CN1042162A

CN1042162A - 合成含有氨基酸和/或肽的接枝共聚物

Info

Publication number: CN1042162A
Application number: CN89107587A
Authority: CN
Inventors: 克里斯汀·V·本尼迪克特; 尼希夫·查特韦迪
Original assignee: Bio Polymers Inc
Current assignee: Bio Polymers Inc
Priority date: 1988-08-22
Filing date: 1989-08-21
Publication date: 1990-05-16
Also published as: AU618834B2; FI893854A; US4908404A; DK410889A; EP0359996A2; DK410889D0; EP0359996A3; AU4001489A; NO893350L; EP0359996B1; DE68914559D1; NO175006B; JPH02191629A; NO893350D0; ATE104318T1; DE68914559T2; FI893854A0; NO175006C

Abstract

一种分子量从大约30,000至大约500,000的水溶性阳离子含肽接枝共聚物，它包括(a)一个聚合物主链和(b)一个与聚合物主链至少大约5％至大约100％的伯或仲胺功能团进行反应的氨基酸或肽接枝物。本发明的含肽接枝共聚物可以在(a)分子量，阳离子度，接枝到聚合物主链上的氨基酸或肽单元的取代百分比及(b)含肽接枝共聚物自身的化学和物理结构中变化，由此能够专门制造出本发明的聚合物可用于特殊目的的最终应用。

Description

本发明涉及一类新的含有氨基酸和/或肽的接枝共聚物，并具有强的粘接作用，它们广泛地适用于各种生物医学。这些接枝共聚物适合于代谢作用，在玻璃试管内或在体内有生长和活化组织和/或细胞的作用。

聚合材料已广泛用于移植物或其他生物医学上的应用。这是由于它们与天然细胞组织成份如胶原蛋白极其相似。该成份可与其它物质直接结合。对数十种肽的研究，制出了多种有用的生物医学多肽。然而仍有大量的聚合物尚未加以评价和使用，这些聚合物由于其高度柔软的骨架和许多有功能的侧链而具有引人注目的性能，这包括难熔性、机械强度和粘接能力。

近年来，已萃取、提纯出胶原蛋白、昆布氨酸、血纤维素蛋白和纤维结合素并作为细胞组织和细胞粘接促进剂在市场上出售，合成的聚-D-赖氨酸和聚-L-赖氨酸也是为此目的而进行销售的。但这些还存在着明显不足之处，即限制了这类聚合物的用途，如：（a）它们仅能与有限的几种类型的基体起作用或它们仅对一些特殊类型的细胞有效;和（b）人血中的血纤维素蛋白和纤维结合素对健康有潜在的危害。

最近，Waite和Tanzer在“科学”Vol.212，1038-1040页（1981）上确定了某些天然的极强粘接剂，生物粘接剂多酚朊，它是由生活在水下并定期克服击岸波力和潮汐力的海生贻贝所分泌的。自然界中存在的生物粘接剂多酚朊是由贻贝的外分泌酚腺产生并存贮的，并由贻贝的脚在形成新的令人生厌的粘接剂的形成过程中沉积在海岸表面上。天然的生物粘接剂多酚朊可按照“生物化学杂志”，Vol.258，2911-15页（1983）或US-4，496，397所述的方法进行萃取和提纯。

从贻贝中提取天然生物粘接剂多酚朊的应用受到其能得到的量所限制。现在只能满足少量研究和某些医疗上的应用。

形成生物粘接剂多酚朊在重复单元的同感十肽菌素可按照US-4，585，585所述的方法进行聚合来制取。由人工合成得到的生物粘接剂多酚朊具有粘接剂特性，但受到一些限制，即所得分子量仅约10，000至20，000，因而限制了其粘接强度，另外，由于难于控制的副反应以及很难有效地解开其保护的氨基酸，十肽菌素的聚合反应是很复杂的，因此这种合成材料在许多需要较强粘接强度的方面就不能使用。

除了聚-D-赖氨酸和聚-L-赖氨酸以外，多肽粘接剂必须从生物源中提取。通常合成聚合物最好尽可能避免引入生物的衍生物，尽管其量很小，但却会危害和污染。

人们发现以合理的费用来合成而制得的高分子量物质，聚-D-赖氨酸和聚-L-赖氨酸，但对细胞组织的粘接不很有效。同样地生物粘接剂多酚朊的十肽菌素低聚物也不具有令人满意的粘接性能，而采用传统程序聚合反应将十肽菌素进行聚合的几次试验也不能形成足够高的聚合度，致使所生产的十肽菌素聚合物的粘接性能无法与从贻贝中提取的天然生物粘接剂多酚朊相比。

令人惊奇的是现在已经发现十肽菌素低聚物的立体化学对生物粘接剂多酚朊的粘接特性并非是必需的，还出人预料地发现一种聚合物仅需含有一定数量的3，4-二羟苯丙氨酸（Dopa）不必含有完整的十肽菌素链区就具有良好的粘接性能。现在更进一步发现聚合物的分子量具有关键性。这是由于主链聚合物和最终的接枝共聚物具有阳离子性能。

因此本发明的第一目的是提供一种具有强粘接作用的含有氨基酸和/或肽的接枝共聚物。

本发明进一步的目的是提供一种可变通的方法以合成常规设定的含有氨基酸和/或肽的接枝共聚物，适用于特定的最终用途和/或表面。

本发明更进一步的目的是重复合成一种具有特殊分子量、二羟苯丙氨酸（Dopa）含量和粘接性的接枝共聚物。

在实现本发明这些以及其他目的的同时，本发明提供水溶性的含有阳离子氨基酸和/或肽的接枝共聚物，具有分子量约从30，000至500，000，包括有：

（a）一种聚合物主链，它含有或通过改性可给出自由的伯或仲胺功能团以便与氨基酸或肽接枝反应，该主链分子量约从10，000至250，000;和

（b）与聚合物主链上至少约5%至100%的伯或仲胺功能团进行接枝反应的氨基酸或肽，其中所说的氨基酸或肽的接枝物，包括至少一个3，4-二羟苯丙氨酸（Dopa）或其可经羟基化成为Dopa形式的前体。

根据本发明含有氨基酸和/或肽的接枝共聚物，其形式可以变化，从而控制（a）分子量、阳离子度、接枝到聚合物主链上的氨基酸或肽单元的取代百分比，（b）含有氨基酸和/或肽的接枝共聚物本身的化学和物理结构，故此本发明的聚合物可制成适合于特殊的最终用途。

为了更全面地了解本发明，请参阅本发明的附图及下面所述的例子。

图1是用于合成含肽接枝共聚物PAA-SA-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-OH，所采用程序的示意图，在例1中将加以详述。

