生物病原体的疫苗包含病原微生物的活的减毒的或非剧毒的菌株。很多疫苗包含杀死的或相反的灭活的微生物。其它的疫苗利用病原体裂解物的纯化的成分，例如表面碳水化合物或重组的源自病原体的蛋白。利用活的减毒的或灭活的病原体的疫苗通常产生有力的免疫应答，但是它们的应用具有局限性。例如，活的疫苗菌株有时候会引起传染性病状，特别是当施用于免疫妥协的受体时。此外，很多病原体，特别是病毒，在它们的基因组中进行持续迅速的变异，这允许它们逃脱针对抗原性不同疫苗菌株的免疫应答。
鉴于发展疫苗的困难，很多疫苗供应严重短缺。例如，2007年10月美国发生了流感、水痘和甲肝疫苗的短缺。在一些情况下，疫苗短缺的发生是由于没有足够的生产商将其设备投入到疫苗生产以维持需求。在一些情况下，疫苗短缺是由于疫苗效力低造成的，这意味着必须向每个个体施以很大数量的疫苗产品以达到预防性效果。例如，一些疫苗不能作为完整生物体施用(即使是减毒的或杀死的)，因为它们引起传染性病状。相反，这样的疫苗通常包含纯化的病原体成分，其通常导致效力小得多的免疫应答。
因此，业界存在生产高免疫性有效疫苗的系统和方法的需求。也存在对于能够有利地诱导持续时间长的免疫应答的改善的疫苗组合物的需求。为了治疗和预防传染性疾病，存在对于高免疫原性但不引起疾病的改善的疫苗组合物的需求。
发明内容
本发明提供了用于调节免疫系统的合成的纳米载体。合成的纳米载体包含一种或多种免疫调节试剂、免疫刺激试剂和靶试剂(本文也称为“靶半体”)。免疫调节试剂诱导B和/或T细胞中的免疫应答。免疫刺激试剂帮助刺激免疫系统(以一种最终能够加强、抑制、引导或重引导免疫应答的方式)。因此，免疫刺激试剂包括免疫抑制剂和诱导调节性T细胞的试剂。在一些具体实施方式中，这样的试剂能够促进耐受的获得。靶试剂识别与特定的器官、组织、细胞和/或亚细胞位点相联的一个或多个靶标。纳米载体在预防和/或治疗那些易于通过免疫系统调节而治疗的疾病、失调或症状的药学制备物和试剂盒中是有用的。这样的症状包括那些通过特异性或非特异性加强免疫应答、特异性或非特异性抑制免疫应答或特异性或非特异性引导/重引导免疫应答而调节的疾病、失调或症状。
如本领域技术人员所认识到的，免疫系统调节，在其它事件中，在众多与医疗治疗相关的事件中是有用的，例如，如，用于预防和/或治疗传染性疾病、癌症、过敏症、哮喘(包括过敏性哮喘)、自身免疫疾病(包括类风湿性关节炎)、用于免疫抑制(与移植物联合)以改善移植排斥、抵抗令人上瘾的物质的免疫和抵抗生物危害物和其它毒性物质的免疫。免疫系统调节作为工业和学术研究中的工具也是有用的，例如，如，免疫动物以生产抗体。本发明的纳米载体可用于所有这些目的。
本发明的一个方面是提供疫苗。根据本发明所述的疫苗通常含有抗原。在一个具体实施方式中，抗原通过共价或非共价方式与纳米载体有真正的“结合”。非共价键包括，例如，离子键、疏水键、物理截留等，以下进行更详细的描述。这样的自身携带抗原的纳米载体包含于以下所指称的疫苗纳米载体的范畴内。在另一个具体实施方式中，纳米载体具有与之结合的免疫刺激制剂，以用于增强、抑制、引导或重引导免疫应答，优选为对抗原的免疫应答。在这种情况下，抗原可以与结合试剂的纳米载体(载体上结合了免疫刺激试剂)制备物混合以形成疫苗。当然抗原也可以与纳米载体结合，包括下面所讨论的，结合至结合了免疫刺激试剂的相同载体。
在一些具体实施方式中，考虑到抗原为被动输送(例如，个体暴露于环境中的变应原)。在这种情况下，携带结合的免疫刺激试剂的纳米载体可以在没有抗原的情况下施用，抗原通过环境输送。例如，免疫刺激试剂可以是将免疫系统从Th2应答重引导为Th1应答的试剂。因此，在一些具体实施方式中，所施用的试剂/纳米载体和经环境输送的抗原组合起来作用将免疫应答从Th2应答(其一般为与IgE的产生相联，且由细胞因子IL-4所驱动)重引导为朝向Th1为主导的应答(其与IgG的产生相联，且由IL-12和干扰素-γ驱动)。因此，在一些具体实施方式中，所施用的试剂/纳米载体和经环境输送的抗原降低IgE抗体的存在，从而治疗过敏症。甚至还可能在不存在预期的暴露于环境中抗原的情况下作为单一治疗而施用与纳米载体结合的免疫刺激试剂，以将免疫应答重引导为朝向Th1或者影响免疫系统的方面，这可以通过不依赖施用抗原的方式而操作，例如嗜曙红细胞灌注。
在很多情况下本发明的制备物将包括一个或多个纳米载体。在一些具体实施方式中，制备物包括与免疫调节试剂、免疫刺激试剂和靶试剂中的一个或多个(但不是所有的)结合的纳米载体。在一些具体实施方式中，制备物是纳米载体的混合物，其具有携带免疫调节试剂、免疫刺激试剂和靶试剂中的一个或多个(但不是所有的)的亚群体。在一些具体实施方式中，制备物是不同的纳米载体的混合物，每个纳米载体携带免疫调节试剂、免疫刺激试剂和靶试剂中的一个或多个(但不是所有的)。制备物同样可以是纳米载体中的一个，其中每个纳米载体携带与之结合的免疫调节试剂、免疫刺激试剂和靶试剂全部三者。在这种情况下，纳米载体自身(除了它们输送的试剂之外)可以是相同的或不同的。
重要的是：发现本发明的纳米载体对于刺激免疫系统是强有力的。重要的是：发现纳米载体可以被制成模拟改善当暴露于自然界中的抗原时或在疫苗技术之前免疫系统所“看到”的情况(从免疫学观点来看)。在这个方面，令人始料未及地发现，如果与纳米载体共价结合的话佐剂的活性会显著增强。同样令人始料未及地发现，纳米载体甚至能够在没有靶试剂的情况下帮助将免疫调节试剂或免疫刺激试剂靶向合适的免疫细胞。
本文描述的系统允许以产生改善的免疫调节的方式操作那些影响免疫系统的参数。本发明的一个重要方面是纳米载体的尺寸、试剂密度、靶向程度和位置、降解和试剂释放等可以控制。本发明的众多方面实现一个或多个这些优点，以下更详细地描述。特别地，以下描述了免疫调节制备物，这样的制备物的合成纳米载体，特异性和优选的纳米载体，特异性和优选的免疫调节、免疫刺激和靶试剂，本发明的纳米载体的成分部分和构建模块，以及生产这样的纳米载体的方法，包括涉及自组装纳米载体的优选方法。此外，描述了用于产生与弱抗原和不被T细胞识别的抗原(例如碳水化合物和小分子抗原)相关的有力的免疫调节的制备物和系统。在一些方面，提供了包含纳米载体(例如，一种靶向特异性器官、组织、细胞或亚细胞位点的纳米载体)的组合物。在一些具体实施方式中，纳米载体靶向一个或多个次级淋巴组织或器官。在一些具体实施方式中，次级淋巴组织或器官是淋巴结、脾、派亚氏淋巴丛、阑尾或扁桃体。
纳米载体骨架(和本文所提供的试剂所结合或包埋的纳米载体)可以由聚合物和/或非聚合物分子组成。因此，纳米载体骨架可以是基于蛋白的、基于核酸的或基于碳水化合物的。在一些具体实施方式中，骨架是大分子。在一些具体实施方式中，骨架由氨基酸或核酸组成。在一些具体实施方式中，骨架由分子的交联的链组成，如核酸。在一些具体实施方式中，骨架由RNAi交联的链组成。在一些具体实施方式中，骨架为基于聚氨基的。纳米载体可以是(但不限于)一个或众多基于脂的纳米颗粒、聚合纳米颗粒、金属纳米颗粒、基于表面活性剂的乳液、树枝状化合物和/或使用纳米材料的组合发展出来的纳米颗粒例如脂-聚合物纳米颗粒。
在一些具体实施方式中，纳米载体由一个或多个聚合物组成。在一些具体实施方式中，一个或多个聚合物是溶于水的非吸附性聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是聚乙二醇(PEG)或聚氧乙烯(PEO)。在一些具体实施方式中，聚合物是聚烷撑二醇或聚亚烷基氧化物。在一些具体实施方式中，一个或多个聚合物是生物可降解聚合物。在一些具体实施方式中，一个或多个聚合物是生物可兼容聚合物(其为可溶于水的非吸附性聚合物和生物可降解聚合物的偶联体)。在一些具体实施方式中，生物可降解聚合物是聚乳酸(PLA)、聚(羟基乙酸)(PGA)或聚(乳酸/羟基乙酸)(PLGA)。在一些具体实施方式中，纳米载体由PEG-PLGA聚合物组成。
在一些具体实施方式中，纳米载体通过自组装形成。自组装是指使用那些能够自身适应以可以预见的方式可以预见地且可以重复地形成纳米载体的成分形成纳米载体的过程。在一些具体实施方式中，通过使用两性生物材料(其自身彼此设定为形成尺寸、成分和成分位置可预见的纳米载体)形成纳米载体。根据本发明，两性生物材料上可以结合免疫调节试剂、免疫刺激试剂和/或靶试剂，从而当纳米载体自组装时，在纳米载体上/在纳米载体内存在可以重复的试剂的定位和密度式样。
在一些具体实施方式中，纳米载体是微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒。在一些具体实施方式中，微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒是自组装的。
在一些具体实施方式中，纳米载体具有正ζ电位。在一些具体实施方式中，纳米载体在中性pH带有净正电荷。在一些具体实施方式中，纳米载体在其表面包含一个或多个胺半体。在一些具体实施方式中，胺半体是伯、仲、叔或季胺。在一些具体实施方式中，胺半体是脂肪族胺。在一些具体实施方式中，纳米载体包含含有胺的聚合物。在一些具体实施方式中，纳米载体包含含有胺的脂。在一些具体实施方式中，纳米载体包含在中性pH带有正电荷的蛋白或肽。在一些具体实施方式中，纳米载体是乳胶颗粒。在一些具体实施方式中，在其表面具有一个或多个胺半体的纳米载体在中性pH带有净正电荷。
在一些具体实施方式中，本文提供的组合物的纳米载体具有500nm以下的平均几何直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有50nm以上但500nm以下的平均几何直径。在一些具体实施方式中，纳米载体群体的平均几何直径为约60nm、75nm、100nm、125nm、150nm、175nm、200nm、225nm、250nm、275nm、300nm、325nm、350nm、375nm、400nm、425nm、450nm或475nm。在一些具体实施方式中，平均几何直径为100-400nm、100-300nm、100-250nm或100-200nm。在一些具体实施方式中，平均几何直径为60-400nm、60-350nm、60-300nm、60-250nm或60-200nm。在一些具体实施方式中，平均几何直径为75-250nm。在一些具体实施方式中，纳米载体的群体中30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多的纳米载体具有500nM以下的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体的群体中10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多的纳米载体具有50nm以上但500nm以下的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体的群体中10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多的纳米载体具有约60nm、75nm、100nm、125nm、150nm、175nm、200nm、225nm、250nm、275nm、300nm、325nm、350nm、375nm、400nm、425nm、450nm或475nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体的群体中10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多的纳米载体具有100-400nm、100-300nm、100-250nm或100-200nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体的群体中10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多的纳米载体具有60-400nm、60-350nm、60-300nm、60-250nm或60-200nm的直径。在一些前述的具体实施方式中，纳米载体为纳米颗粒。
本文提供的纳米载体可用于调节免疫应答(例如增强、抑制、引导或重引导)，并包含免疫调节试剂、免疫刺激试剂和靶试剂中的至少一个。在一些具体实施方式中，纳米载体包含B细胞抗原、T细胞抗原、免疫刺激试剂和靶试剂中的至少一个。在一些具体实施方式中，纳米载体包含B细胞抗原、T细胞抗原、免疫刺激试剂和靶试剂中的至少两个。在一些具体实施方式中，纳米载体包含B细胞抗原、T细胞抗原、免疫刺激试剂和靶试剂中的至少三个。在一些具体实施方式中，纳米载体包含B细胞抗原、T细胞抗原、免疫刺激试剂和靶试剂的全部四者。
在一些具体实施方式中，纳米载体包含B细胞抗原。B细胞抗原可以在纳米载体的表面，包埋于纳米载体内或二者皆有。在一些具体实施方式中，B细胞抗原以激活B细胞受体的密度位于纳米载体的表面。在一些具体实施方式中，B细胞抗原与纳米载体结合。在一些具体实施方式中，B细胞抗原与纳米载体共价结合。在一些具体实施方式中，B细胞抗原与纳米载体非共价结合。在一些具体实施方式中，纳米载体还包含靶半体。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是弱免疫原性的抗原。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是小分子。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是令人上瘾的物质。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是毒素。在一些具体实施方式中，包含于纳米载体中的毒素是完整分子或其部分。在一些具体实施方式中，B细胞抗原不是T细胞抗原。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是碳水化合物。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同种抗原、异种抗原、变应原、令人上瘾的物质或代谢性疾病酶或酶产物。
变应原是指能够在易感个体中诱导过敏性反应的物质(抗原)。变应原的名单是巨大的，包括花粉、昆虫毒素、动物皮屑、真菌孢子和药物(例如盘尼西林)。变应原还包括食物变应原。
在一些具体实施方式中，纳米载体包含T细胞抗原。在一些具体实施方式中，T细胞抗原在纳米载体的表面，包埋于纳米载体内或二者皆有。在一些具体实施方式中，T细胞抗原与纳米载体结合。在一些具体实施方式中，T细胞抗原与纳米载体共价结合。在一些具体实施方式中，T细胞抗原与纳米载体非共价结合。在一些具体实施方式中，抗原是退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同种抗原、异种抗原、变应原、令人上瘾的物质或代谢性疾病酶或酶产物。在一些具体实施方式中，T细胞抗原是“普遍的”T细胞抗原(即可以与不相关B细胞抗原使用的T细胞抗原，包括碳水化合物，以刺激T细胞辅助)。在一些具体实施方式中，纳米载体还包括靶半体。
在一些具体实施方式中，纳米载体同时包含B细胞抗原和T细胞抗原。在一些具体实施方式中，B细胞抗原和T细胞抗原是不同的抗原。在一些具体实施方式中，B细胞抗原和T细胞抗原是相同的抗原。在一些具体实施方式中，B细胞抗原位于纳米载体表面(例如共价或非共价结合)或同时位于纳米载体表面(例如共价或非共价结合)和包埋于纳米载体内(例如共价或非共价结合)，而T细胞抗原位于纳米载体表面(例如共价或非共价结合)，包埋于纳米载体内(例如共价或非共价结合)，或同时位于纳米载体表面(例如共价或非共价结合)和包埋于纳米载体内(例如共价或非共价结合)。
在一些具体实施方式中，当纳米载体同时包含B细胞抗原和T细胞抗原时，纳米载体还包含免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂位于纳米载体表面和/或包埋于纳米载体内。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂与纳米载体结合。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂与纳米载体共价结合。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂与纳米载体非共价结合。
在一些具体实施方式中，当纳米载体同时包含B细胞抗原和T细胞抗原时，纳米载体还包含靶试剂。在一些具体实施方式中，靶试剂位于纳米载体表面。在一些具体实施方式中，靶试剂与纳米载体结合。在一些具体实施方式中，靶试剂与纳米载体共价结合。在一些具体实施方式中，靶试剂与纳米载体非共价结合。
在一些具体实施方式中，当纳米载体同时包含B细胞抗原和T细胞抗原时，纳米载体还包含免疫刺激试剂和靶试剂。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂位于纳米载体表面(例如共价或非共价结合)和/或包埋于纳米载体内(例如共价或非共价结合)，而靶试剂位于纳米载体表面(例如共价或非共价结合)。
在一些具体实施方式中，纳米载体包含免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂位于纳米载体表面。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂包埋于纳米载体内。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂既位于纳米载体表面又包埋于纳米载体内。在一些具体实施方式中，位于纳米载体表面的免疫刺激试剂与包埋于纳米载体内的免疫刺激试剂是不同的。在一些具体实施方式中，位于纳米载体表面的与包埋于纳米载体内的免疫刺激试剂是相同的。
在一些具体实施方式中，纳米载体包含一种以上的免疫刺激试剂，其中免疫刺激试剂是不同的。
在一些具体实施方式中，纳米载体包含免疫刺激试剂和抗原。在一些具体实施方式中，抗原是B细胞抗原或T细胞抗原。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂是免疫抑制试剂(抑制免疫应答)。在一些具体实施方式中，免疫抑制试剂是环孢霉素、类固醇、氨甲蝶呤或任何干扰T细胞激活的试剂。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂诱导调节性T细胞(例如TGF-β、雷帕霉素或维甲酸)。在一些具体实施方式中，诱导调节性T细胞的免疫抑制剂或试剂促进对抗原耐受的获得。在一些具体实施方式中，纳米载体还包含靶试剂。在一些具体实施方式中，纳米载体可用于抑制个体中的免疫系统和/或促进耐受。
在一些具体实施方式中，纳米载体包含免疫刺激试剂，纳米载体还包含B细胞抗原和/或T细胞抗原。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是弱免疫原性的抗原。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是小分子。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是碳水化合物。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是令人上瘾的物质。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是毒素。在一些具体实施方式中，T细胞抗原是退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同种抗原、异种抗原、变应原、令人上瘾的物质或代谢性疾病酶或酶产物。在一些具体实施方式中，T细胞抗原是普遍的T细胞抗原。在一些具体实施方式中，纳米载体还包含靶试剂。
在一些具体实施方式中，纳米载体可用于在个体中诱导或增强对弱免疫原性的抗原(例如小分子或碳水化合物)的免疫应答。在一些具体实施方式中，纳米载体可用于在个体中诱导或增强对令人上瘾的物质的免疫应答。在一些具体实施方式中，纳米载体可用于在个体中诱导或增强对毒素的免疫应答。在一些具体实施方式中，纳米载体可用于治疗上瘾的个体或易于上瘾的个体。在一些具体实施方式中，纳米载体可用于治疗已经暴露于或即将暴露于毒素的个体。在一些具体实施方式中，纳米载体可用于治疗和/或预防传染性疾病、癌症、过敏症、哮喘(包括过敏性哮喘)或自身免疫疾病(包括类风湿性关节炎)。在其它具体具体实施方式中，纳米载体可用于免疫抑制(与移植物联合)以改善移植排斥。
在一些具体实施方式中，纳米载体包含靶半体。在一些具体实施方式中，靶半体位于纳米载体表面。在一些具体实施方式中，靶半体与纳米载体结合。在一些具体实施方式中，靶半体与纳米载体共价结合。在一些具体实施方式中，靶半体与纳米载体非共价结合。
在一些方面，提供了包含纳米载体的组合物，所述纳米载体包含(a)聚合物与抗原的偶联体，(b)聚合物与免疫刺激试剂的偶联体，和/或(c)聚合物与靶半体的偶联体。在一些具体实施方式中，纳米载体包含聚合物与抗原的偶联体，和聚合物与免疫刺激试剂的偶联体。在一些具体实施方式中，纳米载体包含聚合物与抗原的偶联体，和聚合物与靶半体的偶联体。在一些具体实施方式中，纳米载体包含聚合物与免疫刺激试剂的偶联体，和聚合物与靶半体的偶联体。在一些具体实施方式中，纳米载体包含聚合物与抗原的偶联体、聚合物与免疫刺激试剂的偶联体，和聚合物与靶半体的偶联体。在一些具体实施方式中，偶联体是共价偶联体或非共价偶联体或其任意组合。在一些具体实施方式中，抗原是B细胞抗原。在一些具体实施方式中，纳米载体还包含聚合物与T细胞抗原的偶联体。在一些具体实施方式中，这样的偶联体是共价的或非共价的偶联体。在一些具体实施方式中，抗原是T细胞抗原。在一些具体实施方式中，纳米载体还包含聚合物与B细胞抗原的偶联体。在一些具体实施方式中，这样的偶联体是共价的或非共价的偶联体。
在一些方面，提供了包含纳米载体的组合物，所述纳米载体包含符合下列公式X-L1-Y-L2-Z的分子，其中X是生物可降解聚合物，Y是可溶于水的非吸附性聚合物，Z是靶半体、免疫调节试剂、免疫刺激试剂或药学试剂，L1和L2是键或连接分子，其中Y或者Z可以不存在，但Y和Z不能同时不存在。在一些具体实施方式中，纳米载体包含抗原、免疫刺激试剂或二者皆有。在一些具体实施方式中，药学试剂是抗原。在一些具体实施方式中，抗原是退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同种抗原、异种抗原、变应原、令人上瘾的物质或代谢性疾病酶或酶产物。Z可以是本文描述的任何抗原。在一些具体实施方式中，Z是靶半体。在一些具体实施方式中，Z是与细胞表面表达的受体结合的靶半体。在一些具体实施方式中，Z是与可溶性受体结合的靶半体。在一些具体实施方式中，可溶性受体是补体蛋白或预先存在的抗体。在一些具体实施方式中，靶半体用于将纳米载体输送至抗原呈递细胞、T细胞或B细胞。在一些具体实施方式中，抗原呈递细胞是树突状细胞(DC)、滤泡树突状细胞(FDC)或巨噬细胞。在一些具体实施方式中，巨噬细胞是被膜下窦巨噬细胞(SCS-Mph)。在一些具体实施方式中，Y是PEG或PEO。在一些具体实施方式中，Y是聚烷撑二醇或聚亚烷基氧化物。在一些具体实施方式中，X是PLGA、PLA或PGA。在一些具体实施方式中，Z不存在。
在一些方面，提供了包含纳米载体的组合物，所述纳米载体包含免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，组合物还包含抗原和/或靶半体。在一些具体实施方式中，抗原、靶半体和免疫刺激试剂中至少有一个与可溶于水的非吸附性聚合物偶联。在一些具体实施方式中，抗原、靶半体和免疫刺激试剂中至少有一个与生物可降解聚合物偶联。在一些具体实施方式中，抗原、靶半体和免疫刺激试剂中至少有一个与生物可兼容聚合物偶联。在一些具体实施方式中，生物可兼容聚合物为可溶于水的非吸附性聚合物偶联至生物可降解聚合物的偶联体。在一些具体实施方式中，抗原是B细胞抗原。在一些具体实施方式中，B细胞抗原不是T细胞抗原。在一些具体实施方式中，纳米载体还包含T细胞抗原。在一些具体实施方式中，抗原是T细胞抗原。
在一些方面，提供了包含纳米载体的组合物，所述纳米载体包含小分子、免疫刺激试剂和T细胞抗原。在一些具体实施方式中，小分子在纳米载体的表面，或同时在纳米载体的表面和包埋于纳米载体内。在一些具体实施方式中，小分子是令人上瘾的物质。在一些具体实施方式中，令人上瘾的物质是尼古丁。在一些具体实施方式中，小分子是毒素。在一些具体实施方式中，毒素来自于化学武器、生物战的试剂或有害的环境中的试剂。在一些具体实施方式中，小分子偶联至聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是生物可兼容聚合物。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂在纳米载体的表面，或同时在纳米载体的表面和包埋于纳米载体内。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂偶联至聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物或生物可降解聚合物。在一些具体实施方式中，纳米载体还包含靶半体。在一些具体实施方式中，靶半体偶联至聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是生物可兼容聚合物。在一些具体实施方式中，可溶于水的非吸附性聚合物是PEG或PEO。在一些具体实施方式中，可溶于水的非吸附性聚合物是聚烷撑二醇或聚亚烷基氧化物。在一些具体实施方式中，生物可降解聚合物是PLGA、PLA或PGA。在一些具体实施方式中，生物可兼容聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物与生物可降解聚合物的偶联体。
在一些具体实施方式中，提供了包含纳米载体的组合物，所述纳米载体包含尼古丁、免疫刺激试剂、T细胞抗原和靶半体。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂是TLR 7/8激动剂。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂是R848(也称为CL097)或咪喹莫特。在一些具体实施方式中，尼古丁在纳米载体的表面，或同时在纳米载体的表面和包埋于纳米载体内。在一些具体实施方式中，尼古丁偶联至聚合物，优选为共价偶联。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物。在一些具体实施方式中，尼古丁偶联至生物可兼容聚合物。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂在纳米载体的表面，包埋于纳米载体内，或同时在纳米载体的表面和包埋于纳米载体内。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂偶联至聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂偶联至生物可降解聚合物。在一些具体实施方式中，靶半体偶联至聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些具体实施方式中，靶半体偶联至生物可降解聚合物。在一些具体实施方式中，可溶于水的非吸附性聚合物是PEG或PEO。在一些具体实施方式中，可溶于水的非吸附性聚合物是聚烷撑二醇或聚亚烷基氧化物。在一些具体实施方式中，生物可降解聚合物是PLGA、PLA或PGA。在一些具体实施方式中，生物可兼容聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物与生物可降解聚合物的偶联体。
在本文提供的任何纳米载体的一些具体实施方式中，免疫刺激试剂包埋于纳米载体内。在这些具体实施方式中的一些，免疫刺激试剂是R848、TLR9激动剂(例如CpG/含有CpG的核酸)。在一些具体实施方式中，这样的纳米载体可用于激活CD4T细胞和/或CD8T细胞。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂(例如R848或TLR9激动剂)是非偶联的。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂(例如R848或TLR9激动剂)偶联至聚合物。在一些具体实施方式中，偶联是共价的。在一些具体实施方式中，偶联是非共价的。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是生物可降解聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是生物可兼容聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是PEG-PLA或PLA。在任何这些具体实施方式中，纳米载体还可以包含T细胞抗原。
在一些方面，提供了包含纳米载体的组合物，所述纳米载体包含弱免疫原性抗原、免疫刺激试剂和T细胞抗原。在一些具体实施方式中，弱免疫原性抗原在纳米载体的表面，或同时在纳米载体的表面和包埋于纳米载体内。在一些具体实施方式中，弱免疫原性抗原是小分子或碳水化合物。在一些具体实施方式中，弱免疫原性抗原是令人上瘾的物质。在一些具体实施方式中，弱免疫原性抗原是毒素。在一些具体实施方式中，弱免疫原性抗原共价偶联至聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂在纳米载体的表面，或同时在纳米载体的表面和包埋于纳米载体内。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂共价偶联至聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。在一些具体实施方式中，纳米载体还包含靶半体。在一些具体实施方式中，靶半体共价偶联至聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物生物可降解聚合物。
在一些方面，提供了包含纳米载体的组合物，所述纳米载体靶向特异性细胞、组织或器官并调节免疫应答，所述纳米载体包含以激活B细胞的密度位于其表面的B细胞抗原，以及免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，纳米载体还包含靶半体。在一些具体实施方式中，组合物是药物组合物并还包含药学上可接受的载体。在一些具体实施方式中，药物组合物是疫苗组合物。
在一些方面，提供了包含抗原呈递细胞-靶半体和纳米载体的组合物例如药物组合物。在一些具体实施方式中，抗原呈递细胞-靶半体和纳米载体是偶联的。在一些具体实施方式中，偶联体是共价偶联体。在一些具体实施方式中，偶联体是非共价偶联体。
在一些方面，提供了包含免疫刺激试剂和纳米载体的组合物例如药物组合物。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂和纳米载体是偶联的。在一些具体实施方式中，偶联体是共价偶联体。在一些具体实施方式中，偶联体是非共价偶联体。
在一些方面，提供了包含符合公式X-L1-Y-L2-Z的分子的组合物，其中X是生物可降解聚合物，Y是可溶于水的非吸附性聚合物，Z是靶半体、免疫调节试剂、免疫刺激试剂或药学试剂，L1和L2是键或连接分子，其中Y或者Z可以不存在，但Y和Z不能同时不存在。
在一些方面，提供了包含符合公式T-L1-X-L2-Y-L3-Z的分子的组合物，其中T是T细胞抗原，X是生物可降解聚合物，Y是可溶于水的非吸附性聚合物，Z是靶半体、免疫刺激试剂或药学试剂，L1、L2和L3是键或连接分子，其中T、Y和Z中任意一个或任意两个可以不存在，但T、Y和Z不能三者同时不存在。在一些具体实施方式中，药学试剂是抗原。在一些具体实施方式中，抗原是B细胞抗原或T细胞抗原。
在一些具体实施方式中，Z是退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同种抗原、异种抗原、变应原、半抗原、令人上瘾的物质或代谢性疾病酶或酶产物。在一些具体实施方式中，Z是任一种本文描述的B细胞抗原。在一些具体实施方式中，Z是任一种本文提供的T细胞抗原。
在一些具体实施方式中，Z是与细胞表面表达的受体结合的靶半体。在一些具体实施方式中，Z是与可溶性受体结合的靶半体。在一些具体实施方式中，可溶性受体是补体或预先存在的抗体。在一些具体实施方式中，靶半体用于靶向抗原呈递细胞、T细胞或B细胞。
在一些具体实施方式中，Y是PEG或PEO。在一些具体实施方式中，Y是聚烷撑二醇或聚亚烷基氧化物。
在一些具体实施方式中，X是PLGA、PGA或PLA。
在一些具体实施方式中，Z不存在。在一些具体实施方式中，Y不存在。
在一些方面，提供了包含免疫刺激试剂和聚合物的偶联体的药物组合物。在一些具体实施方式中，偶联体是共价偶联体。在一些具体实施方式中，偶联体是非共价偶联体。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是生物可兼容聚合物。在一些具体实施方式中，生物可兼容聚合物是生物可降解聚合物或可溶于水的非吸附性聚合物。在一些具体实施方式中，生物可兼容聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物与生物可降解聚合物的偶联体。在一些具体实施方式中，聚合物是合成的。在一些具体实施方式中，药物组合物包含一个或多个纳米载体，其中偶联体是一个或多个纳米载体的成分。在一些具体实施方式中，组合物还包含抗原。在一些具体实施方式中，药物组合物不包含抗原。在一些具体实施方式中，组合物还包含靶试剂。
在一些方面，提供了包含免疫刺激试剂和聚合物的偶联体的疫苗组合物。在一些具体实施方式中，偶联体是共价偶联体。在一些具体实施方式中，偶联体是非共价偶联体。在一些具体实施方式中，聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物、生物可降解聚合物或生物可兼容聚合物。在一些具体实施方式中，可溶于水的非吸附性聚合物是聚乙二醇。在一些具体实施方式中，聚合物是生物可兼容聚合物。在一些具体实施方式中，生物可兼容聚合物是生物可降解聚合物或可溶于水的非吸附性聚合物。在一些具体实施方式中，生物可兼容聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物与生物可降解聚合物的偶联体。在一些具体实施方式中，聚合物是合成的。在一些具体实施方式中，药物组合物包含一个或多个纳米载体，其中偶联体是一个或多个纳米载体的成分。在一些具体实施方式中，组合物还包含抗原。在一些具体实施方式中，药物组合物不包含抗原。在一些具体实施方式中，组合物还包含靶试剂。
在一些具体实施方式中，B细胞抗原是蛋白或肽。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是非蛋白抗原(即不是蛋白或肽)。在一些具体实施方式中，蛋白或肽来自传染性试剂。在一些具体实施方式中，传染性试剂是细菌、真菌、病毒、原生动物或寄生虫。在一些具体实施方式中，病毒是痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、登革热病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人类免疫缺陷病毒、人类乳头瘤病毒、水痘-带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、细胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒状病毒、轮状病毒、鼻病毒、腺病毒、乳头瘤病毒、细小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰质炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道肠道病毒、风疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆转录病毒、嗜肝DNA病毒、柯萨奇病毒、委内端拉马脑脊髓炎病毒、日本脑炎病毒、黄热病毒、裂谷热病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒。
在一些具体实施方式中，B细胞抗原是小分子。在一些具体实施方式中，小分子是被滥用的物质、令人上瘾的物质或毒素。
在一些具体实施方式中，B细胞抗原是令人上瘾的物质。在一些具体实施方式中，令人上瘾的物质是尼古丁、麻醉药、迷幻剂、刺激物、咳嗽抑制剂、镇定剂或止痛药。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是鸦片或苯化重氮。
在一些具体实施方式中，B细胞抗原是毒素。在一些具体实施方式中，毒素来自化学武器。在一些具体实施方式中，来自化学武器的毒素是肉毒杆菌毒素或磷杂环戊二烯(phosphene)。来自化学武器的毒素还包括但不限于O-烷基(＜C10，包括环烷基)烷基(Me、Et、n-Pr或i-Pr)-磷酸氟化物(例如，沙林：甲基氟膦酸O-异丙酯，梭曼：甲基氟磷酸O-叔己酯)，O-烷基(＜C10，包括环烷基)N，N-二烷基(Me、Et、n-Pr或i-Pr)磷胺氰化物(例如，塔崩：N，N-二甲氨基氰基磷酸O-乙酯)，O-烷基(H或＜C10，包括环烷基)S-2-二烷基(Me、Et、n-Pr或i-Pr)-氨基乙基烷基(Me、Et、n-Pr或i-Pr)硫代磷酸盐及相应的烷基化或质子化盐(例如，VX：O-乙基S-2-二异丙基氨基乙基甲基硫代磷酸盐)，硫芥子气：2-氯乙基氯甲基硫醚，芥子气：双(2-氯乙基)硫醚、双(2-氯乙基硫)甲烷，倍半芥子气：1，2-双(2-氯乙基硫)乙烷、1，3-双(2-氯乙基硫)-n-丙烷、1，4-双(2-氯乙基硫)-n-丁烷、1，5-双(2-氯乙基硫)-n-戊烷、双(2-氯乙基硫甲基)乙醚，O-芥子：双(2-氯乙基硫乙基)乙醚，路易斯毒气(Lewisite)：路易斯毒气1：2-氯乙烯二氯胂，路易斯毒气2：双(2-氯乙烯)氯胂，路易斯毒气3：三(2-氯乙烯)肿，氮芥：HN1：双(2-氯乙基)乙胺，HN2：双(2-氯乙基)甲胺，HN3：三(2-氯乙基)胺，蛤蚌毒素，蓖麻毒素，阿米吨(Amiton)：O，O-二乙基S-(2-(二乙基氨基)乙基)硫代磷酸酯及相应的烷基化或质子化的盐，PFIB：1，1，3，3，3-五氟-2-(三氟甲基)-1-丙烯，二苯羟乙酸-3-喹咛环酯(BZ)，光气：碳酰氯，氯化氰，氰化氢和三氯硝基甲：三氯硝基甲烷。在一些具体实施方式中，纳米载体中包含的毒素是上述任何一项的完整分子或其一部分。
在一些具体实施方式中，B细胞抗原是生物危害性或有害的环境中的试剂。在一些具体实施方式中，有害的环境中的试剂是砷、铅、汞、氯乙烯、多氯联苯、苯、多环芳香烃、镉、苯并(a)芘、苯并(b)荧蒽、氯仿、二氯-二苯基-三氯乙烯(DDT)，P，P’-、阿罗克洛1254(aroclor 1254)，阿罗克洛1260(aroclor 1260)、二苯并(a，h)蒽、三氯乙烯、狄氏剂(dieldrin)、六价铬或p，p’-二氯二苯基二氯乙烯(DDE，P，P’)。
在一些具体实施方式中，B细胞抗原是碳水化合物。在一些具体实施方式中，碳水化合物来自传染性试剂。在一些具体实施方式中，传染性试剂是细菌、真菌、病毒、原生动物或寄生虫。在一些具体实施方式中，细菌是假单胞菌属(Pseudomonas)、肺炎球菌属(Pneumococcus)、大肠杆菌(E.coli)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、密螺旋体(Treponema)、包柔氏螺旋体(Borrelia)、衣原体(Chlamydia)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、梭菌属(Clostridium)、沙门氏菌属(Salmonella)、军团杆菌属(Legionella)、弧菌(Vibrio)或肠球菌(Enterococci bacterium)或分支杆菌(Mycobacterium)属。在一些具体实施方式中，病毒是痘病毒(pox virus)、小痘病毒(smallpox virus)、埃博拉病毒(ebola virus)、马尔堡病毒(marburg virus)、登革热病毒(dengue fever virus)、流感病毒(influenza virus)、副流感病毒(parainfluenza virus)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus)、麻疹病毒(rubeola virus)、人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiency virus)、人类乳头瘤病毒(human papillomavirus)、水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus)、单纯疱疹病毒(herpes simplex virus)、细胞巨化病毒(cytomegalovirus)、EB病毒(Epstein-Barr virus)、JC病毒(JC virus)、棒状病毒(rhabdovirus)、轮状病毒(rotavirus)、鼻病毒(rhinovirus)、腺病毒(adenovirus)、乳头瘤病毒(papillomavirus)、细小病毒(parvovirus)、小核糖核酸病毒(picornavirus)、脊髓灰质炎病毒(poliovirus)、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道肠道病毒(reovirus)、风疹病毒(rubella virus)、外衣病毒(togavirus)、粘病毒(orthomyxovirus)、逆转录病毒(retrovirus)、嗜肝DNA病毒(hepadnavirus)、柯萨奇病毒(coxsackievirus)、委内端拉马脑脊髓炎病毒(equine encephalitis virus)、日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus)、黄热病毒(yellow fever virus)、裂谷热病毒(Rift Valley fever virus)、甲肝病毒(hepatitis A virus)、乙肝病毒(hepatitisB virus)、丙肝病毒(hepatitis C virus)、丁肝病毒(hepatitis D virus)或戊肝病毒(hepatitis E virus)。
在一些具体实施方式中，B细胞抗原是自身抗原。在一些具体实施方式中，自身抗原是蛋白或肽、脂蛋白、脂、碳水化合物或核酸。在一些具体实施方式中，自身抗原是酶、结构蛋白、分泌的蛋白、细胞表面受体或细胞因子。在一些具体实施方式中，细胞因子是TNF、IL-1或IL-6。在一些具体实施方式中，自身抗原是胆固醇酯转移蛋白(CETP)、与Alzheimer病相关的Aβ蛋白、处理Aβ蛋白的病理形式的蛋白水解酶、与动脉硬化症相关的LDL或HIV-1的共同受体。在一些具体实施方式中，处理Aβ蛋白的病理形式的蛋白水解酶是β-分泌酶。在一些具体实施方式中，与动脉硬化症相关的LDL是氧化的或最小化修饰的。在一些具体实施方式中，HIV-1的共同受体是CCR5。在一些具体实施方式中，自身抗原是自身免疫疾病抗原。
在一些具体实施方式中，B细胞抗原是退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原或代谢性疾病酶或酶产物。
在一些具体实施方式中，抗原是癌症抗原。在一些具体实施方式中，癌症抗原是Melan-A/MART-1，二肽基肽酶IV(DPPIV)，腺苷脱氨酶结合蛋白(ADAbp)，亲环蛋白b，结肠直肠相关抗原(CRC)--C017-1A/GA733，癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-1和CAP-2，etv6，aml1，前列腺特异性抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-1、PSA-2和PSA-3，前列腺特异性膜抗原(PSMA)，T-细胞受体/CD3-ζ链，肿瘤抗原的MAGE家族(例如，MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-Al0、MAGE-A11、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-C1、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)，肿瘤抗原的GAGE家族(例如，GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE-9)，BAGE，RAGE，LAGE-1，NAG，GnT-V，MUM-1，CDK4，酪氨酸酶，p53，MUC家族，HER2/neu，p21ras，RCASl，α-胎蛋白，E-钙粘附蛋白，α-钙紧张素(catenin)，β-钙紧张素和γ-钙紧张素，p120ctn，gp100Pmel117，PRAME，NY-ESO-1，大脑糖原磷酸酶，SSX-1，SSX-2(HOM-MEL-40)，SSX-1，SSX-4，SSX-5，SCP-1，CT-7，cdc27，腺瘤样的结肠息肉病蛋白(APC)，胞衬蛋白(fodrin)，PlA，连接蛋白37，Ig-独特型，p15，gp75，GM2和GD2神经节苷脂，病毒产品例如人乳头瘤病毒蛋白，肿瘤抗原的Smad家族，lmp-1，EBV编码的核抗原(EBNA)-1，或c-erbB-2。
在一些具体实施方式中，传染性疾病抗原是病毒抗原。在一些具体实施方式中，病毒抗原是来自痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、登革热病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人类免疫缺陷病毒、人类乳头瘤病毒、水痘-带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、细胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒状病毒、轮状病毒、鼻病毒、腺病毒、乳头瘤病毒、细小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰质炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道肠道病毒、风疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆转录病毒、嗜肝DNA病毒、柯萨奇病毒、委内端拉马脑脊髓炎病毒、日本脑炎病毒、黄热病毒、裂谷热病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒的抗原。
在一些具体实施方式中，B细胞抗原是弱免疫原性抗原。在一些具体实施方式中，弱免疫原性抗原是非蛋白抗原。在一些具体实施方式中，弱免疫原性抗原是碳水化合物或小分子。在一些具体实施方式中，弱免疫原性抗原是被滥用的物质、令人上瘾的物质或毒素。在一些具体实施方式中，毒素来自化学武器。在一些具体实施方式中，弱免疫原性抗原是有害的环境中的试剂。在一些具体实施方式中，弱免疫原性抗原是自身抗原。
一般地，T细胞抗原是蛋白或肽。在一些具体实施方式中，T细胞抗原是退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同种抗原、异种抗原、变应原、接触致敏剂、半抗原或代谢性疾病酶或酶产物。
在一些具体实施方式中，T细胞抗原来自传染性试剂。在一些具体实施方式中，传染性试剂是细菌、真菌、病毒、原生动物或寄生虫。在一些具体实施方式中，传染性疾病抗原是病毒抗原。在一些具体实施方式中，病毒抗原是来自痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、登革热病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人类免疫缺陷病毒、人类乳头瘤病毒、水痘一带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、细胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒状病毒、轮状病毒、鼻病毒、腺病毒、乳头瘤病毒、细小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰质炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道肠道病毒、风疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆转录病毒、嗜肝DNA病毒、柯萨奇病毒、委内端拉马脑脊髓炎病毒、日本脑炎病毒、黄热病毒、裂谷热病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒的抗原。
在一些具体实施方式中，T细胞抗原是普遍T细胞抗原。在一些具体实施方式中，普遍T细胞抗原是源自破伤风类毒素、EB病毒或流感病毒的一个或多个肽。
在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂是白细胞介素、干扰素、细胞因子等。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂是Toll样受体(TLR)激动剂、细胞因子受体激动剂、CD40激动剂、Fc受体激动剂、含有CpG的免疫刺激核酸、补体受体激动剂或佐剂。在一些具体实施方式中，TLR激动剂是TLR-1、TLR-2、TLR-3、TLR-4、TLR-5、TLR-6、TLR-7、TLR-8、TLR-9或TLR-10激动剂。在一些具体实施方式中，Fc受体激动剂是Fc-γ受体激动剂。在一些具体实施方式中，补体受体激动剂与CD21或CD35结合。在一些具体实施方式中，补体受体激动剂诱导纳米载体的内源性补体调理。在一些具体实施方式中，细胞因子受体激动剂是细胞因子。在一些具体实施方式中，细胞因子受体激动剂是小分子、抗体、融合蛋白或适配子(aptamer)。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂是佐剂。在一些具体实施方式中，佐剂诱导细胞因子的生物合成。在一些具体实施方式中，佐剂是明矾、MF59、R848、霍乱毒素、鲨烯、磷酸盐佐剂或四氯十氧化物。在一些具体实施方式中，佐剂是单磷酸类脂A(MPL，SmithKline Beecham)；皂角苷包括QS21(SmithKline Beecham)；免疫刺激寡核苷酸(例如，Kreig等人，Nature 374：546-9，1995首先描述的CpG免疫刺激寡核苷酸)；不完全弗氏佐剂；完全弗氏佐剂；montanide；维生素E和各种由生物可降解油(例如鲨烯和/或生育酚、Quil A、RibiDetox、CRL-1005或L-121)制备的油包水乳剂。
在特异的具体实施方式中，免疫刺激试剂可以是天然或合成的Toll样受体(TLR)的激动剂。在特异的具体实施方式中，免疫刺激试剂可以是toll样受体(TLR)-7(例如CpG，其诱导I型干扰素的产生)的配体；DC表面分子CD40的激动剂；促进DC成熟的试剂；TLR-4激动剂；细胞因子；从坏死细胞中释放的促炎性刺激剂(例如尿酸盐晶体)；激活的补体级联成分(例如CD21、CD35等)；等等。
在一些具体实施方式中，靶半体结合至细胞表面表达的受体。在一些具体实施方式中，靶半体结合至可溶性受体。在一些具体实施方式中，可溶性受体是补体蛋白或预先存在的抗体。在一些具体实施方式中，靶半体用于将纳米载体输送至抗原呈递细胞、T细胞或B细胞。在一些具体实施方式中，抗原呈递细胞是巨噬细胞。在一些具体实施方式中，巨噬细胞是被膜下窦巨噬细胞。在一些具体实施方式中，抗原呈递细胞是树突状细胞。在一些具体实施方式中，抗原呈递细胞是滤泡树突状细胞。
在一些具体实施方式中，靶半体是与CD11b、CD169、甘露糖受体、DEC-205、CD11c、CD21/CD35、CX3CR1或Fc受体结合的分子。在一些具体实施方式中，靶半体是与CD169、CX3CR1或Fc受体结合的分子。在一些具体实施方式中，与CD169结合的分子是抗-CD169抗体。在一些具体实施方式中，与CX3CR1结合的分子是CX3CL1(fractalkine)。在一些具体实施方式中，靶半体包含免疫球蛋白的Fc部分。在一些具体实施方式中，靶半体包含IgG的Fc部分。在一些具体实施方式中，免疫球蛋白的Fc部分是人类免疫球蛋白的Fc部分。在一些具体实施方式中，IgG的Fc部分是人类IgG的Fc部分。在一些具体实施方式中，靶半体是可溶性受体，CRFc。在一些具体实施方式中，CRFc可用于靶向被膜下窦中的巨噬细胞但不靶向髓质的巨噬细胞。在一些具体实施方式中，靶半体是一个或多个胺半体。
在一些方面，本文提供的组合物是免疫原性的。
在一些方面，提供了一种方法，包括向个体施用有效量的本文提供的任意组合物以调节免疫应答。在一些具体实施方式中，组合物为有效诱导或增强免疫应答的量。在一些具体实施方式中，组合物为有效抑制免疫应答的量。在一些具体实施方式中，组合物为引导或重引导免疫应答的量。在一些具体实施方式中，方法用于预防和/或治疗本文鉴别的症状。
在一些具体实施方式中，当方法用于诱导或增强免疫应答时，个体患有或者易于患上癌症、传染性疾病、非自身免疫代谢或退行性疾病、变态反应性疾病、过敏性疾病或上瘾症。在一些具体实施方式中，个体已经暴露于或可能暴露于毒素。在一些具体实施方式中，个体已经暴露于或可能暴露于来自化学武器的毒素。在一些具体实施方式中，个体已经暴露于或可能暴露于来自有害的环境物质的毒素。在一些具体实施方式中，纳米载体包含B细胞抗原、免疫刺激试剂和T细胞抗原，例如普遍T细胞抗原。在一些具体实施方式中，纳米载体还包含靶半体。
在一些具体实施方式中，当方法用于治疗或预防上瘾症(或用于治疗已经暴露于或可能暴露于毒素的个体)时，纳米载体还包含令人上瘾的物质或毒素、佐剂和T细胞。在一些具体实施方式中，方法在攻击性试剂到达其效应位点(例如大脑时)产生结合并中和攻击性试剂的高效价抗体。在一些具体实施方式中，令人上瘾的物质或毒素以高密度存在于纳米载体表面。
在一些具体实施方式中，传染性疾病是慢性病毒感染。在一些具体实施方式中，慢性病毒感染是HIV、HPV、HBV或HCV感染。在一些具体实施方式中，传染性疾病是细菌感染或由细菌感染引起。在一些具体实施方式中，个体患有或易于患上假单胞菌感染、肺炎球菌感染、肺结核、疟疾、利什曼病、幽门螺旋杆菌、葡萄状球菌感染或沙门氏菌感染。在一些具体实施方式中，传染性疾病是真菌感染或由真菌感染引起。在一些具体实施方式中，传染性疾病是寄生虫感染或由寄生虫感染引起。在一些具体实施方式中，传染性疾病是原生动物感染或由原生动物感染引起。在一些具体实施方式中，个体患有或易于患上流感。
在一些具体实施方式中，当方法用于抑制或重引导免疫应答时，个体患有或易于患上过敏性疾病或自身免疫疾病。在一些具体实施方式中，个体具有食物过敏症。在一些具体实施方式中，个体对奶或其它奶成分(例如乳糖)、鸡蛋、花生、树木果仁(胡桃仁、腰果仁等)、鱼类、贝壳、大豆或小麦过敏。在一些具体实施方式中，方法用于使个体对抗原例如变应原产生耐受。在一些具体实施方式中，自身免疫疾病是狼疮、多发性硬化、类风湿性关节炎、I型糖尿病、炎症性肠病、甲状腺炎或腹腔疾病。在一些具体实施方式中，个体已经接受或即将接受移植，方法可用于防止或改善移植排斥。在一些具体实施方式中，纳米载体包含抗原和免疫抑制剂或诱导调节性T细胞的试剂。在一些具体实施方式中，纳米载体还包含靶半体。一般地，当方法用于抑制免疫应答时，抗原以不含佐剂的方式提供。
在一些用于治疗过敏症的具体实施方式中，纳米载体包括变应原和免疫刺激试剂(例如佐剂，如TLR激动剂)。
在一些具体实施方式中，组合物以调节免疫应答(例如从Th2到Th1免疫应答)的有效量施用。在一些具体实施方式中，个体患有或即将患上过敏性疾病。在一些具体实施方式中，纳米载体包含抗原例如变应原，和免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，纳米载体还包含靶半体。
