CN1636597A - 治疗女性性功能障碍的化合物 - Google Patents

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Abstract

描述了一种治疗FSD，特别是FSAD女性患者的方法。所述方法包括给予该女性能够增强性生殖器中cAMP作用的活性剂；其中活性剂的量能增强女性性生殖器中cAMP的作用。活性剂可与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合。所述活性剂是NEP抑制剂(I：NEP)。

Description

治疗女性性功能障碍的化合物
本申请是2000年11月7日的提交的中国专利申请00137665.9，发明名称为“治疗女性性功能障碍的化合物”的分案申请。
本发明涉及用于治疗女性性功能障碍(FSD)，特别是女性性唤起障碍(FSAD)的药物。
本发明也涉及治疗FSD、特别是FSAD的方法。
本发明也涉及分析筛选用于治疗FSD、特别是FSAD的化合物的方法。
为了方便起见，在权利要求部分之前描述下文中所使用的缩写表。
女性的性反应
在阴道和阴蒂以及其他性器官开始发生生理改变以前，女性的性反应唤起期与要求期不容易区分。性兴奋和性愉快与血管和神经肌肉活动相伴随，就是导致阴蒂、阴唇和阴道壁充血，增加阴道的润滑作用和扩张阴道腔(Levin，1980；Ottesen，1983；Levin，1991；Levin，1992；Sjoberg，1992；Wagner，1992；Schiavi等人，1995；Masters等人，1996；Berman等人，1999)。
阴道充血能够产生渗出物并且该过程起增加阴道润滑的作用。渗出物使得血浆流经上皮并且流到阴道表面上，这种驱动力增加唤起期阴道毛细血管床的血流。另外，充血导致阴道长度和阴道腔直径特别是阴道远端2/3处直径的增加。阴道腔扩张是由于阴道壁平滑肌松驰和骨盆底肌肉的骨骼肌松驰。某些性交疼痛疾病如阴道痉挛被认为至少部分是由于不充足的松驰阻止了阴道的扩张；已经确定了主要是平滑肌的问题还是骨骼肌的问题(Levin，1980；Ottesen，1983；Levin，1991；Levin，1992；Sjoberg，1992；Wagner，1992；Schiavi等人，1995；Master等人，1996；Berman等人，1999)。
阴道的脉管系统和微脉管系统受包含神经肽和其他神经递质候选物的神经支配。这些神经递质包括降钙素基因相关肽(CGRP)、神经肽Y(NPY)、一氧化氮合酶(NOS)、P物质和血管活性肠肽(VIP)(Hoyle等人，1996)。以下讨论存在于阴蒂中的肽。通常与VIP一起存在的一氧化氮合酶从免疫学方面来看更多表达于深部动脉和静脉中而不是在propria血管中(Hoyle等人，1996)。
女性性功能障碍
已知一些人可能患有女性性功能障碍(FSD)。
FSD最好定义为妇女在性表达中难以或不能获得满足。FSD是几种不同的女性性功能障碍的统称(Leiblum，1998，Berman等人，1999)。妇女可能有性欲缺乏、性唤起或性高潮困难、性交疼痛等问题或这些问题的组合。一些类型的疾病、药物治疗、损伤或心理上的问题都可引起FSD。
对配偶双方性功能障碍情况进行调查的研究结果显示76％以上妇女有性功能障碍的抱怨并且在美国有30-50％的妇女经历FSD。
FSD亚型包括退减性性欲障碍、女性性唤起障碍、性高潮障碍或性欲障碍。
正在开发中的治疗方法是针对治疗特定亚型的FSD，主要是性欲障碍和性唤起障碍。
FSD的类型最好通过将它们与正常女性性反应阶段：性欲、性唤起和性高潮相对照来定义(Leiblum 1998)。性欲或性冲动是性表达的驱动力-并且其表现通常包括当在感兴趣伙伴的交往中或者当暴露在其他色情刺激中时存在性想法。而性唤起是血管对性刺激的反应，其重要的组成部分是阴道润滑和阴道伸长。因此与性欲相比，性唤起是与生殖器(例如阴道和阴蒂)血流有关的反应并且不必敏感。性高潮是性唤起达到高潮时性紧张的松驰。因此，一般来说，当妇女在任一阶段，通常包括性欲、性唤起或性高潮中有不充足或不满意的反应时便发生FSD。FSD类型包括退减性性欲障碍、性唤起障碍、性高潮障碍和性疼痛病症。
如果一个妇女没有或很少有性欲，并且没有或很少有性想法或性幻想，那么，她可能存在退减性性欲障碍。这种FSD可由低睾丸素水平引起，这是由自然绝经或外科手术造成的绝经引起的。其他原因包括疾病、药物、疲劳、抑郁和焦虑。
女性性唤起障碍(FSAD)的特点是生殖器对性刺激不充足的反应。生殖器(例如阴道和/或阴蒂)不经历正常性唤起特征的充血过程。阴道壁的润滑性差，所以出现性交疼痛。性高潮可能受到阻止。性唤起障碍可由绝经期、生育孩子后和哺乳期的雌激素减少引起，也可以由与血管组分有关的疾病如糖尿病和动脉粥样硬化引起。其他原因是由于用利尿药、抗组胺药、抗抑郁药，例如SSRIs或抗高血压药治疗。下面更详细地讨论FSAD。
性交疼痛病症(包括交媾困难和阴道痉挛)的特点是插入引起疼痛并且可由减少润滑的药物、子宫内膜异位、骨盆炎性疾病、炎性肠道疾病或尿道问题引起。
FSD的流行情况难以确定，这是因为该术语包括数种类型的问题，某些问题难以测量并且也因为最近才对FSD的治疗产生兴趣。许多妇女的性问题或者与女性年龄增长直接相关或者与慢性疾病如糖尿病和高血压有关。
对FSD的发病情况和流行情况有各种各样的报道，一部分使用不同的评价标准来解释，但大多数研究人员报道一定比例的健康妇女中仍有一种或多种FSD亚型症状。例如，比较配偶间性功能障碍的研究表明63％的妇女有唤起或性高潮功能障碍而40％的男性有勃起或射精功能障碍(Frank等人，1978)。
然而，女性性唤起障碍的流行情况在不同的调查中有明显差别。在近来National Health and Social Life Survey调查中报道19％的妇女有润滑困难而在门诊妇科临床中14％的妇女有类似的润滑困难(Rosen等人，1993)。
一些研究也已经报道糖尿病妇女中有性唤起功能障碍(高达47％)，这包括降低阴道润滑(Wincze等人，1993)。在神经病和性功能障碍之间没有联系。
许多研究也显示总体上有11到48％的妇女可随年龄增长而降低性欲。类似地，报道11到50％的妇女有唤起和润滑问题，所以有性交疼痛的经历。阴道痉挛不常见，大约有1％的妇女受其影响。
有性经历妇女的研究显示5-10％有原发性性快感缺失。另外10％偶有性高潮并且还有10％经历不协调的性高潮(Spector等人，1990)。
因为FSD由表示性反应周期各个阶段症状的几种亚型组成，所以没有单一的治疗方法。目前FSD的治疗主要地集中在心理问题或相关问题上。当更多的临床和基础科学研究致力于该医学问题的研究时，FSD的治疗逐渐地展开。从病理生理学方面来看，女性的性抱怨并非都是生理性的，特别是那些可能患有造成所有女性性抱怨原因的血管生成(vasculogenic)功能障碍(例如FSAD)的个体。现在还没有特许用于治疗FSD的药物。经验性药物治疗包括给予雌激素(局部给药或作为激素替代治疗)、雄性激素或调节情绪的药物如丁螺环酮或曲唑酮。由于低功效或无法接受的副作用，这些治疗选择通常不令人满意。
自从最近关注通过药物学方法治疗FSD以来，治疗包括：心理指导、不用处方即可购买的性润滑剂和试验中的新药，包括批准用于治疗其他疾病的药物。这些药物包括激素类药物如睾丸素或雌激素与睾丸素的组合物和近期证明对男性勃起功能障碍有效的心血管药物。这些药物中没有一种被证明是治疗FSD特别有效的。
女性性唤起障碍(FSAD)
性唤起反应包括骨盆血管充血、阴道润滑及外生殖器扩张和膨胀。性唤起障碍引起显著的苦恼和/或与他人接触困难。对配偶性功能障碍进行研究的研究结果显示有大量女性患有性唤起功能障碍；已知又称为女性性唤起障碍(FSAD)。
美国精神病学协会的诊断和统计手册(DSM)IV中将女性性唤起障碍(FSAD)定义为：
“一种持续的或经常发生的无力获得或保持足够的性刺激润滑-膨胀反应直到性活动完成。所述障碍必须引起显著的苦恼或与他人接触困难”
FSAD是非常普遍的影响绝经前、绝经期和绝经后(±HRT)妇女的性机能障碍。与之有联系的伴发疾病是，如抑郁、心血管疾病、糖尿病和UG疾病。
FSAD的第一个后果是缺少充血/膨胀，缺少润滑和缺少愉快的生殖器感觉。FSAD的第二个结果是性欲降低、性交疼痛或获得性高潮困难。
最近有人假设，至少部分具有FSAD症状的病人是由于心血管方面的原因(Goldstein等人，1998)，并且动物数据支持该观点(Park等人，1997)。
正处于疗效研究中的治疗FSAD的新药主要是促进男性生殖器血液循环的勃起功能障碍治疗剂。它们包括两种类型的制剂，口服或舌下给药的药物(阿朴吗啡、酚要拉明、Sildenafil)和经男性尿道注射或给予的以及经女性生殖器局部给予的前列腺素(PGE1-前列地尔)。
本发明寻求提供一种治疗FSD、特别是FSAD的有效的方法。
本发明的精液发现物是利用I:NEP治疗女性FSD(特别是FSAD)的基础。
按照本发明，本发明所述I:NEP称作“本发明活性剂”。
本发明活性剂也可以与一种或多种其他可药用活性剂一起使用。如果存在或与本发明活性剂一起使用，所述其他可药用活性剂可称作“其他活性剂”。这些活性剂中的一种或多种可以是一个或多个I:PDE、不同的I:NEP、I:NPY。下面更详细地讨论活性剂组合物。
如果本发明其他活性剂是I:PDE，那么，在某些实例中，所述PDE是cAMP水解PDE(也可任选是cGMP水解)。术语“水解cAMP”也包括代谢和/或分解cAMP。术语“水解cAMP(也可任选地水解cGMP)”是指除cAMP以外，其他活性剂可水解cGMP。术语“水解cGMP”也包括代谢和/或分解cGMP。然而，可以理解，在本发明某些实例中，其他活性剂不必一定能够水解cGMP。
本文有关活性剂的一般参考可适用于其他活性剂以及本发明活性剂。
按照本发明，本发明活性剂作用于靶向物，优选特异性作用于指定靶向物。该靶向物有时称作“本发明靶向物”。然而，本发明活性剂可作用于一个或多个其他靶向物。这些其他靶有时可称作“其他靶向物”。同样地，如果使用其他活性剂，那么，其他活性剂可以靶向本发明相同的靶向物和/或其他靶向物(不必是本发明活性剂所作用的相同的其他靶向物)。本文将描述这些靶向物。可以理解，本文有关靶向物的一般参考可适用于其他靶向物以及本发明靶向物。
本发明的精液发现物是利用本发明活性剂促进女性生殖器(例如阴道或阴蒂)血流的基础。
在试验中，我们发现FSAD与生殖器血流减少-特别是阴道和/或阴蒂血流减少有关。因此，可通过用血管活性物质促进生殖器血流来治疗妇女的FSAD。在研究中，我们发现，cAMP介导阴道和阴蒂的血管舒张并且可通过升高cAMP水平来促进和/或加强生殖器(例如阴道或阴蒂)的血流。这是另一个精液发现物。
在这方面，以前还没有人提出可用这种方法-即通过直接或间接升高cAMP水平来治疗FSAD。此外，本领域没有学说提出FSAD与cAMP活性和/或水平的有害调节有关或者cAMP对调节阴道和阴蒂血管舒张起作用。因此，本发明甚至非常出人意料。
另外，我们发现，通过使用本发明活性剂，可增加生殖器的充血并治疗FSAD-例如增加阴道的润滑作用和增加阴道和阴蒂的敏感性。
因此，在广义的方面，本发明涉及利用cAMP增效剂来治疗FSD、特别是FSAD。
本发明是有益的，因为它提供一种恢复正常性唤起反应-即增加生殖器血流导致阴道、阴蒂和阴唇充血的方法。这将导致通过血浆渗出物使阴道的润滑作用增加、阴道的顺应性增加和生殖器(例如阴道和阴蒂)的敏感性增加。因此，本发明提供一种恢复或加强正常性唤起反应的方法。
一方面，本发明涉及用于(或当使用时)治疗FSD，特别是FSAD的药物组合物；包含活性剂的药物组合物，所述活性剂能够加强患有FSD特别是FSAD女性生殖器中cAMP的作用；其中，所述活性剂可以与或不与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合；并且其中所述活性剂是本文所定义的本发明活性剂。因此，所述组合物(如同本文所提到的任何其他组合物一样)可进行包装以便于后来在治疗FSD、特别是FSAD中的应用。
另一方面，本发明涉及利用活性剂来生产用于治疗FSD、特别是FSAD的药物(如可药用组合物)的用途；其中所述活性剂能够加强患有FSD特别是FSAD的女性生殖器中cAMP的作用；并且其中所述活性剂是本文所定义的本发明活性剂。
另一方面，本发明涉及治疗女性FSD、特别是FSAD的方法；所述方法包括给予所述女性能够加强生殖器中cAMP作用的活性剂；其中，所述活性剂的量是能够引起所述女性生殖器中cAMP作用加强的量；其中，所述活性剂可以与或不与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合；并且其中所述活性剂是本文所定义的本发明活性剂。
另一方面，本发明涉及用于识别治疗FSD，特别是FSAD的活性剂的测定方法，所述测定方法包括：测定所述活性剂是否可直接或间接加强cAMP的作用；其中在活性剂存在下，cAMP的作用加强说明所述活性剂可用于治疗FSD、特别是FSAD；并且其中所述活性剂是I:NEP。
作为实施例，本发明涉及用于识别可直接或间接加强cAMP的作用以便治疗FSD、特别是FSAD的活性剂的测定方法，所述测定方法包括：将活性剂与能够影响cAMP活性和/或水平的部分接触；并测定cAMP的活性和/或水平；其中在活性剂存在下cAMP的作用加强说明所述活性剂可用于治疗FSD、特别是FSAD；并且其中所述活性剂是I:NEP。
作为另一实施例，本发明涉及用于识别可直接或间接加强cAMP的作用以便治疗FSD、特别是FSAD的活性剂的测定方法，所述测定方法包括：将活性剂与cAMP接触；并测定cAMP的活性；其中在活性剂存在下cAMP的作用加强说明所述活性剂可用于治疗FSD、特别是FSAD；并且其中所述活性剂是I:NEP。
另一方面，本发明涉及一种方法，它包括步骤：(a)、按照本发明进行测定；(b)、识别一种或多种可直接或间接加强cAMP活性的活性剂；和(c)、制备一定量所述一种或多种识别的活性剂；并且其中所述活性剂是I:NEP。
在该方面，例如，可改进在步骤(b)中识别的活性剂以便于把活性增加到最大，然后可重复步骤(a)。这些步骤可重复直至获得所需要活性或药动学图。
因此，另一方面，本发明涉及一种方法，它包括步骤：(a1)、按照本发明进行测定；(b1)、识别一种或多种可直接或间接加强cAMP活性的活性剂；(b2)、修饰一种或多种所述识别的活性剂；(a2)、重复或不重复步骤(a1)；和(c)、制备一定量所述一种或多种识别的活性剂(即那些已经修饰过的活性剂)；并且其中所述活性剂是I:NEP。
另一方面，本发明涉及通过用活性剂体内加强cAMP作用来治疗FSD、特别是FSAD的方法；其中在体外测定方法中，所述活性剂能够直接或间接加强cAMP的作用；其中所述体外测定方法是本发明测定方法；并且其中所述活性剂是I:NEP。
另一方面，本发明涉及活性剂用于制备用于治疗FSD、特别是FSAD的药物组合物中的应用，其中当通过本发明测定方法进行体外测定时，所述活性剂能够直接或间接加强cAMP的作用；并且所述活性剂是I:NEP。
另一方面，本发明涉及用于识别能够治疗FSD(特别是FSAD)的活性剂的动物模型，所述模型包括麻醉的雌性动物并包括测定所述动物骨盆神经受刺激后，其阴道和/或阴蒂血流改变的方法；并且所述活性剂是I:NEP。
另一方面，本发明涉及用于识别能够直接或间接加强cAMP的作用以便治疗FSAD的活性剂的测定方法，所述测定方法包括：给予本发明动物模型活性剂；测定cAMP的任何加强作用和/或所述动物阴道和/或阴蒂血流的增加；并且所述活性剂是I:NEP。
另一方面，本发明涉及一种诊断方法，所述方法包括从雌性动物体内分离出样品；测定所述样品是否包含一种以引起FSD、特别是FSAD的量存在的特种物质，或者测定所述样品的量是否引起FSD、特别是FSAD；其中所述特种物质对所述雌性动物生殖器中cAMP的水平或活性具有直接的或间接的影响；并且其中所述特种物质可通过使用活性剂进行调节以便获得有益的影响；并且所述活性剂是I:NEP。
另一方面，本发明涉及一种诊断组合物或试剂盒，它包括检测分离的雌性动物样品中特种物质的方法；其中所述方法可用于测定所述样品是否包含所述特种物质并且以引起FSD、特别是FSAD的量存在，或者测定所述样品的量是否引起FSD、特别是FSAD；其中所述特种物质对所述雌性动物生殖器中的cAMP水平或活性具有直接或间接影响并且其中所述特种物质可通过使用活性剂进行调节以便获得有益的影响；并且所述活性剂是I:NEP。
为了易于参考，在适宜的章节标题下讨论本发明这些方面和其他方面。然而，每章节下的说法不必限制各特定章节。
优选的方面
优选地，本发明活性剂用于治疗FSAD。
优选地，本发明活性剂是女性生殖器(例如阴道或阴蒂)血管舒张的调节剂。
在一个实施方案中，优选地，本发明活性剂用于口服给药。
在另一实施方案中，本发明活性剂可用于局部给药。
本发明活性剂是I:NEP(有时写成NEPi)。
在某些应用中，优选地，所述活性剂是选择性I:NEP。
在某些应用中，优选地，所述活性剂是I:NEP，其中所述NEP是EC3.4.24.11。
在某些应用中，优选地，所述活性剂是选择性I:NEP，其中所述NEP是EC3.4.24.11。
优选地，本发明活性剂是抑制剂-即它能够显示抑制性功能。
优选地，本发明活性剂具有对cAMP的间接加强作用。或者，在某些应用中，优选地，所述活性剂不具有对cAMP的直接加强作用。可以理解，所述活性剂可能具有对cAMP的间接加强作用，它是通过作用于天然发现和天然定位的直接起作用的活性剂-如天然发现和定位的VIP起作用的。
在某些应用中，本发明活性剂可以与另一种可药用活性剂联合给予。所述联合给药不必在同一时间，更不必说通过同一途径了。联合给予的组合物的实例可能是包含本发明活性剂和其他活性剂的组合物，其中所述其他活性剂可能具有对cAMP的直接加强作用。下面讨论组合物的实例。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂具有对cAMP的间接加强作用。所述其他活性剂的实例包括I:NEP和/或I:NPY。或者，在某些应用中，优选地，所述其他活性剂不具有对cAMP的直接加强作用。可以理解，所述其他活性剂可能具有对cAMP的间接加强作用，它是通过作用于天然发现和天然定位的直接起作用的活性剂-如天然发现和定位的VIP起作用的。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂具有对cAMP的直接加强作用。所述其他活性剂的实例包括I:PDE。
在某些应用中，所述其他活性剂是抑制剂-即能够表现抑制性功能。
在某些应用中，所述其他活性剂是拮抗剂。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是I:PDE(有时写成PDEi)。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是选择性I:PDE。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是I:PDE1或I:PDE2(有时写成I:PDEII或PDEIIi或PDE2i)或I:PDE3或I:PDE4或I:PDE7或I:PDE8，更优选地所述活性剂是I:PDE2。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是选择性I:PDEII(有时写成PDE2)。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是I:NEP(有时写成NEPi)。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是选择性I:NEP。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是I:NEP，其中所述NEP是EC3.4.24.11。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是选择性I:NEP，其中所述NEP是EC 3.4.24.11。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是I:NPY(有时写成NPYi)。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是I:NPYY1或I:NPYY2或I:NPYY5，更优选地，所述活性剂是I:NPY Y1。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是选择性I:NPY。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是I:NPY Y1。
在某些应用中，优选地，所述其他活性剂是选择性I:NPY Y1。
在某些应用中，所述活性剂不引起血压长时间下降(例如在大约5分钟或更长时间内)，或者以一种不引起血压长时间下降的方式给予。在该实例中，如果局部给予所述活性剂，那么，该活性剂可能具有引起血压降低的能力(如通过静脉内给予时)，前提条件是，在局部应用中，所述活性剂通过血流的水平最小。在口服活性剂中，优选地，所述活性剂不引起血压长时间降低。
在优选的方面中，本发明活性剂不引起心率大的改变，或者以一种不引起心率大的改变的方式给予。
治疗
可以领会，本文所有有关治疗的参考包括一种或多种治本治疗、治标治疗和预防治疗。优选地，术语治疗至少包括治本治疗和/或治标治疗。
女性生殖器
按照Gray’s解剖学，C.D.Clemente，第13美国版中提供的定义使用术语“女性生殖器”，即：
“生殖器由内生殖器和外生殖器组成。内生殖器位于骨盆内并且由卵巢、尿管、子宫和阴道组成。外生殖器在泌尿生殖器隔膜表面并且在骨盆弓的下面。它们包括耻骨、大阴唇和小阴唇、阴蒂、前庭、前庭球和较大的前庭腺。”
内源性cAMP
在高度优选的实施方案中，本发明活性剂加强内源性cAMP的作用-如提高内源性cAMP的水平。
术语“内源性cAMP”是指由性刺激(性唤起)产生的cAMP。因此，所述术语不包括不依赖于性驱动升高的cAMP水平。
因此，按照本发明，通过直接或间接加强内源性cAMP信号传导，并因此增加阴道血流/润滑和/或阴蒂血流，促进性唤起反应，来治疗FSAD。因此，本发明治疗方法恢复或加强正常唤起反应。
在本发明治疗方法中，可通过使用NEP抑制剂(EC 3.4.24.11)获得该结果。本文提供动物试验模型。该动物试验模型可用于测定生殖器血流的增加，这是cAMP作用加强的结果。在该动物试验模型中，刺激骨盆神经-引起模拟性唤起/反应生理机能的作用。在这些试验中，本发明活性剂在神经受刺激后，引起血流增加，其增加程度超出对照值。在神经未受刺激的情况下，所述活性剂不具有(或可以忽略的)引起血流增加的作用。典型地，在这些试验中，刺激神经以便增加血流基线。然后，将待试验的(或现有的)活性剂通过系统或局部途径，如通过静脉内、局部或口服途径给予所述动物。与对照值比，血流增加的表明是本发明的活性剂。
性刺激
本发明也包括在性刺激前和/或过程中给予本发明活性剂。术语“性刺激”可以是与“性唤起”同义的。本发明在该方面是有利的，因为它提供系统选择性。天然的级联效应仅发生在生殖器而不在其他区域-例如心脏等。因此，可获得对生殖器的选择性作用。
因此，在发明某些方面中，非常需要有性刺激步骤。我们发现，该步骤可提供系统选择性。术语“性刺激”可以是一种或多种视觉刺激、身体刺激、听觉刺激或思维刺激。
因此，优选地，在性刺激前或过程中给予本发明活性剂，特别是当那些活性剂用于口服给予时。
因此，在该优选的方面中，本发明提供本发明活性剂在生产用于治疗FSAD的药物中的应用；其中所述活性剂能够加强患有FSAD的女性生殖器中cAMP的作用；并且其中所述女性在给予所述药物前或过程中受到性刺激。
优选地，本发明提供本发明活性剂在生产用于治疗FSAD的药物中的应用；其中所述活性剂能够加强FSAD女性生殖器中cAMP的作用；其中所述女性在给予所述药物前或过程中受到过性刺激；并且其中所述药物通过口服途径给予所述女性。
另外，在该优选的方面中，本发明提供治疗女性FSAD的方法；所述方法包括给予所述女性能够加强生殖器中cAMP作用的本发明活性剂；其中所述活性剂量为能够引起所述女性生殖器中cAMP作用加强的量；其中所述活性剂可以与或不与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合；并且其中所述女性在给予所述活性剂前或过程中受到过性刺激。
优选地，本发明提供治疗女性FSAD的方法；所述方法包括给予所述女性能够加强生殖器中cAMP作用的本发明活性剂；其中所述活性剂量为能够引起所述女性生殖器中cAMP作用加强的量；其中所述活性剂可以与或不与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合；其中所述女性在给予所述活性剂前或过程中受到过性刺激；并且其中所述活性剂通过口服途径给予所述女性。
增强cAMP作用
本文所使用的关于cAMP的术语“增强”包括下列任何一种或多种作用：增强cAMP的效力、增加cAMP的水平、增强cAMP的活性、减少AMP降解的水平、减少cAMP抑制的水平。
所述增强作用可以是一种直接作用。直接作用的实例是通过增加其表达的活性上调cAMP的水平。
或者，所述增强作用可以是一种间接作用。该作用的实例是对可能抑制和/或降低cAMP水平和/或活性的物质发挥作用。该作用的另一实例是增强物质的作用，所述物质增强cAMP的效力、增加cAMP的水平、增强cAMP的活性、减少AMP降解的水平或减少cAMP抑制的水平。
其他可作为PcAMP的活性剂的实例为I:PDE，如I:PDEII。
cAMP模拟物
在本发明某些方面中，其他活性剂可作为cAMP模拟物。
本文使用的术语“cAMP模拟物”是指在女性生殖器中以一种与cAMP类似的方式发挥作用(例如具有类似的生物学特征和作用)并且当发挥作用时，具有下列任何一种或多种作用的活性剂：增加cAMP类似物的效力、增加cAMP类似物的水平、增强cAMP类似物的活性、减少cAMP类似物降解的水平、减少cAMP类似物抑制的水平。
cAMP模拟物的实例是毛喉素。我们发现，毛喉素增加阴道和阴蒂的血流并且也可以作为阴道松弛剂。
在优选的方面中，cAMP模拟物通过口服给予。
cAMP激活剂
本文所使用的术语“cAMP激活剂”是指一种在女性生殖器中控制或释放cAMP的物质。所述控制可以是直接的(例如对cAMP本身的作用)或间接的(例如通过激活cAMP)。为了易于参考，我们把这些物质称为AcAMP。
靶向物
根据本发明，本文所使用的术语“靶向物”是指下列任何物质：cAMP、AcAMP、IcAMP或AMcAMP。或者本发明靶向物可称作PcAMP靶。
本发明靶向物和/或其他靶向物可以是编码氨基酸和/或核苷酸的氨基酸序列和/或核苷酸序列和/或负责表达氨基酸和/或核苷酸和/或其调节剂的表达单位。
所述靶向物甚至可以是这样的靶向物的组合。
活性剂
本发明活性剂可以是任何适宜的能够用作PcAMP的活性剂。
所述活性剂(即本发明活性剂和/或其他活性剂)可以是氨基酸序列或其化学衍生物。所述物质甚至可以是有机化合物或其他化学物质。所述活性剂甚至可以是核苷酸序列-它可以是有义序列或反义序列。所述活性剂甚至可以是抗体。
因此，术语“活性剂”包括但不限制于可通过任何适宜的途径获得或生产的化合物，无论是天然的或非天然的。
所述活性剂可通过化合物库设计或获得，它可以包括肽以及其他化合物，如小的有机分子如前导化合物。
作为实例，所述活性剂可以是天然物质、生物学大分子或由生物学物质(如细菌、真菌或动物(特别是哺乳动物)细胞或组织)制备的提取物、有机或无机分子、合成的活性剂、半合成活性剂、结构或功能模拟物、肽、肽模拟物、衍生的活性剂、从全蛋白上断裂下来的肽或通过合成方法(如作为实例，利用肽合成器或通过重组技术或其组合)合成的肽、重组活性剂、抗体、天然或非天然活性剂、融合蛋白或其等同物和突变体、其衍生物或组合物。
本文所使用的术语“活性剂”可以是单一的物质或者它可以是活性剂的组合物。
在某些应用中，如果所述活性剂是有机化合物-例如，如果所述活性剂是I:NEP-那么典型地，所述有机化合物可以包含酰胺基(即-N(H)-C(O)-或者-C(O)-N(H)-)和一个或多个烃基。术语“烃基”是指至少包含C和H并且可以任选地包含一个或多个其他适宜的取代基的基团。所述取代基的实例可以包括卤素-、烷氧基-、硝基-、烷基-、环状基团等。除了所述取代基可能是环状基团外，取代基的组合可形成环状基团。如果烃基包含一个以上C，那么那些碳不是必须彼此连接的。例如，至少两个碳可通过适宜的元素或基团连接。因此，所述烃基可包含杂原子。适宜的杂原子是本领域技术人员熟知的并且包括，例如硫、氮和氧。在某些应用中，优选地，所述活性剂至少包含一个环状基团。在某些应用中，优选地，所述活性剂至少包含一个通过酰胺键连接到另一个烃基上的环状基团。在本文的实施例章节介绍这些化合物的实例。
在某些应用中，如果所述活性剂是有机化合物-例如，如果所述活性剂是I:PDE-那么典型地，所述有机化合物可以包含两个或多个连接的烃基。在某些应用中，优选地，所述活性剂至少包含两个环状基团-任选地其中一个环状基团可以是稠合环的环状结构。在某些应用中，优选地，至少一个环状基团是杂环基。在某些应用中，优选地，所述杂环基在环中至少包含一个N。在本文的实施例章节介绍这些化合物的实例。
在某些应用中，如果所述活性剂是有机化合物-例如，如果所述活性剂是I:NPY-那么典型地，所述有机化合物可以包含两个或多个连接的烃基。在某些应用中，优选地，所述活性剂至少包含两个环状基团-其中一个环状基团可以是稠合环的环状结构。在某些应用中，至少一个环状基团是杂环基。在某些应用中，优选地，所述杂环基在环中至少包含一个N。在本文的实施例章节介绍这些化合物的实例。
所述活性剂可包含卤素基团。“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
所述活性剂可包含一个或多个烷基、烷氧基、链烯基、亚烷基、亚链烯基-它们可以是支链或直链的基团。
所述活性剂可以以可药用盐的形式存在-如酸加成盐或碱盐-或其溶剂化物包括其水合物的形式存在。有关适宜的盐的评论参见Berge等人J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19。
适宜的酸加成盐是由形成无毒盐的酸形成的并且其实例为盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖酸盐、琥珀酸盐、蔗糖盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐。
适宜的碱盐是形成无毒盐的碱形成的并且其实例是钠、钾、铝、钙、镁、锌和二乙醇胺盐。
如果需要，通过将本发明活性剂的溶液与适宜的酸或碱混合可以很容易地制备本发明活性剂的可药用盐。所述盐可从溶液中沉淀出来并且可通过过滤收集或可将溶剂蒸发回收。
所述活性剂可以以多晶型形式存在。
所述活性剂可包含一个或多个不对称碳原子并因此以两种或多种立体异构体形式存在。如果所述活性剂包含链烯基或亚链烯基，也可能存在顺式(E)和反式(Z)异构现象。本发明包括所述活性剂的各种立体异构体并且如果需要，包括其各种互变异构体形式及其混合物。
非对映异构体或者顺式和反式异构体的分离可通过常规技术来完成，例如通过本发明活性剂立体异构体混合物或其适宜的盐或其衍生物的分级结晶、色谱或H.P.L.C.来进行分离。合适时，活性剂的各种对映异构体也可以由相应的光学纯的中间体通过拆分(如使用合适的手性载体来使相应的消旋体进行高效液相层析)或者通过由相应的外消旋体与合适的有光学活性的酸或碱反应形成的非对映异构体进行分级结晶来制备。
本发明也包括活性剂或其可药用盐的所有同位素变体。本发明活性剂或其可药用盐的同位素变体被定义为其中至少一个原子被具有相同原子序号但原子量不同于自然界中通常发现的原子量的原子所替代。可掺入到活性剂及其可药用盐中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素如分别为2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。在药物和/或底物组织分布研究中可以使用活性剂及其可药用盐的某些同位素变体，例如其中掺入放射性同位素如3H或14C的。从其易于制备和检测来说，特别优选的是氚(即3H)和碳-14(即14C)同位素。另外，用同位素如氘(即2H)取代可因更好的代谢稳定性而产生某些治疗方面的优点，例如，增加体内半衰期或减少所需剂量并因此而在某些环境中是优选的。活性剂及其可药用盐的同位素变体一般可通过常规方法使用合适试剂的合适同位素变体来制备。
本领域技术人员会意识到活性剂可由前体药物来衍生。前体药物的例子包括具有某些保护基团并且不具有所述药理活性但可通过某些方式给药(如口服或非胃肠道方式)并且在体内代谢后形成具有药理活性的所述活性剂的那些物质。
也会意识到可以将称作“前体部分”的某些基团(例如在H.Bundgaard，Elsevier，1985“Design of Prodrug”中所描述的，其所公开的内容引入本文供参考)引入活性剂的合适官能团上。这些前体药物也包括在本发明的范围之内。
PcAMP可以完成下列任何一层或多层意思：直接或间接增加cAMP的有效性、直接或间接增加cAMP的水平、直接或间接增强cAMP的活性、直接或间接降低cAMP降解的水平、直接或间接降低cAMP抑制的水平。
优选地，本发明活性剂直接或间接增加患有FSAD的女性生殖器中的cAMP的水平。
更优选地，本发明活性剂直接或间接地选择性地增加患有FSAD的女性生殖器中的cAMP的水平。
更优选地，本发明活性剂直接或间接地选择性地增加cAMP的水平，其中所述cAMP是性唤起诱导的cAMP。
在高度优选的方面，本发明活性剂增加性唤起诱导的cAMP的相对量。
在某些应用中，本发明活性剂选择性地治疗FSAD。
一方面，活性剂可抑制或拮抗合适的靶向物并因此而增加女性生殖器中的cAMP水平。下文中，我们使用术语抑制剂来指抑制剂和/或拮抗剂。
另一方面，活性剂可以活化或激活合适的靶向物并因此而增加女性生殖器中的cAMP水平。下文中，我们使用术语激活剂和上调剂来指激活剂和/或上调剂和/或激动剂。
因此，活性剂可以激活、拮抗、上调或抑制合适的靶向物。
本发明活性剂可以是能够显示一种或多种以上这些特性的单一物质。另外，本发明活性剂可以是能够显示两种或两种以上这些特性的活性剂的组合物。
优选地，活性剂可选择性地激活、选择性地拮抗、选择性地上调或选择性地抑制合适的靶向物。
优选地，活性剂可选择性地激活、选择性地拮抗、选择性地上调或选择性地抑制选择性的合适的靶向物。
活性剂也能够显示一种或多种其他有利的功能特性。例如，本发明活性剂可以增强cAMP的作用，也可以增强cGMP的作用。
在某些应用(如局部应用)中，活性剂也可以显示ACE(血管紧张素转化酶)抑制作用。在本文的实验部分描述了ACE的测定。在某些应用(如特定类型的病人)中，该活性剂(即，也显示ACE抑制作用的)不适于口服给药。
在某些应用中，活性剂也可以显示ECE(内皮转化酶)抑制作用。在本领域中，ECE的测定是公知的。
药物的联合使用