图2是用于合成含肽接枝共聚物H-Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-PLL所采用程序的示意图，在例2中将加以详述。当然，应当理解本发明并不限于这里所述的个别例子。

接枝共聚物是由一种聚合物或共聚物作为主链，在其上可接上一个或多个支链，接枝共聚物一般所具有的性质与由相同单体单元在直链上无规则分布而形成的常规共聚物的性质，可观察其不同之处，常规共聚物的性质一般介于二种均聚物性质之间，而接枝共聚物可具有每种组分的一些性质。

“肽”这个词在本发明中是广义的解释。该词包含一个或多个氨基酸以及天然和合成的肽。在任何情况下，肽都是或包括至少一个Dopa基团或一个能迅速羟基化而成为Dopa形式的前体。因为已发现此基团对粘接作用是必要的。

本发明的含肽接枝共聚物的聚合物主链最好是水溶性的，因而由其制得的接枝共聚物也将是水溶性的。一些聚合物虽然不是水溶性的，但与某些特定功能团反应后能具有水溶性，这样的聚合物也包括在本发明的范围内。接枝共聚物在水中的溶介度是以组织、细胞和其它生物学活性部分在水溶液中的溶介为基准的，当然，是不能使用有机溶剂。

聚合物主链也必须是阳离子的或能表现为阳离子的，以便与负电荷的生物学表面产生强烈的静电相互作用。一般说来，对含有必需的自由伯和仲胺基团的聚合物主链的改性会使聚合物主链表现为既有水溶性和阳离子化。含有自由伯或仲胺基团的接枝共聚物主链应呈现的PK值至少约为8，最好约从8.5至约10。

此外，聚合物主链必须含有足够的伯或仲自由胺功能团以便与肽接枝物能进行反应成为含肽的接枝共聚物，从而表现出所期望的生物粘接性质。还有对于不包含有所说的胺基团，但可通过改性而含有所说基团的聚合物主链也包括在本发明的范围内。在最佳的实施例中，聚合物主链是由每个含有或经改性而含有一个自由伯或仲胺功能团的单体重复单元所组成的。换句话说，主链可以是一个不含有一个自由胺基的单体单元所组成的共聚物。然而在所有的情况下，对于含有或经改性而含有自由伯或仲胺基的单体单元来说，所需要的自由胺基数量必须至少为约从1，000，000至25，000，000摩尔/克聚合物，以便与肽接枝物进行反应。

分子量是这些粘接剂的一个关键特性。这里所用的一切分子量都是指数均分子量。含肽的接枝共聚物必须有足够高的分子量，以便提供足够数量的分子间的键并在基质和粘接剂之间进行连接，将基质粘接到粘接剂上。如分子量在30，000以下，含肽的接枝共聚物因未获得足够的总分子量而不能形成粘接剂。如果分子量在约500，000以上，含肽的接枝共聚物因太粘以致不能从溶液中过滤或沉淀出来，因而难于将其用于基质上。聚合物主链的分子量应约从10，000至约250，000，最好约从30，000至约150，000。

可从市场购买的适用主链聚合物包括聚赖氨酸、聚烯丙胺、聚氮丙啶、脱乙酰壳多糖、聚乙烯胺、硫酸软骨素、聚右旋糖酐、透明质酸、聚丙烯酸、聚丙烯腈以及像聚（Lys、Tyr）、聚（Lys、Ser）等具有所需分子量的共聚物。

为了在生物医学上的应用，要求聚合物主链是由含有足够的反应部位以便粘接含肽接枝物的单体所组成，合适的单体包括氨基酸、碳水化合物、肽、类脂、糖脂、丙烯酸、烯丙胺等，以及这些物质的各种混合物。

另外，聚合物主链对于本领域的技术人员可用已知的聚合方法进行合成。聚合物主链必须含有足够的阳离子单体成份或能表现出阳离子性而能形成所需阳离子度的单体成份;所生产的聚合物其PK值最好约为8。合适的水溶性阳离子单体包括：赖氨酸、乌氨酸、氨基糖、烯丙酸、乙烯胺等等。聚合物也必须是水溶性的或能表现为水溶性的，因此选择任何非活性共聚用单体必须能使生成的聚合物是水溶性的。合适的非活性共聚用单体包括中性的或酸性的氨基酸，糖和羟酸等。

此外，需要这样的主链/肽混合物，即所粘合的肽移植的活度应尽可能保留多一些，根据预定的用途，混合物应是水溶性的且容易过滤消毒。

肽接枝物与主链聚合物的反应在每种情况下都应准许在肽接枝物的反应基团和主链聚合物的反应基团之间形成共价键。在某些情况下，自由的肽接枝物和那些已定位之间发生反应形成双的或三重的肽接枝物。

肽接枝物必须至少含有一个3，4-二羟苯丙氨酸（Dopa）氨基酸或用共同未决申请（申请号：856594，申请日为86年5月25日）所揭示的方法经羟基化能形成Dopa形式的前体。经羟基化可形成Dopa形式的例子包括酪氨酸和苯丙氨酸。Dopa基团的存在提供了很强的氢结合，当其用于水环境中时，可很好地与水竞争，将其从表面进行取代。Dopa基团也提供了金属螯合，在出现粘接的固化过程中形成迈克尔型亲核缩合产物。

氨基酸如赖氨酸、丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸、羟基脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸、组氨酸等可以任何所需比例，与包括肽接枝物来产生不同性质的含肽接枝共聚物。

脯氨酸是公知的结构破乳剂，它对接枝物提供一个开放的构成，将大部分分子暴露于表面，从而增加了吸附作用。赖氨酸带有高PK值，在生理条件下具有很强的离子相互作用。

肽接枝物的特殊例子包括Dopa、Dopa-Lys-Ala-Lys、Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys、Ala-Lys-Pro-Ser-Dopa、Dopa-Hyp-Hyp-Thr、Hyp-Thr-Dopa-Lys、Dopa-Hyp-Lys-Ser、Dopa-Lys-Ala-Lys-Hyp-Ser-Tyr、Dopa-LysAla-Lys-Hyp-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr、Lys-Hys-Ser-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys、Dopa-Lys-Glu-Ser-Hyp、Dopa-Lys-Cys（SO₃H）-Lys、Cys（SO₃）-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys、Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Lys、Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr、Phe-Tyr-Lys-Ser、Hyp-Hyp-Thr-Phe-Lys等。

含肽接枝共聚物产物的总分子量范围从约30，000至约500，000，而以约70，000至约350，000为较好，最好是约100，000。要达到必要的分子量，当然取决于主链聚合物的分子量，肽接枝物的分子量以及取代程度。对上述参数加以变更可预制用于各种特殊目的用途的聚合物。