在一些方面，提供了用于将免疫调节试剂输送到免疫系统细胞的疫苗纳米载体。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含至少一个能够诱导B细胞和/或T细胞中免疫应答的免疫调节试剂。在确定的具体实施方式中，存在于纳米载体表面的免疫调节试剂刺激B细胞，和包埋于纳米载体内的免疫调节试剂被处理并被呈递至T细胞。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含至少一个用于将疫苗纳米载体选择性地输送至特异性抗原呈递细胞(APC)的靶半体。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包含分离的和/或重组蛋白或肽、碳水化合物、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、灭活的生物和病毒、死的生物和病毒、遗传改变的生物或病毒，和细胞提取物。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包含核酸、碳水化合物、脂和/或小分子。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是引发免疫应答的试剂。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是抗原。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂用于疫苗。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是任何源自病原体的蛋白和/或其它抗原。病原体可以是病毒、细菌、真菌、原生动物、寄生虫等。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以为完整的被杀死的生物、肽、蛋白、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、碳水化合物或其组合的形式。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体的所有的免疫调节试剂彼此相同。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体的所有的免疫调节试剂是不同的。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体精确地包含一类独特类型的(即一种)免疫调节试剂。例如，当免疫调节试剂是抗原时，疫苗纳米载体中的所有的抗原都是相同的。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体精确地包含两类不同类型的免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两类以上不同类型的免疫调节试剂。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含单一类型的刺激B细胞中免疫应答的免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含单一类型的刺激T细胞中免疫应答的免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种类型免疫调节试剂，其中第一种类型免疫调节试剂刺激B细胞，和第二种类型免疫调节试剂刺激T细胞。在一些具体实施方式中，所有上述试剂可以同时刺激B细胞和T细胞，但不是必须这样。在确定具体实施方式中，上述免疫调节试剂分别只刺激B细胞或T细胞。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上类型的免疫调节试剂，其中一种或多种类型免疫调节试剂刺激B细胞，和一种或多种类型免疫调节试剂刺激T细胞。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含脂膜(例如脂双层、脂单层等)。至少一个免疫刺激试剂可以与脂膜结合。在一些具体实施方式中，至少一个免疫刺激试剂嵌入脂膜内，嵌入脂双层的腔内，与脂膜的内表面结合，和/或包埋于疫苗纳米载体的脂膜内。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含聚合物(例如聚合物核心)。免疫调节试剂可以与聚合物结合，和在一些具体实施方式中，至少一种类型的免疫调节试剂与聚合物结合。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂嵌入聚合物内，与聚合物的内表面结合，和/或包埋于疫苗纳米载体的聚合物内，和，在一些具体实施方式中，至少一种类型的免疫调节试剂嵌入聚合物内，与聚合物的内表面结合，和/或包埋于疫苗纳米载体的聚合物内。
在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体包含90％重量以下的、75％重量以下的、50％重量以下的、40％重量以下的、30％重量以下的、20％重量以下的、15％重量以下的、10％重量以下的、5％重量以下的、1％重量以下的、或者0.5％重量以下的免疫调节试剂。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体与至少一个靶半体结合。在一些具体实施方式中，靶半体可以是核酸、多肽、肽、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、碳水化合物、脂、小分子等。例如，靶半体可以是结合至细胞类型特异性标记物的核酸靶半体(例如适配子
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等)。在一些具体实施方式中，靶半体可以是针对细胞表面蛋白的天然产生的或合成的配体，例如DEC-205、CD169、CD11b等。靶半体的例子还包括本文其它地方提供的那些，例如上文描述的那些。
根据本发明，靶半体识别一个或多个与特定的器官、组织、细胞和/或亚细胞位点相关的“靶”或“标记物”。在一些具体实施方式中，靶可以是与一个或一些细胞类型、与一个或一些疾病，和/或与一个或一些发育阶段唯一相关或主要相关的标记物。所靶向的细胞的例子包括抗原呈递细胞(APC)，例如树突状细胞、滤泡树突状细胞和巨噬细胞。巨噬细胞的一个例子是被膜下窦巨噬细胞。所靶向的其它的细胞包括T细胞和B细胞。在一些具体实施方式中，靶可以包含蛋白、碳水化合物、脂和/或核酸。在一些具体实施方式中，靶是肿瘤标记物。在一些具体实施方式中，靶是APC标记物。在一些具体实施方式中，靶是T细胞标记物。在一些具体实施方式中，靶半体靶向次级淋巴组织或器官。次级淋巴组织或器官包括淋巴结、脾、派亚氏淋巴丛、阑尾或扁桃体。
在一些具体实施方式中，靶是树突状细胞标记物。在一些具体实施方式中，DC标记物包括DC-205、CD11c、II类MHC、CD80、CD86、DC-SIGN、CD11b、BDCA-1、BDCA-2、BDCA-4、Siglec-H、CX3CR1和/或Langerin。这样的标记物的例子在本文其它地方提供。
在一些具体实施方式中，靶是被膜下窦巨噬细胞标记物。在一些具体实施方式中，SCS-Mph标记物包括CD169(即唾液酸粘附素)、CD11b(即CD11b/CD18、Mac-1、CR3或αMβ2整合素)、Fc受体，和/或甘露糖受体(即多价血凝素)，这些蛋白皆为主要在SCS-Mph上表达。这样的标记物的例子在本文其它地方提供。
在一些具体实施方式中，靶是B细胞标记物。在一些具体实施方式中，B细胞标记物可以包括补体受体、CR1(即CD35)或CR2(即CD21)，这些蛋白是B细胞上表达的。在一些具体实施方式中，可以通过B细胞标记物例如CD19、CD20和/或CD22实现靶向B细胞。在一些具体实施方式中，可以通过B细胞标记物例如CD40、CD52、CD80、CXCR5、VLA-4、II类MHC、表面IgM或IgD、APRL和/或BAFF-R实现靶向B细胞。这样的标记物的例子在本文其它地方提供。
在一些具体实施方式中，靶是FDC标记物。在一些具体实施方式中，FDC标记物包括补体受体、CR1(即CD35)或CR2(即CD21)，这些蛋白是FDC上表达的。这样的标记物的例子在本文其它地方提供。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含单一类型的靶半体，其引导疫苗纳米载体输送至单一的细胞类型(例如仅输送至SCS-Mph)。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含单一类型的靶半体，其引导疫苗纳米载体输送至多种细胞类型(例如既输送至SCS-Mph又输送至FDC，或既输送至SCS-Mph又输送至DC)。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种类型靶半体，其中第一种类型靶半体引导疫苗纳米载体输送至一种细胞类型，和第二种类型靶半体引导疫苗纳米载体输送至第二种细胞类型。例如，在一些具体实施方式中，第一种类型靶半体引导输送至SCS-Mph，和第二种类型靶半体引导输送至DC。作为另一个例子，第一种类型靶半体引导输送至SCS-Mph，和第二种靶半体引导输送至FDC。
在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体包含50％重量以下的、40％重量以下的、30％重量以下的、20％重量以下的、15％重量以下的、10％重量以下的、5％重量以下的、1％重量以下的或0.5％重量以下的靶半体。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体可以转运一种或多种类型的能够帮助刺激免疫应答的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂通过激活APC以增强其免疫刺激能力而增大免疫应答。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂通过扩大针对特异性抗原的淋巴细胞应答而增大免疫应答。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂通过诱导局部调节子的释放(例如从多种细胞类型中释放细胞因子)而增大免疫应答。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含同时刺激B细胞和T细胞的单一类型的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种类型免疫刺激试剂，其中第一种类型免疫刺激试剂刺激B细胞，和第二种类型免疫刺激试剂刺激T细胞。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上类型的免疫刺激试剂，其中一种或多种免疫刺激试剂刺激B细胞，和一种或多种类型免疫刺激试剂刺激T细胞。
在一些具体实施方式中，可以使用多种检验来确定在B细胞或一组B细胞，或T细胞或一组T细胞中的免疫应答是否被调节。在一些具体实施方式中，检验评价细胞或一组细胞是否被“激活”。
在一些具体实施方式中，可以使用多种检验来确定在T细胞或一组T细胞中的免疫应答是否被刺激。在一些具体实施方式中，可以通过测定抗原诱导的T细胞产生的细胞因子情况而确定T细胞中免疫应答的刺激。在一些具体实施方式中，可以通过测定抗原诱导的T细胞的增殖情况而确定T细胞中免疫应答的刺激。在一些具体实施方式中，如果T细胞激活的细胞标记物相对于未刺激的细胞在不同水平表达(例如更高或更低的水平)则确定T细胞中有免疫应答。
在一些具体实施方式中，可以使用多种检验来确定在B细胞或一组B细胞中的免疫应答是否被刺激。在一些具体实施方式中，可以通过以下测定抗体效价、抗体亲和性、中和检验中的抗体表现、类别转换重组、抗原特异性抗体的亲和成熟、记忆B细胞的发育、长生血浆细胞(其能够长时间地产生大量的高亲和性抗体)的发育、生发中心的反应和/或中和检验中的抗体表现而确定B细胞中免疫应答的刺激。
疫苗纳米载体是包含例如至少一个能够刺激B细胞和/或T细胞中免疫应答的免疫调节试剂的物质。可以根据本发明使用任何疫苗纳米载体。
在一些具体实施方式中，纳米载体具有最大不超过100微米(μm)的尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有最大为300nm或以下的尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有最大为250nm或以下的尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有最大为200nm或以下的尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有最大为150nm或以下的尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有最大为100nm或以下的尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有最大为25nm至200nm的尺寸范围。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有最大为20nm至100nm的尺寸范围。
根据本发明可以使用多种不同的纳米载体。在一些具体实施方式中，纳米载体为球或椭圆球。在一些具体实施方式中，纳米载体为平的或板状的。在一些具体实施方式中，纳米载体为立方体或立方形。在一些具体实施方式中，纳米载体为椭圆或椭圆形。在一些具体实施方式中，纳米载体为圆柱体、圆锥体或棱锥。纳米载体可以是实心的或凹的且可以包含一个或多个层。在一些具体实施方式中，每个层相对于其它层具有独特的成分和独特的特性。仅举一例，纳米载体可以具有核心/壳结构，其中核心是一个层(例如聚合物核心)而壳是第二个层(例如脂双层或单层)。纳米载体可以包含多个不同的层。在一些具体实施方式中，一个层可以是实质上交联的，第二个层不是实质上交联的，等等。在一些具体实施方式中，一个层、一些层或所有不同的层可以包含一个或多个免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或其组合。在一些具体实施方式中，一个层包含免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂，第二个层不包含免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂，等等。在一些具体实施方式中，每一个单个的层包含不同的免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或其组合。
在一些具体实施方式中，纳米载体可以可选地包含一个或多个脂。在一些具体实施方式中，纳米载体是脂质体。在一些具体实施方式中，纳米载体包含脂双层。在一些具体实施方式中，纳米载体包含脂单层。在一些具体实施方式中，纳米载体是胶团(micelle)。在一些具体实施方式中，纳米载体包含由脂层(例如脂双层、脂单层等)环绕的聚合物基质核心。在一些具体实施方式中，纳米载体包含由脂层(例如脂双层、脂单层等)环绕的非聚合物核心(例如金属颗粒、量子点、陶颗粒、骨颗粒、病毒颗粒等)。
在一些具体实施方式中，纳米载体包含一个或多个聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物基质可由包被层(例如脂质体、脂单层、胶团等)环绕。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以与聚合物基质结合。在这样的具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂有效包埋于纳米载体内。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以与纳米载体共价结合。在一些具体实施方式中，共价结合由连接子介导。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂与纳米载体非共价结合。例如，在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂包埋于聚合物基质、脂膜等内，或由聚合物基质、脂膜等环绕，和/或分布在聚合物基质、脂膜等中。作为选择，抑或是另外，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以通过疏水相互作用、电荷相互作用、范德华力等与聚合物基质、脂膜等结合。
众多的聚合物和从其中形成聚合物基质的方法在药物输送领域是已知的。一般地，聚合物基质包含一个或多个聚合物。根据本发明可以使用任何聚合物。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是均聚物或包含两个或多个单体的共聚物。在序列方面，共聚物可以是无规，嵌段或包含无规和嵌段序列的组合。根据本发明的聚合物可以是有机聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物是树状聚合物或聚合物的混合体。
聚合物的例子包括聚乙烯，聚碳酸酯(如聚(1，3-二恶烷-2酮))，聚酐(如聚(癸二酸酐))，聚羟基酸(如聚(β-羟基烷酸酯))，聚丙基丁烯二酸酯，聚己内酯，聚酰胺(如聚己内酰胺)，聚缩醛，聚醚，聚酯(如聚乳酸，聚甘醇酸)，聚(原酸酯)，聚腈基丙烯酸酯，聚乙烯醇，聚氨酯，聚磷腈，聚丙烯酸酯，聚甲基丙烯酸酯，聚脲，聚苯乙烯和聚胺。
在一些具体实施方式中，纳米载体包含包埋于反胶团内的免疫调节试剂。仅举一例，脂质体纳米载体可以包含包埋于脂质体膜内的疏水性免疫调节试剂，和在脂质体纳米载体内部发现的与反胶团包埋的亲水性免疫调节试剂。
在一些具体实施方式中，纳米载体不包含聚合物成分。在一些具体实施方式中，纳米载体包含金属颗粒、量子点、陶颗粒、骨颗粒、病毒颗粒等。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂与这样的非聚合物纳米载体的表面结合。在一些具体实施方式中，非聚合物纳米载体是非聚合物成分的聚集体，例如金属原子(例如金原子)的聚集体。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂与非聚合物成分的聚集体的表面结合，包埋于非聚合物成分的聚集体内，由非聚合物成分的聚集体环绕，和/或分布在非聚合物成分的聚集体中。
在一些具体实施方式中，纳米载体可以可选地包含一个或多个两性物质(即同时具有亲水性和疏水性的物质)。在一些具体实施方式中，两性物质可以促进具有增加的稳定性、改善的一致性或增加的粘性的纳米载体的产生。
在一些具体实施方式中，纳米载体包含一个或多个与纳米载体的外表面结合和/或包埋于纳米载体内的纳米颗粒。
可以使用本领域任何已知的方法制备纳米载体。例如，颗粒纳米载体制剂可以通过以下方法制成：例如纳米沉淀，使用液体通道的流动聚焦，喷雾干燥，单一和双乳剂溶剂挥发，溶剂提取，相分离，碾磨，微乳程序，微细加工，纳米级加工，牺牲层，单一和复合凝聚，以及其它本领域普通技术人员熟知的方法。作为选择，抑或是另外，可以使用用于单分散半导体、导电性的、磁性的、有机的和其它纳米颗粒的水性和有机溶剂综合体。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂不与纳米载体共价结合。例如，纳米载体可以包含聚合物基质，和免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂等与本发明的纳米载体的聚合物基质的表面结合，包埋于本发明的纳米载体的聚合物基质内，和/或分布在本发明的纳米载体的聚合物基质中。免疫调节试剂可以通过扩散、纳米载体的降解和/或其组合而被释放。在一些具体实施方式中，纳米载体的聚合物通过骨架侵蚀而降解。在一些具体实施方式中，纳米载体的聚合物通过表面侵蚀而降解。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂与颗粒共价结合。在一些具体实施方式中，共价结合通过一个或多个连接子介导。根据本发明可以使用任何合适的连接子。在一些具体实施方式中，连接子是可切割的连接子(例如酯键、酰胺键、二硫键等)。
在一些具体实施方式中，纳米载体通过自组装制备。作为例子，将脂与亲脂性免疫调节试剂混合，然后在固体表面制成薄膜。将亲水性免疫调节试剂溶于水性溶液，然后加入脂膜中在振荡中将脂水解。将具有亲脂性免疫调节试剂的脂质体整合入双层壁中，和脂质体腔内的亲水性免疫调节试剂自发组装。在一些具体实施方式中，将预制的聚合物纳米颗粒在轻微振荡下与小脂质体混合以诱导脂质体融合至聚合物纳米颗粒表面。
作为另一个例子，首先将待包埋的亲水性免疫调节试剂通过在挥发性的可与水混溶的有机溶剂中与天然来源的且非毒性的两性物质混合而整合入反胶团。在一些具体实施方式中，在形成反胶团之后加入生物可降解聚合物。将得到的生物可降解聚合物-反胶团混合物与不可溶于聚合物的亲水性非溶剂结合，通过溶剂快速扩散至非溶剂中以及有机溶剂的挥发而形成纳米颗粒。
在一些具体实施方式中，脂单层稳定的聚合物纳米载体用于输送一个或多个免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，首先将亲水性免疫调节分子与脂肪的极性端基团进行化学地偶联。在含有一种或多种可与水混溶的溶剂的水性溶液中将偶联物与一定比例的未偶联脂肪分子混合。在可与水混溶的或部分与水混溶的有机溶剂中将生物可降解聚合物材料与待包埋的疏水性免疫调节试剂混合。将得到的聚合物溶液加入偶联的和未偶联的脂肪的水性溶液中，通过有机溶剂快速扩散至水中以及有机溶剂的挥发而产生纳米颗粒。
本文描述的组合物和方法可用于预防和/或治疗任何传染性疾病、失调和/或病症。其它的疾病、失调和/或病症的例子中本文其它地方提供。在一些具体实施方式中，根据本发明的疫苗纳米载体可用于疾病、失调和/或病症的一个或多个征状或特征的治疗、减轻、改善、缓解、延迟其发作、抑制其进展，减轻其严重程度和/或降低其发生率。在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体可用于微生物感染(例如细菌感染、真菌感染、病毒感染、寄生虫感染等)的一个或多个征状或特征的治疗、减轻、改善、缓解、延迟其发作、抑制其进展，减轻其严重程度和/或降低其发生率。在一些具体实施方式中，微生物感染的预防和/或治疗包括向有需要的个体施用治疗上有效量的本发明的疫苗纳米载体，以足够达到所需要效果的量和时间。在本发明的一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体的“治疗上有效量”是指对本文提供的疾病、失调和/或病症的一个或多个征状或特征能有效地治疗、减轻、改善、缓解、延迟其发作、抑制其进展，减轻其严重程度和/或降低其发生率的量。
在一些具体实施方式中，本发明的预防和/或治疗规程包括向个体施用治疗上有效量的一个或多个本发明的疫苗纳米载体，从而调节免疫应答(例如同时刺激T细胞和/或B细胞)。
本发明提供了新型的组合物，其包含治疗上有效量的一个或多个疫苗纳米载体和一个或多个药学上可接受的赋形剂。在一些具体实施方式中，本发明提供了包含本文所描述的本发明的疫苗纳米载体的药物组合物。组合物可以包含一种以上类型的纳米载体，每种类型具有不同的成分(例如免疫调节试剂、靶试剂、免疫刺激试剂、赋形剂等)。根据一些具体实施方式，提供了向有需要的个体(例如人)施用包含本发明组合物的药物组合物的方法。
在一些具体实施方式中，在诊断疾病、失调和/或病症之前、与之同时和/或诊断之后将治疗上有效量的本发明的疫苗纳米载体组合物输送至病人和/或动物。在一些具体实施方式中，在疾病、失调和/或病症的征状发作之前、与之同时和/或发作之后将治疗上有效量的本发明的疫苗纳米载体组合物输送至病人和/或动物。在一些具体实施方式中，在暴露于传染性试剂之前将治疗上有效量的本发明的疫苗纳米载体组合物输送至病人和/或动物。在一些具体实施方式中，在暴露于传染性试剂之后将治疗上有效量的本发明的疫苗纳米载体组合物输送至病人和/或动物。在一些具体实施方式中，在暴露于令人上瘾的物质或毒素之前将治疗上有效量的本发明的疫苗纳米载体组合物输送至病人和/或动物。在一些具体实施方式中，在暴露于令人上瘾的物质或毒素之后将治疗上有效量的本发明的疫苗纳米载体组合物输送至病人和/或动物。
在一些具体实施方式中，本发明的药物组合物通过多种途径施用，包括口服、静脉内、肌肉内、动脉内、髓内、囊内、皮下、心室内、经皮、真皮内、直肠、阴道内、腹膜内、局部(通过粉末、膏、药膏和/或滴液)、经皮、粘膜、鼻、口腔、肠、舌下；通过气管内灌注、支气管灌注和/或吸入；和/或作为口喷雾剂、鼻喷雾剂和/或气雾剂。在一些具体实施方式中，组合物经口服施用。在一些具体实施方式中，组合物通过非肠道施用。在一些具体实施方式中，组合物通过肌肉内注射施用。
在一些具体实施方式中，延缓疾病、失调和/或病症(例如特定的微生物感染)发作和/或进展的疫苗纳米载体可以通过与一个或多个治疗疾病、失调和/或病症的症状的另外的治疗性试剂组合施用。例如，疫苗纳米载体可以与抗癌试剂、抗感染试剂、抗生素或抗病毒试剂组合使用。
本发明提供了多种包含一个或多个本发明的纳米载体的试剂盒。例如，本发明提供了包含本发明的纳米载体和使用说明书的试剂盒。试剂盒可以包含多个不同的纳米载体。试剂盒可以包含在任何组合中的任何一些另外的成分或反应试剂。根据本发明的一些具体实施方式，试剂盒可以包括，例如(i)包含至少一个免疫调节试剂(其中至少一个免疫调节试剂能够同时刺激T细胞和/或B细胞应答)，至少一个靶半体，和/或至少一个免疫刺激试剂的纳米载体；(ii)向有需要的个体施用纳米载体的说明书。在一些具体实施方式中，试剂盒可以包括，例如(i)至少一个免疫调节试剂，其中至少一个免疫调节试剂能够同时刺激T细胞和B细胞应答；(ii)至少一个靶半体；(iii)至少一个免疫刺激试剂；(iv)聚合物基质前体；(v)脂和两性物质；(vi)从单独成份(i)-(v)制备本发明的疫苗纳米载体的说明书。
在一些具体实施方式中，试剂盒包含本发明的纳米载体和进行混合的说明书。在一些具体实施方式中，这样的试剂盒还包含免疫刺激试剂和/或抗原。这样的试剂盒的纳米载体可以包含免疫调节试剂(例如T细胞抗原，如普遍T细胞抗原)和/或靶半体。T细胞抗原和/或靶半体可以在纳米载体的表面。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂和抗原是相同的。在一些具体实施方式中，它们是不同的。
在上文描述的任何具体实施方式中，除非上下文清晰表明，否则单词偶联的意思是共价或非共价偶联。在上文描述的任何具体实施方式中，单词包埋的意思是通过混合、通过环绕核心的壳、通过共价结合纳米载体表面的内部等方式物理地陷在其内。
本申请引用各种授权的专利、公开的专利申请、期刊论文和其他出版物，通过引用全部并入本文。
定义
被滥用的物质：如本文所用的术语“被滥用的物质”是指由个体(例如人)为了该物质所指明的目的之外的目的而摄入或以医生所指导的方式或剂量之外的方式或剂量而摄入的任何物质。在一些具体实施方式中，被滥用的物质是药物，例如非法药物。在一些具体实施方式中，被滥用的物质是非处方药药。在一些具体实施方式中，被滥用的物质是处方药。在一些具体实施方式中，被滥用的物质是令人上瘾的物质。在一些具体实施方式中，被滥用的物质具有改变情绪的效应，因此包括吸入剂和溶剂。在一些具体实施方式中，被滥用的物质是不具有改变情绪效应或兴奋特性的物质，因此包括合成代谢类固醇。被滥用的物质包括但不限于，大麻成分(例如，以印度大麻提炼的麻药(hashish)、大麻(marijuana))，镇静剂(例如，巴比妥酸盐、苯二氮卓、氟硝西泮(Rohypnol)、GHB、安眠酮(quaaludes))，意识状态分离麻醉药(dissociative anesthetic)(例如，克他命、PCP)，迷幻剂(例如，LSD、酶斯卡灵、墨西哥蕈类提炼出的迷幻药(psilocybin))，鸦片和吗啡衍生物(例如，可待因、芬太奴、海洛因、吗啡、鸦片)，刺激剂(安非他明、可卡因、狂喜迷幻药(Ecstacy)(MDMA)、甲基苯丙胺、哌醋甲酯(利他林)、尼古丁)，合成代谢类固醇和吸入剂。在一些具体实施方式中，用于在纳米载体中吸入的被滥用的物质是完整分子或其一部分。
令人上瘾的物质：如本文所用的术语“令人上瘾的物质”是引起迷念、强迫或物理依赖性或心理依赖性的物质。在一些具体实施方式中，令人上瘾的物质是非法药物。在其它具体实施方式中，令人上瘾的物质是非处方药。在另外的具体实施方式中，令人上瘾的物质是处方药。令人上瘾的物质包括但不限于，可卡因、海洛因、大麻、甲基苯丙胺和尼古丁。在一些具体实施方式中，用于在纳米载体中吸入的被滥用的物质是完整分子或其一部分。
氨基酸：如本文所用的术语“氨基酸”在其最广泛意义上是指能够被引入多肽链的任何化合物和/或物质。在一些具体实施方式中，氨基酸具有基本结构H2N-C(H)(R)-COOH。在一些具体实施方式中，氨基酸是天然产生的氨基酸。在一些具体实施方式中，氨基酸是合成氨基酸；在一些具体实施方式中，氨基酸是D-氨基酸；在一些具体实施方式中，氨基酸是L-氨基酸。“标准氨基酸”或“天然氨基酸”是指天然产生的肽中的20种常见的标准L-氨基酸中的任何一种。“非标准氨基酸”是指除了标准氨基酸之外的任何氨基酸，不论其是合成制备的还是从天然来源获得的。如本文所用的“非天然氨基酸”包括化学产生的或修饰的氨基酸，包括但不限于盐，氨基酸衍生物(例如酰胺)和/或取代物。氨基酸(包括肽的羧基-和/或氨基-末端氨基酸)可以通过能够改变肽的循环半衰期而对其活性无副影响的甲基化、酰胺化、乙酰化和/或以其它化学基团的取代而被修饰。氨基酸可以参与二硫键。术语“氨基酸”与“氨基酸残基”不加区分地使用，可以指代游离氨基酸和/或肽的氨基酸残基。在该术语所在的上下文中可以清晰地显示其是指游离氨基酸还是指肽的残基。
动物：如本文所用的术语“动物”是指动物界的任何成员。在一些具体实施方式中，“动物”是指任何发育阶段的人。在一些具体实施方式中，“动物”是指任何发育阶段的非人动物。在一些具体实施方式中，非人动物是指哺乳动物(例如啮齿类、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、绵羊、牛、灵长类和/或猪)。在一些具体实施方式中，动物包括但不限于哺乳动物、鸟、爬虫动物、两栖动物、鱼和/或软体动物。在一些具体实施方式中，动物可以是转基因动物、遗传工程化动物和/或克隆体。
抗体：如本文所用的术语“抗体”是指任何免疫球蛋白，不论是天然的或完全或部分合成产生的。其所有的保持特异性结合能力的衍生物也包括在该术语中。该术语还涵盖了任何具有与免疫球蛋白结合结构域同源或大量同源的结合结构域的蛋白。这样的蛋白可以来自天然来源，或部分或全部合成产生。抗体可以是单克隆或多克隆的。抗体可以是任何免疫球蛋白类别的成员，包括任何人类的类别：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。如本文所用的术语“抗体片段”或“抗体的特征性部分”不加区分地使用，其是指抗体的任何小于其全长的衍生物。抗体片段能够保持全长抗体的特异性结合能力的至少显著性的部分。这样的抗体片段的例子包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2、scFv、Fv、dsFv二体和Fd片段。抗体片段还包括Fc片段。抗体片段可以是通过任何方式产生的。例如，抗体片段可以通过完整抗体的片段化经酶式作用或化学产生和/或其可以通过从编码部分抗体序列的基因经重组产生。作为选择，抑或是另外，抗体片段可以全部或部分合成产生。抗体片段可选地可以包含单链抗体片段。作为选择，抑或是另外，抗体片段可以包含多条连接在一起(例如通过二硫连接)的链。抗体片段可选地可以包含多分子复合体。功能性抗体片段通常包含至少约50个氨基酸，更通常将包含至少约200个氨基酸。
大约：除非另有指明或从上下文可以断定，否则在指称数字时如本文所用的术语“大约”或“约”一般是包括落在该数字的每一方向(大于或小于)5％、10％、15％或20％范围内的数字(除非当这样的数字将低于可能数值的0％或超过可能数值的100％)。
与……结合：如本文所用的术语“与……结合”是指两个或两个以上物质通过直接或间接的共价或非共价相互作用而连接的状态。在一些具体实施方式中，结合是共价的。在一些具体实施方式中，共价结合由连接半体介导。在一些具体实施方式中，结合是非共价的(例如电荷相互作用、亲和相互作用、金属配合、物理吸附、主客体相互作用、疏水相互作用、TT堆积相互作用、氢键相互作用、范德华力相互作用、磁性相互作用、静电相互作用、偶极-偶极相互作用等)。例如，在一些具体实施方式中，物质(例如免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂、纳米颗粒等)可以与疫苗纳米载体共价结合。在一些具体实施方式中，物质(例如免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂、纳米颗粒等)可以与疫苗纳米载体非共价结合。例如，物质可以与本发明的疫苗纳米载体的脂双层、脂单层、聚合物基质等的表面结合，包埋于本发明的疫苗纳米载体的脂双层、脂单层、聚合物基质等之内，由本发明的疫苗纳米载体的脂双层、脂单层、聚合物基质等环绕，和/或分布在本发明的疫苗纳米载体的脂双层、脂单层、聚合物基质等之中。
生物可兼容：如本文所用的术语“生物可兼容”是指对细胞无毒性的物质。在一些具体实施方式中，如果在体内向细胞加入一种物质而不在体内诱导炎性和/或其它副作用的话，则认为该物质是“生物可兼容”的物质。在一些具体实施方式中，如果在体外或在体内向细胞加入一种物质而引起低于或等于约50％、约45％、约40％、约35％、约30％、约25％、约20％、约15％、约10％、约5％、低于约5％的细胞死亡的话，则认为该物质是“生物可兼容”的物质。
生物可降解的：如本文所用的术语“生物可降解的”是指在生理条件下降解的物质。在一些具体实施方式中，生物可降解的物质是由细胞机制分解的物质。在一些具体实施方式中，生物可降解的物质是由化学过程分解的物质。
B细胞抗原：如本文所用的术语“B细胞抗原”是指任何由B细胞中的免疫应答识别并激发B细胞中的免疫应答的抗原。在一些具体实施方式中，是B细胞抗原的抗原也是T细胞抗原。在一些具体实施方式中，B细胞抗原不同时是T细胞抗原。在一些具体实施方式中，当本文提供的纳米载体同时包含B细胞抗原和T细胞抗原时，B细胞抗原和T细胞抗原不是相同的抗原，虽然在一些具体实施方式中B细胞抗原和T细胞抗原每个均可以同时是B细胞抗原和T细胞抗原。在其它具体实施方式中，纳米载体的B细胞抗原和T细胞抗原是相同的。
细胞类型：如本文所用的术语“细胞类型”是指具有定义细胞类型的一组与众不同的形态学、生物化学和/或功能特性的细胞形式。本领域技术人员将认识到可以在不同的特异性水平定义细胞类型。例如，T细胞和B细胞是不同的细胞类型，其可以彼此区分开来，但共同具有一些作为更广的“淋巴细胞”(其均为淋巴细胞的成员)细胞类型的特性的特征。通常，不同类型的细胞可以基于多种基因(本领域称为特性细胞类型(例如特性品系的细胞类型)的“标记物”)的差异性表达而彼此区分开来。在一些具体实施方式中，不同类型的细胞可以基于其不同的功能而彼此区分开来。“细胞特异性标记物”是在这样的基因产物或其修饰版本，其在一种或多种细胞类型上相对于全部其它或多数其它细胞类型来说有显著较高水平的表达，并且其表达是该细胞类型的特性。很多细胞类型特异性标记物在本领域中是这样识别的。
有害的环境中的试剂：如本文所用的术语“有害的环境中的试剂”是指环境中发现的有害物质。这样的物质通常被认为具有健康风险。有害的环境中的试剂包括被认为具有健康风险而实际上可能不具有风险的物质。有害的环境中的试剂包括但不限于是砷、铅、汞、氯乙烯、多氯联苯、苯、多环芳香烃、镉、苯并(a)芘、苯并(b)荧蒽、氯仿、DDT，P，P’-、阿罗克洛1254(aroclor 1254)、阿罗克洛1260(aroclor 1260)、二苯并(a，h)蒽、三氯乙烯、狄氏剂(dieldrin)、六价铬和DDE，P，P’。在一些具体实施方式中，包含于纳米载体中的有害的环境中的试剂是完整分子或其一部分。
体外：如本文所用的术语“体外”是指在人工环境中发生的事件，例如在试管或反应管中，在细胞培养物中等，而不是在生物体(例如动物、植物和/或微生物)内。
体内：如本文所用的术语“体内”是指在生物体(例如动物、植物和/或微生物)内发生的事件。
免疫刺激试剂：如本文所用的术语“免疫刺激试剂”是指调节针对抗原的免疫应答的试剂，但不是抗原或源自抗原。如本文所用的术语“调节“是指诱导、增强、抑制、引导或重引导免疫应答。这样的试剂包括刺激(或增强)针对抗原的免疫应答的免疫刺激试剂，但是如上所述，其不是抗原或源自抗原。因此，免疫刺激试剂包括佐剂。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂在纳米载体表面和/或包埋于纳米载体内部。在一些具体实施方式中，纳米载体表面的免疫刺激试剂与包埋于纳米载体内部的免疫刺激试剂不同。在一些具体实施方式中，纳米载体包含一种以上类型的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，一种以上类型的免疫刺激试剂作用于不同的途径。免疫刺激试剂的例子包括本文其它地方提供的那些。
核酸：如本文所用的术语“核酸”在其最广泛的意义上是指被引入或能够被引入寡核苷酸链的任何化合物和/或物质。在一些具体实施方式中，核酸是指通过磷酸二酯键被引入或能够被引入寡核苷酸链的化合物和/或物质。在一些具体实施方式中，“核酸”是指单个核酸残基(例如核苷酸和/或核苷)。在一些具体实施方式中，“核酸”是指包含单个核酸残基的寡核苷酸链。如本文所用的术语“寡核苷酸”和“多核苷酸”不加区分地使用。在一些具体实施方式中，“核酸”包括RNA以及单链和/或双链DNA和/或cDNA。此外，术语“核酸”、“DNA”、“RNA”和/或相似的术语包括核酸类似物，即具有磷酸二酯骨架之外的类似物。例如，所谓的“肽核酸”，(其在本领域是已知的，在骨架中具有肽键而不是磷酸二酯键)被认为包含在本发明的范围内。术语“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括彼此为简并版本和/或编码相同氨基酸序列的所有的核苷酸序列。编码蛋白和/或RNA的核苷酸序列可以包括内含子。核酸可以从天然来源纯化，使用重组表达系统产生，可选地进行纯化、化学合成等。在合适的情况下(例如化学合成分子的情况)核酸可以包含核苷酸类似物例如具有化学修饰的碱基或糖、骨架修饰等的类似物。除非另有指明，否则核酸序列以5’至3’的方向呈现。如本文所用的术语“核酸片断”是指较长的核酸序列的一部分的核酸序列。在很多具体实施方式中，核酸片段包含至少3、4、5、6、7、8、9、10或更多个残基。在一些具体实施方式中，核酸是天然核苷或包含天然核苷(例如，腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)；核苷类似物(例如，2-氨基腺苷、2-硫胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、C-5丙炔基-胞苷、C-5丙炔基-尿苷、2-氨基腺苷、C-5溴尿苷、C-5氟尿苷、C-5碘尿苷、C-5丙炔基-尿苷、C-5丙炔基-胞苷、C-5甲基-胞苷、2-氨基腺苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-加氧腺苷、8-加氧鸟苷、O(6)-甲基鸟苷和2-硫胞苷)；化学修饰的碱基；生物修饰的碱基(例如，甲基化的碱基)；夹层碱基；修饰的糖(例如，2’-氟核糖、核糖、2’-脱氧核糖、阿拉伯糖和己糖)；和/或修饰的磷酸基团(例如硫代磷酸盐和5’-N-亚磷酰胺连接)。
颗粒：如本文所用的术语“颗粒”是指任何具有10微米(μm)以下直径的物质。通常，颗粒具有最长为1000nm或以下的尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，颗粒具有300nm或以下的直径。颗粒包括微米颗粒、纳米颗粒和皮可米颗粒。在一些具体实施方式中，纳米颗粒具有200nm或以下的直径。在一些具体实施方式中，纳米颗粒具有100nm或以下的直径。在一些具体实施方式中，纳米颗粒具有50nm或以下的直径。在一些具体实施方式中，纳米颗粒具有30nm或以下的直径。在一些具体实施方式中，纳米颗粒具有20nm或以下的直径。在一些具体实施方式中，纳米颗粒具有10nm或以下的直径。在一些具体实施方式中，颗粒可以是聚合物基质。在一些具体实施方式中，颗粒可以是非聚合物颗粒(例如金属颗粒、量子点、陶瓷、无机材料、骨等)。颗粒还可以是脂质体和/或胶团。如本文所用的术语“纳米颗粒”是指任何具有1000nm以下直径的颗粒。在一些具体实施方式中，本文提供的组合物的纳米载体具有500nm以下的平均几何直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有50nm以上但500nm以下的平均几何直径。在一些具体实施方式中，纳米载体群体的平均几何直径为约60nm、75nm、100nm、125nm、150nm、175nm、200nm、225nm、250nm、275nm、300nm、325nm、350nm、375nm、400nm、425nm、450nm或475nm。在一些具体实施方式中，平均几何直径为100-400nm、100-300nm、100-250nm或100-200nm。在一些具体实施方式中，平均几何直径为60-400nm、60-350nm、60-300nm、60-250nm或60-200nm。在一些具体实施方式中，平均几何直径为75-250nm。在一些具体实施方式中，纳米载体的群体中30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多的纳米载体具有500nM以下的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体的群体中10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多的纳米载体具有50nm以上但500nm以下的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体的群体中10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多的纳米载体具有约60nm、75nm、100nm、125nm、150nm、175nm、200nm、225nm、250nm、275nm、300nm、325nm、350nm、375nm、400nm、425nm、450nm或475nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体的群体中10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多的纳米载体具有100-400nm、100-300nm、100-250nm或100-200nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体的群体中10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多的纳米载体具有60-400nm、60-350nm、60-300nm、60-250nm或60-200nm的直径。
弱免疫原性的抗原：如本文所用的术语“弱免疫原性的抗原”是指不激发任何免疫应答或不激发想要的足够水平的免疫应答的抗原。如本文所用的“足够”是指当在不含本文描述的纳米载体的组合物中施用时(例如，在不存在纳米载体时作为游离抗原与佐剂混合)，引发可检测的或保护性免疫应答的能力。在一些具体实施方式中，想要的免疫应答是治疗或预防疾病或病症。在一些具体实施方式中，想要的免疫应答是减缓疾病或病症的一种或多种征状。弱免疫原性的抗原包括但不限于自身抗原、小分子和碳水化合物。
自身抗原：如本文所用的术语“自身抗原”是指动物体内的正常物质，当针对动物内的抗原的免疫应答被激发时，可以产生自身免疫性(例如，自身免疫疾病)。自身抗原可以是蛋白或肽、脂蛋白、脂、碳水化合物或核酸。核酸可以是DNA或RNA。自身抗原包括但不限于酶、结构蛋白、分泌的蛋白、细胞表面受体和细胞因子。在一些具体实施方式中，自身抗原是细胞因子，和细胞因子是TNF、IL-1或IL-6。在一些具体实施方式中，自身抗原是胆固醇酯转移蛋白(CETP)、负责将胆固醇从高密度脂蛋白(HDL)转移到低密度脂蛋白胆固醇(LDL)的血清蛋白、与Alzheimer病相关的Aβ蛋白、处理Aβ蛋白的病理形式的蛋白水解酶、与动脉硬化症相关的LDL或HIV-1的共同受体。在一些具体实施方式中，处理Aβ蛋白的病理形式的蛋白水解酶是β-分泌酶。在一些具体实施方式中，与动脉硬化症相关的LDL是氧化的或最小化修饰的。在一些具体实施方式中，HIV-1的共同受体是CCR5。
小分子：一般地，“小分子”在本领域中被理解为具有约2000g/mol以下大小的有机分子。在一些具体实施方式中，小分子为约1500g/mol以下或约1000g/mol以下。在一些具体实施方式中，小分子为约800g/mol以下或约500g/mol以下。在一些具体实施方式中，小分子是非聚合物和/或非寡聚物。在一些具体实施方式中，小分子不是蛋白、肽或氨基酸。在一些具体实施方式中，小分子不是核酸或核苷酸。在一些具体实施方式中，小分子不是糖或多糖。
特异性结合：如本文所用的术语“特异性结合”是指第一个和第二个半体的非共价物理结合，其中第一个和第二个半体之间的结合为每种半体与发生的环境中存在的多数或所有其它半体间的结合的至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍，或比之更强烈至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍。如果在所应用的条件下(例如在生理条件下，例如在细胞内或与细胞存活相一致)平衡解离常数Kd为10-3M或更低、10-4M或更低、10-5M或更低、10-6M或更低、10-7M或更低、10-8M或更低、10-9M或更低、10-10M或更低、10-11M或更低或10-12M或更低，则两个或两个以上物质的结合可以认为是特异性的。在一些具体实施方式中，特异性结合可以通过多个较弱的相互作用(例如，多个单独的相互作用，例如每个单独的相互作用的特征在于Kd为10-3M以上)实现。在一些具体实施方式中，特异性结合(其可被称为“分子识别”)是两个物质之间的可饱和的结合相互作用，其依赖于每个物质上的官能团的互补方向。特异性结合相互作用的例子包括适配子-适配子靶向相互作用、抗体-抗原相互作用、抗生物素-生物素相互作用、配体-受体相互作用、金属-螯合剂相互作用、互补核酸之间的杂交等。
个体：如本文所用的术语“个体”或“病人”是指接受本发明的组合物的任何生物，例如，为了实验、诊断和/或治疗目的。典型的个体包括动物(例如哺乳动物，如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类和人)和/或植物。
患有：“患有”疾病、失调和/或病症的个体已经被诊断、可能被诊断或表现出疾病、失调和/或病症的一个或多个征状。
易于患上：“易于患上”疾病、失调和/或病症的个体尚未被诊断患有和/或可能未表现出疾病、失调和/或病症。在一些具体实施方式中，疾病、失调和/或病症与微生物感染(例如细菌感染、病毒感染、真菌感染、寄生虫感染等)相关。在一些具体实施方式中，易于患上微生物感染的个体可能暴露于微生物(例如通过摄取、吸入、身体接触等)。在一些具体实施方式中，易于患上微生物感染的个体可能暴露于被微生物感染的个体。在一些具体实施方式中，易于患上微生物感染的个体是在微生物流行的地点的个体(例如旅行到微生物流行的地点的个体)。在一些具体实施方式中，易于患上疾病、失调和/或病症的个体将会患上疾病、失调和/或病症。在一些具体实施方式中，易于患上疾病、失调和/或病症的个体将不会患上疾病、失调和/或病症。在一些具体实施方式中，个体患有或易于患上癌症、传染性疾病、非自身免疫疾病或退行性疾病或上瘾症。在一些具体实施方式中，个体患有或易于患上细菌、真菌、原生动物、寄生虫或病毒感染。这样的传染是本文提供的任何微生物引起的。在一些具体实施方式中，个体患有或易于患上结核(tuberculosis)、疟疾(malaria)、利什曼病(leishmaniasis)、幽门螺旋杆菌(H.pylori)、葡萄状球菌(Staphylococcus)感染或沙门氏菌(Salmonella)感染。在一些具体实施方式中，个体患有或易于患上流感。在一些具体实施方式中，个体患有或易于患上自身免疫疾病、过敏症或哮喘。
T细胞抗原：如本文所用的术语“T细胞抗原”是指任何由T细胞中的免疫应答识别并激发T细胞中的免疫应答的抗原(例如由T细胞上的T细胞受体通过结合至主要组织相容性复合体分子(MHC)的抗原或其一部分的呈递而被特异性识别的抗原)。在一些具体实施方式中，是T细胞抗原的抗原也是B细胞抗原。在其它具体实施方式中，T细胞抗原不同时是B细胞抗原。T细胞抗原一般是蛋白或肽。T细胞抗原可以是刺激CD8+T细胞应答、刺激CD4+T细胞应答或同时刺激二者的抗原。因此，在一些具体实施方式中，纳米载体能够有效地同时刺激两种类型的应答。
靶：如本文所用的术语“靶”或“标记物”是指能够特异性结合至特别的靶半体的任何物质。在一些具体实施方式中，靶与一种或多种特别的组织类型特异性结合。在一些具体实施方式中，靶与一种或多种特别的细胞类型特异性结合。例如，细胞类型特异性标记物通常比参考细胞群体中的细胞类型的表达高至少2倍。在一些具体实施方式中，细胞类型特异性标记物的存在水平比参考群体中的平均表达高至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍或至少1000倍。对细胞类型特异性标记物的检测或测定使得可能将目标细胞类型从很多、多数或所有其它细胞类型中区分开。在一些具体实施方式中，靶包含蛋白、碳水化合物、脂和/或核酸，如本文所述。
靶向的：如果一种物质特异性与靶结合，为了本文描述的目的认为该物质是“靶向的”。在一些具体实施方式中，在严格条件下靶半体特异性与靶结合。如果靶半体特异性与靶结合，从而将完整纳米载体输送至特异性器官、组织、细胞和/或亚细胞位点，则认为包含靶半体的本发明的纳米载体(例如疫苗纳米载体)是“靶向的”。
靶半体：如本文所用的术语“靶半体”是指任何与细胞的成分结合的半体。在一些具体实施方式中，靶半体与细胞的成分特异性结合。这样的成分被称为“靶”或“标记物”。靶半体可以是多肽、糖蛋白、核酸、小分子、碳水化合物、脂等。在一些具体实施方式中，靶半体是抗体或其特征性部分。在一些具体实施方式中，靶半体是受体或其特征性部分。在一些具体实施方式中，靶半体是受体或其特征性部分。在一些具体实施方式中，靶半体是配体或其特征性部分。在一些具体实施方式中，靶半体是与细胞类型特异性标记物结合的核酸靶半体(例如适配子)。在一些具体实施方式中，靶半体是小分子。在一些具体实施方式中，靶半体在纳米载体表面。在其它具体实施方式中，靶半体包埋于纳米载体内部。在其它具体实施方式中，靶半体与纳米载体结合。在一些具体实施方式中，靶半体与纳米载体共价结合。在其它具体实施方式中，靶半体与纳米载体非共价结合。在其它具体实施方式中，靶半体结合细胞表面表达的受体。在一些具体实施方式中，靶半体结合可溶性受体。在一些具体实施方式中，可溶性受体是补体蛋白或预先存在的抗体。在其它具体实施方式中，靶半体用于将纳米载体输送至抗原呈递细胞、T细胞或B细胞。在一些具体实施方式中，抗原呈递细胞是巨噬细胞。在其它具体实施方式中，巨噬细胞是被膜下窦巨噬细胞。在其它具体实施方式中，抗原呈递细胞是树突状细胞。在一些具体实施方式中，抗原呈递细胞是滤泡树突状细胞。靶半体的特异性的非限制性例子包括与CD11b、CD169、甘露糖受体DEC-205、CD11c、CD21/CD35、CX3CR1或Fc受体结合的分子。在一些具体实施方式中，与上述任何一个结合的分子是抗体或其结合抗原的片段(例如抗-CD169抗体)。在一些具体实施方式中，与Fc受体结合的分子是包含免疫球蛋白(例如IgG)的Fc部分的分子。在其它具体实施方式中，免疫球蛋白的Fc部分是人类Fc部分。在一些具体实施方式中，与CX3CR1结合的分子是CX3CL1(fractalkine)。与CD169结合的靶半体包括抗-CD169抗体和CD169的配体，例如涎化的CD227、CD43、CD206或这些配体的保持结合功能的部分，例如可溶性部分。
治疗上有效的量：如本文所用的术语“治疗上有效的量”意思是当向患有或易于患上疾病、失调和/或病症的个体施用时，对于疾病、失调和/或病症足以治疗、减轻、改善、缓解、减轻其征状、预防、延迟其发作、抑制其进展，减轻其严重程度和/或降低其发生率的治疗性、预防性和/或诊断性试剂(例如本发明的疫苗纳米载体)的量。该术语还旨在指称本文提供的调节个体的免疫应答的纳米载体或其组合物的量。
治疗性试剂：如本文所用的术语“治疗性试剂”是指，当向个体施用时具有治疗性、预防性和/或诊断性效应和/或引发想要的生物学和/或药理学效应的任何试剂。
治疗：如本文所用的术语“治疗”是指特别的疾病、失调和/或病症的一个或多个征状或特征的部分或完全地减轻、改善、缓解、延迟其发作、抑制其进展，减轻其严重程度和/或降低其发生率。例如，“治疗”微生物感染可以指的是抑制微生物的存活、生长和/或传播。可以为了降低发展与疾病、失调和/或病症相关的病理的风险的目的而向未表现出疾病、失调和/或病症的迹象的个体和/或只表现出疾病、失调和/或病症的早期迹象的个体施加治疗。在一些具体实施方式中，治疗包括向个体输送本发明的疫苗纳米载体。
普遍T细胞抗原：如本文所用的术语“普遍T细胞抗原”是指能够促进T细胞帮助并增强针对完全不相关抗原的免疫应答的T细胞抗原。普遍T细胞抗原包括破伤风类毒素，以及源自破伤风类毒素、EB病毒或流感病毒的一个或多个肽。普遍T细胞抗原还包括流感病毒的成分，例如红血球凝聚素、神经氨糖酸苷酶或核蛋白，或一个或多个源自其中的肽。
疫苗纳米载体：如本文所用的术语“疫苗纳米载体”是指包含至少一个免疫调节试剂或免疫刺激试剂的物质。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包括至少两种类型免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是抗原，和疫苗纳米载体包含2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多种抗原。不同的抗原可以是完全不同的抗原性分子或源自完全不同的抗原性分子，或者不同的抗原可以是来自相同的抗原性分子的不同的表位。在其它具体实施方式中，疫苗纳米载体包含2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多种来自相同的抗原性分子的不同的表位。疫苗纳米载体可以是任何形式的颗粒。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体能够刺激T细胞和/或B细胞中的免疫应答。在其它具体实施方式中，疫苗纳米载体能够增强、抑制、引导或重引导免疫应答。在一些具体实施方式中，本领域的可利用的任何检验可用于确定T细胞和/或B细胞是否被刺激。在一些具体实施方式中，可以通过监视抗原诱导的细胞因子的产生、抗原诱导的T细胞的增殖和/或抗原诱导的蛋白表达的变化来检验T细胞的刺激。在一些具体实施方式中，可以通过监视抗体效价、抗体亲和性、中和检验中抗体的表现、类别转换重组、抗原特异性抗体的亲和成熟、记忆B细胞的发育、长生血浆细胞(其能够长时间地产生大量的高亲和性抗体)的发育、生发中心的反应和/或中和检验中抗体的表现来检验B细胞的刺激。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体还包含至少一个能够帮助将疫苗纳米载体输送至个体内的特定靶(例如器官、组织、细胞和/或亚细胞位点)的靶半体。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体还包含至少一个能够帮助刺激T细胞和/或B细胞中免疫应答的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体还包含至少一个允许可调的膜坚固性和可控的脂质体稳定性的纳米颗粒。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含脂、两性化合物、聚合物、糖、聚合物基质和/或非聚合物颗粒。
可溶于水的非吸附性聚合物：如本文所用的术语“可溶于水的非吸附性聚合物”是指在水中可溶并且赋予减少的生物垢特性的聚合物。在一些具体实施方式中，可溶于水的非吸附性聚合物是聚乙二醇、聚氧乙烯、聚烷撑二醇和聚亚烷基氧化物。
附图说明
图1：组合的疫苗靶向策略，以实现最佳的体液和细胞免疫应答。复合疫苗携带内源的T细胞抗原、佐剂(未显示)和用于DC、FDC和SCS-Mph的靶半体，以及用于B细胞识别的表面抗原。在皮下或肌肉内注射之后，材料通过引流淋巴管到达淋巴结并在每个APC积累(澄清一下：只显示了APC特异性的靶半体，但是每个APC都获得整个的复合物)。DC将复合物内在化并消化，将I类和II类MHC中的抗原性的肽分别呈递至CD8和CD4T细胞。激活的T细胞分化成调节细胞免疫应答的效应/记忆(TEff/Mem)细胞。TFH细胞向B细胞(最初被SCS-Mph上的抗原刺激，在此过程中获得并处理T细胞抗原以重刺激TFH)提供帮助。TFH细胞提供的帮助允许发生GC反应，在GC反应中B细胞增殖并产生高亲和性抗体。
图2：SCS-Mph与淋巴上携带的病毒颗粒结合并将其呈递至滤泡B细胞。(A)小鼠腘淋巴结的皮层的免疫组化染色(以抗-CD169染色，并以小麦胚芽凝集素复染)。在足底注射红色荧光的泡性口炎病毒(VSV)之后30分钟收获淋巴结。在引流淋巴结的被膜下窦中，红色的病毒专有性地与CD169+巨噬细胞共区域化。(B)注射VSV之后30分钟，在被膜下窦(SCSf)的基底下面的淋巴结巨噬细胞(Mph)和滤泡B细胞(B1)的电子显微镜图显示VSV位于表面，位于Mph的吞噬溶酶体内和Mph和B细胞的交界处(箭头)。(C)向未经处理的小鼠(B6)足底注射VSV导致病毒特异性B细胞上表面表达的IgM的迅速下调，这是B细胞激活的标志。通过足底注射膦酸盐脂质体(CLL)除去SCS-Mph之后，B细胞激活被消除，这表明SCS-Mph对于将微粒抗原呈递至B细胞是必需的。
图3：示例性的脂质体纳米载体，其中亲脂性免疫调节试剂整合在膜中，和亲水性免疫调节试剂包埋于脂质体内。
图4：示例性的纳米颗粒稳定化的脂质体纳米载体，其中亲脂性免疫调节试剂整合在膜中，和亲水性免疫调节试剂包埋于脂质体内。
图5：示例性的脂质体-聚合物纳米载体，其中亲脂性免疫调节试剂整合在膜中，和疏水性免疫调节试剂包埋于聚合物纳米颗粒内。
图6：示例性的纳米颗粒稳定化的脂质体-聚合物纳米载体，其中亲脂性免疫调节试剂整合在膜中，和疏水性免疫调节试剂包埋于聚合物纳米颗粒内。
图7：示例性的包含反胶团的脂质体-聚合物纳米载体，其中亲脂性免疫调节试剂整合在膜中，和亲水性免疫调节试剂包埋于反胶团内。
图8：示例性的纳米颗粒稳定化的包含反胶团的脂质体-聚合物纳米载体，其中亲脂性免疫调节试剂整合在膜中，和亲水性免疫调节试剂包埋于脂质体内。
图9：示例性的脂稳定化的聚合物纳米载体，其中亲水性免疫调节试剂与脂单层偶联，和疏水性免疫调节试剂包埋于聚合物核心内。
图10：示例性的脂稳定化的包含反胶团的聚合物纳米载体，其中亲水性免疫调节试剂与脂单层偶联，和亲水性免疫调节试剂包埋于聚合物核心内。
图11：淋巴携带的VSV被SCS巨噬细胞捕获。(A)腘淋巴结中的VSV的MP-IVM显微图像(数字：足底注射之后的分钟数；比例尺标记：100μm)。(B)注射之后三个小时，VSV在C57BL/6→Act(EGFP)受体中聚集(比例尺标记：50μm).(C)注射之后5分钟淋巴结中的VSV的电子显微镜图像。左侧显示中心显微镜图像的简图，右侧显示更高的放大倍数。箭头指明VSV颗粒(比例尺标记：2μm)。(D)VSV-引流淋巴结的共焦显微镜图像(30分钟)。比例尺标记：100μm(左侧)；15μm(右侧)。(E)注射入野生型、C3缺陷型或经CLL除去的小鼠后2个小时腘淋巴结中的VSV效价。***：p＜0.001(双侧ANOVA，Bonferroni’s post-test)。(F)DH-LMP2a小鼠中VSV的捕获。*：p＜0.05(非配对t检验)。(G)未处理小鼠和CLL处理小鼠中足底注射之后的VSV效价(两个相似实验中的一个；n＝3)。ProxLN：腹股沟、主动脉周围的淋巴结；BrachLN：臂淋巴结。(H)TD插管之后淋巴、脾和血液中的病毒效价；*：p＜0.05(非配对t检验)。E-H中的水平线代表平均值。