本发明的活性剂可以与一种或多种其他药物活性剂联合使用，其他药物活性剂如PcGMP(磷酸二酯酶5型抑制剂，如Sildenafil，或一氧化氮供体或一氧化氮前体如L-精氨酸或精氨酸酶抑制剂)和/或中枢作用的药物(如，多巴胺受体激动剂如阿朴吗啡或选择性多巴胺D2受体激动剂如PNU-95666或melanocortin受体激动剂，如melanotan II)。在美国专利5945117中可发现阿朴吗啡用作药物的教导。在该文献中，阿朴吗啡经舌下给药。另外，活性剂可以与下列药物联合使用：一种或多种PDE5抑制剂(如，Sildenafil、Vardenafil(Bayer BA 38-9456)和IC351(Cialis，Icos Lilly))、一种或多种一氧化氮供体(如，NMI-921)、一种或多种多巴胺受体激动剂(如，阿朴吗啡、Uprima、Ixsene)、一种或多种杂环胺如在WO00/40226中综述和具体描述的，特别是实施例7、8和9所述的、一种或多种melanocortin受体激动剂(如melanotan II或PT14)、一种或多种钾通道开通剂(如，KATP通道开通剂(如，米诺地尔、尼可地尔))和/或钙激活的钾通道开通剂(如，BMS-204352)、一种或多种α1-肾上腺素受体拮抗剂(如，酚妥拉明、Vasofem、Vasomax)、一种或多种VIP受体激动剂或VIP类似物(如，Ro-125-1553)或VIP片段、一种或多种α-肾上腺素受体拮抗剂与VIP的组合物(如，Invicorp、Aviptadil)、一种或多种α2-肾上腺素受体拮抗剂(如，育亨宾)、一种或多种雌激素、雌激素和甲羟孕酮或甲羟孕酮乙酸盐(MPA)或雌激素和甲基睾酮激素替代治疗剂(如，HRT，特别是妊马雌酮、Cenestin、Oestrofeminal、Equin、Estrace、Estrofem、Elleste Solo、Estring、Eastraderm、EastradermTTS、Eastraderm Matrix、Dermestril、Premphase、Prempro、Prempak、Premique、Estratest、EstratestHS、Tibolone)、一种或多种睾酮替代剂(包括DHEA(脱氢雄烯酮)、睾酮(Tostrelle)或睾酮植入剂(Organon))、一种或多种睾酮/雌二醇、一种或多种雌激素激动剂如Lasofoxifene、一种或多种5-羟色胺受体激动剂或拮抗剂(如，5HT1A、5HT2C、5HT2A和5HT3受体激动剂和拮抗剂；如WO2000/28993中所述的)、一种或多种前列腺素受体激动剂(如，Muse、前列地尔、米索前列醇)、一种或多种purinergic受体激动剂(特别是P2Y2和P2Y4)、一种或多种抗抑郁剂(如，安非他酮(Wellbutrin)、mirrtazapine、奈法唑酮)。
IC351的结构是：
Figure A20041008595500251
如果联合给予活性剂，那么可以同时、分别或顺序给药。
VIP的组合使用
在本发明中，活性剂不是VIP(或者优选不是其类似物或其片段)。然而，在某些实施方案中，本发明的活性剂可与VIP或其类似物或其片段联合给药。
在高度优选的方面，不给予VIP或其类似物或其片段。这是因为已经有报道VIP输注导致显著的心血管副作用如增加心率和降低动脉舒张压(Ottesen1983，1987，1995)。
另外，尽管Ottesen和同事们证明VIP诱导健康受试者阴道血流和润滑的增加，但不清楚VIP产生其作用的机制。在文献中，有VIP通过不同的第二信使系统传递信号的各种例子，如cGMP/鸟苷酸环化酶(Ashur-Fabian，1999)；一氧化碳(CO)/血红素加氧酶(Fan等人，1998)和cAMP/腺苷酸环化酶(Foda，1995；Schoeffter，1985；Gu，1992)。通过近来的一份报告来举例说明，其中描述可通过释放一氧化氮来解释VIP在子宫动脉中如何起血管松驰作用(Jovanovic，1998)。而且，也有证据表明VIP调节在男性泌尿生殖器功能中的一氧化氮(NO)/cGMP(Kim，1994)。
而且，在文献中已经报告在阴道平滑肌细胞培养中VIP对cAMP水平没有影响(参见Traish，A.，Moreland，R.B.，Huang，Y.，等人(1999)：人和兔阴道平滑肌细胞培养的发展：血管活性物质对胞内环核苷酸水平的影响，Mol.Cell Biol.Res.Comm.，2，131-127)。
再者，在进一步的研究中，Ottesen和同事们(参见，Palle，Bredkjaer，Ottesen和Fahrenkrug 1990，Clinical and Experimental Pharmacology andPhysiology第17卷，61-68)报道了，无论给药途径如何，VIP对阴道血流的影响是全身性血管松驰作用而不是局部反应。此外，他们报道了与VIP相关的许多血管副作用-即潮红、低血压和心动过速。
Ki值
在某些应用中，优选地，本发明活性剂(任选与任意的其他活性剂一起)具有低于大约100nM，优选低于大约75nM，优选低于大约50nM，优选低于大约25nM，优选低于大约20nM，优选低于大约15nM，优选低于大约10nM，优选低于大约5nM的Ki值。
Kb值
在某些应用中，优选地，本发明活性剂(任选与任意的其他活性剂一起)具有低于大约100nM，优选低于大约75nM，优选低于大约50nM，优选低于大约25nM，优选低于大约20nM，优选低于大约15nM，优选低于大约10nM，优选低于大约5nM的Kb值。
Ka值
在某些应用中，优选地，本发明活性剂(任选与任意的其他活性剂一起)具有低于大约100nM，优选低于大约75nM，优选低于大约50nM，优选低于大约25nM，优选低于大约20nM，优选低于大约15nM，优选低于大约10nM，优选低于大约5nM的Ka值。
药代动力学
在本发明某些实施方案中，优选地，本发明活性剂(任选与任意的其他活性剂一起)具有-2～+4，更优选-1～+2的logD值。可通过本领域已知的标准方法如J.Pharm.Pharmacol.1990，42：144中所描述的方法测定所述logD值。
此外，在某些实施方案中，优选地，本发明活性剂(任选与任意的其他活性剂一起)具有大于2×10-6cms-1，更优选大于5×10-6cms-1的caco-2流出。可通过本领域已知的标准方法如J.Pharm.Sci79，7，p595-600(1990)，和Pharm。Res.vol 14，no.6(1997)中所描述的方法测定所述caco流出值。
选择性
在某些应用中，优选地，本发明活性剂(任选与任意的其他活性剂一起)对所要求的靶向物具有至少大约100倍的选择性，优选至少大约150倍，优选至少大约200倍，优选至少大约250倍，优选至少大约300倍，优选至少大约350倍的选择性。
在某些应用中，优选地，本发明活性剂(任选与任意的其他活性剂一起)对所要求的靶向物具有至少大约400倍的选择性，优选至少大约500倍，优选至少大约600倍，优选至少大约700倍，优选至少大约800倍，优选至少大约900倍，优选至少大约1000倍的选择性。
化学合成方法
典型地，通过化学合成技术来制备所述活性剂。
活性剂或靶向物或其变体、同源物、衍生物、片段或模拟物可使用合成全部或部分活性剂的化学方法来制备。例如，肽可通过固相技术来合成、从树脂上分开并通过制备性高效液相色谱来纯化(如，Creighton(1983)ProteinsStructures And Molecular Principles，WH Freeman和Co.New York NY)。合成肽的组成可通过氨基酸分析或测序来确证(如，Edma降解方法；Creighton，同上)。
可使用各种固相技术来直接合成活性剂或其变体、同源物、衍生物、片段或模拟物(Roberge JY等人(1995)Science 269：202-204)并使用例如ABI 431A肽合成仪(Perkin Elmer)按照制造商提供的说明可完成自动合成。另外，可在直接合成期间改变包含活性剂或其任意部分的氨基酸序列，和/或使用化学方法将所述氨基酸序列与其他亚单位或其任意部分的序列组合来产生改变的活性剂或靶向物，例如改变的NEP。
在本发明的另一实施方案中，可使用本领域公知的化学合成方法来全合成或半合成活性剂或靶向物或其变体、同源物、衍生物、片段或模拟物的编码序列(参见Caruthers MH等人(1980)Nuc Acids Res Symp Ser 215-23，HornT等人(1980)Nuc Acids Res Symp Ser 225-232)。
模拟物
本文所使用的术语“模拟物”涉及任何对靶向物具有与参照活性剂相同的定性活性和作用的化学物质，包括但不限于肽、多肽、抗体或其他有机化学物质。
化学衍生物
本文所使用的术语“衍生物”或“衍生的”包括活性剂的化学修饰。这类化学修饰的例子是用卤素基团、烷基、酰基或氨基置换氢。
化学修饰
在本发明的一个实施方案中，活性剂可以是化学修饰的活性剂。
活性剂的化学修饰可以增强或降低活性剂和靶向物之间的氢键作用、电荷作用、疏水作用、范德瓦耳斯作用或偶极作用。
一方面，确定的活性剂可作为开发其他化合物的样本(如，模板)。
重组方法
在本发明测定中使用的靶向物通常可通过重组DNA技术制备。
加强cGMP作用
本文所使用的关于cGMP的术语“加强”包括下列任何一种或多种作用：增强cGMP的效力、增加cGMP的水平、增加cGMP的活性、减少cGMP降解的水平、减少cGMP抑制的水平。
所述加强作用可以是一种直接作用。或者它可以是一种继发作用和/或下游作用。
优选地，加强cGMP作用的活性剂对IcGMP和/或AMcGMP(其中cGMP的调节剂对cGMP有不利的影响)起作用，使得活性剂降低和/或消除和/或掩盖和/或转移IcGMP和/或AMcGMP对cGMP的不利影响。
因此，本发明包括一种或多种I:IcGMP和一种或多种I:IcGMP的组合物。一方面，I:IcGMP是I:PDEcGMP。
IcGMP和/或AMcGMP
我们发现cAMP介导生殖器(如，阴道或阴蒂)血流并通过增强cAMP信号传导可在动物模型中增强生殖器(如，阴道或阴蒂)血流。因此，上调/增强cAMP介导血管松驰的活性剂在FSAD治疗中将是有效的。为了便于参考，我们将这些物质称作IcAMP和/或AMcAMP。这里，IcAMP和AMcAMP对cAMP水平或活性具有不利影响。
因此，活性剂可以是I:IcAMP和/或I:AMcAMP中的任何一种或多种。
活性剂可以是能够显示两种或多种这些特性的单一物质。另外，活性剂可以是能够显示一种或多种这些特性的活性剂的组合物。
IcAMP和AMcAMP的例子包括NEP和一种或多种PDE或与其相关的任何成分。相关成分例如可以是受体和/或辅因子。
因此，本发明活性剂可以与I:PDEcAMP、I:NPY(有时写作NPYi)、I:NPY Yn(有时写作NPY Yni)中的一种或多种联合使用。
同样，活性剂可以是能够显示两种或多种这些特性的单一物质。另外，活性剂可以是能够显示一种或多种这些特性的活性剂的组合物。
I:IcAMP和/或I:AMcAMP
根据本发明，我们发现通过使用降低和/或消除和/或掩盖和/或转移和/或防止IcAMP和/或AMcAMP对cAMP不利影响的活性剂来治疗和/或预防FSAD是可能的。甚至活性剂可恢复因IcAMP和/或AMcAMP而降低的cAMP水平。方便起见，我们称这些物质为I:IcAMP和/或I:AMcAMP。这里，I:IcAMP和I:AMcAMP防止或降低对cAMP水平或活性的不利影响。
因此，在一个优选方面，活性剂是I:IcAMP和/或I:AMcAMP，其中AMcAMP对AMcAMP有不利影响。
AcAMP
根据本发明，我们发现FSAD的一个重要原因是在女性生殖器中低水平或低活性的cAMP。
因此，活性剂可以是U:AcAMP。
因此，优选地，本发明的活性剂也能够作为A:AC、A:VIPr、A:VIPn、I:I:VIPr或I:I:VIPn中的任何一种或多种起作用，和/或可与其联合使用。
活性剂可以是能够显示两种或多种这些特性的单一物质。另外，活性剂可以是能够显示一种或多种这些特性的活性剂的组合物。
U:AcAMP
另一方面，另外的靶向物可以是增加cAMP水平的成分。因此，活性剂也可以作为U:AC起作用。
因此，例如本发明活性剂也能够作为U:AcAMP、A:AC、A:VIPr、A:VIPn、I:I:VIPr或I:I:VIPn中的任何一种或多种起作用，和/或可与其联合使用。
例如，靶向物可以是cAMP本身或AC或VIP(或其组合)。
I:IcAMP和/或I:McAMP和/或U:AcAMP的联合使用
另一方面，本发明的活性剂可与cAMP增效剂联合使用。例如，本发明的活性剂可与一种或多种下列物质联合使用：
I:PDEcAMP
I:PDEncAMP
I:NPY
I:NPY Yn
I:NEP
U:AcAMP
A:AC
A:VIPr
A:VIPn
I:I:VIPr
I:I:VIPn
cAMP模拟物
抑制剂
从本发明活性剂方面考虑，本文所使用的术语“抑制剂”意指可降低和/或消除和/或掩盖和/或防止IcAMP和/或McAMP对cAMP不利影响的活性剂。
激活剂
从本发明活性剂方面考虑，本文所使用的术语“激活剂”意指可增加和/或产生和/或暴露和/或升高和/或确保cAMP和/或AcAMP作用的活性剂。激活剂可以起激动剂的作用。
其他活性成分
另一方面，本发明活性剂甚至可以与一种或多种其他活性成分-如一种或多种能够增强cGMP作用的活性剂联合使用。
氨基酸序列
本文所使用的术语“氨基酸序列”是术语“多肽”和/或术语“蛋白质”的同义词。在某些例子中，术语“氨基酸序列”是术语“肽”的同义词。在某些例子中，术语“氨基酸”序列与术语“蛋白质”同义。
氨基酸序列可由合适的原料制备分离，或者可合成制备或通过使用重组DNA技术来制备。
一方面，本发明提供能够在测定中起靶向物作用的氨基酸序列，所述测定用于鉴定能够影响氨基酸序列以便增强cAMP来治疗FSAD的一种或多种活性剂和/或其衍生物。
核苷酸序列
本文使用的术语“核苷酸序列”与术语“多核苷酸”同义。
核苷酸序列可以是来源于基因组的或合成的或重组的DNA或RNA。核苷酸序列可以是代表有义或反义股的双链的或单链的或其组合的。
在某些应用中，优选地，核苷酸是DNA。
在某些应用中，优选地，核苷酸序列使用重组DNA技术来制备(如，重组DNA)。
在某些应用中，优选地，核苷酸序列是cDNA。
在某些应用中，优选地，核苷酸序列在这方面可与天然产生的形式相同。
一方面，本发明提供编码能够在测定(如酵母双杂交测定)中起靶向物作用物质的核苷酸序列，所述测定用于鉴定能够影响所述物质以便增强cAMP作用来治疗FSAD的一种或多种活性剂和/或其衍生物。
技术人员会理解多种不同的核苷酸序列可因遗传密码的简并而编码靶向物。另外，会理解技术人员可使用常规技术制备基本上不影响由本发明核苷酸序列编码的活性的核苷酸取代物，以反映表达靶向物的任意特定宿主生物密码子使用偏好。因此，与在附录序列表中所述的核苷酸序列相关的术语“变体”、“同系物”或“衍生物”包括任何从序列取代的、改变的、修饰的、置换的、缺失的或插入到序列的一种(多种)核酸，条件是所得核苷酸序列编码了本发明的功能性靶向物(或者是本发明的活性剂，只要所述活性剂包含核苷酸序列或氨基酸序列)。
如上所述，就序列的同源性而言，与本文序列表所述的序列相比，优选地至少有75％的同源性，更优选至少85％，更优选至少90％。更优选地有至少95％的同源性，更优选至少98％。可按照上文所述方法来进行核苷酸同源性的比较。优选地序列比较程序是上文所述的GCG Wisconsin Bestfit程序。缺失评分标准有各个相同核苷酸的10分匹配值和各个失配的-9分值。缺失口产生罚分是-50并且缺失口延伸罚分是每个核苷酸-3。
本发明也包括能够与本文所述序列选择性杂交的核苷酸序列，或其任何变体、片段或衍生物，或它们的补体。核苷酸序列长度优选至少15个核苷酸，更优选长度至少为20、30、40或50个核苷酸。这些序列可用作探针，如在诊断试剂盒中。
变体/同源物/衍生物
除了本文所述的具体氨基酸序列和核苷酸序列外，本发明也包括使用其变体、同源物和衍生物。这里，术语“同源性”可等同于“一致性”。
本文中，同源序列被认为包括至少75、85或90％相同的氨基酸序列，优选至少95或98％相同。具体来说，同源性通常应当考虑已知对活性来说必不可少的序列的区域。尽管同源性也可被认为是类似性(即，具有相似化学特性/功能的氨基酸残基)，但本文优选以序列一致性表示同源性。
同源性比较可通过眼来进行，或者常常借助便于使用的序列比较程序来进行。这些可商购的计算机程序可计算两个或多个序列之间的同源性百分数。
对相近的序列可计算出同源性百分数，即，一个序列同其他序列一起对比并且将一个序列中的每个氨基酸与其他序列中的相应氨基酸比较，每次一个残基。这被称为“无缺口”对比。一般来说，该无缺口对比仅仅在较少数目的残基中进行。
尽管这是一种非常简单和一致的方法，但没有考虑使用，例如，在不相同的一对序列中，插入或缺失将使随后的氨基酸残基不能对比，因此，在进行完整对比时可能导致同源性百分数的大大降低。
因此，大多数序列比较方法被设计为进行最适对比，其中考虑了可能的插入和缺失而不过多地罚扣总体同源性的得分。这通过在序列对比中插入“缺口”以尽可能使局部的同源性最高化。
然而，这些较复杂的方法将“缺口罚分”分配到对比中所存在的每个缺口中，这样，对于有相同数目的相同氨基酸来说，有尽可能少缺口-反映两个比较序列间的较高相关性-的序列的对比会比有许多缺口的序列获得较高的分数。“亲族缺口耗费”通常用来为缺口的存在支付较高的费用并且为缺口中每个随后的残基支付较少的罚分。这是最常用的缺口评分系统。当然，高缺口罚分会产生有较少缺口的最适对比。大多数对比程序可改进缺口罚分。然而，使用这种序列比较软件时，优选使用缺失值。例如，使用GCG Wisconsin Bestifit包(见下文)时，氨基酸序列的缺失口罚分对缺口是-12分而对每个延伸是-4分。
所以，最大同源性百分数的计算首先要求进行最适对比，考虑缺口罚分。进行这种对比的合适的计算机程序是GCG Wisconsin Bestifit包(Universityof Wisconsin，U.S.A.；Devereux等人，1984，Nucleic Acids Research12：387)。其他可进行序列比较的软件的例子包括但不限于BLAST包(见Ausubel等人，1999 ibid-Chapter 18)、FASTA(Atschul等人，1990，J.Mol.Biol.，403-410)和GENEWORKS成套比较工具。BLAST和FASTA在不联机和在线检索时均可使用(见Ausubel等人，1999 ibid，7-58到7-60页)。然而，优选使用GCG Bestifit程序。一种新的工具，称作BLAST2序列也可用来比较蛋白质和核苷酸序列(见FEMS Microbiol Lett 1999 174(2)：247-50；FEMSMicrobiol Lett 1999 177(1)：187-8和tatina@ncbi.nlm.nih.gov)。
尽管最终同源性百分数可按一致性来测定，但对比方法本身通常不基于全部配对或全不配对的比较。而是通常使用按类似性评分的标准根据化学类似性或进化的距离来将分数分配给每对比较。这种常用的评分标准的例子是BLOSUM62标准-BLAST成套程序的缺失标准。如果提供的话，GCG WisconsinBestifit程序通常使用公共缺失值或惯用符号比较表(见进一步详细描述的使用者手册)。GCG包优选使用公共缺失值，或在其他软件的情况下使用如BLOSUM62的缺失标准。
一旦软件产生最适对比，计算同源性百分数，优选序列一致性百分数成为可能。软件通常分段进行序列比较并产生数值结果。
序列也可以有缺失、插入或取代的氨基酸残基，这些残基产生沉默改变并产生功能性等同物。考虑氨基酸取代可根据极性、电荷、溶解性、疏水性、亲水性的和/或残基的两亲性的类似性来进行，只要能保持物质的二级结合活性。例如，带负电荷的氨基酸包括天门冬氨酸和谷氨酸；带正电荷的氨基酸包括赖氨酸和精氨酸；并且不带电的极性的具有类似亲水性端基的氨基酸包括亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天门冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。
可制备保守取代物，例如，按下表所示方法。在第二栏相同区域的氨基酸并且优选在第三栏同一行的氨基酸可相互取代：
    脂肪族   非-极性的     GAP
    ILV
  极性-不带电荷的     CSTM
    NQ
  极性-带电荷的     DE
    KR
    芳香族     HFWY
本发明也包括可发生的同源取代(本文所使用的取代和置换均指存在的氨基酸残基与选择性残基的交换)，即，等同取代如用碱性的取代碱性的、用酸性的取代酸性的、用极性的取代极性的氨基酸残基等。也可以发生非同源取代，即，从一类残基取代为另一类或另外包括的非天然氨基酸如鸟氨酸(下文称作Z)、二氨基丁酸鸟氨酸(下文称作B)、正亮氨酸鸟氨酸(下文称作O)、吡啶丙氨酸(pyriylalanine)、噻吩基丙氨酸、萘基丙氨酸和苯基甘氨酸。
置换也可通过非天然氨基酸来进行，这些非天然氨基酸包括：α*和α-二取代的*氨基酸，N-烷基氨基酸*、乳酸*、天然氨基酸的卤代衍生物如三氟酪氨酸*、对氯苯丙氨酸*、对溴苯丙氨酸*、对碘苯丙氨酸*、L-烯丙基甘氨酸*、β-丙氨酸*、L-α-氨基丁酸*、L-γ-氨基丁酸*、L-α-氨基异丁酸*、L-ε-氨基己酸#、7-氨基庚酸*、L-蛋氨酸砜#*、L-正亮氨酸*、L-正缬氨酸*、对硝基-L-苯丙氨酸、L-羟基脯氨酸#、L-硫代脯氨酸*、苯丙氨酸(Phe)的甲基衍生物如4-甲基-Phe*、五甲基-Phe*、L-Phe(4-氨基)#、L-Tyr(甲基)*、L-Phe(4-异丙基)*、L-Tic(1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸)*、L-二氨基丙酸#和L-Phe(4-苯甲基)*。在上文的讨论中(涉及同源或非同源取代)，标志*被用来表示衍生物的疏水特性而#用来表示衍生物的亲水特性，#*表示两亲特性。
改变的氨基酸序列可包括合适的间隔基团，所述基团可插入序列中的任何两个氨基酸残基之间，除氨基酸间隔基团如甘氨酸或β-丙氨酸残基外，包括烷基如甲基、乙基或丙基基团。变体的其它形式包括存在一个或多个类肽形式的氨基酸残基，本领域技术人员会很好地理解。为了避免有疑问，所使用的“类肽形式”指改变的氨基酸残基，其中α-碳取代基在残基的氮原子上而不是α-碳上。制备类肽形式的肽的方法在本领域中是已知的，例如Simon RJ等人，PNAS(1992)89(20)，9367-9371和Horwell DC，Trends Biotechnol.(1995)13(4)，132-134。
杂交
本发明也包括可与本文所述靶向序列杂交的序列的应用-如活性剂是反义序列时。
本文所使用的术语“杂交”应包括“一核苷酸链通过碱基配对与互补链结合的过程”以及在聚合酶链反应(PCR)技术中进行的扩增过程。
能与本文所述核苷酸序列或其补体选择性杂交的本发明核苷酸序列通常与本文所述的相应互补核苷酸序列在至少20个，优选至少25或30，例如至少40、60或100或更多邻近的核苷酸区域有至少75％、优选至少85或90％并且更优选至少95％或98％的同源性。本发明优选的核苷酸序列将包括与本发明序列表SEQ ID No2中所述核苷酸序列优选有至少80或90％同源性的区域并且更优选与本发明序列表SEQ ID No2中所述核苷酸序列有至少95％的同源性。
术语“可选择性杂交的”意指核苷酸序列用作探针时，发现明显高于本底水平下靶核苷酸序列与探针杂交。可发生本底杂交，这是因为例如在被筛选的cDNA或基因组DNA文库中存在其他核苷酸序列。这样，本底暗示由探针和非特异DNA文库成员之间的相互作用所产生信号水平的强度比用靶向DNA所观察的特异性相互作用低10倍，优选低100倍。例如，通过用32P放射标记探针可测量相互作用的强度。
按Berger和Kimmel(1987，Guide to Molecular Cloning Techniques，Methods in Enzymology，Vol 152，Academic Press，San Diego CA)的教导，杂交条件基于核苷酸结合复合物的熔化温度(Tm)，并授予如下文所描述的定义“严格性”。
最大的严格性通常在约Tm-5℃(低于探针Tm5℃)发生；最高的严格性在低于Tm约5℃到10℃；中等严格性在低于Tm约10℃到20℃；并且低严格性在低于Tm约20℃到25℃。本领域技术人员会理解，最大严格性杂交可用来确定或检测相同的核苷酸序列而中等(或低)严格性杂交可用来确定或检测类似的或相关的多核苷酸序列。
在优选方面，本发明包括可在严格性条件下可与本发明核苷酸序列杂交的核苷酸序列(如，65℃和0.1×SSC{1×SSC＝0.15M NaCl，0.015M Na3柠檬酸pH7.0})。本发明核苷酸序列是双链时，分开或组合的双螺旋的双链均包含在本发明中。核苷酸序列是单链时，可以理解该核苷酸序列的互补序列也包含在本发明的范围之内。
可通过各种方法来获得与本发明序列非100％同源性的但落入本发明范围的核苷酸序列。可获得本文所述序列的其他变体，例如通过探查由一定范围的原料制备的DNA文库。另外，可以获得其他病毒/细菌，或同系细胞特别是在哺乳动物细胞(如大鼠、小鼠、牛和灵长类动物细胞)中发现的同系细胞并且这些同系细胞及其片段通常能够与本文序列表中所示的序列进行选择性地杂交。这些序列可通过探查由其他动物种制备的cDNA文库或基因组DNA文库，并且用包含全部或部分本文所述核苷酸序列的探针在中等到高严格性条件下探查这些文库来获得。采用类似的方法获得本发明的同源物种和氨基酸和/或核苷酸序列的等位变体。
使用简并PCR也可获得变体和同源菌株/种，其中使用设计的引物，它靶向于编码本发明序列之中的保守氨基酸序列的变体和同源体范围之内的序列。可以预测保守序列，例如通过对比来自数种变体/同源体的氨基酸序列。序列对比可使用本领域已知的计算机软件来进行。例如广泛使用的GCG WisconsinPileUp程序。在简并PCR中使用的引物将包含一个或多个简并部位并且将在低于用针对已知序列的单个序列引物来克隆序列所使用的严格性条件下使用。
另外，这些核苷酸序列可通过特征序列如本发明序列表SEQ ID No2中所述的核苷酸序列定点诱变来获得。例如，序列要求沉默密码子改变而使密码子适于特定的表达核苷酸序列的宿主细胞时，这是有用的。其他序列改变可能是需要的，以便引入限制酶识别部位，或者改变核苷酸序列编码的蛋白质的活性。
可使用本发明的核苷酸序列来产生引物如PCR引物、选择性扩增反应的引物，探针如用揭示标记通过常规方法使用放射性或非放射性标记物标记的，或者可以将核苷酸序列克隆到载体中。这些引物、探针和其他片段的长度将至少有15个，优选至少20个，例如至少25、30或40个核苷酸，并且也包括在本文所使用的本发明术语核苷酸序列中。
可通过重组、合成方法或通过本领域技术人员可用的任何方法来制备本发明的核苷酸序列如DNA多核苷酸和探针。它们也可通过常规技术来克隆。
总而言之，引物将通过合成方法来制备，包括分步制备所需核酸序列，一次一个核苷酸。使用自动技术完成制备在本领域是容易的。
较长的核苷酸序列通常使用重组方法来制备，例如使用PCR(聚合酶链反应)克隆技术。这包括制备位于需要克隆的靶向序列的侧翼区的一对引物(如约15到30个核苷酸的)，使引物与从动物或人细胞获得的mRNA或cDNA接触，在使所需区域扩增的条件下进行聚合酶链反应(PCR)，分离扩增的片段(如，通过在琼脂糖凝胶上纯化反应混合物)并且回收扩增的DNA。可以设计包含合适的限制酶识别位点的引物，以便将扩增的DNA克隆到合适的克隆载体中。
由于遗传密码的固有简并性，编码基本上相同或功能等同的氨基酸序列的其它DNA序列可用于克隆和表达靶序列。本领域普通技术人员应该理解，对于某些表达系统，产生具有非天然存在的密码子的靶序列是有益的。特定原核生物或真核生物的宿主首选的密码子(Murray E et al(1989)Nuc Acids Res 17：477-508)可供选择，例如提高靶向物表达率或者产生具有所需特性的(如具有较长半衰期的重组RNA转录物)、而不是产生由天然存在的序列产生的转录物的密码子。
表达载体
用作靶向物或者表达靶向物的核苷酸序列可结合到重组的可复制载体中。载体可用于复制或表达相容性宿主细胞中的或来源于相容性宿主细胞的核苷酸序列。可使用包括启动子/增强子和其它表达调节信号的控制序列来控制表达。可使用原核生物的启动子和真核生物的细胞中的功能性启动子。可以使用组织特异性或刺激特异性启动子。也可使用包括来源于两种或多种上述的不同启动子的序列成分的嵌合启动子。
根据使用的序列和/或载体，通过宿主重组细胞表达核苷酸序列产生的蛋白可被分泌出来或包含于细胞内。可用信号序列设计编码序列，信号序列指导特定的原核生物或真核生物的细胞膜直接分泌编码序列物质。
融合蛋白
靶氨基酸序列可以融合蛋白形式生产，例如借助萃取和纯化。融合蛋白伴侣的实例包括谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、6xHis、GAL4(DNA结合和/或转录活化结构域)和β-半乳糖苷酶。在融合蛋白伴侣和所需的蛋白序列之间包括蛋白分解位点以除去融合蛋白序列也是很方便的。优选融合蛋白不影响靶向物的活性。
融合蛋白可包含与本发明的物质融合的抗原或抗原决定簇。在本发明的实施方案中，融合蛋白可以是包含用作佐剂的物质的非天然存在的融合蛋白，所述佐剂可对免疫系统产生一般性刺激作用。抗原或抗原决定簇可连接到所述物质的氨基或羧基端。
在本发明的另一个实施方案中，氨基酸序列可连接到异源序列上以编码融合蛋白。例如，为筛选肽文库中能够影响所述物质活性的活性剂，编码表达可被市售抗体识别的异源表位的嵌合物质是有用的。
抗体
在本发明的一个实施方案中，本发明的活性剂可以是抗体。此外，或者在供替代的选择中，靶向物可以是抗体。此外在供替代的选择中，检测靶向物的手段可以是抗体。
抗体可通过标准技术，例如用本发明的物质免疫接种或用噬菌体展示文库进行生产。
为实现本发明的目的，除非另有说明，术语“抗体”包括但不限于多克隆的、单克隆的、嵌合的、单链的、Fab片断、由Fab表达文库产生的片断以及其模拟物。这类片断包括保持其与靶物质、Fv、F(ab’)和F(ab’)2片断以及单链抗体(scFv)的结合活性的整个抗体的片断、包含抗体的抗原结合位点的融合蛋白和其它合成蛋白。再者，抗体及其片断可以是人源化抗体。中和抗体，即抑制所述物质多肽生物活性的那些抗体尤其优选用于诊断和治疗。
如果需要多克隆抗体，将所选择的哺乳动物(如小鼠、兔、山羊、马等)用带有表位的免疫原性多肽免疫，所述表位可由本发明确定的活性剂和/或物质获得。根据宿主的种类，可使用各种佐剂增强免疫反应。这类佐剂包括，但不限于弗氏佐剂；矿物凝胶，如氢氧化铝；和表面活性物质，如溶血卵磷脂、多聚醇类、聚阴离子、肽、油性乳液、匙孔血蓝蛋白和二硝基苯酚。BCG(卡介菌)和小棒杆菌(Corynebacterium parvum)可能是有用的人佐剂，为了激发防御系统，如果将纯化的多肽物质施用于期望免疫的个体，就可以使用这类人佐剂。
收集被免疫动物的血清并按照已知方法处理。如果包含针对由本发明确定的活性剂和/或物质获得的表位的多克隆抗体的血清还含有针对其它抗原的抗体，可通过免疫亲和色谱纯化多克隆抗体。生产和加工多克隆抗血清的技术是本领域已知的。为制备这类抗体，本发明还提供用作人或动物的免疫原的本发明的多肽或其半抗原化为另一种多肽的片断。
针对可由本发明确定的活性剂和/或物质获得的表位的单克隆抗体也可由本领域普通技术人员方便地生产。通过杂交瘤制备单克隆的通用方法是熟知的。产生抗体的无限增殖细胞系可通过细胞融合产生；也可通过其它技术，例如用致癌DNA直接转化B淋巴细胞或者用EB(Epstein-Barr)病毒转染来产生。可筛选各种性质，即同型和表位亲和性的针对眼框表位的单克隆抗体。
针对本发明物质和/或确定活性剂的单克隆抗体可用任何通过培养的传代细胞系生产抗体分子的技术来制备。这些技术包括，但不限于最初由Koehler和Milstein描述的杂交瘤技术(1975 Nature 256：495-497)、人B细胞杂交瘤技术(Kosbor et al(1983)Immunol Today 4：72；Cote et al(1983)Proc Natl Acad Sci 80：2026-2030)和EBV-杂交瘤技术(Cole et al(1985)Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R Liss Inc，pp 77-96)。此外，也可使用为生产“嵌合抗体”开发的技术，将小鼠抗体基因剪接到人抗体基因上以获得具有适合抗原特异性和生物活性的分子(Morrison etal(1984)Proc Natl Acad Sci 81：6851-6855)；Neuberger et al(1984)Nature 312：604-608；Takeda et al(1985)Nature 314：452-454)。或者，用于生产单链抗体的技术(US Patent No.4946779)也适用于生产特定的单链抗体物质。
抗体，无论是单克隆抗体还是多克隆抗体，它们都针对可由本发明确定的活性剂和/或物质获得的表位，并且是中和抗体的那些抗体在被动免疫治疗中具有作用。单克隆抗体尤其可用于增加抗独特型抗体。抗独特型抗体是带有需要针对其加以保护的所述物质和/或活性剂的“内影像”的免疫球蛋白。增加抗独特型抗体的技术是本领域公知的。这些抗独特型抗体在治疗中也有用。
也可通过在体内在淋巴细胞群中诱导产生抗体或者通过筛选重组的免疫球蛋白文库或分布板中的高度特异结合的试剂来产生抗体(如Orlandi等人于1989年在Proc Natl Acad Sci 86：3833-3837以及Winter G和Milstein C于1991年在Nature 349：293-299中公开的)。
也可生产含有用于与物质结合的特异结合位点的抗体片断。例如，这类片断包括，但不限于可通过胃蛋白酶消化抗体分子产生的F(ab’)2和可通过还原F(ab’)2片断的二硫键生成的Fab片断。或者，可构建Fab表达文库以快速和容易地识别具有所需特异性的单克隆Fab片断(Huse WD et al(1989)Science256：1275-1281)。
报道基因
种类众多的报道基因可用于本发明的分析方法(以及筛选)中，优选的报道基因提供可方便地检测的信号(如通过光谱学检测)。例如，报道基因可编码催化改变光吸收性的反应的酶。
报道基因分子的实例包括，但不限于β-半乳糖苷酶、绿荧光蛋白(greenfluorescent protein)、萤光素酶、氯霉素、乙酰转移酶、β-葡糖醛酸糖苷酶、外切葡聚糖酶和葡糖淀粉酶。或者，可将放射性标记的或荧光标记的核苷酸掺入刚生成的转录物中，之后当所述转录物与寡核苷酸探针结合时被识别。
在一个优选的实施方案中，通过报道基因产物，例如β-半乳糖苷酶的酶活性测定报道基因分子的产生。