含肽接枝共聚物必须含有接枝在至少5%至约100%的自由伯或仲胺功能团的肽单元（以下简称为%取代），含肽接枝共聚物的最小%取代将根据聚合物主链的特性而发生变化。然而，在所有的情况下，最小%取代量必须足以使形成的含肽接枝共聚物具有所需的分子量，溶介度和阳离子度特性，以及所希望的生物粘接剂性质。

在最佳实施例中，聚合物主链含有或经改性后含有重复的单体单元，每个单元都含有自由的伯或仲胺单元，已经发现必须至少有5%的自由胺基与肽接枝物反应以获得所需的生物粘接剂性质。在此最佳实例中，%取代量约从7%至约30%，最好是约从10%至约20%，这种类型聚合物主链的例子包括聚赖氨酸和聚烯丙胺，其中重复的单体单元分别是赖氨酸和烯丙胺。

聚合物主链也可以是由不同单体单元组成的共聚物，每个单体单元不一定包括自由的伯或仲胺单元。对于这种类型的主链聚合物需要较大的最小取代度以获得所需的生物粘接剂性质。作为一个极端的例子，聚合物主链中自由伯或仲胺基的数量可以足够低，由100%的肽接枝所取代，制成具有所需性质的含肽接枝共聚物，再者，肽接枝物的最小%取代量必须足够高，以致使制成的具有分子量约从30，000至约500，000范围的含肽接枝共聚物，并有所需的溶介度和阳离子度特性。

本发明含有一个以上氨基酸的肽是用Merrifield在“美国化学会志”85卷，2149-2154页（1963）所述的工艺而制备的。所涉及的合成是将受保护的氨基酸逐步加到增长的肽链上，该链通过共价键连接到固体载体上（如固体树脂珠粒）。这种方法的总概念取决于用共价键将链上的第一个氨基酸连接到固体聚合物树脂珠粒上，以及逐步的方式每次接上一个氨基酸直到收集到所需的结果为止。最后从固体载体上除去肽，然后除去保护基。这种方法所提供的肽增长链连接到完全不溶固体粒子上。因此以适宜的方式将其过滤并洗去试剂和副产品。

氨基酸可连接到任何适宜的聚合物珠粒上，该聚合物在所用的溶剂中是不溶介的，并且在过滤后具有稳定的物理形式。这样的聚合物珠粒必须含有一个这样的功能团，即第一个受保护的氨基酸通过共价键牢固地键合到它上面。适用此目的各种聚合物珠粒的例子如聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚葡聚糖、脱乙酰壳多糖等。

在氨基酸上的各种功能团虽然是活性的，但并不进入反应，在整个反应过程中，像用于多肽工艺中那样，都用传统的保护基团方法将这些功能团保护起来。

氨基酸的α-氨基是用一个叔丁基氧代羰基（BOC）或一个芴基甲氧基羰基（FMOC）或一个其等效物加以保护。羟基功能是用一个苄基或苄基衍生物基团如4-甲氧苄基、4-甲苄基、3，4-二甲苄基、4-氯苄基、2，6-二氯苄基、4-硝基苄基、苄基氢化基或一个其等效物加以保护。

半胱氨酸的硫羟的功能可用上述的苄基或苄基衍生保护基或用一个正-烷基硫代基如甲基硫代基、乙基硫代基、正-丙基硫代基、正-丁基硫代基或其等效物加以保护。精氨酸的胍基功能可用一个硝基、甲苯磺酰基或一个其等效物加以保护。赖氨酸的ε-氨基功能可用一个苄基氧代羰基或一个苄基氧代羰基衍生物如2-氯苄基氧代羰基、2-溴苄基氧代羰基、3，4-二甲基苄基氧代羰基或其等效物加以保护。用于组氨酸的咪唑氮原子保护基是苄基、甲苯磺酰基或如上述用于赖氨酸的苄基氧代羰基或苄基氧代羰基的衍生物。

一旦获得所需的肽，就将其与聚合物主链进行反应生成接枝共聚物。此方法的第一步是裂开肽的终端保护基团。然后将肽与一个双功能团交联试剂反应。适合于此目的的交联剂包括双琥珀酰亚胺基辛二酸、双琥珀酰亚胺基癸二酸、双琥珀亚胺基酒石酸、二硫代双（琥珀酰亚胺基丙酸酯）、1，2-亚乙基二醇双（琥珀酰亚胺基琥珀酸酯等。在终端含有一个活性基的肽，然后从固体载体上裂开，所用的裂介试剂对于肽合成技术，本领域的技术人员是熟知的，如三氟乙酸、甲烷磺酸、氟化氢等。将保护基团，固体载体和已选定的裂介试剂进行适当的组合，最后一步是提供一种水溶性的，含有一个活性基能与所选定的聚合物主链上自由的伯或仲胺基进行反应的自由肽。自由肽与聚合物主链在一种适宜的缓冲溶液如三乙胺硼酸盐、四硼酸钠等中混合并进行反应生成含肽接枝共聚物。

本发明的含肽接枝共聚物仅对某些确定的应用表现出足够的粘接性能，如将细胞、蛋白质和细胞组织部分定位到惰性基质如塑料和玻璃上或生物基质如皮肤移植上或人造静脉材料上等。

通过加入交联剂可提高肽接枝共聚物的粘接强度。交联剂在基质和共聚物之间以及共聚物自身之间促进含肽接枝共聚物的局部或全部交联。交联的本质尚不清楚，但可认为必定含有共价键。所用交联剂的准确重量百分比取决于含肽接枝共聚物的分子量以及交联剂的纯度。

适用的交联剂包括：例如、酶催化氧化剂如儿茶酚氧化酶、

酪氨酸酶、或带有任何数量的活性功能团的化学交联剂、这类交联剂包括戊二醛、甲醛、双（硫代琥珀酰亚胺基）辛二酸酯和3，3-二硫代双（硫代琥珀酰亚胺基丙酸酯）、或甚至是化学氧化剂如氧或过氧化物，或配位剂如铁、铝、锰等。

在各种应用中，可加入表面活性剂，填料、染料、抗菌素、治疗剂等。

以下的例子用以说明本发明含肽接枝共聚物的合成方法、用作粘接剂和含肽接枝共聚物的粘接强度。这里的这些例子仅用于说明的目的而不构成对本发明权利要求的限制。在本领域的技术人员了解所述的本发明后，可以作出许多变更或修改，它们均属于本发明的构思或范围之内。