图12：外周淋巴结中CD169+巨噬细胞的鉴定。(A-C)从原态C57BL/6小鼠汇聚的单核细胞的品系标记物表达的分析。(A)在对CD169+群体设门之后(中间图板)，分析细胞中两个与巨噬细胞结合的表面标记物(I-Ab(II类MHC)和CD11b)的表达情况(下端图板)。在上端图板显示了以抗-CD169同种型对照的染色。(B)进一步分析CD169+I-Ab+CD11b+细胞中CD68、F4/80、CD11c和Gr-1的表达情况。设门以鉴别标记物+的细胞(除了CD11c染色之外)，其中标记物被放置用于鉴别常规的CD11chigh树突状细胞(覆盖)。数字表示在直方图门下面的CD169+I-Ab+CD11b+细胞的百分率。数据是3-5个具有相似结果的实验的代表。(C)图板B中数据的定量分析，误差条代表SEM。(D-G)来自原态C57BL/6小鼠的腘淋巴结的共焦显微镜图像显示在CD169+细胞上共表达所选的标记物(箭头)。比例尺标记：左栏为125μm和所有其它栏为20μm。
图13：CLL处理之后腘淋巴结的形态学变化。(A)未处理对照小鼠(-CLL，左栏)和6-10天之前接受CLL足底注射的动物的腘淋巴结(上面三行)和脾(下面一行)的共焦显微镜图像。CLL处理除去了淋巴结中的CD169+巨噬细胞(上面一行)，但是不除去脾中的；Lyve-1+髓质淋巴内皮细胞(第二行)和皮层的CD11chigh树突状细胞(第三行)不受影响。(B)经过和不经过CLL处理的腘淋巴结中的细胞亚群频率，数据来自n＝3小鼠，以平均值±SEM表示；*：p＜0.05，**：p＜0.01；非配对student’s t检验。(C)足底注射50μl CLL后6-10天，腘淋巴结中不同的I-Ab+CD11b+白细胞亚群的频率。每个符号代表从一只小鼠汇聚的腘淋巴结。对I-Ab+CD11b+细胞设门之后通过流式细胞术检测腘淋巴结中总的单核细胞中细胞亚群的频率，如图12A所示。(D)未处理(-CLL)或足底注射CLL(+CLL)7天后，腘淋巴结的免疫组化分析。比例尺标记：300mm。(E)CLL处理7天后和足底注射20μgVSV-IND之后5分钟，代表性的腘淋巴结中的SCS的超结构。注意完全不存在SCS巨噬细胞和病毒颗粒。比例尺标记：2μm。
图14：腘淋巴结中荧光病毒和乳胶纳米颗粒的保留。(A)足底注射Alexa-568标记的腺病毒(AdV)30分钟之后腘淋巴结的共焦显微镜图像。以FITC-α-CD169和Alexa-647-α-B220将冷冻的部分染色以鉴别B细胞。比例尺标记：100μm(左侧图板)和15μm(右侧图板)。(B)SCS巨噬细胞捕获的AdV颗粒的透射电镜图像。上端图板显示低倍总揽(中间图板)的带注释的示意图。中间图板中的带框区域在下端图板中被放大，箭头代表电子密集的球状AdV颗粒。比例尺标记：2μm(上端和中间图板)和1μm(下端图板)。(C-D)来自经足底注射20μgAlexa-568标记的UV灭活的AdV(C)或VV(D)30分钟之后的C57BL/6小鼠腘淋巴结的共焦显微镜图像。荧光病毒聚集在B滤泡上面的皮层SCS中(通过FITC-α-B220染色鉴定)，也聚集在髓质中；而病毒不仅被CD169+巨噬细胞结合，还被LYVE-1+淋巴内皮细胞结合。比例尺标记代表125μm(左侧图板)和25μm(右侧图板)。(E)后足底注射Alexa-568标记的VSV和大约1011个Crimson荧光团(Crimson Fluospheres)(直径200nm)30分钟之后的腘淋巴结的共焦显微镜图像。以FITC-α-CD169将冷冻的淋巴结部分进行复染。注意：与VSV不同，乳胶珠中引流淋巴结上保留性较差。比例尺标记：125μm。
图15：足底注射CLL对引流淋巴结中VSV分布的影响。共焦显微镜图像显示：无CLL处理(A)或CLL处理7天后(B)，荧光VSV颗粒定位于腘淋巴结。通过FITC-α-B220染色鉴别B滤泡。在髓质(加框区域)中，VSV被LYVE-1+细胞结合，这不受CLL处理的影响。比例尺标记：125μm(左栏)和25μm(右栏)。
图16：SCS巨噬细胞将源自淋巴的AdV呈递至滤泡B淋巴细胞。(A)腘淋巴结中B滤泡上面的SCS中的CD169+巨噬细胞的共焦显微镜图像。以小麦胚芽凝集素(WGA)将冷冻的部分进行复染以鉴别细胞外基质和以α-B220进行复染以检测B细胞。注意：一些B细胞位于SCS中和一个B细胞似乎在滤泡和SCS之间迁移(箭头)。比例尺标记：25μm。足底注射AdV后30分钟，腘淋巴结中的SCS巨噬细胞和周围细胞的电子显微镜图像(B)和示意图(C)。比例尺标记：2μm。(C)中的框表示在图板(D)和(E)中以更高的倍数显示的区域。这些图板显示了SCS巨噬细胞和B细胞界面处(箭头)的AdV颗粒的两个例子。星号代表其它的与巨噬细胞结合的AdV颗粒。比例尺标记：500nm。
图17：由巨噬细胞介导的淋巴携带的VSV跨越SCS基底的转移改变了病毒特异性B细胞的行为。(A)电子显微镜图像和示意图(中间)，其显示VSV注射后30分钟，巨噬细胞刺穿腘淋巴结的SCS的基底。比例尺标记：10μm(左)和2μm(右)。箭：含有经消化的病毒的液泡。箭头：巨噬细胞和B细胞相接触的区域中的病毒体。(B)腘淋巴结中的多克隆和VI10YEN B细胞的MP-IVM。比例尺标记：50μm。(C)VSV注射之后VI10YENB细胞/对照B细胞的区域比例。结果来自3个图像/组。(D、E)定位于腘淋巴结中的VI10YEN B细胞(相对于SCS)。**：p＜0.01(单侧ANOVA用Bonferroni’s post-test)。
图18：VSV血清型和VSV-IND特异性VI10YEN B细胞的鉴定。(A)纯化的VSV裂解液的SDS-PAGE凝胶(12％)。顶端：VSV-IND和VSV-NJ。N和P蛋白在VSV-NJ中共同迁移，大约的分子量显示于括号中。(B)Alexa-488标记的VSV-IND(中间一行)或VSV-NJ(下面一行)与来自C57BL/6小鼠(左栏)或VI10YEN小鼠(右栏)的B细胞的结合。上面一行显示以针对VI10YEN BCR(Dangand Rock，1991，J.Immunol.，146：3273)的抗-个体基因型抗体35.61进行的对照染色。(C)经CD43neg纯化的、Fluo-LOJO标记的来自VI10YEN小鼠(上面一行)或C57BL/6小鼠(下面一行)的B细胞中的细胞内钙流动。随时间进程连续收集事件，星号代表加入抗体或病毒的时间点。以1000/B细胞使用病毒颗粒，以10μg/106B细胞使用抗-IgM-(Fab)2。(D)足底注射10μg UV-VSV或UV-VSV-AlexaFluor-488-IND免疫后4天和10天，C57BL/6小鼠血清中的总Ig和IgG的中和检验。(E)暴露于来自VSV贮液的上清液的VI10YEN B细胞中的钙流。上清液通过透过蔗糖垫进行超离心产生，引起病毒效价下降大约10,000倍，以不稀释(右上)或1∶100稀释(右下)用于B细胞中。作为对照，将VSV贮液稀释至相等的病毒效价(MOI；左侧图板)。结果证明存在抗原性的VSV-G，其不与我们的病毒制备物中的病毒颗粒结合。
图19：VSV诱导VI10YEN B细胞粘附至ICAM-1和VCAM-1。(A、B)纯化的原态和VSV-IND激活的VI10YEN B细胞(暴露30分钟)粘附至以所标明浓度的重组ICAM-1-Fc(A)或VCAM-1-Fc(B)包被的塑料板。显示了两个三次重复实验的汇集数据。水平线代表平均数。(C、D)C57BL/6小鼠的腘淋巴结中ICAM-1和VCAM-1表达的共焦显微镜图像。比例尺标记：50μm。(E)纯化的原态野生型和VI10YEN B细胞粘附至以所标明的pfu-等价浓度的UV灭活的VSV-IND包被的塑料皿。数据以三次重复的平均值±SEM表示。
图20：SCS巨噬细胞对于淋巴结中VSV特异性B细胞的早期激活是必需的。(A)共焦显微镜图像显示MHC-II与VSV-IND共定位于(注射后30分钟)SCS中的VI10YEN x MHCII(EGFP)B细胞，而不是深层滤泡(星号)。比例尺标记：25μm。(B)与VSV结合的和与VSV分离的VI10YEN x MHCII(EGFP)B细胞与SCS的距离。水平线：中位数。足底注射VSV-IND后，VI10YEN(C)和多克隆B细胞(D)上的BCR表达的动力学。(E)注射VSV-IND(20μg)后，经CLL处理的或未处理的腘淋巴结中的VI10YEN细胞上的BCR的表达。平均荧光强度按照无病毒值(虚线)进行校正。平均值±SEM(3-5只小鼠)。注射VSV-IND(0.4μg)6小时后，对照(F)和CLL处理的(G)腘淋巴结中的VI10YEN B细胞的共焦显微镜图像。比例尺标记：125μm。(H)注射VSV-IND(标示剂量)6小时后，T/B边界和滤泡中的VI10YEN B细胞的频率。平均值±SEM；n＝3-4个滤泡/2只小鼠；*：p＜0.05；**：p＜0.01；***：p＜0.001(t检验)。
图21：病毒注射后引流淋巴结中VI10YEN B细胞的移动性。VSV足底注射后约5-35分钟，深层滤泡和SCS/表面滤泡中野生型(三角)和VI10YEN B细胞(圆圈)的3D瞬时速率的中位数。水平线代表平均值；*：p＜0.05；**：p＜0.01；(单侧ANOVA，Bonferroni’s post-test)。注意特异性B细胞在整个滤泡中减慢下来，可能是我们的制备物中游离VSV-G的影响(见图18)。CLL处理和未处理的popLN中的对照实验显示了相似的B细胞移动性参数。
图22：注射VSV-IND之后，病毒引流和非引流的淋巴结中的VI10YEN B细胞上标记物诱导的激活的时间过程。以CMTMR荧光标记VI10YEN B细胞，并将其转移至原态小鼠，18小时后接受20μg UV灭活的VSV-IND注射(时间0小时)。在所示的时间间隔之后收获引流腘淋巴结(popLN)和末梢臂淋巴结(brachLN)以产生单细胞悬浮液。对(A)B220+CMTMR+VI10YEN细胞或(B)B220+CMTMR-内源性对照B细胞设门之后，通过流式细胞术检测B细胞上CD69和CD86的表达。
图23：接受过继性转移CMTMR标记的VI10YEN B细胞和CMAC标记的多克隆B细胞的混合物的小鼠(右栏)的腘淋巴结的共焦(左侧和中间一栏)和MP-IVM显微镜图像(右栏)。接下来的一天，在足底注射20μg UV灭活的VSV-IND，通过外科手术制备用于MP-IVM分析冷冻的部分的引流腘淋巴结或收获用于共焦分析冷冻的部分的引流腘淋巴结(在所示的时间点)。MP-IVM图像显示：早在病毒注射之后30分钟，VSV特异性的B细胞(而不是多克隆B细胞)即与SCS中的VSV接触。在注射后6个小时，VI10YEN B细胞迁移至T/B边界。比例尺标记：左栏为150μm和其它栏为25μm。
图24：使用来自人类IgG的Fc片段在体内靶向SCS-Mph。(A)左栏的FACS图记录了荧光PEG-PLGA纳米颗粒(直径～100nm)与淋巴结巨噬细胞的结合。(B)Fc-纳米颗粒(NP)靶向SCS-Mph和滤泡树突状细胞。
图25：在淋巴结被膜下窦(SCS)上的巨噬细胞中而非髓质中的巨噬细胞中鉴别出化学因子受体CX3CR1(fractalkine受体)。右侧显微镜图像是来自双敲入小鼠的淋巴结的3D影像，其中绿色荧光蛋白(GFP)在CX3CR1位点表达，而红色荧光蛋白(RFP)报告另一种化学因子受体CCR2的表达。通过显著的绿色荧光可以容易地鉴别SCS-Mph，而髓质巨噬细胞主要表达RFP。
图26：SCS-Mph表达化学因子受体CX3CR1。图像显示了来自敲入小鼠(其经过遗传工程化以在CX3CR1位点表达GFP)的淋巴结的单细胞悬浮液的FACS图。通过可溶性受体CRFc(其与SCS中的巨噬细胞而不与髓质中的巨噬细胞结合)染色而鉴别SCS-Mph。CRFc阴性的表达CX3CR1的细胞(即GFP-high)是常规的表达该化学因子受体的树突状细胞。
图27：来自足底注射直径为0.2μm的乳胶珠(表面以胺(左侧和中间图板)或羧基半体(右侧图板)修饰)24小时后的小鼠腘淋巴结的冷冻部分的荧光显微镜图像。两套珠子均购自Invitrogen(Cat.no.F8763和F8805)。以抗-CD169将左侧和右侧的部分进行复染。将图像调成这样的方向：髓质(以抗-CD169进行浅的弥漫染色)面向右边，而被膜下窦(SCS)区域(以抗-CD169进行深度染色)面向左边。注意：红色的胺修饰的颗粒主要定位于SCS，而蓝色的羧基修饰的珠子主要保留在髓质中。
图28：(A)携带抗原的靶向纳米颗粒是高度免疫原性的并诱导高抗体效价。(B)纳米颗粒疫苗引发的诱导的免疫应答赋予针对致死剂量的VSV的有力的保护。
图29：通过免疫调节纳米颗粒在体内激活T细胞。(A)NP对CD4T细胞激活的影响。(B)NP对CD8T细胞应答的影响(与CpG佐剂(一种TLR9激动剂)混合)。(C)共包埋的佐剂对CD8T细胞激活的影响。
图30：显示了示例性的尼古丁偶联策略。
图31：显示了示例性的R848偶联策略。
具体实施方式
疫苗
疫苗接种通常本质上是被动或主动的。一般地，主动疫苗接种包括将个体的免疫系统暴露于一个或多个被识别为不必要、不想要和/或异源并且激发内源性免疫应答(引起抗原特异性原态淋巴细胞的激活，然后产生分泌抗体的B细胞或抗原特异性效应和记忆T细胞或二者)的试剂。这种方式可以引起长期的保护性免疫力，其可通过重复暴露于相同的抗原性材料而不时地被增强。针对主动免疫接种的成功的免疫应答的长期性的前景使得该策略在多数临床实践中比被动免疫接种更可取，在被动免疫接种中，受体被注射预制的抗体或抗原特异性效应淋巴细胞，这产生迅速的特别的保护，但通常不会建立持久性免疫力。
在人类中正在应用或已经应用了大量多种的疫苗制剂。人类中最常见的使用途径是肌肉内(i.m.)注射，但是疫苗还可以通过口服、鼻内、皮下、吸入或静脉内使用。在多数情况下，源自疫苗的抗原最初被呈递到区域淋巴结的原态淋巴细胞。
目前一些针对例如微生物病原体的疫苗由活的减毒的微生物或微生物的非毒性变体菌株或杀死的或灭活的生物体组成。其它疫苗利用或多或少的纯化的病原体裂解物的成分，例如表面碳水化合物或重组的源自病原体的蛋白(其有时与其它分子特别是赋予辅助活性的蛋白融合)。
用于肌肉内注射的疫苗通常与辅助性载体(最常用的是明矾，即硫酸钾铝)一起施用，辅助性载体被认为建立一个用于抗原性材料的延释的仓库，但也表现出免疫调节活性，例如通过不完全了解的机理而偏向Th2应答(Lindblad，2004，Immunol.Cell.Biol.，82：497；和Jordan等人，2004，Science，304：1808；二者皆通过引用并入本文)。
使用活的减毒的或灭活的病原体的疫苗通常产生有力的免疫应答，但是它们的使用具有局限性。例如，活的疫苗菌株有时候会引起传染性病状，特别是当施用于免疫妥协的受体时。此外，很多病原体，特别是病毒，在它们的基因组中持续进行迅速的变异，这允许它们逃脱针对抗原性不同疫苗菌株的免疫应答。但是，多数或所有的病原体被认为具有一些不容易突变的抗原性决定簇，因为它们与必需的功能相关。针对这些保守性表位(而不是更可变的、非必需的表位)的抗体能够提供抵抗高度突变的病毒的保护(Baba等人，2000，Nat.Med.，6：200；通过引用并入本文)。基于活的或杀死的完整病原体的疫苗不一定促进对这些关键表位的识别，但是可能实质上“迷惑”免疫系统将其攻击聚集在高度可变的决定簇。因此，本发明包括以下认识：模拟病毒颗粒的高免疫原性颗粒性质但呈现出选择性的必需的不可变表位的工程化疫苗纳米载体能够产生比完整微生物更加有力且“防逃脱的”的中和抗体和效应T细胞应答。
仍然尚未完全了解疫苗刺激引流淋巴结中的抗体免疫应答(或不能这样)的精确机理。B和T细胞最初被隔绝在不同的解剖区域，分别为位于表面的B滤泡和周围的副皮质区和深的皮层。在抗原刺激后，滤泡中的抗原特异性B细胞和T细胞区域中的CD4T细胞被激活，然后朝着两个隔间(compartment)之间更宽的区域迁移。吞噬了淋巴携带的抗原的B细胞处理所获得的材料并开始呈递II类MHC表面分子中的抗原性肽，然后由激活的CD4T细胞(TFH细胞)识别。抗原识别允许TFH细胞向B细胞提供帮助，这构成有力的生存信号并激发B滤泡内生发中心(GC)的形成。GC反应促进类别转换重组、抗原特异性抗体的亲和成熟，和记忆B细胞与长生血浆细胞(其能够长时间地产生大量的高亲和性抗体)的形成。因此，本发明包含以下认识：疫苗纳米载体可以具有允许抗原性材料被B和T细胞同时有效识别并诱导有力的GC反应的成分(图1)。
本发明描述了用来开发用于疫苗输送的疫苗纳米载体的系统，其能够克服目前疫苗技术的上述这些局限性。本发明包含以下认识：淋巴携带的病毒颗粒(其具有数十至数百纳米的直径并诱导有力的细胞和抗体应答)被捕获并被保留在引流淋巴结的被膜下窦的巨噬细胞(即，被膜下窦巨噬细胞，简写为SCS-Mph)的表面。这些巨噬细胞参与完整的病毒颗粒至滤泡B细胞的有效的早期呈递。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体模拟病毒颗粒并靶向SCS-Mph。如实施例1所示，在皮下注射包被了Cy5的聚(乳酸羟基乙酸)(PLGA)纳米颗粒(50nm-150nm)(其被单层脂和聚乙二醇表面稳定化)之后，注射的纳米颗粒容易地进入淋巴并结合在引流淋巴结的被膜下窦，与淋巴携带的病毒相似。携带刺激B细胞和/或T细胞的免疫调节试剂的相似纳米载体在免疫接种个体中是特别有用的。
因此，本发明包含以下认识：携带免疫调节试剂的纳米载体(例如大小为淋巴携带的病毒的纳米载体)能够在淋巴结中被识别，就像它们是病毒一样，并且可以激发有力的免疫应答，例如，当颗粒包括由B细胞和/或T细胞识别的免疫调节试剂时。
通过在表面携带免疫调节试剂和/或在内部装载相似或不同的免疫调节试剂，纳米载体能够将这些免疫调节试剂同时输送到免疫系统的不同细胞并刺激它们。在一些具体实施方式中，存在于纳米载体表面的免疫调节试剂刺激B细胞，包埋于纳米载体内部的免疫调节试剂在淋巴组织内(和通过激活后的B细胞)被抗原呈递细胞(APC)例如树突状细胞(DC)处理并呈递给T细胞。在一些具体实施方式中，通过以靶半体(例如，抗体或其片段、肽或多肽、
Figure GPA00001138904500431
NanobodyTM、AdNectinTM、AvimerTM、适配子、SpiegelmerTM、小分子、脂、碳水化合物等)修饰纳米载体的表面，纳米载体能够选择性地输送免疫调节试剂至特异性抗原呈递细胞，例如DC、SCS-Mph、FDC、T细胞、B细胞和/或其组合。纳米载体可以是(但不限于此)一个或多个脂纳米颗粒、聚合物纳米颗粒、金属纳米颗粒、基于表面活性剂的乳剂、树枝状聚合物和/或使用纳米材料的组合(例如脂-聚合物纳米颗粒)开发的纳米颗粒。在标题为“疫苗纳米载体”的部分中进一步详细描述疫苗纳米载体。
T细胞
本发明提供了用于将例如免疫调节试剂输送至免疫系统的细胞的疫苗纳米载体。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含至少一个能被输送至APC的免疫调节试剂，然后APC处理该免疫调节试剂并将其输送至T细胞。
专职APC可以非常有效地使抗原内在化(通过吞噬或内吞)，然后显示抗原的片段，与APC膜上的II类主要组织相容性复合体(II类MHC)分子或I类MHC分子相结合。CD4T细胞识别APC膜上的抗原-II类MHC分子复合体并与之相互作用，而CD8T细胞识别抗原-I类MHC分子复合体并与之相互作用。然后APC产生另外的共刺激信号以及调节性细胞因子，从而引起T细胞的激活。
免疫调节试剂
本发明提供了包含一个或多个免疫调节试剂的疫苗纳米载体。在一些具体实施方式中，包含一个或多个免疫调节试剂的本发明的纳米载体被用作疫苗。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包含分离的和/或重组的蛋白或肽、碳水化合物、糖蛋白、糖脂、糖肽、蛋白聚糖、灭活的生物和病毒、死的生物和病毒、遗传改变的生物或病毒，和细胞提取物。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包含核酸、碳水化合物、脂和/或小分子。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是激发免疫应答的试剂。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是编码蛋白或肽的多核苷酸，当蛋白或肽被表达时，免疫应答被激发。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是抗原。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是蛋白或肽。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂用于疫苗。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是任何源自病原体的蛋白和/或其它抗原。病原体可以是病毒、细菌、真菌、原生动物、寄生虫等。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包括细菌生物的抗原，例如包柔氏螺旋体属(Borreliaspecies)、炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、百日咳嗜血杆菌(Bordetella pertussis)、弯曲杆菌(Camphylobacter jejuni)、衣原体属(Chlamydia species)、鹦鹉热衣原体(Chlamydial psittaci)、生殖道沙眼衣原体(Chlamydial trachomatis)、梭菌属(Clostridium species)、破伤风梭菌(Clostridiumtetani)、内毒杆菌(Clostridium botulinum)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、白喉杆菌(Corynebacterium diphtheriae)、柯克斯体属(Coxiella species)、肠球菌属(Enterococcus species)、埃立克体属(Erlichia species)、大肠杆菌、土拉热弗郎西丝菌(Francisella tularensis)、嗜血杆菌属(Haemophilus species)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、副流感嗜血杆菌(Haemophilus parainfluenzae)、乳酸菌属(Lactobacillus species)、军团杆菌属(Legionella species)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、问号钩端螺旋体(Leptospirosis interrogans)、李斯特菌属(Listeria species)、单核增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)、分支杆菌属(Mycobacterium species)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、支原体属(Mycoplasma species)、肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae)、奈瑟菌属(Neisseria species)、脑膜炎奈瑟菌(Neisseriameningitides)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)、肺炎球菌属(Pneumococcusspecies)、假单胞菌属(Pseudomonas species)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、沙门氏菌属(Salmonella species)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella enterica)、立克次氏体属(Rickettsia species)、落矶山热立克次体(Rickettsia ricketsii)、地方性斑疹伤寒立克次氏体(Rickettsia typhi)、志贺氏杆菌属(Shigella species)、葡萄状球菌属(Staphylococcus species)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、链球菌属(Streptococcus species)、肺炎链球菌(Streptococccus pnuemoniae)、脓链球菌(Streptococcus pyrogenes)、变种链球菌(Streptococcus mutans)、密螺旋体属(Treponema species)、梅毒螺旋体(Treponemapallidum)、弧菌属(Vibrio species)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)等。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包括病毒生物的抗原，例如痘病毒、小痘病毒(天花)、埃博拉病毒、嗜肝DNA病毒、马尔堡病毒、登革热病毒、甲型和乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹(麻疹病毒)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、人类乳头瘤病毒(HPV)、水痘-带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒1和2、细胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒状病毒、轮状病毒、鼻病毒、腺病毒、正粘病毒、乳头瘤病毒、细小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰质炎病毒、腮腺炎、狂犬病、呼吸道肠道病毒、风疹病毒、外衣病毒、逆转录病毒、柯萨奇病毒、委内端拉马脑脊髓炎病毒、日本脑炎病毒、黄热病毒、裂谷热病毒、甲肝、乙肝、丙肝、丁肝和戊肝病毒等。病毒生物包括dsDNA病毒、ssDNA病毒、dsRNA病毒、(+)ssRNA病毒(-)sRNA病毒、ssRNA-RT病毒和dsDNA-RT病毒。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包括真菌、原生动物和/或寄生虫生物的抗原，例如曲霉属(Aspergillus species)、假丝酵母属(Candida species)、白色念珠菌(Candida albicans)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、隐球酵母属(Cryptococcus species)、新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)、溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、利什曼虫属(Leishmaniaspeceis)、星形诺卡氏菌(Nocardiaasteroides)、疟原虫(Plasmodiumfalciparum)、刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)、阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)、弓形体属(Toxoplasma species)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、曼森氏住血吸虫(Schistosoma mansoni)等。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包括HCV的E1和/或E2蛋白。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包括HIV的gp120。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包括流感病毒的红血球凝聚素和/或神经氨糖酸苷酶。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包括肺炎链球菌或家族1和/或家族2PspA的肺炎球菌多糖或5型和8型荚膜多糖或识别金黄色葡萄球菌的吸附性基质分子的微生物细胞表面成分。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包括白色念珠菌的甘露聚糖或新型隐球酵母的隐球菌荚膜多糖。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包括疟原虫的PfEMP1或其它在疟原虫感染的红血细胞上表达的源自寄生虫的抗原或刚地弓形虫的GRA7。
本文描述的任何抗原均可以是完全杀死的生物、肽、蛋白、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、编码蛋白或肽的核酸、碳水化合物、小分子或其组合的形式。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂源自这样的微生物：对于该微生物已经存在至少一种疫苗。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂源自这样的微生物：对于该微生物尚未开发疫苗。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含至少一种类型免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体的所有的免疫调节试剂彼此是相同的。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含许多不同的免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含多个单独的免疫调节试剂，它们均是相同的。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体精确地包含一种类型免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体精确地包含两类不同类型的免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上不同类型的免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含3、4、5、6、7、8、9、10或更多种不同类型的免疫调节试剂。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种类型免疫调节试剂，二者源自同一个属的微生物。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种类型免疫调节试剂，二者源自同一个属和种的微生物。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种类型免疫调节试剂，二者源自同一个属、种和株的微生物。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种类型免疫调节试剂，二者源自同一个克隆的微生物。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上类型免疫调节试剂，其均源自同一个属的微生物。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上类型免疫调节试剂，其均源自同一个属和种的微生物。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上类型免疫调节试剂，其均源自同一个属、种和株的微生物。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上类型免疫调节试剂，其均源自同一个克隆的微生物。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种或两种以上类型免疫调节试剂，其均源自同一个属的微生物。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种或两种以上类型免疫调节试剂，其均源自同一个属和种的微生物。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种或两种以上类型免疫调节试剂，其均源自同一个属、种和株的微生物。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种或两种以上类型免疫调节试剂，其源自同一个种的不同株的微生物。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种或两种以上类型免疫调节试剂，其源自同一个属的不同种的微生物。在其它具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种或两种以上类型免疫调节试剂，每个源自不同属的微生物。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含仅一种类型免疫调节试剂，其同时刺激B细胞和T细胞中的免疫应答。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种类型免疫调节试剂，其中第一种免疫调节试剂刺激B细胞，第二种类型免疫调节试剂刺激T细胞。在一些具体实施方式中，一种或两种试剂可以刺激T细胞和B细胞。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上类型免疫调节试剂，其中一种或多种类型免疫调节试剂刺激B细胞，一种或多种类型免疫调节试剂刺激T细胞。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含至少一种类型免疫调节试剂，其与疫苗纳米载体的外表面结合。在一些具体实施方式中，结合是共价的。在一些具体实施方式中，共价结合由一个或多个连接子介导。在一些具体实施方式中，结合是非共价的。在一些具体实施方式中，非共价结合由电荷相互作用、亲和相互作用、金属配合、物理吸附、主客体相互作用、疏水相互作用、TT堆积相互作用、氢键结合相互作用、范德华力相互作用、磁性相互作用、静电相互作用、偶极-偶极相互作用和/或其组合所介导。对于免疫调节试剂如何与疫苗纳米载体结合的更详细的描述，请参见以下标题为“疫苗纳米载体的产生”的部分。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包括脂膜(例如脂双层、脂单层等)。至少一个免疫刺激试剂可以与脂膜结合。在一些具体实施方式中，至少一个免疫刺激试剂嵌入脂膜内。一些具体实施方式中，至少一个免疫刺激试剂嵌入脂双层的腔内。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含至少一个与脂膜的内表面结合的免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，至少一个免疫调节试剂包埋于疫苗纳米载体的脂膜内。在一些具体实施方式中，至少一种类型免疫调节试剂可以位于疫苗纳米载体的多个位点。例如，第一种类型免疫调节试剂可以嵌于脂膜内，第二种类型免疫调节试剂可以包埋于疫苗纳米载体的脂膜内。再举一个例子，第一种类型免疫调节试剂可以与脂膜的外表面结合，第二种类型免疫调节试剂可以与疫苗纳米载体的脂膜的内表面结合。在一些具体实施方式中，第一种类型免疫调节试剂可以嵌于疫苗纳米载体的脂双层的腔内，脂双层中可以包埋聚合物基质，第二种类型免疫调节试剂可以分布在所述聚合物基质中。在一些具体实施方式中，第一种类型免疫调节试剂和第二种类型免疫调节试剂可以位于疫苗纳米载体的相同位点(例如它们可都与疫苗纳米载体的外表面结合；它们可都包埋于疫苗纳米载体内，等)。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含聚合物(例如聚合物核心)。至少一种类型免疫调节试剂可以与聚合物结合。在一些具体实施方式中，至少一种类型免疫调节试剂嵌入聚合物内。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含至少一种类型与聚合物的内表面结合的免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，至少一种类型免疫调节试剂包埋于疫苗纳米载体的聚合物内。在一些具体实施方式中，至少一种类型免疫调节试剂可以位于疫苗纳米载体的多个位点。例如，第一种类型免疫调节试剂可以嵌于聚合物内，第二种类型免疫调节试剂可以包埋于环绕疫苗纳米载体的聚合物核心的脂膜内。再举一个例子，第一种类型免疫调节试剂可以与聚合物的外表面结合，第二种类型免疫调节试剂可以嵌于疫苗纳米载体的聚合物内。
本领域普通技术人员将认识到前述例子只是多个免疫调节试剂可以与疫苗纳米载体的不同位点结合的很多不同方式的代表。多个免疫调节试剂可以位于疫苗纳米载体的任意位点的组合。另外，前述例子还可适用于纳米载体的其它试剂(例如免疫刺激试剂)。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是T细胞抗原，且T细胞抗原源自疫苗所要针对的相同病原体。在这种情况下，最初刺激少量的原态T细胞以产生病原体特异性效应和记忆T细胞。在一些具体实施方式中，抗原可以取自不相关的来源，例如对其已经存在广泛的免疫力的传染性试剂(例如，破伤风类毒素或流感病毒的常见成分，例如红血球凝聚素、神经氨糖酸苷酶或核蛋白)。在后一种情况下，疫苗利用记忆T细胞(其为针对以前的感染或疫苗接种而产生)的存在。记忆细胞一般针对抗原重刺激反应迅速并且有力，因此，可以提供对B细胞的帮助的优越的来源。
其它的T细胞抗原包括但不限于退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变应原、同种抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、接触敏感剂、半抗原、异种抗原或代谢性疾病酶或酶产物。在一些具体实施方式中，传染性疾病抗原是病毒抗原，其包括但不限于源自本文描述的任何病毒的任何抗原。T细胞抗原的例子包括本文其它地方提供的那些。
在一些具体实施方式中，T细胞抗原以完整蛋白整合入纳米载体。在一些具体实施方式中，T细胞抗原以修饰的蛋白整合入纳米载体。在一些具体实施方式中，T细胞抗原以突变的蛋白整合入纳米载体。在一些具体实施方式中，T细胞抗原以重叠肽的集合提供，其可以增强抗原整合入II类MHC复合体，从而进一步促进帮助性应答。在一些具体实施方式中，T细胞抗原以非重叠肽的集合提供，其可以增强抗原整合入II类MHC复合体，从而进一步促进帮助性应答。在一些具体实施方式中，T细胞抗原以编码抗原的核酸提供。
在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体(例如疫苗纳米载体)包含90％重量以下的、75％重量以下的、50％重量以下的、40％重量以下的、30％重量以下的、20％重量以下的、15％重量以下的、10％重量以下的、5％重量以下的、1％重量以下的或0.5％重量以下的免疫调节试剂。
靶半体
在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体包含一个或多个靶半体。在本发明的一些具体实施方式中，纳米载体与一个或多个靶半体结合。靶半体可以是与器官、组织、细胞、细胞外基质和/或亚细胞位点结合的成分的任何半体。在一些具体实施方式中，这样的成分被称为“靶”或“标记物”，以下进一步详细讨论。
靶半体可以是核酸、多肽、糖蛋白、碳水化合物、脂、小分子等。例如，靶半体可以是结合至细胞类型特异性标记物的核酸靶半体(例如适配子
Figure GPA00001138904500481
等)。一般地，适配子是与特定靶(例如多肽)结合的寡核苷酸(例如，DNA、RNA或其类似物或衍生物)。在一些具体实施方式中，靶半体可以是针对细胞表面受体(例如生长因子、激素、LDL、转运蛋白等)的天然产生的或合成的配体。靶半体可以是抗体，该术语包括抗体片段、抗体的特征性部分、单链抗体等。可以使用合成的结合蛋白例如
Figure GPA00001138904500482
NanobodiesTM、AdNectinsTM、AvimersTM等。可以通过使用例如噬菌体显示程序鉴定肽靶半体。已经使用这个广泛使用的技术来鉴定多种不同的细胞类型的细胞特异性配体。
根据本发明，靶半体识别与特定器官、组织、细胞和/或亚细胞位点结合的一个或多个“靶”或“标记物”。在一些具体实施方式中，靶可以是与一种或一些细胞类型、与一种或一些疾病和/或与一种或一些发育时期独特地相关或主要相关的标记物。细胞类型特异性标记物通常在该细胞类型中比在参考细胞群体(其可以由例如含有大约相同数量细胞(例如，大约相同数目的细胞、大约相同体积的细胞、大约相同质量的细胞等)的混合物组成)中的表达水平高至少2倍。在一些具体实施方式中，细胞类型特异性标记物的存在水平比参考群体中的平均表达高至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍、至少1000倍、至少5000倍或至少10,000倍。对细胞类型特异性标记物的检测或测定使得可能将目标细胞类型从很多、多数或所有其它细胞类型中区分开。
在一些具体实施方式中，靶可以包含蛋白、碳水化合物、脂和/或核酸。在一些具体实施方式中，靶可以包含蛋白和/或其特征性部分，例如肿瘤标记物、整合素、细胞表面受体、跨膜蛋白、细胞间蛋白、离子通道、膜转运蛋白、酶、抗体、嵌合蛋白、糖蛋白等。在一些具体实施方式中，靶可以包含碳水化合物和/或其特征性部分，例如糖蛋白、糖(例如，单糖、二糖、多糖)、糖衣(即，多数真核细胞外表面上的富含碳水化合物的外周区)等。在一些具体实施方式中，靶可以包含脂和/或其特征性部分，例如油、脂肪酸、甘油酯、激素、类固醇(例如胆固醇、叶酸)、维生素(例如维生素E)、磷脂、鞘脂类、脂蛋白等。在一些具体实施方式中，靶可以包含核酸和/或其特征性部分，例如DNA核酸；RNA核酸；修饰的DNA核酸；修饰的RNA核酸；包括DNA、RNA、修饰的DNA、修饰的RNA的任意组合的核酸；等。
在一些具体实施方式中，靶半体可以是来自VSV的表面糖蛋白分子。VSV包含单一表面分子VSV-G，其为toll样受体激动剂。VSV有效地靶向免疫系统的细胞，所以在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体可以包含VSV表面分子从而将疫苗纳米载体靶向免疫系统的细胞。
在一些具体实施方式中，靶是肿瘤标记物。在一些具体实施方式中，肿瘤标记物是在肿瘤细胞上但不在健康和/或正常细胞上表达的抗原。在一些具体实施方式中，肿瘤标记物是在肿瘤细胞上比在健康和/或正常细胞上更普遍存在的抗原。示例性肿瘤标记物包括但不限于gp100；Melan-A；酪氨基酸激酶；PSMA；HER-2/neu；MUC-1；拓扑异构酶IIa；sialyl-Tn；癌胚抗原；ErB-3-结合蛋白-1；α胎蛋白；和睾丸癌抗原MAGE-A1、MAGE A4和NY-ESO-1。
在一些具体实施方式中，靶是APC标记物。在一些具体实施方式中，APC靶是在APC上表达但不在非APC上表达的抗原。在一些具体实施方式中，APC靶是在APC上比在非APC上更普遍存在的抗原。示例性APC标记物包括但不限于CD11c、CD11b、CD14、CD40、CD45、CD163、CD169(sialoadhesion)、DEC205(CD205)、II类MHC、DC-SIGN、CD21/CD35和FcγRI、PD-L2。在一些具体实施方式中，APC标记物包括任何DC和/或巨噬细胞标记物，其例子在本文描述。
在一些具体实施方式中，靶是DC标记物。在一些具体实施方式中，DC靶是在DC上表达但不在非DC上表达的抗原。在一些具体实施方式中，DC靶是在DC上比在非DC上更普遍存在的抗原。示例性DC标记物在下面标题为“树突状细胞”的部分列出并且包括本文其它地方提供的那些。
在一些具体实施方式中，靶是T细胞标记物。在一些具体实施方式中，T细胞靶是在T细胞上表达但不在非T细胞上表达的抗原。在一些具体实施方式中，T细胞靶是在T细胞上比在非T细胞上更普遍存在的抗原。示例性T细胞标记物在下面标题为“T细胞靶半体”的部分列出并且包括本文其它地方提供的那些。
在一些具体实施方式中，靶优先在特定细胞类型中表达。例如，APC、DC和/或T细胞上的APC、DC和/或T细胞靶的表达相对于参考群体来说在APC、DC和/或T细胞中为至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍过表达。在一些具体实施方式中，参考群体可以包含非APC、FDC和/或T细胞。
在一些具体实施方式中，激活的APC、DC和/或T细胞上的APC、DC和/或T细胞靶的表达相对于参考群体来说在激活的APC、DC和/或T细胞中为至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍过表达。在一些具体实施方式中，参考群体可以包含非激活的APC、FDC和/或T细胞。
在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体(例如疫苗纳米载体)包含50％重量以下的、40％重量以下的、30％重量以下的、20％重量以下的、15％重量以下的、10％重量以下的、5％重量以下的、1％重量以下的或0.5％重量以下的靶半体。
在一些具体实施方式中，靶半体与纳米载体共价结合。在一些具体实施方式中，共价结合由连接子介导。在一些具体实施方式中，靶半体与纳米载体不是共价结合。例如，靶半体可以与本发明的颗粒的聚合物基质的表面结合、包埋于其中、由其环绕和/或分布于其中。例如，在一些具体实施方式中，靶半体可以包埋于纳米载体的脂质体膜和/或聚合物基质内、由其环绕和/或分布于其中。作为选择，抑或是另外，靶半体可以通过电荷相互作用、亲和相互作用、金属配合、物理吸附、主客体相互作用、疏水相互作用、TT堆积相互作用、氢键结合相互作用、范德华力相互作用、磁性相互作用、静电相互作用、偶极-偶极相互作用和/或其组合与纳米载体结合。靶半体与疫苗纳米载体的结合在以下标题为“疫苗纳米载体的产生”的部分中有更详细的描述。
树突状细胞
树突状细胞(DC)是一类髓细胞样的白细胞；它们是在对T淋巴细胞的最有力的抗原呈递细胞之中。静止态DC以非成熟的耐受态存在于很多组织中，包括淋巴结，即它们呈递中级至高水平的肽-MHC复合体(但其中几乎没有或没有共刺激分子并且不分泌T细胞所需的用于分化成效应细胞的细胞因子)。接受非成熟DC呈递的特异性抗原的T细胞开始增殖几天，但是然后它们通过细胞凋亡而死亡或变得对进一步激活无反应。接着发生的抗原特异性T细胞应答的消除赋予宿主针对该抗原的选择性耐受。与此相反，当DC获得抗原而它们暴露于成熟刺激物时，细胞迅速上调MHC和共刺激分子并分泌几种细胞因子。现在成熟的DC是效应T细胞和免疫记忆的有力诱导者。DC的成熟可以由很多信号诱导，例如一些炎性细胞因子、DC表达的CD40的连接、TLR的激动剂(例如细菌内毒素)、免疫复合体、激活的补体、坏死的细胞、凋亡的细胞、游离尿酸盐、尿素盐晶体和/或HMGB-1。
DEC-205(即CD205)是表面表达的多功能血凝素，其在DC和淋巴组织中的胸腺上皮细胞中选择性表达。以皮下注射嵌合α-DEC-205单克隆抗体进行的体内实验已经表明：在小鼠和人类中，配体与DEC-205的结合诱导有效的内在化和后续的对内吞的材料的处理以在MHC分子中呈递(Hawiger等人，2001，J.Exp.Med.194：769；Bonifaz等人，2002，J.Exp.Med.，196：1627；和Bozzacco等人，2007，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，104：1289；每篇均通过引入并入本文)。在皮内或皮下注射后，嵌合抗体通过淋巴管转运至引流淋巴结，在引流淋巴结嵌合抗体与常驻的DC特异性结合，因此提供将抗原靶向静止态DC(而不引起它们的成熟)的方式。靶向的DC然后将诱导T细胞对所呈递的抗原的耐受，而不是免疫力。但是，当以诱导DC成熟的免疫刺激试剂(例如α-CD40或一种或多种DC上表达的TLR的配体；在以下标题为“免疫刺激试剂”的部分有更进详细的讨论)一起靶向DEC-205时，则疫苗作为有力的免疫刺激剂优先促进细胞毒和Th1型的效应T细胞应答。
可以通过与DC-205、CD11c、II类MHC、CD80、CD86、DC-SIGN、CD11b、BDCA-1、BDCA-2、BDCA-4、Siglec-H、CX3CR1和/或Langerin结合的半体实现靶向DC。
在一些具体实施方式中，可以通过与任何主要在DC上表达和/或存在的物质(即DC标记物)(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)特异性结合的任何靶半体实现靶向DC。示例性DC标记物包括但不限于，CD1a(R4，T6，HTA-1)；CD1b(R1)；CD1c(M241，R7)；CD1d(R3)；CD1e(R2)；CD11b(αM整合素链，CR3，Mol，C3niR，Mac-1)；CD11c(αX整合素，p150，95，AXb2)；CDw117(乳糖基神经酰胺，LacCer)；CD19(B4)；CD33(gp67)；CD 35(CR1，C3b/C4受体)；CD 36(GpIIIb，GPIV，PASIV)；CD39(ATP脱氢酶，NTP脱氢酶-1)；CD40(Bp50)；CD45(LCA，T200，B220，Ly5)；CD45RA；CD45RB；CD45RC；CD45RO(UCHL-1)；CD49d(VLA-4α，α4整合素)；CD49e(VLA-5α，α5整合素)；CD58(LFA-3)；CD64(FcγRI)；CD72(Ly-19.2，Ly-32.2，Lyb-2)；CD73(Ecto-5′核苷酸酶)；CD74(Ii，不变链)；CD80(B7，B7-1，BB1)；CD81(TAPA-1)；CD83(HB15)；CD85a(ILT5，LIR3，HL9)；CD85d(ILT4，LIR2，MIR10)；CD85j(ILT2，LIR1，MIR7)；CD85k(ILT3，LIR5，HM18)；CD86(B7-2/B70)；CD88(C5aB)；CD97(BL-KDD/F12)；CD 101(IGSF2，P126，V7)；CD116(GM-CSFRα)；CD120a(TMFRI，p55)；CD120b(TNFRII，p75，TNFR p80)；CD123(IL-3Rα)；CD139；CD148(HPTP-η，p260，DEP-1)；CD 150(SLAM，IPO-3)；CD 156b(TACE，ADAM 17，cSVP)；CD 157(Mo5，BST-1)；CD 167a(DDR1，trkE，cak)；CD168(RHAMM，IHABP，HMMR)；CD169(唾液酸粘合素，Siglec-1)；CD170(Siglec-5)；CD171(L1CAM，NILE)；CD172(SIRP-1α，MyD-1)；CD172b(SIRPβ)；CD180(RP105，Bgp95，Ly64)；CD184(CXCR4，NPY3R)；CD193(CCR3)；CD196(CCR6)；CD197(CCR7(wsCDw197))；CDw197(CCR7，EBI1，BLR2)；CD200(OX2)；CD205(DEC-205)；CD206(MMR)；CD207(Langerin)；CD208(DC-LAMP)；CD209(DC-SIGN)；CDw218a(IL18Rα)；CDw218b(IL8Rβ)；CD227(MUC1，PUM，PEM，EMA)；CD230(朊病毒蛋白(PrP))；CD252(OX40L，TNF(配体)超家族，成员4)；CD258(LIGHT，TNF(配体)超家族，成员14)；CD265(TRANCE-R，TNF-R超家族，成员11a)；CD271(NGFR，p75，TNFR超家族，成员16)；CD273(B7DC，PDL2)；CD274(B7H1，PDL1)；CD275(B7H2，ICOSL)；CD276(B7H3)；CD277(BT3.1，B7家族：嗜乳脂蛋白3)；CD283(TLR3，TOLL样受体3)；CD289(TLR9，TOLL样受体9)；CD295(LEPR)；CD298(ATP1B3，Na K ATPase β3亚基)；CD300a(CMRF-35H)；CD300c(CMRF-35A)；CD301(MGL1，CLECSF14)；CD302(DCL1)；CD303(BDCA2)；CD304(BDCA4)；CD312(EMR2)；CD317(BST2)；CD319(CRACC，SLAMF7)；CD320(8D6)；和CD68(gp110，Macrosialin)；II类MHC；BDCA-1；Siglec-H；其中括号中所列名称代表别名。
T细胞靶半体
在一些具体实施方式中，可以通过与任何主要在T细胞上表达和/或存在的物质(即T细胞标记物)(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)特异性结合的任何靶半体实现靶向T细胞。示例性T细胞标记物包括但不限于，CD2(E-rosette R，T11，LFA-2)；CD3(T3)；CD3α；CD3β；CD3ε；CD4(L3T4，W3/25，T4)；CD5(T1，Tp67，Leu-1，LY-1)；CD6(T12)；CD7(gp40，Leu 9)；CD8a(Leu2，T8，Lyt2，3)；CD8b(CD8，Leu2，Lyt3)；CD11a(LFA-1α，α整合素链)；CD11b(αM整合素链，CR3，Mol，C3niR，Mac-1)；CD11c(αX整合素，p150，95，AXb2)；CD15s(唾液酰Lewis X)；CD15u(3′硫代Lewis X)；CD15su(6硫代-唾液酰Lewis X)；CD16b(FcgRIIIb)；CDw17(乳糖基神经酰胺，LacCer)；CD 18(整合素β2CD11a，b，c β-亚基)；CD26(DPP IV外酶，ADA结合蛋白)；CD27(T14，S152)；CD28(Tp44，T44)；CD29(血小板GPIIa，β-1整合素，GP)；CD31(PECAM-1，Endocam)；CD35(CR1，C3b/C4b受体)；CD37(gP52-40)；CD38(ADP-核糖基/环化酶，T10)；CD43(Sialophorin，Leukosialin)；CD44(ECMRII，H-CAM，Pgp-1)；CD45(LCA，T200，B220，Ly5)；CD45RA(p561ck，p59fyn，Src激酶)；CD45RB(p561ck，p59fyn，Src激酶)；CD45RC(p561ck，p59fyn，Src激酶)；CD46(MCP)；CD47(gp42，IAP，OA3，Neurophillin)；CD47R(MEM-133)；CD48(Blast-1，Hulym3，BCM-1，OX-45)；CD49c(VLA-3α，α3整合素)；CD49d(VLA-4α，α4整合素)；CD49e(VLA-5α，α5整合素)；CD49f(VLA-6α，α6整合素gplc)；CD50(ICAM-3)；CD52(CAMPATH-1，HES)；CD53(OX-44)；CD54(ICAM-1)；CD55(DAF)；CD56(Leu-19，NKH-1，NCAM)；CD57(HNK1，Leu-7)；CD58(LFA-3)；CD59(1F5Ag，H19，Protectin，MACIF，MIRL，P-18)；CD60a(GD3)；CD60b(9-O-乙酰基GD3)；CD60c(7-O乙酰基GD3)；CD62L(L-选择素，LAM-1，LECAM-1，MEL-14，Leu8，TQ1)；CD73(Ecto-5′-核苷酸酶)；CD75(唾液酸掩蔽的Lactosamine)；CD75S(α2，6sialylated Lactosamine)；CD81(TAPA-1)；CD82(4F9，C33，IA-4，KAI1，R2)；CD84(P75，GR6)；CD85a(ILT5，LIR3，HL9)；CD85j(ILT2，LIR1，MIR7)；CD87(uPAR)；CDw92(p70)；CD94(Kp43)；CD95(APO-1，FAS，TNFRSF6)；CD98(4F2，FRP-1，RL-388)；CD99(MIC2，E2)；CD99R(CD99Mab限制的)；CD100(SEMA4D)；CD 102(ICAM-2)；CD108(SEMA7A，JMH血型组抗原)；CDw119(IFNγR，IFNγRa)；CD120a(TNFRI，p55)；CD120b(TNFRII，p75，TNFR p80)；CD121a(1型IL-1R)；CD121b(2型IL-1R)；CD122(IL2Rβ)；CD124(IL-4Rα)；CD 126(IL-6Rα)；CD127(p90，IL-7R，IL-7Rα)；CD128a(IL-8Ra，CXCD1，(暂时命名为CD181))；CD128b(IL-8Rb，CXCR2，(暂时命名为CD182))；CD130(gp130)；CD132(常见的γ链，IL-2Rγ)；CD 147(Basigin，EMMPRIN，M6，OX47)；CD 148(HPTP-η，p260，DEP-1)；CD150(SLAM，IPO-3)；CD153(CD3OL，TNSF8)；CD156b(TACE，ADAM17，cSVP)；CD158a(KIR2DL1，p58.1)；CD158b1(KIR2DL2，p58.2)；CD158b2(KIR2DL3，p58.3)；CD158c(KIR2DS6，KIRX)；CD158|e1/e2(KIR3DLI/S1，p70)；CD159F(KIR2DL5)；CD158g(KIR2DS5)；CD158h(KIR2DS1，p50.1)；CD158i(KIR2DS4，p50.3)；CD158j(KIR2DS2，p50.2)；CCD158k(KIR3DL2，p140)；CD159a(NKG2A)；CD160(BY55，NK1，NK28)；CD161(NKR，NKRP1A)；CD162(PSGL-1)；CD164(MGC-24，MUC-24)；CD171(L1CAM，NILE)；CD172g(SIRPg)；CD181(CXCR1，(以前称作CD128a))；CD182(CXCR2，(以前称作CD128b))；CD183(CXCR3，GPR9)；CD184(CXCR4，NPY3R)；CD185(CXCR5)；CD186(CXCR6)；CD191(CCD1)；CD192(CCR2)；CD193(CCR3)；CD195(CCR5)；CD196(CCR6)；CD197(CCR7(以前是CDw197))；CDw197(CCR7，EBI1，BLR2)；CDw198(CCR8)；CDw199(CCR9)；CD205(DEC-205)；CDw210(CK)；CDw217(CK)；CDw218a(IL18Rα)；CDw218b(IL18Rβ)；CD220(胰岛素R)；CD221(IGF1R)；CD222(M6P-R，IGFII-R)；CD223(LAG-3)；CD224(GGT)；CD225(Leu13)；CD226(DNAM-1，PTA1)；CD229(Ly9)；CD230(朊病毒蛋白(PrP))；CD244(2B4，P38，NAIL)；CD245(p220/240)；CD247(CD3Z链)；CD261(TRAIL-R1，TNF-R超家族，成员10a)；CD262(TRAIL-R2，TNF-R超家族，成员10b)；CD263(TRAIL-R3，TNF-R超家族，成员10c)；CD264(TRAIL-R4，TNF-R超家族，成员10d)；CD265(TRANCE-R，TNF-R超家族，成员11a)；CD268(BAFFR，TNF-R超家族，成员13C)；CD272(BTLA)；CD275(B7H2，ICOSL)；CD277(BT3.1，B7家族：Butyrophilin 3)；CD294(CRTH2，PGRD2，G蛋白偶联受体44)；CD295(LEPR)；CD296(ART1，ADP-核糖转移酶1)；CD298(ATP1B3，Na K ATPase β3亚基)；CD300a(CMRF-35H)；CD300c(CMRF-35A)；CD305(LAIR1)；CD314(NKG2D)；CD316(EW12)；CD317(BST2)；CD319(CRACC，SLAMF7)；CD321(JAM1)；CD322(JAM2)；CDw328(Siglec7)；和CD68(gp 110，Macrosialin)；其中括号中所列名称代表别名。