检测和测定靶向物表达的各种方法，例如通过使用对蛋白具有特异性的多克隆或单克隆抗体是本领域已知的。实例包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)和荧光激活细胞分选术(FACS)。优选的是使用与多肽的两个非干扰性表位反应的单克隆抗体的双位点的基于单克隆的免疫测定法，但也可使用竞争性结合测定法。记载这些及其它测定方法的文献有Hampton R etal，(1990)Serological Methods，A Laboratory Manual，APS Press，St PaulMN和Maddox DE et al(1983)，J Exp Med 15 8：121 1)。
各种标记物和结合技术是本领域普通技术人员已知的，它们可用于各种核酸和氨基酸测定中。产生用于检测多核苷酸序列靶向物的标记杂交物或PCR探针的方法包括微量标记、切口平移、末端标记或使用标记核苷酸的PCR扩增。或者，可将编码序列或其任何部分克隆到用于产生mRNA探针的载体中。这类载体是本领域已知的并有市售，它们可通过加入适合的RNA聚合酶，例如T7、T3或SP6和标记的核苷酸用于体外合成RNA探针。
有许多公司，例如Pharmacia Biotech(Piscataway，NJ)，Promega(Madison，WI)和US Biochemical Corp(Cleveland，OH)提供用于这些方法的商品试剂盒和方案。适合的报道基因分子或标记物包括放射性核素、酶、荧光剂、化学发光剂或生色剂以及底物、辅因子、抑制剂和磁粉等。教导了这些标记物使用的专利包括US-A-3817837；US-A-3850752；US-A-3939350；US-A-3996345；US-A-4277437；US-A-4275149和US-A-4366241。也可如US-A-4816567中所示生产重组免疫球蛋白。
定量特定分子表达的其它方法包括放射性标记(Melby PC et al 1993 JImmunol Methods 159：235-44)或生物素酰化(Duplaa C et al 1993 AnalBiochem 229-36)核苷酸、共扩增对照核苷酸和将实验结果内插到标准曲线上。通过以ELISA格式运行分析可加速多种样品的定量，其中目标低聚物存在于不同稀释液中并通过分光光度分析和测热反应进行快速定量。
无论是否存在标记基因的表达都认为所需的基因总是存在的，其存在性和表达应被证实。例如，如果将核苷酸序列插入到标记基因序列中，含有该核苷酸序列的重组细胞可通过标记基因功能的缺乏来识别。或者，在单一启动子的控制下，可用靶编码序列与标记基因成串排列。应答诱导或选择的标记基因的表达一般也表示靶向物的表达。
或者，包含编码靶向物的序列和表达靶向物编码区域的宿主细胞可通过本领域普通技术人员已知的各种方法来识别。这些方法包括，但不限于DNA-DNA或DNA-RNA杂交和蛋白生物测定或免疫测定技术，所示技术包括基于膜、基于溶液或基于芯片的核酸或蛋白测定和/或定量分析技术。
cAMP活性/水平的一般性分析
受试物质增强cAMP的能力可通过测量靶向物水平的相关增加或减少来测定。另外，或者供替代的选择是，受试物质增强cAMP的能力可通过测量cAMP水平的有关增加来测定。例如，可采纳Smith等人于1993年的教导(Appl.Biochem.Biotechnol.41：189-218)。另外有市售的用于测定cAMP的免疫测定试剂盒(如Amersham International，Arlington Heights，IL andDuPout，Boston，MA)。在试验部分给出了适宜的cAMP测定的具体方法。
筛选
在任何一种药物筛选技术中，任何一种或多种适合的靶向物—例如氨基酸和/或核苷酸序列都可用于识别PcAMP。用于该试验的靶向物可以游离于溶液中、固定在固体载体上、固定于细胞表面或定位于细胞内。该靶向物甚至可以存在于动物模型中，其中所述靶向物可以是外源性靶向物或引入的靶向物。动物模型是非人动物模型。可以测量靶向物活性的消失或者靶向物与受试活性物质之间的结合复合物的形成。
可采用基于1984年9月13日出版的Geysen的欧洲专利申请84/03564中描述的药物筛选方法。概括地说，在一种固体底物，例如塑料大头针或一些其它表面上合成大量不同的小分子肽试验化合物。将肽试验化合物与适合的靶向物或其片断反应并洗涤。然后检测结合物—例如通过适当采用本领域熟知的方法。也可将纯化的靶向物也可直接包被到培养板上用于药物筛选技术。或者，可使用非中和抗体捕获肽并使其固定到固体支持物上。
本发明还构思了使用竞争性药物筛选分析，其中能特异性地与靶向物结合的中和抗体与试验化合物竞争结合靶向物。
另一种高通量筛选(HTS)具有适宜的所述物质结合亲和性的活性剂的筛选技术是WO 94/03564中具体描述的方法。
预期本发明的分析方法适于小规模和大规模筛选试验化合物以及定量分析。
因此，本发明还涉及一种识别增强cAMP作用的活性剂的方法，该方法包括将适合的靶向物与所述活性剂接触，然后测定cAMP的活性和/或水平。
本发明还涉及一种识别在雌性生殖器中选择性增强cAMP作用的活性剂的方法，该方法包括将来源于雌性生殖器的适合靶向物与所述活性剂接触，然后测定cAMP的活性和/或水平。
本发明还涉及一种识别增强cAMP作用的活性剂的方法，该方法包括将适合的靶向物与所述活性剂接触，然后测定靶向物的活性和/或水平。
本发明还涉及一种识别在雌性生殖器中选择性增强cAMP作用的活性剂的方法，该方法包括将来源于雌性生殖器的适合靶向物与所述活性剂接触，然后测定靶向物的活性和/或水平。
在一个优选的方面，本发明的筛选至少包括下列步骤(这些步骤的顺序不一定与此相同)：(a)进行体外筛选以确定候选活性剂是否具有相关活性(例如，NEP调节作用，如NEP来源于狗的肾脏)；(b)进行一种或多种选择性筛选以确定所述候选活性剂的选择性(例如，看所述活性剂是否也是ACE抑制剂-如使用本文描述的测定方法)；和(c)对所述候选活性剂进行体内筛选(例如，使用功能性动物模型)。一般来说，如果所述候选活性剂通过了(a)筛选和(b)筛选，才进行(c)筛选。
诊断
本发明还提供用于检测FSAD的易感性的诊断组合物或试剂盒。在此，所述组合物或试剂盒应包括能够表明一种或多种靶向物存在或者不存在于试验样品中的物质。试验样品优选由雌性生殖器或者其分泌物或其中含有的分泌物获得。
例如，诊断组合物可包含任何一种本文提及的核苷酸序列或其变体、同源物、片断或衍生物，或者能与任一种所述核苷酸序列的整体或部分杂交的序列。
为提供诊断疾病的基础，应由靶向物建立正常或标准值。这可以如下完成：通过在本领域熟知的适于复合物形成的条件下，将取自正常者(动物或人)的体液或细胞提取物与靶向物的抗体结合。通过将形成的标准复合物与系列稀释的阳性对照进行比较来确定其量，在阳性对照中是将已知量的抗体与已知浓度的纯化靶向物结合。然后，可将由正常样品获得的标准值与由取自可能患FSAD的被诊断对象的样品获得值进行比较。标准值与诊断值之间的偏差确定了病症的存在。
靶向物本身或其任何部分可构成诊断和/或治疗化合物的基础。用于诊断目的时，靶向物多核苷酸序列可用于检测和定量与FSAD有关的症状、病症或疾病中的基因表达。
编码多核苷酸序列的靶向物可用于诊断由靶向物表达导致的FSAD。例如，编码靶向物的多核苷酸序列可用于来自活检或尸检组织或者生物体液的杂交或PCR测定以检测靶向物表达的异常性。这类定性或定量方法的形式可包括Southern或northern测定、斑点印迹或其它基于膜的技术；PCR技术；浸渍杆、针或芯片技术；以及ELISA或其它多种常规技术。所有这些技术都是本领域公知的，并且实际上也是许多市售诊断试剂盒的基础。
在临床试验或监测个体患者的治疗中，这类测定可用于评价特定治疗方案的效果并可用于动物研究，临床试验，监测个别病人的治疗中。为提供诊断疾病的基础，应建立靶向物表达的正常或标准曲线。这可如下完成：通过在适于杂交或扩增的条件下，将取自正常者(动物或人)的体液或细胞提取物与靶向物或其部分结合。通过将由正常者得到的值与系列稀释的阳性对照进行比较来定量标准杂交，阳性对照与该实验相同，其中使用已知量的纯化的靶向物。可将由正常样品获得的标准值与由取自可能患与编码靶向物的序列表达有关的病症或疾病的被诊断对象的样品获得值进行比较。标准值与诊断值之间的偏差确定了病症的存在。如果疾病确诊，施用现有的治疗剂，可形成治疗曲线或数据。最终，按常规重复该测定以评价治疗数据是否趋向或恢复正常或标准。可采用连续治疗曲线来表明经过数天或数月治疗后的治疗效果。
一方面，本发明涉及靶向物多肽或其变体、同源物、片断或衍生物以生产抗靶向物的抗体的用途，所述抗体可例如用于诊断性地检测和定量FSAD状态中的靶向物水平。
本发明还提供用于测定细胞和组织中的靶向物的诊断分析方法和试剂盒，所述方法和试剂盒包括可用作阳性对照的纯化的靶向物和抗靶向物的抗体。这些抗体可用于基于溶液、膜或组织的技术中以测定与靶蛋白的表达或者其缺失表达或其变体、同源物、片断或衍生物的表达有关的任何疾病或病症。
分析方法
诊断组合物和/或方法和/或试剂盒可用于下列技术，包括但不限于：竞争性和非竞争性分析、放射免疫测定、生物发光和化学发光测定、荧光分析、夹心法分析、免疫放射分析、斑点印迹、包括ELISA的酶联测定、微滴板、用于快速检测尿或血液的抗体包被的条带或检测尺、免疫组织化学和免疫细胞化学。
例如，免疫组织化学试剂盒也可用于探测生殖器组织中的NEP活性。免疫组织化学试剂盒可同时使用光学和电子显微镜探测组织切片和培养细胞中的NEP，所述显微镜是既可用于研究和也可用于临床目的的。这类信息可用于诊断并且还可能用于治疗目的，以检测和/或预防和/或治疗FSD，例如FSAD。对于每一种试剂盒，建立测定的范围、灵敏度、准确性、可靠性、特异性和再现性。分析内和分析间差异建立于顶替分析和活性分析的标准曲线上的20％、50％和80％的点处。
探针
本发明的另一方面是提供核酸杂交或PCR探针，它们可测定(尤其是能够选择性选择的那些)多核苷酸序列，包括基因组序列、编码靶编码区域或密切相关的分子，例如等位基因。探针的特异性，即它是否由高度保守的、保守的或非保守的区域或结构域衍生，以及杂交或扩增的严格性(高度、中等或低度)将决定探针是否仅识别天然存在的靶编码序列或相关的序列。用于测定相关核酸序列的探针选自靶向物家族成员的保守的或高度保守的核苷酸区域，这类探针可用于简并探针库中。为测定相同的核酸序列，或者哪里需要最高特异性，核酸探针应选自靶向物多核苷酸的非保守性核苷酸区域或独特区域。本文采用的术语“非保守性核苷酸区域”是指对本文公开的靶向物编码序列具有独特型的核苷酸区域，而不是存在于相关家族的成员中。
如US-A-4683195、US-A-4800195和US-A-4965188中所述的PCR提供了基于靶序列的寡核苷酸的其它用途。这些低聚物通常是化学合成的，但它们也可通过酶促生成或由重组的原料制备。在识别特定基因或病症的最佳条件下使用的低聚物一般包含两个核苷酸序列，一个是有义取向的(5’→3’)，另一个是反义取向的(3’←5’)。相同的两种低聚物、嵌套低聚物的集合或甚至简并低聚物库可在不太严格的条件下用于测定和/或定量密切相关的DNA或RNA序列。
用于编码靶向物的核酸序列也可用于产生先前所述的杂交探针，用于测绘内源性基因组序列图。可采用公知的技术将所述序列定位到特定的染色体或染色体的特定区域中。这些包括原位杂交到染色体扩展图上(Verma et al(1988)Human Chromosomes：A Manual of Basic Techniques，Pergamon Press，NewYork City)、流式分选的染色体制品、或人工构建的染色体，例如YAC、人工细菌染色体(BAC)、细菌PI构成物或单一染色体cDNA文库。
原位杂交的染色体制品和物理定位技术，例如使用建立染色体标记物的连锁分析在扩展基因图中没有价值。基因图的实例可参见科学(Science)(1995；270：410f和1994；265；1981f)。将一个基因放置到另一种哺乳动物的染色体中通常可揭示相关标记物，即使特定人染色体的号码或臂是未知的。可通过物理定位将新的序列定位到染色体臂或其局部上。这给用定位克隆或其它基因发现技术研究疾病基因的观察者提供了有价值的信息。一旦通过遗传连锁到特定的基因组区域上粗略地确定了疾病或综合症，定位到所述区域的任何序列可代表供进一步研究的相关或调节基因。本发明的核苷酸序列还可用于测定正常者、携带者或感染者之间的因易位、翻转等的染色体定位差异。
宿主细胞
与本发明有关的术语“宿主细胞”包括可包含活性剂靶向物的任何细胞。
本发明的另一个实施方案提供用本身是靶向物或表达靶向物的多核苷酸转化或转染的宿主细胞。所述多核苷酸优选载于用于复制和表达多核苷酸的载体中，所述多核苷酸是靶向物或用来表达靶向物。宿主细胞应选择与所述载体相容的，例如可以是原核生物(如细菌)、真菌、酵母或植物细胞。
革兰氏阴性菌大肠杆菌(E.coli)被广泛用作异源基因表达的宿主。然而，大量异源蛋白质趋于在细胞内累积。随后从大肠杆菌的胞内蛋白质中纯化所需蛋白质，该纯化有时存在困难。
与大肠杆菌相对照，芽孢杆菌属细菌也非常适于作为异种宿主，因为它们能使蛋白质分泌进入培养基中。其它适于作为宿主的细菌是链霉菌属和假单胞菌属的细菌。
根据编码本发明的多肽的多核苷酸的性质，和/或进一步处理所表达的蛋白质的可取性，真核生物宿主，例如酵母或其它真菌是优选的。一般来说，酵母细胞优于真菌细胞，因为它们更易于操作。但是，某些蛋白质很难从酵母细胞中分泌出来，或者在某些情况下，未进行正确的加工(如，酵母中的过度葡糖基化)。在这些情况下，应选择不同的真菌宿主生物。
本发明范围内适宜的表达宿主的实例是真菌，例如曲霉属真菌(如EP-A-0184438和EP-A-0284603中描述的那些)和木霉属的种类；细菌，例如芽孢杆菌属的种类(如EP-A-0134048和EP-A-0253455中描述的那些)、链霉菌属和假单胞菌属的种类；以及酵母，例如克鲁维氏酵母(如EP-A-0096430和EP-A-0301670中描述的那些)和酵母属的种类。例如，典型的表达宿主可选自黑曲霉(Aspergillus niger)、黑曲霉变种(Aspergillus niger var.tubigenis)、黑曲霉变种(Aspergillus niger var.awamori)、棘孢曲霉(Aspergillus aculeatis)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、米曲霉(Aspergillus orvzae)、Trichoderma reesei、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、乳克鲁维氏酵母(Kluyveromyces lactis)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
可使用适合的宿主细胞—例如酵母、真菌和植物宿主细胞进行翻译后修饰(如肉豆蔻酰化、糖基化、平截、laptidation以及酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸磷酰化)，按需赋予本发明的重组表达产物以最佳生物活性。
生物
与本发明有关的术语“生物”包括可包含由其获得的靶向物和/或产物的任何生物。生物的实例可包括真菌、酵母或植物。
与本发明有关的术语“转基因生物”包括包含所得靶向物和/或产物的任何生物。
宿主细胞/宿主生物的转化
如前面所示，宿主生物可以是原核生物或真核生物。适宜的原核生物宿主的例子包括大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。有关原核生物宿主转化的教导在本领域文献中有许多记载，例如参见Sambrook等人(分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning：A Laboratory Manual)，第2版，1989年，Cold SpringHarbor Laboratory Press)和Ausubel等人(分子生物学现行方法(CurrentProtocols in Molecular Biology)，1995，John Wiley & Sons，Inc.)。
如果使用原核生物宿主，转化前需要对核苷酸序列加以适当修饰，例如除去内含子。
在另一个实施方案中，转基因生物可以是酵母。这种情况下，酵母也被广泛地用作异源基因表达的载体。酿酒酵母具有悠久的工业应用历史，包括其用于异源基因表达。有关酿酒酵母中的异源基因的表达参见Goodey等人的综述(1987，Yeast Biotechnology，D R Berry et al，eds，pp401-429)和King等人的综述(1989，Molecular and Cell Biology of Yeasts，E F Walton andG T Yarronton，eds，pp 107-133，Blackie，Glasgow)。
酿酒酵母十分适于异源基因表达的原因有数种。首先，它对人是非病原性的，它不会产生某些内毒素。第二，经过几个世纪的各种目的的商业探索，它具有使用安全的悠久历史。这使大众广为接受。第三，广泛的商业应用和致力于该微生物的研究使人们掌握了大量关于酿酒酵母的遗传学和生理学以及大规模发酵特性的知识。
E Hinchcliffe E Kenny撰写了酿酒酵母中异源基因表达原理的综述(1993，“作为表达异源基因载体的酵母”，Yeasts，Vol 5，Anthony H Rose and JStuart Harrison，eds，2nd edition，Academic Press Ltd.)。
可利用几种类型的酵母载体，包括整合载体和自主复制质粒载体，所述整合载体需要与宿主基因组重组来保持。
为制备转基因酵母，通过将本发明的核苷酸序列插入酵母中指定用于表达的构建物中制备表达构建物。已开发了数种类型的用于异源蛋白表达的构建物。构建物含有与本发明核苷酸序列融合的在酵母中有活性的启动子，通常使用酵母来源的启动子，例如GAL1启动子。通常使用酵母来源的信号序列，例如编码SUC2信号肽的序列。酵母中的有活性的终止子终止表达系统。
为转化酵母，已开发了数种转化方案。例如本发明的转基因酵母可通过下列教导制备：Hinnen等人(1978，Proceedings of the National Academy ofSciences of the USA 75，1929)；Beggs，J D(1978，Nature，London，275，104)；和Ito，H等人(1983，J Bacteriology 153，163-168)。
用各种选择性标记物选择转化的酵母细胞。在用于转化的标记物中有许多自养标记物，例如LEU2、HIS4和TRP1，以及主要的抗生素抗性的标记物，例如氨基糖甙类抗生素标记物，如G418。
另一种宿主生物是植物。构建遗传修饰的植物的基本原理是将遗传信息插入植物基因组中以使插入后的遗传物质保持稳定。已有数种用于插入遗传信息的技术，两种主要的原理是直接引入遗传信息和通过使用载体系统引入遗传信息。通用技术的综述参见Potrykus的文章(Annu Rev Plant Physiol Plant MolBiol[1991]42：205-225)和Christou的文章(Agro-Food-Industry Hi-TechMarch/April 1994 17-27)。有关植物转化的其它技术可参见EP-A-0449375。
因此，本发明还提供一种用核苷酸序列转化宿主细胞的方法，所述核苷酸序列本身是靶向物或用于表达靶向物。可在适于表达和适于从细胞培养物中回收所述编码的蛋白质的条件下培养用核苷酸序列转化的宿主细胞。取决于所用的序列和/或载体，通过重组细胞产生的蛋白质可被分泌出来或被包含在细胞内。本领域普通技术人员应该理解，可用信号序列设计包含编码序列的表达载体，其可通过原核生物或真核生物的细胞膜直接分泌编码序列。其它重组构建物可将编码序列连接到编码多肽结构域的核苷酸序列上，这样有助于可溶性蛋白的纯化(Kroll DJ等人(1993)DNA Cell Biol 12：441-53)。
药物组合物
本发明还提供一种药物组合物，它含有治疗有效量的本发明活性剂和可药用载体、稀释剂或赋形剂(包括它们的组合)。
药物组合物可以以人或兽用药形式用于人或动物，它们一般含有一种或多种可药用稀释剂、载体或赋形剂。用于治疗用途的可接受载体或稀释剂是药物领域公知的，并且记载于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，MackPublishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985)。药物载体、赋形剂或稀释剂的选择应考虑计划的给药途径和标准的药物实践。药物组合物除含有载体、赋形剂或稀释剂外，还可含有一种或多种任何适宜的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂、增溶剂。
防腐剂、稳定剂、颜料和甚至芳香剂也可加到药物组合物中。防腐剂的实例包括苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸酯。也可使用抗氧剂和悬浮剂。
根据不同的给药系统，可以有不同的组成/配方。例如，本发明的药物组合物可以配制为使用微型泵或通过粘膜途径给药的，例如呈鼻喷雾剂或吸入气雾剂或可摄取溶液形式，或者通过例如静脉内、肌内或皮下途径经非胃肠途径给药，其中将组合物配制为注射剂形式。或者，制剂可被设计为同时通过两种途径给药的形式。
当活性剂通过胃肠粘膜经粘膜给药时，在通过胃肠道期间活性剂应能保持稳定；例如活性剂应能耐受蛋白水解的降解作用，在酸性pH下是稳定的并且能耐受胆汁的洗涤作用。
如果合适，药物组合物可以栓剂或阴道栓形式通过吸入给药，以洗剂、溶液、霜剂、软膏或细粉形式局部给药，通过使用皮肤贴剂给药，以含有赋形剂如淀粉或乳糖的片剂形式、以仅含活性剂或含有活性剂与赋形剂的胶囊或卵形剂形式、或者以含有矫味剂或着色剂的酏剂、溶液或悬浮液形式口服给药，或者它们可通过非胃肠途径，例如静脉内、肌内或皮下注射给药。对于非胃肠给药，组合物最好以灭菌水溶液形式给药，该溶液可含有其它物质，例如足以使该溶液与血液等渗的盐或单糖。对于颊或舌下给药，组合物可以常规方式配制的片剂或锭剂形式给药。
对于某些实施方案，活性剂也可与环糊精结合使用。环糊精已知用于与药物分子形成包合物和非包合物的复合物。形成药物-环糊精复合物可改变药物分子的溶解度、溶解速率、生物利用度和/或稳定性。药物-环糊精复合物一般用于大多数剂型和给药途径。作为与药物直接复合的可替代的选择是，环糊精可被用作辅助添加剂，例如作为载体、稀释剂或增溶剂。最常用的是α-、β-和γ-环糊精，适合的例子记载于WO-A-91/11172、WO-A-94/02518和WO-A-98/55148。
在一个优选的实施方案中，本发明的活性剂系统给药(例如口服、经颊、舌下)，更优选口服给药。
因此，活性剂是适于口服给药的形式。
对于某些实施方案，使用时活性剂优选不作用于中枢神经系统。
对于某些实施方案，使用时活性剂优选是经外周发挥作用的。
给药
术语“给药”包括通过病毒或非病毒技术传递。病毒传递机制包括，但不限于腺病毒载体、腺伴随病毒(AAV)载体、疱疹病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体和杆状病毒载体。非病毒传递机制包括脂质介导的转染、脂质体、免疫脂质体、lipofectin、阳离子表面两亲物(CFA)和它们的组合。
本发明的活性剂可以仅以其本身给药，但是通常是以药物组合物形式给药-例如该活性剂与适于目的给药途径和标准药学实践的药物赋形剂、稀释剂或载体混合。
例如，活性剂可以以片剂、胶囊、卵形剂、酏剂、溶液或悬浮液形式(如经口服或局部)给药，它们可含有矫味剂或着色剂，用于活性剂的立即释放、延迟释放、调节释放、持续释放、脉冲释放或控制释放。
片剂可含有赋形剂，例如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙和甘氨酸；崩解剂，例如淀粉(优选玉米、土豆或木薯淀粉)、淀粉乙醇酸钠、交联羧甲基纤维素钠和某些复合硅酸盐；和制粒粘合剂，例如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(MPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。另外，还可包括润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸、二十二烷酸甘油酯和滑石。
类似形式的固体组合物也可用作明胶胶囊的填充剂。与此有关的优选赋形剂包括乳糖、淀粉、纤维素、奶糖或高分子量聚乙二醇。对于水性悬浮液和/或酏剂，活性剂可与各种甜味剂或矫味剂、着色物质或颜料，与乳化剂和/或悬浮剂以及与稀释剂例如水、乙醇、丙二醇和甘油或者它们的组合混合。
给药(传递)途径包括，但不限于下列的一种或多种：口服(例如以片剂、胶囊或可摄取的溶液形式)、局部、粘膜(如以鼻喷雾剂或吸入气雾剂形式)、鼻、非胃肠(如通过注射形式)、胃肠道、脊髓内、腹膜内、肌内、静脉内、子宫内、眼内、皮内、颅内、气管内、阴道内、脑室内、小脑内、皮下、眼用(包括脉络膜基底内或房内)、透皮、直肠、颊、阴道、硬膜外和舌下。
应该理解，并非所有的活性剂都需通过相同的途径给药。同样，如果组合物含有一种以上的活性成分，则这些活性成分可通过不同的途径给药。
如果本发明的活性剂经非胃肠给药，给药的实例包括下列的一种或多种：静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、脑室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌内或皮下施用活性剂；和/或采用输液技术施用。
对于非胃肠给药，活性剂最好以无菌水溶液形式使用，该溶液可含有其它物质，例如足以使该溶液与血液等渗的盐或葡萄糖。如果需要，水溶液应适宜地缓冲(优选至pH3-9)。采用本领域普通技术人员熟知的标准制药学技术，在无菌条件下很容易制备适宜的非胃肠制剂。
如上所示，本发明的活性剂可经鼻内或通过吸入给药，通常以干粉吸入器形式或使用适合的推进剂由加压容器、泵或喷雾器将气雾剂喷雾使用，所述推进剂是，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氢氟烷烃(如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134ATM)或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷(HFA 227EATM))、二氧化碳或其它适合的气体。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过传递计量量的阀门来确定。加压容器、泵喷嘴或喷雾器可内装活性化合物的溶液或悬浮液(如，用乙醇和推进剂的混合物作为溶剂)，其中可另外含有润滑剂，如脱水山梨醇三油酸酯。用于吸入器或吹入器使用的胶囊或管壳剂(例如由明胶制备)可配制为含有活性剂与适合的粉末基质，如乳糖或淀粉的粉末混合物。
或者，活性剂可以以栓剂或阴道栓形式给药或者可以以凝胶、水凝胶、洗剂、溶液、霜剂、软骨或细粉形式局部给药。活性剂还可例如使用皮肤贴剂经皮或透皮给药。它们还可通过肺或直肠途径给药。它们还可通过眼途径给药。对于眼科应用，所述化合物可配制成等渗的、pH调节的、无菌盐水的微粒子悬浮液形式，或者优选配制为等渗的、pH调节的、无菌盐水的溶液形式，其中可任选地混合有防腐剂，例如氯苄烷鎓。或者，它们可被配制成软膏，例如使用凡士林。
对于皮肤的局部应用，活性剂可配制成适合的软膏形式，其中含有悬浮或溶解在例如与一种或多种下列物质的混合物中的活性成分：矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，活性剂可悬浮或溶解在下列的一种物质或多种物质的混合物中配制为适合的洗剂或霜剂：矿物油、脱水山梨醇一硬脂酸酯、聚乙二醇、液体石蜡、吐温60、鲸蜡基酯蜡、鲸蜡基硬脂醇(cetearyl alcohol)、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。
本发明的组合物可通过直接注射给药。
对于某些应用，活性剂优选通过口服给药。
对于某些应用，活性剂优选经局部给药。
剂量水平
一般，医生将决定最适于个体患者的实际剂量。对任一特定患者的具体剂量水平和给药频率可根据包括下列的多种因素发生变化：使用的具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间长短、患者的年龄、体重、健康状况、性别、饮食、给药方式和时间、排泄速率、联合用药、具体症状的严重程度和正施行的个体治疗。本发明的活性剂和/或药物组合物可按照每天1-10次，例如每天1或2次的治疗方案给药。
对于人类患者的口服和非胃肠给药，活性剂的每日剂量水平可以是单次剂量或分成几次剂量。
根据需要，活性剂可以以0.01-30mg/kg体重，例如0.1-10mg/kg，更优选以0.1-1mg/kg体重的剂量给药。自然，本文列举的剂量是平均情况下的例子。因此，对于具体情况，当然可以接受更高或更低的剂量范围。
制剂
活性剂可配制成药物组合物，例如使用本领域已知的技术将其与一种或多种适合的载体、稀释剂或赋形剂混合。
下面描述一些非限制性制剂的例子。
制剂1：用下列成分制备片剂：
                                     重量/mg
活性剂                               250
微晶纤维素                           400
二氧化硅，雾化的                     10
硬脂酸                               5
总计                                 665
将各成分混合并压制成每片重665mg的片剂。
制剂2：如下制备静脉内制剂：
活性剂                               100mg
等渗盐水                             1,000ml
药用活性剂盐
活性剂可以以可药用盐的形式给药。通常，如果合适，可药用盐可容易地用所需的酸或碱来制备。盐可以从溶液中沉淀出来，经过滤收集或者可通过蒸发溶剂来回收。
动物试验模型
可使用体内模型来观察和/或设计治疗FSAD的疗法或治疗剂。可使用模型观察各种工具/先导化合物对指示性唤起反应的各种参数的影响。这些试验动物模型可用于本发明的分析中。动物试验模型是非人的动物试验模型。
现有有许多可以使用的血管性雌性性功能障碍(FSAD)的动物模型。
例如，已有记载侵入性动物模型的文献(例如，参见Park et al.，1997)。这里，在正常和动脉粥样硬化的雌性兔中，在骨盆神经刺激后可直接记录阴道和阴蒂的血液动力学反应。在正常或FSAD动物中都可观察cAMP增效剂的体内效果。
例如，已有记载非侵入性动物模型的文献(例如，参见Goldstein等人的综述，1998；Laan等人，1998)。这里，脉冲多普勒超声波检查法用作检测阴道和阴蒂动脉中血流变化的方法。该模型可用于观察药理学施用血管扩张剂期间的血管形成效果。
可使用的其它非侵入性技术包括阴道光体积描记法，该方法提供了定量测量阴道粘膜充血的方法；以及阴道热清除技术，该技术基于通过测量从保持于恒温的阴道内探针转移走的热量来记录阴道血流变化的原理。
性唤起动物模型
在研究中，我们开发了一种稳定再现的性唤起生理模型。该模型使用麻醉的兔并使用激光多普勒技术监测生殖器的血流，同时常规性地记录心血管参数。我们能够测定在有或没有试验物质存在下由骨盆神经刺激或输注VIP引起的阴道(甚至阴蒂)血流的微小变化。
我们相信，我们的动物模型直接反映了临床数据。因此，该模型可通过例如测量阴蒂或阴道血流的增加用于研究治疗FSAD的候选活性剂。
雌性性唤起的生理学测量
依据本发明，可使用数种不同的技术测量阴蒂和阴道的血流。例如，可使用阴道光体积描记法、阴道热清除技术、阴蒂和阴道反差增强MRI、阴蒂/外阴激光多普勒脉冲成像和阴蒂超声波检查法。
阴道润滑的定量测量还可以通过本领域已知的技术-例如(a)阴道塞在刺激前后的重量，和(b)测量阴道液体的pH值。对于后者，阴道的正常滞留酸性介质变得更具为碱性，当在性唤起过程中发生液体渗出时，接近血液的pH值。
NEP(中性内肽酶)
按照本发明，靶向物是PcAMP靶，其中PcAMP靶是NEP。
编码NEP的核苷酸序列和氨基酸序列在文献中有记载。本文给出的序列表中列出了某些序列。
一方面，NEP是NEP(EC 3.4.24.11)(也称为脑啡肽酶或内肽酶-2)。这里，我们发现了人和兔阴道中的NEP EC 3.4.24.11 mRNA和表达蛋白质。
这里，我们相信在包括患FSAD的那些女性中，VIP被NEP EC 3.4.24.11降解。因此，NEP抑制剂将增强性唤起期间释放的VIP的内源性血管舒张作用。这可对FSAD产生治疗作用，例如通过增加阴道充血。我们发现NEP EC3.4.24.11的选择性抑制剂增强由骨盆神经刺激和VIP引起的生殖器的(如阴道的或阴蒂的)血流增加。此外，选择性NEP抑制剂增强VIP和神经介导的离体阴道壁的松弛。
A.Mckusick等在http：//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm上发表了有关NEP的背景技术。下列有关NEP的信息节选于该网站。
“在人急性淋巴细胞性白血病(ALL)的诊断中，普通急性淋巴细胞性白血病(CALLA)抗原是一种重要细胞表面标记。它存在于前B表型的白血病细胞中，代表了85％的ALL情况。CALLA不限于白血病细胞，发现它还存在于多种正常组织中。CALLA是一种在肾脏中含量尤其丰富的糖蛋白，它存在于肾脏的近端肾小管的刷状缘和肾小球上皮中。Letarte等人(1998)克隆了编码CALLA的cDNA，显示出由cDNA序列得到的氨基酸序列与人的膜相关中性内肽酶(NEP；EC3.4.24.11)、也被称为脑啡肽相同。NEP在疏水性残基的氨基一侧切割肽并使数种肽激素失活，所述激素包括胰高血糖素、脑啡肽、P物质、神经降压素、催产素和缓激肽。通过cDNA转染测定，Shipp等人(1989)证实了CALLA是一类功能性中性内肽酶，以前它们被称为脑啡肽酶。Barker等人(1989)证实了编码100-kD II型跨膜糖蛋白的CALLA基因存在于大于45kb的单拷贝中，大于45kb的单拷贝不在表达细胞表面CALLA的恶性肿瘤中重新排列。通过研究体细胞杂交将基因定位到人的染色体3上，原位杂交发现位于3q21-q27。Tran-Paterson等人(1989)还通过用人-啮齿类动物的体细胞杂合物的Southern印迹测定使基因定位于染色体3上。D’Adamio等人(1989)证实了CALLA基因跨度大于80kb并由24个外显子组成。”
I:NEP
如上所述，活性剂可以是任何可作为I:NEP起作用的适宜活性剂。
下面描述了鉴别和/或研究I:NEP的适宜分析系统的具体内容。
下面的综述文章中讨论了I:NEP：
Pathol.Biol.，46(3)，1998，191.