例1

PAA-SA-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-OH的合成

例1中含肽接枝共聚物合成方法所用的工艺流程简要在图1中说明。

将含有1毫克当量羟基的对-苄氧基苄醇树脂（1克）用二氯甲烷冲洗几次，加入FMOC-Lys（BOC）-OH（1mm 0.465克）、1毫升溶于二氯甲烷中的1N二环己基碳二亚胺（DCCI）（1mm）溶液和加入对-二甲胺基吡啶（1.0mm 0.124克）。将悬浮液摇动6小时。重复此偶联作用，然后把树脂用0.5毫升苯甲酰氯和0.5毫升的吡啶处理，再摇动30分钟，然后用乙醇、二甲基乙酰胺（DMAC）和二氯甲烷彻底洗涤树脂并在真空下干燥。每克树脂的FMOC-Lys（BOC）-OH含量用分光光度测定法测定为0.6-0.8mm/gm。

将FMOC－Lys(BOC)－对－苄酯树脂（I）放入一个反应罐（ACT200型,肽自动合成器）中，所用的洗涤和反应都用15-20毫升的溶剂进行。操作周期的草案由以下内容组成：

1，用二甲基乙酰胺（DMAC）洗涤

2，用15%哌啶/二甲基-亚砜（1×5分钟，1×15分钟介封

3，用DMAC洗涤

4，用二氯甲烷洗涤

5，用成型的FMOC-氨基酸的1-羟基苯并三唑（HOBT）酯偶联

6，用乙醇、DMAC、二氯甲烷洗涤

苯并三唑酯的制备是在一个预先活化罐中将各为3当量的FMOC-氨基酸，HOBT和二环己基碳二亚胺（DCCI）在二氯甲烷中混合20分钟而成的。在二氯甲烷中进行偶联30分钟，再在二氯甲烷/二甲基亚砜（比例为2∶1）中偶联1.5小时。偶联的完全度用Keiser测试法〔由Keiser等人在“分析生物化学”Vol.34。595-598页（1970）中说明〕进行监控。用适当地受阻断的氨基酸衍生物预成型9个周期。（图Ⅰ，Ⅲ）最后的一个周期用双琥珀酰亚胺基辛二酸（DSS）或双琥珀酰亚胺基癸二酸（DSA）偶联预成型。

将合成完毕后的肽反应产物从反应罐送出，然后用三氟乙酸/儿茶酚处理45分钟（图Ⅰ，Ⅳ）。滤出树脂并将滤液蒸发，加入醚沉淀出肽琥珀酰亚胺酯三氟乙酸盐。

将肽琥珀酰亚胺酯三氟乙酸盐加到4mm的聚烯丙胺的盐酸水溶液中，并强力搅拌，加入三乙氨基硼酸盐缓冲剂（1M、PH为9.5）将PH调至8.5（图Ⅰ，Ⅴ）。30分钟后用稀盐酸（Hcl）将混合物酸化至PH为2，然后用分子量截止为约8000-12，000的渗析袋渗析36小时并在冷室中更换3次4升0.001N Hcl。将此溶液冻干、形成Hcl盐的聚烯丙胺-肽（图Ⅰ，Ⅵ），这在HPLC上产生一个单峰并具有恰当的氨基酸介析数。发现在聚烯丙胺上约10%的氨基被肽酰化。

例2，H-Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-PLL的合成

例2是含肽接枝共聚物所使用的合成程序的概要在图2中说明。

用例1的方法制备FMOC-Lys（BOC）-对-苄氧基苄酯树脂并用例1同样的方法进行9个周期的氨基酸偶联预先型（图2、Ⅰ）。N终端丙氨酸以它的BOC-衍生物形式偶联，而Dopa则以FMOC-Dopa（Cl₂Bzl）₂-OBT的形式加入。

将肽合成完毕后的反应产物从反应罐中送出，然后用三氟乙酸/儿茶酚处理45分钟（图2，Ⅶ）。滤出树脂并将滤液蒸发。加入醚沉淀出十肽菌素三氟乙酸盐（图2，Ⅷ）。

将十肽菌素三氟乙酸盐溶于二噁烷/水（1∶1）中并用各是4当量的三乙胺和二-叔丁基碳酸氢钠进行处理，在过滤纸上呈阴性的水合茚三酮试验表明完成了反应。然后用稀盐酸将混合物酸化至pH为3，蒸发，用醚沉淀，然后滤出沉淀的BOC-十肽菌素。

然后将1mm的BOC-十肽菌素在四氢呋喃中用1.1mm的二环己基碳二亚胺和2mm的五氟化酚进行处理。搅拌45分钟后滤出沉淀的二环己基脲并蒸发滤液。将残余物用乙醚沉淀，过滤并在真空条件下干燥、得到BOC-十肽菌素-对-氟苯酯（图2，Ⅹ）。

将此制备的BOC-十肽菌素-五氟苯酯用三氟乙酸/儿茶酚处理45分钟，加入醚后接着蒸发沉淀出的十肽菌素-五氟苯酯三氟乙酸盐（图2，Ⅺ）。这是在一块多孔玻璃上进行收集的，过滤，用醚净化并在真空条件下于干燥器中干燥。

将1mm的十肽菌素五氟苯酯三氟乙酸盐加到4mm的聚-L-赖氨酸氢溴盐水溶液中，强力搅拌加入三乙氨基硼酸盐缓冲液（1M，PH9.5）使PH值调至8.5，30分钟后用稀盐酸将混合物酸化至PH为2，冻干得到部分受阻断的含肽接枝共聚物（图2，Ⅻ）。

将部分受阻断的含肽接枝共聚物Ⅻ溶于三氟乙酸中并用乙烷二硫醇、苯硫基甲烷溶液和三氟甲烷磺酸进行处理。20分钟后加入乙醚，用多孔玻璃漏斗过滤沉淀出的产品，并用乙醚和乙酸乙酯洗涤，然后将含肽接枝共聚物溶于水中，用分子量截止为约30，000的渗析袋渗析36小时并在冷室中更换3次4升的0.001N Hcl，将溶液冻干形成Hcl盐的聚-L-赖氨酸肽接枝共聚物，（图2，ⅩⅢ），这在HPLC上出现一个单峰并产生预期的氨基酸，可发现聚-L-赖氨酸上约10%的氨基被十肽菌素酰化。

例3，H-Dopa-PAA的合成

将1mm的叔-丁氧基羰基（BOC）-Dopa在四氢呋喃中用2mm的N-羟基琥珀酰亚胺和1mm的二环己基碳二亚胺进行处理。搅拌1小时后滤出沉淀的二环己基碳二亚胺并将滤液蒸发干燥，然后将干燥物再溶于乙醇中并加到2mm的聚烯丙胺盐酸化物的水溶液中，加入三乙氨基硼酸盐缓冲液（1M，PH9.5）使PH值调至8.5。搅拌30分钟后将混合物用稀盐酸化至PH为2，然后将溶剂蒸发，残余物用三氟乙酸进行处理除去叔-丁氧羰基，加入乙醚后接着蒸发沉淀出的Dopa-聚合物，用多孔玻璃漏斗过滤。