在一些具体实施方式中，可以通过与任何主要在激活后的T细胞上表达和/或存在的物质(即激活的T细胞的靶)(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)结合(例如特异性结合)的任何靶半体实现靶向T细胞。示例性的激活的T细胞的靶半体包括但不限于，CD1a(RA，T6，HTA-1)；CD1b(R1)；Cd1c(M241，R7)；CD1d(R3)；CD9(p24，DRAP-1，MRP-1)；CD25(Tac抗原，IL-2Rα，p55)；CD30(Ber-H2，Ki-1)；CD39(ATP脱氢酶，NTP脱氢酶-1)；CD45RO(UCHL-1)；CD49a(VLA-1α，α1整合素)；CD49b(VLA-2α，gpla，α2整合素)；CD69(AIM，EA 1，MLR3，gp34/28，VEA)；CD70(Ki-24，CD27配体)；CD74(Ii，不变链)；CD80(B7，B7-1，BB1)；CD86(B7-2/B70)；CD96(TACTILE)；CD97(BL-KDD/F12)；CD101(IGSF2，P126，V7)；CD103(HML-1，整合素αE，ITGAE)；CD107a(LAMP-1)；CD107b(LAMP-2)；CD109(8A3，E123 7D1)；CD134(OX40，TNFRSF4)；CDw137(4-1BB，ILA)；CD146(Muc 18，S-endo，MCAM，Me1-CAM)；CD152(CTLA-4)；CD154(CD40L，gp39，TRAP-1，T-BAM)；CD166(ALCAM，KG-CAM，SC-1，BEN，DM-GRASP)；CD178(Fas配体)；CD227(MUC1，PUM，PEM，EMA)；CD253(TRAIL，TNF(配体)超家族，成员10)；CD254(TRANCE，RANKL，TNF(配体)超家族，成员11)；CD258(LIGHT，TMF(配体)超家族，成员14)；CD267(TACI，TNF-R超家族，成员13B)；CD273(B7DC，PDL2)；CD274(B7H1，PDL1)；CD278(ICOS)；CD279(PD1)；和CD312(EMR2)；其中括号中所列名称代表别名。
靶半体的分子特性
核酸靶半体。如本文所用“核酸靶半体”是与靶特异性结合的核酸。在一些具体实施方式中，核酸靶半体是核酸适配子。适配子通常是与特定器官、组织、细胞、细胞外基质成分和/或亚细胞位点相关的特异性靶结构结合的多核苷酸。一般地，适配子的靶向功能是基于适配子的三维结构。在一些具体实施方式中，适配子与靶的结合通常是由适配子和靶的二维和/或三维结构之间的相互作用所介导。在一些具体实施方式中，适配子与靶的结合不仅仅是基于适配子的初级序列，还基于适配子和/或靶的三维结构。在一些具体实施方式中，适配子通过互补性Watson-Crick碱基配对与它们的靶结合，这种结合被打乱碱基配对的结构(例如发夹环)所打乱。
在一些具体实施方式中，核酸靶半体是
Figure GPA00001138904500541
一般地，
Figure GPA00001138904500542
是高亲和性的L-对映体的寡核苷酸配体，与D-寡核苷酸相比，其显示出对酶降解的高度抗性。在一些具体实施方式中，
Figure GPA00001138904500543
按照适配子的设计和使用来进行设计和使用。
本领域普通技术人员将认识到，本文描述的任何能够特异性与靶结合的核酸均可用于本发明。
本发明的核酸(包括核酸靶半体和/或待输送的功能性RNA，例如RNAi试剂、核酶、tRNA等，以下更详细描述)可以通过任何可获得的技术制备，包括但不限于，化学合成、酶式合成、酶式或化学切割较长的前体，等。合成RNA的方法在本领域是已知的(参见，例如Gait，M.J.(ed.)Oligonucleotide synthesis：a practicalapproach，Oxford[Oxfordshire]，Washington，DC：IRL Press，1984；和Herdewijn，P.(ed.)Oligonucleotide synthesis：methods and applications，Methods in molecularbiology，v.288(Clifton，N.J.)Totowa，N.J.：Humana Press，2005；两篇均通过引用并入本文)。
形成核酸靶半体的核酸可以包含天然产生的核苷、修饰的核苷、天然产生的在一个或多个核苷之间插入烃连接子(例如亚烃基)或聚醚连接子(例如PEG连接子)的核苷、在一个或多个核苷之间插入烃或PEG连接子的修饰的核苷，或其组合。在一些具体实施方式中，核酸靶半体的核苷酸或修饰的核苷酸可以被烃连接子或聚醚连接子替换，只有核酸靶半体的结合亲和性和特异性不被该替换实质性降低(例如，靶的核酸靶半体的解离常数应该不高于约1×10-3M)。
本领域技术人员将领会到：根据本发明的核酸可以包含完全是在天然产生的核酸中发现的类型的核苷酸，或者反而可以包括一个或多个核苷酸类似物或具有与天然产生的核酸不同的结构。美国专利6,403,779；6,399,754；6,225,460；6,127,533；6,031,086；6,005,087；5,977,089及其中的参考文献公开了可以使用的众多的特异性核苷酸类似物和修饰。参见Crooke，S.(ed.)Antisense Drug Technology：Principles，Strategies，and Applications(1st ed)，Marcel Dekker；ISBN：0824705661，1st edition(2001)；通过引用并入本文；以及其中的参考文献。例如，2’-修饰包括卤素、烷氧基和烯丙氧基基团。在一些具体实施方式中，2’-OH基团被选自H、OR、R、卤素、SH、SR1、NH2、NHR、NR2或CN的基团取代，其中R是C1-C6烷基、烯基或炔基，卤素是F、Cl、Br或I。修饰的连接的例子包括硫代磷酸盐和5’-N-亚磷酰胺连接。
根据本发明可以使用包含众多不同的核苷酸类似物、修饰的骨架或非天然产生的核苷间连接的核酸。本发明的核酸可以包括天然核苷(即腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)或修饰的核苷。修饰的核苷的例子包括碱基修饰的核苷(例如阿糖胞苷、肌苷、异鸟苷、水粉伞素(nebularine)、假尿苷、2，6-二氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、2-硫胸苷、3-脱氮-5-氮胞苷、2’-脱氧尿苷、3-硝基吡咯、4-甲基吲哚、4-硫尿苷、4-硫胸苷、2-氨基腺苷、2-硫胸苷、2-硫尿苷、5-溴胞苷、5-碘尿苷、肌苷、6-氮尿苷、6-氯嘌呤、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氮腺苷、8-叠氮腺苷、苯并咪唑、M1-甲基腺苷、吡咯并嘧啶、2-氨基-6-氯嘌呤、3-甲基腺苷、5-丙炔基胞苷、5-丙炔基尿苷、5-溴尿苷、5-氟尿苷、5-甲基胞苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-加氧腺苷、8-加氧鸟苷、O(6)-甲基鸟苷和2-硫胞苷)，化学或生物修饰的碱基(例如甲基化的碱基)，修饰的糖(例如2’-氟核糖、2’-氨基核糖、2’-叠氮核糖、2’-O-甲基核糖、L-对映体核苷阿拉伯糖和己糖)，修饰的磷酸盐基团(例如硫代磷酸盐和5’-N-亚磷酰胺连接)及其组合。用于核酸的化学合成的天然和修饰的核苷酸单体可以容易地获得。在一些情况下，包含这样的修饰的核酸相对于仅由天然核苷酸组成的核酸表现出改善的特性。在一些具体实施方式中，本文描述的核酸修饰用于减少和/或防止核酸酶(例如外切核酸酶、内切核酸酶等)的消化。例如，可以通过在一条链或两条链的3’末端加入核苷酸类似物以减少消化，从而稳定核酸的结构。
修饰的核酸不必在分子的全长上统一修饰。不同的核苷酸修饰和/或骨架结构可以存在于核酸的不同位置。本领域普通技术人员将领会到：核苷酸类似物或其它修饰可以位于核酸的任何位置，只要核酸的功能实质上不受影响。仅举一例，修饰可以位于适配子的任何位置，只要适配子与适配子靶特异性结合的能力实质上不受影响。修饰区域可以位于一条链或两条链的5’-末端和/或3’-末端。例如，可以这样的使用修饰的适配子，其中两条链的任一条链的5’-和/或3’-末端的大约1个至大约5个残基是核苷酸类似物和/或具有骨架修饰。修饰可以是5’或3’末端修饰。核酸链可以包含至少50％未修饰的核苷酸，至少80％未修饰的核苷酸，至少90％未修饰的核苷酸或100％未修饰的核苷酸。
根据本发明的核酸可以包含例如糖、核苷或核苷间连接的修饰，如在美国专利公开2003/0175950、2004/0192626、2004/0092470、2005/0020525和2005/0032733中描述的那些。本发明包括使用具有其中所描述的任意一个或多个修饰的任意核酸。例如，已经报道许多末端偶联物，例如脂类例如胆固醇、石胆酸、月桂酸或长烷基支链能够改善细胞摄入。可以使用例如本领域已知的任何合适的检验(例如选择那些产生改善的治疗性试剂的输送，改善的适配子与适配子靶的特异性结合等)测试类似物和修饰。在一些具体实施方式中，根据本发明的核酸可以包含一个或多个非天然核苷连接。在一些具体实施方式中，适配子的3’-末端、5’-末端或3’-末端和5’-末端的一个或多个内部核苷酸被倒转以产生连接，例如3’-3’连接或5’-5’连接。
在一些具体实施方式中，根据本发明的核酸是非合成的，而是从其天然环境中分离的天然产生的物质。
小分子靶半体。在一些具体实施方式中，根据本发明的靶半体可以是小分子。在一些具体实施方式中，小分子为约2000g/mol以下的大小。在一些具体实施方式中，小分子为约1500g/mol以下或约1000g/mol以下。在一些具体实施方式中，小分子为约800g/mol以下或约500g/mol以下。
在一些具体实施方式中，小分子是寡聚体。在一些具体实施方式中，小分子是非寡聚体。在一些具体实施方式中，小分子是天然产物或具有基于天然产物的完整结构的部分结构(例如亚结构)的天然产物样的化合物。在一些具体实施方式中，小分子是合成产物。在一些具体实施方式中，小分子可以来自化学库。在一些具体实施方式中，小分子可以来自制药公司的系列库。在一些具体实施方式中，小分子是美国食品与药品管理局批准的药物，如在美国联邦法规(C.F.R.)中所提供。
本领域普通技术人员将领会到根据本发明可以使用与本文描述的想要的靶特异性结合的任何小分子。
蛋白靶半体。在一些具体实施方式中，根据本发明的靶半体可以是蛋白或肽。在一些具体实施方式中，肽在大小方面的范围为约5至约100、约5至约50、约10至约75、约15至约50或约20至约25个氨基酸。在一些具体实施方式中，肽序列可以基于蛋白的序列。在一些具体实施方式中，肽序列可以是氨基酸的随机排列。
术语“多肽”和“肽”在本文中可互换地使用，“肽”通常是指长度为约100个氨基酸以下的多肽。多肽可以含有L-氨基酸、D-氨基酸或二者，并且可以含有任何的多种氨基酸修饰或本领域中已知的类似物。有用的修饰包括例如末端乙酰化、酰胺化、脂化、磷酸化、糖基化、酰基化、法呢基化、硫酸盐化等。
可以用作根据本发明的靶半体的示例性蛋白包括但不限于抗体、受体、细胞因子、肽激素、糖蛋白、糖肽、蛋白聚糖、源自组合库的蛋白(例如AvimersTM、
Figure GPA00001138904500571
等)，及其特征性部分。可以使用合成的结合蛋白例如NanobodiesTM、AdNectinsTM等。在一些具体实施方式中，蛋白靶半体可以是肽。
本领域普通技术人员将体会到根据本发明可以使用与本文描述的想要的靶特异性结合的任何蛋白和/或肽。
在一些具体实施方式中，靶半体可以是抗体和/或其特征性部分。术语“抗体”是指任何免疫球蛋白，不论是天然的或完全或部分合成产生的，还指其衍生物和特征性部分。抗体可以是单克隆或多克隆的。抗体可以是任何免疫球蛋白类别的成员，包括任何人类的类别：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
如本文所用的抗体片段(即抗体的特征性部分)是指小于抗体全长的任何衍生物。在一些具体实施方式中，抗体片段保持全长抗体的特异性结合能力的至少显著部分。这样的抗体片段的例子包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2、scFv、Fv、dsFv二体和Fd片段。抗体片段还包括但不限于Fc片段。
抗体片段可以通过任何方式产生。例如，抗体片段可以通过完整抗体的片段化经酶式作用或化学产生和/或其可以通过从编码部分抗体序列的基因经重组产生。作为选择，抑或是另外，抗体片段可以全部或部分合成产生。抗体片段可选地可以包含单链抗体片段。作为选择，抑或是另外，抗体片段可以包含多条连接在一起(例如通过二硫连接)的链。抗体片段可选地可以包含多分子复合体。功能性抗体片段通常包含至少约50个氨基酸，更通常将包含至少约200个氨基酸。
在一些具体实施方式中，抗体可以包括嵌合(例如“人源化”)和单链(重组)抗体。在一些具体实施方式中，抗体可以具有减少的效应功能和/或双特异性分子。在一些具体实施方式中，抗体可以包括由Fab表达库产生的片段。
单链Fv(scFv)是仅由可变轻链(VL)和可变重链(VH)组成(彼此通过多肽连接子共价结合)的重组抗体片段。VL或VH可以包含NH2-末端结构域。多肽连接子的长度和组成可以变化，只要两个可变结构域能够无显著空间位阻地桥连。通常，连接子主要包含一段甘氨酸和丝氨酸残基，其中散布一些谷氨酸或赖氨酸残基以增加溶解性。
二体是嵌合的scFv。二体通常具有比多数scFv更短的肽连接子，它们经常显示出作为二体结合的偏爱。
Fv片段是由一个VH和一个VL结构域组成(通过非共价相互作用结合在一起)的抗体片段。如本文所用的术语“dsFv”是指具有工程化的分子间二硫键(以稳定VH-VL对)的Fv。
F(ab’)2片段是实质上等同于通过以胃蛋白酶在pH 4.0-4.5消化免疫球蛋白而获得的抗体片段。片段可以通过重组产生。
Fab’片段是实质上等同于将连接F(ab’)2片段中的两个重链片段的二硫桥或桥连接的还原而获得的抗体片段。Fab’片段可以通过重组产生。
Fab片段是实质上等同于通过以酶(例如木瓜蛋白酶)消化免疫球蛋白而获得的抗体片段。Fab片段可以通过重组产生。Fab片段的重链片段是Fd片。
碳水化合物靶半体。在一些具体实施方式中，根据本发明的靶半体可以包含碳水化合物。在一些具体实施方式中，碳水化合物可以是包含由糖苷键连接的单糖(或其衍生物)的多糖，如本领域所知。这样的糖包括但不限于葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡萄糖胺、半乳糖胺和神经氨酸。在一些具体实施方式中，碳水化合物可以是一个或多个普鲁兰糖(pullulan)、纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟基纤维素、甲基纤维素、右旋糖苷、环右旋糖苷、糖原、淀粉、羟乙基淀粉、卡拉胶(carageenan)、糖基、直链淀粉、壳聚糖、N，O-羟甲基壳聚糖、海藻胶和海藻酸、淀粉、几丁质、肝素、魔芋、葡甘聚糖、石耳素(pustulan)、肝素、透明质酸、卡德兰(curdlan)和黄原胶。
在一些具体实施方式中，碳水化合物可以是酰胺化、羧基化和/或硫化的。在一些具体实施方式中，亲水性多糖可以通过引入大量的侧链疏水性基团而被修饰以变成疏水性的。在一些具体实施方式中，疏水性碳水化合物可以包括醋酸纤维素、醋酸普鲁兰糖、醋酸魔芋、醋酸直链淀粉和、醋酸右旋糖苷。
本领域普通技术人员将领会到根据本发明可以使用与本文描述的想要的靶特异性结合的任何碳水化合物。
脂靶半体。在一些具体实施方式中，根据本发明的靶半体可以包含一个或多个脂肪酸基团或其盐。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以包含可消化的长链的(例如C8-C50)取代的或非取代的烃。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是C10-C20脂肪酸或其盐。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是C15-C20脂肪酸或其盐。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是C15-C25脂肪酸或其盐。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是不饱和的。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是单不饱和的。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是多不饱和的。在一些具体实施方式中，不饱和脂肪酸基团的双键可以是顺式构象。在一些具体实施方式中，不饱和脂肪酸的双键可以是反式构象。
在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是一个或多个丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸或二十四酸。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是一个或多个棕榈油酸、油酸、十八碳烯酸、亚油酸、α-亚油酸、γ-亚油酸、花生四烯酸、鳕烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥子酸。
本领域普通技术人员将领会到根据本发明可以使用与本文描述的想要的靶特异性结合的任何脂肪酸基团。
新型靶半体
任何新型靶半体可以应用于根据本发明的
Figure GPA00001138904500591
纳米载体。本领域已知的任何方法可以用于设计、鉴别和/或分离新型靶半体。例如，利用分子库的标准技术和体外结合检验可以用于鉴定新型靶半体。
核酸靶半体(例如适配子、
Figure GPA00001138904500592
)可以通过使用任何可获得的方法设计和/或鉴别。在一些具体实施方式中，通过鉴别来自核酸候选混合物的核酸靶半体而设计和/或鉴别核酸靶半体。Systemic Evolution of Ligands by ExponentialEnrichment(SELEX)或其变体是普遍使用的从核酸候选混合物中鉴别与靶结合的核酸靶半体的方法(参见例如美国专利6,482,594；6,458,543；6,458,539；6,376,190；6,344,318；6,242,246；6,184,364；6,001,577；5,958,691；5,874,218；5,853,984；5,843,732；5,843,653；5,817,785；5,789,163；5,763,177；5,696,249；5,660,985；5,595,877；5,567,588和5,270,163；每篇均通过引用并入本文)。作为选择，抑或是另外，Polyplex In Vivo Combinatorial Optimization(PICO)是一种用于在体内和/或体外从核酸候选混合物中鉴别与靶结合的核酸靶半体(例如适配子)的方法，在标题为“System for Screening Particles”，申请日为2006年12月15日的同一申请人的PCT申请US06/47975中有描述，通过引用并入本文。
免疫刺激试剂
在一些具体实施方式中，纳米载体可以转运一个或多个帮助刺激免疫应答的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂通过激活APC(以增强他们的免疫刺激试剂能力)而增强免疫应答。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂通过扩大对特异性抗原的淋巴细胞应答而增强免疫应答。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂通过诱导调节子的局部释放(例如从多种细胞类型释放细胞因子)而增强免疫应答。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂抑制或重引导免疫应答。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂诱导调节性T细胞。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体的所有免疫刺激试剂彼此相同。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含许多不同类型的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含多个单独的免疫刺激试剂，它们彼此都相同。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体精确地包含一种类型免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体精确地包含两种不同类型的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上的不同类型的免疫刺激试剂。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含同时刺激B细胞和T细胞的单一类型的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种类型免疫刺激试剂，其中第一种类型免疫刺激试剂刺激B细胞，第二种类型免疫刺激试剂刺激T细胞。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上类型的免疫刺激试剂，其中一种或多种类型免疫刺激试剂刺激B细胞，一种或多种类型免疫刺激试剂刺激T细胞。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含至少一种类型的与疫苗纳米载体的外表面结合的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，结合是共价的。在一些具体实施方式中，共价结合由一个或多个连接子介导。在一些具体实施方式中，结合是非共价的。在一些具体实施方式中，非共价结合由电荷相互作用、亲和相互作用、金属配合、物理吸附、主客体相互作用、疏水相互作用、TT堆积相互作用、氢键结合相互作用、范德华力相互作用、磁性相互作用、静电相互作用、偶极-偶极相互作用和/或其组合所介导。免疫刺激试剂与疫苗纳米载体的结合在以下标题为“疫苗纳米载体的产生”的部分中有更详细的描述。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包括脂膜(例如脂双层、脂单层等)，至少一种类型免疫刺激试剂可以与脂膜结合。在一些具体实施方式中，至少一种类型免疫刺激试剂嵌入脂膜内。一些具体实施方式中，至少一种类型免疫刺激试剂嵌入脂双层的腔内。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含至少一种类型的与脂膜的内表面结合的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，至少一种类型免疫刺激试剂包埋于疫苗纳米载体的脂膜内。在一些具体实施方式中，至少一种类型免疫刺激试剂可以位于疫苗纳米载体的多个位点。例如，第一种类型免疫刺激试剂可以嵌于脂膜内，第二种类型免疫刺激试剂可以包埋于疫苗纳米载体的脂膜内。再举一个例子，第一种类型免疫刺激试剂可以与脂膜的外表面结合，第二种类型免疫刺激试剂可以与疫苗纳米载体的脂膜的内表面结合。在一些具体实施方式中，第一种类型免疫刺激试剂可以嵌于疫苗纳米载体的脂双层的腔内，脂双层中可以包埋聚合物基质，第二种类型免疫刺激试剂可以分布在所述聚合物基质中。在一些具体实施方式中，第一种类型免疫刺激试剂和第二种类型免疫刺激试剂可以位于疫苗纳米载体的相同位点(例如它们可都与疫苗纳米载体的外表面结合；它们可都包埋于疫苗纳米载体内，等)。本领域普通技术人员将认识到前述例子只是多个免疫刺激试剂可以与疫苗纳米载体的不同位点结合的很多不同方式的代表。多个免疫刺激试剂可以位于疫苗纳米载体的任意位点的组合。
在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂可以是白细胞介素、干扰素、细胞因子等。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂可以是Toll样受体(TLR)的天然或合成的激动剂。在特异的具体实施方式中，疫苗纳米载体包括toll样受体(TLR)-7的配体，例如CpG，其诱导I型干扰素的产生。在特异的具体实施方式中，免疫刺激试剂可以是DC表面分子CD40的激动剂。在一些具体实施方式中，为了刺激免疫力而不是耐受性，纳米载体包括促进DC成熟(引发原态T细胞的需要)和细胞因子(例如I类干扰素，其促进抗体应答和抗病毒免疫力)产生的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以是TLR-4激动剂，例如细菌脂多糖(LPS)、VSV-G和/或HMGB-1。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是细胞因子，其为从细胞释放的小蛋白或生物因子(5kD-20kD的范围)且对于细胞-细胞相互作用、交流和其它细胞的行为具有特异性效应。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂可以是从坏死细胞中释放的促炎性刺激剂(例如尿酸盐晶体)。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂可以是激活的补体级联成分(例如CD21、CD35等)。在一些具体实施方式中，免疫刺激试剂可以是激活的免疫复合体的成分。免疫刺激试剂包括TLR-1、TLR-2、TLR-3、TLR-4、TLR-5、TLR-6、TLR-7、TLR-8、TLR-9和TLR-10激动剂。免疫刺激试剂还包括补体受体激动剂，例如与CD21或CD35结合的分子。在一些具体实施方式中，补体受体激动剂诱导纳米载体的内源性补体调理。免疫刺激试剂还包括细胞因子受体激动剂，例如细胞因子。在一些具体实施方式中，细胞因子受体激动剂是小分子、抗体、融合蛋白或适配子。
在一些具体实施方式中，存在不止一种类型免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，不同的免疫刺激试剂每个作用于不同的途径。因此，免疫刺激试剂可以是不同的Toll样受体、Toll样受体和CD40、Toll样受体和炎性体，等等。
在一些具体实施方式中，本发明提供了包含与一个或多个佐剂制共同配制成的疫苗纳米载体的药物组合物。如本文所用的术语“佐剂”是指不构成特异性抗原但是增强对所施用的抗原的免疫应答的试剂。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体与一种或多种佐剂配制，例如凝胶类型的佐剂(例如氢氧化铝、磷酸铝、磷酸钙等)；微生物佐剂(例如包括CpG基序的免疫调节DNA序列；内毒素例如单磷酸类脂A；外毒素例如霍乱毒素、大肠杆菌热不稳定毒素和百日咳毒素；胞壁酰二肽等)；油乳剂和基于乳化的佐剂(例如弗氏佐剂，MF59[Novartis]、SAF等)；颗粒佐剂(例如脂质体、生物可降解微球体、皂角苷等)；合成佐剂(例如非离子阻断共聚物、胞壁酰肽类似物、聚磷腈、合成多核苷酸等)；和/或其组合。其它的示例性佐剂包括一些聚合物(例如美国专利5,500,161中描述的聚磷腈，通过引用并入本文)、QS21、鲨烯、四氯十氧化物等。
T细胞激活的检验
在一些具体实施方式中，可以应用各种检验以确定T细胞或T细胞组中的免疫应答是否被激活(即T细胞或T细胞组是否变成“激活的”)。在一些具体实施方式中，可以通过测定抗原诱导的T细胞产生的细胞因子而确定T细胞中免疫应答的刺激。在一些具体实施方式中，可以通过测定抗原诱导的T细胞产生的IFNγ、IL-4、IL-2、IL-10、IL-17和/或TNFα而确定T细胞中免疫应答的刺激。在一些具体实施方式中，通过细胞内细胞因子染色然后进行流式细胞术而测定抗原诱导的由T细胞产生的细胞因子。在一些具体实施方式中，通过表面捕获染色然后进行流式细胞术而测定抗原诱导的由T细胞产生的细胞因子。在一些具体实施方式中，通过确定激活的T细胞培养物上清液中细胞因子的浓度而测定抗原诱导的由T细胞产生的细胞因子。在一些具体实施方式中，这可以通过ELISA测定。
在一些具体实施方式中，通过ELISPOT检验测定抗原诱导的由T细胞产生的细胞因子。一般地，ELISPOT检验应用与三明治酶联免疫吸附检验(ELISA)技术非常相似的技术。将抗体(例如单克隆抗体，多克隆抗体等)无菌地包被至被覆了PVDF(聚偏二氟乙烯)的微型板。根据对待测细胞因子的特异性选择抗体。通过使用例如不与检验中的任何抗体应答的血清蛋白将板封闭。以不同的密度将目标细胞植板(与抗原或有丝分裂原一起)，然后置于潮湿的37℃ CO2孵箱内持续一定的时间。激活的细胞所分泌的细胞因子在局部被高表面区域的PVDF膜上包被的抗体所捕获。洗涤孔以除去细胞、碎片和培养液成分之后，向孔中加入对细胞因子特异性的二抗(例如生物素化的多克隆抗体)。该抗体与靶细胞因子的不同表位反应，并因此用于检测所捕获的细胞因子。在洗涤以除去任何未结合的生物素化抗体之后，然后使用抗生物素-HRP和沉淀底物(例如AEC、BCIP/NBT)显示所检测的细胞因子。着色的终产物(点，通常为黑蓝色)通常代表单个的产生细胞因子的细胞。可以人工对点进行计数(例如使用解剖显微镜)，或使用自动计数器以捕获微孔图像并分析点的数目和大小。在一些具体实施方式中，每个点对应于单一的产生细胞因子的细胞。
在一些具体实施方式中，如果约1％至约100％的抗原特异性T细胞产生细胞因子，则称T细胞中的免疫应答被刺激。在一些具体实施方式中，如果至少约1％、至少约5％、至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或约100％的抗原特异性T细胞产生细胞因子，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
在一些具体实施方式中，如果免疫的个体比原态对照包含高出至少约10倍、至少约50倍、至少约100倍、至少约500倍、至少约1000倍、至少约5000倍、至少约10,000倍、至少约50,000倍、至少约100,000倍或高出至少约100,000倍以上的产生细胞因子的细胞，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
在一些具体实施方式中，通过测定抗原诱导的T细胞的增殖而确定T细胞中免疫应答的刺激。在一些具体实施方式中，可以通过分裂的T细胞(有时称为“淋巴细胞转化测试，或“LTT”)中H3-胸苷的摄入而测定抗原诱导的增殖。在一些具体实施方式中，如果H3-胸苷的摄入(以γ计数器的计数读数给出)比原态对照高出至少约5倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约50倍、至少约100倍、至少约500倍、至少约1000倍、至少约5000倍、至少约10,000倍、或高出至少约10,000倍以上，则称发生了抗原诱导的增殖。
在一些具体实施方式中，可以通过流式细胞术测定抗原诱导的增殖。在一些具体实施方式中，可以通过羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)稀释检验而测定抗原诱导的增殖。CFSE是一种无毒的荧光的透膜的染料，其通过琥珀酰反应性基团与细胞质中的蛋白(例如T细胞蛋白)的氨基基团相结合。当细胞分裂时，CFSE标记的蛋白在子代细胞中均匀分布，因此随着每次分裂细胞荧光减半。因此，在存在各自的抗原时在培养之后抗原特异性的T细胞(CFSElow)的荧光丧失，可以与培养物中的其它细胞(CFSEhigh)分辨开来。在一些具体实施方式中，如果CFSE稀释(以CFSElow细胞占所有的CFSE+细胞的百分率表示)是至少约5％、至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约90％、至少约95％或至少约100％，则称发生了抗原诱导的增殖。
在一些具体实施方式中，如果T细胞激活的细胞标记物相对于未刺激的细胞而言以不同的水平(例如更高或更低的水平)表达，则称T细胞中的免疫应答被刺激。在一些具体实施方式中，CD11aCD27、CD25、CD40L、CD44、CD45RO和/或CD69在激活的T细胞中比在未刺激的T细胞中表达更高。在一些具体实施方式中，L选择素(CD62L)、CD45RA和/或CCR7在激活的T细胞中比在未刺激的T细胞中表达更低。
在一些具体实施方式中，通过检验效应CD8+T细胞抵抗抗原冲击的靶细胞的细胞毒性而测定T细胞中的免疫应答。例如，可以进行51铬(51Cr)释放检验。在该检验中，效应CD8+T细胞与感染的细胞(其呈递病毒肽至I类MHC上)结合并指引感染的细胞进行细胞凋亡。如果加入效应CD8+T细胞之前以51Cr标记细胞，则释放到上清液中的51Cr的数量与被杀死的靶的数目成比例。
本领域普通技术人员将认识到以上描述的检验仅仅是可用于确定是否发生T细胞激活的示例性方法。本领域技术人员已知的可用于确定是否发生T细胞激活的任何检验均落入本发明的范围内。本文描述的检验以及其它可用于确定是否发生T细胞激活的检验在Current Protocols in Immunology(John Wiley & Sons，Hoboken，NY，2007；通过引用引入本文)中有描述。
B细胞
本发明提供了用于将例如免疫调节试剂输送至免疫系统的细胞的疫苗纳米载体。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含可以被呈递至B细胞的至少一个免疫调节试剂(即B细胞抗原)。
免疫调节试剂
B细胞和T细胞通过不同的机理识别抗原。如上所述，T细胞识别经处理形式的抗原(例如被APC的MHC分子呈递至T细胞受体的肽片段)。B细胞识别天然形式的抗原。B细胞通过B细胞受体(BCR)和/或膜上结合的免疫球蛋白识别血液或淋巴中的游离的(例如可溶的)抗原。
免疫调节试剂可以是B细胞抗原。B细胞抗原包括但不限于蛋白、肽、小分子和碳水化合物。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是非蛋白抗原(即不是蛋白或肽抗原)。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是与传染性试剂结合的碳水化合物。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是与传染性试剂结合的糖蛋白或糖肽。传染性试剂可以是细菌、病毒、真菌、原生动物或寄生虫。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是弱免疫原性的抗原。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是被滥用的物质或其部分。在一些具体实施方式中，B细胞抗原是令人上瘾的物质或其部分。令人上瘾的物质包括但不限于尼古丁、麻醉药、咳嗽抑制剂、镇定剂和止痛药。令人上瘾的物质的例子包括本文其它地方提供的那些。
在一些具体实施方式中，B细胞抗原是毒素，例如来自化学武器的毒素。在一些具体实施方式中，来自化学武器的毒素是肉毒杆菌毒素或磷杂环戊二烯(phosphene)。来自化学武器的毒素还包括但不限于O-烷基(＜C10，包括环烷基)烷基(Me、Et、n-Pr或i-Pr)-磷酸氟化物(例如，沙林：甲基氟膦酸O-异丙酯，梭曼：甲基氟磷酸O-叔己酯)，O-烷基(＜C10，包括环烷基)N，N-二烷基(Me、Et、n-Pr或i-Pr)-磷胺氰化物(例如，塔崩：N，N-二甲氨基氰基磷酸O-乙酯)，O-烷基(H或＜C10，包括环烷基)S-2-二烷基(Me、Et、n-Pr或i-Pr)-氨基乙基烷基(Me、Et、n-Pr或i-Pr)硫代磷酸盐和相应的烷基化或质子化盐(例如，VX：O-乙基S-2-二异丙基氨基乙基甲基硫代磷酸盐)，硫芥子气：2-氯乙基氯甲基硫醚，芥子气：双(2-氯乙基)硫醚、双(2-氯乙基硫)甲烷，倍半芥子气：1，2-双(2-氯乙基硫)乙烷、1，3-双(2-氯乙基硫)-n-丙烷、1，4-双(2-氯乙基硫)-n-丁烷、1，5-双(2-氯乙基硫)-n-戊烷、双(2-氯乙基硫甲基)乙醚，O-芥子气：双(2-氯乙基硫乙基)乙醚，路易斯毒气(Lewisite)：路易斯毒气1：2-氯乙烯二氯胂，路易斯毒气2：双(2-氯乙烯)氯胂，路易斯毒气3：三(2-氯乙烯)胂，氮芥：HN1：双(2-氯乙基)乙胺，HN2：双(2-氯乙基)甲胺，HN3：三(2-氯乙基)胺，蛤蚌毒素，蓖麻毒素，阿米吨(Amiton)：O，O-二乙基S-(2-(二乙基氨基)乙基)硫代磷酸酯及相应的烷基化或质子化的盐，PFIB：1，1，3，3，3-五氟-2-(三氟甲基)-1-丙烯，二苯羟乙酸-3-喹咛环酯(BZ)，光气：碳酰氯，氯化氰，氰化氢和三氯硝基甲：三氯硝基甲烷。
B细胞抗原还可以是有害的环境中的试剂。在有害的环境中的试剂包括但不限于砷、铅、汞、氯乙烯、多氯联苯、苯、多环芳香烃、镉、苯并(a)芘、苯并(b)荧蒽、氯仿、DDT、P，P’-，阿罗克洛1254(aroclor 1254)、阿罗克洛1260(aroclor1260)、二苯并(a，h)蒽、三氯乙烯、狄氏剂(dieldrin)、六价铬和DDE，P，P’。这样的试剂的例子包括本文其它地方提供的那些。
在一些具体实施方式中，B细胞抗原是自身抗原。在其它具体实施方式中，B细胞抗原是同种抗原、变应原、接触致敏剂、退行性疾病抗原、半抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、令人上瘾的物质、异种抗原或代谢性疾病酶或酶产物。这样的抗原的例子包括本文其它地方提供的那些。
如上所述，本发明提供了包含例如一个或多个免疫调节试剂的疫苗纳米载体。在一些具体实施方式中，包含一个或多个免疫调节试剂的本发明的纳米载体用作疫苗。在一些具体实施方式中，向B细胞抗原呈递可以通过呈递纳米载体的表面上的结构上完整的免疫调节试剂而最优化。在一些具体实施方式中，结构上完整的免疫调节试剂以高拷贝数目和/或密度被呈递在疫苗纳米载体的表面。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包含分离的和/或重组蛋白或肽、灭活的生物和病毒、死的生物和病毒、遗传改变的生物或病毒，和细胞提取物。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以包含核酸、碳水化合物、脂和/或小分子。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是激发免疫应答的试剂。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂是抗原。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂用于疫苗。可以在以上标题为“B细胞”的部分找到对于免疫调节试剂的进一步描述。
如上所述，疫苗纳米载体可以包含仅一种类型免疫调节试剂，其同时刺激B细胞和T细胞。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种类型免疫调节试剂，其中第一种类型免疫调节试剂刺激B细胞，第二种类型免疫调节试剂刺激T细胞。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上类型免疫调节试剂，其中一种或多种类型免疫调节试剂刺激B细胞，一种或多种类型免疫调节试剂刺激T细胞。
靶半体
如上所述，本发明的纳米载体包含一个或多个靶半体。关于本发明的靶半体的一般性和特异性特征的讨论，参见以上标题为“T细胞”的部分中小标题为“靶 半体”的内容。在一些具体实施方式中，靶半体靶向特定的细胞类型。在一些具体实施方式中，靶是B细胞标记物。在一些具体实施方式中，B细胞靶是在B细胞上表达而不在非B细胞上表达的抗原。在一些具体实施方式中，B细胞靶是在B细胞上比在非B细胞上更普遍存在的抗原。
在一些具体实施方式中，靶是SCS-Mph标记物。在一些具体实施方式中，SCS-Mph靶是在SCS-Mph上表达但不在非SCS-Mph上表达的抗原。在一些具体实施方式中，SCS-Mph靶是在SCS-Mph上比在非SCS-Mph上更普遍存在的抗原。示例性SCS-Mph标记物在下面标题为“被膜下窦巨噬细胞”的部分列出并且包括本文其它地方提供的那些。
在一些具体实施方式中，靶是FDC标记物。在一些具体实施方式中，FDC靶是在FDC上表达但不在非FDC上表达的抗原。在一些具体实施方式中，FDC靶是在FDC上比在非FDC上更普遍存在的抗原。示例性FDC标记物在下面标题为“滤泡树突状细胞”的部分列出并且包括本文其它地方提供的那些。
在一些具体实施方式中，靶优先在特定细胞类型中表达。例如，SCS-Mph、FDC和/或B细胞上的SCS-Mph、FDC和/或B细胞靶的表达相对于参考群体来说在SCS-Mph、FDC和/或B细胞中为至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍过表达。在一些具体实施方式中，参考群体可以包含非SCS-Mph、FDC和/或B细胞。
在一些具体实施方式中，激活的SCS-Mph、FDC和/或B细胞上的SCS-Mph、 FDC和/或B细胞靶的表达相对于参考群体来说在激活的SCS-Mph、FDC和/或B细胞中为至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍过表达。在一些具体实施方式中，参考群体可以包含非激活的SCS-Mph、FDC和/或B细胞。
被膜下窦巨噬细胞
本发明包含以下认识：抗原靶向被膜下窦巨噬细胞(SCS-Mph)参与淋巴携带的病原体(例如病毒)向滤泡B细胞的有效的早期呈递(图2)。如实施例1所描述，向小鼠足底皮下注射泡性口炎病毒(VSV)或腺病毒(AdV)之后，病毒颗粒被引流膝后弯淋巴结中的CD169+ SCS-Mph有效地且选择性地保留。这些淋巴结中的VSV特异性B细胞受体(BCR)转基因B细胞被迅速激活并在该病毒攻击后产生特别高的抗体效价。SCS-Mph的清除(通过注射负载了氯曲膦酸盐(clodronate)(其对Mph是毒性的)的脂质体)消除了早期的B细胞激活，这表明SCS-Mph对于淋巴携带颗粒抗原向B细胞呈递来说是必需的。
以固定在表面上(而不是处于溶液中)呈递至B细胞的多价抗原对B细胞的激活更加有力。不想被任何一个理论所束缚，本发明提出了为何很多包被的病毒(例如VSV)引发针对其包被糖蛋白的有力的中和抗体应答的一种原因：抗原性蛋白以非常高的密度被呈递至病毒颗粒的表面，和病毒颗粒被以相对不可移动的方式被呈递至B细胞，即结合至SCS-Mph的质膜。本发明包括以下认识：疫苗载体(其通过在皮下注射后靶向SCS-Mph并在其表面呈递多价的构象完整的抗原而模拟病毒颗粒)能够刺激有力的B细胞应答。
在一些具体实施方式中，SCS-Mph的靶向通过与CD169(即唾液酸粘附素)、CD11b(即CD11b/CD18、Mac-1、CR3或αMβ2整合素)、和/或甘露糖受体(即多价血凝素)(这些蛋白皆为主要在SCS-Mph上表达)结合的半体实现。这样的半体的例子包括在本文其它地方提供的那些。
在一些具体实施方式中，可以通过与主要在巨噬细胞上表达和/或存在的任意物质(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)(即SCS-Mph标记物)特异性结合的任意靶半体实现靶向SCS-Mph。示例性的SCS-Mph标记物包括但不限于，CD4(L3T4，W3/25，T4)；CD9(p24，DRAP-1，MRP-1)；CD11a(LFA-1α，αL整合素链)；CD11b(αM整合素链，CR3，Mo1，C3niR，Mac-1)；CD11c(αX整合素，p150，95，AXb2)；CDw12(p90-120)；CD13(APN，gp150，EC 3.4.11.2)；CD14(LPS-R)；CD15(X-半抗原，Lewis，X，SSEA-1，3-FAL)；CD15s(唾液酰LewisX)；CD15u(3′硫代Lewis X)；CD15su(6硫代-唾液酰Lewis X)；CD16a(FCRIIIA)；CD16b(FcgRIIIb)；CDw17(乳糖基神经酰胺，LacCer)；CD18(整合素β2，CD11a，b，c β-亚基)；CD26(DPP IV外酶，ADA结合蛋白)；CD29(血小板GPIIa，β-1整合素，GP)；CD31(PECAM-1，Endocam)；CD32(FCγRII)；CD33(gp67)；CD35(CR1，C3b/C4b受体)；CD36(GpIIIb，GPIV，PASIV)；CD37(gp52-40)；CD38(ADP-核糖基环化酶，T10)；CD39(ATP脱氢酶，NTP脱氢酶-1)；CD40(Bp50)；CD43(Sialophorin，Leukosialin)；CD44(ECMRII，H-CAM，Pgp-1)；CD45(LCA，T200，B220，Ly5)；CD45RA；CD45RB；CD45RC；CD45RO(UCHL-1)；CD46(MCP)；CD47(gp42，IAP，OA3，Neurophillin)；CD47R(MEM-133)；CD48(Blast-1，Hulym3，BCM-1，OX-45)；CD49a(VLA-1α，α1整合素)；CD49b(VLA-2α，gpla，α2整合素)；CD49c(VLA-3α，α3整合素)；CD49e(VLA-5α，α5整合素)；CD49f(VLA-6α，α6整合素，gplc)；CD50(ICAM-3)；CD51(整合素α，VNR-α，Vitronectin-Rα)；CD52(CAMPATH-1，HE5)；CD53(OX-44)；CD54(ICAM-1)；CD55(DAF)；CD58(LFA-3)；CD59(1F5Ag，H19，Protectin，MACIF，MIRL，P-18)；CD60a(GD3)；CD60b(9-O-乙酰基GD3)；CD61(GP IIIa，β3整合素)；CD62L(L-选择素，LAM-1，LECAM-1，MEL-14，Leu8，TQ1)；CD63(LIMP，MLA1，gp55，NGA，LAMP-3，ME491)；CD64(FcγRI)；CD65(神经酰胺，VIM-2)；CD65s(唾液酰化-CD65，VIM2)；CD72(Ly-19.2，Ly-32.2，Lyb-2)；CD74(Ii，不变链)；CD75(sialo-masked乳酸胺)；CD75S(α2，6唾液酰化乳酸胺)；CD80(B7，B7-1，BB1)；CD81(TAPA-1)；CD82(4F9，C33，IA-4，KAI1，R2)；CD84(p75，GR6)；CD85a(ILT5，LIR2，HL9)；CD85d(ILT4，LIR2，MIR10)；CD85j(ILT2，LIR1，MIR7)；CD85k(ILT3，LIR5，HM18)；CD86(B7-2/B70)；CD87(uPAR)；CD88(C5aR)；CD89(IgA Fc受体，FcαR)；CD91(α2M-R，LRP)；CDw92(p70)；CDw93(GR11)；CD95(APO-1，FAS，TNFRSF6)；CD97(BL-KDD/F12)；CD98(4F2，FRP-1，RL-388)；CD99(MIC2，E2)；CD99R(CD99Mab restricted)；CD100(SEMA4D)；CD101(IGSF2，P126，V7)；CD102(ICAM-2)；CD111(PVRL1，HveC，PRR1，Nectin 1，HIgR)；CD112(HveB，PRR2，PVRL2，Nectin2)；CD114(CSF3R，G-CSRF，HG-CSFR)；CD115(c-fms，CSF-1R，M-CSFR)；CD116(GM-CSFRα)；CDw119(IFNγR，IFNγRA)；CD120a(γNFRI，p55)；CD120b(TNFRII，p75，TNFR p80)；CD121b(2型IL-1R)；CD122(IL2Rβ)；CD123(IL-3Rα)；CD124(IL-4Rα)；CD127(p90，IL-7R，IL-7Rα)；CD128a(IL-8Ra，CXCR1，(暂时命名为CD181))；CD128b(IL-8Rb，CSCR2，(暂时命名为CD182))；CD130(gp130)；CD131(常见的β亚基)；CD132(常见的γ链，IL-2Rγ)；CDw136(MSP-R，RON，p158-ron)；CDw137(4-1BB，ILA)；CD139；CD141(Thrombomodulin，Fetomodulin)；CD147(Basigin，EMMPRIN，M6，OX47)；CD148(HPTP-η，p260，DEP-1)；CD155(PVR)；CD156a(CD156，ADAM8，MS2)；CD156b(TACE，ADAM17，cSVP)；CDw156C(ADAM10)；CD157(Mo5，BST-1)；CD162(PSGL-1)；CD164(MGC-24，MUC-24)；CD 165(AD2，gp37)；CD168(RHAMM，IHABP，HMMR)；CD169(唾液酸粘合素，Siglec-1)；CD170(Siglec 5)；CD171(L1CAM，NILE)；CD172(SIRP-1α，MyD-1)；CD172b(SIRPβ)；CD180(RP105，Bgp95，Ly64)；CD181(CXCR1，(以前称作CD128a))；CD182(CXCR2，(以前称作CD128b))；CD184(CXCR4，NPY3R)；CD191(CCR1)；CD192(CCR2)；CD195(CCR5)；CDw197(CCR7(以前是CDw197))；CDw198(CCR8)；CD204(MSR)；CD205(DEC-205)；CD206(MMR)；CD207(Langerin)；CDw210(CK)；CD213a(CK)；CDw217(CK)；CD220(胰岛素R)；CD221(IGF1 R)；CD222(M6P-R，IGFII-R)；CD224(GGT)；CD226(DNAM-1，PTA1)；CD230(朊病毒蛋白(PrP))；CD232(VESP-R)；CD244(2B4，P38，NAIL)；CD245(p220/240)；CD256(APRIL，TALL2，TNF(配体)超家族，成员13)；CD257(BLYS，TALL1，TNF(配体)超家族，成员13b)；CD261(TRAIL-R1，TNF-R超家族，成员10a)；CD262(TRAIL-R2，TNF-R超家族，成员10b)；CD263(TRAIL-R3，TNBF-R超家族，成员10c)；CD264(TRAIL-R4，TNF-R超家族，成员10d)；CD265(TRANCE-R，TNF-R超家族，成员11a)；CD277(BT3.1，B7家族：Butyrophilin 3)；CD280(TEM22，ENDO 180)；CD281(TLR1，TOLL样受体1)；CD282(TLR2，TOLL样受体2)；CD284(TLR4，TOLL样受体4)；CD295(LEPR)；CD298(ATP1B3，Na K ATPase，β3亚基)；CD300a(CMRF-35H)；CD300c(CMRF-35A)；CD300e(CMRF-35L1)；CD302(DCL1)；CD305(LAIR1)；CD312(EMR2)；CD315(CD9P1)；CD317(BST2)；CD321(JAM1)；CD322(JAM2)；CDw328(Siglec7)；CDw329(Siglec9)；CD68(gp 110，Macrosialin)；和/或甘露糖受体；其中括号中所列名称代表别名。这样的标记物的例子包括本文其它地方提供的那些。
在一些具体实施方式中，可以通过与主要在激活后的巨噬细胞上表达和/或存在的任意物质(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)(即激活的SCS-Mph标记物)特异性结合的任意靶半体实现靶向SCS-Mph。示例性的激活的SCS-Mph标记物包括但不限于，CD1a(R4，T6，HTA-I)；CD1b(R1)；CD1c(M241，R7)；CD44R(CD44v，CD44v9)；CD49d(VLA-4α，α4整合素)；CD69(AIM，EA 1，MLR3，gp34/28，VEA)；CD105(Endoglin)；CD142(组织因子，促凝血酶原激酶，F3)；CD143(ACE，肽基二肽酶A，Kininase II)；CD153(CD3OL，TNSF8)；CD163(M130，GHI/61，RM3/1)；CD166(ALCAM，KG-CAM，SC-1，BEN，DM-GRASP)；CD227(MUC1，PUM，PEM，EMA)；CD253(TRAIL，TNF(配体)超家族，成员10)；CD273(B7DC，PDL2)；CD274(B7H1，PDL1)；CD275(B7H2，ICOSL)；CD276(B7H3)；CD297(ART4，ADP-核糖转移酶4；和Dombrock血型糖蛋白；其中括号中所列名称代表别名。这样的标记物的例子包括本文其它地方提供的那些。
B 细胞靶半体
在一些具体实施方式中，可以通过与补体受体，CR1(即CD35)或CR2(即CD21)(B细胞以及FDC上表达的蛋白)结合的半体实现靶向B细胞。在一些具体实施方式中，可以通过B细胞标记物例如CD19、CD20和/或CD22实现靶向B细胞。在一些具体实施方式中，可以通过B细胞标记物例如CD40、CD52、CD80、CXCR5、VLA-4、II类MHC、表面IgM或IgD、APRL和/或BAFF-R实现靶向B细胞。本发明包括以下认识：对补体受体或其它APC相关性分子特异性的半体对B细胞的同时靶向会增强体液应答。