Current Pharm.Design，2(5)，1996，443.
Biochem.Soc.Trans.，21(3)，1993，678.
Handbook Exp.Pharmacol.，104/1，1993，547.
TiPS，11，1990，245.
Pharmacol.Rev.，45(1)，1993，87.
Curr.Opin Inve.Drugs，2(11)，1993，1175.
Antihypertens.Drugs，(1997)，113.
Chemtracts，(1997)，10(11)，804.
Zinc Metalloproteases Health Dis.(1996)，105.
Cardiovasc.Drug Rev.，(1996)，14(2)，166.
Gen.Pharmacol.，(1996)，27(4)，581.
Cardiovasc.Drug Rev.，(1994)，12(4)，271.
Clin.Exp.Pharmacol.Physiol.，(1995)，22(1)，63.
Cardiovasc.Drug Rev.，(1991)，9(3)，285.
Exp.Opin.Ther.Patents(1996)，6(11)，1147.
下列文献中公开了I:NEP：
EP-509442A
US-192435
US-4929641
EP-599444B
US-884664
EP-544620A
US-798684
J.Med.Chem.1993，3821.
Circulation 1993，88(4)，1.
EP-136883
JP-85136554
US-4722810
Curr.Pharm.Design，1996，2，443.
EP-640594
J.Med.Chem.1993，36(1)，87.
EP-738711-A
JP-270957
CAS#115406-23-0
DE-19510566
DE-19638020
DP-830863
JP-98101565
EP-733642
WO9614293
JP-08245609
JP-96245609
WO9415908
JP05092948
WO-9309101
WO-9109840
EP-519738
EP-690070
J.Med.Chem.(1993)，36，2420.
JP-95157459
Bioorg.Med.Chem.Letts.，1996，6(1)，65.
下列文献中公开了优选的I:NEP：
EP-A-0274234
JP-88165353
Biochem.Biophys.Res.Comm.，1989，164，58.
EP-629627-A
US-77978
Perspect.Med.Chem.(1993)，45.
EP-358398-B
I:NEP的优选实例选自下列结构式：
EP-358398-B
I:NEP的优选实例选自下列结构式：
Figure A20041008595500581
Figure A20041008595500601
更优选的I:NEP选自下列结构式：
更优选的I:NEP选自下列结构式：
Figure A20041008595500631
按照实验部分(在下的)所示的教导制备这些化合物。测试这些化合物的活性，发现它们在增强cAMP中有用，因此用于治疗FSAD。在实验部分(在下的)给出了有关这些化合物的一些实验数据。
NEP分析
由犬、大鼠、兔和人肾皮质制备可溶性(NEP)中性内肽酶制品及其分析。
由肾皮质获得可溶性NEP并通过测量切割NEP底物Abz-D-Arg-Arg-Leu-EDDnp生成其荧光产物Abz-D-Arg-Arg的速率测定其活性。
实验方法：
1、材料
所有的水均是去离子的双蒸水。
1.1组织
人肾脏    IIAM(Pennsylvania.美国)
大鼠肾脏
兔肾脏
犬肾脏
1.2匀化介质
100mM甘露醇和20mM Tris@pH7.1
室温下，在1升水中稀释2.42g Tris(Fisher T/P630/60)并用6M盐酸将pH调至7.1。往其中加入18.22g甘露醇(Sigma M-9546)。
1.3Tris缓冲液(NEP缓冲液)
在950ml水中稀释50ml 50mM的Tris pH7.4(Sigma T2663)。
1.4底物(Abz-D-Arg-Arg-Leu-EDDnp)
购自SNPE，将其以粉末形式贮存于-20℃下。通过将该底物轻轻地(不能进行涡旋或声波处理)再悬浮于Tris缓冲液中制备2mM储备液。将该2mM的储备液分成每份600μl，在-20℃下贮存至多一个月。(Medeiros，M.A.S.，Franca，M.S.F.et al.，(1997)，Brazilian Journal of Medical andBiological Research，30，1157-1162)。
1.5总产物
将相应于100％底物转化为产物的样品加到培养板上以测定底物转化的百分数。通过将1ml 2mM底物与20μl酶储备液在37℃下保温24小时形成总产物。
1.6终止溶液
用NEP缓冲液制备300μM膦酰二肽(Phosphoramidon)(Sigma R7385)储备液并将其以每份50μl贮存于-20℃下。
1.7二甲基亚砜(DMSO)。
1.8氯化镁-MgCl2.6H2O(Fisher MO600/53)。
1.9黑色96孔平底测定板(Costar 3915)。
1.10Topseal A(Packard 6005185)。
1.11离心管
2、特殊仪器
2.1 Sorvall RC-5B离心机(SS34 GSA转子，预冷却到-4℃)。
2.2 Braun miniprimer搅拌机。
2.3 Beckman CS-6R离心机。
2.4 Fluostar galaxy。
2.5 Wesbart 1589振荡保温箱。
3、方法
3.1组织制备
3.2采用Booth，A.G.&Kenny，A.J.(1994)Biochem.J.142，575-581中的方法，由肾皮质获得犬、大鼠、兔和人的NEP。
3.3在室温下，使冷冻的肾脏融化并从髓切下皮质。
3.4将皮质切碎，并用Braun miniprimer(2.2)使其在约10倍体积的匀浆缓冲液(1.2)中匀浆。
3.5将氯化镁(1.8)(20.3mg/gm组织)加到该匀化物中并在冰水浴中搅拌15分钟。
3.6在Becknan离心机(2.3)中，将匀化物以1,500g(3,820rpm)离心12分钟后，将上清液移至新的离心管中，弃去沉淀。
3.7在Sovall离心机(2.1)中，将上清液以15,000g(12,100rpm)离心12分钟，弃去上清液。
3.8将残留沉淀顶部的浅粉层取出并再悬浮于含氯化镁的均化缓冲液中(对于1g组织，使用含9mg氯化镁的5ml缓冲液)。
3.9在Becknan离心机(2.3)中，将悬浮液以2,200g(4,630rpm)离心12分钟后，弃去沉淀。
3.10在Sovall离心机(2.1)中，将上清液以15,000g(12,100rpm)离心12分钟，弃去上清液。
3.11将最终的沉淀再悬浮于含氯化镁的均化缓冲液中(对于1g组织，使用含0.9mg氯化镁的0.5ml缓冲液)。用Braun miniprimer(2.2)得到均匀的悬浮液。然后以每份100μl冷冻用以测定NEP活性。
4.0NEP活性测定
通过其切割NEP特异性肽底物的能力测定预先等分的NEP的活性。
4.1制备4％DMSO/NEP缓冲溶液(96ml NEP缓冲液中含4ml DMSO)。
4.2使底物、总产物、酶和膦酰二肽储备液在冰上融化。
4.3往每个孔中加入50μl 4％ DMSO/NEP缓冲溶液。
4.4以1∶40的比例稀释2mM底物储备液，制成50μM溶液。往每个孔中加入100μl 50μM的底物溶液(终浓度为25μM)。
4.5加入50μl的系列酶稀释液以引发反应(通常使用1∶100，1∶200，1∶400，1∶800，1∶1600和1∶3200的稀释液)。往空白孔中加入50μl NEP缓冲液。
4.6以1∶80的比例稀释2mM总产物溶液，制成25μM溶液。将200μl 25μM的产物加到一块新测定板的前四个孔中。
4.7将测定板在37℃下在振荡保温箱中保温60分钟。
4.8以1∶100的比例将300μM的膦酰二肽储备液稀释至300nM。通过加入100μl 300nM膦酰二肽溶液并于37℃下在振荡保温箱中保温20分钟，使反应终止后，在Fluostar(ex320/em420)上读取数据。
5、NEP抑制测定
5.1使底物、总产物、酶和膦酰二肽储备液在冰上融化。
5.2用100％DMSO制备化合物储备液并以1∶25的比例在NEP缓冲液中稀释，得到4％DMSO溶液。所有进一步的稀释都在4％DMSO溶液中进行(96ml NEP缓冲液中含4ml DMSO)。
5.3将50μl化合物一式两份地加到96孔培养板中，将50μl 4％ DMSO/NEP缓冲液加到对照和空白孔中。
5.4以1∶40的比例在NEP缓冲液中稀释2mM底物储备液，制成50μM溶液(275μl 2mM底物用10.73ml缓冲液稀释足够1块测定板使用)。
5.5在NEP缓冲液中稀释酶储备液(由活性检测确定)。
5.6以1∶80比例在NEP缓冲液中稀释2mM总产物储备液，制成25μM溶液。将200μl该溶液加到另一块测定板的前四个孔中。
5.7以1∶1000的比例稀释300μM膦酰二肽储备液，制备300nM储备液(11μl膦酰二肽用10.99ml NEP缓冲液稀释)。
5.8往96孔测定板的各孔中加入下列成分：
将表中的试剂加到96孔测定板中。
化合物/DMSO Tris缓冲液 底物 NEP酶 总产物
样品 2μl化合物 50μl 100μl 50μl 无
对照 2μl DMSO 50μl 100μl 50μl 无
空白 2μl DMSO 100μl 100μl 无 无
总产物 2μl DMSO 无 无 无 200μl
5.9加入NEP酶引发反应后，于37℃在振荡保温箱中保温1小时。
5.10通过加入100μl 300nM膦酰二肽溶液并于37℃在振荡保温箱中保温20分钟，使反应终止后，在Fluostar(ex320/em420)上读取数据。
6、计算
在有或没有化合物的存在下测定NEP酶的活性，并以百分数表示。
％对照活性(酶的转化数)：
Figure A20041008595500671
抑制剂的％活性：
Figure A20041008595500672
以对照的％表示的活性：
Figure A20041008595500673
将％活性(对照的％)对化合物浓度作S形剂量-反应曲线并在Excel中用LabStats拟合曲线计算IC50。
PDE(磷酸二酯酶)
按照本发明，其它靶向物可以是另一种PcAMP靶，例如PDE(磷酸二酯酶)，尤其是水解cAMP的PDE(并任选地水解cGMP)。
已知环核苷酸，例如cAMP和cGMP是重要的细胞内第二信使。环核苷酸磷酸二酯酶-另外也称为PDE-是催化环核苷酸降解的一类酶，因此它们是调节环核苷酸浓度的细胞成分之一。
最近几年，根据底物亲和性和辅因子需求定义了至少七种PDE酶(例如PDEI-PDEVII)以及这些酶的许多亚型(Beavo JA and Reifsnyder DH，TrendsPharmacol.Sci.11：150[1990]；Beavo J，In：环核苷酸磷酸二酯酶：结构、调节作用和药物作用，Beavo J and Housley MD(Eds.).Wiley：Chihester，pp.3-15[1990])。
PDE的实例包括：PDEI，一种Ca2+/钙调蛋白依赖性PDE；PDEII，一种cAMP和cGMP刺激的PDE；PDEIII，一种cGMP抑制的PDE；PDEIV，一种高亲和性cAMP特异性PDE；和PDEV，一种cGMP特异性PDE。PDEI等有时也被称为I型PDE等或1型PDE等。
每种PDE家族可包含两种或多种同工型(即，它们可以是两种或多种PDE同功酶)。例如，在大鼠中，与果蝇Dunce基因同源的哺乳动物PDE IV(ChenCN et al，Proc.Nat.Acad.Sci.(USA)83：9313[1986])已知具有四种同工型(Swinnen JV et al.，Proc.Nat.Acad.Sci.(USA)86：5325[1989])。还已知人PDEs也以同工型形式存在并具有剪接变体。例如，1990年报道了单核细胞中的PDEIV的人同工型的克隆(Livi GP et al.，Mol.Ce...Bio.，10：2678[1990])。再例如，其它研究者独立克隆了PDEIV的三种剪接变体，它们是新命名的hPDEIV-B1、hPDEIV-B2和hPDEIV-B3。
有关环核苷酸磷酸二酯酶的教导参见US-A-5932423和US-A-5932465。
有关其它环核苷酸磷酸二酯酶-即CN PCDE8的教导可参见WO-A-97/35989。根据WO-A-97/35989，CN PCDE8具有两种同功酶，它们是新命名的CN PCDE8A和CN PCDE8B。在本领域中，术语“同功酶”有时也称作“同工型”。
根据WO-A-97/35989的记载，已鉴别出多种不同PDE的抑制剂，一些正进行临床评估。例如PDEIII抑制剂被开发为抗血栓形成剂、抗高血压剂和用于治疗充血性心衰的强心剂。咯利普兰，一种PDEIII抑制剂，已被用于治疗抑郁；其它PDEIII抑制剂正进行作为抗炎药的评估。咯利普兰还显示出抑制脂多糖(LPS)诱导的α-TNF，α-TNF在体外显示出增强HIV-1复制的作用。因此，咯利普兰可抑制HIV-1复制(Angel et al 1995 AIDS 9：1137-44)。另外，根据其抑制α-TNF、β-TNF和γ-干扰素产生的能力，咯利普兰在脑脊髓炎的治疗中表现出有效性(多发性硬化的实验动物模型(Sommer et al，1995 NatMed 1：244-248))并可有效治疗迟发性运动障碍(Sasaki et al，1995 Eur JPharmacol 282：71-76)。
按照WO-A-97/35989，还描述了用于治疗支气管哮喘和其它呼吸疾病的非特异性PDE抑制剂，例如茶碱；以及用于间歇性跛行和糖尿病引发的其它外周血管疾病的己酮可可碱。据认为，在呼吸疾病的治疗中，茶碱作用于呼吸道平滑肌以及具有抗炎或免疫调节能力(Banner et al 1995 Respir J 8：996-1000)；并认为其中茶碱通过抑制CN PDE cAMP和cGMP的水解起作用(Banneret al 1995 Mondaldi Arch Chest Dis 50：286292)。已知阻断α-TNF产生的己酮可可碱可抑制HIV-1复制(Angel et al supra)。Beavo 1995 supra中列出了CN PDE抑制剂的名称。
据认为，选择性PDE抑制剂及其同功酶和亚型将产生更有效的治疗作用，同时具有更少的副作用。例如，参见Wieshaar RE等人(J.Med.Chem.，28：537[1985])、Giembycz MA(Biochem.Pharm.，43：2041[1992])以及Lowe JA和Cheng JB(Drugs of the Future，17：799-807[1992])的综述。
因此，对于某些应用需要对一种类型的PDE具有选择性抑制作用。
Victor A.Mckusich等人在http：//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm上发表了有关PDE的背景技术。下列有关PDE2或cGMP兴奋的PDE的信息节选于该网站。
“环核苷酸充当介导各种细胞对胞外信号，例如激素、光和神经递质的反应的第二信使。环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)通过调节细胞中环核苷酸的浓度在信号转导中起作用。哺乳动物细胞含有多种PDE，根据其底物亲和性以及对辅因子和抑制药物的选择敏感性，它们可分为7组。这7组是：(I)Ca2+/钙调蛋白依赖性PDE；(II)cGMP刺激的PDE；(III)cGMP抑制的PDE；(IV)cAMP特异性PDE；(V)cGMP特异性PDE；(VI)光受体PDE；和(VII)高度亲和的、cAMP特异性的。从氨基酸序列可清楚地看出，所有这些组别的PDE都包含相关的区域，这些区域被认为是催化区域，在不同组别之间约由30％的序列是相同的。同组成员之间关系更密切；在整个编码区域，它们有60-80％的序列是相同的。
Michaeli等人(1993)建立了一种用于分离编码cAMP磷酸二酯酶的cDNA的高选择性功能筛选法，该方法通过补偿同时缺乏内源性cAMP PDE基因、PDE1和PDE2的酿酒酵母中的缺陷进行。采用该功能筛选法，从人成胶质细胞瘤cDNA文库中分离对应于3种编码cAMP特异性PDE的人基因的三组cDNA。其中两种基因与果蝇’dunce’cAMP特异性PDE有密切关系。第三种基因(Michaeli等人(1993)称为HCP1)编码一种新的cAMP特异性PDE。HCP1的氨基酸序列与所有环核苷酸PDE的催化区域的序列有关。但它仍是一种不具体cAMP特异性PDE组成员的其它性质的高亲和性cAMP特异性PDE。HCP1的PDE活性对cGMP或者cGMP可抑制性PDE的其它抑制剂不敏感。HCP1的生物化学和药理学性质使Michaeli等人(1993)认为它是从前未发现的环核苷酸PDE组中的一员，它们被命名为第VII组。Northern印迹分析表明在人的骨骼肌中存在高水平的HCP1 RNA。
通过Southern印迹分析，Milatovich等人(1994)将HCP1定位于染色体8；通过对包含染色体8的不同区域的杂交体细胞的研究，他们认识了对8q13-q22的分配。Han等人(1998)通过原位荧光杂化使PDE7A基因定位于8q13。通过种间逆代杂交，他们使小鼠Pde7A基因定位于染色体3的远区。”
Jennifer P.Macke等人在http：//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm上发表了有关PDE2的背景技术。下列有关cGMP兴奋的PDE2的信息节选于该网站。
“Rosman等人(1997)克隆了相应于PDE2A的cDNA。PDE2A编码预定分子量为106kD的941个氨基酸的多肽。该蛋白质序列的90％与牛和大鼠的PDE2A序列相同。Northern印迹分析表明在测试的所有人组织中，PDE2A以不同水平的4.2-kb mRNA表达，在大脑中的表达水平最高。表达研究揭示了PDE2A水解cAMP和cGMP，并被PDE2A特异性的抑制剂EHNA抑制。”
文献描述了PDE的核苷酸序列和氨基酸序列。本文提供的序列表中给出了其中的某些序列。
一方面，PDE靶向物选自下列的一种或多种PDE酶：PDEcAMP1、PDEcAMP2、PDEcAMP3、PDEcAMP4、PDEcAMP7和PDEcAMP8。
PDE靶向物优选自下列的一种或多种PDE酶：PDEcAMP1、PDEcAMP2、PDEcAMP3和PDEcAMP4。
在本发明中，针对靶向物的PDE至少是PDE2。
I:PDE
如上面所示，另一种活性剂可以是可作为I:PDE起作用的任何活性剂。另外，或者供替代的选择，本发明的活性剂也可作为I:PDE起作用。
I:PDE的实例公开于EP-A-091133和EP-A-0771799。
I:PDE优选是I:PDE2。因此，优选的化合物实例是EP-A-0771799中描述的那些。
为方便起见，现重述EP-A-0771799的权利要求1：
具有通式(I)的嘌呤-6-酮衍生物及其互变异构体和盐：
Figure A20041008595500711
其中：
R1表示氢或者包含至多8个碳原子的直链或支链烷基；
R2表示包含至多4个碳原子的直链或支链酰基，或者包含至多8个碳原子的直链或支链烷基，所述烷基可任选地被羟基、叠氮基或者式-NR3R4或-OSO2R5的基团取代；其中
R3和R4相同或不同，表示包含3-6个碳原子的环烷基、氢、甲酰基或包含至多6个碳原子的直链或支链烷基、所述烷基可任选地被分别包含至多6个碳原子的直链或支链烷氧基或者烷氧羰基或者被式-(CO)a-NR6R7的基团取代，其中：
a是0或1的数；
R6和R7相同或不同，表示氢、甲酰基、羟基、苯基或者包含至多6个碳原子的直链或支链烷基、所述烷基可任选地被羟基或者包含至多5个碳原子的直链或支链烷氧基取代；或者
R3和/或R4表示包含至多6个碳原子的直链或支链烷氧羰基、羧基或者包含至多6个碳原子的直链或支链酰基，所述酰基可任选地被羟基或者包含至多4个碳原子的直链或支链烷氧基取代；或者
R3和/或R4表示式-(CO)b-T-NR8R9、-CO-R10、-SO2R11或-SO2NR12R13，其中
b与上述a具有相同的含义并且与a相同或不同；
T可表示包含至多5个碳原子的直链或支链烷基，或者当b≠0时，它还可表示一个键；
R8和R9与上述R6和R7具有相同含义并且与R6和R7相同或不同；
R10表示包含至多3个选自S、N和/或O的杂原子的饱和的、部分饱和的或不饱和的5-7元杂环，所述杂环在N官能团上可任选地被包含至多4个碳原子的直链或支链烷基、烷氧基或烷氧羰基、羧基、苄氧羰基或羟基取代；
R11表示包含至多5个碳原子的直链或支链烷基、苄基或苯基；
R12和R13相同或不同，表示氢、苯基或包含至多6个碳原子的直链或支链烷基；或者
R3和R4与氮原子一起形成5或6元的饱和的、部分饱和的或不饱和的杂环，该杂环可包含至多3个选自N、S和/或O的杂原子；或者-NR14残基，该残基可任选地被羰基、包含至多5个碳原子的直链或支链烷氧羰基或者包含至多5个碳原子的直链或支链烷基取代，所述烷基可被羟基、羧基或者分别包含至多6个碳原子的直链或支链酰基、烷氧基或烷氧羰基取代；其中
R14表示氢、羰基或包含至多5个碳原子的直链或支链烷基或烷氧羰基；和
R5表示苯基或者包含至多5个碳原子的直链或支链烷基；
A表示分别包含至多6个碳原子的直链或支链亚烷基或亚烯基链；
D和L相同或不同，表示包含6-10个碳原子的芳基或者包含至多3个选自S、N和/或O的杂原子的5-7元芳香的、任选是苯并稠合的杂环，所述芳基或杂环可任选地被相同或不同的下列基团取代至多3次：卤素、羟基、硝基、三氟甲基、羧基、分别包含至多6个碳原子的直链或支链基、烷氧基或烷氧羰基，或者被式-(V)c-NR15R16和/或-OR17的基团取代；或者
c是0或1的数；
V表示式-CO或-SO2的残基；
R15和R16相同或不同，具有上述R3和R4中给出的含义；
R17表示氢、包含至多8个碳原子的直链或支链烯基或者包含至多8个碳原子的直链或支链烷基，所述烯基或烷基可任选地被相同或不同的下列基团取代至多3次：羟基、羰基或包含至多5个碳原子的直链或支链烷氧羰基；和/或可任选被含6-10个碳原子的芳基或者被含至多3个选自S、N和/或O的杂原子的5-7元芳香的、可任选是苯并稠合的杂环取代的环，所述芳基或杂环可任选地被相同或不同的下列基团取代至多两次：卤素、羟基、硝基、羧基、三氟甲基或者分别包含至多5个碳原子的烷基、烷氧基或烷氧羰基，或者带有式(V’)d-NR18R19的基团；其中
d与上述a具有相同含义并且与a相同或不同；
R18和R19与上述R3和R4具有相同含义并且与R3和R4相同或不同；
V’与上述V具有相同含义并且与V相同或不同；和/或
表示下面D中给出的环系，该环系可任选地被包含至多5个碳原子的直链或支链酰基取代，任选地被羟基、包含至多5个碳原子的直链或支链烷氧基或者被式-NR20R21基团取代；其中
R20和R21相同或不同，与上述R3和R4具有相同含义；或者
E表示式-CH2-Y-Z的残基；其中
Y表示一个键或者氧或硫原子或者-NH-基；
Z表示包含至多5个碳原子的直链或支链烷基；
D表示下式的残基：
Figure A20041008595500731
优选的I:PDE选自下列结构式：
NPY(神经肽Y)
依据本发明，另一种靶向物是PcAMP靶，该PcAMP靶是NPY或其相关受体中的一种。
文献已描述了NPY的核苷酸序列和氨基酸序列。本文提供的序列表中给出了其中的某些序列。
现在，我们发现神经肽Y(NPY)对血管活性肠肽(VIP)介导的血管舒张具有抑制性调节影响作用。因此，NPY受体的抑制作用将促进骨盆神经和VIP介导的生殖器(如阴道和阴蒂)血流的增加。在临床上这将增强阴道和/或阴蒂充血，最终通过血浆漏出和提高阴道的顺应性而增强润滑作用。因此，用于治疗FSAD的适合靶向物是NPY或其相关受体中的一种。
因此，另一方面，其它活性剂优选NPY Y1 Y2或Y5拮抗剂，优选是一种口服的NPY Y1 Y2或Y5拮抗剂。该活性剂将通过增加生殖器(如阴道或阴蒂)血流并增强润滑作用来治疗FSAD。
NPY介导的对VIP引发的血流增加的拮抗作用代表了可通过其影响雌性生殖道血流的潜在治疗靶。由此产生拮抗作用的机理最可能是通过NPY Y1受体引发的Gi/o活化。在另一种生理系统中，NPY Y1受体参与介导血管收缩和抑制交感神经递质释放(Lundberg et al.，1996；不能排除NPY Y2的影响)。我们相信在雌性生殖道中NPY通过直接抑制腺苷酸环化酶抑制血管舒张，所述腺苷酸环化酶直接抑制VIP释放或交感神经的神经传递。
如上所示，另一种PcAMP靶是NPY受体中的一种。
神经元的NPY释放调节VIP引起的阴道血管床的血管舒张。该调节作用最可能是通过涉及与NPY Y1受体有关的突触前机制产生，虽然也不排除突触后作用方式。NPY拮抗剂将增强VIP引发的阴道血管床的血管扩张作用。临床上，该作用通过阴道壁充血增强阴道的润滑作用以及顺应性。
我们使用人阴道中的NPY Y1 Y2和Y5受体亚型进行了NPY受体表达研究。
因此，一方面，其它PcAMP靶是一种或多种NPY Y1 Y2和Y5受体亚型。
Victor A.Mckusick等人在http：//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm上发表了有关NPY及其相关受体的背景技术。下列有关NPY的信息节选于该网站。
“神经肽Y(NPY)是一种富含于和广泛分布在哺乳动物神经系统中的肽。据显示，其氨基酸序列与肽YY同源并且同源率超过50％，其核苷酸序列与胰腺多肽(PNP；167780同源)。NPY是一种36氨基酸的肽。Minth等人(1984)从嗜铬细胞瘤的mRNA开始克隆了NPY基因。Takeuchi等人(1985、1986)分别从嗜铬细胞瘤和胰腺内分泌肿瘤分离出了NPY和PNP基因的cDNA克隆。使用这些cDNA探针分析人-小鼠杂交体细胞中的染色体分配名单中的基因组DNA，然后检测基因是否是合成的。研究显示，基因是非合成的(nonsynteny)，在7pter-7q22上带有NPY，在17p11.1-17qter上带有PNP。通过用Mus spretus进行逆代杂交研究，Bahary等人(1991)将同源NPY基因定位于小鼠染色体6。由于小鼠染色体6与人7q同源，因此人的NPY基因有可能定位于7cen-q22区域。Meisler等人(1987)排除了囊纤维变性(219700)的部位与神经肽Y之间存在密切联系。Terenghi等人(1987)采用原位杂交技术测定了在外科活检样品和死后的大脑中，编码大脑皮层神经元中的NPY的mRNA的分布。该研究显示了在正常成熟皮层神经元中NPY基因转录和表达的定位的一致性。Baker等人(1995)通过荧光原位杂交表明NPY基因定位于7p15.1并以单拷贝形式存在。他们评论说NPY是已知的保守程度最高的肽之一，例如在人和鲨鱼之间仅有3个氨基酸的差异。神经肽Y是一种与能量平衡控制有关的神经调节剂，在ob/ob小鼠的下丘脑中被过度生产。为确定NPY在对leptin(164160)缺乏的响应中的作用，Erickson等人(1996)生产了NPY缺乏的ob/ob小鼠。在不存在NPY的情况下，ob/ob小鼠由于减少了食物摄入和增加能量消耗，不太肥胖，因此不易患糖尿病、不孕和促生长不足。这些结果可解释为NPY是leptin缺乏的中央效能器。选择乙醇优先喂养的大鼠的遗传连锁测定识别了包括NPY基因的染色体区域(Carr等人，1998)。与非乙醇优先的大鼠相比，乙醇优先的大鼠在数个大脑区域中的NPY水平较低。Thiele等人(1998)研究了完全缺乏NPY的小鼠的乙醇消耗，这也是靶向基因分布的结果(Erichson等人，1996)。他们发现与野生型小鼠相比，NPY缺乏的小鼠消耗含有6％、10％和20％(体积)的乙醇溶液的量较高。由乙醇引发的睡眠的快速苏醒可以看出，NPY缺乏的小鼠对乙醇的镇静/催眠作用也不太敏感，甚至血浆乙醇浓度与对照相比也没有明显的差异。相反，与对照相比，在通常表达NPY的神经元中过度表达了标记的NPY基因的转基因小鼠对乙醇的喜爱性较差，同时对乙醇的镇静/催眠作用更敏感。这些数据给出了在大脑中乙醇的消耗量与抗性与大脑中的NPY水平成反比的直接证据。作为正在进行的肥胖基因基础研究的一部分，Karvonen等人(1998)鉴别了通过用脯氨酸置换pre-pro-NPY的信号肽部分7位残基上的亮氨酸得到的1128T-C的多态性。该多态性与肥胖或能量代谢无关，但在正常体重的和肥胖的芬兰人以及肥胖的荷兰人中，该多态性与高血清总胆固醇水平和LDL胆固醇水平明显有关并与它们具有一致性。Uustitupa等人(1998)发现14％的芬兰人具有7位脯氨酸多态性，但该多态性在荷兰人仅占6％。在NPY中7位是脯氨酸的人与不具有该基因变异的人相比，血清总胆固醇水平高出0.6-1.4mmol/mL。在正常体重的荷兰人中没有发现pro7 NPY对血清总胆固醇水平的影响，因此可以设想肥胖的人可能更易受基因变异的影响。通过计算，在血清总胆固醇水平等于或高于8mmol/L的肥胖者中具有pro7 NPY的可能性可能高达50-60％。至少是在芬兰人中，pro7 NPY是影响血清胆固醇水平的最强的遗传因素之一。还可参见Allen和Bloom(1986)；Dockray(1986)；Maccarrone和Jarrott(1986)；Minth等人(1986)。”
Victor A.Mckusick等人在上述网站上发表了有关NPY及其相关受体的背景技术。下列有关NPYRl的材料节选于该网站。
“神经肽Y(NPY；162640)是哺乳动物神经系统中最丰富的神经肽之一，它表现出多种不同的重要生理活性，包括对精神运动活性、食物摄取、中枢内分泌物分泌的调节作用和心血管系统的有力血管活性。采用药理学标准，已鉴别出两种NPY亚型(Y1和Y2)。NPY Y1受体已在不同的组织中被识别，例如但、脾脏、小肠、肾脏、睾丸、胎盘和主动脉平滑肌中。Y2受体主要发现于中枢神经系统。Herzog等人(1992)报道了编码人NPY受体的cDNA的克隆，他们证实了人NPY受体是G蛋白-结合的受体大家族中的一员。当在中国仓鼠卵巢(CHO)或人中肾细胞中表达时，该受体表现出特征性配体特异性。在肾细胞系中，该受体与介导环AMP累积抑制作用的百日咳毒素敏感的G蛋白结合。另一方面，在CHO细胞系中，该受体的结合不是抑制腺苷酸环化酶，而是增加细胞内的钙。因此，根据不同类型细胞中存在的特异性G蛋白和效能器系统，第二信使结合的NPY受体是细胞类型特异性的。Larhammar等人(1992)独立地克隆和表征了神经肽Y受体。Herzog等人(1993)确定了人NPY Y1受体基因的分子组织和调控。与大多G蛋白偶联的受体基因的相近结构形成对照，他们发现NPY Y1受体基因具有3个外显子。他们在基因的第一个内含子中还识别出共同的Pstl多态性。通过高拆分荧光原位杂交技术，他们将该基因定位于4q31.3-q32。Herzog等人(1997)发现NPY1R和NPY5R(602001)基因共同定位于染色体4q31-q32上。这两种基因以相反方向从共同的启动子区域开始转录。一种替代是，Y1受体基因的已剪接的5-引物(prime)外显子是Y5受体的编码序列的一部分。Herzog等人(1997)推测了这种非常规排列，即通过基因复制技术产生了这两种基因，它们可协同表达。通过种间逆代杂交，Lutz等人(1997)分别将Npy1r和Npy2r基因定位到小鼠染色体8和3的保守连接基团上，所述基团相应于人染色体4q的远区。”
Victor A.Mckusick等人在上述网站上发表了有关NPY及其相关受体的背景技术。下列有关NPYR2的材料节选于该网站。
“神经肽Y(NPY)通过存在于大脑和交感神经神经元的G蛋白结合的受体传送信号。根据药理学标准、组织分布和编码基因的结构，已明确了至少3类神经肽Y受体；参见162641和162643。Rose等人(1995)报道了编码人2型受体NPY2R的cDNA在COS细胞中的克隆表达。已转染的细胞对NPY(162640)、肽YY(PYY；600781)和包括13-36位氨基酸的NPY片断显示出高亲和性。预计的381-氨基酸蛋白质具有7个跨膜区，其具有G蛋白偶合受体的特性，并且仅有31％与人Y1受体(NPY1R；162641)相同。通过对取自不同区域的神经系统的组织样品进行Northern印迹分析测定4-kb mRNA。Gerald等人(1995)使用放射标记的PYY-结合测定克隆了相应于取自人海马的人Y2受体的cDNA。他们在COS-7细胞中表达了Y2基因并进行了激素结合测定，该测定表明Y2受体结合(亲和性从最高到最低)PYY、NPY和胰腺多肽(PP；167780)激素。Ammar等人(1996)克隆并表征了编码2型NPY受体的人基因。转录跨越9kb基因组序列，并以2个外显子形式被编码。同1型NPY受体基因中一样，NPY2R的5-引物未翻译区被4.5-kb间插序列间隔。Ammar等人(1996)通过DNA分析证实了啮齿类动物-人杂交细胞通过荧光原位杂交(FISH)将NPY2R基因定位到了4q31上(包含NPY1R基因的相同区域)，认为这些亚型虽然结构不同，但仍可通过基因复制产生。通过种间逆代杂交分析，Lutz等人(1997)分别将Npy1r和Npy2r基因定位到小鼠染色体8和3的保守连接基团上，所述基团相应于人染色体4q的远区。”
测定有争议的或实际的活性剂是否能够与NPY结合的方法记载于WO-A-98/52890中(参见其96页第2-28行)。
I:NPY
如上所示，其它活性剂可以是能用作I:NPY(有时称为NPY拮抗剂)的任何适宜活性剂。另外，或者可供选择的替代，本发明的活性剂也可用作I:NPY。
下列综述中讨论了I:NPY(尤其是NPY拮抗剂)：
Dunlop J，Rosenzweig-Lipson S：肥胖的治疗方法，Exp Opin Ther Pat 19998 12 1683-1694
Wang S，Ferguson KC，Burris TP，Dhurandhar NV：第8届肥胖和非胰岛素依赖性糖尿病国际年会：新药开发，Exp Opin Invest Drugs 1999 8 7 1117-1125Ling AL：神经肽Y受体拮抗剂，Exp Opin Ther Pat 1999 9 4 375-384Adham N，Tamm J，Du P，Hou C等人：拮抗剂SNAP 6608与Y5受体结合中有关残基的识别，Soc Neurosci Abstr 1998 24 Part 2 626.9Shu YZ，Cutrone JQ，Klohr SE，Huang S：BMS-192548，一种从黑曲霉WB2346得到的神经肽Y受体的四环类结合抑制剂.II.物理化学性质和结构鉴别，JAntibiot 1995 48 10 1060-1065