然后将含Dopa的接枝共聚物溶于水中，用分子量截止为8，000-12，000的渗析袋渗析36小时，并在冷室中更换3次4升的0.001N Hcl。

所得到的粉状Dopa-聚烯丙胺接枝共聚物经冷冻干燥后在HPLC上出现一个单峰，可以发现聚烯丙胺上约40%的氨基被Dopa酰化，结果分子量为70，000。

例4至10

使用上述例1的工艺流程，制备出以下的含肽接枝共聚物。

例18

采用上述例3的工艺流程，制备含有氨基酸的接枝共聚物和H-Dopa-PLL。所形成的接枝共聚物的分子量为37，000并发现聚赖氨酸上10%的氨基被Dopa酰化。

对比例19至20

采用上述例3的工艺流程，制备下列含有氨基酸的接枝共聚物：

对比例号氨基酸主链 %取代分子量

19 H-丝氨酸 PAA 20% 41K

20 H-酪氨酸 PAA 10% 40K

对比例21至23

采用肽合成技术领域的技术人员所熟知的标准方法制备下列合成聚合物：

对比例号说明分子量

21 Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-

Hyp-Thr-Dopa-Lys＝（10P） 1198

22 （10P）n 1Dopa，2Hypo （1538）n＜20K

23 H-Dopa-Lys-Ala-Lys-Pro-

Ser-Tyr-OH （853）n＜10K

例21中所采用的制备十肽菌素的技术已由Baran和Merrifield在“肽”Vol.2.1-284页（1980），“美国化学会志”Vol.95.1328-33（1973），以及由meienhoffer等人在“国际肽蛋白研究会志”Vol.13，35-42页（1979）加以叙述。对比例22和23中的低分子量十肽菌素聚合物是用标准方法获得的，该方法在肽化学中用于线性聚合，此方法已由Yamamoto在“化学会志”Perkin Trans，Vol.I，613-617页（1987）加以说明。

例23

此例子说明本发明含肽接枝共聚物用于细胞固定的粘接作用。

由贻贝中提取纯的生物粘接剂多酚朊，Mytilis，edulis已按特别的配方制备并作为对比物，用作生物活性材料（CELL-TAK

粘接剂，可从Biopolymers，Inc.Farmington.CT得到）固定在单一组份形式的惰性基片上。CELL-TAK

粘接剂和含肽接枝共聚物在大约4℃的5%（V/V）乙酸中贮存。

将三种哺乳动物细胞类型分别与用CELL-TAK

粘接剂的附着物，未涂覆细胞组织培养塑料器具的附着物以及用本发明含肽接枝共聚物涂覆的塑料器具附着物进行对比。依照在小仓鼠肾细胞上的固着物（BHK-21;ATCC CCL10）在含有10%小牛皮血清和10%胰蛋白磷酸盐肉汤的Basal Medium Eagle′s（BME）中生长。人类组织淋巴细胞（u-937;ATCC CRL1593）在含有10%小牛皮血清的RPMI 1640介质中生长。淋巴细胞（P3×63-Ag8.653;ATCC CRL1580）除了用20%热钝化胎儿牛血清外，也能同样生长。后两种细胞类型的独立的固着物，因此在悬浮体培养液中操作。

所有的蛋白质都用溶液浇铸方法涂覆在细胞组织培养塑料器具上。对于所有的试验，用10毫克/毫升的微升体积溶液喷涂并干燥于35毫米直径、10平方厘米的塑料盘上，最终密度为0.5～5微克/平方厘米。用空气干燥后，将盘用一次乙醇（95% V/V）和二次蒸馏水漂洗。

检定附着物在37℃下维持20分钟后所附着细胞的量，BHK细胞从托盘上受胰蛋白酶的作用，并用新鲜介质通过离心作用进行洗涤，然后悬浮在新的带有10%小牛血清，密度为2×10⁵细胞/毫升的RPMI 1640，在悬浮液中生长的U-937和P3X细胞通过离心作用进行洗涤并再悬浮到相似的密度。将悬浮液接种到未处理的细胞组织的培养皿上作为另一个对照物，别的器皿用纯的生物粘接剂多酚朊和本发明的接枝共聚物处理。到20分钟时，轻度搅拌，然后从器皿上除去未附着的细胞并用血球计数器计数。计算数据是用附着的细胞数减去从细胞盘中器皿上（均分为3）所得未附着细胞数除以细胞盘上的总数，再乘以百分系数。

此项检定的条件是这样确定的，即得到次优级粘接的Cell-Tak

粘接剂涂覆板，这样就可研究对超过纯生物粘接剂多酚朊粘接能力的任何聚合物涂层。表1所示为制备各种蛋白质所获得的性能范围。在本例中所用的聚赖氨酸酪氨酸聚合物是具有分子量为100，000的1∶1线性无规共聚物。对比例22和23的合成聚合物，其分子量低于纯生物粘接剂多酚朊的分子量，此聚合物作为细胞附着物的媒质对应地显示出较低的性能，随着分子量的增加，附着性能也增加。例3和5的合成接枝共聚物与纯的生物粘接剂多酚朊的分子量接近，而粘接剂附着性能看来比低分子量的合成聚合物高很多。例4的合成接枝共聚物的分子量高于纯生物粘接剂多酚朊的分子量，而附着性能则近于相等。

在所有剂量中，例3和例5的合成接枝共聚物比纯生物粘接剂多酚朊好。

表Ⅰ

细胞附着物与Cell-TAK

粘接剂和合成的类似物的百分比

粘接剂 BHK-21 细胞类型 U-937

15微克 P3X 25

25微克

Cell-Tak

粘接剂 60 88 55

例3 78 84 71

例4 63 81 57

例5 76 94 57

例11 43 76 35

例18 37 64 40

对比例22 29 14 18

对比例23 21 28 29

聚赖氨酸酪氨酸 67 / 31

聚-L-赖氨酸 80 / 59

聚烯丙胺 / / 94

塑料 19 17 14

测定哺乳细胞在纯生物粘接剂多酚朊和含肽接枝共聚物存在下的生长速率，以评价由含肽接枝共聚物所引起的任何可能的不利影响，小仓鼠肾细胞（BHK）毛坯在BME阳性10%小牛皮血清和10%胰蛋白

磷酸盐肉汤中生长汇集胰蛋白酶化并在BME中用离心方法洗涤几次，将悬浮物（5×10⁴细胞/毫升）接种到未经处理的35mm器皿上（对照物）以及带有Cell-Tak

粘接剂和在10%小牛皮血清的BME中含肽接枝共聚物（5微克/平方厘米）的器皿上。在有5%CO₂，37.5℃保温的过程中的不同时间点取出三份盘子。所附着的细胞于是从表面胰蛋白酶化，洗涤后用血球计数器计数。