在一些具体实施方式中，可以通过与主要在B细胞上表达和/或存在的任意物质(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)(即B细胞标记物)特异性结合的任意靶半体实现靶向B细胞。示例性的B细胞标记物包括但不限于，CD1c(M241，R7)；CD1d(R3)；CD2(E-rosette R，T11，LFA-2)；CD5(T1，Tp67，Leu-1，Ly-1)；CD6(T12)；CD9(p24，DRAP-1，MRP-1)；CD11a(LFA-1α，αL整合素链)；CD11b(αM整合素链，CR3，Mol，C3niR，Mac-1)；CD11c(αX整合素，P150，95，AXb2)；CDw17(乳酸神经酰胺，LacCer)；CD18(Integrin β2，CD11a，b，cβ-亚基)；CD19(B4)；CD20(B1，Bp35)；CD21(CR2，EBV-R，C3dR)；CD22(BL-CAM，Lyb8，Siglec-2)；CD23(FceRII，B6，BLAST-2，Leu-20)；CD24(BBA-1，HSA)；CD25(Tac抗原，IL-2Rα，p55)；CD26(DPPIV内酶，ADA结合蛋白)；CD27(T14，S152)；CD29(血小板GPIIa，β-1整合素，GP)；CD31(PECAM-1，Endocam)；CD32(FCγRII)；CD35(CR1，C3b/C4b受体)；CD37(gp52-40)；CD38(ADP-核糖基环化酶，T10)；CD39(ATP脱氢酶，NTP脱氢酶-1)；CD40(Bp50)；CD44(ECMRII，H-CAM，Pgp-1)；CD45(LCA，T200，B220，Ly5)；CD45RA；CD45RB；CD45RC；CD45RO(UCHL-1)；CD46(MCP)；CD47(gp42，IAP，OA3，Neurophilin)；CD47R(MEM-133)；CD48(Blast-1，Hulym3，BCM-1，OX-45)；CD49b(VLA-2α，gpla，α2整合素)；CD49c(VLA-3α，α3整合素)；CD49d(VLA-4α，α4整合素)；CD50(ICAM-3)；CD52(CAMPATH-1，HES)；CD53(OX-44)；CD54(ICAM-1)；CD55(DAF)；CD58(LFA-3)；CD60a(GD3)；CD62L(L-选择素，LAM-1，LECAM-1，MEL-14，Leu8，TQ 1)；CD72(Ly-19.2，Ly-32.2，Lyb-2)；CD73(Ecto-5′-核苷酸酶)；CD74(Ii，不变链)；CD75(sialo-masked Lactosamine)；CD75S(α2，6唾液酰化乳酸胺)；CD77(Pk抗原，BLA，CTH/Gb3)；CD79a(Igα，MB1)；CD79b(Igβ，B29)；CD80；CD81(TAPA-1)；CD82(4F9，C33，IA4，KAI1，R2)；CD83(HB15)；CD84(P75，GR6)；CD85j(ILT2，LIR1，MIR7)；CDw92(p70)；CD95(APO-1，FAS，TNFRSF6)；CD98(4F2，FRP-1，RL-388)；CD99(MIC2，E2)；CD100(SEMA4D)；CD102(ICAM-2)；CD108(SEMA7A，JMH血型组抗原)；CDw119(IFNγR，IFNγRa)；CD120a(TNFRI，p55)；CD 120b(TNFRII，p75，TNFR p80)；CD121b(2型IL-1R)；CD122(IL2Rβ)；CD124(IL-4Rα)；CD130(gp130)；CD132(常见的γ链，IL-2Rγ)；CDw137(4-1BB，ILA)；CD139；CD147(Basigin，EMMPRIN，M6，OX47)；CD150(SLAM，IPO-3)；CD162(PSGL-1)；CD164(MGC-24，MUC-24)；CD166(ALCAM，KG-CAM，SC-1，BEN，DM-GRASP)；CD167a(DDR1，trkE，cak)；CD171(L1CMA，NILE)；CD175s(Sialyl-Tn(S-Tn))；CD180(RP105，Bgp95，Ly64)；CD184(CXCR4，NPY3R)；CD185(CXCR5)；CD192(CCR2)；CD196(CCR6)；CD197(CCR7(以前是CDw197))；CDw197(CCR7，EBI1，BLR2)；CD200(OX2)；CD205(DEC-205)；CDw210(CK)；CD213a(CK)；CDw217(CK)；CDw218a(IL18Rα)；CDw218b(IL18Rβ)；CD220(胰岛素R)；CD221(IGF1 R)；CD222(M6P-R，IGFII-R)；CD224(GGT)；CD225(Leu13)；CD226(DNAM-1，PTA1)；CD227(MUC1，PUM，PEM，EMA)；CD229(Ly9)；CD230(朊病毒蛋白(Prp))；CD232(VESP-R)；CD245(p220/240)；CD247(CD3Z链)；CD261(TRAIL-R1，TNF-R超家族，成员10a)；CD262(TRAIL-R2，TNF-R超家族，成员10b)；CD263(TRAIL-R3，TNF-R超家族，成员10c)；CD264(TRAIL-R4，TNF-R超家族，成员10d)；CD265(TRANCE-R，TNF-R超家族，成员11a)；CD267(TACI，TNF-R超家族，成员13B)；CD268(BAFFR，TNF-R超家族，成员13C)；CD269(BCMA，TNF-R超家族，成员16)；CD275(B7H2，ICOSL)；CD277(BT3.1.B7家族：Butyrophilin 3)；CD295(LEPR)；CD298(ATP1B3 Na K ATPase β3亚基)；CD300a(CMRF-35H)；CD300c(CMRF-35A)；CD305(LAIR1)；CD307(IRTA2)；CD315(CD9P1)；CD316(EW12)；CD317(BST2)；CD319(CRACC，SLAMF7)；CD321(JAM1)；CD322(JAM2)；CDw327(Siglec6，CD33L)；CD68(gp 100，Macrosialin)；CXCR5；VLA-4；II类MHC；表面IgM；表面IgD；APRL；和/或BAFF-R；其中括号中所列名称代表别名。这样的标记物的例子包括本文其它地方提供的那些。
在一些具体实施方式中，可以通过与主要在激活后的B细胞上表达和/或存在的任意物质(例如蛋白、脂、碳水化合物、小分子等)(即激活的B细胞的标记物)特异性结合的任意靶半体实现靶向B细胞。示例性的激活的B细胞标记物包括但不限于，CD1a(R4，T6，HTA-1)；CD1b(R1)；CD15s(唾液酰Lewis X)；CD15u(3′硫代Lewis X)；CD15su(6硫代-唾液酰Lewis X)；CD30(Ber-H2，Ki-1)；CD69(AIM，EA 1，MLR3，gp34/28，VEA)；CD70(Ki-24，CD27配体)；CD80(B7，B7-1，BB1)；CD86(B7-2/B70)；CD97(BL-KDD/F12)；CD125(IL-5Rα)；CD126(IL-6Rα)；CD138(Syndecan-1，类肝素硫酸盐蛋白聚糖)；CD152(CTLA-4)；CD252(OX40L，TNF(配体)超家族，成员4)；CD253(TRAIL，TNF(配体)超家族，成员10)；CD279(PD1)；CD289(TLR9，TOLL样受体9)；和CD312(EMR2)；其中括号中所列名称代表别名。这样的标记物的例子包括本文其它地方提供的那些。
滤泡树突状细胞
最初探测到以前未知的抗原的B细胞通常表达对该抗原具有亚最适结合亲和性的B细胞受体(BCR，即具有跨膜结构域的抗体)。但是，当B细胞进入生发中心(GC)反应时，B细胞能够将其产生的抗体的亲和性增加几个数量级。这个通常持续几周的事件依赖于累积、保留抗原性材料并将抗原性材料呈递至激活的B细胞的FDC。B细胞(虽然有力地增殖)反复地使编码抗体的抗原结合位点的遗传序列发生变异并进行类别转换重组以形成分泌的高亲和性抗体(多数为IgG同种型)。GC反应还刺激长命的记忆B细胞和保持高保护性抗体效价(通常为很多年)的胞质细胞的产生。预料在皮下注射后靶向FDC并被长期保留在FDC表面的疫苗纳米载体增强针对疫苗接种有反应的GC反应并改善想要的体液免疫应答的亲和性和长期性。
在一些具体实施方式中，可以通过与补体受体，CR1(即CD35)或CR2(即CD21)(FDC以及B细胞上表达的蛋白)结合的半体实现靶向FDC。半体的例子包括在本文其它地方提供的那些。
包含多个靶半体的疫苗纳米载体
GC反应和B细胞存活不仅需要FDC，还依赖于激活的CD4T细胞提供的帮助。当CD4T细胞首先被DC(DC将II类MHC中的同源肽(pMHC)呈递以达到滤泡帮助(TFH)表型)刺激时，提供的帮助是最有效的。然后新生成的TFH细胞朝着B滤泡迁移并向那些呈递相同的pMHC复合体的B细胞提供帮助。为此，B细胞首先获得抗原性材料(例如，病毒或病毒样疫苗)，将其内在化并处理(即提取装载至II类MHC的肽)，然后将pMHC呈递至TFH细胞。
因此，本发明包括以下认识：刺激最适体液免疫力的疫苗能够结合几个特征和成分(图1)：(a)靶向DC并被DC呈递的针对CD4T细胞的抗原性材料；(b)能够以原态形式被SCS-Mph呈递至抗原特异性滤泡B细胞的高密度表面抗原；(c)为了呈递至TFH细胞，被滤泡B细胞获得并被滤泡B细胞处理的能力(本发明包括以下认识：B细胞容易地获得来自SCS-Mph的颗粒物质并将其内在化)；(d)到达FDC并以完整形式被长期保留在FDC上的能力；和(e)赋予APC完全免疫原性并避免或克服耐受的辅助性活性。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含至少一个靶半体。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体的所有靶半体是彼此相同的。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体许多不同类型的靶半体。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含多个单独的靶半体，其每个彼此相同。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体精确包含一种类型靶半体。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体精确包含两种不同类型的靶半体。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上不同类型的靶半体。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含单一类型的靶半体，其引导疫苗纳米载体输送至单一的细胞类型(例如仅输送至SCS-Mph)。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含单一类型的靶半体，其引导疫苗纳米载体输送至多种细胞类型(例如既输送至SCS-Mph又输送至FDC)。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种类型靶半体，其中第一种类型靶半体引导疫苗纳米载体输送至一种细胞类型，第二种类型靶半体引导疫苗纳米载体输送至第二种细胞类型。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上类型的靶半体，其中一种或多种类型靶半体引导疫苗纳米载体输送至一种细胞类型，一种或多种类型靶半体引导疫苗纳米载体输送至第二种细胞类型。仅举一例，疫苗纳米载体可以包含两种类型靶半体，其中第一种类型靶半体引导疫苗纳米载体输送至DC，第二种类型靶半体引导疫苗纳米载体输送至SCS-Mph。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含至少一个靶半体，其与疫苗纳米载体的外表面结合。在一些具体实施方式中，结合是共价的。在一些具体实施方式中，共价结合由一个或多个连接子介导。在一些具体实施方式中，结合是非共价的。在一些具体实施方式中，非共价结合由电荷相互作用、亲和相互作用、金属配合、物理吸附、主客体相互作用、疏水相互作用、TT堆积相互作用、氢键相互作用、范德华力相互作用、磁性相互作用、静电相互作用、偶极-偶极相互作用和/或其组合所介导。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包括脂膜(例如脂双层、脂单层等)，其中至少一个靶半体与脂膜结合。在一些具体实施方式中，至少一个靶半体嵌入脂膜内。一些具体实施方式中，至少一个靶半体嵌入脂双层的腔内。在一些具体实施方式中，至少一个靶半体可以位于疫苗纳米载体的多个位点。例如，第一个靶半体可以嵌于脂膜内，第二个免疫刺激试剂可以与疫苗纳米载体的外表面结合。再举一例，第一个靶半体和第二个靶半体可以均与疫苗纳米载体的外表面结合。
免疫刺激试剂
如上所述，在一些具体实施方式中，纳米载体可以转运一个或多个帮助刺激免疫应答的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含同时刺激B细胞和T细胞的单一类型的免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种类型免疫刺激试剂，其中第一种类型免疫刺激试剂刺激B细胞，第二种类型免疫刺激试剂刺激T细胞。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含两种以上类型的免疫刺激试剂，其中一种或多种类型免疫刺激试剂刺激B细胞，一种或多种类型免疫刺激试剂刺激T细胞。对于可用于本发明的免疫刺激试剂的更详细的描述，参见以上部分。
B 细胞激活的检验
在一些具体实施方式中，可以应用各种检验以确定B细胞或B细胞组中的免疫应答是否被刺激(即B细胞或B细胞组是否变成“激活的”)。在一些具体实施方式中，可以通过测定抗体效价确定B细胞中免疫应答的刺激。一般地，“抗体效价”是指在特定的稀释度时抗体与抗原结合并中和抗原的能力。例如，高抗体效价是指在甚至是高稀释度时抗体与抗原结合并中和抗原的能力。在一些具体实施方式中，如果在比未免疫个体或预免疫血清高至少约5倍、至少约10倍、至少约20倍、至少约50倍、至少约100倍、至少约500倍、至少约1000倍或多于约1000倍的稀释度时抗体效价测定为阳性，则称B细胞中免疫应答被刺激。
在一些具体实施方式中，可以通过测定抗体亲和性确定B细胞中免疫应答的刺激。特别地，如果抗体具有10-7M以下、10-8M以下、10-9M以下、10-10M以下、10-11M以下、10-12M以下或更低的平衡解离常数(Kd)，则称B细胞中免疫应答被刺激。
在一些具体实施方式中，如果发生类别转换重组，则称B细胞中T细胞依赖性免疫应答被刺激。特别地，从IgM转换至IgG同种型或转换至IgA或转换至IgG与IgA同种型的混合物是B细胞中T细胞依赖性免疫应答的指征。
在一些具体实施方式中，通过测定抗原特异性抗体的亲和成熟来确定B细胞中的免疫应答。亲和成熟发生于生发中心反应中，其中激活的B细胞反复地使编码抗原结合区域的免疫球蛋白基因发生变异。产生变体抗体(其具有针对抗原的更高的亲和性)的B细胞优选地被允许存活并增殖。因此，随着时间的进行，GC中的B细胞产生的抗体获得渐增的亲和性。在一些具体实施方式中，该过程的结果是出现高抗体效价(例如，甚至在高稀释度时与抗原结合并中和抗原的高亲和性IgG抗体)。
在一些具体实施方式中，如果形成了记忆B细胞和/或能够长时间地产生大量的高亲和性抗体的长生血浆细胞，则称B细胞中的免疫应答被刺激。在一些具体实施方式中，在为了测试记忆B细胞和/或能够长时间地产生大量的高亲和性抗体的长生血浆细胞的存在而进行疫苗接种后的不同的时间间隔(例如，2周、1个月、2个月、6个月、1年、2年、5年、10年、15年、20年、25年或更长)测定抗体效价。在一些具体实施方式中，通过测定体液应答而称存在记忆B细胞和/或能够长时间地产生大量的高亲和性抗体的长生血浆细胞(例如，如果相对于最初致敏，在后来的加强性疫苗接种后体液免疫应答显著性更迅速且产生更高的效价)。
在一些具体实施方式中，如果发生有力的生发中心反应，则称B细胞中的免疫应答被刺激。在一些具体实施方式中，可以通过进行组织学实验目视检测有力的生发中心反应。在一些具体实施方式中，可以通过进行含有抗原的淋巴组织(例如疫苗引流淋巴结、脾等)的免疫组化而检验有力的生发中心反应。在一些具体实施方式中，免疫组合之后进行流式细胞术。
可以通过鉴定抗体同种型(例如，IgG、IgA、IgE、IgM)而确定B细胞中免疫应答的刺激。在一些具体实施方式中，B细胞产生IgG同种型的抗体是想要的B细胞中的免疫应答。
在一些具体实施方式中，通过在中和检验中分析抗体功能而确定B细胞中的免疫应答。特别地，将不存在血清时微生物(例如，病毒、细菌、真菌、原生动物、寄生虫等)在体外感染易感细胞系的能力与向细胞生长的培养基中加入了不同稀释度的免疫和非免疫血清的状态相比较。在一些具体实施方式中，如果微生物的感染在约1∶5、约1∶10、约1∶50、约1∶100、约1∶500、约1∶1000、约1∶5000、约1∶10,000或更低的稀释度被中和，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
在一些具体实施方式中，通过以对微生物通常为致死的剂量感染经免疫的和未免疫的小鼠组(例如，疫苗接种后3周或更久)来确定动物模型中疫苗的功效。监视两个组的存活程度和存活持续时间，通常描绘于Kaplan-Meier曲线中。为了确定延长的存活是否是由B细胞应答造成，可以将来自免疫小鼠的血清转移为“被动疫苗)以确定对非免疫小鼠对抗致死性感染的保护。
本领域普通技术人员就认识到以上描述的检验仅仅是可用于确定是否发生B细胞激活的示例性方法。可用于确定是否发生B细胞激活的任何本领域技术人员已知的方法皆落入本发明的范围内。此处描述的检验以及其它的可用于确定是否发生B细胞激活的检验在Current Protocols in Immunology(John Wiley & Sons，Hoboken，NY，2007；通过引用并入本文)中有描述。
疫苗纳米载体
一般地，疫苗纳米载体是包含例如能够同时刺激B细胞和T细胞中免疫应答的至少一个免疫调节试剂的物质。任何疫苗纳米载体均可用于本发明。在一些具体实施方式中，纳米载体是生物可降解的且生物可兼容的。一般地，生物可兼容物质对细胞是非毒性的。在一些具体实施方式中，如果向细胞中加入一种物质后的结果为一定阙值(例如，50％以下、20％以下、10％以下、5％以下或更少的细胞死亡)以下的细胞死亡，则该物质被认为是生物可兼容的。在一些具体实施方式中，如果向细胞中加入一种物质后不引起不利作用，则该物质被认为是生物可兼容的。一般地，生物可降解物质是在治疗相关时间段(例如、几周、几个月或几年)之内在生理条件下进行分解的物质。在一些具体实施方式中，生物可降解的物质是由细胞机制分解的物质。在一些具体实施方式中，生物可降解的物质是由化学过程分解的物质。在一些具体实施方式中，纳米载体既是生物可兼容物质又是生物可降解物质。在一些具体实施方式中，纳米载体是生物可兼容物质但不是生物可降解物质。在一些具体实施方式中，纳米载体是生物可降解物质但不是生物可兼容物质。
一般地，根据本发明的纳米载体是最大尺寸(例如直径)在100微米(μm)以下的任何物质。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有10μm以下的最大尺寸。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有1000纳米(nm)以下的最大尺寸。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有900nm、800nm、700nm、600nm、500nm、400nm、300nm、200nm或100nm以下的最大尺寸。通常，本发明的纳米载体具有300nm或以下的最大尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有250nm或以下的最大尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有最大为200nm或以下的尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有最大为150nm或以下的尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有最大为100nm或以下的尺寸(例如直径)。在本发明的一些具体实施方式中使用更小的纳米载体，例如具有50nm或以下的最大尺寸。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有25nm至200nm范围的最大尺寸。在一些具体实施方式中，本发明的纳米载体具有20nm至100nm范围的最大尺寸。
在一些具体实施方式中，纳米载体具有1000nm以下的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约750nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约500nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约450nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约400nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约350nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约300nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约275nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约250nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约225nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约200nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约175nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约150nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约125nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约100nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约75nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约50nm的直径。在一些具体实施方式中，纳米载体具有大约25nm的直径。
在一些具体实施方式中，纳米载体具有大于肾脏排泄物限制的尺寸(例如纳米载体具有6nm以上的直径)。在一些具体实施方式中，纳米载体足够小以避免肝脏将纳米载体从血流中清除(例如纳米载体具有1000nm以下的直径)。一般地，纳米载体的生理化学特征应该允许纳米载体通过减少肾脏排泄和肝脏清除而在血浆中循环更长时间。
通常想要使用大小、形状和/或组成相对一致的纳米载体群，从而每个纳米载体具有相似的特征。例如，至少80％、至少90％或至少95％的纳米载体可以具有落在平均直径或平均最大尺寸5％、10％或20％以内的直径或最大尺寸。在一些具体实施方式中，纳米载体群的大小、性质和/或组成可以是非均匀的。
根据本发明可以使用多种不同的纳米载体。在一些具体实施方式中，纳米载体为球或椭圆球。在一些具体实施方式中，纳米载体为球或椭圆球。在一些具体实施方式中，纳米载体为平的或板状的。在一些具体实施方式中，纳米载体为立方体或立方形。在一些具体实施方式中，纳米载体为椭圆或椭圆形。在一些具体实施方式中，纳米载体为圆柱体、圆锥体或棱锥。
纳米载体可以是实心的或凹的且可以包含一个或多个层。在一些具体实施方式中，每个层相对于其它层具有独特的成分和独特的特性。仅举一例，纳米载体可以具有核心/壳结构，其中核心是一个层(例如聚合物核心)而壳是第二个层(例如脂双层或单层)。纳米载体可以包含多个不同的层。在一些具体实施方式中，一个层可以是实质上交联的，第二个层不是实质上交联的，等等。在一些具体实施方式中，一个层、一些层或所有不同的层可以包含一个或多个免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或其组合。在一些具体实施方式中，一个层包含免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂，第二个层不包含免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂，等等。在一些具体实施方式中，每一个单独的层包含不同的免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或其组合。
脂疫苗纳米载体
在一些具体实施方式中，纳米载体可以可选地包含一个或多个脂。在一些具体实施方式中，纳米载体可以包含脂质体。在一些具体实施方式中，纳米载体可以包含脂双层。在一些具体实施方式中，纳米载体可以包含脂单层。在一些具体实施方式中，纳米载体可以包含胶团。在一些具体实施方式中，纳米载体可以包含核心，核心包含由脂层(例如脂双层、脂单层等)环绕的聚合物基质。在一些具体实施方式中，纳米载体可以包含由脂层(例如脂双层、脂单层等)环绕的非聚合物核心(例如金属颗粒、量子点、陶颗粒、骨颗粒、病毒颗粒等)。
在一些具体实施方式中，纳米载体可以包含脂双层，所述脂双层的方向使得纳米载体的内表面和外表面是亲水性的，脂双层的腔是疏水性的。包含脂双层的疫苗纳米载体的例子在实施例2中描述并在图3-8中显示。在一些具体实施方式中，疏水性免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以与脂双层的腔结合(例如嵌于其内)。在一些具体实施方式中，亲水性免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以与纳米载体内部和/或外部结合(例如共价或非共价结合、包埋于其内等)。在一些具体实施方式中，亲水性免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以与脂双层的内表面和/或外表面结合(例如共价或非共价结合、包埋于其内等)。在一些具体实施方式中，脂双层的内亲水性表面与两性物质结合。在一些具体实施方式中，两性物质的方向使得两性物质的亲水端与脂双层的内表面结合，并且两性物质的疏水端朝向纳米载体的内部，从而在纳米载体内部产生疏水性的环境。
在一些具体实施方式中，纳米载体可以包含脂单层，所述脂单层的方向使得纳米载体的内部是疏水性的，纳米载体的外部是亲水性的。包含脂单层的疫苗纳米载体的例子在实施例2中描述并在图9和10中显示。在一些具体实施方式中，疏水性免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以与纳米载体的内部和/或脂单层的内表面结合(例如共价或非共价结合、包埋于其内等)。在一些具体实施方式中，亲水性免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以纳米载体的外部和/或脂单层的外表面(例如共价或非共价结合、包埋于其内等)。在一些具体实施方式中，脂双层的内疏水性表面与两性物质结合。在一些具体实施方式中，两性物质的方向使得两性物质的疏水端与脂双层的内表面结合，并且两性物质的亲水端朝向纳米载体的内部，从而在纳米载体内部产生亲水性的环境。
在一些具体实施方式中，纳米载体可以包含一个或多个与纳米载体的外表面结合的纳米颗粒。包含与纳米载体的外表面结合的纳米颗粒的疫苗纳米载体的例子在实施例2中描述并在图4、6和8中显示。
纳米载体中脂的百分率范围可以为0％至99％重量、10％至99％重量、25％至99％重量、50％至99％重量或75％至99％重量。在一些具体实施方式中，纳米载体中脂的百分率范围可以为0％至75％重量、0％至50％重量、0％至25％重量或0％至10％重量。在一些具体实施方式中，纳米载体中脂的百分率可以为大约1％重量、大约2％重量、大约3％重量、大约4％重量、大约5％重量、大约10％重量、大约15％重量、大约20％重量、大约25％重量或大约30％重量。
在一些具体实施方式中，脂是油。一般地，纳米载体中可包括任何本领域已知的油。在一些具体实施方式中，油可以包含一个或多个脂肪酸基团或其盐。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团包含可消化的长链(例如C8-C50)取代的或非取代的烃。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是C10-C20脂肪酸或其盐。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是C15-C20脂肪酸或其盐。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是C15-C25脂肪酸或其盐。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是不饱和的。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是单不饱和的。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是多不饱和的。在一些具体实施方式中，不饱和脂肪酸基团的双键可以是顺式构象。在一些具体实施方式中，不饱和脂肪酸的双键可以是反式构象。
在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是一个或多个丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸，棕榈酸，硬脂酸，正二十酸、二十二酸或二十四酸。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是一个或多个棕榈油酸、油酸、十八碳烯酸、亚油酸、α-亚麻酸、γ-亚油酸、花生四烯酸、廿碳烯-9-酸、花生四烯酸、十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥子酸。
在一些具体实施方式中，油是液态甘油三酸酯。
适合用于本发明的油包括但不限于，杏仁(almond)、杏仁(apricot kernel)、鳄梨、巴西棕榈(babassu)、香柠檬、黑加仑种子、琉璃苣、刺桧、甘菊、油菜、香菜、巴西棕榈(carnauba)、蓖麻、肉桂、可可脂、椰子、鳕鱼肝、咖啡、玉米、棉花种子、鸸鹋、桉树、夜来香、鱼类、亚麻籽、香叶醇、葫芦、葡萄籽、榛子坚果、牛膝草、荷荷巴油(jojoba)、夏威夷胡桃、杂薰衣草油(lavandin)、薰衣草、柠檬、山苍子(litsea cubeba)、澳洲坚果(macademia nut)、锦葵、芒果种子、绣线菊种子(meadowfoam seed)、水貂、肉豆蔻、橄榄、橙、深海鲈鱼(orange roughy)、棕榈、棕榈仁、桃仁、花生、罂粟种子、南瓜种子、油菜籽、米糠、迷迭香、红花、檀香、sasquana、香薄荷(savoury)、沙棘(seabuckthorn)、芝麻、牛油树脂、硅树脂、大豆、向日葵、茶树、蓟、椿(tsubaki)、香根草、胡桃和小麦胚芽油，及其组合。适合用于本发明的油包括但不限于硬脂酸丁酯、辛酸三甘油酯、癸酸三甘油酯、环甲硅油、癸二酸二乙酯、二甲硅油360、豆蔻酸异丙酯、矿物油、辛基十二醇、油醇、硅树脂油，及其组合。在一些具体实施方式中，脂是激素(例如雌激素、睾丸激素)、类固醇(例如胆固醇、叶酸)、维生素(例如维生素E)、磷脂(例如缩醛磷脂酰胆碱)、鞘脂类(例如神经酰胺)或脂蛋白(例如阿朴脂蛋白)。
包含聚合物基质的纳米载体
在一些具体实施方式中，纳米载体可以包含一个或多个聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物基质可由包被层(例如脂质体、脂单层、胶团等)环绕。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以与聚合物基质结合。在这样的具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂有效包埋于纳米载体内。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以与聚合物基质共价结合。在一些具体实施方式中，共价结合由连接子介导。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂与聚合物基质非共价结合。例如，在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以包埋于聚合物基质内、或由聚合物基质环绕，和/或分布在聚合物基质中。作为选择，抑或是另外，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以通过疏水相互作用、电荷作用、范德华力等与聚合物基质结合。
众多的聚合物和从其中形成聚合物基质的方法在药物输送领域是已知的。一般地，聚合物基质包含一个或多个聚合物。根据本发明可以使用任何聚合物。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是均聚物或包含两个或多个单体的共聚物。在序列方面，共聚物可以是无规，嵌段或包含无规和嵌段序列的组合。通常，根据本发明的聚合物是有机聚合物。
聚合物的例子包括聚乙烯，聚碳酸酯(如聚(1，3-二恶烷-2酮))、聚酐(如聚(癸二酸酐))、聚羟基酸(如聚(β-羟基烷酸酯))、聚丙基丁烯二酸酯、聚己内酯、聚酰胺(如聚己内酰胺)、聚缩醛、聚醚、聚酯(如聚乳酸、聚甘醇酸)、聚(原酸酯)、聚腈基丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚氨酯、聚磷腈、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚脲、聚苯乙烯和聚胺。
在一些具体实施方式中，根据本发明的聚合物包括是根据21C.F.R§177.2600由美国食品与药品管理局(FDA)批准用于人类的聚合物，包括但不限于聚酯(例如，聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚己内酯、聚戊内酯、聚(1，3-二恶烷-2酮))；聚酐(如聚(癸二酸酐))；聚醚(如聚乙二醇)；聚脲；聚甲基丙烯酸酯；聚丙烯酸酯；和聚腈基丙烯酸酯。
在一些具体实施方式中，聚合物可以是亲水性的。例如，聚合物可以包含阴离子基团(例如，磷酸盐基团、硫酸盐基团、羧酸盐基团)；阳离子基团(例如，季胺基团)；或极性基团(例如羟基基团、巯基基团、胺基团)。在一些具体实施方式中，包含亲水性聚合物基质的纳米载体在纳米载体内产生亲水性环境。在一些具体实施方式中，亲水性免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以与亲水性聚合物基质结合。
在一些具体实施方式中，聚合物可以是疏水性的。在一些具体实施方式中，包含疏水性聚合物基质的纳米载体在纳米载体内产生疏水性环境。在一些具体实施方式中，疏水性免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以与疏水性聚合物基质结合。
在一些具体实施方式中，聚合物可以被一个或多个半体和/或官能团修饰。根据本发明可以使用任何半体或官能团。在一些具体实施方式中，聚合物可以被聚乙二醇(PEG)、碳水化合物和/或源自多糖的聚缩醛修饰(Papisov，2001，ACSSymposium Series，786：301；通过引用并入本文)。
在一些具体实施方式中，聚合物可以被脂或脂肪酸基团修饰，其性质在下文中更详细描述。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是一个或多个丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸，棕榈酸，硬脂酸，正二十酸、二十二酸或二十四酸。在一些具体实施方式中，脂肪酸基团可以是一个或多个棕榈油酸、油酸、十八碳烯酸、亚油酸、α-亚油酸、γ-亚油酸、花生四烯酸、廿碳烯-9-酸、花生四烯酸、十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥子酸。
在一些具体实施方式中，聚合物可以是聚酯，包括包含乳酸和羟基乙酸单元的共聚物，例如聚乳酸-羟基乙酸共聚物和聚(丙交酯-乙交酯)共聚物，在本文中一起被称为“PLGA”；以及包含羟基乙酸单元的均聚物(本文称为“PGA”)和包含乳酸单元的均聚物(例如聚-L-乳酸、聚-D-乳酸、聚-D，L-乳酸、聚-L-丙交酯、聚-D-丙交酯和聚-D，L-丙交酯，在本文中一起被称为“PLA”)。在一些具体实施方式中，示例性的聚酯包括例如聚羟基酸；PEG共聚物和丙交酯和乙交酯的共聚物(例如，PLA-PEG共聚物、PGA-PEG共聚物、PLGA-PEG共聚物，及其衍生物。在一些具体实施方式中，聚酯包括例如聚酐、聚(原酸酯)、聚(原酸酯)-PEG共聚物、聚(己内酯)、聚(己内酯)-PEG共聚物、聚赖氨酸、聚赖氨酸-PEG共聚物、聚(乙烯亚胺)、聚(乙烯亚胺)-PEG的共聚物、聚(L-丙交酯-L-赖氨酸)共聚物、聚(丝氨酸酯)、聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)、聚[α-(4-氨基丁基)-L-羟基乙酸]，及其衍生物。
在一些具体实施方式中，聚合物可以是PLGA。PLGA是乳酸和羟基乙酸的生物可兼容和生物可降解共聚物，各种形式的PLGA的特征根据乳酸∶羟基乙酸的比率。乳酸可以是L-乳酸、D-乳酸或D，L-乳酸。可以通过改变乳酸∶羟基乙酸的比率调整PLGA的降解速率。在一些具体实施方式中，用于本发明的PLGA的特征在于乳酸∶羟基乙酸的比率是大约85∶15、大约75∶25、大约60∶40、大约50∶50、大约40∶60、大约25∶75或大约15∶85。
在一些具体实施方式中，聚合物可以是一个或多个丙烯酸聚合物。在一些具体实施方式中，丙烯酸聚合物包括例如丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰乙基酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸酐)、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物、聚氰基丙烯酸酯，和包含一个或多个前述聚合物的组合。丙烯酸聚合物可以包含丙烯酸和甲基丙烯酸酯完全聚合化的共聚物(具有少量的季铵基团)。
在一些具体实施方式中，聚合物可以是阳离子聚合物。一般地，阳离子聚合物能够缩合和/或保护带负电的核酸链(例如DNA、RNA或其衍生物)。含有胺的聚合物例如聚(赖氨酸)(Zauner等人，1998，Adv.Drug Del.Rev.，30：97；和Kabanov等人，1995，Bioconjugate Chem.，6：7；二者皆通过引用并入本文)、聚(乙烯亚胺)(PEI；Boussif等人，1995，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，1995，92：7297；通过引用并入本文)和聚(酰胺-胺)树枝状高分子(Kukowska-Latallo等人，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93：4897；Tang等人，1996，Bioconjugate Chem.，7：703；和Haensler等人，1993，Bioconjugate Chem.，4：372；所有文献通过引用并入本文)是在生理pH带正电的，与核酸形成离子对，在多种细胞系中调节转染。
在一些具体实施方式中，聚合物可以是携带阳离子侧链的可降解的聚酯(Putnam等人，1999，Macromolecules，32：3658；Barrera等人，1993，J.Am.Chem.Soc.，115：11010；Kwon等人，1989，Macromolecules，22：3250；Lim等人，1999，J.Am.Chem.Soc.，121：5633；和Zhou等人，1990，Macromolecules，23：3399；所有文献通过引用并入本文)。这样的聚酯的例子包括聚(L-丙交酯-L赖氨酸)共聚物(Barrera等人，1993，J.Am.Chem.Soc.，115：11010；通过引用并入本文)，聚(丝氨酸酯)(Zhou等人，1990，Macromolecules，23：3399；通过引用并入本文)，聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)(Putnam等人，1999，Macromolecules，32：3658；和Lim等人，1999，J.Am.Chem.Soc.，121：5633；二者皆通过引用并入本文)，和聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)(Putnam等人，1999，Macromolecules，32：3658；和Lim等人，1999，J.Am.Chem.Soc.，121：5633；二者皆通过引用并入本文)。
在一些具体实施方式中，根据本发明的聚合物可以是碳水化合物，其性质在下文中更详细描述。在一些具体实施方式中，碳水化合物可以是包含由糖苷键连接的单糖(或其衍生物)的多糖，如本领域所知。在一些具体实施方式中，碳水化合物可以是一个或多个普鲁兰糖(pullulan)、纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟基纤维素、甲基纤维素、右旋糖苷、环右旋糖苷、糖原、淀粉、羟乙基淀粉、卡拉胶(carageenan)、glycon、直链淀粉、壳聚糖、N，O-羟甲基壳聚糖、海藻胶和海藻酸、淀粉、几丁质、肝素、魔芋、葡甘聚糖、石耳素(pustulan)、肝素、透明质酸、卡德兰(curdlan)和黄原胶。
在一些具体实施方式中，根据本发明的聚合物可以是蛋白或肽，其性质在下文中更详细描述。可用于本发明的示例性的蛋白包括但不限于白蛋白、胶原、聚(氨基酸)(例如聚赖氨酸)、抗体等。
在一些具体实施方式中，根据本发明的聚合物可以是核酸(即多核苷酸)，其性质在下文中更详细描述。可用于本发明的示例性的多核苷酸包括但不限于DNA、RNA等。
这些和其它聚合物的性质以及制备方法在本领域是已知的(参见，例如，美国专利号6,123,727、5,804,178、5,770,417、5,736,372、5,716,404、6,095,148、5,837,752、5,902,599、5,696,175、5,514,378、5,512,600、5,399,665、5,019,379、5,010,167、4,806,621、4,638,045和4,946,929；Wang等人，2001，J.Am.Chem.Soc.，123：9480；Lim等人，2001，J.Am.Chem.Soc.，123：2460；Langer，2000，Acc.Chem.Res.，33：94；Langer，1999，J.Control.Release，62：7；和Uhrich等人，1999，Chem.Rev.，99：3181；所有文献通过引用并入本文)。更一般地，多种合成合适的聚合物的方法在以下文献中描述：Concise Encyclopedia of Polymer Science and Polymeric Aminesand Ammonium Salts，Ed.by Goethals，Pergamon Press，1980；Principles ofPolymerization by Odian，John Wiley & Sons，Fourth Edition，2004；ContemporaryPolymer Chemistry by Allcock等人，Prentice-Hall，1981；Deming等人，1997，Nature，390：386；和美国专利号6,506,577、6,632,922、6,686,446和6,818,732；所有文献通过引用并入本文。
在一些具体实施方式中，聚合物可以是直链或支链聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物可以是树突状聚合物。在一些具体实施方式中，聚合物可以是彼此实质上交联的。在一些具体实施方式中，聚合物可以是无实质交联的。在一些具体实施方式中，聚合物可以不进行交联步骤而用于本发明。
还应该理解，本发明的纳米载体可以包含嵌段共聚物、接枝共聚物、共混、混合物和/或任何前述和其它聚合物的加合物。
本领域技术人员将认识到本文所列举的聚合物代表可用于本发明的聚合物的示例性而非穷举性的列举。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含嵌入反胶团的免疫调节试剂。仅举一例，脂质体纳米载体可以包含嵌入脂质体膜的疏水性免疫调节试剂，和嵌入脂质体纳米载体的内部中的反胶团的亲水性免疫调节试剂。
非聚合物纳米载体
在一些具体实施方式中，纳米载体不包含聚合物成分。在一些具体实施方式中，纳米载体可以包含金属颗粒、量子点、陶颗粒、骨颗粒、病毒颗粒等。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂可以与这样的非聚合物纳米载体的表面结合。在一些具体实施方式中，非聚合物纳米载体是非聚合物成分的聚集体，例如金属原子(例如金原子)的聚集体。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂与非聚合物成分的聚集体的表面结合，包埋于非聚合物成分的聚集体内，或由非聚合物成分的聚集体环绕，和/或分布在非聚合物成分的聚集体中。
在本发明的一些具体实施方式中，非聚合物纳米载体包含梯度或均匀的合金。在本发明的一些具体实施方式中，纳米载体包含具有光学上可测和/或磁性可测性质的颗粒。
包含两性物质的纳米载体
在一些具体实施方式中，纳米载体可以可选地包含一个或多个两性物质。在一些具体实施方式中，两性物质能够促进具有增加的稳定性、改善的一致性或增加的粘性的纳米载体的产生。在一些具体实施方式中，两性物质可以与脂膜(例如脂双层、脂单层等)的内表面结合。例如，如果脂膜的内表面是亲水性的，则包埋于脂纳米载体内的空间是亲水性的。但是，如果两性物质与亲水性脂膜的内表面结合以致于两性物质的亲水端与亲水性脂膜的内表面结合并且两性物质的疏水段与纳米载体的内部结合，则包埋于纳米载体内的空间是疏水性的。
纳米载体中的两性物质的百分率范围可以为0％至99％重量、10％至99％重量、25％至99％重量、50％至99％重量或75％至99％重量。在一些具体实施方式中，纳米载体中两性物质的百分率范围可以为0％至75％重量、0％至50％重量、0％至25％重量或0％至10％重量。在一些具体实施方式中，纳米载体中两性物质的百分率可以为大约1％重量、大约2％重量、大约3％重量、大约4％重量、大约5％重量、大约10％重量、大约15％重量、大约20％重量、大约25％重量或大约30％重量。
任何本领域已知的两性物质均适合用于制造根据本发明的纳米载体。这样的两性物质包括但不限于磷酸甘油酯；磷脂酰胆碱；二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)；二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)；二油酰基氧基丙基三乙基铵(DOTMA)；二油酰基磷脂酰胆碱；胆固醇；胆固醇酯；二酰基甘油；二酰基甘油琥珀酸酯；二磷脂酰甘油(DPPG)；十六烷醇；脂肪醇，例如聚乙二醇(PEG)；聚氧乙烯-9-月桂醚；表面活性脂肪酸，例如棕榈酸或油酸；脂肪酸；脂肪酸单甘油酯；脂肪酸二甘油酯；脂肪酸酰胺；三油酸山梨酯
Figure GPA00001138904500821
甘胆酸盐；单月桂酸山梨酯
Figure GPA00001138904500822
聚山梨酸酯20
Figure GPA00001138904500823
聚山梨酸酯60
Figure GPA00001138904500824
聚山梨酸酯65
Figure GPA00001138904500825
聚山梨酸酯80
Figure GPA00001138904500826
聚山梨酸酯85
Figure GPA00001138904500827
聚氧乙烯单硬脂酸酯；表面活性肽(Surfactin)；poloxomer；脂肪酸山梨酯，例如三油酸山梨酯；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)；心磷脂；磷脂酸；脑苷脂；联十六烷醇磷酸酯；二棕榈酰磷脂酰甘油；硬脂酸胺；十二烷基胺；十六烷基胺；棕榈酸乙酯；蓖麻醇酸甘油酯；硬脂酸十六烷酯；肉豆蔻酸异丙酯；四丁酚醛；聚(乙二醇)5000磷脂酰乙醇胺；聚(乙二醇)400-单硬脂酸酯；磷脂；具有高表面积性质的合成和/或天然去污剂；脱氧胆酯；环化糊精；离液序列高的盐；离子配对试剂；及其组合。两性物质成分可以是不同两性物质的混合物。这些两性物质可以从天然来源提取和纯化，或者从实验室中合成制备。在一些特异性具体实施方式中，两性物质可从商业渠道获得。
本领域技术人员将认识到，这仅仅是具有表面活性的物质的示例性而非穷举性列举。任何两性物质可用于生产用于本发明的纳米载体。
包含碳水化合物的疫苗纳米载体
在一些具体实施方式中，纳米载体可选地包含一个或多个碳水化合物。纳米载体中的碳水化合物的百分率范围可以为0％至99％重量、10％至99％重量、25％至99％重量、50％至99％重量或75％至99％重量。在一些具体实施方式中，纳米载体中碳水化合物的百分率范围可以为0％至75％重量、0％至50％重量、0％至25％重量或0％至10％重量。在一些具体实施方式中，纳米载体中碳水化合物的百分率可以为大约1％重量、大约2％重量、大约3％重量、大约4％重量、大约5％重量、大约10％重量、大约15％重量、大约20％重量、大约25％重量或大约30％重量。
碳水化合物可以是天然的或合成的。碳水化合物可以源自天然的碳水化合物。在一些具体实施方式中，碳水化合物是单糖，包括但不限于葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡萄糖胺、半乳糖胺和神经氨酸。在一些具体实施方式中，碳水化合物是二糖，包括但不限于乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖和纤维二糖。在一些具体实施方式中，碳水化合物是多糖，包括但不限于，普鲁兰糖(pullulan)、纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟基纤维素(HC)、甲基纤维素(MC)、右旋糖苷、环右旋糖苷、糖原、淀粉、羟乙基淀粉、卡拉胶(carageenan)、glycon、直链淀粉、壳聚糖、N，O-羟甲基壳聚糖、海藻胶和海藻酸、淀粉、几丁质、肝素、魔芋、葡甘聚糖、石耳素(pustulan)、肝素、透明质酸、卡德兰(curdlan)和黄原胶。在一些具体实施方式中，碳水化合物是糖醇，包括但不限于甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、赤藻糖醇、麦芽糖醇和乳糖醇。
与疫苗纳米载体结合的颗粒
在一些具体实施方式中，根据本发明的疫苗纳米载体可以包含一个或多个颗粒。在一些具体实施方式中，一个或多个颗粒与疫苗纳米载体结合。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含一个或多个与纳米载体的外表面结合的颗粒。在一些具体实施方式中，颗粒可以与疫苗纳米载体通过共价键结合。在一些具体实施方式中，颗粒可以与疫苗纳米载体通过非共价相互作用结合(例如，电荷相互作用、亲和相互作用、金属配合、物理吸附、主客体相互作用、疏水相互作用、TT堆积相互作用、氢键相互作用、范德华力相互作用、磁性相互作用、静电相互作用、偶极-偶极相互作用和/或其组合)。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含一个或多个包埋于纳米载体中的颗粒。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体包含一个或多个嵌于纳米载体表面中的颗粒(例如嵌于脂双层中)。在一些具体实施方式中，与纳米载体结合的颗粒允许可调的膜坚固性和可控的脂质体稳定性。
在一些具体实施方式中，与疫苗纳米载体结合的颗粒可以包含聚合物基质，如上所述。在一些具体实施方式中，与疫苗纳米载体结合的颗粒可以包含非聚合物成分(例如金属颗粒、量子点、陶颗粒、骨颗粒、病毒颗粒等)，如上所述。
在一些具体实施方式中，与疫苗纳米载体结合的颗粒可以带有负电荷。在一些具体实施方式中，与疫苗纳米载体结合的颗粒可以带有正电荷。在一些具体实施方式中，与疫苗纳米载体结合的颗粒可以是电中性的。
在一些具体实施方式中，颗粒在其表面具有一个或多个胺半体。胺半体可以是例如脂肪族胺半体。在一些具体实施方式中，胺是伯、仲、叔或季胺。在一些具体实施方式中，颗粒包含含有胺的聚合物。在一些具体实施方式中，颗粒包含含有胺的脂。在一些具体实施方式中，颗粒包含在中性pH带有正电荷的蛋白或肽。在一些具体实施方式中，在其表面具有一个或多个胺半体的颗粒在中性pH带有净正电荷。在本发明的颗粒中还可以使用其它在中性pH提供正电荷的其它化学半体。
ζ电位是颗粒的表面电位的度量。在一些具体实施方式中，颗粒具有正的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有-50mV至+50mV范围的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有-25mV至+25mV范围的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有-10mV至+10mV范围的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有-5mV至+5mV范围的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有0mV至+50mV范围的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有0mV至+25mV范围的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有0mV至+10mV范围的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有0mV至+5mV范围的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有-50mV至0mV范围的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有-25mV至0mV范围的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有-10mV至0mV范围的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有-5mV至0mV范围的ζ电位。在一些具体实施方式中，颗粒具有基本上中性的ζ电位(即大约0mV)。
一般地，与疫苗纳米载体结合的颗粒具有10微米(μm)以下的最大尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，颗粒具有1000纳米(nm)以下的最大尺寸。在一些具体实施方式中，颗粒具有900nm、800nm、700nm、600nm、500nm、400nm、300nm、200nm或100nm以下的最大尺寸。通常，颗粒具有300nm或以下的最大尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，颗粒具有最大为200nm或以下的尺寸(例如直径)。在一些具体实施方式中，颗粒具有最大为100nm或以下的尺寸(例如直径)。在本发明的一些具体实施方式中使用更小的纳米载体，例如具有50nm或以下的最大尺寸。在一些具体实施方式中，颗粒具有25nm至200nm范围的最大尺寸。在一些具体实施方式中，颗粒具有1nm至100nm范围的最大尺寸。在一些具体实施方式中，颗粒具有1nm至30nm范围的最大尺寸。
在一些具体实施方式中，颗粒具有大约1000nm以下的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约750nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约500nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约400nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约300nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约200nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约100nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约75nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约50nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约30nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约25nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约20nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约15nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约10nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约5nm的直径。在一些具体实施方式中，颗粒具有大约1nm的直径。
在一些具体实施方式中，颗粒是微米颗粒(例如微球体)。一般地，“微米颗粒”是指任何具有1000μm以下直径的颗粒。在一些具体实施方式中，颗粒是纳米颗粒(例如纳米球体)。一般地，“纳米颗粒”是指任何具有1000nm以下直径的颗粒。在一些具体实施方式中，颗粒是皮可米颗粒(例如皮可米球体)。一般地，“皮可米颗粒”是指任何具有1nm以下直径的颗粒。在一些具体实施方式中，颗粒是脂质体。在一些具体实施方式中，颗粒是胶团。
根据本发明可以使用多种不同的颗粒。在一些具体实施方式中，颗粒为球或椭圆球。在一些具体实施方式中，颗粒为球或椭圆球。在一些具体实施方式中，颗粒为平的或板状的。在一些具体实施方式中，颗粒为立方体或立方形。在一些具体实施方式中，颗粒为椭圆或椭圆形。在一些具体实施方式中，颗粒为圆柱体、圆锥体或棱锥。
可以使用本领域任何已知的方法制备颗粒(例如纳米颗粒、微米颗粒)。例如，颗粒制剂可以通过以下方法制成：例如纳米沉淀、使用液体通道的流动聚焦、喷雾干燥、单一和双乳剂溶剂挥发、溶剂提取、相分离、碾磨、微乳程序、微细加工、纳米级加工、牺牲层、单一和复合凝聚，以及其它本领域普通技术人员熟知的方法。作为选择，抑或是另外，用于单分散半导体、导电性的、磁性的、有机的和其它纳米颗粒的水性和有机溶剂综合体已经描述(Pellegrino等人，2005，Small，1：48；Murray等人，2000，Ann.Rev.Mat.Sci.，30：545；和Trindade等人，2001，Chem.Mat.，13：3843；所有文献通过引用并入本文)。