Rigollier P，Rueger H，Whitebread S，Yamaguchi Y，Chiesi M，SchillingW，Criscione L：CGP 71683A，一种神经肽Y Y5受体的有效和选择性拮抗剂的合成和SAR，Int Symp Med Chem 1998 15th Edinburgh 239Criscione L，Rigollier P，Batzl-Hartmann C，Rueger H，Stricker-Krongrad A等人：神经肽Y5受体介导的自由禁食和能量被剥夺的瘦型鼠的食物摄取，J Clin Invest 1998 102 12 2136-2145
Neurogen Corp：NGD 95-1 Clin Trials Monitor 1996 5 10 Ab 19244Buttle LA：减肥药物：定位大超市销售，Exp Opin Invest Drugs 1996 5 121583-1587
Gehlert DR，Hipskind PA：肥胖中的神经肽Y受体拮抗剂，Exp Opin InvestDrugs 1996 7 9 1827-1838
Goldstein DJ，Trautman ME：肥胖症的治疗，Emerging Durgs 1997 2-1-27Hipskind P A，Lobb K L，Nixon J A，Britton T C，Bruns RT，Caltlow J，Dieckman Mcginty D K，Gachenheimer S L，Gitter B D，Lyengar S，SchoberD A等人：NPY Y-1的有效和选择性拮抗剂1，2，3-三取代的吲哚，J Med Chem1997 40 3712-3714
Zimmerman DM，Cantrall BE，Smith ECR，Nixon JA，Bruns RF，Gitter B，Hipskind PA，Ornstein PL，Zarrinmayeh H，Britton TC，Schober DA，Gehlert DR：系列1-取代的-4-甲基苯并咪唑神经肽Y-1受体拮抗剂的结构-活性关系，Bioorganic Med Chem Lett 1998 8 5 473-476
Zarrinmayeh H，Nunes A，Ornstein P，Zimmerman D，Arnold MB等人：作为选择性神经肽Y Y1受体拮抗剂新的2-[(4-氯苯氧基)甲基]苯并咪唑系列化合物的合成和评价，J Med Chem 1998 41 15 2709-2719
Britton TC，Spinazze PG，Hipskind PA，Zimmerman DM，Zarrinmayeh H，Schober DA，Gehlert DR，Bruns RG：系列苯并噻吩衍生的NPY-Y1拮抗剂的结构-活性关系：C2侧链的最优化，Bioorganic Med Chem Lett 1999 9 3475-480
Zarrinmayeh H，Zimmerman DM，Cantrell BE，Schober DA，Bruns RF，Gachenheimer SL，Ornstein PL，Hipskind PA，Britton TC，Gehlert DR：
作为神经肽Y Y1受体拮抗剂的一系列二氨基烷基取代的苯并咪唑的结构-活性关系，Bioorganic Med Chem Lett 1999 9 5 647-652
Murakami Y，Hara H，Okada T，Hashizume H，Kii M，Ishikawa M，MiharaS-1，Kato G，Hanasaki K，Hagishita S，Fujimoto M：作为新的有效的选择性神经肽Y Y1受体拮抗剂的1，3-二取代的苯并吖庚因，J Med Chem 1999 4214 2621-2632
Rudolf K，Eberiein W，Engel W，Wieland HA，Willim KD，Entzeroth M，Wienen W，Beck Sickinger AG，Doods HN：第一种高效选择性非肽类神经肽YY1受体拮抗剂：BIBP3226，Eur J Pharmacol 1994 271 2-3 R11-R13
Wieland HA，Willim KD，Entzeroth M，Wienen W，Rudolf K，Eberlein W，Engel W，Doods HN：非肽类神经肽Y1受体拮抗剂BIBP 3226的亚型选择性和拮抗剂特性，J Pharmacol Exp Ther 1995 275 1 143＝149
Wright J，Bolton G，Creswell M，Downing D，Georgic L，Heffner T，HodgesJ，MacKenzie R，Wise L：8-氨基-6-(芳基磺酰基)-5-硝基喹诺酮类：新的非肽类神经肽Y1受体拮抗剂，Bioorganic Med Chem Lett 1996 6 15 1809-1814Capurro D，Huidobro-Toro JP：神经肽Y Y1受体在血压压力反射中的关系：用BIBP 3226和BIB 3304进行的研究，Eur J Pharmacol 1999 376 3 251-255
Dumont Y，Cadieux A，Doods H，Quirion R：研究中枢和外周神经系统中的神经肽Y受体的新工具：BIBO-3304(Y1)，BIIE-246(Y2)和[125I]-GR-231118(Y1/Y4)，Soc Neurosci Abstr 1999 25 Part 1 Abs 74.11
Hegde SS，Bonhaus DW，Stanley W，Eglen RM，Moy TM，LoebM等人：1229U91，一种高亲和性和选择性的神经肽Y(NPY)-Y1受体拮抗剂的药理学评价，Pharmacol Res 1995 31 190
Matthews JE，Chance WT，Grizzle MK，Heyer D，Daniels AJ：用GI 264879A，一种NPY-Y1受体处理的大鼠的食物摄取抑制和体重减轻，Soc Neurosci Abstr1997 23 Pt 2 1346
Doods HN，Willim K-D，Smith SJ：BIBP 3226：一种选择性高效NPY-Y1拮抗剂，Proc Br Pharmacol Soc 1994 13-16 Dec.C47
Rudolf K，Eberlein W，Engel W，Wieland HA，Willim KD，Entzeroth M，Wienen W，Beck Sickinger AG，Doods HN：第一种高效选择性非肽类神经肽YY1受体拮抗剂：BIBP 3226，Eur J Pharmacol 1994 271 2-3 R11-R13Serradelil-Le-Gal C，Valette G，Rouby PE，Pellet A，Villanova G，Foulon L，Lespy L，Neliat G，Chambon JP，Maffrand JP，Le-Fur G：SR120107A和SR 120918A：两种有效的选择性的口服有效的NPY Y1受体拮抗剂，Soc Neurosci Abstr 1994 20 Pt 1 907-Abs 376.14
Hong Y，Gregor V，Ling AL，Tompkins EV，Porter J，Chou TS Paderes G，Peng Z，Hagaman C.Anderes K，Luthin D，May J：作为有效NPY Y2受体拮抗剂的新的脒基脲化合物的合成和生物学评价，Acs 1999 217 Anaheim MEDI108
下列文献中公开了I:NPY(尤其是NPY拮抗剂)：
              WO-98/07420
              WO-94/00486
              WO-96/22305
              WO-97/20821
              WO-97/20822
              WO-96/14307
                      JP-07267988
                      WO-96/12489
                      US-5552422
                      WO-98/35957
                      WO-96/14307
                      WO-94/17035
                      EP-0614911
                      WO-98/40356
                      EP-0448765
                      EP-0747356
                      WO-98/35941
                      WO-97/46250
                      EP-0747357
I:NPY的优选实例选自下列结构式。经过测试发现这些化合物在增强cAMP中有用，由此可用于治疗FSAD。在下面的实验部分给出了有关这些化合物的一些实验数据。
Figure A20041008595500821
Figure A20041008595500831
Figure A20041008595500841
Figure A20041008595500851
VIP(血管活性肠肽)
依据本发明，另一种靶向物是PcAMP靶，该PcAMP靶是VIP或其相关受体之一。目前的分类和命名称它们为VPAC1、VPAC2和PACAP。
VIP及其受体的核苷酸序列和氨基酸序列可从文献查阅到。本文提供的序列表中给出了其中的一些序列。
我们知道VPAC1和VPAC2存在于人和兔的阴道中。PACAP既不存在于兔的阴道中，也不存在于人的阴道中。
VIP是在性唤起期间释放的一种主要内源性神经递质，它应答神经诱发的位于阴道壁血管床的阴道血管扩张。腺苷酸环化酶活化和cAMP的产生介导了这种血管扩张作用。不希望受到理论的局限，通过VIP受体亚型VPAC1、VPAC2或PACAP(脑垂体腺苷酸环化酶活化肽)受体可介导这种作用。VPAC2和PACAP受体可最广泛地在CNS中表达，尽管这两种受体也在脑垂体中表达，但它们未表现出广泛的生物学功能。
本发明的活性剂可增强VIP和/或用作VIP模拟物或类似物。因此所述活性剂将增强和/或模拟性唤起期间释放的内源性VIP的血管舒张作用。所述活性剂对VIP引发的阴道平滑肌松弛作用还具有加合作用。在临床上，可用于FSAD的治疗，并且还通过阴道壁充血和顺应性增强阴道的润滑作用。在该实施方案中，无论怎样，模拟物或类似物都不具有上面讨论的VIP的有害性质。
Victor A.Mckusick等人在http：//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm上发表了有关VIP及其相关受体的背景技术。下列有关VIP的信息节选于该网站。
“血管活性肠肽(VIP)，一种最初从猪十二指肠分离的28氨基酸肽，它不仅存在于胃肠组织中，还存在于神经组织中(可能是一种神经递质)，并表现出多种不同的生物学作用。由于VIP与胰高血糖素、促胰液素和肠抑胃肽(GIP)表现出相似性，因此认为VIP是胰高血糖素-促胰液素家族中的一员。编码VIP的mRNA的初级翻译产物(前VIP原)的分子量为20道尔顿。通过克隆与编码人VIP的mRNA互补的DNA序列，Itoh等人(1983)发现VIP前体不仅包含VIP，还包含一种新的27氨基酸肽(被命名为PHM27)，其具有组氨酸氨基端和甲硫氨酸羧基端。PHM27有2个氨基酸与从猪小肠中分离的PHI17不同；正如其命名中所示，PHI27具有异亮氨酸羧基端。Linder等人(1987)分离了编码VIP和PHM27的人基因并研究了其在大鼠的各种组织中的表达。Heinz-Erian等人(1985)认为使用VIP神经肽对囊性纤维化患者的汗腺更新不足可能是减少表皮水含量和降低表皮对氯化物和其它离子的相对不渗透性(囊性纤维化的特征)的基本机制。为验证这种假设，Gozes等人(1987)实施了“候选基因”方案。Bonder等人(1985)通过实验表明VIP和PHM-27通过相邻的外显子被编码。Gozes等人(1987)用PHM-27编码的基因组片断来测定VIP基因存在于6q21-qter。因此，他们消除了可能构成囊性纤维化主要原因的缺陷性VIP基因(它由染色体7编码)。通过原位杂交技术，Gozes等人(1987)使VIP基因定位于6q24。这将VIP放入了MYB(189990)区域，它被定位于6q22。Gozes等人(1987)研究了神经元组织中2种基因之间的功能关系。他们观察到3日龄大鼠的海马中MYBmRNA的尖峰，该峰位于存在于8日龄大鼠海马中的VIP mRNA的峰之前。Omary和Kagnoff(1987)在人结肠腺癌细胞系中发现了VIP的核受体。Gotoh等人(1988)将所述基因的分子克隆片断通过点印迹杂交法杂交到分类染色体上，使VIP定位于染色体6上。通过原位杂交可准确定位于6q26-q27。”
Victor A.Mckusick等人在http：//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm上发表了有关VIP及其相关受体的背景技术。下列有关VIPR1或VPAC1的信息节选于该网站。
“血管活性肠肽(VIP；192320)是一种主要发现于中枢神经系统和分布于不同组织中的外周肽能神经元中的octacosameric神经内分泌介质。在许多具有免疫学功能的神经内分泌肽中，VIP以其具有直接影响B细胞和T细胞的能力而著名。神经、呼吸道、胃肠道和免疫细胞的不同亚群带有特异性的高亲和性VIP受体，所述受体与能活化腺苷酸环化酶的鸟嘌呤核苷酸-结合(G)蛋白结合。Libert等人(1991)通过选择性扩增和由甲状腺cDNA克隆获得了G蛋白质-结合的受体家族的4种新受体。Sreedharan等人(1991)识别出这4种受体之一是VIP受体(称为RDC1)。Libert等人(1991)通过原位杂交将VIPR基因定位于2q37。后来的报道对定位于2q37的基因实际上是VIP受体基因的结论产生了质疑(Vassart，1992)。Sreendharan等人(1991)指定了GPRN1序列，Wenger(1993)还发现定位于2q31的该序列不与VIP结合。Sreedharan等人(1995)分离出真正的I型VIP受体基因并通过荧光原位杂交使其定位于小细胞肺癌有关区域中的3p22带。通过种间逆代杂交分析，Hashimoto等人(1999)将小鼠Vipr1基因定位于染色体9的远区，该区与人染色体3p表现出synteny同源性。Sreedharan等人(1993)克隆了人小肠VIP受体基因；该推论的氨基酸序列的84％与大鼠肺VIP受体基因。Couvineau等人(1994)从人空肠上皮细胞cDNA文库分离了2种克隆VIPR cDNA。一种cDNA编码由460个氨基酸组成的并具有7个跨膜区域的VIP受体(与其它G蛋白质结合的受体一样)。另一种cDNA编码495个氨基酸的VIP受体相关的蛋白质，该蛋白质与功能性VIP受体在C-末端的428个氨基酸具有100％同源性，但它的N-末端包含完全分支化的67个氨基酸。当在COS-7细胞中表达时，第二种蛋白质不与放射性碘标记的VIP结合，尽管按照免疫荧光研究，该种蛋白质一般存在于质膜中。Sreedharan等人(1995)发现了I型VIP受体(也称为II型PACAP受体(参见另一类PACAP受体的102981))跨度约22kb并且包括13个外显子(从42-1400bp)和12个内含子(从0.3-6.1kb)。Sreedharan等人(1995)还描绘了该基因的起动子和5-引物侧旁区域的性质。”
Victor A.Mckusick等人在上述网站上发表了有关VIP及其相关受体的背景技术。下列有关VIPR2或VPAC2的信息节选于该网站。
“血管活性肠肽(VIP；192320)和脑垂体腺苷酸环化酶活化多肽(PACAP；102980)是同源性肽，它们行使神经递质和神经内分泌激素的功能。虽然VIP和PACAP的受体具有同源性，但它们在其底物特异性和表达类型上存在差别。参见VIPR1(192321)和ADCYAP1R1(102981)。Svoboda等人(1994)使用基于VIP受体中保守序列的引物进行了低严格性PCR。他们从淋巴母细胞cDNA文库克隆了人VIP2受体基因。该基因编码一种438个氨基酸的多肽，该多肽的86％与大鼠VIP2受体相同。他们在中国苍鼠卵巢细胞中表达了人VIP2受体，发现该受体与PACAP-38、PACAP-27、VIP和helodermin结合，并且该受体与这些肽中的任一种结合都激活腺苷酸环化酶。还发现结合的肽被GTP抑制。Adamou等人(1995)从人胎盘cDNA文库克隆了VIP2受体基因。Northern印迹揭示了VIPR2是以4.6kb和2.3kb的2段转录物形式在骨骼肌中被高水平表达，在心脏、大脑、胎盘和胰腺中被低水平表达。Mackay等人(1996)使用荧光原位杂交使VIPR2基因定位于人染色体7q36.3。使用由3型holoprosencephaly(HPE3；142945)患者得到的细胞系的进一步定位揭示了VIPR2基因是位于HPE3的窄小的决定性区域内。Mackay等人(1996)认为尽管VIPR2可能与HPE3表型有关，但它不是唯一起作用的因素。”
AC(腺苷酸环化酶)
根据本发明的另一方面，另一种靶向物是PcAMP靶，该PcAMP靶是AC。
AC的核苷酸序列和氨基酸可从文献中查阅到。
在VIP刺激和使用毛喉素(一种腺苷酸环化酶活化剂)以模拟活化cAMP/腺苷酸环化酶的作用期间，我们测量了阴道的cAMP浓度，通过评价胞内cAMP水平和随后腺苷酸环化酶的活化，证实VIP引发血管舒张。
在这些研究中，我们发现VIP处理和毛喉素处理增高了离体阴道组织中的胞内cAMP水平。
我们还发现在性唤起动物模型中，毛喉素增加了阴道血流。
另外，我们发现毛喉素引发了离体阴道的松弛。
Victor A.Mckusick等人在http：//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm上发表了有关AC的背景技术。下列有关AC的内容节选于该网站。
“腺苷酰环化酶(EC 4.6.1.1)催化ATP向环AMP的转化。该酶的活性受到数种激素的调节，不同的多肽参与信号从受体向催化部分的转导。兴奋性或抑制性受体(Rs和Ri)与表现GTP酶活性的G蛋白(Gs和Gi)相互作用，他们调节腺苷酰环化酶的催化亚单位的活性。Parma等人(1991)克隆了相应于人大脑腺苷酰环化酶的cDNA(以HBAC1符号表示)。通过使用人大脑cDNA探针原位杂交到中期染色体spreads上，Stengel等人(1992)显示出该基因位于8q24.2。通过同样的方法，发现高度同源性基因ADCY2(103071)定位于5p15.2。”
通用重组DNA操作技术
尽管本文提及的技术一般都是本领域所熟知的，仍可参考尤其是Sambrook等人的《分子克隆-实验室手册》(Molecular Cloning，ALaboratory Manual)(1989)和Ausubel等人的《分子生物学精选方案》(ShortProtocols in Molecular Biology)(1999)，第4版，JohnWiley & Sons，Inc。PCR记述于US-A-4683195、US-A-4800195和US-A-4965188。
总之，本发明涉及I:NEP在治疗FSD、特别是FSAD中的应用。
实施例
下面将参照以下附图对本发明进行描述，这些描述仅仅是举例性的：
图1是图表；
图2是图表；
图3是图表；
图4是图表；
图5是图表；
图6是图表；
图7是图表；
图8是图表；
图9是图表；
图10是图表；
图11是图表；并且
图12是图表。
应当理解，本发明的活性剂是I:NEP。有关I:PDE和I:NPY的教导为专业人员清楚地指明，本发明活性剂可以与一种或两种这些类型的活性剂联合使用以得到本文所提及的有益效果。还包括这些附加的教导以进一步支持我们的精液发现物。
下面更详细地讨论附图。
图1：骨盆神经的电刺激在被麻醉的性唤起兔模型中诱导阴道血流频率依赖性增加。刺激频率的增加导致更大的血流增加。采用激光多普勒技术监测血流的变化。
图2：血管活性肠肽(VIP)-在被麻醉的性唤起兔模型中诱导阴道血流增加。图2a说明了通过输入VIP(静脉内药团)阴道血流如何以浓度依赖的方式增加。图2b证明两次重复输注VIP产生了相似的血流增加。注意响应的持续时间也是相似的。采用激光多普勒技术监测血流的变化。
图3：血管活性肠肽(VIP)在被麻醉的性唤起兔模型中使平均动脉血压降低。该图说明血管活性剂的典型作用，和用于评价阴道血流对麻醉兔平均动脉压的刺激参数。所发现的作用是在所有实验动物中可见的典型趋势。VIP引起平均动脉压的显著下降，而骨盆神经刺激、Hepsaline或PDEcAMP抑制剂或NEP对照输注对血压没有影响。值得注意的是，与VIP输注有关的血压降低也和心率大大增加有关。
图4：cAMP/腺苷酸环化酶途径的活化模拟VIP介导的血管舒张和阴道组织平滑肌松弛。图4说明了输注毛喉素(40nmol/kg，静脉药团，一种cAMP模拟物)引起阴道血流的明显增加。注意响应的幅度和持续时间与由VIP(20.0μg/kg，静脉药团)引起的情况相似。有趣的是，对血流的影响比对阴道外壁的作用时间更长。所有变化均采用激光多普勒技术监测。图4b证明VIP(0.1μM)和毛喉素(10μM)使兔阴道的细胞内cAMP浓度明显升高，超过了基础水平。图4c表明毛喉素引起预先收缩(用1μM苯肾上腺素)的兔阴道条的有效松弛，其IC50值约为300nM。采用体内激光多普勒技术、生物化学cAMP酶免疫分析法或通过体外组织松弛监测所有变化。
图5：输注VIP使阴蒂血流增加，并且cAMP/腺苷酸环化酶途径的活化模拟VIP介导的被麻醉的性唤起兔模型的阴蒂血管舒张。输注VIP(60-200μg/kg)引起阴蒂血流浓度依赖性增加。静脉输注200μg/kg VIP后观察到阴蒂血流115％增加。通过输注cAMP模拟毛喉素(FSK，40nmol/kg，静脉药团)可以模拟VIP对阴蒂血流的影响。静脉输注40nmol/kg毛喉素后观察到阴蒂血流156％增加。所有的增加均明显高于对照输注(Hepsaline)。注意响应的幅度与由VIP(200μg/kg，静脉药团)引起的情况相似，并且可与图2和4中对阴道血流观察的结果相比。采用体内激光多普勒技术监测所有变化，并且当与赋形剂输注(Hepsaline)比较时有明显增加。
图6：NEP EC 3.4.24.11的选择性抑制剂促进了麻醉的性唤起兔模型中骨盆神经刺激(PNS)的阴道血流增加。以15分钟的间隔反复用PNS引起阴道血流(白色条棒)可再现的增加。与相同时间的对照刺激或赋形剂对照(阴影条棒)观察到的增加相比，施用NEP抑制剂(灰色条棒)使次最大刺激频率(例如4Hz)引起的阴道血流峰的增加加强。观察到了如下的剂量依赖性加强-0.3mg/kg静脉注射引起40％增加，1.0mg/kg静脉注射引起91％增加(3次的平均值)。NEP抑制剂对基础(未刺激的)阴道血流没有影响(没有给出数据)。采用激光多普勒技术监测所有变化。
图7：NEP EC 3.4.24.11的选择性抑制剂促进了麻醉的性唤起兔模型中VIP引起的阴道血流增加。以30分钟的间隔反复用VIP输注引起阴道血流可再现的增加(见图2b)。当使用次最大剂量例如6.0μg/kg VIP引起刺激增加时，NEP抑制剂对血流加强的幅度和持续时间的延长均有加强作用。在引起阴道血流量最大增加的VIP剂量、例如60μg/kg，NEP抑制剂仅仅使阴道血流增强的持续时间加强。在NEP抑制剂存在下VIP引起的增加以实心三角表示，而对照VIP的反应以空心三角表示。对照输注Hepsaline对响应的幅度没有影响。采用激光多普勒技术监测所有变化。
图8：2型PDEcAMP的选择性抑制剂促进了麻醉的性唤起兔模型中骨盆神经刺激(PNS)的阴道血流增加。以15分钟的间隔反复用PNS引起阴道血流(白色方块)可再现的增加。与相同时间的对照刺激(空心方块)观察到的增加相比，施用2型PDEcAMP抑制剂使次最大刺激频率(黑色方块，例如4Hz)引起的阴道血流峰的增加加强。输注PDE2抑制剂(500μg/kg)引起阴道血流86.8+21.9％的增强(平均值±标准偏差，n＝2)。采用激光多普勒技术监测所有变化。
图9：2型PDEcAMP的选择性抑制剂促进了麻醉的性唤起兔模型中VIP诱导的阴道血流增加。以30分钟的间隔反复用VIP输注引起阴道血流可再现的增加(见图2b)。2型PDEcAMP的选择性抑制剂(25μg/kg，静脉药团)对VIP(60μg/kg，静脉药团)引起的阴道血流加强的持续时间有加强作用。在PDEcAMP抑制剂存在下VIP引起的增加以实心三角表示，而对照VIP的反应以空心三角表示。对照输注Hepsaline对响应的幅度没有影响。采用激光多普勒技术监测所有变化。
图10：NPY Y1受体的选择性拮抗剂促进了麻醉的性唤起兔模型中骨盆神经刺激(PNS)的阴道血流增加。以15分钟的间隔反复用PNS引起阴道血流(数据未显示)可再现的增加。与相同时间的对照刺激或赋形剂对照(阴影条棒)观察到的增加相比，施用NPY Y1拮抗剂(灰色条棒)使次最大刺激频率(例如4Hz)引起的阴道血流峰的增加加强。观察到了如下的剂量依赖性加强-0.01mg/kg静脉注射引起15.8±19.6％增加；0.03mg/kg静脉注射引起35.1±17.17％增加；0.10mg/kg静脉注射引起60.1±16.9％增加以及0.30mg/kg静脉注射引起91.9±27.4％增加(3次的平均值±标准偏差)。NPY Y1拮抗剂对基础(未刺激的)阴道血流没有影响(没有给出数据)。采用激光多普勒技术监测所有变化。
图11：是本文提供的显示活性剂非常适用于通过加强内源cAMP水平增加阴道血流量的某些数据的汇总图。
图12：NEP EC 3.4.24.11的选择性抑制剂促进了麻醉的性唤起兔模型中骨盆神经刺激(PNS)的阴道血流增加。与相同时间的对照刺激或赋形剂对照(阴影条棒)观察到的增加相比，施用NEP抑制剂(灰色条棒)使次最大刺激频率(例如4Hz)引起的阴蒂血流峰的增加加强。观察到了如下的剂量依赖性加强-1.0mg/kg静脉注射引起131％增加(3次的平均值)。NEP抑制剂对基础(未刺激的)阴蒂血流没有影响。采用激光多普勒技术监测所有变化。
测量cAMP活性/水平的分析
用Biotrak cAMP酶免疫分析(EIA)试剂盒(Amersham Life Sciences RPN225)测量阴道组织样本中的cAMP。
通过EIA测量阴道组织样本中的cAMP水平。EIA是以未标记cAMP与固定量的过氧化物酶标记的cAMP竞争有限量的cAMP特异性抗体为基础的。
1.材料
除非另外指明，所有材料均由Amersham Life Science cAMP EIA试剂盒(RPN 225)提供。
1.1微滴板-96孔微滴板用驴抗兔IgG包被。
1.2分析缓冲液-一经重新配制，即为pH5.8、含0.02％牛血清白蛋白和0.5％防腐剂的0.05M乙酸钠缓冲液。将瓶中的物质转入用3×15毫升蒸馏水洗涤的刻度量筒中。然后将最终体积调节至500毫升。
1.3cAMP标准物(用于乙酰化方法)。cAMP的浓度为10.24pmol/ml，在0.05M乙酸盐缓冲液(一经重新配制，pH为5.8，含0.02％牛血清白蛋白和0.5％防腐剂)中。标准物在使用前溶于2.5毫升分析缓冲液中。
1.4抗血清。抗-cAMP抗体，在0.05M乙酸盐缓冲液(一经重新配制，pH为5.8，含0.02％牛血清白蛋白和0.5％防腐剂)中。在使用前用11毫升分析缓冲液稀释抗体并轻轻地倒转混合以溶解内容物。
1.5cAMP偶联物。cAMP辣根过氧化物酶，在0.05M乙酸盐缓冲液(一经重新配制，pH为5.8，含0.02％牛血清白蛋白和0.5％防腐剂)中。在使用前用11毫升分析缓冲液稀释该溶液并轻轻地倒转混合以溶解内容物。
1.6洗涤缓冲液。一经重新配制，即为pH7.5、含0.05％(v/v)TweenTM 20的0.01M磷酸盐缓冲液。将瓶中的物质转入用3×15毫升蒸馏水洗涤的刻度量筒中。然后将最终体积调节至500毫升。
1.7TMB底物。3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)/过氧化氢，在20％(v/v)二甲基甲酰胺中。备用。
1.8乙酰化试剂。根据需要准备2ml乙酸酐、4ml三乙胺。
1.9硫酸(1M)。由18M储液(BDH)制备1M硫酸。向18.8ml蒸馏水中加入1.11ml硫酸。
2.具体的设备
2.1一次性使用的5ml玻璃试管
2.2分光光度平板读数器(Spectra max 190)
2.3微滴板摇床(Luckham R100)
3.方法
·组织样品的制备。将组织在5毫升生理盐溶液的样品例如激动剂、cAMP模拟物等中进行预处理。处理后，将样品在液氮中速冻，然后用锤子打碎。将粉末刮入离心管中，加入1毫升0.5M冰冷却的高氯酸(PCA)。将样品涡旋混合，并在冰上放置1小时。
·从组织样品中提取cAMP。在4℃，将样品以10000g的转速离心5分钟。取出上清液，置于另外的离心管中。将沉淀物于-80℃存放以进行蛋白分析。然后用磷酸三钾将上清液样品中和至pH约6。在4℃，以10000g的转速离心5分钟。取出上清液并用5倍体积(5毫升)水饱和的乙醚洗涤4次。每次洗涤后倾析出上面的乙醚层。将水层转入短的薄壁玻璃管中，并在60℃和氮气流下干燥。将干燥的提取物溶于1ml分析缓冲液中并贮存在冰箱中备用(或者可以冷冻)。
·储备试剂平衡到室温，然后制备操作溶液。
·在贴有2、4、8、16、32、64、128、256和512fmol标签的玻璃管中制备cAMP标准物。向除512fmol标准物之外的所有管中加入1毫升分析缓冲液。然后向两个最高浓度的标准物(256和512fmol)中加入1毫升乙酰化标准物(10.24pmol/ml)。将256fmol标准物涡旋混合，并将其中的1毫升转入128fmol标准物中。依次进行这样的操作，直至2fmol标准物中1毫升溶液被弃去。零标准物管设定为含1毫升分析缓冲液。
·将组织提取样品在冰上解冻(如果需要的话)，并在贴标签的玻璃管中稀释成1/100(10μl样品：990μl分析缓冲液)。
·通过在通风橱中沿着管壁加入100μl乙酰化试剂、并立即涡旋混合，使标准物和样品中的cAMP乙酰化。
·将50μl所有的标准物和样品加入96孔板的适当孔中，并向非特异性结合(NSB)的孔中加入150μl分析缓冲液。
·在于3-5℃进行孵育的2小时前，向除空白(B)和NSB之外的所有孔中加入100μl抗血清。
·孵育后，向除B之外的所有孔中加入100μl cAMP-过氧化物酶偶联物，1小时后在3-5℃进行孵育。
·通过将培养板反转并印迹在吸收纸上清空培养板，然后用400μl洗涤缓冲液洗涤各孔4次。将每一洗涤后的板再印迹一次，以确保已经除去了所有残留的洗涤缓冲液。然后立即向所有孔中加入200μl TMB。
·在室温，将各板置于培养板摇床中30分钟，然后向所有孔中加入100μl 1M硫酸。在Spectra max 190中于30分钟内读出450nm处的光密度。
4.标准物
对于所有分析准备下列标准物管：
4.1 将标准物掺入分析缓冲液中
将已知量的cAMP掺入分析缓冲液中以测定分析的效力。向分析缓冲液中加入70pmol/ml cAMP，这在分析中相当于35fmol/孔，这是剂量响应曲线的中间值。
制备1ml标准物：68.4μl 521fml/孔标准物
               931.6μl分析缓冲液
4. 化合物对培养板的影响
设置标准物以确定功能研究中所有的化合物是否对96孔培养板有任何作用或是对cAMP的结合有影响。这些标准物包括：
·仅将化合物掺入分析缓冲液中用于评价该化合物对培养板的作用。
·将化合物掺入含有基础水平cAMP的血浆中以评价该化合物对cAMP与培养板结合的影响。
向每一标准物中掺入5nM浓度的化合物，选择5nM是因为过去最终输注的药物总浓度约为150-300nM。在分析前，将样品稀释为1∶100，因此5nM大于任何最终输注的预期总体药物浓度。
5.计算
Spectra max平板读数器读取450nm的光密度(OD)。
在Spectra max上以％B/Bo(y坐标轴)对cAMP fmol/孔(x坐标轴)绘图产生标准曲线。
如下计算每一样品和标准物的％B/Bo(％结合)：
Bo＝零标准物(参见方法3.2)
然后从标准曲线上直接读取每一样品的fmol/孔体积。然后将这些值转化为pmol/ml，并取每对样品的平均值。
由fmol/孔值转化为pmol/ml：
fmol转化为pmol                  ＝除以1000
每孔的体积                      ＝50μl....即 (×1000)
50
样品稀释至1/100，所以总值       ＝1×1000/1000×100/50＝2
所以所有的fmol/孔值乘以2即得pmol/ml值。
动物试验模型
加强环3’，5’-单磷酸腺苷(cAMP)的作用导致麻醉的性唤起兔模型阴道血流增加
1.0 目的
1.开发和验证雌性性唤起动物模型。
2.确定负责麻醉兔生殖器血流调节的机理。
3.确定增加阴道和阴蒂血流的的有效途径。
4.研究阴道平滑肌松弛的机理，并确定增加阴道松弛的有效途径。
2.0 介绍
正常的性唤起反应由性兴奋过程中观察到的多种生理反应组成。这些变化例如阴道、阴唇和阴蒂的充血由导致生殖器血流的增加导致。充血因血浆渗出导致阴道的润滑性增加，使阴道柔顺性增加(阴道平滑肌松弛)，并增加了阴道和阴蒂的敏感性。
雌性性唤起疾病(FSAD)是非常普遍的性疾病，受影响的绝经前、邻近绝经和绝经后(±HRT)妇女高达40％。FSAD的主要后果是生殖器充血或膨胀减少，表现出阴道缺乏润滑性以及缺少愉快的生殖器感觉。继而导致性需求减少、性交过程中疼痛以及难以达到性高潮。FSAD最常见的起因是造成阴道、阴唇和阴蒂充血的生殖器血流减少。(Park，1997；Goldstein，1998；Berman，1999a，Werbin，1999)。
如本文所述，本发明提供了恢复或加强患FSAD妇女正常性唤起反应的方法，该方法是通过增加生殖器血流实现的。