BHK-21细胞的生长速率与未涂覆的对照物比较或与纯生物粘接剂多酚朊对照比较，不受所有测试的含肽接枝共聚物或纯生物粘接剂多酚朊（包括主链聚合物聚烯丙胺和聚-L-赖氨酸）的影响，重要的是需注意在任何这些聚合物存在下，生长速率不增大或延迟。

例24

本例说明细胞组织切片在使用本发明含肽接枝共聚物所制成的载片上的延迟作用。

将嵌入石蜡的肝细胞组织切片成10毫米，并粘着在玻璃显微镜载片上，载片上涂覆Cell-Tak 粘接剂或含肽接枝共聚物，涂覆密度为每载片5微克，制备三个载片，每个载片上都含有两个不同的切片。

试验用的含肽接枝共聚物是PAA-SA-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-OH，例5的含肽接枝共聚物，和乙酰-Dopa-PAA。这里所用的以及以下例子中所用的乙酰-Dopa-PAA均是按例3中所述的工艺流程进行制备的，但下面的除外，将1mm的乙酰-Dopa，而不是1mm的叔丁氧羰基（BOC）-Dopa在四氢呋喃中先用2mm的N-羟基琥珀酰亚胺和1mm的二环己基碳二亚胺进行处理。另外因用了乙酰-Dopa而不是BOC-Dopa，就不必用三氟乙酸来解除阻断。生成的接枝共聚物分子量为42，000并发现聚烯丙胺上10%的自由氨基被乙酰-Dopa所酰化。

另外，经测试线型聚烯丙胺聚合物（PAA）分子量约为30，000，线型聚-L-赖氨酸聚合物分子量约为100，000。

在45℃暖台上干燥1小时后，载片在二甲苯中作两次5分钟洗涤，接着在95%乙醇中洗涤3次，在70%乙醇中洗涤一次及一次3分钟水洗脱去蜡。载片然后再经受下述次序的处理：

切片保留数

处理 PAA 乙酰-Dopa 例5 Cell-Tak

-PAA 粘接剂

1，100mM PBS， 6 6 6 6

PH8，15分钟

2，10mM PBS，PH7， 6 6 6 6

0.3%H₂O₂，

0.25%三硝基甲苯，

x-100 2小时

3，流水，15分钟 6 6 6 6

4，胰蛋白酶/EDTA 6 6 6 6

（0.05%/0.02%）

30分，37℃

5，胰蛋白酶/EDTA 6 6 6 6

（0.05%/0.02%）

30分，37℃

6，流水，15分钟 6 6 6 6

7，0.1%SDS在水中 6 6 6 6

15.5小时

8，流水，25分钟 6 6 6 6

9，胃蛋白酶（5，000U/ml） 6 5 6 6

20分，37℃

10，流水浴，15分钟 6 3 6 6

PAA和例5中的含肽接枝共聚物以及Cell-Tak

粘接剂同样完成所有这些处理。处理9和10后，切片从乙酰-Dopa-PAA接枝共聚物上脱落，用聚-L-赖氨酸固定的切片在处理7或在此之前就全部脱落。

例25

本例说明本发明含肽接枝共聚物在铝上的粘接性能。

将表Ⅱ中所设定的含肽接枝共聚物的控制量和纯生物粘接剂多酚朊应用到铝箔带上来测试其粘接强度。用乙醇将1.3厘米×4厘米的带清洗干净并干燥，将固定量的含水聚合物输送到一个带子的末端，迅速地将第二条带子压上1.3厘米。每个粘接区域内聚合物的总量在4和20微克之间变化，送至4微升的蒸馏水中，允许粘接剂固化1小时，将样条夹在压力表（0-500或0-5000克范围）和齿轮电动机之间，用一气缸产生25克/秒的变形，以此来测量粘接强度，所有步骤均在室温下进行。数据为每组5个试样的平均值，并以克/平方厘米/微克来表示。

表Ⅱ

聚合物箔粘接的剪切强度试验

克/平方厘米/微克蛋白质

纯生物粘接剂多酚朊 73

聚烯丙胺 74

聚-L-赖氨酸 62

聚-L-赖氨酸酪氨酸 0

例3 84

例4 52

例5 69

例7 31

例11 42

例12 65

例13 130

例14 76

对比例19 65

对比例20 21

对比例21 0

对比例22 20

对比例23 0

乙酰-Dopa-PAA 0

PAA-Lopo Dopa，o Hypro 48

纯生物粘接剂多酚朊在每平方厘米/微克蛋白质73克剪切强度下，显示出最高粘接强度6.4和9.6微克，以每微克聚合物为基准，许多含肽接枝共聚物和线型聚烯丙胺聚合物（PAA）接近或超过纯生物粘接剂多酚朊所显示的强度。

例26

此例论证了本发明含肽接枝共聚物在含水环境中的应用。

对纯生物粘接剂蛋白质和各种分子量的含肽接枝共聚物测定其水相容粘接特性。使用酶催化的或化学的分子间交联剂以增加组分的分子量，因而也提高了内聚粘合强度。Hypan 聚丙烯腈（Kingston Technologies.Inc）是一种至少含有80%水的水凝胶，将其用作要粘合的基质，Hypan

-Hypan

水凝胶粘合体是通过测试其对酸浴（0.5M Hcl）的抗酸力来表示每种带有或不带有交联剂的聚合物的粘接特性。Hypan

水凝胶用不带交联剂的纯生物粘接剂多酚朊粘合的带子在水中两小时之内就会分离，但在酸中不到1分钟就会分离。带有交联剂的纯生物粘接剂多酚朊在水中或酸中至少一个星期仍保持完整。

将Hypan

水凝胶切成1×2厘米的长片，使用前在磷酸盐缓冲盐水PH7.0（PBS）中浸湿。应用各种浓度的纯生物粘接剂多酚朊或含肽共聚物，范围从1至15微克/平方厘米。用纯生物粘接剂多酚朊和高分子量含肽接枝共聚物，只要较低的浓度就足以形成充分的粘合。每微克粘接剂使用5.5至11单位的状酪氨酸酶。使用的化学交联剂是以共价方式将两个自由胺粘合。选择双（硫代琥珀酰亚胺基）辛二酸（BS-3）和3，3-二硫代双（硫代琥珀酰亚胺基丙酸）（DTSSP）是因为它们的水溶解度和在生理PH值的官能度。