在一些具体实施方式中，可以通过纳米沉淀方法或喷雾干燥制备颗粒。可以改变用于制备颗粒的条件以产生想要的尺寸或性质(例如疏水性、亲水性、外部形状、“粘度”、形状等)的颗粒。所用的制备颗粒的方法和条件(例如，溶剂、温度、浓度、空气流速等)可以取决于要输送的治疗性试剂和/或聚合物基质的成分。
制备用于输送胶囊化试剂的微米颗粒的方法在文献中有描述(参见，例如，Doubrow，Ed.，″Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy，″CRCPress，Boca Raton，1992；Mathiowitz等人，1987，J.Control.Release，5：13；Mathiowitz等人，1987，Reactive Polymers，6：275；和Mathiowitz等人，1988，J.Appl.Polymer Sci.，35：755；所有文献通过引用并入本文)。
如果根据以上任何方法制备的颗粒具有想要的范围以外的尺寸范围，则可使用例如筛子对颗粒进行区分。
疫苗纳米载体的生产
可以使用本领域任何已知的方法制备纳米载体。例如，颗粒纳米载体制剂可以通过以下方法制成：例如纳米沉淀，使用液体通道的流动聚焦，喷雾干燥，单一和双乳剂溶剂挥发，溶剂提取，相分离，碾磨，微乳程序，微细加工，纳米级加工，牺牲层，单一和复合凝聚，以及其它本领域普通技术人员熟知的方法。作为选择，抑或是另外，用于单分散半导体、导电性的、磁性的、有机的和其它纳米颗粒的水性和有机溶剂综合体已经描述(Pellegrino等人，2005，Small，1：48；Murray等人，2000，Ann.Rev.Mat.Sci.，30：545；和Trindade等人，2001，Chem.Mat.，13：3843；所有文献通过引用并入本文)。
在一些具体实施方式中，可以通过纳米沉淀方法或喷雾干燥制备疫苗纳米载体。可以改变用于制备纳米载体的条件以产生想要的尺寸或性质(例如疏水性、亲水性、外部形状、“粘度”、形状等)的颗粒。所用的制备纳米载体的方法和条件(例如，溶剂、温度、浓度、空气流速等)可以取决于疫苗纳米载体的成分和/或产生的疫苗纳米载体的结构。
制备用于输送胶囊化试剂的微米颗粒的方法在文献中有描述(参见，例如，Doubrow，Ed.，″Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy，″CRCPress，Boca Raton，1992；Mathiowitz等人，1987，J.Control.Release，5：13；Mathiowitz等人，1987，Reactive Polymers，6：275；和Mathiowitz等人，1988，J.Appl.Polymer Sci.，35：755；所有文献通过引用并入本文)。
在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体包含至少一个免疫调节试剂，和可选地包含，脂膜、聚合物基质和/或非聚合物颗粒。在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体包含至少一个免疫调节试剂；脂膜、聚合物基质和/或非聚合物颗粒；和至少一个靶半体。在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体包含至少一个免疫调节试剂；脂膜、聚合物基质和/或非聚合物颗粒；至少一个靶半体；和至少一个免疫刺激试剂。在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体包含至少一个免疫调节试剂；脂膜、聚合物基质和/或非聚合物颗粒；至少一个靶半体；至少一个免疫刺激试剂；和至少一个纳米颗粒。
本发明的疫苗纳米载体可以通过任何可获得的方法制备。希望不对免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂的三维特性和构象有负影响地将免疫调节试剂、靶半体和/或免疫刺激试剂结合至疫苗纳米载体。希望疫苗纳米载体应该能够在全身施用之后避免被单核吞噬细胞系统摄入从而其能够到达身体的特异性细胞。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒不与疫苗纳米载体共价结合。例如，疫苗纳米载体可以包含聚合物基质，和免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒与本发明的疫苗纳米载体的聚合物基质的表面结合，包埋于本发明的疫苗纳米载体的聚合物基质内，和/或分布在本发明的疫苗纳米载体的聚合物基质中。免疫调节试剂可以通过扩散、疫苗纳米载体的降解和/或其组合而被释放。在一些具体实施方式中，聚合物通过骨架侵蚀而降解。在一些具体实施方式中，聚合物通过表面侵蚀而降解。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒与疫苗纳米载体共价结合。对于这样的疫苗纳米载体，通过破坏结合而实现免疫调节试剂释放并输送至靶位点。例如，如果免疫调节试剂与纳米载体通过可切割连接子结合，则在切割该连接子之后免疫调节试剂被释放并输送至靶位点。
在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒不与纳米载体共价结合。例如，疫苗纳米载体可以包含聚合物，和免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒与本发明的疫苗纳米载体的聚合物的表面结合，包埋于本发明的疫苗纳米载体的聚合物内，由本发明的疫苗纳米载体的聚合物环绕，和/或分布在本发明的疫苗纳米载体的聚合物中。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒与疫苗纳米载体物理结合。
物理结合可以通过多种不同方式实现。物理结合可以是共价的或非共价的。疫苗纳米载体、免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒可以彼此直接结合，例如通过一个或多个共价键，或通过一个或多个连接子结合。在一个具体实施方式中，连接子与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒形成一个或多个共价或非共价键，且与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒形成一个或多个共价或非共价键，从而将它们彼此连接起来。在一些具体实施方式中，第一个连接子与疫苗纳米载体形成共价或非共价键且第二个连接子与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒形成共价或非共价键。这两个连接子彼此之间形成一个或多个共价或非共价键。
根据本发明可使用任何合适的连接子。连接子可用于形成酰胺键、酯键、二硫键等。连接子可包含碳原子或杂原子(例如氮、氧、硫等)。通常，连接子为1至50个原子长、1至40个原子长、1至25个原子长、1至20个原子长、1至15个原子长、1至10个原子长或1至10个原子长。连接子可以被各种取代基取代，包括但不限于氢原子、烷基、烯基、炔基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、三烷基氨基、羟基、烷氧基、卤素、芳基、杂环、芳香族杂环、氰基、酰胺、氨基甲酰、羧酸、酯、硫醚、烷基硫醚、硫醇和脲基基团。如本领域技术人员所认识到的，这些基团可以依次被取代。
在一些具体实施方式中，连接子是脂肪族或杂脂肪族连接子。在一些具体实施方式中，连接子是聚烷基连接子。在一些具体实施方式中，连接子是聚醚连接子。在一些具体实施方式中，连接子是聚乙烯连接子。在一些特异性具体实施方式中，连接子是聚乙二醇(PEG)连接子。
在一些具体实施方式中，连接子是可切割的连接子。仅举一些例子，可切割的连接子包括蛋白酶可切割的肽连接子、核酶敏感性核酸连接子、脂酶敏感性脂连接子、糖苷酶敏感性碳水化合物连接子、pH敏感性连接子、缺氧敏感性连接子、光切割连接子、热不稳定连接子、酶切割连接子(例如酯酶切割连接子)、超声敏感连接子、x-射线切割连接子等。在一些具体实施方式中，连接子不是可切割的连接子。
多种方法中的任何方法可用于将连接子与疫苗纳米载体结合。一般的策略包括被动吸附(例如通过静电相互作用)、多价鳌合、特异性结合对成员之间的高亲和性非共价结合、共价键形成等(Gao等人，2005，Curr.Op.Biotechnol.，16：63；通过引用并入本文)。在一些具体实施方式中，可以使用点击化学(click chemistry)将连接子与颗粒结合(例如Diels-Alder反应、Huigsen 1，3-双极环加成、亲核取代、羰基化学、环氧化作用、双羟化作用等)。
可以使用双功能交联试剂。这样的试剂含有两个反应基团，从而提供共价连接两个靶基团的方式。化学偶联试剂中的反应基团通常属于不同类的官能团，例如琥珀酰亚胺酯、马来酰亚胺和吡啶二硫。示例性交联试剂包括例如碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺-4-叠氮水杨酸(NHS-ASA)、二甲基庚二亚胺二盐酸盐(DMP)、二甲基辛二亚胺(DMS)、3，3’-二硫双丙亚胺(DTBP)、N-琥珀酰亚胺3-[2-吡啶二硫]-丙氨(SPDP)、琥珀酰亚胺α-甲基丁酸酯、生物素氨基己酰-6-氨基-己酸N-羟基-琥珀酰亚胺酯(SMCC)、琥珀酰亚胺-[(N-马来酰亚胺丙氨)-十二乙二醇]酯(NHS-PEO12)等。例如，碳二亚胺介导的酰胺的形成和活性马来酰亚胺酯介导的胺和巯基偶联是广泛使用的方法。
在一些具体实施方式中，可以通过将一个分子上的胺基团偶联至第二个分子上的硫醇基团(有时通过两步或三步反应序列)而形成疫苗纳米载体。含有硫醇的分子可以通过使用杂双功能交联试剂(例如同时含有琥珀酰亚胺酯和马来酰亚胺、吡啶二硫或碘乙酰胺的试剂)与含有胺的分子反应。可以使用胺-羧酸和硫醇-羧酸交联、巯基马来酰亚胺偶联化学(例如，马来酰亚胺苯甲酰-N-羟基马来酰亚胺酯(MBS)方法)等。多肽可以分别通过赖氨酸或半胱氨酸侧链中的胺或硫醇基团，或通过N-末端氨基基团方便地偶联至颗粒。核酸例如RNA可以通过末端氨基基团合成。可以使用多种偶联试剂(例如，琥珀酰亚胺3-(2-吡啶二硫)丙酸酯(SPDP)和硫代琥珀酰亚胺-4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸盐(硫-SMCC))结合疫苗纳米载体的各种成分。疫苗纳米载体可以使用表面具有的官能团(例如氨基或羧基基团)制备以促进与生物分子的结合。
可以使用非共价特异性结合相互作用。例如，颗粒或生物分子可以进行生物素官能团化，而另一个则进行链霉菌抗生物素官能团化。这两个半体彼此非共价地特异性结合且具有高度亲和性，从而将颗粒和生物分子结合起来。可以类似地使用其它特异性结合对。或者，组氨酸标记的生物分子可以与偶联至镍-氮川三乙酸(Ni-NTA)的颗粒结合。
任何生物分子与颗粒、靶半体和/或治疗性试剂结合。间隔区(spacer)可以是例如短肽链(例如长度为1至10个氨基酸，例如长度为1、2、3、4或5个氨基酸)核酸、烷基链等。
对于其它的关于结合和/或偶联方法和交联剂的一般性信息，可参见杂志Bioconjugate Chemistry，American Chemical Society，Columbus OH，PO Box 3337，Columbus，OH，43210出版；″Cross-Linking，″Pierce Chemical Technical Library，可在Pierce网站获得，最初在1994-95 Pierce Catalog中出版，及其中的参考文献；WongSS，Chemistry of Protein Conjugation and Cross-linking，CRC Press Publishers，BocaRaton，1991；和Hermanson，G.T.，Bioconjugate Techniques，Academic Press，Inc.，SanDiego，1996。
作为选择，抑或是另外，疫苗纳米载体可以通过非共价相互作用直接或间接与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合。非共价相互作用的例子包括但不限于电荷相互作用、亲和相互作用、金属配合、物理吸附、主客体相互作用、疏水相互作用、TT堆积相互作用、氢键相互作用、范德华力相互作用、磁性相互作用、静电相互作用、偶极-偶极相互作用和/或其组合。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体可以通过电荷相互作用与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合。例如，疫苗纳米载体可以具有阳离子表面或与阳离子聚合物(例如聚(赖氨酸)或聚(乙烯亚胺))反应以提供阳离子表面。然后疫苗纳米载体表面可以通过电荷相互作用与带负电的免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合。通常免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒的一端与带负电的聚合物(例如聚(羧酸))或另外的寡核苷酸序列(其可以与阳离子聚合物表面相互作用而不破坏免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒的功能)结合。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体可以通过亲和相互作用与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合。例如，生物素可以与疫苗纳米载体的表面结合而链霉菌抗生物素可以与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合；或者相反，生物素可以与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合而链霉菌抗生物素可以与疫苗纳米载体的表面结合。生物素基团和链霉菌抗生物素可以通过连接子(例如亚烃基连接子或聚醚连接子)与疫苗纳米载体结合或与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合。生物素基团和链霉菌抗生物素通过亲和相互作用结合，从而将疫苗纳米载体与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体可以通过金属配合与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合。例如，聚组氨酸可以与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒的一端结合，和氮川三乙酸可以与疫苗纳米载体的表面结合。金属例如Ni2+将鳌合聚组氨酸和氮川三乙酸，从而将免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒与疫苗纳米载体结合。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体可以通过物理吸附与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合。例如，疏水性尾巴(例如聚甲基丙烯酸酯或具有至少约10个碳的烷基基团)可以与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒的一端结合。疏水性尾巴将吸附至疏水性疫苗纳米载体的表面，从而将免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒与疫苗纳米载体结合。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体可以通过主客体相互作用与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合。例如，大环主体(例如瓜环或环状糊精)可以与疫苗纳米载体的表面结合，和客体基团(例如烷基基团、聚乙二醇或二氨基烷基基团)可以与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合；或者相反，主体基团可以与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合，和客体基团可以与疫苗纳米载体的表面结合。在一些具体实施方式中，主体和/或客体分子可以通过连接子(例如亚烃基连接子或聚醚连接子)与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒或疫苗纳米载体结合。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体可以通过氢键相互作用与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒结合。例如，具有特定序列的寡核苷酸可以与疫苗纳米载体的表面结合，和基本上互补的序列可以与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒的一端或两端结合(不破坏免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒的功能)。然后免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒通过与疫苗纳米载体结合的寡核苷酸的互补性碱基配对而与疫苗纳米载体结合。如果一个寡核苷酸上约80％的核酸碱基通过寡核苷酸碱基配对系统(例如Watson-Crick碱基配对、反向Watson-Crick碱基配对、Hoogsten碱基配对等)与第二个寡核苷酸上的碱基形成氢键，则两个寡核苷酸是基本上互补的。通常，希望与疫苗纳米载体结合的寡核苷酸序列和与免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒通过与疫苗纳米载体结合的互补性寡核苷酸之间形成至少约6个互补性碱基对。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体通过自组装形成。对于疫苗纳米载体的自组装的详细的例子，参见实施例1和2。在一些具体实施方式中，制备小脂质体(10nm-1000nm)并应用小脂质体将一个或多个免疫调节试剂输送至免疫系统的细胞(图3)。一般地，脂质体是人工构建的圆球体脂泡，其数十至数千纳米的可控的直径意味着单独的脂质体包含体积为仄升(10-21L)至飞升(10-15L)的生物可兼容腔室，这些腔室可用于包埋并储存各种货物，例如蛋白、酶、DNA和药物分子。脂质体可以包含具有两性性质的脂双层：双层的内表面和外表面均为亲水性的，双层的腔是疏水性的。亲脂性分子可以自发嵌入脂质体膜并将其亲水性结构域保留在外面，由于膜的双功能性的优势，亲水性分子可以与脂质体的外表面化学地偶联。
在一些具体实施方式中，脂与亲脂性免疫调节试剂混合，然后形成固体表面上的细膜。亲水性免疫调节试剂溶解于水性溶液中，然后将此水性溶液加入到脂膜中，在振荡下将脂水解。具有整合到双层壁中的亲脂性免疫调节试剂和位于脂质体腔内的亲水性免疫调节试剂的脂质体自发组装。
在一些具体实施方式中，用于脂质体的脂可以是下列物质的一个或多个，但不限于此：磷脂酰胆碱、脂A、胆固醇、长醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神经酰胺、糖基神经酰胺、脑苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、心磷脂、磷脂酸和溶血磷脂。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂可以与脂质体的表面偶联。在一些具体实施方式中，脂质体内携带相同或不同的免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，脂质体表面膜可以被能够选择性地将免疫调节试剂输送至特异性抗原表达细胞的靶半体修饰。
在一些具体实施方式中，纳米颗粒稳定化的脂质体用于将一个或多个免疫调节试剂输送至免疫系统的细胞(图4)。通过允许小的带电的纳米颗粒(1nm-30nm)吸附至脂质体表面，脂质体-纳米颗粒复合体不但具有上述仅仅脂质体的性质(图3)，还具有可调的膜坚固性和可控的脂质体稳定性。当小的带电的纳米颗粒到达带有相反电荷或无净电荷的脂质体表面时，纳米颗粒与膜之间的静电或电荷-偶极相互作用吸引纳米颗粒停留在膜表面，被脂膜部分包裹住。这诱导脂质体的局部的膜的弯曲和小球表面的收缩，二者均调节膜的坚固性。这个方面对于使用脂质体进行疫苗输送(以模拟病毒，病毒的坚固性取决于病毒膜内其它生物成分的组成)是至关重要的。此外，被吸附的纳米颗粒形成带电的壳，其保护脂质体抵抗融合，从而增强脂质体稳定性。在一些具体实施方式中，小的纳米颗粒与脂质体在轻微振荡下混合，和纳米颗粒自发地粘附至脂质体表面。在特异的具体实施方式中，小的纳米颗粒可以是，但不限于，聚合物纳米颗粒、金属纳米颗粒、无机或有机纳米颗粒、其杂合物，和/或其组合。
在一些具体实施方式中，脂质体-聚合物纳米载体用于将一个或多个免疫调节试剂输送至免疫系统的细胞(图5)。亲水性免疫调节试剂不是保持脂质体内凹，相反，免疫调节试剂可被包埋。图3显示了装载了双嵌段共聚物纳米颗粒的脂质体，以形成脂质体包被的聚合物纳米载体，其同时具有脂质体和聚合物纳米颗粒的性质，而排除了一些它们的局限性。在一些具体实施方式中，脂质体壳可用于携带亲脂性免疫调节试剂或偶联亲水性免疫调节试剂，和聚合物核心可用于输送疏水性免疫调节试剂。
在一些具体实施方式中，预制的聚合物纳米颗粒(40nm-1000am)与小的脂质体(20nm-100nm)在轻微振荡下混合，以诱导脂质体融合至聚合物纳米颗粒表面。在特异性具体实施方式中，双嵌段共聚物纳米颗粒可以是，但不限于，一个或多个以下物质：聚(D，L-乳酸)-嵌段-聚(乙二醇)(PLA-b-PEG)、聚(D，L-羟基乙酸)-嵌段-聚(乙二醇)(PLG-b-PEG)、聚(D，L乳酸羟基乙酸)共聚物-嵌段-聚(乙二醇)(PLGA-b-PEG)和聚(ε-己内酯)-嵌段-聚(乙二醇)(PCL-b-PEG)。
在一些具体实施方式中，纳米颗粒稳定化的脂质体-聚合物纳米载体用于输送一个或多个免疫调节试剂(图6)。通过小的纳米颗粒(1nm-30nm)吸附至脂质体-聚合物纳米载体表面，纳米载体不但具有上述纳米颗粒稳定化的脂质体(图4)和上述脂质体-聚合物纳米颗粒的性质(图5)，还具有可调的膜坚固性和可控的脂质体稳定性。
在一些具体实施方式中，含有反胶团的脂质体-聚合物纳米载体用于输送一个或多个免疫调节试剂(图7)。由于上述脂质体-聚合物纳米载体(图5和6)限制于在聚合物纳米颗粒内携带疏水性免疫调节试剂，所以在这里将小的反胶团(1nm-20nm)制成包埋亲水性免疫调节试剂，然后与双嵌段共聚物混合以制成脂质体的聚合物核心。
在一些具体实施方式中，首先将待包埋的亲水性免疫调节试剂通过在挥发性的可与水混溶的有机溶剂中与天然来源的且非毒性的两性物质混合而整合入反胶团。在一些具体实施方式中，两性物质可以是，但不限于，一个或多个以下物质：磷脂酰胆碱、脂A、胆固醇、长醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神经酰胺、糖基神经酰胺、脑苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、心磷脂、磷脂酸和溶血磷脂。在一些具体实施方式中，挥发性的可与水混溶的有机溶剂可以是，但不限于：四氢呋喃、丙酮、乙腈或二甲基甲酰胺。在一些具体实施方式中，在形成反胶团之后向该混合物中加入生物可降解聚合物。将得到的生物可降解聚合物-反胶团混合物与不可溶于聚合物的亲水性非溶剂混合，通过溶剂快速扩散至非溶剂中以及有机溶剂的挥发而形成纳米颗粒。在一些具体实施方式中，不可溶于聚合物的亲水性非溶剂可以是，但不限于，一个或多个以下物质：水、乙醇、甲醇及其混合物。含有反胶团的聚合物纳米颗粒与脂分子混合以形成上述脂质体-聚合物复合体结构(图5)。
在一些具体实施方式中，含有反胶团的纳米颗粒稳定化的脂质体-聚合物纳米载体用于输送一个或多个免疫调节试剂(图8)。通过将小的纳米颗粒(1nm-30nm)吸附至脂质体-聚合物纳米载体表面，纳米载体不但具有上述纳米颗粒稳定化的脂质体(图4)和上述含有反胶团的脂质体-聚合物纳米颗粒的性质(图7)，还具有可调的膜坚固性和可控的脂质体稳定性。
在一些具体实施方式中，脂单层稳定化的聚合物纳米载体用于输送一个或多个免疫调节试剂(图9)。与上述脂质体聚合物纳米载体(图5-8)相比较，这个系统具有试剂和制备意义上的简单性的性质。在一些具体实施方式中，疏水性均聚物可以形成聚合物核心，而不是图5-8中所用的双嵌段共聚物(其同时具有疏水性和亲水性片段)。脂稳定化的聚合物纳米载体可以在一个单一步骤中制成，而不是先分别制备聚合物纳米颗粒和脂质体然后再将其混合在一起。
在一些具体实施方式中，亲水性免疫调节分子首先与脂的头部基团化学偶联。偶联物在含有一种或多种与水混溶的溶剂的水性溶液中以一定比例与未偶联的脂分子混合。在一些具体实施方式中，两性物质可以是，但不限于，一个或多个以下物质：磷脂酰胆碱、脂A、胆固醇、长醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神经酰胺、脑苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、糖基神经酰胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、心磷脂、磷脂酸和溶血磷脂。在一些具体实施方式中，与水混溶的溶剂可以是但不限于：丙酮、乙醇、甲醇和异丙醇。生物可降解聚合物材料与疏水性免疫调节试剂混合以包埋于与水混溶或部分与水混溶的有机溶剂中。在特异性具体实施方式中，生物可降解聚合物可以是，但不限于，一个或多个以下物质：聚(D，L-乳酸)、聚(D，L-羟基乙酸)、聚(ε-己内酯)，或其以各种摩尔比例的共聚物。在一些具体实施方式中，与水混溶的有机溶剂可以是但不限于：丙酮、乙醇、甲醇或异丙醇。在一些具体实施方式中，部分与水混溶的有机溶剂可以是但不限于：乙腈、四氢呋喃、乙酸乙酯、异丙醇、乙酸异丙酯或二甲基甲酰胺。将得到的聚合物溶液加入到偶联的脂和未偶联的脂的水性溶液中，通过有机溶剂快速扩散至水中以及有机溶剂的挥发而形成纳米颗粒。
在一些具体实施方式中，包含反胶团的脂单层稳定化的聚合物纳米颗粒用于输送一个或多个免疫调节试剂(图10)。由于上述脂质体稳定化的聚合物纳米载体(图9)限制于携带疏水性免疫调节试剂，所以在这里将小的反胶团(1nm-20nm)制成包埋亲水性免疫调节试剂，然后与生物可降解聚合物混合以制成聚合物纳米载体核心。
应该理解，可以以任何合适的方式制备本发明的组合物，和本发明不以任何方式限制于使用本文上述方法产生的组合物。合适方法的选择可能需要注意到所结合的特定半体的性质。
如果需要，可以使用各种方法将结合了免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒的疫苗纳米载体与未结合免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒的疫苗纳米载体分离开来，或与结合了不同数目的免疫调节试剂、靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒的疫苗纳米载体分离开来。例如，可以使用尺寸排除色谱、琼脂糖凝胶色谱或过滤以分离结合了不同数目物质的疫苗纳米载体群体和/或将疫苗纳米载体与其它物质分离开来。一些方法包括尺寸排除或阴离子交换色谱。
在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体在无菌条件下制备。这可以保证产生的疫苗是无菌的和无传染性的，从而与活体疫苗相比改善了安全性。这提供了有价值的安全度量，特别是当接受疫苗的个体具有免疫缺陷、患有感染和/或易于患上感染的时候。
在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体可以是冻干的并储存在悬浮液中或作为冻干粉末，这取决于为了延长时间而不损失活性的制备策略。
应用
本文描述的组合物和方法可用于诱导、增强、抑制、引导或重引导免疫应答。本文描述的组合物和方法可用于预防和/或治疗任何癌症、传染性疾病、代谢性疾病、退行性疾病、自身免疫疾病、过敏性疾病、炎性疾病、免疫性疾病或其它失调和/或病症。本文描述的组合物和方法还可用于治疗上瘾症，例如对任意本文描述的令人上瘾的物质上瘾。本文描述的组合物和方法还可用于预防和/或治疗由暴露于毒素、有害物质、环境毒素或其它有害试剂而引起的病症。个体包括但不限于人和/或其它灵长类；哺乳动物(包括商业有关的哺乳动物，例如牛、猪、马、绵羊、猫和/或狗)；和/或鸟(包括商业有关的鸟，例如鸡、鸭、鹅和/或火鸡)。
在一些具体实施方式中，根据本发明的疫苗纳米载体可用于疾病、失调和/或病症的一个或多个征状或特征的治疗、减轻、改善、缓解、延迟其发作、抑制其进展，减轻其严重程度和/或降低其发生率。在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体可用于微生物感染(例如细菌感染、真菌感染、病毒感染、寄生虫感染等)的一个或多个征状或特征的治疗、减轻、改善、缓解、延迟其发作、抑制其进展，减轻其严重程度和/或降低其发生率。
在本发明的一个方面，提供了预防和/或治疗疾病、失调或病症(例如微生物感染)的方法。在一些具体实施方式中，疾病、失调或病症的预防和/或治疗包括向有需要的个体施用治疗上有效量的本发明的疫苗纳米载体，以足够达到所需要效果的量和时间。在本发明的一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体的“治疗上有效量”是指对微生物感染的一个或多个征状或特征能有效地治疗、减轻、改善、缓解、延迟其发作、抑制其进展，减轻其严重程度和/或降低其发生率的量。在一些具体实施方式中，“治疗上有效量”是有效调节免疫系统的量。这样的量可以是有免疫原性的量，即足够在个体中引发可检测的免疫应答(例如可检测的抗体应答和/或可检测的T细胞应答)的量。
本发明的预防和/或治疗方案包括向健康个体(例如，未表现出任何微生物感染征状和/或未被诊断具有微生物感染的个体；未暴露于毒素的个体，未摄取被滥用物质或令人上瘾物质的个体，等等)施用治疗上有效量的一个或多个本发明的疫苗纳米载体。例如，可以在发生微生物感染之前，暴露于毒素、被滥用物质或令人上瘾物质等之前，和/或发生其相关征状之前，使用本发明的疫苗纳米载体接种健康个体；可以在征状和/或暴露/摄取发生的实质上同时(例如，48小时内、24小时内或12小时内)处理风险个体(例如，暴露于遭受微生物感染个体的病人，到微生物/毒素流行的地方旅行的人；等等)。当然已知患有微生物感染、已经暴露于毒素或摄入被滥用物质或令人上瘾物质的个体可以在任何时间接受治疗。
在一些具体实施方式中，本发明的预防和/或治疗方法包括向个体施用治疗上有效量的一个或多个本发明的疫苗纳米载体，使得T细胞和B细胞中的免疫应答都被刺激。
在一些具体实施方式中，通过将所选的免疫调节试剂与针对不同APC的靶半体和免疫刺激试剂组合，可以使免疫应答(例如效应物应答)偏向优先引发针对给定迹象的最想要的类型的免疫应答，例如体液免疫、1型T细胞应答、2型T细胞应答、细胞毒T细胞，反应和/或这些应答的组合。因此，相同的平台可以用于大范围的不同的临床应用，包括针对病原体主体的预防性疫苗以及对已经存在的疾病(例如感染、过敏症、自身免疫疾病和/或癌症)的免疫治疗。
癌症包括但不限于胆管癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、上皮肿瘤、淋巴瘤、肝癌、肺癌(例如，小细胞和非小细胞型)、黑素瘤、神经母细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直肠癌、肉瘤、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌和肾癌，以及其他癌与肉瘤。
自身免疫疾病包括但不限于，类风湿性关节炎、风湿热、溃疡性结肠炎、腹腔疾病、Crohn病、炎症性肠病、胰岛素依赖型糖尿病、糖尿病、少年糖尿病、自发免疫性糖尿病、胃炎、自身免疫性萎缩性胃炎、自身免疫性肝炎、甲状腺炎、桥本(Hashimoto)甲状腺炎、自身免疫性甲状腺炎、胰岛炎、卵巢炎、睾丸炎、葡萄膜炎、晶状体源性葡萄膜炎、多发性硬化、重症肌无力、原生粘液水肿、甲状腺毒症、恶性贫血、自身免疫性溶血性毒液贫血、Addison病、硬皮病、Goodpasture综合征、Guillain-Barre综合征、Graves病、血管球性肾炎、牛皮癣、寻常性天疱疮、类天疱疮、交感性眼炎、特发性血小板减少性紫癜、idiopathic feucopenia、Siogren综合征、Wegener肉芽肿病、多/皮肌炎或系统性红斑狼疮。
过敏性疾病包括但不限于，湿疹、过敏性鼻炎(rhinitis)或鼻炎(coryza)、干草发烧、结膜炎、哮喘、荨麻疹(麻疹)、局部过敏反应、食物过敏、过敏反应、特应性皮炎、超敏反应和与其它过敏症状。过敏反应可能是对任何变应原(包括但不限于，常见的尘土、花粉、植物、动物皮屑、药品、食物过敏原、昆虫毒液，病毒或细菌)的免疫反应的结果。
炎性疾病和/或失调包括，例如，心血管疾病、慢性阻塞性肺病(COPD)、支气管扩张、慢性胆囊炎、肺结核、桥本(Hashimoto)甲状腺炎、脓毒症、结节病、硅肺和其它肺尘症，以及伤口中移植的外源体，但不限于此。如本文所用的术语“脓毒症”是指公认的与主体对微生物侵入的全身性炎性反应相关的临床综合征。本文所用的术语“脓毒症”是指通常表现为发烧或体温过低、心动过速和呼吸急促的病症，并且在几种情况下可发展为低血压、器官功能障碍，甚至死亡。
药物组合物
本发明提供了新型组合物，其包含治疗上有效量的一个或多个疫苗纳米载体和一个或多个药学上可接受的赋形剂。在一些具体实施方式中，本发明提供了药物组合物，其包含本发明的疫苗纳米载体和/或其中的如本文描述的任何组合物。这样的药物组合物可选地可以包含一个或多个另外的治疗活性物质。根据一些具体实施方式，提供了向有需要的个体施用包含本发明的组合物的药物组合物的方法。在一些具体实施方式中，本发明的组合物施用于人。为了本发明的目的，词语“活性成分”一般是指本发明的疫苗纳米载体，其包含至少一个免疫调节试剂和可选地包含一个或多个靶半体、免疫刺激试剂和/或纳米颗粒。
虽然本文提供的药物组合物的描述主要是针对适合施用于人的药物组合物，但是技术人员应该理解这样的组合物一般适合施用于任何种类的动物。对适合施用于人的药物组合物的改变(以使其适合施用于各种动物)是熟知的，和普通技术兽医药理人员能够仅仅通过常规的实验(如果有的话)来设计和/或进行这样的改变。考虑到本发明的药物组合物所施用的个体包括但不限于人和/或其它灵长类；动物，包括商业相关的动物例如牛、猪、马、绵羊、猫和/或狗；和/或鸟，包括商业相关的鸟例如鸡、鸭、鹅和/或火鸡。
本文描述的药物组合物制剂可以通过药学领域已知的或从今以后发展的任何方法制备。一般地，这样的制备方法包括将活性成分与一个或多个赋形剂和/或一个或多个其它辅佐性成分结合的步骤，然后，如果必要和/或需要，将产物塑形和/或包装成想要的单剂或多剂单位。
本发明的药物组合物可以以单一单位剂量和/或多个单一单位剂量来制备、包装和/或散装销售。如本文所用的“单位剂量”是包含预先确定数量的活性成分的药物组合物的不连续数量。活性成分的量一般等于向个体施用的活性成分的剂量和/或这样的剂量的方便的份数，例如，如，这样的剂量的一半或三分之一。
本发明的药物组合物中的活性成分的相对量、药学上可接受的赋形剂和/或任何其它成分的相对数量将根据治疗个体的身份、大小和/或条件进行改变，进一步根据组合物的施用途径进行改变。举例来说，组合物可以包含0.1％至100％(w/w)的活性成分。
本发明的药物制剂可以包含另外的药学上可接受的赋形剂，本文所用的赋形剂包括任何和所有的溶剂、分散介质、稀释剂或其它液体载体、分散或悬浮辅助、表面活性剂、等张试剂、增厚或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等，按照特定剂型需要。Remington’s The Science and Practice of Pharmacy，21st Edition，A.R.Gennaro，(Lippincott，Williams & Wilkins，Baltimore，MD，2006；通过引用并入本文)公开了各种用于配制药物组合物的赋形剂和已知的用于制备药物组合物的技术。任何常规的赋形剂，除非其与物质或其衍生物不兼容(例如产生任何不想要的生物效应或者以有害的方式与药物组合物中的其它任何成分相互作用)，否则其使用被考虑在本发明的范围内。
在一些具体实施方式中，药学上可接受的赋形剂是至少95％、96％、97％、98％、99％或100％纯的。在一些具体实施方式中，赋形剂被批准用于人类和兽医用途。在一些具体实施方式中，赋形剂被美国食品与药品管理局批准。在一些具体实施方式中，赋形剂是药物级的。在一些具体实施方式中，赋形剂符合美国药典(USP)、欧洲药典(EP)、英国药典和/或国际药典的标准。
用于制备药物组合物的药学上可接受的赋形剂包括但不限于，惰性稀释剂、分散和/或粒化剂、表面活性剂和/或乳化剂、崩解剂、粘合剂、防腐剂、缓冲剂、润滑剂和/或油。这样的赋形剂可以可选地包括在本发明的制剂中。根据配制者的判断，组合物中可以存在赋形剂例如可可油和栓剂蜡、着色剂、包被剂、甜味剂、香料和香味剂。
示例性的稀释剂包括但不限于碳酸钙、碳酸钠、磷酸钙、磷酸二钙、硫酸钙、磷酸氢钙、磷酸钠乳糖、蔗糖、纤维素、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、山梨醇、肌醇、氯化钠、干淀粉、玉米淀粉、粉状糖等，及其组合。
示例性的粒化和/或分散剂包括但不限于马铃薯淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉、羟基乙酸淀粉钠、粘土、褐藻酸、瓜尔胶、柑橘果肉、琼脂、膨润土、纤维素和木制品、天然海绵、阳离子交换树脂、碳酸钙、硅酸盐、碳酸钠、交联聚(乙烯吡咯烷酮)(crospovidone)、羧甲基淀粉钠(羟基乙酸淀粉钠)、羧甲基纤维素、交羧甲基纤维素钠(croscarmellose)、甲基纤维素、预制成胶的淀粉(淀粉1500)、微晶淀粉、不溶于水的淀粉、羧甲基纤维素钙、镁铝硅酸盐(Veegum)、十二烷基硫酸钠、季铵盐类化合物等，及其组合。
示例性表面活性剂和/或乳化剂包括但不限于，天然乳化剂(例如阿拉伯树胶、琼脂、褐藻酸、褐藻酸钠、黄芪胶、chondrux、胆固醇、黄原胶、果胶、明胶、蛋黄、酪蛋白、羊毛脂、胆固醇、蜡和卵磷脂)，胶粘土(例如斑脱土[铝硅酸盐]和Veegum[镁铝硅酸盐])，长链氨基酸衍生物，高分子量的醇(例如硬脂醇、十六醇、油醇、单硬脂酸三醋精、乙二醇双硬脂酸酯、单硬脂酸甘油酯、和丙二醇单硬脂酸酯、聚乙烯醇)，卡波姆(carbomer)(例如羧基聚亚甲基、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物和羧基乙烯聚合物)，角叉菜，纤维素衍生物(例如羧甲基纤维素钠、粉状纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素)，山梨脂肪酸酯(例如，聚氧乙烯单月桂酸山梨酯
Figure GPA00001138904500971
聚氧乙烯山梨聚糖
Figure GPA00001138904500972
聚氧乙烯单油酸山梨酯单棕榈酸山梨酯
Figure GPA00001138904500974
单硬脂酸山梨酯三硬脂酸山梨酯
Figure GPA00001138904500976
单油酸甘油酯、单油酸山梨酯
Figure GPA00001138904500977
聚氧乙烯酯(例如，聚氧乙烯单硬脂酸酯
Figure GPA00001138904500978
聚氧乙烯氢化调味油、聚乙氧基化调味油、聚甲醛硬脂酸酯和Solutol)，蔗糖脂肪酸酯，聚乙二醇脂肪酸酯(例如
Figure GPA00001138904500979
)，聚氧乙烯酯(例如聚氧乙烯月桂酸酯
Figure GPA000011389045009710
聚(乙烯-吡咯烷酮)，二乙二醇单月桂酸酯，三乙醇胺油酸酯，油酸钠，油酸钾，油酸乙酯，油酸，月桂酸乙酯，硫酸月桂酸钠，Pluronic F 68，Poloxamer 188，西曲溴铵，氯化十六烷基吡啶，苄烷氯铵，多库酯钠等，和/或其组合。
示例性的粘合剂包括但不限于，淀粉(例如玉米淀粉和淀粉糊)；明胶；糖(如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糊精、糖浆、乳糖、乳糖醇、甘露醇)；天然的和合成的树胶(例如阿拉伯树胶、褐藻酸钠、爱尔兰苔藓提取物、panwar树胶、ghatti树胶、isapol壳的粘液、羧甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、醋酸纤维素、聚(乙烯吡咯烷酮)、镁铝硅酸盐(Veegum)和落叶松阿拉伯半乳聚糖)；褐藻酸盐；聚乙烯氧化物；聚乙二醇；无机钙盐；硅酸；聚甲基丙烯酸酯；蜡；水；醇；等；及其组合。
示例性的防腐剂包括但不限于抗氧化剂、螯合剂、抗微生物防腐剂、抗真菌防腐剂、醇防腐剂、酸性防腐剂，以及其它防腐剂。示例性的抗氧化剂包括但不限于，α生育酚、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、单硫甘油、偏亚硫酸氢钾、丙酸、五倍子酸丙酯、抗坏血酸钠、重亚硫酸钠、偏亚硫酸氢钠和硫酸钠。示例性的螯合剂包括乙二胺四乙酸(EDTA)、单水合柠檬酸、乙二胺四乙基二钠、乙二胺四乙基二钾、乙二胺四乙酸、富马酸、苹果酸、磷酸、乙二胺四乙基钠、酒石酸和乙二胺四乙基三钠。示例性的抗微生物防腐剂包括但不限于，苄烷氯铵、苄索氯铵、苯甲醇、溴硝醇、溴化十六烷基三甲铵、氯化十六烷基吡啶、双氯苯双胍己烷、氯丁醇、氯甲酚、氯二甲苯酚、甲酚、乙基醇、甘油、海克替啶、咪唑啉基脲、苯酚、苯氧基乙醇、苯乙基醇、苯汞基硝酸盐、丙烯乙二醇和硫柳汞(thimerosal)。示例性的抗真菌防腐剂包括但不限于，尼泊金丁酯、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、安息香酸、羟基安息香酸、安息香钾、山梨酸钾、安息香酸钠、丙酸钠和山梨酸。示例性的醇防腐剂包括但不限于，乙醇、聚乙二醇、苯酚、酚化合物、双酚、氯丁醇、羟基安息香酸盐和苯基乙基醇。示例性的酸性防腐剂包括但不限于，维生素A、维生素C、维生素E、β-胡萝卜素、柠檬酸、乙酸、脱氢乙酸、抗坏血酸、山梨酸和植酸。其它的防腐剂包括但不限于，生育酚、生育酚乙酸酯、deteroxime mesylate、溴化十六烷基三甲铵、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)、乙二胺、硫酸月桂酸钠(SLS)、十二烷基醚硫酸钠(SLES)、重亚硫酸钠、偏亚硫酸氢钠、硫酸钾、偏亚硫酸氢钾、
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尼泊金甲酯、Germall 115、Germaben II、NeoloneTM、KathonTM和
Figure GPA00001138904500982
在一些具体实施方式中，防腐剂是抗氧化剂。在其它具体实施方式中，防腐剂是螯合剂。
示例性缓冲剂包括但不限于，柠檬酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、氯化铵、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、葡乳醛酸钙、葡庚糖酸钙、葡萄糖酸钙、D-葡萄糖酸、甘油磷酸钙、乳酸钙、丙酮酸、乙酰丙酸钙、戊酸、磷酸氢钙、磷酸、磷酸钙、磷酸氢氧化钙、乙酸钾、氯化钾、葡萄糖酸钾、钾混合物、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸钾混合物、醋酸钠、重碳酸钠、氯化钠、柠檬酸钠、乳酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钠混合物、氨基丁三醇、氢氧化镁、氢氧化铝、褐藻酸、无热原的水、等渗盐、Ringer溶液、乙基醇等，及其组合。
示例性的润滑剂包括但不限于，硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、硅石、云母、麦芽、甘油山嵛酸酯、氢化植物油、聚乙二醇、安息香酸钠、醋酸钠、氯化钠、亮氨酸、硫酸月桂酸镁、硫酸月桂酸钠等，及其组合。
示例性油包括但不限于，杏仁(almond)、杏仁(apricot kernel)、鳄梨、巴西棕榈(babassu)、香柠檬、黑加仑种子、琉璃苣、刺桧、甘菊、油菜、香菜、巴西棕榈(carnauba)、蓖麻、肉桂、可可脂、椰子、鳕鱼肝、咖啡、玉米、棉花种子、鸸鹋、桉树、夜来香、鱼类、亚麻籽、香叶醇、葫芦、葡萄籽、榛子坚果、牛膝草、肉豆蔻酸异丙酯、荷荷巴油(jojoba)、夏威夷胡桃、杂薰衣草油(lavandin)、薰衣草、柠檬、山苍子(litsea cubeba)、澳洲坚果(macademia nut)、锦葵、芒果种子、绣线菊种子(meadowfoam seed)、水貂、肉豆蔻、橄榄、橙、深海鲈鱼(orangeroughy)、棕榈、棕榈仁、桃仁、花生、罂粟种子、南瓜种子、油菜籽、米糠、迷迭香、红花、檀香、sasquana、香薄荷(savoury)、沙棘(sea buckthorn)、芝麻、牛油树脂、硅树脂、大豆、向日葵、茶树、蓟、椿(tsubaki)、香根草、胡桃和小麦胚芽油。示例性的油包括但不限于，硬脂酸丁酯、辛酸三甘油酯、癸酸三甘油酯、环甲硅油、癸二酸二乙酯、二甲硅油360、豆蔻酸异丙酯、矿物油、辛基十二醇、油醇、硅树脂油，及其组合。
用于口服和非肠道施用的液体剂型包括但不限于，药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和西也剂。除了活性成分之外，液体剂型可以包含本领域常用的惰性稀释剂，例如，水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙基醇、异丙基醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲基醇、安息香酸苯甲酯、丙烯甘油、1，3-丁烯甘油、二甲基甲酰胺、油(特别是，棉花籽、落花生、玉米、胚芽、橄榄、调味油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃基醇、聚乙二醇和山梨醇的脂肪酸酯，及其混合物。除了惰性稀释剂外，口服组合物可以包括佐剂，例如加湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、香料和香味剂。在用于非肠道的一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体与增溶剂(例如，
Figure GPA00001138904500991
醇、油、修饰的油、乙二醇、聚山梨酸盐、环化糊精、聚合物，及其组合)混合。
可注射制剂(例如无菌可注射水性悬浮液或油质悬浮液)可以使用合适的分散剂或加湿剂和悬浮剂根据本领域已知的方法制备。无菌可注射制备物可以是非毒性非肠道可接受的稀释剂或溶剂(例如，如，在1，3-丁二醇中的溶液)中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液。可使用的可接受的载体和溶剂有水、Ringer溶液、U.S.P和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的固定的油可方便地用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以应用任何温和的固定的油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。此外，脂肪酸例如油酸用于注射物的制备。
可注射制剂可通过例如以阻挡细菌的过滤膜过滤或通过以无菌固体组合物(在使用前可溶于或悬浮于无菌水或其它无菌可注射介质中)的形式整合灭菌试剂而灭菌。
为了延长药物的功效，经常需要减慢皮下或肌肉内注射的药物的吸收。这可以通过使用晶体的液体悬浮液或水溶性差的无定形材料而实现。然后药物的吸收速率取决于溶解速率，而溶解速率又取决于晶体尺寸和晶型。或者，可以通过将药物溶解或悬浮于油性介质而实现非肠道施药的延迟吸收。
用于直肠或阴道施用的组合物通常是栓剂，其可通过将本发明的疫苗纳米载体与合适的非刺激性赋形剂(例如可可油、聚乙二醇或栓剂蜡，其在室温为固体而在体温时为液体，因此在直肠或阴道腔内熔化并释放活性成分)混合来制备。
用于口服施用的固体剂型包括胶囊、药片、药丸、粉末和颗粒。在这样的固体剂型中，活性成分与至少一个惰性的药学上可接受的赋形剂(例如柠檬酸钠或磷酸氢钙)和/或a)填充剂或延伸剂(例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸)，b)粘合剂(如，例如，羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯酮、蔗糖和阿拉伯树胶)，c)湿润剂(例如甘油)，d)崩解剂(例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、一些硅酸盐和碳酸钠)，e)溶液保留剂(例如石蜡)，f)吸收加速剂(季胺化合物)，g)加湿剂(例如，如十六烷醇和单硬脂酸甘油酯)，h)吸附剂(例如高岭土和斑脱土)和i)润滑剂(例如云母、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体乙二醇、硫酸月桂酸钠及其混合物)混合。在胶囊、药片和药丸的情况下，剂型可以包含缓冲剂。
相似类型的固体组合物可以用作软的或硬的填充的明胶胶囊中的填充剂(使用赋形剂例如乳糖或牛奶糖，以及高分子量的聚乙二醇等)。药片、糖衣丸、胶囊、药丸和颗粒的固体剂型可以通过包衣和壳(例如肠溶衣和制药领域熟知的其它包衣)来制备。它们可以可选地包含浊化剂并可以是仅仅或优先在肠道的某一部分释放(可选地，以缓释的方式释放)活性成分的组合物。可用的包埋组合物的例子包括聚合物物质和蜡。相似类型的固体组合物可以用作软的或硬的填充的明胶胶囊中的填充剂(使用赋形剂例如乳糖或牛奶糖，以及高分子量的聚乙二醇等)。
活性成分可以与一个或多个上述赋形剂形成微胶囊形式。药片、糖衣丸、胶囊、药丸和颗粒的固体剂型可以通过包衣和壳(例如肠溶衣、控释包衣和制药领域熟知的其它包衣)来制备。在这样的固体剂型中，活性成分可以与至少一个惰性稀释剂(例如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。如通常的实践，除了惰性稀释剂之外，这样的剂型可以包括另外的物质，例如成片润滑剂和其它的成片辅助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、药片和药丸的情况下，剂型可以包含缓冲剂。它们可以可选地包含浊化剂并可以是仅仅或优先在肠道的某一部分释放(可选地，以缓释的方式释放)活性成分的组合物。可用的包埋组合物的例子包括聚合物物质和蜡。
根据本发明的疫苗纳米载体的局部和/或经皮肤施用的剂型包括软膏、浆糊、乳霜、洗液、凝胶、粉末、溶液、喷雾剂、吸入剂和/或贴剂。一般地，在无菌条件下将活性成分与药学上可接受的赋形剂和/或任何需要的防腐剂和/或可能需要的缓冲剂混合。另外，本发明考虑到使用经皮肤的贴剂，其通常提供控制活性物质输送至身体的额外优点。可以通过例如将活性成分溶解和/或分散在合适的介质中来制备这样的剂型。作为选择，抑或是另外，可以通过提供速率控制膜和/或通过将活性成分分散于聚合物基质和/或凝胶中来控制速率。
适合用于真皮内输送本文描述的药物组合物的装置包括短的针装置，如在美国专利4,886,499、5,190,521、5,328,483、5,527,288、4,270,537、5,015,235、5,141,496和5,417,662中所描述。可以通过限制针刺入皮肤的有效穿透长度的装置(例如在PCT国际公开WO 99/34850及其功能等价物中描述的那些)施用皮内组合物。喷射注射装置(其通过液体喷射注射器和/或针(刺破角质层并在到达真皮时产生喷射)将液体疫苗输送至真皮)是适合的。喷射注射装置在例如美国专利5,480,381、5,599,302、5,334,144、5,993,412、5,649,912、5,569,189、5,704,911、5,383,851、5,893,397、5,466,220、5,339,163、5,312,335、5,503,627、5,064,413、5,520,639、4,596,556、4,790,824、4,941,880、4,940,460和PCT公开WO 97/37705和WO97/13537中描述。弹道粉末/颗粒输送装置(其使用压缩气体以加速粉末形式的疫苗穿过皮肤外层到达真皮)是适合的。作为选择，抑或是另外，常规的注射器可用于真皮内施用的经典曼托(mantoux)方法。
适合于局部施用的制剂包括但不限于液体和/或半液态制剂，例如擦剂、洗剂、水包油和/或油包水乳剂，例如乳霜、软膏和/或浆糊，和/或溶液和/或悬浮液。可局部施用的制剂可以包含例如约1％至约10％(w/w)的活性成分，虽然活性成分的浓度可以高达溶剂中活性成分的溶解性限度。局部施用的制剂还可以包含一个或多个本文描述的其它成分。
本发明的药物组合物可以以适合于通过口腔的肺施用的制剂进行制备、包装和/或出售。这样的制剂可以包括干燥颗粒，干燥颗粒包含活性成分且直径范围为约0.5μm至约7μm或约1μm至约6μm。这样的组合物为干粉的形式，使用包含干粉储存室的装置(可以向该储存室引入推进剂流以使粉末分散)和/或使用自推进溶剂/粉末分散容器(例如在密封容器内包含溶解于和/或分散于低沸推进剂的活性成分的装置)方便地施用。这样的粉末包含颗粒，其中至少98％重量的颗粒具有0.5μm以上的直径且至少95％数目的颗粒具有7μm以下的直径。或者，至少95％重量的颗粒具有1μm以上的直径且至少90％数目的颗粒具有6μm以下的直径。干粉组合物可以包括固体精细粉末稀释剂例如糖，并方便地以单元剂型提供。
低沸推进剂一般包括在大气压下具有65°F以下沸点的液体推进剂。一般地，推进剂构成组合物的50％至99.9％(w/w)，和活性成分构成组合物的0.1％至20％(w/w)。推进剂还可以包含另外的成分例如液态非例子和/或固体阴离子表面活性剂和/或固体稀释剂(其可以具有与包含活性成分的颗粒相同数量级的颗粒尺寸)。
制成肺部输送的本发明的药物组合物可提供溶液和/或悬浮液的滴液形式的活性成分。这样的制剂可作为水性和/或稀释醇溶液和/或悬浮液来制备、包装和/或出售，可选地为无菌的，其包含活性成分，和可以通过任何喷雾和/或雾化装置方便地施用。这样的制剂还可以包含一个或多个另外的成分，包括但不限于，香料剂(例如糖精钠)、挥发油、缓冲剂、表面活性剂和/或防腐剂(例如甲基羟基安息香酸盐)。通过此施用途径提供的液滴具有约0.1μm至约200μm的范围的平均直径。
本文描述的可用于肺部输送的制剂可用于鼻内输送本发明的药物组合物。另一种适合鼻内施用的制剂是包含活性成分的粗糙粉末，其具有约0.2μm至约500μm的平均颗粒。这样的制剂以吸取鼻气息的方式施用，即从靠近鼻孔的粉末容器迅速吸入鼻通道。
适合用于鼻部施用的制剂可以包含例如少至约0.1％(w/w)到多达100％(w/w)的活性物质，且可以包含本文描述的一种或多种其它成分。本发明的药物组合物可以以适合于口腔施用的制剂来制备、包装和/或出售。这样的制剂可以是例如使用常规方法制成的药片和/或锭剂，和可以包含例如0.1％至20％(w/w)的活性成分，平衡包含口服可溶解和/或可降解的组合物和可选地包含一种或多种本文描述的其它成分。作为选择，适合于口腔施用的制剂可以包含粉末和/或气雾化和/或离子化的溶液和/或悬浮液(其中包含活性成分)。这样的粉末和/或气雾化和/或离子化的制剂当分散时具有约0.1μm至约200μm的范围的平均颗粒和/或滴液尺寸，还可以包含一种或多种本文描述的其它成分。
本发明的药物组合物可以以适合于口腔施用的制剂来制备、包装和/或出售。这样的制剂可以是例如眼滴液的形式，其包括例如水性或油脂赋形剂中的0.1％/1.0％(w/w)的活性成分的溶液和/或悬浮液。这样的滴液还可以包含缓冲剂、盐和/或一种或多种本文描述的其它成分。可用的其它的经眼施用的制剂包括那些在包含微晶形式和/或脂质体制备物中的活性成分的制剂。耳滴液和/或眼滴液被考虑在本发明的范围内。
在例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy 21st ed.，LippincottWilliams & Wilkins，2005中有关于制备和/或生产药物制剂的一般性考虑。
施用
在一些具体实施方式中，在诊断出疾病、失调和/或病症之前、与之同时和/或之后将治疗上有效量的本发明的疫苗纳米载体组合物输送至病人和/或动物。在一些具体实施方式中，在疾病、失调和/或病症的征状出现之前、与之同时和/或之后将治疗上有效量的本发明的组合物输送至病人和/或动物。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体的量对于疾病、失调和/或病症的一个或多个征状或特征足以治疗、减轻、改善、缓解、延迟其发作、抑制其进展，减轻其严重程度和/或降低其发生率。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体的量足以在个体中引发可检测的免疫应答。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体的量足以在个体中引发可检测的抗体应答。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体的量足以在个体中引发可检测的T细胞应答。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体的量足以在个体中引发可检测的抗体和T细胞应答。在一些具体实施方式中，纳米载体提供的优点是纳米载体能够以远低于常规疫苗所需的抗原浓度引发有力的应答。