在研究中，我们采用激光多普勒技术测量生殖器血流的小变化，已经确定cAMP(环3’，5’-单磷酸腺苷)是阴道血管松弛的调节剂。利用VIP代谢抑制剂(一种NEP EC 3.4.24.11抑制剂)，我们还证实，VIP介导骨盆神经刺激(即性兴奋)中观察到的生殖器血流增加。这与性唤起动物模型的开发有关，并且证明这些数据反映出雌性性唤起过程中观察到的生理变化。该模型还用于确定和验证生殖器血流增加的机理，例如直接或间接增强cAMP介导的血管松弛。
3.0 方法
3.1 麻醉方案
经肌内注射0.5ml/kg美托咪定(Domitor)和肌内注射0.25ml/kg氯胺酮(Vetalar)联合预处理雌性新西兰兔(约2.5kg)，同时经面罩保持吸氧。用PortexTM无封套的气管内管3ID切开兔的气管，与换气装置连接，并保持每分钟30-40次呼吸的换气速率，潮汐体积(tidal volume)约18-20ml，最大呼吸道压为10cm水柱。然后用异氟烷麻醉并继续以2升/分钟的量换氧。用23G或24G导管在右缘耳静脉插管，并以0.5ml/分钟的量灌注Lactated Ringer溶液。在侵入性手术过程中保持供给兔3％的异氟烷，并降至2％异氟烷以保持麻醉。
3.2 脉管套管插入术
将兔子左侧腹股沟处的毛剃除，并沿大腿垂直切开约5cm长的切口。股静脉和股动脉露出，将其分离，然后插入PVC导管(17G)以用于输入药物和化合物。对股动脉重复同样的套管插入术，将导管插入10cm深以确保导管达到腹部主动脉。将动脉导管与Gould系统相连以记录血压变化。经动脉导管取出用于血气分析的血样。测量收缩压和舒张压，并用式(舒张压×2+收缩压)÷3计算平均动脉压。用脉搏氧计量器和Po-ne-mah数据获取软件系统(PonemahPhysiology Platform，Gould instrument Systems Inc)测量心率。
3.3骨盆神经刺激
从腹部中线切开至腹腔。切口长及耻骨上约5cm。简单地剥离脂肪和肌肉以使延及体腔的腹下神经露出。必需保持接近耻骨壁的侧曲线以避免损伤位于耻骨上的股静脉和股动脉。坐骨和骨盆神经位置较深，兔子背部一侧进一步解剖后可见。一旦找到坐骨神经，骨盆神经的位置也就容易找到了。术语骨盆神经很少使用，在解剖学书中没有对这一主题进行足够详细的定义。无论如何，神经刺激引起阴道和阴蒂血流的增加，并且造成骨盆区的神经支配。从组织周围找出骨盆神经，并在神经周围放置Harvard双极刺激电极。将神经略微抬高以使其拉紧，这样就确保将电极放置在适当的位置。在神经和电极的周围放入约1ml轻石蜡油。该轻石蜡油用作神经保护润滑剂并防止血液污染电极。电极与Grass S88刺激器相连。以下列参数刺激骨盆神经：5V，脉冲宽度0.5ms，刺激时间10秒，刺激频率2至16Hz。当每15-20分钟刺激神经时，得到可再现的响应。
在每次实验开始时测定频率响应曲线，以测定用作次最大响应的最佳频率，通常为4Hz。使用Harvard 22输注泵，以连续15分钟的刺激循环，经股静脉输入试验化合物。
3.4激光多普勒探针的放置
在耻骨尾端沿腹部中线切口使耻骨区露出。除去结缔组织使阴蒂膜露出，以确保其壁不含小血管。除去所有的结缔组织使外阴道壁也同样露出。将一只激光多普勒流量探针插入阴道内3cm，使得探针柄的一半可见。放置第二枚探针，使其刚好位于外阴蒂壁的上面。调节这些探针的位置直到获得信号为止。第二枚探针恰好放置在外阴道壁血管的表面。将两枚探针在其放置处夹紧。
阴道和阴蒂血流既可以使用Po-ne-mah数据获取软件(PonemahPhysiology Platform，Gould instrument Systems Inc)直接由流量计读数，也可以间接地由Gould图表记录器描绘。在试验开始时进行校准(0-125ml/分钟/100g组织)。
3.5输注血管活性肠肽(VIP)
VIP(Bachem，H-3775)的静脉内输注剂量为2.0、6.0、20.0、60.0μg/kg，并且以0.5ml盐水为载体输注。VIP用Harvard 22泵、以500μl/分钟的速度经3向接口输入股静脉。输注VIP后，用肝素化的盐水(Hepsaline)冲洗导管，使得VIP不会留在导管内。
对于用VIP输注进行的试验，需要初始敏化剂量响应曲线(2-60μg/kg)，以得到可再现的响应。最初输注Hepsaline(50UI/ml)作为阴性对照。
3.6输注抑制剂
在盐水或5％葡萄糖溶液(在1.8ml注射用水中的200μl 50％葡萄糖)中配制NEP(中性内肽酶EC3.4.24.11)抑制剂、5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂和NPYY1拮抗剂。将PDEcAMP抑制剂溶于40％乙醇溶液(在1.8ml注射用水/乙醇中的200μl 50％葡萄糖)中。以与VIP同样的速度输注抑制剂和对照物。在VIP剂量响应曲线之前保持NEP抑制剂30分钟，而在骨盆神经刺激之前保持NEP抑制剂、NPYY1受体拮抗剂和PDEcAMP抑制剂15分钟。
3.7测量分离的兔阴道中平滑肌的松弛
3.7(a)体外制备兔阴道：通过颈脱位处死雌性新西兰白兔(2.0-3.0kg)。打开腹腔并切除阴道。在Krebs碳酸氢盐缓冲剂中，以最初剩余的1.5g张力，将组织条用包线丝缝合(6/0线规)纵向固定在Wesley Co.5ml甲硅烷化器官腔中，保持温度在37℃，并通入95％O2/5％CO2。将每一组织条上面的缚线连结在10g容量的压力换置(force-displacement)传感器上，测量等渗压的变化，并用DART体外数据俘获系统记录。使组织平衡1.5小时并用Krebs有规律地洗涤。
3.7(b)血管活性肠肽引起的兔阴道松弛：用1μM蒸浴浓度(bathconcentration)苯福林使每一组织收缩。当收缩反应达到稳定的平台期(约15分钟)时，以对数单位将VIP渐增地加入器官腔中，以形成0.1-100nM的浓度。分别加入每一VIP浓度后，测量松弛反应5分钟；此时达到最大松弛。然后向组织中加入试验活性剂(例如NEP或PDE抑制剂)或DMSO载体(时间匹配对照)。
3.7(c)VIP松弛试验的数据分析：对于每一VIP浓度松弛-响应曲线，以苯福林引起的最大收缩百分数表示由VIP引起的松弛响应。然后将这些值对VIP浓度的对数绘图，得到S形曲线。为了曲线拟合，将最小松弛响应定为0％，而最大松弛响应不固定。测定产生50％苯福林收缩松弛所需的VIP浓度(EC50PE)。
3.7(d)电场刺激的兔阴道松弛：如3.7(a)节所述制备兔阴道组织条。将组织条固定在置于器官腔顶部和底部的两个铂电极之间，距离约4cm远。用1μM蒸浴浓度苯福林使每一组织收缩。当收缩反应达到稳定的平台(约15分钟)时，对组织进行预处理电场刺激(EFS)以产生松弛曲线。以0.5毫的秒脉冲宽度，连续10秒释放2、4、8和16Hz的系列频率，在40-60伏电压下进行上述刺激。在每一频率(5分钟)之间使组织恢复到基线收缩前张力，并记录松弛响应的大小。
在完成预处理EFS响应曲线后，将所有组织洗涤15分钟，使组织恢复到基线张力。然后向组织中加入试验活性剂(例如NEP或PDE抑制剂，一氧化氮合酶[NOS]抑制剂)或DMSO载体(时间匹配对照)。加入化合物或载体后，用苯福林(1μM)使组织再收缩15分钟，并如上所述测定EFS-引起的松弛响应曲线。
对于EFS试验，向Krebs中加入阿托品(10μM)和胍乙啶(150μM)以消除阴道的任何胆碱能或肾上腺素能神经原神经支配。
3.8测量分离的兔阴道中cAMP水平
用Biotrak cAMP酶免疫分析(EIA)试剂盒(Amersham Life Sciences RPN225)测定阴道组织提取物中的cAMP浓度。用试验化合物(例如毛喉素或VIP)处理分离的阴道组织样品。5分钟后，用液氮将样品速冻，打成匀浆并提取cAMP。通过EIA测定cAMP的含量。EIA是以来标记的cAMP与固定量的过氧化物酶标记的cAMP对有限量的cAMP特异性抗体的竞争为基础的。
3.9测量分离的兔阴道中磷酸二酯酶(PDE)活性
从ABS Inc.，Delaware获得人阴道壁胞质溶胶提取物(供者的年龄为41-60岁)。通过Mono-Q阴离子交换色谱分离PDE同工酶，并根据其底物选择性、对变构调节剂和选择性抑制剂的敏感性确定其特征。用特异性PDE同工酶抗体进行Western分析，以检测PDE在人阴道中的表达。
所有数据均以平均值±标准偏差记录。用t-检验确定显著变化。
4.0结果和讨论
4.1性唤起动物模型
在研究中，我们开发了健康的可再现性唤起生理模型。使用该麻醉的兔模型，我们可以用激光多普勒技术测量到很小的生殖器血流变化。采用刺激骨盆神经来刺激性唤起的神经元作用。
我们发现，刺激骨盆神经引起阴道和阴蒂血流的频率依赖性增加(见图1)。无论是阴道内壁或是外壁的记录，阴道血流的增加都是显著的。以2Hz的频率刺激骨盆神经使阴道血流量平均最大升高10.3±1.8，以4Hz的频率刺激为20.0±4.6，以8Hz的频率刺激为36.3±4.8并且以16Hz的频率刺激为46.6±4.7ml/分钟/100g组织(n＝4；15-20V，0.5ms，10s)，并且阴蒂血流的增加以2Hz的频率刺激为14.7±3.6，以4Hz的频率刺激为29.4±1.4，以8Hz的频率刺激为69.7±2.1。这些值与前面在人体研究和性唤起动物模型中观察到的范围相似。(Berman，1999a；Park，1997)。
我们发现，对骨盆神经的次最大刺激导致生殖器血流的可再现增加(例如每15分钟以4Hz的频率刺激使阴道血流量平均增加8.50±0.1ml/分钟/100g组织(n＝8)并使阴蒂血流量平均增加13.65±0.86ml/分钟/100g组织(n＝11))。这种再现性保持高达5小时。我们可以利用这些响应的再现性进行如下研究：a)识别内源性血管活性物质/导致生殖器充血的机理，和b)可以有效增加阴道和/或阴蒂血流的药物的影响。
我们发现，在麻醉兔中没有与骨盆神经刺激有关的心血管副作用(见图3)。
生殖器血流的增加是在性唤起过程中(Berman，1999)通过增加动脉血流供给实现的-阴道动脉、子宫动脉的阴道分支、内阴部动脉和中间直肠动脉的中间分支都向阴道和阴蒂供血。源于S2/S4脊柱区的骨盆神经支配雌性生殖器，并且其末端延伸至下阴道、阴蒂和相关的血管中。通过刺激骨盆神经，我们可以模拟在性唤起中观察到的血流的作用，即增加动脉生殖器血流量。有趣的是，静脉引流使毛细网络充血并不能使动脉血流量增加。阴道充血通过增加血浆的渗出致使阴道润滑，这是性刺激过程中观察到的第一个骨盆反应。目前骨盆神经刺激或性唤起过程中神经递质的释放是不确定的。阴道和阴蒂的脉管系统和微脉管系统受含有神经肽或其他神经递质的神经支配，这些神经具有明确的免疫组织化学特征。这些研究表明，与降钙素基因有关的肽(CGRP)、神经肽Y(NPY)、一氧化氮合成酶(NOS)、P物质和血管活性肠肽(VIP)都存在于支配人阴道和阴蒂的神经中(Hoyle，1996；Burnett，1997；HauserKronberger，1999)。
4.2 性唤起麻醉的兔模型的验证
为了将用该模型得到的血流数据转化成性唤起人模型中观察到的数据，我们将阴道血流数据直接与临床前研究中得到的心血管数据进行比较。
我们发现，输注VIP在性唤起兔模型中具有以下作用：
·外原VIP(静脉药团)引起阴道血流显著的浓度依赖性增加(见图2a)。无论是阴道内壁或是阴道外壁，所记录的阴道血流的增加明显高于上述基础血流值。静脉内注射VIP(60μg/kg)使阴道血流显著增加24.7±3.6ml/分钟/100g组织。输注后约11分钟，血流量保持高于基础水平。剂量越低，增加越小，例如6.0μg/kg VIP使阴道血流量升高7.5±1.3ml/分钟/100g组织，并使血流量在输注后7分钟保持升高。
·反复输注同样剂量的VIP(以30分钟间隔静脉内输注)引起阴道血流明显可再现地增加(见图2b)。
·VIP(静脉内输注)明显使心率增加，并使平均动脉血压降低(见图3)。静脉内输注6.0μg/kg VIP使动脉血压显著减少13.2±0.7mmHg，并使每分钟心率明显升高16±4次搏动。
该动物模型直接反映出给健康志愿者输注VIP所观察到的临床数据，即阴道血流增加、降低血压和心率升高。因此，该模型可用于研究在性唤起过程中出现的生理变化的机理，此外还可用于确定增强阴道血流、因而治疗FSAD的新途径。
4.3 通过刺激cAMP/腺苷酸环化酶途径由VIP-引起的阴道血流变化
Ottesen与其合作者证明VIP引起阴道血流增加并使健康志愿者的阴道润滑。然而VIP的作用机理是不清楚的。在该文献中，有大量的VIP通过不同的第二信使系统包括cGMP/鸟苷酸环化酶(Ashur-Fabian，1999)、一氧化碳/血红素加氧酶(Fan，1998)和cAMP/腺苷酸环化酶(Schoeffter，1985；Gu，1992；Foda，1995)传输信号的实例。近期描述用一氧化氮的释放解释VIP如何在子宫动脉中起松弛作用的报道就是例证(Jovanovic，1998)。令人关注的还有VIP调节NO/cGMP在雄性泌尿生殖器功能的证据(Kim，1994)，并且有用VIP(0.5μM)处理人阴道平滑肌细胞培养物不能使cAMP含量升高的直接证据(Traish，1999，出处同上)。
在该研究中我们证明，通过升高胞内cAMP水平，VIP引起血管松弛。通过实施一系列功能试验，我们测量了血流量和平滑肌松弛，并对胞内cAMP的浓度进行生化测定。我们使用毛喉素，一种腺苷酸环化酶活化剂或cAMP的模拟物，模拟cAMP/腺苷酸环化酶途径活化的作用。VIP和毛喉素对生理性唤起作用在阴道血流和松弛方面具有同样的影响。
VIP(20μg/kg)和毛喉素(40nmol/kg)使阴道血流分别明显增加13.2和12.7ml/分钟/100mg组织(见图2a和4a)。由VIP和毛喉素引起的这些变化的幅度并无明显差异。无论是阴道内壁或是阴道外壁，所记录的这些变化明显高于上述基础血流量。
VIP(0.1μM)和毛喉素(10μM)均使分离的阴道组织中胞内cAMP的浓度比上述基础水平明显增高(见图4b)。
VIP(0.1μM)和毛喉素(10μM)使基础浓度从276nM分别升高156％和238％。这些百分数的不同反映出所用VIP和毛喉素浓度的不同，例如浓度为0.1μM的VIP使预收缩的分离组织松弛约80％，而10μM浓度的毛喉素足以使分离的组织完全松弛。
此外，我们证明，VIP和毛喉素使分离的阴道组织松弛，其ED50值分别为18.8±0.6nM和320±20nM(见图4c)。
这些数据表明，VIP通过cAMP/腺苷酸环化酶途径引起阴道血管松弛，因此该模型可用于研究是否刺激骨盆神经、即性唤起导致VIP释放/cAMP/腺苷酸环化酶途径的活化。此外，也可以研究在性唤起过程中增强阴道血流的途径，例如直接或间接加强cAMP的信号传输。
4.4cAMP是阴道血管松弛的介质
在性唤起过程中使阴道血流增加的神经递质和第二信使候选物目前尚未确认。迄今为止，研究人员关注于一氧化氮(NO)/cGMP途径。根据本发明，我们证实了：1)cAMP/腺苷酸环化酶途径介导了VIP引起的阴道血流增加；2)VIP是性唤起过程中释放的内源性神经递质；和3)内原释放的VIP通过使cAMP升高导致其血管松弛作用。
使阴道壁松弛的神经递质目前尚未确定。我们已经证明VIP是刺激骨盆神经时释放出来的神经递质，并且cAMP介导了VIP介导的血管松弛。防止VIP代谢或直接加强cAMP信号传输的活性物质使骨盆神经刺激引起的阴道血流增加强化，例如分别有NEP抑制剂或PDEcAMP抑制剂(参见下面一节)。
 在研究中我们发现，可以排除NO在VIP引起的阴道松弛中的作用。有效的和选择性的5型PDE抑制剂对VIP-引起的分离阴道平滑肌的松弛具有最小的影响(VIP-引起的松弛增强30％；见表1)。
表1：VIP介导的分离兔阴道松弛的增强。该表说明了VIP-引起的预收缩(1μM苯福林)阴道平滑肌松弛的EC50值增加的百分数。1、2、3和4型PDEcAMP的选择性抑制剂都会显著加强VIP-介导的松弛，而5型PDEcAMP的选择性抑制剂或载体对照对VIP-介导的松弛没有影响。
选择性剂量的PDE抑制剂 VIP-引起的松弛增加的百分数
1型PDEcAMP 210％
2型PDEcAMP 130％
3型PDEcAMP 220％
4型PDEcAMP 160％
5型PDEcGMP 没有作用(30％)
对照-载体 没有作用
我们证明，VIP还是内源性NANC(非肾上腺素能，非胆碱能的)神经递质，它部分地造成EFS-引起的分离阴道平滑肌的松弛。高剂量的一氧化氮合酶抑制剂(L-NOARG，300μM)仅仅使EFS-引起的松弛抑制50％。防止NEP-引起的VIP代谢并因此加强VIP信号传输的NEP抑制剂(1μM)增强了由EFS引起的一氧化氮NANC松弛。我们已经证明，NO和VIP都可调节阴道壁平滑肌的紧张。因此用增强NO/cGMP和/或VIP/cAMP介导的信号传输的活性物质可以治疗性地加强阴道平滑肌的松弛。
4.5 VIP经cAMP途径引起阴蒂血管松弛
在性唤起过程中使阴蒂血流增加的神经递质和第二信使候选物目前尚未确定。与目前对阴道血流的研究一致，研究人员推测并关注于一氧化氮(NO)/cGMP途径。尽管可见含有神经元的VIP存在于阴蒂组织中，但是目前没有VIP在干预阴蒂血流/充血方面的报道(Hauser-Kronberger等，1999)。
在该研究中我们证实：
1.输注VIP增加阴蒂血流
2.cAMP/腺苷酸环化酶途径介导VIP-引起的阴蒂血流增加
3.VIP是在性唤起过程中释放的内源性阴蒂神经递质：
1.输注VIP(60-200μg/kg，静脉内注射药团)引起阴蒂血流以浓度依赖的方式增加(图5)。静脉输注200μg/kg VIP后观察到阴蒂血流增加115％。这明显高于对照输注(Hepsaline)的结果。
2.通过输注cAMP模拟物毛喉素(40nmol/kg，静脉内注射药团，图5)可以模拟VIP对阴蒂血流的影响。静脉内输注40nmol/kg毛喉素后观察到阴蒂血流增加156％。这明显高于对照输注(Hepsaline)的结果。值得注意的是，该响应幅度与VIP(200μg/kg，静脉内注射药团)引起的响应相似，并且可与图2和图4中所示的对阴道血流观察到的结果相比。
3.临床相关剂量的NEP EC 3.4.24.11的选择性抑制剂明显加强了骨盆神经刺激引起的阴蒂血流增加(见图12)。与载体对照增加相比，NEP抑制剂使阴蒂血流峰的增加加强至131％。
这些数据确定了VIP能够增加阴蒂血流/使血管松弛，并且这可以通过活化cAMP/腺苷酸环化酶途径模拟。对于NEP EC3.4.24.11(负责VIP代谢)的抑制剂加强骨盆神经刺激引起的阴蒂血流增加的发现，证实了VIP是骨盆神经刺激/性唤起过程中释放的神经递质。
4.6 直接或间接升高cAMP水平的药物活性物质使生殖器血流增加
FSAD与生殖器血流量有关，并且由生殖器血流减少引起。治疗这种疾病的有效途径是使生殖器血流增加。已经确定，cAMP是生殖器血管松弛的介质，而神经元释放的VIP导致cAMP的升高，我们相信，如果cAMP信号传输增强，其结果是生殖器血流增加，因此使生殖器血流恢复到正常水平并治疗FSAD。
特别优选的是，我们选择三种靶向物质以直接或间接加强cAMP-介导的血管松弛-PDEcAMP抑制剂例如2型PDEcAMP抑制剂、NEP(EC 3.4.24.11)抑制剂和神经肽Y Y1(NPY Y1)受体拮抗剂。
4.6.1中性内肽酶(NEP EC 3.4.24.11)抑制剂
NEP EC 3.4.24.11引起VIP代谢，因此终止VIP介导的生物活性。NEP抑制剂加强性唤起过程中释放的VIP的内源性血管松弛作用。这将具有加强生殖器充血的临床作用。
先前没有文献报道NEP EC 3.4.24.11存在于阴道组织中或者在阴道组织中发生功能性作用或是在性唤起过程中发挥作用。
临床相应剂量的NEP EC 3.4.24.11的选择性抑制剂使骨盆神经刺激引起的阴道血流增加明显加强(见图6)。
与时间匹配的对照增加相比，NEP抑制剂使阴道血流峰的增加加强高达53％。次最大刺激频率(如4Hz)的增加是剂量依赖性的，例如静脉内注射0.1mg/kg引起35.0±7.6％的增加；静脉内注射0.3mg/kg引起42.6.0±27.7％的增加，并且静脉内注射1.0mg/kg引起52.8±32.5％的增加。NEP抑制剂对基础(未刺激的)阴道血流没有刺激。因此，本发明的活性物质通过加强cAMP的信号传输加强性唤起，而不是在没有性需求的情况下引起性唤起，即直接增加cAMP的信号传输。
临床相应剂量的NEP EC 3.4.24.11的选择性抑制剂使骨盆神经刺激引起的阴蒂血流增加明显加强(见图12)。与载体对照增加相比，NEP抑制剂使阴蒂血流峰的增加加强131％。NEP抑制剂对基础(未刺激的)阴道血流没有刺激。这进一步使得我们确信，本发明的活性物质通过加强cAMP的信号传输加强性唤起，而不是在没有性需求的情况下引起性唤起，即直接增加cAMP的信号传输。
与时间匹配的对照相比，临床相应剂量的NEP EC 3.4.24.11的选择性抑制剂使VIP引起的阴道血流增加加强。次最大剂量的VIP(例如6.0μg/kg)使峰增加明显加强(95±6％)，并使该加强的时间延长(约140％-从7分钟增加至超过17分钟，见图7)。将NEP抑制剂与引起最大血流增加剂量的VIP联合给药时，使VIP引起的阴道血流增加的时间明显延长(在11-20分钟内约增加80％)。
临床相应剂量的NEP抑制剂使VIP引起的和神经介导的分离组织的松弛明显加强。在选择性NEP抑制剂(1μM)存在下，VIP的EC50值从18.8±0.6nM显著减少至2.9±0.3nM。NEP抑制剂的作用是浓度依赖性的。
表达NEP EC 3.4.24.11 mRNA信使和蛋白，并且通过Northern和Western分析在人和兔阴道中识别出来。
4.6.2磷酸二酯酶(PDE)抑制剂
cAMP由cAMP-水解PDE酶即PDEcAMP降解。PDEcAMP抑制剂使性唤起过程中释放的cAMP的内源性血管松弛作用加强。这应该具有加强阴道充血的临床作用。
先前没有文献报道PDEcAMP存在于阴道组织中或者这些同工酶在阴道组织中发生功能性作用或是在性唤起过程中发挥作用。人和兔阴道的PDE特性表明存在1、2、3、4、7和8型PDEcAMP同工酶。这些PDEcAMP的抑制剂代表了加强阴道血流和/或松弛阴道平滑肌的可能的活性物质。
临床相应剂量的2型PDEcAMP的选择性抑制剂使骨盆神经刺激引起的阴道血流增加明显加强(见图8)。与时间匹配的对照增加(@4Hz)相比，2型PDEcAMP抑制剂(500μg/kg；静脉内注射)使阴道血流峰的增加加强86.8±21.9％。
2型PDEcAMP的选择性抑制剂使VIP(60μg/kg)-引起的阴道血流峰的增加持续时间明显提高了超过100％(以50％的幅度测量；见图9)。2型PDEcAMP的选择性抑制剂使VIP刺激引起的阴道血流峰的增加明显加强(约15±3％[200μg/kg])。
PDEcAMP抑制剂使VIP-引起的预收缩分离的阴道平滑肌的松弛加强(1μM苯福林；见表1)。1、2、3和4型PDEcAMP的选择性抑制剂均明显加强了VIP-介导的松弛(210％ @76nM，130％ @8nM，220％ @3.4μM和160％ @686nM增强VIP的EC50值)。这些抑制剂以本身已知的对所关注的具体PDEcAMP具有选择性的剂量给药。5型PDEcGMP的选择性抑制剂或载体对照对VIP介导的松弛没有有用的影响。
4.6.3NPY Y1受体拮抗剂
NPY对VIP介导的血管松弛具有抑制作用，并且NPY Y1受体拮抗剂促进性唤起过程中释放的内源性VIP的血管松弛作用。这应该具有加强阴道充血的临床作用。
先前没有文献报道NPY受体存在于阴道组织中或者这些同工酶在阴道组织中发生功能性作用或是在性唤起过程中发挥作用。
NPY受体表达的研究已经通过Northern和Western分析发现，在人和兔阴道中存在NPY Y1、Y2和Y5受体亚型。
临床相应剂量的NPY Y1的选择性抑制剂使骨盆神经刺激引起的阴道血流增加明显加强(见图10)。与时间匹配的对照增加相比，NPY Y1拮抗剂使阴道血流峰的增加加强92％。次最大刺激频率(例如4HZ)的增加是剂量依赖性的，例如静脉内注射0.01mg/kg引起15.8±19.6％的增加；静脉内注射0.03mg/kg引起35.1±17.17％的增加；静脉内注射0.10mg/kg引起60.1±16.9％的增加并且静脉内注射0.3mg/kg引起91.9±27.4％的增加(平均值±标准偏差，n＝3)。NPY Y1拮抗剂对基础(未刺激的)阴道血流没有刺激。这就支持了我们的观点，即它们通过加强cAMP的信号传输加强性唤起，而不是在没有性需求的情况下引起性唤起，即直接增加cAMP的信号传输。
4.7 加强cAMP或增加阴道血流的活性物质对麻醉兔平均动脉血压的影响
在口服治疗FSAD的研究中，希望对心血管没有副作用，例如对血压或心率没有副作用。在研究中，我们发现输注VIP明显降低平均动脉血压(见图3)以及明显增加心率。因此，特别优选的是，该活性物质不是VIP。无论如何，骨盆神经刺激以及PDEcAMP和NEP抑制剂对血压没有影响。静脉内输注的6.0μg/kg VIP使平均动脉血压明显减少13.2±0.7mmHg，并使每分钟的心率显著增加16±4次搏击。更高剂量例如60μg/kg VIP(静脉内输注)使平均动脉血压明显减少14.7±1.37mmHg，并使每分钟的心率显著增加111±30次搏击，此后平均动脉血压增加8.5±1.4mmHg。
试验化合物
用上述提及的一系列化合物进行本发明的试验，并且发现它们对于本发明是有效的-即它们可以用作治疗FSD、特别是FSAD的PcAMP。
这些化合物包括：
式Ia(“FIa”)化合物-即5-[4-(二乙基氨基)苄基]-1-甲基-3-丙基-6，7-二氢-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮。FIa可以按照EP-A-0911333(其中的实施例50)的教导制备。
式II(“FII”)化合物-即9-(1-乙酰基-4-苯基丁基)-2-[(3，4-二甲氧基苯基)甲基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮。FII可以按照EP-A-0771799(其中的实施例100)的教导制备。
式III(“FIII”)化合物-即甲氰吡酮。FIII是市售产品。
式IV(“FIV”)化合物-即咯利普兰。FIV是市售产品。
式V(“FV”)化合物-即环己烷甲酸，3-[[[1-(2-羧基-4-戊烯基)环戊基]羰基]氨基]-，1-乙基酯。FV可以按照EP-A-0274234(其中的实施例300)的教导制备。
式VI(“FVI”)化合物-即环己烷甲酸，3-[[[1-(2-羧基-4-戊烯基)环戊基]羰基]氨基]-。FV可以按照EP-A-0274234(其中的实施例379)的教导制备。
特别是，FIa、FII、FIII和FIV是PDEcAMP抑制剂。FIa是I:PDEI，FII是I:PDEII，FIII是I:PDEIII并且FIV是I:PDEIV。
这些化合物的数据如上示于前面实施例一节中-例如见表I。
显然，这些PDEcAMP抑制剂加强VIP-引起的分离组织的松弛。
临床相关剂量的FII-选择性I:PDEII-加强VIP-引起的阴道血流增加。
临床相关剂量的FII还使骨盆神经刺激引起的阴道血流增加加强。
FV和FVI是NEP EC3.4.24.11的选择性抑制剂。
在前面的实施例一节中如上所示的数据是由FVI得出的。但是，由FV得到了类似的结果。
显然，临床相关剂量的FV和FVI加强VIP-引起的阴道血流增加。
临床相关剂量的FV和FVI还使骨盆神经刺激引起的阴道血流增加加强。
临床相关剂量的FV和FVI还使VIP-引起和神经介导的分离组织的松弛加强。
其他用于试验并证明有效的化合物包括：
2-[(1-{[(1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-3-吡啶基)氨基]羰基}环戊基)-甲基]-4-甲氧基丁酸(F57)
2-{[1-({[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]氨基}羰基环戊基]-甲基}-4-苯基丁酸(F58)
(+)-2-{[1-({[2-(羟甲基)-2，3-二氢-1H-茚-2-基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}-4-苯基丁酸(F59)
2-[(1-{[(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}环戊基)-甲基]-4-苯基丁酸(F60)
顺-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-[(1-{[(4-{[(苯磺酰基)氨基]羰基}环己基)氨基]羰基}环基)甲基]丙酸(F61)
(+)-2-{[1-({[2-(羟甲基)-2，3-二氢-1H-茚-2-基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}戊酸(F62)
(+)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}环戊基)-甲基]戊酸(F63)
2-({1-[(3-苄基苯胺基)羰基]环戊基}甲基)戊酸(F64)
2-[(1-{[(1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-3-吡啶基)氨基]羰基}环戊基)-甲基]戊酸(F65)
2-{[1-({[(1R，3S，4R)-4-(氨基羰基)-3-丁基环己基]氨基}羰基)环戊基]甲基}戊酸(F66)
F57-66中的每一个化合物均是I:NEP。
合成化合物F57-66
在下面的说明中，制备实施例是中间体的合成；而实施例则是本发明各化合物的合成。
实施例1
2-[(1-{[(1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-3-吡啶基)氨基]羰基}环戊基)-甲基]- 4-甲氧基丁酸(F57)
Figure A20041008595501101
将制备1(1/62)的苄基酯(850mg，1.64mmol)和5％钯/炭(250mg)在40％乙醇水溶液(21ml)中的混合物在30psi和室温下氢化30分钟。反应混合物经Hyflo过滤，减压蒸发滤液。残余的泡沫经硅胶柱色谱纯化，用二氯甲烷∶甲醇(97∶3)作洗脱剂，得到白色泡沫状标题化合物，550mg，79％；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)d：1.24-2.17(m，12H)，2.18-2.31(m，1H)，3.07(s，3H)，3.21(t，2H)，5.08(s，2H)，6.63(d，1H)，7.23-7.41(m，5H)，7.72(d，1H)，8.24(s，1H)。
分析实测值：C，67.46；H，7.18；N，6.24。C24H30N2O5的理论值：C，67.58；H，7.09；N，6.57％。
实施例2
2-{[1-({[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}-4-苯基 丁酸(F58)
Figure A20041008595501102
将制备3(3/67)的苄基酯(780mg，1.55mmol)和10％钯/炭(100mg)在乙醇∶水(90∶10体积比)(30ml)中的混合物在室温和60psi氢气压下氢化1.5小时。滤出催化剂，减压蒸发滤液得到白色泡沫状标题化合物，473mg，74％；1H NMR(CDCl3，300MHz)d：1.26-1.77(m，10H)，1.78-2.46(m，11H)，2.49-2.70(m，2H)，2.95-3.36(m，4H)，6.92-7.38(m，5H)；分析实测值：C，64.05；H，7.73；N，6.22。C24H34N2O4；0.75H2O的理论值：C，65.88；H，7.83；N，6.40％。
实施例3
(+)-2-{[1-({[2-(羟甲基)-2，3-二氢-1H-茚-2-基]氨基}羰基)环戊基]-甲 基}-4-苯基丁酸(F59)
使用AD柱以及用己烷∶异丙醇∶三氟乙酸(70∶30∶0.2)作洗脱剂，通过标准HPLC方法，可以纯化2-{[1-({[2-(羟甲基)-2，3-二氢-1H-茚-2-基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}-4-苯基丁酸(WO 9110644)，得到实施例3的标题化合物，99.5％ee；[α]D＝+9.1°(c＝1.76，乙醇中)。
实施例4
2-[(1-{[(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}环戊基)-甲基]-4-苯基丁 酸(F60)
将制备4(4/70)的苄基酯(187mg，0.39mmol)和10％钯/炭(80mg)在乙醇(20ml)中的混合物在60psi下氢化18小时。Tlc分析表明仍剩余有原料，因此再加入10％钯/炭(100mg)，并继续反应5小时。再次进行的Tlc分析表明还剩有原料，所以再加入催化剂(100mg)，并继续氢化18小时。混合物经Arbocel过滤，减压浓缩滤液，并与二氯甲烷共沸。粗产物经硅胶色谱纯化，使用Biotage柱，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)作洗脱剂，得到标题化合物，为澄清的油，80mg，53％；1H NMR(CDCl3，300MHz)d：1.51-1.89(m，9H)，2.03(m，1H)，2.20(m，1H)，2.40(m，2H)，2.60(m，5H)，7.15-7.30(m，5H)；LRMS：m/z 387.8(MH+)。
实施例5
顺-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-[(1-{[(4-{[(苯磺酰基)氨基]羰基}环己基)氨基] 羰基}环戊基)甲基]丙酸(F61)
Figure A20041008595501121
将制备8(8/66)的叔丁基酯(446mg，0.75mmol)在二氯甲烷(5ml)和三氟乙酸(5ml)中的溶液在室温搅拌18小时。减压浓缩反应混合物，残余物与二氯甲烷共沸，然后与甲苯共沸，最后与乙醚共沸，得到标题化合物，为白色泡沫，385mg，95％；1H NMR(CDCl3，400MHz)d：1.48-2.17(m，18H)，2.40(s，1H)，2.66(s，1H)，3.37(s，3H)，3.50-3.70(m，6H)，3.94(s，1H)，6.10(d，1H)，6.59(s，1H)，7.55(t，2H)，7.61(m，1H)，8.02(d，2H)，9.11(s，1H)；分析实测值：C，54.88；H，6.90；N，5.04。C26H38N2O8S；1.7H20理论值：C，57.97；H，7.11；N，5.20％。