将粘接剂和或交联剂或缓冲剂直接放到一片Hypan 水凝胶上，混合后分布在1平方厘米的区域。将第二长片直接迅速放在已处理过的长片顶上。允许交叠的长片保温30秒然后放入300微升0.5N盐酸的Coor器皿中。其结果在表Ⅲ中总结。

用状酪氨酸酶进行酶催化交联的结果是所有粘合Hypan

水凝胶的测试聚合物都很好。当交联纯生物粘接剂多酚朊时，要交联的同型物都合并在酸中。对主链的测试，聚赖氨酸酪氨酸和聚烯丙胺粘合良好，但二者在酸中的交联状态是分离的。聚-L-赖氨酸在哪种状态都不粘合。

化学交联剂如BS3和DTSSP在粘合所有测试的同型物都是成功的，只有少数例外，可用于这些交联剂的自由胺对已加载的（质子化的）胺（此胺可与带负电荷的水凝胶进行离子化粘合）对此系统及任何含肽化合物可认为是关键性的。该比例是PH的函数。

最意想不到的是，例15的高分子量聚合物提供耐酸粘合却不加交联剂。375K的分子量显然足以提供耐酸粘合强度。

对比例20至22合成的低分子量肽和聚合物加不加交联剂都不能粘合。

表Ⅲ

凝胶粘合试验

耐酸粘合

聚合物状酪氨酸酶 BS3 DTSSP

纯生物粘接剂多酚朊 +++ +++ +++

聚烯丙胺 - +++ +++

聚-L-赖氨酸 - +++ -

线型共聚物 - - -

例3 ++ +++ +++

例4 +++ +++

例5 +++ +++ +++

例7 +++ +++ +++

例11 - -

例12 + 非水溶性

例13 +++ ++ ++

例14 ++ +++ +++

例15 +++ +++

例18 + +++

对比例19 - +++ ++

对比例20 - ++ +

对比例21 - -

对比例22 -

对比例23 - - -

乙酰-Dopa-PAA +++ +++ -

PAA-Lop，（O Dopa， + +++ ++

O Hypro）

例27

一个眼睛的模型系统用来证明使用本发明的含肽接枝共聚物来密封小的和大的细胞组织孔眼的可行性。用手术刀从15-20毫米直径的角膜部位取下整个牛眼睛的上皮细胞手术刀划破擦伤角膜的中心制出一个孔眼将附加在10m，盐水注射器上的18－计针插。

前眼房通过角膜的穿刺术确定是否有漏出物。然后用去离子水冲洗擦伤部位并抹去过量的水。再将纯生物粘接剂多酚蛋白质和含肽接枝共聚物（50ug/cm²）立即施加到孔眼部位的外围。将一块水凝胶治疗接触透镜（Hypan

hydrogel，Kingston Technologies，Inc.）在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中预浸30分钟，然后将其铺在受伤部位，轻压透镜一角膜界面确保补片直接对合到细胞组织上。在固化过程中将一个充水渗析袋施加到粘合剂上20分钟。粘合剂的强度用附加在针头上的测压计测量，此针头预先插入前眼房。

拿开渗析袋，眼压约为120

/分钟，用注射器连接到测压计上，监控漏出物和压力。所记录的水压是第一次漏出物标记所达到的读数。此压力值除以0.535换算为mmHg。数据至少是两个试样的平均值。表Ⅳ中耐压37至75mmHg的粘合剂标一个单+，失效前达到75或更高mmHg的标++。

表Ⅳ

Hypan粘合到眼睛上的能力

聚合物 COX BS3

纯生物粘接剂多酚朊 ++ ++

聚烯丙胺 - -

聚-L-赖氨酸 -

聚-L-赖氨酸酪氨酸 -

线型共聚物

例3 ++

例4 -

例5 - ++

例7 - -

例11 ++

例12 -

例13 ++

例14 ++

例15 ++

对比例19 - -

对比例20 - +

对比例21 -

对比例22 -

对比例23

乙酰-Dopa-PAA +

PAA-10，（O，Dopa，O Hypro） -

试验结果证实了使用本系统的含肽接枝共聚物密封大的和小的细胞组织孔眼的可行性。可是，仅聚合物主链组分，以及对比例19-23的聚合物至少在37mmHg压力下不显示粘合力。

例28

此例论证了用本发明的含肽接枝共聚物作为皮肤移植的应用。使用猪表皮来评价粘合力。

将冷冻的脱脂猪表皮切成2厘米的长条，盖上湿纱布进行冷冻以便在完全融化时出现水合作用。大约2小时后将猪皮条用乙醇擦洗，然后用纱布弄干。

粘合剂配方含有14微升的例5含肽接枝共聚物（5毫克/毫升在水中）;4微升的0.05M PO₄缓冲剂（PH＝7）以及2微升的30mM（17.18毫克/毫升）双（硫代琥珀酰亚胺基）辛二酸（BS3）的水溶液。将要进行测试的粘合剂成份在一个干净的聚苯乙烯盘中按上述顺序进行混合。

将14微升的粘接剂组份施加到一块猪皮条的粘接部位（1平方厘米）。在粘接部位再盖上第二块猪皮条，它上面再放上一个295克重量的塑料盘压10分钟，然后垂直挂起粘接的细胞组织在底部施以重力直至粘接部位断裂，由此测试粘接剂的剪切强度。

本发明例5的含肽接枝共聚物，所产生的平均剪切强度为93克/平方厘米。

例29

在本例中使用牛角膜来证实本发明的含肽接枝共聚物与交联剂和缓冲剂配合在一起对粘接角膜细胞组织是一个有效的配方。从已形成晶核的眼内刮掉牛角膜（包括整个上皮和内皮）并切成两个2×1平方厘米的片，将牛角膜片用100微升的磷酸盐缓冲盐水溶液冲洗并马上干燥，先进行以下的粘接（1平方厘米面积）测试。

在一分开的干净表面，将在PO₄缓冲剂或水中的8微升例5含肽接枝共聚物与5微升的0.025M PO₄缓冲剂以及1.16微升双硫代琥珀酰亚胺基）辛二酸（BS3）在水中以浓度为15mM进行混合。应当注意，如果以水作溶剂，含肽接枝共聚物的稳定性较高，而且如果该溶液计划有贮一星期以上时则必使用。在每个试验中，将8微升的配方组成施加到眼睛上0.64平方厘米的面积，然后将第二块牛角膜长条慢慢放置在第一块上，仅覆盖同样的0.64平方厘米面积。

用大约含15毫升水的小水袋对粘接处向下加负荷，允许持续20分钟，然后测试粘接处的剪切强度。

将粘接的角膜条的一端夹在环形架上，另一端夹一个水袋，然后以200毫升/分钟的恒定速率向袋内注入水直至粘接部位出现分离为止。测定水的重量，之后转换为剪切强度单位，结果列于表Ⅴ中。