可以施用对治疗有效的任何数量和施用途径施用根据本发明的方法的组合物。所需的精确数量根据在个体之间变化，这取决于物种、年龄和个体的一般条件、感染的严重性、特别的组合物、其施用途径、其活性模式等。本发明的组合物通常制成容易施用且剂量一致的剂量单元形式。但是，应该理解，将由主治医生在合理的医学判断的范围内决定本发明的组合物每日的总的用量。任何特定个体或生物的特异性治疗上有效的剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的病症和该病症的严重程度；所用的特异性活性成分的活性；所用的特异性组合物；个体的年龄、体重、一般健康状况、性别和食谱；所用的特异性活性成分的施用时间、施用途径和排泄速率；治疗持续的时间；与所用的特异性活性成分联用的或同时使用的药物；以及医学领域熟知的类似因素。
本发明的药物组合物可以通过任何途径施用。在一些具体实施方式中，本发明的药物组合物通过多种途径施用，包括，口服、静脉内、肌肉内、动脉内、骨髓内、鞘内、皮下、心室内、经皮、真皮内、直肠、阴道内、腹膜内、表面(如通过粉末、软膏、乳霜和/或滴液)、经皮、粘膜、鼻、口腔、肠道、舌下；通过气管灌输、支气管灌输和/或吸入；和/或作为口喷雾剂、鼻喷雾剂和/或气雾剂。特异性考虑的途径为口服施用、静脉内注射、肌肉内注射和/或皮下注射。在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体为非肠道施用。在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体为静脉内施用。在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体为口服施用。
一般地，最合适的施用途径将取决于多种因素，包括疫苗纳米载体的性质(例如，其在胃肠道环境中的稳定性)、个体的状况(例如，个体是否能够耐受口服施用)等。本发明包括通过任何合适的途径(考虑到药物输送领域可能的进展)输送本发明的药物组合物。
在一些具体实施方式中，本发明疫苗纳米载体可以以每天范围为约0.001mg/kg至约100mg/kg、约0.01mg/kg至约50mg/kg、约0.1mg/kg至约40mg/kg、约0.5mg/kg至约30mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg或约1mg/kg至约25mg/kg个体体重的量施用(一天一次或多次)，以获得想要的治疗功效。需要的剂量的输送可以一天三次、一天两次、一天一次、两天一次、隔一天一次、每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次。在一些具体实施方式中，需要的剂量可以施用多次来进行输送(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多次施用)。
在一些具体实施方式中，本发明包括“治疗鸡尾酒”，其包含本发明的疫苗纳米载体的群体。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体的群体内的所有疫苗纳米载体包含单一种类的靶半体，其能够与多个靶结合(例如能够同时与SCS-Mph和FDC结合)。在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体的群体内的不同疫苗纳米载体包含不同的靶半体，所有的不同的靶半体均与相同的靶结合。在一些具体实施方式中，不同的疫苗纳米载体包含不同的靶半体，所有的不同的靶半体能够与不同的靶结合。在一些具体实施方式中，这样的不同的靶可以与相同的细胞类型结合。在一些具体实施方式中，这样的不同的靶可以与不同的细胞类型结合。
组合治疗
将认识到，本发明的疫苗和药物组合物可以以组合治疗应用。用于组合方案中的治疗(治疗剂或程序)的特定组合将考虑到需要的治疗剂和/或程序的兼容性以及要达到的需要的治疗效果。将认识到，应用的治疗可以达到相同目的需要的效果(例如，用于抵抗特定类型的微生物感染的疫苗接种的本发明的疫苗纳米载体可以与另一种用于治疗相同的微生物感染的试剂同时施用)，或者它们可以达到不同的效果(例如控制疫苗纳米载体的任何副作用)。
在一些具体实施方式中，本发明的药物组合物可以单独施用或与一种或多种其它治疗试剂联合施用。“联合”不是暗示试剂必须同时施用和/或配制成同时输送，虽然这些输送方法落入本发明的范围内。可以在一种或多种其它的需要的治疗剂或医疗程序的同时，之前或之后施用组合物。一般地，每种试剂按照对该试剂确定的剂量和/或时间表施用。另外，本发明包括与可以改善本发明药物组合物的生物可利用性、减少和/或改变其代谢、抑制其排泄和/或改变其在体内分布的试.剂联合输送本发明的药物组合物。
用于组合方案中的治疗(治疗剂或程序)的特定组合将考虑到需要的治疗剂和/或程序和/或要达到的需要的治疗效果。将认识到，应用的治疗可以达到针对同一种病症的需要的效果(例如，本发明的疫苗纳米载体可以与另一种用于治疗相同的病症的治疗性试剂同时施用)，和/或它们可以达到不同的效果(例如控制疫苗纳米载体的任何副作用)。在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体与美国食品与药片管理局批准的第二种治疗性试剂一起施用。
还将认识到：联合使用的治疗性活性试剂可以一起以单一组合物施用或在不同的组合物中分别施用。
一般地，预期联合使用的试剂以不超过其单独使用时的水平使用。在一些具体实施方式中，联合使用时的水平低于单独使用时的水平。
在一些具体实施方式中，本发明的疫苗纳米载体可以与试剂，包括，例如治疗性、诊断性和/或预防性试剂联合使用。根据本发明输送的示例性的试剂包括但不限于，小分子、有机金属化合物、核酸、蛋白(包括多聚体蛋白、蛋白复合体等)、肽、脂、碳水化合物、激素、金属、放射活性元素和化合物、药物、疫苗、免疫试剂等，和/或其组合。
在一些具体实施方式中，延迟特定的微生物感染的发作和/或发展的疫苗纳米载体可以与一种或多种治疗微生物感染征状的其它治疗性试剂联合施用。仅举一例，在暴露于狂犬病病毒之后，包含用于接种抵抗狂犬病病毒的免疫调节试剂的纳米载体可以与一种或多种用于治疗狂犬病病毒征状的治疗性试剂(例如，用于治疗偏执狂(其为狂犬病病毒感染的征状)的安定药剂)联合施用。
在一些具体实施方式中，包含本发明的疫苗纳米载体的药物组合物包含50％重量以下的、40％重量以下的、30％重量以下的、20％重量以下的、15％重量以下的、10％重量以下的、5％重量以下的、1％重量以下的或0.5％重量以下的待输送的试剂。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体与一种或多种具有药学活性的小分子和/或有机化合物联合施用。在一些具体实施方式中，试剂是临床上使用的药物。在一些具体实施方式中，药物是抗癌剂，抗生素，抗病毒剂，抗HIV剂，抗寄生虫剂，抗原生动物剂，麻醉剂，抗凝血剂，酶的抑制剂，甾体类试剂，甾体类或非甾体类抗炎剂，抗组胺剂，免疫抑制剂，抗瘤剂，抗原，疫苗，抗体，解充血药，镇静剂，鸦片，止痛剂，退烧药，避孕药，激素，前列腺素，妊娠前试剂，抗青光眼试剂，眼药，抗类胆碱，止痛剂，抗抑郁剂，安定药剂，神经毒素，催眠药，镇定剂，抗惊厥剂，肌肉放松剂，抗Parkinsion药剂，抗痉挛剂，肌肉收缩剂，通道阻滞剂，缩瞳剂，抗分泌剂，抗血栓药剂，抗凝血剂，抗类胆碱，β-肾上腺素阻滞剂，利尿剂，心血管活性剂，血管活性剂，血管舒张剂，抗高血压剂，血管生成剂，细胞-细胞外基质相互作用调节剂(例如，细胞生长抑制剂和抗粘附分子)，DNA、RNA或蛋白合成抑制剂等。
在一些具体实施方式中，小分子试剂可以是任何药物。在一些具体实施方式中，药物是已经被合适的政府机构或监察机构认为是可以安全并有效用于人类或动物的药物。例如，由FDA根据21C.F.R.§§330.5，331-361和440-460(通过引用并入本文)所列的批准用于人类的药物；由FDA根据21C.F.R.§§500-589(通过引用并入本文)所列的用于兽医用途的药物。所有列出的药物认为可以被接受而用于本发明。
可以在Pharmaceutical Drugs：Syntheses，Patents，Applications by AxelKleemann and Jurgen Engel，Thieme Medical Publishing，1999和the Merck Index：AnEncyclopedia of Chemicals，Drugs and Biologicals，Ed.By Budavari等人，CRC Press，1996(二者通过引用并入本文)中找到关于适合用于本发明的类别和特异性药物的更加完整的列表。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体与一种或多种核酸(例如功能性RNA、功能性DNA等)联合用于特异性位点，例如组织、细胞或亚细胞位点。例如，用于延迟特定的微生物感染发作和/或发展的本发明的疫苗纳米载体可以与减少微生物蛋白表达的RNAi试剂联合施用。核酸的分子特性在上文中标题为“核酸靶半体”的部分有描述。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体与一种或多种蛋白或肽联合施用。在一些具体实施方式中，待输送的试剂可以是肽、激素、红细胞生成素、胰岛素、细胞因子、疫苗接种用的抗原等。在一些具体实施方式中，待输送的试剂可以是抗体和/或其特征性部分。它们的分子特性在上文中标题为“蛋白靶半体”的部分有描述。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体与一种或多种碳水化合物联合施用，例如与蛋白结合的碳水化合物，如糖蛋白、蛋白聚糖等。碳水化合物可以是天然的或合成的。碳水化合物还可以是天然碳水化合物的衍生物。在一些具体实施方式中，碳水化合物可以是简单糖或复合糖。在一些具体实施方式中，碳水化合物是单糖，包括但不限于葡萄糖、果糖、半乳糖和核糖。在一些具体实施方式中，碳水化合物是二糖，包括但不限于乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖和纤维二糖。在一些具体实施方式中，碳水化合物是多糖，包括但不限于纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、甲基纤维素(MC)、右旋糖苷、葡萄聚糖、糖原、黄原胶、结冷胶、淀粉和普鲁兰糖(pullulan)。在一些具体实施方式中，碳水化合物是糖醇，包括但不限于甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、赤藻糖醇、麦芽糖醇和乳糖醇。碳水化合物的分子特性在上文中标题为“包含碳水化合物的疫苗纳米载 体”的部分有描述。
在一些具体实施方式中，疫苗纳米载体与一种或多种脂联合施用，例如与蛋白结合的脂，如脂蛋白。可以用于本发明的示例性的脂包括但不限于，油、脂肪酸、饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、必需脂肪酸、顺式脂肪酸、反式脂肪酸、甘油酯、甘油单酯、甘油二脂、甘油三酸酯、激素、类固醇(例如胆固醇、叶酸)、维生素(例如维生素E)、磷脂、鞘脂和脂蛋白。脂的分子特性在上文中标题为“脂疫苗纳米载体”的部分有描述。
本领域技术人员将认识到这是可以与本发明的疫苗纳米载体联合输送的治疗性、诊断性和/或预防性试剂的示例性而非完整的列举。根据本发明可以与疫苗纳米载体一起施用任何治疗性、诊断性和/或预防性试剂。
试剂盒
本发明提供了多种包含一个或多个本发明的纳米载体的试剂盒。例如，本发明提供了包含本发明的疫苗纳米载体和使用说明书的试剂盒。试剂盒可以包含多个不同的疫苗纳米载体。试剂盒可以包含任意组合的任意数目的其它成分或反应剂。在此不一一列举所有可能的组合，但是每个组合均包括在本发明的范围内。
根据本发明的一些具体实施方式，试剂盒可以包括，例如：(1)包含至少一个免疫调节试剂的疫苗纳米载体，其中至少一个免疫调节试剂能够刺激T细胞和B细胞应答；(ii)向有需要的个体施用疫苗纳米载体的说明书。
在一些具体实施方式中，试剂盒可以包括，例如：(1)包含至少一个免疫调节试剂的疫苗纳米载体，其中至少一个免疫调节试剂能够刺激T细胞和B细胞应答，至少一个靶半体和/或至少一个免疫调节试剂；(ii)向有需要的个体施用疫苗纳米载体的说明书。
在一些具体实施方式中，试剂盒可以包括，例如：(1)至少一个免疫调节试剂，其中至少一个免疫调节试剂能够刺激T细胞和B细胞应答；(ii)至少一个靶半体；(iii)至少一个免疫刺激试剂；(iv)聚合物基质前体；(v)脂和两性物质；(vi)从单独成份(i)-(v)组装本发明的疫苗纳米载体的说明书。
在一些具体实施方式中，试剂盒包含本发明的纳米载体和如何进行混合的说明书。在一些具体实施方式中，这样的试剂盒还包含免疫刺激试剂和/或免疫调节试剂(例如B细胞或T细胞抗原)。这样的试剂盒的纳米载体可以包含免疫调节试剂(例如T细胞抗原，如普遍T细胞抗原)和/或靶半体。T细胞抗原和/或靶半体可以在纳米载体的表面。在一些具体实施方式中，免疫调节试剂和抗原是相同的。在一些具体实施方式中，它们是不同的。
试剂盒通常包括本发明的疫苗纳米载体的使用说明书。例如，说明书可以包含产生疫苗纳米载体、向有需要的个体施用疫苗纳米载体等的方案和/或描述产生疫苗纳米载体、向有需要的个体施用疫苗纳米载体等的条件。试剂盒一般包括一个或多个器皿或容器，从而一些或所有的单个成分和反应剂可以分开存储。试剂盒还可以包括将单个的容器以相对封闭的方式封装以用于商业销售的装置，例如塑料盒子，其中可以装入说明书、包装材料例如泡沫塑料等。试剂盒或试剂盒中包括的一个或多个器皿或容器上面可以有标识符，例如条形码或射频识别(ID)标签等。标识符可用于例如用于唯一确定用于质量控制、存货控制、追踪、工作站之间的移动等目的试剂盒。
实施例
实施例1：淋巴结中的被膜下窦巨噬细胞清除淋巴携带的病毒并将其呈递至抗病毒B细胞
材料和方法
方法概述
从感染的BSRT7细胞的培养上清液纯化VSV-IND和VSV-NJ病毒体，以未修饰形式或者Alexa-568(红色)或Alexa-488(绿色)荧光标记使用。将用于组织显示的荧光病毒进行UV照射以防止产生非荧光的子代。对VSV-IND颗粒进行荧光标记或UV照射不影响其抗原性或者在VI10YEN细胞中引发钙流动的能力(未显示)。将荧光病毒注射入足底之后，收获引流的腘淋巴结以进行电子显微镜分析或产生用于免疫染色和共焦显微镜的冷冻切片。为了显示淋巴结中过继性转移的B细胞，将VI10YEN和野生型B细胞进行荧光标记并通过静脉内注射共转染至野生型或突变的受体小鼠。18小时后，当B细胞回归到B细胞滤泡时，以标记或未标记的VSV注射小鼠的右足底。之后在不同的时间间隔，通过MP-IVM观察引流的腘淋巴结或者将其收获以用于共焦显微镜观察或进行流式细胞术以分析病毒特异性和对照B细胞的激活状态。在一些实验中，通过皮下注射CLL而消除腘淋巴结中的巨噬细胞，动物用于此后7-10天的实验。在预先进行CLL处理或不预先进行CLL处理的淋巴结上进行各种标记物的MP-IVM、电子显微镜、免疫组化和流式细胞术分析。通过向足底注射确定数量的活体VSV然后在VSV注射2小时或6小时之后收获组织而检测VSV从足底注射位点向血液和其它器官的繁殖。为了测定病毒效价，将组织匀浆并用于空斑实验。一些病毒繁殖实验在胸管插管之后进行。
小鼠和抗体
C57BL/6和BALB/c小鼠购买自Taconic Farm(Germantown，NY)。VI10YEN(Hangartner等人，2003，Proc.Natl.Acad.Sci，USA，100：12883；通过引用并入本文)，C3-/-(Wessels等人，1995，Proc.Natl.Acad.Sci，USA，92：11490；通过引用并入本文)，MHCII-EGFP(Boes等人，2002，Nature，418：983；引用并入本文)，Act-EGFP(Wright等人，2001，Blood，97：2278)，和DH-LMP2A小鼠(Casola等人，2004，Nat.Immunol.，5：317；通过引用并入本文)在Harvard Medical School和the ImmuneDisease Institute(IDI)的栅栏动物场饲养。通过以两剂650rad照射Act(EGFP)小鼠并以C57BL/6骨髓还原而产生辐射嵌合体，在使用之前允许还原8周。在一些实验中，在实验之前7-10天通过足底注射30μl的膦酸盐脂质体(CLL)而除去SCS巨噬细胞。
膦酸盐是Roche Diagnostics GmbH，Mannheim，Germany的惠赠。其它用于制备脂质体的试剂为：磷脂酰胆碱(LIPOID E PC，Lipoid GmbH，Ludwigshafen，Germany)和胆固醇(Sigma-Aldrich)。
根据National Institutes of Health的指南，将小鼠养在无特异性病原体和无抗病毒抗体的条件下。所有的动物程序都经过Institutional Animal Committees of HarvardMedical School和IDI批准。
除了抗-B220-Alexa647(Invitrogen-Caltag)、抗-LYVE-1(Millipore-Upstate)、山羊抗-兔子-APC(Invitrogen)、山羊抗-GFP-FITC(Rockland)、抗-FITC-Alexa488(Invitrogen)和Fab抗-IgM-FITC(Jackson Immunoresearch)之外，抗体购自BDBiosciences(San Jose，CA)。以下抗体购自AbD-Serotec：抗-CD68-Alexa647、抗-CD11b-Alexa647、F4/80-Alexa647、抗-CD169-FITC(3D6)。用于检测VI10YEN小鼠中的VI10BCR的抗-个体基因型抗体35.61(Hangartner等人，2003，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，100：12883；通过引用并入本文)根据标准方法从杂交瘤上清液中产生。
流式细胞术
在对小鼠进行后眼窝放血并以ACK缓冲剂(0.15M NH4Cl、1mM KHCO3、0.1mM EDTA(二钠盐)，pH7.2)裂解红细胞之后将血液样品进行流式细胞分析。通过小心地切碎组织然后于37℃在DMEM(Invitrogen-Gibco)(其中存在250μg/ml liberase CI(Roche)加50μg/ml DNase-I(Roche))中消化40分钟而产生用于流式细胞术的淋巴结和脾的单细胞悬浮液。消化20分钟后，将样品剧烈地通过18G针头以确保器官完全分离。所有的流式细胞分析在FACS缓冲液(含有PBS和2mM EDTA和2％FBS(Invitrogen-GIBCO))中在FACScalibur(BD Pharmingen)上进行，并通过FlowJo软件(Treestar Inc.，Ashland，OR)进行分析。为了测定钙流，以4μM Fluo-LOJO(Teflabs)(处于含有10％FCS的DMEM中)于37℃标记细胞90分钟。细胞穿过FCS旋落并立即使用。
病毒和VSV空斑检验
在BSRT7细胞上以0.01的MOI繁殖VSV血清型Indiana(VSV-IND，源自Mudd-Summers的克隆，体外拯救的(Whelan等人，1995，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，92：8388；通过引用并入本文)和空斑纯化的)或New Jersey(VSV-NJ，Pringle Isolate，空斑纯化的)。通过在2000x g离心，通过0.45μm无菌过滤膜过滤感染细胞的上清液并在40,000x g进行超离心90分钟，从而将感染细胞的上清液从细胞碎片中除去。将沉淀重悬于PBS并通过透过NTE(0.5mM NaCl、10mM Tris-HCl，pH 7.5，5mM EDTA，pH 8)中的10％蔗糖垫的超离心(157,000x g，60分钟)进行纯化。重悬于PBS中过夜后，通过BCA检验(Pierce)定量测定病毒蛋白，通过空斑检验定量测定感染力。一些斑以AlexaFluor-488或AlexaFluor-568(Invitrogen-Molecular Probes)的羧酸马来酰亚胺酯(Alexa染料摩尔数比病毒颗粒高104-105倍)进行标记。通过穿过NTE中的10％蔗糖的超离心除去未偶联的染料，将沉淀重悬于PBS并冷冻储存。通过在绿色猴肾细胞(Vero)上进行空斑检验而定量测定VSV制备物的感染力。以Potter-Elvejhem匀浆器将器官匀浆后，类似地测定来自感染小鼠器官的VSV效价。如果需要，在病毒制备过程中，从157,000x g的超离心中收集大约4ml的上清液并以10,000MWCO Amicon Ultra(Millipore)进行浓缩。为了对浓缩的上清液中剩余感染力作出解释，将VSV贮液稀释至等于浓缩上清液中的感染力的水平，将VI10YEN B细胞中的钙流与进一步稀释100倍的VSV和上清液进行比较。根据标准程序(Leopold等人，1998，HumanGene Therapy，9：367；通过引用并入本文)产生UV灭活的、AlexaFluor-568标记的腺病毒5(AdV5)。所有的传染性工作均在指定的BL2+工作站上根据制度指南进行，并经过Harvard Committee on Microbiological Safety的批准。
VSV中和检验
在含有2％FCS的MEM中将经过免疫的小鼠的血清预稀释40倍。将系列2倍稀释物与等体积的VSV(500pfu/ml)混合并于37℃在5％CO2中孵育90分钟。将100μl的血清-病毒混合物转移至96孔板中的Vero细胞单层并于37℃孵育1小时。以含有1％甲基纤维素的100μl的DMEM将单层覆盖并于37℃孵育24小时。然后，除去覆盖，将单层固定并以0.5％的结晶紫染色。将空斑数减少50％的最高血清稀释作为效价。为了测定IgG效价，与等体积的0.1mM的β巯基乙醇(在盐水中)预处理未稀释的血清。
粘附检验
以重组小鼠VCAM-1-Fc或ICAM-1-Fc(R&D systems)的稀释物或PBS中的纯化的VSV-IND包被96孔板(Corning)过夜，重复三次。阴性对照孔以4％BSA包被，阳性对照孔以1mg/ml的多聚L赖氨酸包被。于4℃以Hanks Balanced SaltSolution(HBSS)/1％BSA将板子封闭1-2小时，并洗涤。使用CD43磁性珠子(Miltenyi，Bergisch Gladbach，Germany)通过磁性细胞分离法负选择来自VI10YEN或C57BL/6小鼠的原态B细胞，并以3×105/孔加入到板中的HBSS(含有1％BSA、1mMCa2 +和1mM Mg2 +，存在或不存在UV灭活的VSV-IND(MOI为1000))中，37℃持续30分钟。轻轻洗涤(在含有1％的BSA的HBSS中洗涤3次)之后，以PBS/10％戊二醛将板子固定10分钟，以0.5％结晶紫/20％甲醇染色45分钟并在水中洗涤。通过加入1％的SDS洗脱染料，30分钟后通过分光光度法确定570nm处的吸收(SpectraMax340PC微量板阅读器和SoftmaxPro 3.1.2软件，Molecular Devices Corporation)。
共焦显微镜方法
对于一些分析，以20μg AlexaFluor-568或AlexaFluor-488标记的VSV-IND或VSV-NJ注射C57BL/6小鼠的两只后足，持续30分钟。对于其它实验，将1×107在实验前一天负选择的来自VI10YENx MHCII-EGFP小鼠的原态B细胞注入小鼠。在预先确定的时间点，通过足底注射磷酸盐缓冲的L-赖氨酸和1％多聚甲醛/高碘酸盐(PLP)而将腘淋巴结原位固定。除去腘淋巴结并在PLP中于4℃孵育3-5小时之后，在0.1M PBS(pH 7.2)中洗涤腘淋巴结，并在PBS中渐增系列的10％、20％和30％蔗糖中冷冻保存。在TBS组织冷冻液(Triangle Biomedical Sciences，Durham NC)中将样品突然冷冻并储存在-80℃。将40μm厚的切片装配在SuperfrostPlus玻片(Fisherbrand)上，以1μg/ml抗体2.4G2(BD Pharmingen)封闭Fc受体之后，在湿室中以荧光抗体进行染色。样品在FluorSave反应剂溶液(EMD-Calbiochem)中装配并储存于4℃直至进行分析。使用Olympus BX50WI显微镜和10x/0.4或60x/1.2W的物镜通过BioRad共焦显微镜系统收集图像。使用LaserSharp2000软件(BioRad Cell Science，Hemel Hempstead，Great Britain)和Photoshop CS(Adobe)分析图像。通过对位于T/B边界50μm内的细胞进行计数而定量计算定位于T/B边界的B细胞，由B220复染显示，任何位于更中心区域的细胞被认为是滤泡。
电子显微镜方法
通过足底注射2％甲醛和2.5％戊二醛(处于0.1M甲次砷酸盐缓冲液中，pH7.4)而在原位固定腘淋巴结。切除淋巴结并浸没在相同的缓冲液中于4℃过夜，在甲次砷酸盐缓冲液中洗涤，并以1％四氧化锇/1.5％氰亚铁酸钾(在水中)于室温黑暗中进行锇染色，持续1小时。在水中洗涤之后，在0.05M马来酸盐缓冲液(pH5.15)中洗涤3-4次。在马来酸盐缓冲液中的1％的乙酸铀酰中将样品复染2个小时并在水中洗涤3次。通过在水中的乙醇(70％-90％-100％)的稀释物中孵育15分钟而将样品脱水，在氧化丙烯中孵育1小时，然后转移至1∶1混合的Epon和氧化丙烯中，于室温过夜。将样品转移至包埋模具(其中填充新鲜混合的Epon)并于60℃加热24-48小时以进行聚合。在Harvard Medical School EM facility以TecnaiG2 Spirit BioTWIN电子显微镜分析样品。
多光子活体内显微镜(MP-IVM)法分析腘淋巴结
使用CD43珠(Milenyi)通过磁性分离负选择原态B细胞。使用10μM的5-(和6-)(((4-氯甲基)苯甲酰)氨基)四甲基若丹明(CMTMR；Invitrogen)于37℃标记VI10YEN B细胞，持续20分钟，使用10μM的7-氨基-4氯甲基香豆素(CMAC；Invitrogen)于37℃标记C57BL/6B细胞，持续25分钟。在一些实验中，在野生型和VI10YEN B细胞之间交换标记以排除非特异性染料效应。将每个群体的5-6x106个B细胞混合并在分析前一天通过尾部静脉注射过继性转移进入C57BL/6受体小鼠。在一些实验中，受体C57BL/6小鼠已经在实验前7-10天接受了后足底注射30μl的CLL以除去SCS巨噬细胞(Delemarre等人，1990，J.Leukoc.Biol.，47：251；通过引用并入本文)。过继性转移B细胞之后18小时，通过静脉内注射克他命(50mg/kg)和甲苯噻嗪(10mg/kg)而将受体小鼠麻醉。通过微手术方法制备右侧腘淋巴结以用于MP-IVM，将其放置于客户自制的显微镜平台上，如Mempel等人2004，Nature，427：154(通过引用并入本文)所描述。小心地省下血管和传入淋巴管。将暴露的淋巴结浸没于正常盐水中并以玻璃盖玻片覆盖。将热电偶置于淋巴结旁边以监控局部温度，将其保持在36-38℃。在800nm的激发波长(来自可调的MaiTai Ti：sapphire laser(Spectra-Physics))在BioRad 2100MP系统上进行MP-IVM。通过31G针头将荧光标记的VSV(20μl中含有20μg)注射到同时观察的受体小鼠的后足底。为了进行细胞迁移的四维离线分析，通过20x/0.95水浸目镜(Olympus)以电子放大1.8x-3x每15秒获取11个光学x-y部分(具有4μm z间距)的堆积。以非去扫描检测器通过400/40nm、450/80nm、525/50nm和630/120nm通带过滤膜检测发射的荧光信号和第二谐波信号以产生三色图像。使用Volocity软件(Improvision)将图像堆积的序列转化为赋予体积的四维的时延影像。使用Volocity通过半自动化细胞追踪和通过Matlab(Mathworks)进行的计算机化分析确定3D即时速率。通过不知情记录者进行的人工影像分析确定SCS上的细胞积聚。每2分钟，在SCS、表面滤泡(距离SCS＜50μm的距离)和深层滤泡(距离SCS＞50μm的距离)上数出VI10YEN B细胞和多克隆B细胞，记录整个30分钟的影像中每个室中的VI10YEN/多克隆B细胞的比例。
胸管插管
为了进行胸管插管，在插管之前30分钟，小鼠口服接受200ul橄榄油以促进淋巴管的可视化。然后以甲苯噻嗪(10mg/kg)和盐酸克他命(50mg/kg)将动物麻醉。将聚乙烯导管(PE-10)插入右侧颈静脉以持续灌输(2ml/小时)含有1U/ml肝素(American Pharmaceutical partners，Los Angeles，CA)的Ringer乳酸盐(AbbottLaboratories，North Chicago，IL)。使用解剖显微镜，通过左肋下切口将TD暴露出来。以肝素化(50U/ml)的磷酸盐缓冲盐水(DPBS，Mediatech，Herndon，VA)冲洗
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硅管(0.012”I.D.，Dow Corning，Midland，USA)，并通过大约0.3mm的切口将其插入到乳糜池中，并以异丁基氰基丙烯酸盐单体(
Figure GPA00001138904501112
AbbottLaboratories)固定。将管的剩余部分通过后腹壁取出来。然后，使用6-0不能被吸收的连续缝合线(Sofsilk，Tyco Healthcare Group，Norwalk，CO)将腹部切口封闭。淋巴流平衡30分钟后，以108pfu的VSV-IND在足底注射动物，在冰上收集淋巴样品，持续收集6小时。胸管淋巴收集6小时之后取出淋巴和器官并按照上文所述斑化。按照上文所述将淋巴和器官斑化。在一些实验中，通过外科手术将引流的腘部和主动脉淋巴结切除，将周围的淋巴管烧灼以防止淋巴携带的病毒进入血液。
结果和讨论
淋巴结(LN)阻止病原体(例如进入机体表面的病毒)从感染的外周位点散布到全身。它们也是针对源自病原体的抗原的获得性免疫应答的分期依据(vonAndrian和Mempel，2003，Nat.Rev.Immunol.，3：867；和Karrer等人，1997，J.Exp.Med.，185：2157；二者通过引用并入本文)。尚不清楚病毒颗粒如何从输入性淋巴被清除并呈递至同源的B细胞以诱导抗体应答。这里，我们在被膜下窦(SCS)的基底和淋巴结的髓质中鉴别出CD11b+CD169+MHCII+的巨噬细胞，其在皮下注射(s.c.)几分钟之内捕获病毒颗粒。SCS巨噬细胞跨过SCS基底将表面结合的病毒颗粒转运并将其呈递至下面的滤泡中的迁移性B细胞。选择性除去这些巨噬细胞破坏了局部病毒保留，恶化了宿主的病毒血症，并破坏了局部B细胞激活。这些发现表明CD169+巨噬细胞具有双重生理学功能。它们作为先天“捕蝇纸”而阻止淋巴结携带的病原体的全身性扩散，并且在淋巴组织处作为重要的门户以促进B细胞识别特定的抗原并启动体液免疫应答。
我们研究了进入外周组织的病毒颗粒在引流的淋巴结中如何被处理。以荧光标记的UV灭活的泡性口炎病毒(VSV)(一种由昆虫叮咬传播的引起细胞病变的棒状病毒)(Mead等人，2000，Ann.N.Y.Acad.Sci.916：437；通过引用并入本文)注射小鼠后足底并引发T非依赖性的中和性B细胞应答(Bachmann等人，1995，Eur.J.Immunol.，25：3445；通过引用并入本文)。使用多光子活体内显微镜(MP-IVM)，在注射的足底引流的腘淋巴结(Mempel等人，2004，Nature，427：154；通过引用并入本文)中，我们观察到：皮下注射后几分钟之内VSV以离散的碎片在SCS基底上聚积，而SCS的软组织和顶部仍然没有病毒(图11A)。病毒沉积变得越来越深，形成显著的不规则网状式样，其在数小时内保持固定在位置中。
为了描绘淋巴结中VSV结合位点的偏好性，我们以野生型骨髓恢复了几个照射的Act(EGFP)小鼠。所产生的B6→Act(EGFP)嵌合体在非造血细胞中表达EGFP，推测为SCS基底和顶部的淋巴内皮细胞。将荧光VSV注射进入C57BL/6→Act(EGFP)嵌合体的足底后，病毒颗粒淹没了SCS。3小时后，未结合的腔内VSV已经消失，但是SCS基底显示出强烈的VSV碎片，其不与EGFP+细胞共存，这暗示VSV被造血细胞捕获(图11B)。为了描绘推测的捕获VSV的白细胞，我们在VSV注射5分钟之后收获的腘淋巴结上进行了电子显微镜实验(图11C)。子弹状的电子密集的VSV颗粒选择性地与分散的大细胞(其位于SCS内或在SCS基底正下)表面的离散区域结合。位于SCS基底下面的VSV结合细胞通常通过延伸进入SCS腔的突出与淋巴腔室接触。
淋巴结的超结构研究已经表明SCS含有很多巨噬细胞(Clark，1962，Am.J.Anat.，110：217；和Farr等人，1980，Am.J.Anat.，157：265；二者通过引用并入本文)，所以我们假设保留VSV的细胞属于这一群体。确实，足底注射30分钟之后获得的冷冻淋巴结切片的共焦显微镜观察显示VSV与一个巨噬细胞标记物(CD169/唾液酸粘附素)共同定位于SCS(图11D)。使用流式细胞术，我们在淋巴结中的大约1％-2％的单核细胞(MNC)中检测到了CD169，其统一地共表达CD11b和MHC-II，这表明结合VSV的细胞确实是巨噬细胞(图12)。多数CD169+细胞也表达其它的巨噬细胞标记物，包括CD68和F4/80，而极少表达粒细胞/单核细胞标记物Gr-1。CD169+细胞也表达CD11c，但是比CD11chigh常规性树突状细胞(DC)水平要低。我们得出结论：在经皮沉积数分钟后完整病毒进入淋巴并且迅速且选择性地在髓质和引流淋巴结的SCS中的巨噬细胞上积聚。
为了研究病毒固定的机理，将活体VSV(20μg含有2×108pfu)注射进入后足底，2小时后测定引流淋巴结中的病毒效价。在补体C3缺失的小鼠的引流淋巴结中VSV的保留没有缺陷(图11E)。DH-LMP2a小鼠(其缺少分泌的免疫球蛋白)在脾中病毒效价降低，但是腘淋巴结中不降低(图11F)。因此，淋巴结中VSV的固定是通过与脾边缘区域巨噬细胞不同的机理发生，脾边缘区域巨噬细胞中VSV的固定需要C3和天然抗体以捕获血液携带的VSV(Ochsenbein等人，1999，J.Exp.Med.，190：1165；和Ochsenbein等人，1999，Science，286：2156；二者通过引用并入本文)。可以想象，在淋巴结中VSV表面糖蛋白(VSV-G)可能被表达巨噬细胞的与碳水化合物结合的清道夫受体所识别(Taylor等人，2005，Ann.Rev.Immunol.，23：901；通过引用并入本文)，但是精确的机理需要进一步的研究。
巨噬细胞捕获病毒对于病毒传播和抗病毒免疫力的意义是什么呢？为了解释这个问题，我们通过足底注射膦酸盐脂质体(CLL；Delemarre等人，1990，J.Leukoc.Biol.，47：251；通过引用并入本文)除去位于淋巴结中的巨噬细胞。在所用的剂量下，皮下注射CLL选择性消除了注射点引流的淋巴结中的巨噬细胞，包括腘部、腹股沟和主动脉旁LN(Delemarre等人，1990，J.Leukoc.Biol.，47：251；通过引用并入本文)，而剩下了末梢淋巴结和脾中的巨噬细胞(图13A、B)。在不同的处于淋巴结中的CD11b+MHC II+的吞噬细胞中，CLL优选除去CD169+亚群，而LYVE-1+细胞和常规的DC保持不变。在处理之后7天，CLL处理的腘淋巴结的B细胞数目增加且滤泡增大，但是其它的形态学参数(例如，T/B边界的划分和SCS超结构)保持不变(图13C-E)。
与未处理的淋巴结相比，我们从CLL处理的小鼠的引流淋巴结中恢复的病毒效价约低10倍(图11G)，这表明巨噬细胞的消除引起淋巴过滤的无效率。确实，在CLL处理的小鼠的血液、脾和非引流淋巴结中VSV的效价显著性升高。病毒从注射位点向血液的传播严格取决于淋巴引流，这是因为，当病毒被注射到在胸导管(TD)中携带阻塞管的小鼠的足底时(甚至是在CLL处理的小鼠中)检测不到循环的VSV。在未处理小鼠的TD淋巴液中病毒效价低，但是可以检测到，但是在CLL处理的动物中显著性升高(图11H)。这表明病毒从外周组织早期传播的主要途径是淋巴，其由处于淋巴结中的CLL敏感性巨噬细胞(阻止淋巴携带的VSV的全省性扩散)监视。
这个捕获机理并非对VSV特异的；CD169+SCS巨噬细胞也保留腺病毒(AdV；图11A-C)和牛痘病毒(VV，图14D)，这表明巨噬细胞作为抵抗很多结构不同的病原体的屏障。相反，在足底注射之后，病毒尺寸的橡胶珠(200nm)在SCS中的保留性较差(图14E)。因此，SCS巨噬细胞区别淋巴携带的病毒和其它相似尺寸的颗粒。荧光VSV、AdV和VV也在引流淋巴结的髓质聚集，在那里它们不仅被CD169low细胞结合(图11D)，还被CD169-LYVE-1+淋巴内皮细胞结合(图14C、D)。这在CLL处理的淋巴结中得到确证，在CLL处理的淋巴结中VSV专有性地在髓质的LYVE-1+细胞上聚集(图15)。
接下来，我们研究了B细胞如何识别捕获的VSV。在SCS腔内，腘淋巴结几乎不含B细胞(图16A)，但是我们发现在电子显微图中没有发现SCS内结合病毒的淋巴细胞的迹象。确实，延伸跨过SCS基底的巨噬细胞将病毒颗粒呈递至表面滤泡内的B细胞。在注射VSV(图17A)或AdV(图16B-E)之后，在B细胞-巨噬细胞界面处可以容易地检测到病毒体，这至少持续4个小时。这暗示：为了将病毒颗粒呈递至B细胞，SCS巨噬细胞将病毒颗粒穿梭跨过SCS基底。转胞吞作用(transcytosis)似乎是不可能的，因为极少在SCS巨噬细胞中含有VSV的泡显示出病毒降解的迹象。此外，我们通过MP-IVM没有检测到结合病毒的巨噬细胞的实质性运动性，至少在刺激后首6个小时内没有检测到。因此，病毒颗粒最可能通过沿着巨噬细胞表面移动而到达淋巴结软组织。值得注意的是：从外周位点迁移的DC也将VSV和其他抗原呈递至B细胞(Ludewig等人，2000，Eur.J.Immunol.，30：185；和Qi等人，2006，Science，312：1672；二者通过引用并入本文)，但是源自足底的DC不可能在非常早的事件中发挥作用，因为它们需要更长的时间迁移至腘淋巴结。我们得出结论：SCS基底对于淋巴携带的病毒来说不是不可逾越的；CD169+巨噬细胞似乎作为病毒转运并呈递至B细胞的守卫和促进者。
接下来，我们使用两种血清型的VSV，(Indiana(VSV-IND)和New Jersey(VSV-NJ))(图18；Roost等人，1996，J.Immunol.Methods，189：233；通过引用并入本文)研究了原态B细胞对病毒遭遇如何反应。我们将野生型B细胞与来自VI10YEN小鼠的B细胞(其表达不与VSV-NJ结合的VSV-IND特异性B细胞受体)(Hangartner等人，2003，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，100：12883；通过引用并入本文)进行了比较。相反，一小部分(2％-5％)的野生型B细胞同时结合两种血清型而不被激活。这可能反映出与VSV-G的低亲和性反应或间接的相互作用，例如通过补体(Rossbacher和Shlomchik，2003，J.Exp.Med.，198：591；通过引用并入本文)。为了检测体内应答，将经不同标记的野生型和VI10YEN B细胞进行过继性转移并允许回归至淋巴结滤泡。然后将荧光的UV灭活的病毒注射入足底并在约5-35分钟后通过MP-IVM记录腘淋巴结。在不含病毒的淋巴结或注射VSV-NJ之后，VI10YEN和对照B细胞显示出相同的分布(图17B-C)。相反，在注射VSV-IND之后，VI10YEN细胞迅速在SCS基底以下和在SCS基底上聚集。在CLL处理的和未处理的淋巴结中，基础B细胞活动性和分布没有差异，这暗示了在两种条件下，VSV特异性B细胞以相等的可能性探测SCS。但是，在CLL处理的淋巴结中，荧光病毒没有被保留在SCS上并且VI10YEN B细胞不能在该区域聚集，这表明SCS巨噬细胞对两个事件均是必需的(图17B)。
为了严格定量VI10YEN B细胞的分布，在VSV刺激30分钟之后收获淋巴结并通过共焦显微镜进行分析。整个的滤泡VI10YEN群体保留其总体分布(图17D)，但是在含有VSV-IND的淋巴结中(而不是在VSV-NJ的淋巴结中)位于SCS以下≤50μm的细胞亚群向SCS偏移(图17E)。因为化学趋向性信号，所以VI10YENB细胞似乎不可能重新分布于SCS，因为无反应性多克隆B细胞表达相同的化学趋向因子受体。更可能的是，运动性的VI10YEN细胞与结合巨噬细胞的VSV-IND的随机接触引发依赖于BCR的“终止信号”(Okada等人，2005，PloS Biol.3：e150；通过引用并入本文)：短时间暴露于VSV-IND激活VI10YEN B细胞上的LFA-1和/或α4整合素(Dang和Rock，1991，J.Immunol.，146：3273；通过引用并入本文)，这导致粘附至各自的配体ICAM-1和VCAM-1，二者均在SCS上表达(图19)。另外，VSV-IND与SCS巨噬细胞的结合可能为VI10YEN B细胞通过BCR的直接粘附提供底物。
为了研究B细胞检测到捕获的病毒体之后如何处理，我们测试了来自VI10YEN x MHCII-EGFP小鼠的B细胞，这允许我们显示与内涵体MHC-II共定位的内吞的VSV以作为B细胞引发的指示(Vascotto等人，2007，Curr.，Opin，Immunol.，19：93；通过引用并入本文)。在注射后30分钟内，表面滤泡中的VI10YENx MHCII-EGFP B细胞具有严重内在化的VSV-IND，但没有VSV-NJ颗粒(图20A、B)。在深层滤泡中很少有携带病毒的VSV特异性B细胞，但仍可以检测到。这些细胞可能具有从鲜有的在表面携带VSV的多克隆B细胞获得的病毒体，或者可能对应于VI10YEN细胞，VI10YEN细胞在获得VSV-IND之后不能停留在SCS。
我们的组织学发现证明完整的病毒体优先被SCS和表面滤泡中的B细胞检测到并获得，而对B细胞活动性的MP-IVM测定显示出更广的抗原传播。在VSV-IND注射后，VI10YEN细胞在整个B滤泡中表现出迅速的速率下降(图21)。在CLL处理和对照淋巴结中同样有此发现，这表明病毒抗原不依赖于巨噬细胞到达B细胞。这种抗原性材料最可能由游离的病毒蛋白(自然感染的不可逆的副产物)组成。确实，我们的VSV贮液的纯化上清液在VI10YEN B细胞中诱导强烈的钙流动(图18E)。已知小的淋巴携带的蛋白迅速扩散至滤泡和激活同源的B细胞(Pape等人，2007，Immunity，26：491；通过引用并入本文)。因此，注射病毒上清液抑制滤泡VI10YEN B细胞的移动而不诱导其在SCS的聚集，这表明游离的VSV-G包含在病毒接种体内并且是活性的。这可以解释VSV-IND注射的巨噬细胞非依赖性的广泛的滤泡效应。
为了确定遭遇病毒之后的VI10YEN B细胞激活的动力学，我们测定了常见的激活标记物(图22)。在VSV-IND刺激之后6小时，共刺激分子CD86首先被上调。CD69被迅速地诱导，但是在多克隆B细胞上同样被诱导，推测是被多向性IFN-α信号所诱导(Barchet等人，2002，J.Exp.Med.，195：507；和Shiow等人，2006，Nature，440：540；二者通过引用并入本文)。早在刺激之后30分钟表面IgM(图20C、D)即被下调，在2小时内达到最大值，当＞70％的VI10YEN细胞是BCRlow/neg的时候。因此，BCR的内在化为病毒特异性B细胞的激活提供了最早的特异性读出。引人注目的是，在皮下注射20μg的VSV-IND之后的头两个小时内，CLL处理的淋巴结中的VI10YEN B细胞不能下调其BCR(图20E)，这表明SCS巨噬细胞对于将捕获的病毒体有效的早期呈递至B细胞是必需的。
引发的B细胞最终恳求来自CD4+T细胞的帮助(Vascotto等人，2007，Curr.，Opin，Immunol.，19：93；通过引用并入本文)以进行类别转换重组和生发中心的形成。为了接触T细胞，新激活的B细胞朝着T/B边界迁移(Okada等人，2005，PLoS Biol.，3：e150；和Reif等人，Nature，416：94；二者通过引用并入本文)。这个机理在富含巨噬细胞的小鼠中有效进行；多数VI10YEN B细胞在足底注射VSV-IND(少至40ng)后的6小时之内重新分布于T/B边界(图20F、H和23)。相反，在CLL处理的小鼠中需要高100倍的病毒剂量以引发VI10YEN B细胞的完全的重新分布(图20G、H)。到注射后12个小时的时候，多数VSV特异性细胞到达T-B边界，不论注射剂量为多少。因此，即使没有SCS巨噬细胞，滤泡B细胞最终也会被源自VSV的抗原激活，虽然效率较低。
综上，我们证明淋巴结中的CD169+巨噬细胞具有双重作用：它们捕获淋巴携带的病毒，阻止其全身性传播；并且它们指引捕获的病毒体跨越SCS基底以有效地呈递并激活滤泡B细胞。
实施例2：示例性的基于脂的疫苗纳米技术构建
脂质体纳米载体
在一些具体实施方式中，生产小的脂质体(10nm-1000nm)并在一些具体实施方式中用于将一个或多个免疫调节试剂输送至免疫系统的细胞(图3)。一般地，脂质体是人工构建的圆球体脂泡，其数十至数千纳米的可控直径意味着单独的脂质体包含体积为仄升(10-21L)至飞升(10-15L)的生物可兼容腔室，这些腔室可用于包埋并储存各种货物，例如蛋白、酶、DNA和药物分子。脂质体可以包含具有两性性质的脂双层：双层的内表面和外表面均为亲水性的，双层的腔是疏水性的。亲脂性分子可以自发嵌入脂质体膜并将其亲水性结构域保留在外面，由于膜的双功能性的优势，亲水性分子可以与脂质体的外表面化学地偶联。
在一些具体实施方式中，脂与亲脂性免疫调节试剂混合，然后形成固体表面上的细膜。亲水性免疫调节试剂溶解于水性溶液中，然后将此水性溶液加入到脂膜中，在振荡下将脂水解。具有整合到双层壁中的亲脂性免疫调节试剂和位于脂质体腔内的亲水性免疫调节试剂的脂质体自发组装。
纳米颗粒稳定化的脂质体纳米载体
在一些具体实施方式中，纳米颗粒稳定化的脂质体用于将一个或多个免疫调节试剂输送至免疫系统的细胞(图4)。当小的带电的纳米颗粒到达带有相反电荷或无净电荷的脂质体表面时，纳米颗粒与膜之间的静电或电荷-偶极相互作用吸引纳米颗粒停留在膜表面，被脂膜部分包裹住。这诱导脂质体的局部的膜的弯曲和整体表面的收缩，二者均调节膜的坚固性。这个方面对于使用脂质体进行疫苗输送(以模拟病毒，病毒的坚固性取决于病毒膜内其它生物成分的组成)是至关重要的。此外，被吸附的纳米颗粒形成带电的壳，其保护脂质体抵抗融合，从而增强脂质体稳定性。在一些具体实施方式中，小的纳米颗粒与脂质体在轻微振荡下混合，纳米颗粒自发地粘附至脂质体表面。
脂质体-聚合物纳米载体
在一些具体实施方式中，脂质体-聚合物纳米载体用于将一个或多个免疫调节试剂输送至免疫系统的细胞(图5)。亲水性免疫调节试剂不是保持脂质体内凹，相反，亲水性免疫调节试剂可被包埋。图3显示了装载了双嵌段共聚物纳米颗粒的脂质体，以形成脂质体包被的聚合物纳米载体，其同时具有脂质体和聚合物纳米颗粒的性质，而排除了一些它们的局限性。在一些具体实施方式中，脂质体壳可用于携带亲脂性免疫调节试剂或偶联亲水性免疫调节试剂，聚合物核心可用于输送疏水性免疫调节试剂。在一些具体实施方式中，预制的聚合物纳米颗粒(40nm-1000nm)与小的脂质体(20nm-100nm)在轻微振荡下混合，以诱导脂质体融合至聚合物纳米颗粒表面。
纳米载体稳定化的脂质体-聚合物纳米载体
在一些具体实施方式中，纳米颗粒稳定化的脂质体-聚合物纳米载体用于输送一个或多个免疫调节试剂(图6)。通过小的纳米颗粒(1nm-30nm)吸附至脂质体-聚合物纳米载体表面，纳米载体不但具有上述纳米颗粒稳定化的脂质体(图4)和上述脂质体-聚合物纳米颗粒的性质(图5)，还具有可调的膜坚固性和可控的脂质体稳定性。
包含反胶团的脂质体-聚合物纳米载体
在一些具体实施方式中，含有反胶团的脂质体-聚合物纳米载体用于输送一个或多个免疫调节试剂(图7)。由于上述脂质体-聚合物纳米载体(图5和6)限制于在聚合物纳米颗粒内携带疏水性免疫调节试剂，所以在这里将小的反胶团(1nm-20nm)制成包埋亲水性免疫调节试剂，然后与双嵌段共聚物混合以制成脂质体的聚合物核心。
在一些具体实施方式中，首先将待包埋的亲水性免疫调节试剂通过在挥发性的可与水混溶的有机溶剂中与天然来源的且非毒性的两性物质混合而整合入反胶团。将得到的生物可降解聚合物-反胶团混合物与不可溶于聚合物的亲水性非溶剂联合，通过溶剂快速扩散至非溶剂中以及有机溶剂的挥发而形成纳米颗粒。含有反胶团的聚合物纳米颗粒与脂分子混合以形成上述脂质体-聚合物复合体结构(图5)。
包含反胶团的纳米载体稳定化的脂质体-聚合物纳米载体
在一些具体实施方式中，含有反胶团的纳米颗粒稳定化的脂质体-聚合物纳米载体用于输送一个或多个免疫调节试剂(图8)。通过将小的纳米颗粒(1nm-30nm)吸附至脂质体-聚合物纳米载体表面，纳米载体不但具有上述纳米颗粒稳定化的脂质体(图4)和上述含有反胶团的脂质体-聚合物纳米颗粒的性质(图7)，还具有可调的膜坚固性和可控的脂质体稳定性。
脂单层稳定化的聚合物纳米载体
在一些具体实施方式中，脂单层稳定化的聚合物纳米载体用于输送一个或多个免疫调节试剂(图9)。与上述脂质体聚合物纳米载体(图5-8)相比较，这个系统具有试剂和制备意义上的简单性。在一些具体实施方式中，疏水性均聚物可以形成聚合物核心，而不是图5-8中所用的双嵌段共聚物(其同时具有疏水性和亲水性片段)。脂稳定化的聚合物纳米载体可以在一个单一步骤中制成，而不是先分别制备聚合物纳米颗粒和脂质体然后再将其混合在一起。
在一些具体实施方式中，亲水性免疫调节分子首先与脂的头部基团化学偶联。偶联物在含有一种或多种与水混溶的溶剂的水性溶液中以一定比例与未偶联的脂分子混合。生物可降解聚合物材料与疏水性免疫调节试剂混合以包埋于与水混溶或部分与水混溶的有机溶剂。将得到的聚合物溶液加入到偶联的脂和未偶联的脂的水性溶液中，通过有机溶剂快速扩散至水中以及有机溶剂的挥发而形成纳米颗粒。
包含反胶团的脂单层稳定化的聚合物纳米载体
在一些具体实施方式中，包含反胶团的脂单层稳定化的聚合物纳米颗粒用于输送一个或多个免疫调节试剂(图10)。由于上述脂质体稳定化的聚合物纳米载体(图9)限制于携带疏水性免疫调节试剂，所以在这里将小的反胶团(1nm-20nm)制成包埋亲水性免疫调节试剂，并与生物可降解聚合物混合以制成聚合物纳米载体核心。
实施例3：使用来自人IgG的Fc片段在体内靶向SCS-Mph
将未进行荧光修饰的对照纳米颗粒(上端图板，图24A)或Fc表面偶联的靶向纳米载体(中间和下端图板，图24A)注射到麻醉小鼠的足底，1小时后切除引流的腘淋巴结并制备用于流式细胞术的单细胞悬浮液。通过注射装载膦酸盐的脂质体消除淋巴结巨噬细胞后一个星期，同样以靶向纳米载体注射小鼠(下端图板，图24A)。基于CD11b的高表达，门(gate)内的细胞群体被鉴定为与纳米颗粒结合的巨噬细胞。这些结果表明：(i)纳米颗粒的结合取决于膦酸盐敏感性巨噬细胞的存在；和(ii)相对于对照纳米颗粒，靶向纳米颗粒结合约两倍的巨噬细胞。
图24的右侧图板显示了注射蓝色荧光对照纳米颗粒(上端图板，图24A)或靶向纳米颗粒(中间和底端图板，图24A)之后冷冻的淋巴结切片的荧光显微图。以抗-CD169和鉴别髓质(上端和下端图板，图24A)或B细胞(中间图板，图24A)的标记物将切片进行复染(counter-stained)。注射纳米颗粒1小时之后，在髓质中发现多数对照颗粒(上端，图24A)，而靶向纳米颗粒与CD169+SCS-Mph共定位于B细胞滤泡附近(中间，图24A)。注射之后24小时，在SCS和髓质之间的皮层区域中看到靶纳米颗粒的离散的细胞尺寸的累积，这暗示了迁移性树突状细胞的摄取和转移。
以红色荧光B细胞和1∶1的对照和Fc靶向纳米颗粒混合物静脉注射小鼠足底。24小时后，当一些转化的B细胞迁移进入B细胞滤泡时，切除引流的腘淋巴结并切片以进行共焦显微镜观察和蓝色:绿色荧光比例的定量图像分析。被膜下窦(SCS)区域含有相似水平的蓝色和绿色纳米颗粒(右侧圈起来的细胞，图24B)，而与Fc靶向纳米颗粒结合的绿色荧光在SCS中大约高两倍。在B滤泡内也有显著的绿色纳米颗粒累积，如分散的红色B细胞所显示。这些区域具有特征性的尺寸、形状和滤泡树突状细胞(FDC)的分布，像巨噬细胞和树突状细胞一样已知为表达丰富的Fc受体。
实施例4：携带抗原的靶向纳米颗粒为高度免疫原性的且诱导高抗体效价
以UV灭活的水疱性口炎病毒(VSV，Indiana血清型)或以VSV的经纯化的免疫原性被膜糖蛋白(VSV-G)免疫小鼠组(每组5只)。VSV-G以可溶形式与明矾混合供给，或者VSV-G与非靶向或靶向(具有表面固定的人类Fc)PLGA纳米颗粒(含有或不含明矾佐剂)偶联供给。估计游离VSV-G的剂量比以纳米颗粒输送的VSV-G的剂量约高10倍。小鼠在初次免疫之后55天接受增强性注射，10周后获取血清并测定Vero细胞上VSV-介导的空斑形成的中和情况。结果显示为阻断至少50％空斑形成的最高血清稀释时的效价。每个符号表示一只小鼠中中和抗-VSV的效价。接受含有VSV-G的Fc靶向纳米颗粒免疫的小鼠组(该组中的具有最高抗体效价的两只动物在所测的最高稀释度时完全中和了空斑的形成，所以实际的效价甚至可能更高)产生比其它任何组都显著性高的中和抗-VSV效价。
纳米颗粒(NP)疫苗引发的诱导的免疫应答赋予对致死剂量的VSV的有力的保护。虽然所有接受疫苗的组均显示出一些保护，但是只有一组(其接受VSV-G偶联至Fc靶向NP外加明矾)显示出对致死性感染的100％保护。接受游离VSV-G(VSV-G+明矾)的受体接受的抗原比供给VSV-G偶联至纳米颗粒的动物约高10倍。作为阴性对照，一个小组的小鼠接受不含VSV-G的Fc靶向纳米颗粒(NP-Fc)，其没有产生保护。
实施例5：通过免疫调节纳米颗粒体内激活T细胞
以CFSE标记的CD4T细胞(来自OT-II供体小鼠，该小鼠表达对II类MHC中呈递的鸡白蛋白(OVA)特异性的转基因的TCR)通过静脉注射C57BL6J小鼠。然后，通过使用游离的OVA或纳米颗粒(其由PLA或PLGA组成，其中包埋等量的OVA作为模型抗原)注射一只足底而进行免疫接种实验。所有的抗原性混合物还包含作为佐剂的CpG(一种TLR9激动剂)。注射动物，免疫3天后杀死动物，在来自不同组织的单细胞悬浮液中通过流式细胞术测定OT-II T细胞激活。
未刺激的5，6-羧基-马来酰亚胺-荧光素-酯(CFSE)标记的T细胞不分裂，所以统一携带高浓度的CFSE，这导致明亮地荧光细胞的单一的窄峰。相反，激活的T细胞发生分裂并且在此过程中在两个子代细胞之间平均分配荧光素染料，这导致每次连续分裂之后荧光的强度逐渐减弱。因此，CFSE荧光左偏移得越多，T细胞被激活得越厉害。结果表明：(i)在引流的腘淋巴结中(popLN，上面一行)，纳米颗粒包埋的抗原比游离的抗原产生更强烈的CD4T细胞应答；(ii)在末梢淋巴组织中，包括臂淋巴结(中间一行)和脾(下面一行)只有纳米颗粒诱导局部T细胞增殖，游离OVA不诱导局部T细胞增殖。在接受游离OVA的受体中，臂淋巴结和脾仅含有未分裂的细胞或含有非常少量的CFSE的细胞。后者的群体不指示局部T细胞激活，而是指示其它地方激活的T细胞的迁移。
以CFSE标记的CD8T细胞(来自OT-I供体小鼠，该小鼠表达对I类MHC中呈递的鸡白蛋白(OVA)特异性的转基因的T细胞受体(TCR))通过静脉注射C57BL6J小鼠。其它实验程序与上面一段所述的相同。
如上所述以以CFSE标记的CD8T细胞(来自OT-I供体小鼠)通过静脉注射C57BL6J小鼠。但是，在该实验中，使用CL097(一种激活TLR-7和TLR-8的咪唑喹啉化合物)作为佐剂并测试了不同的佐剂输送方法。在足底注射与游离佐剂(160ng)混合的游离的OVA(1μg或100ng)之后3天，计算引流的腘淋巴结中OT-I T细胞的总数目，从而测定该情况下T细胞的激活。所有接受纳米颗粒的动物均接受含有或不含有160ng CL097的100ng的OVA。那些包埋于纳米颗粒中而不是与PLA聚合物共价结合的材料以[]表示。以连字符标示CL097与PLA的共价键。以游离形式混合于相同腔室内的材料以“+”分开。这些结果显示在接受包埋于纳米颗粒中的OVA(其中佐剂与赋形剂共价连接)的动物中，CD8T细胞的增殖显著性增加。
等同物和范围
本领域技术人员将认识到或仅通过常规实验可以确定本文描述的本发明的特异性具体实施方式的很多等同物。本发明的范围不限于以上的说明书，而是由随附的权利要求书所限定。
本领域技术人员将认识到或仅通过常规实验可以确定本文描述的本发明的特异性具体实施方式的很多等同物。本发明的范围不限于以上的说明书，而是由随附的权利要求书所限定。
除非另有指明或从上下文中可以断定，否则权利要求书中的冠词例如“a”、“an”和“the”除了指一个以外可以指一个或多个。因此，例如，当提及“纳米颗粒”时包括多个这样的纳米颗粒，提及“细胞”时包括本领域技术人员已知的一个或多个细胞，等等。除非另有指明或从上下文中可以断定，否则权利要求书或说明书中所包括的“或者”(在一组的一个或多个成员之间)被认为是满足一个、多个或所有的组成员存在于、应用于给定的产品或方法或与给定的产品或方法相关。本发明包括这样的具体实施方式，其中恰有一个组成员存在于、应用于给定的产品或方法或与给定的产品或方法相关。本发明包括这样的具体实施方式，其中多个组成员或所有组成员存在于、应用于给定的产品或方法或与给定的产品或方法相关。此外应该理解，本发明包括所有这样的变体、组合或排列，其中来自一个或多个所列的权利要求的一个或多个限定、元素、从句、描述性术语等被引入另一个权利要求。例如，任何从属于另一个权利要求的权利要求可以被修改为包括任何其它的从属于同一个基础权利要求的权利要求中的一个或多个限定。此外，除非另有指明或者本领域普通技术人员可以断定会产生矛盾或不一致性，否则，当权利要求提及组合物时，应该理解为包括为了本文描述的任何目的使用该组合物的方法，并且包括根据本文描述的任何制备方法或其它本领域已知的方法制备该组合物的方法。
当元素以Markush组的形式列举表示时，应该理解为同样公开的元素的亚组，并可以从组中除去任何元素。一般地应该理解为，当本发明或本发明的方面被称作包含特定的元素、特征等的时候，本发明的某些具体实施方式或本发明的方面由这样的元素、特征等组成或实质上由这样的元素、特征等组成。为了简单起见，在本文中没有以那样的语言具体列出那样的具体实施方式。应该注意的是，术语“包含”是开放式的并允许包括另外的元素或步骤。