实施例6
(+)-2-{[1-({[2-(羟甲基)-2，3-二氢-1H-茚-2-基]氨基}羰基)环戊基]-甲基} 戊酸(F62)
Figure A20041008595501131
使用AD柱，经HPLC进一步纯化2-{[1-({[2-(羟甲基)-2，3-二氢-1H-茚-2-基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}戊酸(WO 9110644)，用己烷∶异丙醇∶三氟乙酸(90∶10∶0.1)作洗脱剂，得到实施例6的标题化合物，99％ee，[α]D＝+10.4°(c＝0.067，乙醇)。
实施例7
(+)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}环戊基)-甲基]戊酸 (F63)
Figure A20041008595501132
用AD柱，经HPLC将制备18的酸(18/ex4)(824mg)进一步纯化，使用己烷∶异丙醇∶三氟乙酸(85∶15∶0.2)作洗脱剂，得到实施例7的标题化合物，为白色泡沬，386mg，99％ ee，1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：0.90(t，3H)，1.38(m，6H)，1.50-1.79(m，9H)，2.19(m，1H)，2.30(m，1H)，2.44(m，1H)，2.60(m，1H)，2.98(q，2H)，12.10-12.27(bs，1H)；LRMS：m/z 338(MH-)；并且[α]D＝+3.8°(c＝0.1，甲醇)。
实施例8
2-({1-[(3-苄基苯胺基)羰基]环戊基}甲基)戊酸(F64)
Figure A20041008595501141
将制备10(10/53)的苄基酯(1.3mg，2.47mmol)和5％钯/炭(130mg)在水(10ml)和乙醇(40ml)中的混合物在30psi和室温下氢化2小时。反应混合物经Arbocel过滤，减压浓缩滤液，残余物用二氯甲烷研制。残余的胶用乙醚研制，然后用己烷研制，并在50℃干燥，得到固体状的标题化合物，0.79g，81％；1HNMR(CDCl3，300MHz)d：0.95(t，3H)，1.24-1.51(m，3H)，1.58-1.80(m，7H)，1.88(dd，1H)，2.15(m，2H)，2.24(m，1H)，2.48(m，1H)，4.00(s，2H)，6.98(d，1H)，7.24(m，6H)，7.40(m，3H)；分析实测值：C，75.48；H，7.76；N，3.59。C25H31NO3；0.25H2O的理论值：C，75.44；H，7.98；N，3.51％。
实施例9
2-[(1-{[(1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-3-吡啶基)氨基]羰基}环戊基)-甲基]戊 酸(F65)
按照与制备19(19/ex21)所述相似的方法，由制备13(13/56)的苄基酯得到标题化合物，产率51％，为白色泡沬，不同的是，该产物经硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯作洗脱剂；1H NMR(CDCl3，300MHz)d：0.96(t，3H)，1.28-1.80(m，12H)，2.01(m，1H)，2.30-2.52(m，2H)，5.02(dd，2H)，6.60(d，1H)，7.27(m，5H)，7.70(s，1H)，8.34(s，1H)；分析实测值：C，69.52；H，7.41；N，6.51。C24H30N2O4；0.25H2O的理论值：C，69.45；H，7.41；N，6.75。
实施例10
2-{[1-({[(1R，3S，4R)-4-(氨基羰基)-3-丁基环己基]氨基}羰基)环戊基]甲 基}戊酸(F66)
按照与制备14(14/ex1)所述类似的方法，由相应的叔丁基酯制备式ic化合物，即其中r1是丙基的通式i化合物。
制备1(1/62)
2-[(1-{[(1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-3-吡啶基)氨基]羰基}环戊基)-甲基]- 4-甲氧基丁酸苄基酯
Figure A20041008595501152
向冰冷却的1-{2-[(苄氧基)羰基]-4-甲氧基丁基}环戊烷甲酸(EP274234)(1.0g，3.3mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(2滴)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中加入草酰氯(0.26ml，3.0mmol)，并在室温搅拌反应物2小时。减压浓缩溶液，残余物与二氯甲烷(3×10ml)共沸。将产物溶于二氯甲烷(20ml)中，然后在冰浴中冷却。加入制备2(2/28)的胺(600mg，3mmol)和N-甲基吗啉(0.6ml，5.45mmol)，并在室温搅拌反应物18小时。减压浓缩反应混合物，并在水和乙醚之间分配。有机层用盐酸(2N)、碳酸氢钠溶液、然后用水洗涤，用硫酸镁干燥并减压蒸发。残余的绿色固体经中压硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯∶己烷(90∶10)作洗脱剂，得到标题化合物，880mg，57％；1H NMR(CDCl3，300MKz)d：1.37-2.28(m，12H)，2.46-2.64(m，1H)，3.20(s，3H)，3.31(m，2H)，4.97(dd，2H)，5.08(dd，2H)，6.57(d，1H)，7.12(m，1H)，7.18-7.48(m，10H)，8.08(d，1H)。
制备2(2/28)
5-氨基-1-苄基-2(1H)-吡啶酮
将1-苄基-5-硝基-1H-吡啶-2-酮(Justus Liebigs Ann.Chem.484；1930；52)(1.0g，4.35mmol)和颗粒锡(3.5g，29.5mmol)在浓盐酸(14ml)中的混合物在90℃加热1.5小时。冷却的溶液用水稀释，用碳酸钠溶液中和，并用乙酸乙酯(总量250ml)萃取。将合并的有机提取液过滤，用硫酸镁干燥并减压蒸发，得到标题化合物，为淡绿色固体(随时间推移变为蓝色)，440mg，51％；1HNMR(CDCl3，250MHz)δ：4.12-4.47(bs，2H)，5.00(s，2H)，6.31(d，1H)，6.86(s，1H)，7.07(m，1H)，7.14-7.42(m，5H)。
制备3(3/67)
2-{[1-({[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}-4-苯基丁酸苄酯
Figure A20041008595501162
在室温，向冷却的1-{2-[(苄氧基)羰基]-4-苯基丁基}环戊烷甲酸(EP274234)(1.5g，3.94mmol)在无水二氯甲烷(15ml)中的溶液中依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.06g，5.53mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(0.60g，4.44mmol)和4-甲基吗啉(0.56g，5.54mmol)，然后加入N-(3-氨基丙基)-2-吡啶酮(0.56g，3.94mmol)，并在室温搅拌反应物18小时。该混合物用水、2N盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，然后用硫酸镁干燥并减压蒸发。残余的黄色油经硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯∶戊烷(50∶50)作洗脱剂，得到标题化合物，为澄清的胶，800mg，40％；1H NMR(CDCl3，300MHz)d：1.37-2.20(m，16H)，2.34-2.58(m，5H)，2.92-3.46(m，6H)，5.07(d，1H)，5.18(d，1H)，6.98-7.47(m，10H)。
制备4(4/70)
2-[(1-{[(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}环戊基)-甲基]-4-苯基丁 酸苄酯
按照与制备5(5/68)所述类似的方法，由1-{2-[(苄氧基)羰基]-4-苯基丁基}环戊烷甲酸(EP 274234)和2-氨基-5-甲基-1，3，4-噻二唑得到标题化合物，为澄清的油，产率74％；1H NMR(CDCl3，400MHz)d：1.58-1.76(m，7H)，1.83-1.98(m，3H)，2.03(m，1H)，2.20(m，1H)，2.35(m，1H)，2.44(m，3H)，2.65(s，3H)，5.02(dd，2H)，7.00(d，2H).7.15(m，1H)，7.19(m，2H)，7.35(m，5H)；LRMS：m/z 478.7(MH+)。
制备5(5/68)
2-{[1-({[3-(甲氨基)-3-氧代丙基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}-4-苯基丁酸 苄酯
在室温，向冷却的1-{2-[(苄氧基)羰基]-4-苯基丁基}环戊烷羧酸(EP274234)(202mg，0.53mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中的溶液中依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(122mg，0.64mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(86mg，0.64mmol)和4-甲基吗啉(173μl，1.59mmol)，然后加入制备6(6/23)的胺盐酸盐(146mg，1.06mmol)，并在90℃搅拌反应物18小时。将该冷却的溶液减压浓缩，残余物在水(20ml)和乙酸乙酯(100ml)之间分配。分离各层，有机相用水(3×30ml)、盐水(25ml)洗涤，用硫酸镁干燥，并减压蒸发，得到澄清的油。粗产物经硅胶柱色谱纯化，用二氯甲烷∶甲醇(98∶2)作洗脱剂，得到标题化合物，为无色油，162mg，67％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.38-1.53(m，2H)，1.53-1.96(m，8H)，2.02(m，2H)，2.27(t，2H)，2.46(m，3H)，2.76(d，3H)，3.44(m，2H)，5.13(s，2H)，5.79(bs，1H)，6.38(m，1H)，7.06(d，2H)，7.18(m，1H)，7.22(m，2H)，7.38(m，5H)；LRMS：m/z 465.5(MH+)。
制备6(6/23)
3-氨基-N-甲基丙酰胺盐酸盐
在50psi和室温下，将制备7(7/13)的氨基甲酸苄基酯(7.92g，33.5mmol)和5％钯/炭(800mg)在乙醇(300ml)中的混合物氢化4小时。反应混合物经Arbocel过滤，用乙醇充分洗涤，并向合并的滤液中加入1N盐酸(36.9ml，36.9mmol)。将该溶液减压蒸发，残余物与二氯甲烷共沸，得到无色泡沫状的标题化合物，4.66g，1H NMR(DMSOd6，300MHz)δ：2.46(t，2H)，2.60(s，3H)，2.95(m，2H)，7.98-8.16(m，2H)。
制备7(7/13)
3-(甲氨基)-3-氧代丙基氨基甲酸苄酯
Figure A20041008595501182
将N-[(苄氧基)羰基]-β-丙氨酸(10g，44.8mmol)、甲胺盐酸盐(3.33g，49.28mmol)、1-苯并三唑水合物(6.05g，44.8mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(10.3g，53.76mmol)和N-甲基吗啉(11.33ml，103mmol)在二氯甲烷(200ml)中的混合物在室温搅拌18小时。滤出所得沉淀，得到所需产物，为无色泡沬，减压蒸发滤液。残余物经硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯∶己烷(90∶10至100∶0)梯度洗脱，得到另外的产物，7.96g，总计75％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ：2.42(t，2H)，2.80(s，3H)，3.50(m，2H)，5.21(s，2H)，5.49(bs，1H)，5.63(bs，1H)，7.36(m，5H)；分析实测值C，60.68；H，7.00；N，11.95。C12H16N2O3的理论值：C，61.00；H，6.83；N，11.86％。
制备8(8/66)
顺-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-[(1-{[(4-{[(苯磺酰基)氨基]羰基}环己基)氨基] 羰基}环戊基)甲基]丙酸叔丁酯
Figure A20041008595501191
向冰冷却的制备9(9/63)的酸(400mg，0.878mmol)在二氯甲烷(12ml)和N，N-二甲基甲酰胺(0.5ml)中的溶液加入N，N’-二环己基碳化二亚胺(199mg，0.97mmol)、4-二甲基氨基吡啶(118mg，0.97mmol)和苯磺酰胺(152mg，0.97mmol)，并在室温搅拌该反应物20小时。将该混合物减压浓缩，并将残余物悬浮在冷的乙酸乙酯中。滤出所得不溶物质，滤液用盐酸(1N)和水洗涤，然后用硫酸镁干燥并减压蒸发。粗产物经硅胶柱色谱纯化，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5至90∶10)梯度洗脱，得到白色泡沫状标题化合物，480mg，92％；1H NMR(CDCl3，400MHz)d：1.44(s，9H)，1.63(m，13H)，1.80(m，2H)，1.88(m，1H)，1.98(m，2H)，2.36(m，1H)，2.57(m，1H)，3.38(s，3H)，3.40(m，1H)，3.51(t，2H)，3，58(m，3H)，3.95(m，1H)，5.92(d，1H)，7.56(m，2H)，7.62(m，1H)，8.05(d，2H)，8.75(bs，1H)；LRMS：m/z 618(MNa+)。
制备9(9/63)
4-{[(1-{3-叔丁氧基-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]-3-氧代丙基}环戊基)羰基] 氨基}环己烷甲酸
在50psi和室温下，将4-{[(1-{3-叔丁氧基-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]-3-氧代丙基}环戊基)羰基]氨基}环己烷甲酸苄基酯(EP 274234)和10％钯/炭(250mg)在水(10ml)和乙醇(50ml)中的混合物氢化18小时。反应混合物经Solkafloc过滤，减压浓缩滤液，残余物与甲苯(3×)共沸，然后与二氯甲烷(3×)共沸，得到标题化合物，2.0g，96％；1H NMR(CDCl3，300MHz)d：1.48(s，9H)，1.53-1.84(m，14H)，1.94-2.10(m，5H)，2.60(m，2H)，3.40(s，3H)，3.41-3.63(m，5H)，3.96(m，1H)，5.90(bd，1H)。
制备10(10/53)
按照与制备12(12/52)所述相似的方法，由制备11(11/3)的酰氯与合适的胺制备下列化合物：
Figure A20041008595501202
其中：
Figure A20041008595501211
1＝用作柱洗脱剂的二氯甲烷
制备11(11/3)
2-{[1-(氯羰基)环戊基]甲基}戊酸苄酯
向冰冷却的1-{2-[(苄氧基)羰基]戊基}环戊烷甲酸(EP 274234)(2.0g，6.3mmol)在无水二氯甲烷(20ml)中的溶液中加入草酰氯(1.15ml，13.2mmol)，并在室温搅拌该溶液2小时。减压浓缩反应混合物，残余物与二氯甲烷(3x)共沸，得到金色油状标题化合物，2.1g；1H NMR(CDCl3，300MHz)d：0.88(t，3H)，1.28(m，2H)，1.43(m，2H)，1.63(m，6H)，2.00(m，1H)，2.08-2.35(m，3H)，2.44(m，1H)，5.15(s，2H)，7.28(m，5H)。
制备12(12/52)
2-({1-[(3-吡啶基氨基)羰基]环戊基}甲基)戊酸苄酯
向制备11(11/3)的酰氯(200mg，0.60mmol)和2-氨基吡啶(61mg，0.65mmol)在二氯甲烷(3ml)中的混合物中加入三乙胺(0.11ml，0.78mmol)，并在室温搅拌反应物16小时。将该混合物减压蒸发，残余物在碳酸氢钠溶液(5ml)和乙酸乙酯(20ml)之间分配，分离各层。有机相用硫酸镁干燥并减压蒸发，得到胶。粗产物经硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯作洗脱剂，得到标题化合物，130mg；1H NMR(CDCl3，400MHz)d：0.82(t，3H)，1.21(m，3H)，1.40(m，1H)，1.43-1.72(m，6H)，1.81(d，1H)，1.98(m，1H)，2.18(m，1H)，2.24(m，1H)，2.46(m，1H)，4.98(m，2H)，7.20-7.38(m，6H)，7.42(s，1H)，8.06(d，1H)，8.35(d，1H)，8.56(s，1H)。
制备13(13/56)
按照与制备12(12/52)所述类似的方法，由制备11(11/3)的酰氯和适当的胺制备下列化合物：
其中：
Figure A20041008595501222
2＝N-甲基吗啉用作碱
制备14(14/ex1)
2-({1-[(1，3-苯并二氧戊环-5-基氨基)羰基]环戊基}甲基)戊酸
Figure A20041008595501223
向制备15(15/34)的叔丁酯(130mg，0.31mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中加入三氟乙酸(5ml)，并在室温搅拌该溶液4小时。减压浓缩反应混合物，残余物与甲苯共沸，然后与二氯甲烷共沸，得到澄清油状的标题化合物，112mg，1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.83(t，3H)，1.22-1.40(m，3H)，1.50-1.72(m，8H)，1.95(m，1H)，2.10(m，2H)，2.19(m，1H)，4.30(m，2H)，5.93(s，2H)，5.99(bs，1H)，6.74(m，3H)；LRMS：m/z 380(MH-)。
制备15(15/34)
按照与制备17(17/33)所述类似的方法，由制备16(16/1)的酸和适当的胺化合物制备下列化合物：
Figure A20041008595501231
其中：
制备16(16/1)
1-[2-(叔丁氧羰基)-4-戊基]环戊烷甲酸
Figure A20041008595501233
在30psi和室温下，将1-[2-(叔丁氧羰基)-4-戊烯基]环戊烷甲酸(EP274234)(23g，81.5mmol)和10％钯/炭(2g)在无水乙醇(200ml)中的混合物氢化18小时。反应混合物经Arbocel过滤，减压浓缩滤液，得到黄色油。粗产物经硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯∶戊烷(40∶60)作洗脱剂，得到所需产物，为澄清的油，21g，91％；1H NMR(CDCl3，0.86(t，3H)，1.22-1.58(m，15H)，1.64(m，4H)，1.78(dd，1H)，2.00-2.18(m，3H)，2.24(m，1H)；LRMSm/z 283(M-H)-。
制备17(17/33)
2-{[1-({[1-(羟甲基)环戊基]氨基}羰基)环戊基]甲基}戊酸叔丁酯
向制备16(16/1)的酸(150mg，0.53mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(3ml)中的溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(41mg，0.21mmol)、1-羟基苯并三唑水合物(27mg，0.2mmol)、N-甲基吗啉(35μl，0.31mmol)和1-氨基-1-环戊烷甲醇(25mg，0.22mmol)，并在90℃搅拌反应物18小时。冷却的溶液用乙酸乙酯(90ml)稀释，用水(3×25ml)和盐水(25ml)洗涤，然后用硫酸镁干燥并减压蒸发。粗产物经硅胶色谱纯化，用乙酸乙酯∶戊烷(30∶70)作洗脱剂，得到标题化合物，38mg，57％；1H NMR(CDCl3，400MHz)d：0.88(t，3H)，1.29(m，3H)，1.41-1.78(m，26H)，1.78-1.98(m，4H)，2.04(m，1H)，2.26(m，1H)，3.59(dd，1H)，3.70(dd，1H)，4.80(t，1H)，5.81(s，1H)；LRMS：m/z(MH-)。
制备18(18/ex.4)
按照与制备14(14/ex.1)所述类似的方法，由相应的叔丁酯制备下式所示的化合物。
Figure A20041008595501251
3＝从乙醚中重结晶
制备19(19/ex.21)
2-({1-[(3-苄基苯氨基)羰基]环戊基}甲基)戊酸
在30psi和室温下，将制备10(10/53)的苄基酯(1.3mg.2.47mmol)和5％钯/炭(130mg)在水(10ml)和乙醇(4ml)中的混合物氢化2小时。反应混合物经Arbocel过滤，减压浓缩滤液，残余物用二氯甲烷研制。残余的胶用乙醚研制，然后用己烷研制，并在50℃干燥，得到固体状的标题化合物，0.79g，81％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ：0.95(t，3H)，1.24-1.51(m，3H)，1.58-1.80(m，7H)，1.88(dd，1H)，2.15(m，2H)，2.24(m，1H)，2.48(m，1H)，4.00(s，2H)，6.98(d，1H)，7.24(m，6H)，7.40(m，3H)；分析实测值：C，75.48；H，7.76；N，3.59。C22H31NO3；0.25H2O的理论值：C，75.44；H，7.98；N，3.51％。
ACE分析
由猪和人的肾皮质制备可溶性血管紧张素转化酶(ACE)以及分析。
由肾皮质得到可溶性ACE活性，并通过测量ACE底物Abz-Gly-对-硝基-Phe-Pro-OH裂解产生其荧光产物Abz-Gly的速度进行分析。
1.材料
所有的水都是两次去离子的。
1.1人肾 IIAM(Pennsylvania.U.S.A.)或UK Human Tissue Bank(UKHTB)
1.2猪肾ACE Sigma(A2580)
1.3匀化的缓冲液-1
100mM甘露糖醇和20mM Tris @ pH7.1
2.42g Tris(Fisher T/P630/60)在1升水中稀释，并在室温用6M盐酸调节pH至7.1。向该溶液中加入18.22g甘露糖醇(Sigma M-9546)。
1.4匀化的缓冲液-2
100mM甘露糖醇，20mM Tris @ pH7.1和10mM MgCl2.6H2O(FisherMO600/53)
向500ml匀化的缓冲液1(1.4)中加入1.017g MgCl2。
1.5Tris缓冲液(ACE缓冲液)
50mM Tris和300mM NaCl @ pH7.4
将50ml 50mM的Tris pH7.4(Sigma T2663)和17.52g NaCl(FisherS/3160/60)制成1000ml水溶液。
1.6底物(Abz-D-Gly-对-硝基-Phe-Pro-OH)(Bachem M-1100)
将粉末状的ACE底物贮存于-20℃。将该底物适度地悬浮于ACE缓冲液中制成2mM储液，一定不能采用涡旋或声处理。将400μl等分量的2mM储液贮存于-20℃最多一个月。
1.7最终产物
将相应于向产物100％转化的底物样品置于培养板上以使底物百分之百转化可以被检测到(见计算结果)。通过在37℃将1ml 2mM的底物与20μl酶储液一起孵育24小时产生总体产物。
1.8停止溶液
用ACE缓冲液将0.5M EDTA(Promega CAS[6081/92/6])稀释成1∶250，制成2mM溶液。
1.9二甲基亚砜(DMSO)
1.10氯化镁-MgCl2.6H2O(Fisher MO600/53)
1.11黑色96孔平底培养板(Costar 3915或Packard)
1.12Topseal A(Packard 6005185)
1.13离心管
2.特殊装置
2.1 Sorvall RC-5B离心机(SS34 GSA转子，预冷却至4℃)
2.2 Braun微型(miniprimer)混合器
2.3 Beckman CS-6R离心机
2.4 BMG Fluostar Galaxy
2.5 Wesbart 1589振荡孵化器
3.方法
3.1组织制备
3.2按照Booth，A.G.& Kenny，A.J.(1974)Biochem.J.142，575-581所述方法，由肾皮质制备人ACE。
3.3将冷冻的肾在室温解冻，并将皮质与髓质剥离。
3.4将皮质细细地剁碎，并在约10倍体积的匀化缓冲液1(1.4)中，用Braun微型混合器(2.2)匀化。
3.5向匀化的物质中加入氯化镁(1.11)(20.3mg/gm组织)，并将匀化物在冰水浴中搅拌15分钟。
3.6在Beckman离心机(2.3)中、以1,500g(3,820rpm)的转速离心匀化物12分钟，然后将上清液转入干净的离心管中，并弃去沉淀物。
3.7在Sovall离心机(2.1)中、以15,000g(12,100rpm)的转速离心上清液12分钟，并弃去上清液。
3.8取出剩余沉淀物上面一层的淡粉色物质，再悬浮于匀化缓冲液2(1.5)中(每1克组织5ml缓冲液)。
3.9在Beckman离心机中、以2,200g(4,630rpm)的转速离心该悬浮液12分钟，然后弃去沉淀物。
3.10在Sovall离心机(2.1)中、以15,000g(12,100rpm)的转速离心上清液12分钟，并弃去上清液。
3.11将最终的沉淀物再悬浮于匀化缓冲液2中(每1克组织0.5ml缓冲液)。用Braun微型混合器得到匀化的悬浮液。以100μl的等分量将该悬浮液冷冻，用于进行NEP活性分析。
4.0ACE活性测定
通过裂解ACE特异性肽底物的能力，对前面等分量的ACE活性进行测定。
将猪ACE(1.2)解冻并以0.004U/μl的量再悬浮于ACE缓冲液(1.6)中，将所得物质以50μl的等分量冷冻。
4.1制备4％DMSO/ACE缓冲溶液(4mlDMSO在96ml ACE缓冲液中)
4.2底物(1.7)、总产物(1.8)和酶(1.1，1.2，1.3)在冰上解冻
4.3向每孔中加入50μl 4％DMSO/ACE缓冲溶液
4.4将2mM底物储液稀释1∶100，制成20μM溶液。向每孔中加入100μl 20μM底物(分析用的最终浓度为10μM)
4.5加入50μl的系列酶稀释液使反应开始(通常使用1∶100，1∶200，1∶400，1∶800，1∶1600和1∶3200的稀释液)。向空白孔中加入50μl ACE缓冲液。
4.6将2mM的最终产物稀释1∶200，制成10μM溶液。向一个新板的前4个孔中加入200μl 10μM的产物。
4.7在振荡孵化器中于37℃将培养板孵育60分钟。
4.8通过加入在ACE缓冲液中的100μl 2mM EDTA终止酶反应，并在振荡孵化器中于37℃孵育20分钟，然后在BMG Fluostar Gataxy上读数(ex320/em420)。
5.ACE抑制分析
5.1将底物、最终产物和酶储液在冰上解冻。
5.2在100％DMSO中制备化合物储液，并用ACE缓冲液稀释1∶25，得到4％DMSO溶液。其他所有的稀释均用4％DMSO/ACE缓冲溶液(4ml DMSO在96ml ACE缓冲液中)配制。
5.3一式两份，将50μl化合物加入96孔培养板中，并向对照和空白孔中加入50μl 4％ DMSO/ACE缓冲液。
5.4手工或使用多探针机器人进行步骤5.2和5.3。
5.5用ACE缓冲液将2mM底物储液稀释1∶100，制成20μM溶液(10μM最终分析浓度)(对于一只板，向10.89ml缓冲液中加入110μl 2mM底物就足够了)。
5.6用ACE缓冲液稀释酶储液，如活性检查所测定的(4.0)。
5.7用ACE缓冲液将2mM总产物储液稀释1∶200，制成10μM溶液。向另一板的前4个孔中加入200μl该溶液。
5.8将0.5mM EDTA储液稀释1∶250，制成2mM储液(将44μl EDTA加入10.96mlACE缓冲液中)。
5.9向96孔板的每一孔中加入下列试剂：
表1：向96孔板中加入下列试剂
化合物/DMSO Tris缓冲液 底物 ACE酶 最终产物
样品 2μl化合物 50μl 100μl 50μl 无
对照 2μl DMSO 50μl 100μl 50μl 无
空白 2μl DMSO 100μl 100μl 无 无
总和 2μl DMSO 无 无 无 200μl
5.10一式两份，向同样的96孔板中加入50μl最高浓度的每种分析化合物，作为总的结果(5.7)。加入150μl ACE缓冲液以测定每一化合物的荧光。
5.11加入ACE酶使反应开始，然后在振荡孵化器中于37℃孵育1小时。
5.12加入100μl 2mM EDTA终止反应，并在振荡孵化器中于37℃孵育20分钟，然后在BMG Fluostar Galaxy(ex320/em420)上读数。
6.计算
在有或无化合物存在下测定ACE酶的活性，并以百分数表示。
FU＝荧光单位
(i)％对照活性(酶的反转)：
Figure A20041008595501291
(ii)抑制剂的％活性：
Figure A20041008595501292
(iii)以对照的％表示的活性：
Figure A20041008595501293
或
Figure A20041008595501301
(iv)％抑制＝100-％对照
(v)对于荧光化合物，将含有化合物的空白平均FU(5.10)从化合物的平均FU值中扣除，以计算％活性。
将％活性(对照的％)对化合物浓度拟合S形量效曲线，并用LabStats拟合曲线在Excel中计算IC50值。
结论
我们研制了一种动物模型，该模型反映出在雌性性唤起过程中观察到的生理学唤起反应，并直接反映出在人类志愿者中观察到的临床数据。该模型使用激光多普勒技术，以记录骨盆神经刺激或血管活性神经递质引起的阴道和阴蒂血流的微小变化。在性唤起过程中，由骨盆神经的神经支配增加引起生殖器血流增加。在动物模型中，观察到的骨盆神经刺激引起的阴道和阴蒂血流增加代表了在雌性性唤起-即充血过程中观察到的内源性血管作用。因此，该模型首先可用于确定与阴道和阴蒂血流调节有关的机理，并且第二可用于验证使生殖器血流增加的新的途径。
该研究已成功地将体内、体外和生物化学技术结合在一起，用于表明VTP介导的生殖器血流变化以及确定cAMP是调节生殖器血管松弛(和阴道壁松弛)的介质/第二信使。使用该动物模型，我们证实了VIP的注入融合引起阴道和阴蒂血流增加。使用VIP代谢抑制剂(例如NEP EC3.4.24.11抑制剂)，我们还证明了在骨盆神经刺激(即性唤起)过程中观察到的生殖器血流增加是由VIP介导的。我们已经表明，VIP-介导的生殖器血流增加是由组织cAMP升高造成的，而先前已经表明VIP使健康志愿者的阴道血流增加，但是其细胞作用机理尚不清楚。此外，我们还证明了，可以用cAMP模拟物直接增加生殖器血流，或者通过用2型PDEcAMP抑制剂或NPY Y1受体拮抗剂升高cAMP的浓度间接增加生殖器血流。
FSAD的主要起因是生殖器血流减少，这本身可以由阴道、阴唇和阴蒂充血减少得以证明。通过恢复正常的性唤起反应可以治疗患FSAD的妇女。这可以通过改变生殖器血流得以实现。我们治疗FSAD的途径将是例如，使用NEP(EC3.4.24.11)抑制剂、cAMP水解PDE抑制剂或NPY受体拮抗剂直接或间接加强内源性cAMP信号传输，增强生殖器血流，因而加强阴道充血/润滑以及阴蒂充血/敏感。这将具有恢复或加强正常性唤起反应的总体效果，而不具有心血管副作用。性唤起/充血将会被加强，而不是简单地在缺乏性冲动的情况下引起，这可以通过服用某些外源性血管活性剂例如VIP实现。
总而言之，本发明尤其涉及以下方面：
用于(或当使用时)治疗FSD、优选FSAD的药物组合物；该药物组合物含有能使患FSD、优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP加强的活性物质；其中所述活性物质任选地与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合。
活性物质在制备治疗FSD、优选FSAD药物中的应用；其中所述活性物质能使患FSD、优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP加强。
雌性(例如患FSD、优选FSAD的雌性)的治疗方法；该方法包括给所述雌性施用能够使性生殖器中cAMP加强的活性物质；其中活性物质的用量为引起雌性性生殖器中cAMP加强的量；其中所述活性物质任选地与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合。
在特别优选的实施方式中，本发明尤其涉及：
用于(或当使用时)治疗FSD、优选FSAD的药物组合物；该药物组合物含有能使患FSD、优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP加强的活性物质；其中所述活性物质任选地与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合；并且其中所述活性物质经口服递送。
活性物质在制备治疗FSD、优选FSAD药物中的应用；其中所述活性物质能使患FSD、优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP加强；并且其中所述活性物质经口服递送。
雌性(例如患FSD、优选FSAD的雌性)的治疗方法；该方法包括给所述雌性施用能够使性生殖器中cAMP加强的活性物质；其中活性物质的用量为引起雌性性生殖器中cAMP加强的量；其中所述活性物质任选地与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合；并且其中所述活性物质经口服递送。