表Ⅴ

用于粘接剂的溶剂水的重量（克）剪切强度（克/平方厘米）

水 58 90

水 42 66

0.025MPO₄210 328

0.025MPO₄160 250

试验结果证实上述浓度的含有肽接枝共聚物和交联剂的配方在软组织细胞上所形成的粘接至少表现出66克/平方厘米的剪切强度。由于组织细胞不是均匀的，因此所获得的数值不能再现确切数字，但其结果就产生的粘接这一事实是一致的。

Claims

1、一种水溶性阳离子含肽接枝共聚物，其分子量表现为从大约30，000至大约500，000，此共聚物包括：

(a)一个聚合物主链，含有或可经改性而包括有自由的伯或仲胺功能团以便与氨基酸或肽接枝物反应，所说的聚合物主链呈现从大约10，000至大约250，000的分子量；和

(b)与所说聚合物主链的至少5%至大约100%的所说伯或仲胺功能团进行反应的一个氨基酸或肽接枝物，其中所说的氨基酸或肽接枝物包括至少一个3，4-二羟苯丙氨酸(Dopa)氨基酸或其一个能羟基化成Dopa形式的前体。

2、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说共聚物分子量范围从约50，000至约350，000。

3、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说共聚物分子量范围从约70，000至约350，000。

4、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说共聚物分子量约为100，000。

5、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中含有自由伯或仲胺官能单元的聚合物主链表现至少约为8的PK值。

6、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中含有自由伯或仲胺官能单元的聚合物主链表现的PK值从约8.5至约10。

7、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说的主链包括含有自由伯或仲胺官能团的单体单元，胺基存在的数量至少大约1-25毫摩尔自由胺基/克聚合物（含有所说的胺基以便与所说的氨基酸或肽接枝物反应）。

8、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说的主链呈现的分子量从大约10，000至大约250，000。

9、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说的聚合物主链选自含有由聚赖氨酸，聚丙烯胺，聚氮丙啶，脱乙酰壳多糖，聚乙烯胺，硫酸软骨素，聚右旋糖酐，透明质酸，聚丙烯酸组成的组和其共聚物。

10、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说的聚合物主链是聚赖氨酸。

11、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说的聚合物主链是聚烯丙胺。

12、根据权利要求10的含肽接枝共聚物，其中至少大约5%至大约30%的所说自由伯或仲游离胺基与所说的氨基酸或肽接枝物反应。

13、根据权利要求10的含肽接枝共聚物，其中大约10%至大约20%的所说自由伯或仲胺基与所说的氨基酸或肽接枝物反应。

14、根据权利要求11的含肽接枝共聚物，其中至少大约5%至大约30%的所说自由伯或仲游离胺基与所说的氨基酸或肽接枝物反应。

15、根据权利要求11的含肽接枝共聚物，其中大约10%至大约20%的所说自由伯或仲胺基与所说的氨基酸或肽接枝物反应。

16、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说的氨基酸或肽接枝物含有3，4-二羟苯丙氨酸（Dopa）氨基酸。

17、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说的氨基酸或肽接枝物含有能羟基化为Dopa形式的3，4-二羟苯丙氨酸前体。

18、根据权利要求17的含肽接枝共聚物，其中所说的前体选自由酪氨酸和苯丙氨酸组成的组。

19、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说的氨基酸或肽接枝物选自由Dopa，Dopa-Lys-Ala-Lys，Hyp-Hyp-Thr-Depa-Lys，Ala-Lys-Pro-Ser-Dopa，Dopa-Hyp-Hyp-Thr，Hyp-Thr-Dopa-Lys，Dopa-Hyp-Lys-Ser，Dopa-Lys-Ala-Lys-Hyp-Ser-Tyr，Dopa-Lys-Ala-Lys-Hyp-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr，Lys-Hyp-Ser-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys，Dopa-Lys-Glu-Ser-Hyp，Dopa-Lys-Cys（SO₃H）-Lys，Cys（SO₃）-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys，和Lys-Dopa-Thr-Hyp-Hyp-Tyr-Ser-Pro-Lys-Ala，Hyp-Hyp-Thr-Tyr-Lys，Ala-Lys-Pro-Ser-Typ，Phe-Tyr-Lys-Ser，以及Hyp-Hyp-Thr-Phe-Lys组成的组。

20、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说的聚合物主链是聚赖氨酸，而所说的氨基酸或肽接枝物选自由Lys-Dopa-Thr-Hyp-Hyp-Tyr-Ser-Pro-Lys-Ala，Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys，Lys-Hyp-Ser-Dopa-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys，Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Thr-Dopa-Lys，Dopa-Lys-Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr，Dopa-Lys-Ala-Lys-Ala-Lys-Hyp-Ser-Dopa-Hyp-Hyp-Thr和Dopa组成的组。

21、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说的聚合物主链是聚烯丙胺，而所说的氨基酸或肽接枝物选自由Dopa，Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys，Cys-Pro-Ser-Thr-Pro-Pro-Thr-Thr-Lys，Hyp-Thr-Dopa-Lys，Dopa-Lys-Ala-Lys-Pro-Ser-Tyr，和Dopa-Lys-Ala-Lys-Hyp-Ser-Dopa-Hyp-Hyp-Thr组成的组。

22、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说的聚合物主链是聚烯丙胺，而所说的氨基酸或肽接枝物是Dopa。

23、根据权利要求1的含肽接枝共聚物，其中所说的聚合物主链是聚烯丙胺，而所说的氨基酸或肽接枝物是SA-Lys-Pro-Tyr-Hyp-Hyp-Thr-Dopa-Lys-OH。

24、一种水溶性阳离子含肽接枝共聚物，其分子量表现为从大约30，000至大约500，000，该聚合物包括：

（a）一个含有单体重复单元的聚合物主链，每个所说的单体重复单元包括或能经改性后包括自由的伯或仲胺官能单元以便与氨基酸或肽接枝物反应，所说的聚合物主链所显示的分子量从约10，000至约250，000;和

（b）一个与所说聚合物主链至少5%所说伯或仲胺官能单元进行反应的氨基酸或肽接枝物，其中所说的氨基酸或肽接枝物包括至少一个3，4-二羟苯丙氨酸（Dopa）氨基酸或能羟基化成Dopa形式的前体。

25、根据权利要求24的一种水溶性阳离子含肽接枝共聚物，其中所说的单体重复单元选自由赖氨酸和烯丙胺组成的组。

26、根据权利要求24的一种水溶性阳离子含肽接枝共聚物，其中自由伯或仲胺官能单元存在的数量至少大约为1-25毫摩尔胺/克聚合物，以便与所说的氨基酸或肽接枝物反应。