当给出范围时，包括端点值。此外，应该理解的是，除非另有指明或者由上下文和本领域普通技术人员的理解可以断定，否则在本发明的不同具体实施方式中，作为范围表述的数值可以是本发明的不同具体实施方式中的任何具体数值或亚范围，直至范围下限的单位的十分之一，除非上下文另有指明。
另外，应该理解，任何落入现有技术范围内的本发明的任何特定具体实施方式可以明确地从一个或多个权利要求中排除。因为这样的具体实施方式被认为是本领域普通技术人员已知的，所以即使在本文没有明确指出排除，也可以将其排除。不论任何原因，可以从一个或多个权利要求中排除本发明的组合物的任何特定具体实施方式(例如，任何免疫调节试剂、任何靶半体、任何免疫刺激试剂、任何抗原呈递细胞、任何疫苗纳米载体架构、任何微生物、任何施用方法、任何预防性和/或治疗性应用等)，不管是否与现有技术相关。
以上和全文中所讨论的出版物仅仅是因为它们早于本申请的申请日的公开内容而提供。这方面的任何内容不应被理解为承认本发明人没有权利通过更早的公开而使本发明早于这样的公开物。

Claims (386)

1.一种组合物，其包含靶向特异性细胞、组织或器官并调节免疫应答的纳米载体，所述纳米载体包含B细胞抗原、T细胞抗原和免疫刺激试剂中的至少一个。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中纳米载体包含B细胞抗原。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中B细胞抗原位于纳米载体的表面。
4.根据权利要求3所述的组合物，其中B细胞抗原以激活B细胞受体的密度位于纳米载体的表面。
5.根据权利要求2所述的组合物，其中B细胞抗原包埋于纳米载体内部。
6.根据权利要求3或4所述的组合物，其中B细胞抗原位于纳米载体的表面并且也包埋于纳米载体内部。
7.根据权利要求2-5任一项所述的组合物，其中B细胞抗原与纳米载体结合。
8.根据权利要求7所述的组合物，其中B细胞抗原与纳米载体共价结合。
9.根据权利要求2-8任一项所述的组合物，其中B细胞抗原是弱免疫原性的抗原。
10.根据权利要求2-8任一项所述的组合物，其中B细胞抗原是蛋白或肽。
11.根据权利要求2-8任一项所述的组合物，其中B细胞抗原是小分子。
12.根据权利要求2-8任一项所述的组合物，其中B细胞抗原是被滥用的物质。
13.根据权利要求2-8任一项所述的组合物，其中B细胞抗原是令人上瘾的物质。
14.根据权利要求13所述的组合物，其中令人上瘾的物质是尼古丁、麻醉药、迷幻剂、刺激物、咳嗽抑制剂、镇定剂或止痛药。
15.根据权利要求2-8任一项所述的组合物，其中B细胞抗原是毒素。
16.根据权利要求15所述的组合物，其中毒素来自化学武器或生物战的试剂。
17.根据权利要求16所述的组合物，其中化学武器或生物战的试剂是芥子气、蓖麻毒素、肉毒杆菌毒素、蛤蚌毒素、沙林、磷杂环戊二烯、三氯硝基甲或路易斯毒气。
18.根据权利要求2-8任一项所述的组合物，其中B细胞抗原是有害的环境中的试剂。
19.根据权利要求18所述的组合物，其中有害的环境中的试剂是砷、铅、汞、氯乙烯、多氯联苯、苯、多环芳香烃、镉、苯并(a)芘、苯并(b)荧蒽、氯仿、DDT，P，P’-、阿罗克洛1254、阿罗克洛1260、二苯并(a，h)蒽、三氯乙烯、狄氏剂、六价铬或DDE，P，P’。
20.根据权利要求2-8任一项所述的组合物，其中B细胞抗原是蛋白或肽。
21.根据权利要求2-8任一项所述的组合物，其中B细胞抗原是碳水化合物。
22.根据权利要求20或21所述的组合物，其中碳水化合物来自传染性试剂。
23.根据权利要求22所述的组合物，其中传染性试剂是细菌、真菌、病毒、原生动物或寄生虫。
24.根据权利要求23所述的组合物，其中细菌是假单胞菌属、肺炎球菌属、大肠杆菌、葡萄球菌属、链球菌属、密螺旋体、包柔氏螺旋体、衣原体、嗜血杆菌属、梭菌属、沙门氏菌属、军团杆菌属、弧菌或肠球菌或分支杆菌属。
25.根据权利要求23所述的组合物，其中病毒是痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、登革热病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人类免疫缺陷病毒、人类乳头瘤病毒、水痘-带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、细胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒状病毒、轮状病毒、鼻病毒、腺病毒、乳头瘤病毒、细小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰质炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道肠道病毒、风疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆转录病毒、嗜肝DNA病毒、柯萨奇病毒、委内端拉马脑脊髓炎病毒、日本脑炎病毒、黄热病毒、裂谷热病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒。
26.根据权利要求2-8任一项所述的组合物，其中B细胞抗原是自身抗原。
27.根据权利要求26所述的组合物，其中自身抗原是蛋白或肽、脂蛋白、脂、碳水化合物或核酸。
28.根据权利要求26所述的组合物，其中自身抗原是酶、结构蛋白、分泌的蛋白、细胞表面受体或细胞因子。
29.根据权利要求28所述的组合物，其中细胞因子是TNF、IL-1或IL-6。
30.根据权利要求26所述的组合物，其中自身抗原是胆固醇酯转移蛋白(CETP)、与Alzheimer病相关的Aβ蛋白、处理Aβ蛋白的病理形式的蛋白水解酶、与动脉硬化症相关的LDL或HIV-1的共受体。
31.根据权利要求30所述的组合物，其中处理Aβ蛋白的病理形式的蛋白水解酶是β-分泌酶。
32.根据权利要求30所述的组合物，其中与动脉硬化症相关的LDL是氧化的或最小化修饰的。
33.根据权利要求30所述的组合物，其中HIV-1的共受体是CCR5。
34.根据权利要求2-8任一项所述的组合物，其中B细胞抗原是退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原或代谢性疾病酶。
35.根据权利要求34所述的组合物，其中传染性疾病抗原是病毒抗原。
36.根据权利要求35所述的组合物，其中病毒抗原是来自痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、登革热病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人类免疫缺陷病毒、人类乳头瘤病毒、水痘-带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、细胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒状病毒、轮状病毒、鼻病毒、腺病毒、乳头瘤病毒、细小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰质炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道肠道病毒、风疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆转录病毒、嗜肝DNA病毒、柯萨奇病毒、委内端拉马脑脊髓炎病毒、日本脑炎病毒、黄热病毒、裂谷热病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒的抗原。
37.根据权利要求36所述的组合物，其中纳米载体包含T细胞抗原。
38.根据权利要求37所述的组合物，其中当纳米载体同时包含B细胞和T细胞抗原时，其中B细胞抗原是蛋白、肽或非蛋白抗原。
39.根据权利要求37所述的组合物，其中T细胞抗原是普遍T细胞抗原。
40.根据权利要求39所述的组合物，其中普遍T细胞抗原是源自破伤风类毒素、EB病毒或流感病毒的一个或多个肽。
41.根据权利要求37所述的组合物，其中T细胞抗原是退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同种抗原、异种抗原、变应原、接触致敏剂、半抗原或代谢性疾病酶或酶产物。
42.根据权利要求41所述的组合物，其中传染性疾病抗原是病毒抗原。
43.根据权利要求42所述的组合物，其中病毒抗原是来自痘病毒、小痘病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、登革热病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、人类免疫缺陷病毒、人类乳头瘤病毒、水痘-带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、细胞巨化病毒、EB病毒、JC病毒、棒状病毒、轮状病毒、鼻病毒、腺病毒、乳头瘤病毒、细小病毒、小核糖核酸病毒、脊髓灰质炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼吸道肠道病毒、风疹病毒、外衣病毒、粘病毒、逆转录病毒、嗜肝DNA病毒、柯萨奇病毒、委内端拉马脑脊髓炎病毒、日本脑炎病毒、黄热病毒、裂谷热病毒、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、丁肝病毒或戊肝病毒的抗原。
44.根据权利要求37-43任一项所述的组合物，其中当纳米载体包含B细胞和T细胞抗原时，B细胞抗原和T细胞抗原是不同的抗原。
45.根据权利要求37所述的组合物，其中当纳米载体包含B细胞和T细胞抗原时，B细胞抗原和T细胞抗原是相同的。
46.根据权利要求37-45任一项所述的组合物，其中T细胞抗原包埋于纳米载体内部。
47.根据权利要求37-45任一项所述的组合物，其中T细胞抗原与纳米载体结合。
48.根据权利要求47所述的组合物，其中T细胞抗原与纳米载体共价结合。
49.根据权利要求1-48任一项所述的组合物，其中纳米载体包含免疫刺激试剂。
50.根据权利要求49所述的组合物，其中免疫刺激试剂位于纳米载体表面。
51.根据权利要求49所述的组合物，其中免疫刺激试剂包埋于纳米载体内部。
52.根据权利要求49所述的组合物，其中免疫刺激试剂同时位于纳米载体表面和包埋于纳米载体内部。
53.根据权利要求52所述的组合物，其中位于纳米载体表面的免疫刺激试剂和包埋于纳米载体内部的免疫刺激试剂是不同的。
54.根据权利要求49所述的组合物，其中纳米载体包含一个以上的免疫刺激试剂。
55.根据权利要求54所述的组合物，其中一个以上的免疫刺激试剂是不同的。
56.根据权利要求49-51任一项所述的组合物，其中免疫刺激试剂与纳米载体结合。
57.根据权利要求56所述的组合物，其中免疫刺激试剂与纳米载体共价结合。
58.根据权利要求49-57任一项所述的组合物，其中免疫刺激试剂选自toll样受体(TLR)激动剂、细胞因子激动剂、CD40激动剂、Fc受体激动剂、含有CpG的核酸、补体受体激动剂或佐剂。
59.根据权利要求58所述的组合物，其中TLR激动剂是TLR-1、TLR-2、TLR-3、TLR-4、TLR-5、TLR-6、TLR-7、TLR-8、TLR-9或TLR-10激动剂。
60.根据权利要求58所述的组合物，其中Fc受体激动剂是Fc-γ受体激动剂。
61.根据权利要求58所述的组合物，其中补体受体激动剂与CD21或CD35结合。
62.根据权利要求61所述的组合物，其中补体受体激动剂诱导纳米载体的内源性补体调理。
63.根据权利要求58所述的组合物，其中细胞因子受体激动剂是细胞因子。
64.根据权利要求58所述的组合物，其中细胞因子受体激动剂是小分子、抗体、融合蛋白或适配子。
65.根据权利要求58所述的组合物，其中佐剂诱导细胞因子的生物合成。
66.根据权利要求58或65所述的组合物，其中佐剂是明矾、MF59、QS21、霍乱毒素、弗氏佐剂、鲨烯、磷酸盐佐剂或四氯十氧化物。
67.根据权利要求1-66任一项所述的组合物，其中纳米载体还包含靶半体。
68.根据权利要求67所述的组合物，其中靶半体位于纳米载体表面。
69.根据权利要求68所述的组合物，其中靶半体与纳米载体结合。
70.根据权利要求69所述的组合物，其中靶半体与纳米载体共价结合。
71.根据权利要求67-70任一项所述的组合物，其中靶半体与细胞表面表达的受体结合。
72.根据权利要求67-70任一项所述的组合物，其中靶半体与可溶性受体结合。
73.根据权利要求72所述的组合物，其中可溶性受体是补体蛋白或预先存在的抗体。
74.根据权利要求67-71任一项所述的组合物，其中靶半体用于将纳米载体输送至抗原呈递细胞、T细胞或B细胞。
75.根据权利要求74所述的组合物，其中抗原呈递细胞是巨噬细胞。
76.根据权利要求75所述的组合物，其中巨噬细胞是被膜下窦巨噬细胞。
77.根据权利要求74所述的组合物，其中抗原呈递细胞是树突状细胞。
78.根据权利要求74所述的组合物，其中抗原呈递细胞是滤泡树突状细胞。
79.根据权利要求67-78任一项所述的组合物，其中靶半体是与CD11b、CD169、甘露糖受体、DEC-205、CD11c、CD21/CD35、CX3CR1或Fc受体结合的分子。
80.根据权利要求79所述的组合物，其中靶半体是与CD169、CX3CR1或Fc受体结合的分子。
81.根据权利要求79或80所述的组合物，其中靶半体包含免疫球蛋白的Fc部分。
82.根据权利要求81所述的组合物，其中靶半体包含IgG的Fc部分。
83.根据权利要求1-66任一项所述的组合物，其中纳米载体具有正ζ电位。
84.根据权利要求1-66任一项所述的组合物，其中纳米载体在其表面包含一个或多个胺半体。
85.根据权利要求84所述的组合物，其中一个或多个胺半体是一个或多个脂肪族胺。
86.根据权利要求83-85任一项所述的组合物，其中纳米载体是乳胶颗粒。
87.根据权利要求83-85任一项所述的组合物，其中纳米载体在中性pH具有净正电荷。
88.根据权利要求1-87任一项所述的组合物，其中纳米载体由一个或多个聚合物组成。
89.根据权利要求88所述的组合物，其中一个或多个聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物。
90.根据权利要求89所述的组合物，其中可溶于水的非吸附性聚合物是PEG、PEO、聚烷撑二醇或聚亚烷基氧化物。
91.根据权利要求88所述的组合物，其中一个或多个聚合物是生物可降解聚合物。
92.根据权利要求88所述的组合物，其中一个或多个聚合物是生物可兼容聚合物，所述生物可兼容聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物与生物可降解聚合物的偶联体。
93.根据权利要求91或92所述的组合物，其中生物可降解聚合物是PLA、PGA或PLGA。
94.根据权利要求1-93任一项所述的组合物，其中纳米载体通过自组装形成。
95.根据权利要求1-94任一项所述的组合物，其中免疫应答被诱导、增强、抑制、引导或重引导。
96.根据权利要求1-95任一项所述的组合物，其中纳米载体靶向一个或多个次级淋巴组织或器官。
97.根据权利要求96所述的组合物，其中次级淋巴组织或器官是淋巴结、脾、派亚氏淋巴丛、阑尾或扁桃体。
98.根据权利要求1-97任一项所述的组合物，其中纳米载体是微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒。
99.根据权利要求98所述的组合物，其中颗粒通过自组装形成。
100.一种包含纳米载体的组合物，所述纳米载体包含：(a)聚合物与抗原的偶联体，(b)聚合物与免疫刺激试剂的偶联体，和/或(c)聚合物与靶半体的偶联体。
101.根据权利要求100所述的组合物，其中纳米载体包含(a)聚合物与抗原的偶联体和(b)聚合物与免疫刺激试剂的偶联体。
102.根据权利要求100所述的组合物，其中纳米载体包含(a)聚合物与抗原的偶联体和(c)聚合物与靶半体的偶联体。
103.根据权利要求100所述的组合物，其中纳米载体包含(b)聚合物与免疫刺激试剂的偶联体和(c)聚合物与靶半体的偶联体。
104.根据权利要求100所述的组合物，其中纳米载体包含(a)聚合物与抗原的偶联体，(b)聚合物与免疫刺激试剂的偶联体和(c)聚合物与靶半体的偶联体。
105.根据权利要求100-104任一项所述的组合物，其中偶联体是共价偶联体。
106.根据权利要求100-105任一项所述的组合物，其中纳米载体通过自组装形成微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒。
107.根据权利要求101-102和104-106任一项所述的组合物，其中抗原是B细胞抗原。
108.根据权利要求107所述的组合物，其中纳米载体还包含聚合物和T细胞抗原的偶联体。
109.根据权利要求108所述的组合物，其中偶联体是共价偶联体。
110.根据权利要求101-102和104-106任一项所述的组合物，其中抗原是T细胞抗原。
111.根据权利要求110所述的组合物，其中纳米载体还包含聚合物和B细胞抗原的偶联体。
112.根据权利要求111所述的组合物，其中偶联体是共价偶联体。
113.一种包含纳米载体的组合物，所述纳米载体包含具有以下通式X-L1-Y-L2-Z的分子，其中X是生物可降解聚合物，Y是可溶于水的非吸附性聚合物，Z是靶半体、免疫刺激试剂、免疫调节试剂或药学试剂，L1和L2是键或连接分子，其中Y或者Z可以不存在，但Y和Z不能同时不存在。
114.根据权利要求113所述的组合物，其中纳米载体载体包埋抗原、免疫刺激试剂或二者。
115.根据权利要求113或114所述的组合物，其中Z是抗原。
116.根据权利要求113-115任一项所述的组合物，其中Z是退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同种抗原、异种抗原、变应原、令人上瘾的物质或代谢性疾病酶或酶产物。
117.根据权利要求114所述的组合物，其中抗原是退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同种抗原、异种抗原、变应原、令人上瘾的物质或代谢性疾病酶或酶产物。
118.根据权利要求113、114或117任一项所述的组合物，其中Z是与细胞表面表达的受体结合的靶半体。
119.根据权利要求113、114或117任一项所述的组合物，其中Z是与可溶性受体结合的靶半体。
120.根据权利要求119所述的组合物，其中可溶性受体是补体蛋白或预先存在的抗体。
121.根据权利要求113-118任一项所述的组合物，其中靶半体用于将纳米载体输送至抗原呈递细胞、T细胞或B细胞。
122.根据权利要求121所述的组合物，其中抗原呈递细胞是巨噬细胞。
123.根据权利要求122所述的组合物，其中巨噬细胞是被膜下窦巨噬细胞。
124.根据权利要求121所述的组合物，其中抗原呈递细胞是树突状细胞。
125.根据权利要求121所述的组合物，其中抗原呈递细胞是滤泡树突状细胞。
126.根据权利要求113-118任一项所述的组合物，其中靶半体是与CD11b、CD169、甘露糖受体、DEC-205、CD11c、CD21/CD35、CX3CR1或Fc受体结合的分子。
127.根据权利要求126所述的组合物，其中靶半体是与CD169、CX3CR1或Fc受体结合的分子。
128.根据权利要求113-127任一项所述的组合物，其中Y是PEG、PEO、聚烷撑二醇或聚亚烷基氧化物。
129.根据权利要求113-128任一项所述的组合物，其中X是PLGA、PLA或PGA。
130.根据权利要求113和121-126任一项所述的组合物，其中Z不存在。
131.根据权利要求113-130任一项所述的组合物，其中纳米载体是微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒。
132.根据权利要求131所述的组合物，其中颗粒通过自组装形成。
133.一种包含纳米载体的组合物，所述纳米载体包含免疫刺激试剂。
134.根据权利要求133所述的组合物，还包含抗原和/或靶半体。
135.根据权利要求134所述的组合物，其中抗原、靶半体和免疫刺激试剂中的至少一个偶联至可溶于水的非吸附性聚合物。
136.根据权利要求134所述的组合物，其中抗原、靶半体和免疫刺激试剂中的至少一个偶联至生物可降解聚合物。
137.根据权利要求134所述的组合物，其中抗原、靶半体和免疫刺激试剂中的至少一个偶联至生物可兼容聚合物，所述生物可兼容聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物与生物可降解聚合物的偶联体。
138.根据权利要求134-137任一项所述的组合物，其中抗原是B细胞抗原。
139.根据权利要求138所述的组合物，其中B细胞抗原是T细胞非依赖性抗原。
140.根据权利要求138或139所述的组合物，其中纳米载体还包含T细胞抗原。
141.根据权利要求134-137任一项所述的组合物，其中抗原是T细胞抗原。
142.根据权利要求134-141任一项所述的组合物，其中纳米载体是微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒。
143.根据权利要求142所述的组合物，其中颗粒通过自组装形成。
144.一种包含微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒的组合物，所述微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒包含小分子、靶半体、免疫刺激试剂和T细胞抗原。
145.根据权利要求144所述的组合物，其中小分子偶联至聚合物。
146.根据权利要求145所述的组合物，其中聚合物是生物可兼容聚合物，其为可溶于水的非吸附性聚合物与生物可降解聚合物的偶联体。
147.根据权利要求144-146任一项所述的组合物，其中靶半体偶联至聚合物。
148.根据权利要求147所述的组合物，其中聚合物是生物可兼容聚合物，其为可溶于水的非吸附性聚合物与生物可降解聚合物的偶联体。
149.根据权利要求144-148任一项所述的组合物，其中免疫刺激试剂偶联至生物可降解聚合物。
150.根据权利要求146、148或149任一项所述的组合物，其中生物可降解聚合物是PLGA、PLA或PGA。
151.根据权利要求146或148所述的组合物，其中可溶于水的非吸附性聚合物是PEG、PEO、聚烷撑二醇或聚亚烷基氧化物。
152.根据权利要求144-150任一项所述的组合物，其中颗粒通过自组装形成。
153.根据权利要求144-150任一项所述的组合物，其中小分子是令人上瘾的物质、来自化学武器的小分子或有害的环境中的物质。
154.一种包含靶向特异性细胞或组织并且调节免疫应答的纳米载体的组合物，所述纳米载体在其表面包含能激活B细胞受体的密度的B细胞抗原，以及免疫刺激试剂。
155.根据权利要求154所述的组合物，其中纳米载体还包含靶半体。
156.根据权利要求155或155所述的组合物，其中纳米载体是微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒。
157.根据权利要求156所述的组合物，其中颗粒通过自组装形成。
158.根据权利要求1-157任一项所述的组合物，其中组合物是药物组合物并进一步包含药学上可接受的载体。
159.根据权利要求158所述的组合物，其中药物组合物是疫苗组合物。
160.一种药物组合物，其包含靶向抗原呈递细胞的半体和纳米载体的偶联体。
161.根据权利要求160所述的药物组合物，其中偶联体是共价偶联体。
162.根据权利要求160或161所述的药物组合物，其中靶向抗原呈递细胞的半体靶向巨噬细胞。
163.根据权利要求162所述的药物组合物，其中巨噬细胞是被膜下窦巨噬细胞。
164.根据权利要求160或161所述的药物组合物，其中靶向抗原呈递细胞的半体靶向树突状细胞。
165.根据权利要求160或161所述的药物组合物，其中靶向抗原呈递细胞的半体靶向滤泡树突状细胞。
166.根据权利要求160-165任一项所述的药物组合物，其中纳米载体是微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒。
167.根据权利要求166所述的药物组合物，其中颗粒通过自组装形成。
168.一种药物组合物，其包含免疫刺激试剂和纳米载体的偶联体。
169.根据权利要求168所述的药物组合物，其中偶联体是共价偶联体。
170.根据权利要求168或169所述的药物组合物，其中纳米载体是微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒。
171.根据权利要求170所述的药物组合物，其中颗粒通过自组装形成。
172.一种组合物，其包含具有通式X-L1-Y-L2-Z的分子，其中X是生物可降解聚合物，Y是可溶于水的非吸附性聚合物，Z是靶半体、免疫刺激试剂、免疫调节试剂或药学试剂，L1和L2是键或连接分子，其中Y或者Z可以不存在，但Y和Z不能同时不存在。
173.一种组合物，其包含具有通式T-L1-X-L2-Y-L3-Z的分子，其中T是T细胞抗原，X是生物可降解聚合物，Y是可溶于水的非吸附性聚合物，Z是B细胞抗原，其中L1、L2和L3是键或连接分子，其中T、Y和Z中任意一个或任意两个可以不存在，但T、Y和Z不能三者同时不存在。
174.根据权利要求172所述的组合物，其中Z是抗原。
175.根据权利要求172-174任一项所述的组合物，其中Z是退行性疾病抗原、传染性疾病抗原、癌症抗原、变态反应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同种抗原、异种抗原、变应原、半抗原、令人上瘾的物质或代谢性疾病酶或酶产物。
176.根据权利要求175所述的组合物，其中Z是与细胞表面表达的受体结合的靶半体。
177.根据权利要求175所述的组合物，其中Z是与可溶性受体结合的靶半体。
178.根据权利要求177所述的组合物，其中可溶性受体是补体或预先存在的抗体。
179.根据权利要求175-176任一项所述的组合物，其中靶半体用于靶向抗原呈递细胞、T细胞或B细胞。
180.根据权利要求179所述的组合物，其中抗原呈递细胞是巨噬细胞。
181.根据权利要求180所述的组合物，其中巨噬细胞是被膜下窦巨噬细胞。
182.根据权利要求179所述的组合物，其中抗原呈递细胞是树突状细胞。
183.根据权利要求179所述的组合物，其中抗原呈递细胞是滤泡树突状细胞。
184.根据权利要求175-176任一项所述的组合物，其中靶半体是与CD11b、CD169、甘露糖受体、DEC-205、CD11c、CD21/CD35、CX3CR1或Fc受体特异性结合的分子。
185.根据权利要求184所述的组合物，其中靶半体CD169、CX3CR1或Fc受体。
186.根据权利要求175-188任一项所述的组合物，其中Y是PEG、PEO、聚烷撑二醇或聚亚烷基氧化物。
187.根据权利要求175-186任一项所述的组合物，其中X是PLGA、PGA或PLA。
188.根据权利要求175和186-188任一项所述的组合物，其中Z不存在。
189.根据权利要求175和186-187任一项所述的组合物，其中Y不存在。
190.一种药物组合物，其包含免疫刺激试剂和聚合物的偶联体。
191.根据权利要求190所述的组合物，其中偶联体是共价偶联体。
192.根据权利要求190或191所述的药物组合物，其中聚合物是生物可兼容聚合物。
193.根据权利要求192所述的药物组合物，其中生物可兼容聚合物是生物可降解聚合物或可溶于水的非吸附性聚合物。
194.根据权利要求193所述的药物组合物，其中生物可降解聚合物是合成的。
195.根据权利要求190-194任一项所述的药物组合物，其中药物组合物包含纳米载体，其中偶联体是纳米载体的成分。
196.根据权利要求195所述的药物组合物，其中纳米载体是微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒。
197.根据权利要求190-196任一项所述的药物组合物，还包含抗原。
198.根据权利要求190-196任一项所述的药物组合物，其中药物组合物不包含抗原。
199.根据权利要求190-198任一项所述的药物组合物，还包含靶半体。
200.一种疫苗组合物，其包含免疫刺激试剂和聚合物的偶联体。
201.根据权利要求200所述的疫苗组合物，其中偶联体是共价偶联体。
202.根据权利要求200或201所述的疫苗组合物，其中聚合物是可溶于水的非吸附性聚合物。
203.根据权利要求202所述的疫苗组合物，其中聚合物是合成的。
204.根据权利要求202或203所述的疫苗组合物，其中可溶于水的非吸附性聚合物是聚乙二醇。
205.根据权利要求200-204任一项所述的疫苗组合物，其中疫苗组合物包含纳米载体，其中偶联体是纳米载体的成分。
206.根据权利要求205所述的疫苗组合物，其中纳米载体是微米颗粒、纳米颗粒或皮可米颗粒。
207.根据权利要求200-206任一项所述的疫苗组合物，还包含抗原。
208.根据权利要求200-206任一项所述的疫苗组合物，其中疫苗组合物不包含抗原。
209.根据权利要求200-208任一项所述的疫苗组合物，还包含靶试剂。
210.一种方法，包括向个体施用有效量的根据权利要求1-209任一项所述的组合物以调节免疫应答。
211.根据权利要求210所述的方法，其中组合物为有效诱导或增强免疫应答的量。
212.根据权利要求211所述的方法，其中个体患有或者易于患上癌症、传染性疾病、非自身免疫代谢或退行性疾病或上瘾症。
213.根据权利要求212所述的方法，其中传染性疾病是慢性病毒感染。
214.根据权利要求213所述的方法，其中慢性病毒感染是HIV、HPV、HBV或HCV感染。
215.根据权利要求212所述的方法，其中传染性疾病是细菌感染或由细菌感染引起。
216.根据权利要求212所述的方法，其中个体患有或易于患上假单胞菌感染、肺炎球菌感染、肺结核、疟疾、利什曼病、幽门螺旋杆菌、葡萄状球菌感染或沙门氏菌感染。
217.根据权利要求212所述的方法，其中传染性疾病是真菌感染或由真菌感染引起。
218.根据权利要求212所述的方法，其中传染性疾病是寄生虫感染或由寄生虫感染引起。
219.根据权利要求212所述的方法，其中传染性疾病是原生动物感染或由原生动物感染引起。
220.根据权利要求212所述的方法，其中个体患有或易于患上流感。
221.根据权利要求210所述的方法，其中组合物以有效抑制免疫应答的量施用。
222.根据权利要求210所述的方法，其中组合物以有效调节免疫应答的量施用。
223.根据权利要求221或222所述的方法，其中个体患有自身免疫疾病、过敏症或哮喘。
224.根据权利要求223所述的方法，其中自身免疫疾病是狼疮、多发性硬化、类风湿性关节炎、I型糖尿病、炎症性肠病、甲状腺炎或腹腔疾病。
225.一种纳米载体，其包含：
能够刺激T细胞和B细胞中免疫应答的免疫调节试剂；
用于将纳米载体输送至抗原呈递细胞、T细胞或B细胞的靶半体；和
赋形剂。
226.根据权利要求225所述的纳米载体，其中巨噬细胞是被膜下窦巨噬细胞。
227.根据权利要求225所述的纳米载体，其中抗原呈递细胞是树突状细胞。
228.根据权利要求225所述的纳米载体，其中抗原呈递细胞是滤泡树突状细胞。
229.一种纳米载体，其包含：
能够刺激T细胞和B细胞中免疫应答的免疫调节试剂；
用于将纳米载体输送至被膜下窦巨噬细胞的靶半体；和
赋形剂。
230.一种纳米载体，其包含：
能够刺激T细胞和B细胞中免疫应答的免疫调节试剂；
用于将纳米载体输送至树突状细胞的靶半体；和
赋形剂。
231.一种纳米载体，其包含：
能够刺激T细胞和B细胞中免疫应答的免疫调节试剂；
用于将纳米载体输送至滤泡树突状细胞的靶半体；和
赋形剂。
231、一种纳米载体，其包含：
能够刺激T细胞和B细胞中免疫应答的免疫调节试剂；
用于将纳米载体输送至滤泡树突状细胞的靶半体；和
赋形剂。
232.一种纳米载体，其包含：
能够刺激T细胞和B细胞中免疫应答的免疫调节试剂；
靶半体，其中靶半体特异性结合至CD11b；和
赋形剂。
233.一种纳米载体，其包含：
能够刺激T细胞和B细胞中免疫应答的免疫调节试剂；
靶半体，其中靶半体特异性结合至CD169；和
赋形剂。
234.一种纳米载体，其包含：
能够刺激T细胞和B细胞中免疫应答的免疫调节试剂；
靶半体，其中靶半体特异性结合至甘露糖受体；和
赋形剂。
235.一种纳米载体，其包含：
能够刺激T细胞和B细胞中免疫应答的免疫调节试剂；
靶半体，其中靶半体特异性结合至DEC-205；和
赋形剂。
236.一种纳米载体，其包含：
能够刺激T细胞和B细胞中免疫应答的免疫调节试剂；
靶半体，其中靶半体特异性结合至CD11c；和
赋形剂。
237.一种纳米载体，其包含：
能够刺激T细胞和B细胞中免疫应答的免疫调节试剂；
靶半体，其中靶半体特异性结合至CD21/CD35；和
赋形剂。
238.一种纳米载体，其包含：
能够刺激区域淋巴结中的T细胞和B细胞中的免疫应答的免疫调节试剂；
用于将纳米载体输送至抗原呈递细胞、T细胞或B细胞的靶半体；和
赋形剂。
239.一种纳米载体，其包含：
第一免疫调节试剂，其中第一免疫调节试剂位于纳米载体表面并能够刺激B细胞或抗原呈递细胞；
第二免疫调节试剂，其中第二免疫调节试剂位于纳米载体表面或者包埋于纳米载体内部并且能够被抗原呈递细胞处理并呈递给T细胞；和
赋形剂。
240.根据权利要求239所述的纳米载体，其中通过将接受免疫的个体的抗体效价与未接受免疫的个体的抗体效价进行比较而确定B细胞中免疫应答的刺激。
241.根据权利要求240所述的纳米载体，其中如果接受免疫的个体的抗体效价经测定比未接受免疫的个体高约10倍，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
242.根据权利要求240所述的纳米载体，其中如果接受免疫的个体的抗体效价经测定比未接受免疫的个体高约100倍，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
243.根据权利要求240所述的纳米载体，其中如果接受免疫的个体的抗体效价经测定比未接受免疫的个体高约1000倍，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
244.根据权利要求239所述的纳米载体，其中通过测定抗体亲和性确定B细胞中免疫应答的刺激。
245.根据权利要求244所述的纳米载体，其中通过测定抗体的平衡解离常数确定抗体亲和性。
246.根据权利要求245所述的纳米载体，其中如果抗体具有10-7M以下的平衡解离常数，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
247.根据权利要求245所述的纳米载体，其中如果抗体具有10-8M以下的平衡解离常数，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
248.根据权利要求245所述的纳米载体，其中如果抗体具有10-9M以下的平衡解离常数，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
249.根据权利要求245所述的纳米载体，其中如果抗体具有10-10M以下的平衡解离常数，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
250.根据权利要求245所述的纳米载体，其中如果抗体具有10-11M以下的平衡解离常数，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
251.根据权利要求245所述的纳米载体，其中如果抗体具有10-12M以下的平衡解离常数，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
252.根据权利要求239所述的纳米载体，其中如果B细胞中发生类别转换重组，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
253.根据权利要求252所述的纳米载体，其中B细胞中的类别转换重组引起B细胞产生的抗体同种型由IgM转换为IgG。
254.根据权利要求239所述的纳米载体，其中通过测定抗原特异性抗体的亲和成熟确定B细胞中免疫应答的刺激。
255.根据权利要求239所述的纳米载体，其中如果形成了记忆B细胞或能够长时间地产生大量的高亲和性抗体的长生血浆细胞，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
256.根据权利要求239所述的纳米载体，其中如果发生有力的生发中心反应，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
257.根据权利要求239所述的纳米载体，其中通过进行组织学分析确定已经发生了有力的生发中心反应。
258.根据权利要求239所述的纳米载体，其中通过进行淋巴组织的免疫荧光确定已经发生了有力的生发中心反应。
259.根据权利要求239所述的纳米载体，其中通过鉴定抗体的同种型确定B细胞中免疫应答的刺激。
260.根据权利要求259所述的纳米载体，其中如果B细胞被鉴定为产生IgG同种型抗体，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
261.根据权利要求239所述的纳米载体，其中通过分析中和检验中抗体的功能确定B细胞中免疫应答的刺激。
262.根据权利要求261所述的纳米载体，其中如果微生物感染被约1∶10的稀释度中和，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
263.根据权利要求261所述的纳米载体，其中如果微生物感染被约1∶100的稀释度中和，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
264.根据权利要求261所述的纳米载体，其中如果微生物感染被约1∶1000的稀释度中和，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
265.根据权利要求261所述的纳米载体，其中如果微生物感染被约1∶5000的稀释度中和，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
266.根据权利要求261所述的纳米载体，其中如果微生物感染被约1∶10,000的稀释度中和，则称B细胞中的免疫应答被刺激。
267.根据权利要求239所述的纳米载体，其中通过测定抗原诱导的由T细胞产生的细胞因子确定T细胞中免疫应答的刺激。
268.根据权利要求267所述的纳米载体，其中细胞因子是IFNγ、IL-4、IL-2或TNFα。
269.根据权利要求267所述的纳米载体，其中通过细胞内细胞因子染色然后进行流式细胞术而测定抗原诱导的由T细胞产生的细胞因子。
270.根据权利要求267所述的纳米载体，其中通过表面捕获细胞因子染色然后进行流式细胞术而测定抗原诱导的由T细胞产生的细胞因子。
271.根据权利要求267所述的纳米载体，其中通过ELISA确定培养物上清液中细胞因子的浓度而测定抗原诱导的由T细胞产生的细胞因子。
272.根据权利要求269所述的纳米载体，其中如果至少1％的抗原特异性T细胞产生细胞因子，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
273.根据权利要求269所述的纳米载体，其中如果至少25％的抗原特异性T细胞产生细胞因子，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
274.根据权利要求269所述的纳米载体，其中如果至少50％的抗原特异性T细胞产生细胞因子，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
275.根据权利要求269所述的纳米载体，其中如果至少90％的抗原特异性T细胞产生细胞因子，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
276.根据权利要求269所述的纳米载体，其中如果基本上100％的抗原特异性T细胞产生细胞因子，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
277.根据权利要求267所述的纳米载体，其中通过ELISPOT检验测定抗原诱导的由T细胞产生的细胞因子。
278.根据权利要求277所述的纳米载体，其中如果经免疫的个体包含比原态对照多约10倍的产生细胞因子的细胞，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
279.根据权利要求277所述的纳米载体，其中如果经免疫的个体包含比原态对照多约100倍的产生细胞因子的细胞，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
280.根据权利要求277所述的纳米载体，其中如果经免疫的个体包含比原态对照多约1000倍的产生细胞因子的细胞，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
281.根据权利要求277所述的纳米载体，其中如果经免疫的个体包含比原态对照多约10,000倍的产生细胞因子的细胞，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
282.根据权利要求277所述的纳米载体，其中如果经免疫的个体包含比原态对照多约100,000倍的产生细胞因子的细胞，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
283.根据权利要求267所述的纳米载体，其中通过确定抗原诱导的T细胞增殖而测定抗原诱导的由T细胞产生的细胞因子。
284.根据权利要求283所述的纳米载体，其中通过将测试样品中H3-胸苷的摄入与原态对照中H3-胸苷的摄入进行比较而测定抗原诱导的T细胞增殖。
285.根据权利要求284所述的纳米载体，其中如果测试样品中H3-胸苷的摄入比原态对照中高约10倍，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
286.根据权利要求284所述的纳米载体，其中如果测试样品中H3-胸苷的摄入比原态对照中高约50倍，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
287.根据权利要求284所述的纳米载体，其中如果测试样品中H3-胸苷的摄入比原态对照中高约100倍，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
288.根据权利要求284所述的纳米载体，其中如果测试样品中H3-胸苷的摄入比原态对照中高约1000倍，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
289.根据权利要求284所述的纳米载体，其中如果测试样品中H3-胸苷的摄入比原态对照中高约10倍，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
290.根据权利要求283所述的纳米载体，其中通过进行羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)稀释检验而测定抗原诱导的T细胞增殖。
291.根据权利要求290所述的纳米载体，其中如果CFSE稀释为约10％，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
292.根据权利要求290所述的纳米载体，其中如果CFSE稀释为约25％，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
293.根据权利要求290所述的纳米载体，其中如果CFSE稀释为约50％，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
294.根据权利要求290所述的纳米载体，其中如果CFSE稀释为约75％，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
295.根据权利要求291所述的纳米载体，其中如果CFSE稀释为约100％，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
296.根据权利要求267所述的纳米载体，其中通过测定T细胞激活的细胞标记物而确定T细胞中的免疫应答的刺激。
297.根据权利要求296所述的纳米载体，其中如果相对于原态对照细胞而言T细胞表达升高水平的CD11aCD27、CD25、CD40L、CD44、CD45RO或CD69，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
298.根据权利要求296所述的纳米载体，其中如果相对于原态对照细胞而言T细胞表达更低水平的L-选择素(CD62L)、CD45RA或CCR7，则称T细胞中的免疫应答被刺激。
299.根据权利要求267所述的纳米载体，其中通过检验效应CD8+T细胞抵抗抗原冲击的靶细胞的细胞毒性而确定T细胞中的免疫应答的刺激。
300.根据权利要求299所述的纳米载体，其中通过使用51铬(51Cr)释放检验而进行效应CD8+T细胞抵抗抗原冲击的靶细胞的细胞毒性检验。
301.根据权利要求225所述的纳米载体，其中免疫调节试剂与纳米载体共价结合。
302.根据权利要求225所述的纳米载体，其中免疫调节试剂与纳米载体非共价结合。
303.根据权利要求302所述的纳米载体，其中非共价结合由电荷相互作用、亲和相互作用、金属配合、物理吸附、主客体相互作用、疏水相互作用、TT堆积相互作用、氢键相互作用、范德华力相互作用、磁性相互作用、静电相互作用、或偶极-偶极相互作用所介导。
304.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含第二个免疫调节试剂。
305.根据权利要求225所述的纳米载体，其中第二个免疫调节试剂能够刺激T细胞中的免疫应答。
306.根据权利要求225所述的纳米载体，其中第二个免疫调节试剂能够刺激B细胞中的免疫应答。
307.根据权利要求225所述的纳米载体，其中第二个免疫调节试剂能够刺激抗原呈递细胞中的免疫应答。
308.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含靶半体。
309.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含多个靶半体。
310.根据权利要求309所述的纳米载体，其中多个靶半体中所有的单独的靶半体彼此相同。
311.根据权利要求309所述的纳米载体，其中多个靶半体中所有的单独的靶半体彼此不相同。
312.根据权利要求308所述的纳米载体，其中靶半体选自抗体、抗体片段、蛋白、肽、糖蛋白、适配子、寡核苷酸、碳水化合物、脂、葡胺聚糖、affibody、adnectin、spiegelmer、avimer、nanobody和小分子。
313.根据权利要求308所述的纳米载体，其中靶半体靶向抗原呈递细胞。
314.根据权利要求308所述的纳米载体，其中靶半体靶向选自的树突状细胞(DC)、被膜下窦巨噬细胞(SCS-Mph)、B细胞或滤泡树突状细胞(FDC)的抗原呈递细胞。
315.根据权利要求308所述的纳米载体，其中靶半体靶向树突状细胞。
316.根据权利要求308所述的纳米载体，其中靶半体靶向DEC-205(CD205)。
317.根据权利要求308所述的纳米载体，其中靶半体靶向CD169。
318.根据权利要求308所述的纳米载体，其中靶半体靶向CD11b。
319.根据权利要求308所述的纳米载体，其中靶半体靶向甘露糖受体。
320.根据权利要求308所述的纳米载体，其中靶半体靶向CD21/CD35(CR2/CR1)。
321.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含免疫刺激试剂。
322.根据权利要求321所述的纳米载体，其中免疫刺激试剂选自toll样受体(TLR)激动剂、细胞因子受体激动剂、CD40激动剂、Fc受体激动剂或补体受体激动剂。
323.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含TLR-7激动剂。
324.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含CpG。
325.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含TLR-4激动剂。
326.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含细菌脂多糖(LPS)。
327.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含CD40激动剂。
328.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含TLR-2激动剂。
329.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含Fc-γ受体激动剂。
330.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含补体受体激动剂。
331.根据权利要求324所述的纳米载体，其中补体受体激动剂与CD21或CD35结合。
332.根据权利要求225所述的纳米载体，还包含细胞因子。
333.根据权利要求225所述的纳米载体，其中纳米载体包含脂膜。
334.根据权利要求225所述的纳米载体，其中纳米载体包含聚合物基质。
335.根据权利要求225所述的纳米载体，其中纳米载体包含金属颗粒。
336.根据权利要求225所述的纳米载体，其中纳米载体是包含两性物质的脂质体。
337.根据权利要求336所述的纳米载体，其中两性物质位于脂质体的内表面内。
338.根据权利要求336所述的纳米载体，其中两性物质选自磷脂酰胆碱、脂A、胆固醇、长醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神经酰胺、脑苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、糖基神经酰胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、心磷脂、磷脂酸或溶血磷脂。
339.根据权利要求225所述的纳米载体，其中纳米载体是基于脂质体-聚合物的纳米载体。
340.根据权利要求225所述的纳米载体，其中纳米载体是基于脂单层的纳米载体。
341.根据权利要求225所述的纳米载体，其中第二个免疫调节试剂位于反胶团内。
342.根据权利要求225所述的纳米载体，其中赋形剂是选自聚乙烯，聚碳酸酯、聚酐、多羟基酸、聚丙基丁烯二酸酯、聚己内酯、聚酰胺、聚缩醛，聚醚，聚酯、聚(原酸酯)，聚腈基丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚氨酯、聚磷腈、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚脲、聚苯乙烯、聚胺、其衍生物、其组合物、或其共聚物的聚合物。
343.根据权利要求225所述的纳米载体，其中赋形剂是选自下列的聚合物：聚乙二醇(PEG)；聚(乳酸-羟基乙酸)；聚(乳酸-羟基乙酸)和聚乙二醇的共聚物；聚(丙交酯-乙交酯)；聚(丙交酯-乙交酯)和PEG的共聚物；聚羟基乙酸；聚羟基乙酸和PEG的共聚物；聚-L-乳酸；聚-L-乳酸和PEG的共聚物；聚-D-乳酸；聚-D-乳酸与PEG的共聚物；聚-D，L-乳酸；聚-D，L-乳酸与PEG的共聚物；聚-L-丙交酯；聚-L-丙交酯与PEG的共聚物；聚-D-丙交酯；聚-D-丙交酯与PEG的共聚物；聚-D，L-丙交酯；聚-D，L-丙交酯与PEG的共聚物；聚(原酸酯)；聚(原酸酯)与PEG的共聚物；聚(己内酯)；聚(己内酯)与PEG的共聚物；聚赖氨酸；聚赖氨酸与PEG的共聚物；聚(乙烯亚胺)；聚(乙烯亚胺)与PEG的共聚物；聚羟基酸；聚酐；聚(L-丙交酯-L-赖氨酸)；聚(丝氨酸酯)；聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)；聚[α-(4-氨基丁基)-L-羟基乙酸]；其衍生物；其组合；或其共聚物。
344.根据权利要求225所述的纳米载体，其中赋形剂是聚乙二醇和聚(丙交酯-乙交酯)共聚物的共聚物。
345.根据权利要求225所述的纳米载体，其中赋形剂是聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物(PLGA)。
346.根据权利要求225所述的纳米载体，其中赋形剂包含聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物(PLGA)、脂和聚乙二醇。
347.根据权利要求225所述的纳米载体，其中赋形剂包含脂。
348.根据权利要求225所述的纳米载体，其中脂选自磷脂酰胆碱、脂A、胆固醇、长醇、鞘氨醇、鞘磷脂、神经酰胺、糖基神经酰胺、脑苷脂、硫脂、植物鞘氨醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、心磷脂、磷脂酸或溶血磷脂。
349.根据权利要求225所述的纳米载体，其中纳米载体具有大约10nm至大约200nm范围的直径。
350.根据权利要求225所述的纳米载体，其中纳米载体具有大约50nm至大约200nm范围的直径。
351.根据权利要求225所述的纳米载体，其中纳米载体具有大约10nm至大约150nm范围的直径。
352.根据权利要求225所述的纳米载体，其中纳米载体具有大约50nm至大约150nm范围的直径。
353.根据权利要求225所述的纳米载体，其中第一个免疫调节试剂是B细胞抗原。
354.根据权利要求225所述的纳米载体，其中第一个免疫调节试剂是源自病原体的蛋白。
355.根据权利要求225所述的纳米载体，其中第一个免疫调节试剂是肽的集合。
356.根据权利要求225所述的纳米载体，其中第二个免疫调节试剂是T细胞抗原。
357.根据权利要求225所述的纳米载体，其中第二个免疫调节试剂是源自病原体的蛋白。
358.根据权利要求225所述的纳米载体，其中第二个免疫调节试剂是肽的集合。
359.根据权利要求225所述的纳米载体，其中第一个免疫调节试剂和第二个免疫调节试剂彼此相同。
360.根据权利要求225所述的纳米载体，其中第一个免疫调节试剂和第二个免疫调节试剂彼此不相同。
361.一种药物组合物，其包含治疗上有效量的根据权利要求225所述的纳米载体和药学上可接受的赋形剂。
362.一种药物组合物，其包含治疗上有效量的根据权利要求225所述的纳米载体和药学上可接受的佐剂。
363.根据权利要求362所述的药物组合物，其中佐剂是明矾、MF59(Novartis)、QS21、霍乱毒素、弗氏佐剂、鲨烯、磷酸盐佐剂或四氯十氧化物。
364.一种制备根据权利要求225所述的纳米载体的方法，该方法包括以下步骤：
提供：
免疫调节试剂；
聚合物；
脂；和
将免疫调节试剂、靶半体、聚合物和脂混合；和
允许纳米载体发生自组装。
365.一种制备根据权利要求225所述的纳米载体的方法，该方法包括以下步骤：
提供：
免疫调节试剂；
颗粒；
脂；和
将免疫调节试剂、靶半体、颗粒和脂混合；和
允许纳米载体发生自组装。
366.根据权利要求364或365所述的方法，还包括提供靶半体的步骤。
367.一种制备根据权利要求225所述的纳米载体的方法，该方法包括以下步骤：
提供第一混合物，其包含：
疏水性免疫调节试剂；和
脂；和
提供第二混合物，其包含：
亲水性免疫调节试剂；和
水溶液；和
将第一混合物和第二混合物组合，其中第一混合物和第二混合物的组合产生通过自组装形成的纳米载体。
368.一种免疫接种个体的方法，该方法包括以下步骤：向个体施用治疗上有效量的根据权利要求225所述的纳米载体。
369.一种纳米载体，其包含：
包含免疫调节试剂的外部部分，其中免疫调节试剂能够刺激B细胞和T细胞；
内部部分；和
赋形剂。
370.根据权利要求369所述的纳米载体，其中内部部分包含免疫调节试剂，其中内部部分的免疫调节试剂能够被抗原呈递细胞处理并呈递至T细胞。
371.一种纳米载体，其包含：
包含免疫调节试剂的外部部分，其中免疫调节试剂能够刺激B细胞和抗原呈递细胞；
内部部分；和
赋形剂。
372.根据权利要求371所述的纳米载体，其中免疫调节试剂能够被抗原呈递细胞处理并呈递至T细胞。
373.根据权利要求371所述的纳米载体，其中外部部分包含第二个免疫调节试剂，其中外部部分的第二个免疫调节试剂能够被抗原呈递细胞处理并呈递至T细胞。
374.根据权利要求371所述的纳米载体，其中内部部分包含免疫调节试剂，其中内部部分的免疫调节试剂能够被抗原呈递细胞处理并呈递至T细胞。
375.根据权利要求369所述的纳米载体，其中外部部分是脂。
376.根据权利要求375所述的纳米载体，其中外部脂部分包含脂双层。
377.根据权利要求375所述的纳米载体，其中外部脂部分包含脂单层。
378.根据权利要求375所述的纳米载体，其中免疫调节试剂与脂外部分的外表面结合。
379.根据权利要求375所述的纳米载体，其中免疫调节试剂与脂外部分的内表面结合。
380.根据权利要求375所述的纳米载体，其中免疫调节试剂嵌于脂外部分内部。
381.根据权利要求376所述的纳米载体，其中免疫调节试剂嵌于脂双层的腔内。
382.根据权利要求375所述的纳米载体，其中脂外部分的内表面与两性物质结合。
383.根据权利要求369所述的纳米载体，其中内部分包含聚合物基质。
384.根据权利要求383所述的纳米载体，其中聚合物基质包含交联的聚合物网。
385.根据权利要求383所述的纳米载体，其中第二个免疫调节试剂分布于聚合物基质中。
386.根据权利要求383所述的纳米载体，其中至少一个免疫调节试剂包埋于反胶团内，并且其中反胶团包含在内聚合物部分内。
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