在另一特别优选的实施方式中，本发明尤其涉及：
用于(或当使用时)治疗FSD、优选FSAD的药物组合物；该药物组合物含有能使患FSD、优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP加强的活性物质；其中所述活性物质任选地与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合；并且其中所述活性物质加强内源性cAMP。
活性物质在制备治疗FSD、优选FSAD药物中的应用；其中所述活性物质能使患FSD、优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP加强；并且其中所述活性物质加强内源性cAMP。
雌性(例如患FSD、优选FSAD的雌性)的治疗方法；该方法包括给所述雌性施用能够使性生殖器中cAMP加强的活性物质；其中活性物质的用量为引起雌性性生殖器中cAMP加强的量；其中所述活性物质任选地与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合；并且其中所述活性物质加强内源性cAMP。
在又一特别优选的实施方式中，本发明尤其涉及：
用于(或当使用时)治疗FSD、优选FSAD的药物组合物；该药物组合物含有能使患FSD、优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP加强的活性物质；其中所述活性物质任选地与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合；并且其中所述活性物质经口服递送以及其中所述活性物质加强内源性cAMP。
活性物质在制备治疗FSD、优选FSAD药物中的应用；其中所述活性物质能使患FSD、优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP加强；并且其中所述活性物质经口服递送以及其中所述活性物质加强内源性cAMP。
雌性(例如患FSD、优选FSAD的雌性)的治疗方法；该方法包括给所述雌性施用能够使性生殖器中cAMP加强的活性物质；其中活性物质的用量为引起雌性性生殖器中cAMP加强的量；其中所述活性物质任选地与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合；并且其中所述活性物质经口服递送以及其中所述活性物质加强内源性cAMP。
在上面的说明书中所提及的所有出版物均引入本文作为参考。那些不背离本发明范围和精神的对本发明所述方法和系统进行的各种修饰和改变对于本领域专业人员来说是显而易见的。尽管已经结合具体的优选实施方式对本发明进行了描述，但是应该理解，本发明的权利要求不能不适当地限于这些具体实施方式。事实上，那些对生物化学和生物技术领域的专业人员显而易见的、对所述实施本发明的方法进行的各种修饰将包括在下列权利要求的范围内。
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5.Tran-Paterson，R.；Willard，H.F.；Letarte，M.：常见急性成淋巴细胞白血病抗原(中性内肽酶~3.4.24.1 1)基因位于人3号染色体(The commonacute lymphoblastic leukemia antigen (noutralendopeptidase~~3.4.24.1 1)gene is located on human chromosome 3).Cancer Genet.Cytogenet.42：129-134，1989.
关于NPY  部分的参考文献
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缩写
FSD         ＝      女性性机能障碍
FSAD        ＝      女性性唤起疾病
cAMP        ＝      环3′，5′-单磷酸腺苷
cGMP        ＝      环3′，5′-单磷酸鸟苷
PcAMP       ＝      cAMP加强剂
PcGMP       ＝      cGMP加强剂
AcAMP       ＝      cAMP活化剂
AcGMP       ＝      cGMP活化剂
AMcAMP      ＝      cAMP反向调节剂
AMcGMP      ＝      cGMP反向调节剂
IcAMP       ＝      cAMP抑制剂
IcGMP       ＝      cGMP抑制剂
I:IcAMP     ＝      cAMP抑制剂的抑制剂
I:IcGMP     ＝      cGMP抑制剂的抑制剂
I:AMcAMPL   ＝      cAMP反向调节剂的抑制剂
I:AMcGMP    ＝      cGMP反向调节剂的抑制剂
U:AcAMP     ＝      cAMP活化剂的上调物
U:AcGMP     ＝      cGMP活化剂的上调物
AC          ＝      腺苷酸环化酶
A:AC        ＝      AC活化剂
NEP         ＝      中性内肽酶
I:NEP       ＝      NEP抑制剂
VIP            ＝      血管活性肠肽
VIPr           ＝      VIP受体(可以以VIPR表示)
VIPn          ＝      VIP受体亚型(例如VIPR1，VIPR2)
A:VIPr         ＝      VIPr活化剂
A:VIPn        ＝      VIPn活化剂
I:VIPr         ＝      VIPr抑制剂
I:VIPn        ＝      VIPn抑制剂
I:I:VIPr       ＝      VIPr抑制剂的抑制剂
I:I:VIPn      ＝      VIPn抑制剂的抑制剂
PDE            ＝      磷酸二酯酶
PDEn           ＝      PDE家族(例如PDE1、PDE2等)
PDEcAMP        ＝      cAMP水解性PDE
PDEcGMP        ＝      cGMP水解性PDE
I:PDE          ＝      PDE抑制剂
I:PDEcAMP      ＝      cAMP水解性PDE的抑制剂
I:PDEcGMP      ＝      cAMP水解性PDE家族的抑制剂
NPY            ＝      神经肽Y
NPYr           ＝      NPY受体(可以表示为NPYR)
NPY Yn        ＝      NPY的Yn(例如NPY Y1)受体亚型(例如NPYR1)
I:NPY          ＝      NPY抑制剂
I:NPY Yn      ＝      NPY Yn抑制剂
kDa            ＝      千道尔顿
bp             ＝      碱基对
kb             ＝      千碱基对
序列表
1.NEP(EC 3.4.24.11)
基因座    HSMRNAEN     3181bp    mRNA         PRI        12-SEP-1993
定义      人脑啡肽酶mRNA(EC 3.4.24.11).
登记号    X07166
NID       g34757
译本      X07166.1 GI：34757
关键词    脑啡肽酶；金属蛋白质；神经内肽酶
来源      人
生物体    Homo sapiens
          Eukaryota；Metazoa；Chordata；Vertebrata；Mammalia；Eutheria；
          Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.
参比      1(bases 1 to 3181)
作者      Malfroy，B.，Kuang，W.J.，Seeburg，P.H.，Mason，A.J.and Schofield，P.R.
题目      人脑啡肽酶(神经内肽酶)的分子克隆和氨基酸序列
杂志      FEBS Lett.229(1)，206-210(1988)
MEDLINE   88152222
特征               Location/Qualifiers
来源               1..3181
                   /生物体＝″Homo sapiens″
                   /db_xref＝″taxon：9606″
                   /组织型＝″placenta″
                   /克隆文库＝″lambda gt10″
                   /克隆＝″lambda H7″
CDS                18..2249
                   /note＝″脑啡肽酶(AA 1-743)″
                   /密码起始＝1
                   /蛋白质号＝″CAA30157.1″
                   /db_xref＝″PID：g34758″
                   /db_xref＝″GI：34758″
                   /db_xref＝″SWISS-PROT：P08473″
                   /翻译     ＝″MDITDINTPKPKKKQRWTPLEISLSVLVLLLTIIAVTMIALYAT
                   YDDGICKSSDCIKSAARLIQNMDATTEPCTDFFKYACGGWLKRNVIPETSSRYGNFDI
                   LRDELEVVLKDVLQEPKTEDIVAVQKAKALYRSCINESAIDSRGGEPLLKLLPDIYGW
                   PVATENWEQKYGASWTAEKAIAQLNSKYGKKVLINLFVGTDDKNSVNHVIHIDQPRLG
                   LPSRDYYECTGIYKEACTAYVDFMISVARLIRQEERLPIDENQLALEMNKVMELEKEI
                   ANATAKPEDRNDPMLLYNKMTLAQIQNNFSLEINGKPFSWLNFTNEIMSTVNISITNE
                   EDVVVYAPEYLTKLKPILTKYSARDLQNLMSWRFIMDLVSSLSRTYKESRNAFRKALY
                   GTTSETATWRRCANYVNGNMENAVGRLYVEAAFAGESKHVVEDLIAQIREVFIQTLDD
                   LTWMDAETKKRAEEKALAIKERIGYPDDIVSNDNKLNNEYLELNYKEDEYFENIIQNL
                   KFSQSKQLKKLREKVDKDEWISGAAVVNAFYSSGRNQIVFPAGILQPPFFSAQQSNSL
                   NYGGIGMVIGHEITHGFDDNGRNFNKDGDLVDWWTQQSASNFKEQSQCMVYQYGNFSW
                   DLAGGQHLNGINTLGENIADNGGLGQAYRAYQNYIKKNGEEKLLPGLDLNHKQLFFLN
                   FAQVWCGTYRPEYAVNSIKTDVHSPGNFRIIGTLQNSAEFSEAFHCRKNSYMNPEKKC
                   RVW″
misc_feature       3073..3078
                   /note＝″poly A信号″
碱基数      1055a      582c      657g      887t
来源
  1 gcaagtcaga aagtcagatg gatataactg atatcaacac tccaaagcca aagaagaaac
 61 agcgatggac tccactggag atcagcctct cggtccttgt cctgctcctc accatcatag
121 ctgtgacaat gatcgcactc tatgcaacct acgatgatgg tatttgcaag tcatcagact
181 gcataaaatc agctgctcga ctgatccaaa acatggatgc caccactgag ccttgtacag
 241 actttttcaa atatgcttgc ggaggctggt tgaaacgtaa tgtcattccc gagaccagct
 301 cccgttacgg caactttgac attttaagag atgaactaga agtcgttttg aaagatgtcc
 361 ttcaagaacc caaaactgaa gatatagtag cagtgcagaa agcaaaagca ttgtacaggt
 421 cttgtataaa tgaatctgct attgatagca gaggtggaga acctctactc aaactgttac
 481 cagacatata tgggtggcca gtagcaacag aaaactggga gcaaaaatat ggtgcttctt
 541 ggacagctga aaaagctatt gcacaactga attctaaata tgggaaaaaa gtccttatta
 601 atttgtttgt tggcactgat gataagaatt ctgtgaatca tgtaattcat attgaccaac
 661 ctcgacttgg cctcccttct agagattact atgaatgcac tggaatctat aaagaggctt
 721 gtacagcata tgtggatttt atgatttctg tggccagatt gattcgtcag gaagaaagat
 781 tgcccatcga tgaaaaccag cttgctttgg aaatgaataa agttatggaa ttggaaaaag
 841 aaattgccaa tgctacggct aaacctgaag atcgaaatga tccaatgctt ctgtataaca
 901 agatgacatt ggcccagatc caaaataact tttcactaga gatcaatggg aagccattca
 961 gctggttgaa tttcacaaat gaaatcatgt caactgtgaa tattagtatt acaaatgagg
1021 aagatgtggt tgtttatgct ccagaatatt taaccaaact taagcccatt cttaccaaat
1081 attctgccag agatcttcaa aatttaatgt cctggagatt cataatggat cttgtaagca
1141 gcctcagccg aacctacaag gagtccagaa atgctttccg caaggccctt tatggtacaa
1201 cctcagaaac agcaacttgg agacgttgtg caaactatgt caatgggaat atggaaaatg
1261 ctgtggggag gctttatgtg gaagcagcat ttgctggaga gagtaaacat gtggtcgagg
1321 atttgattgc acagatccga gaagttttta ttcagacttt agatgacctc acttggatgg
1381 atgccgagac aaaaaagaga gctgaagaaa aggccttagc aattaaagaa aggatcggct
1441 atcctgatga cattgtttca aatgataaca aactgaataa tgagtacctc gagttgaact
1501 acaaagaaga tgaatacttc gagaacataa ttcaaaattt gaaattcagc caaagtaaac
1561 aactgaagaa gctccgagaa aaggtggaca aagatgagtg gataagtgga gcagctgtag
1621 tcaatgcatt ttactcttca ggaagaaatc agatagtctt cccagccggc attctgcagc
1681 cccccttctt tagtgcccag cagtccaact cattgaacta tgggggcatc ggcatggtca
1741 taggacacga aatcacccat ggcttcgatg acaatggcag aaactttaac aaagatggag
1801 acctcgttga ctggtggact caacagtctg caagtaactt taaggagcaa tcccagtgca
1861 tggtgtatca gtatggaaac ttttcctggg acctggcagg tggacagcac cttaatggaa
1921 ttaatacact gggagaaaac attgctgata atggaggtct tggtcaagca tacagagcct
1981 atcagaatta tattaaaaag aatggcgaag aaaaattact tcctggactt gacctaaatc
2041 acaaacaact atttttcttg aactttgcac aggtgtggtg tggaacctat aggccagagt
2101 atgcggttaa ctccattaaa acagatgtgc acagtccagg caatttcagg attattggga
2161 ctttgcagaa ctctgcagag ttttcagaag cctttcactg ccgcaagaat tcatacatga
2221 atccagaaaa gaagtgccgg gtttggtgat cttcaaaaga agcattgcag cccttggcta
2281 gacttgccaa caccacagaa atggggaatt ctctaatcga aagaaaatgg gccctagggg
2341 tcactgtact gacttgaggg tgattaacag agagggcacc atcacaatac agataacatt
2401 aggttgtcct agaaagggtg tggagggagg aagggggtct aaggtctatc aagtcaatca
2461 tttctcactg tgtacataat gcttaatttc taaagataat attactgttt atttctgttt
2521 ctcatatggt ctaccagttt gctgatgtcc ctagaaaaca atgcaaaacc tttgaggtag
2581 accaggattt ctaatcaaaa gggaaaagaa gatgttgaag aatacagtta ggcaccagaa
2641 gaacagtagg tgacactata gtttaaaaca cattgcctaa ctactagttt ttacttttat
2701 ttgcaacatt tacagtcctt caaaatcctt ccaaagaatt cttatacaca ttggggcctt
2761 ggagcttaca tagttttaaa ctcatttttg ccatacatca gttattcatt ctgtgatcat
2821 ttattttaag cactcttaaa gcaaaaaatg aatgtctaaa attgtttttt gttgtacctg
2881 ctttgactga tgctgagatt cttcaggctt cctgcaattt tctaagcaat ttcttgctct
2941 atctctcaaa acttggtatt tttcagagat ttatataaat gtaaaaataa taatttttat
3001 atttaattat taactacatt tatgagtaac tattattata ggtaatcaat gaatattgaa
3061 gtttcagctt aaaataaaca gttgtgaacc aagatctata aagcgatata cagatgaaaa
3121 tttgagacta tttaaactta taaatcatat tgatgaaaag atttaagcac aaactttagg
3181 g
2.PDE 1型
基因座    HSPDE1A3A   2008bp      mRNA          PRI      12-APR-1996
定义      人3′，5’环核苷酸磷酸二酯酶(HSPDE1A3A)mRNA，完全的cds.
登记号    U40370
NID       g1151108
译本      U40370.1 GI：1151108
关键词    钙调蛋白刺激的磷酸二酯酶
来源      人
生物体    Homo sapiens
          Eukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；
          Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.
参比      1(bases 1 to 2008)
作者      Loughney，K.，Martins，T.J.，Harris，E.A.，Sadhu，K.，Hicks，J.B.，
          Sonnenburg，W.K.，Beavo，J.A.和Ferguson，K.
题目      与两种人体调节钙，钙调蛋白，3‘，5‘-环核苷酸磷酸二酯酶对应的
          cDNA的分离和表征
杂志      J.Biol.Chem.271(2)，796-806(1996)
MEDLINE   96132810
参比      2(bases 1 to 2008)
作者      Loughney，K.，Martins，T.J.，Harris，E.A.S.，Sadhu，K.，Hicks，J.B.，
          Sonnenburg，W.K.，Beavo，J.A.和Ferguson，K.
题目      Direct Submission
杂志      Submitted(07-NOV-1995)Kate Loughney，ICOS，22021 20th Ave.S.E.，
          Bothell，WA 98021，USA
特征               Location/Qualifiers
来源               1..2008
                   /生物体＝″Homo sapiens″
                   /db_xref＝″taxon：9606″
基因               85..1692
                   /基因＝″PDE1A″
CDS                85..1692
                   /基因＝″PDE1A″
                   /note＝″PDE1A3；I型磷酸二酯酶″
                   /编码起始＝1
                   /产物＝″3’，5’-环核苷酸磷酸二酯酶″
                   /蛋白质号＝″AAC50436.1″
                   /db_xref＝″PID：g1151109″
                   /db_xref＝″GI：1151109″
                   /翻译     ＝″MGSSATEIEELENTTFKYLTGEQTEKMWQRLKGILRCLVKQLER
                   GDVNVVDLKKNIEYAASVLEAVYIDETRRLLDTEDELSDIQTDSVPSEVRDWLASTFT
                   RKMGMTKKKPEEKPKFRSIVHAVQAGIFVERMYRKTYHMVGLAYPAAVIVTLKDVDKW
                   SFDVFALNEASGEHSLKFMIYELFTRYDLINRFKIPVSCLITFAEALEVGYSKYKNPY
                   HNLIHAADVTQTVHYIMLHTGIMHWLTELEILAMVFAAAIHDYEHTGTTNNFHIQTRS
                   DVAILYNDRSVLENHHVSAAYRLMQEEEMNILINLSKDDWRDLRNLVIEMVLSTDMSG
                   HFQQIKNIRNSLQQPEGIDRAKTMSLILHAADISHPAKSWKLHYRWTMALMEEFFLQG
                   DKEAELGLPFSPLCDRKSTMVAQSQIGFIDFIVEPTFSLLTDSTEKIVIPLIEEASKA
                   ETSSYVASSSTTIVGLHIADALRRSNTKGSMSDGSYSPDYSLAAVDLKSFKNNLVDII
                   QQNKERWKELAAQEARTSSQKCEFIHQ″
碱基数         627a      400c     437g     544t
来源
  1 gaattctgat gtgcttcagt gcacagaaca gtaacagatg agctgctttt ggggagagct
 61 tgagtactca gtcggagcat catcatgggg tctagtgcca cagagattga agaattggaa
121 aacaccactt ttaagtatct tacaggagaa cagactgaaa aaatgtggca gcgcctgaaa
181 ggaatactaa gatgcttggt gaagcagctg gaaagaggtg atgttaacgt cgtcgactta
241 aagaagaata ttgaatatgc ggcatctgtg ctggaagcag tttatatcga tgaaacaaga
301 agacttctgg atactgaaga tgagctcagt gacattcaga ctgactcagt cccatctgaa
361 gtccgggact ggttggcttc tacctttaca cggaaaatgg ggatgacaaa aaagaaacct
421 gaggaaaaac caaaatttcg gagcattgtg catgctgttc aagctggaat ttttgtggaa
481 agaatgtacc gaaaaacata tcatatggtt ggtttggcat atccagcagc tgtcatcgta
541 acattaaagg atgttgataa atggtctttc gatgtatttg ccctaaatga agcaagtgga
601 gagcatagtc tgaagtttat gatttatgaa ctgtttacca gatatgatct tatcaaccgt
 661 ttcaagattc ctgtttcttg cctaatcacc tttgcagaag ctttagaagt tggttacagc
 721 aagtacaaaa atccatatca caatttgatt catgcagctg atgtcactca aactgtgcat
 781 tacataatgc ttcatacagg tatcatgcac tggctcactg aactggaaat tttagcaatg
 841 gtctttgctg ctgccattca tgattatgag catacaggga caacaaacaa ctttcacatt
 901 cagacaaggt cagatgttgc cattttgtat aatgatcgct ctgtccttga gaatcaccac
 961 gtgagtgcag cttatcgact tatgcaagaa gaagaaatga atatcttgat aaatttatcc
1021 aaagatgact ggagggatct tcggaaccta gtgattgaaa tggttttatc tacagacatg
1081 tcaggtcact tccagcaaat taaaaatata agaaacagtt tgcagcagcc tgaagggatt
1141 gacagagcca aaaccatgtc cctgattctc cacgcagcag acatcagcca cccagccaaa
1201 tcctggaagc tgcattatcg gtggaccatg gccctaatgg aggagttttt cctgcaggga
1261 gataaagaag ctgaattagg gcttccattt tccccacttt gtgatcggaa gtcaaccatg
1321 gtggcccagt cacaaatagg tttcatcgat ttcatagtag agccaacatt ttctcttctg
1381 acagactcaa cagagaaaat tgttattcct cttatagagg aagcctcaaa agccgaaact
1441 tcttcctatg tggcaagcag ctcaaccacc attgtggggt tacacattgc tgatgcacta
1501 agacgatcaa atacaaaagg ctccatgagt gatgggtcct attccccaga ctactccctt
1561 gcagcagtgg acctgaagag tttcaagaac aacctggtgg acatcattca gcagaacaaa
1621 gagaggtgga aagagttagc tgcacaagaa gcaagaacca gttcacagaa gtgtgagttt
1681 attcatcagt aaacaccttt aagtaaaacc tcgtgcatgg tggcagctct aatttgacca
1741 aaagacttgg agattttgat tatgcttgct ggaaatctac cctgtcctgt gtgagacagg
1801 aaatctattt ttgcagattg ctcaataagc atcatgagcc acataaataa cagctgtaaa
1861 ctccttaatt caccgggctc aactgctacc gaacagattc atctagtggc tacatcagca
1921 ccttgtgctt tcagatatct gtttcaatgg cattttgtgg catttgtctt taccgagtgc
1981 caataaattt tctttgagca aaaaaaaa
3.PDE 2型
基因座        HSU67733   4240bp      mRNA PRI                21-MAY-1997
定义          人cGMP-刺激的3‘，5’-环核苷酸磷酸二酯酶PDE2A3 (PDE2A)mRNA，
              完全的cds
登记号        U67733
NID           g2108051
译本          U67733.1 GI：2108051
关键词        .
来源          人
生物体        Homo sapiens
              Eukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；
              Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.
参比          1(bases 1 to 4240)
作者          Rosman，G.J.，Martins，T.J.，Sonnenburg，W.K.，Beavo，J.A.，Ferguson，K.
              and Loughney，K.
题目          编码cGMP-刺激的3‘，5’-环核苷酸磷酸二酯酶的人cDNA的分离和表征
杂志          Gene 191(1)，89-95(1997)
MEDLINE       97354299
参比          2(bases 1 to 4240)
作者          Rosman，G.J.，Martins，T.J.，Sonnenburg，W.K.，Beavo，J.A.，Ferguson，K.
              and Loughney，K.
题目          Direct Submission
杂志          Submitted(21-AUG-1996)Icos Corporation，22021 20th Ave.S.E.，
              Bothell，WA 98021，USA
特征                   Location/Qualifiers
来源                   1..4240
                       /生物体＝″Homo sapiens″
                       /db_xref＝″taxon：9606″
基因                   162..2987
                       /基因＝″PDE2A″
CDS                    162..2987
                       /基因＝″PDE2A″
                       /功能＝″cGMP-刺激的3’，5’-环核苷酸磷酸二酯酶″
                       /note＝″PDE2家族；剪接变体3″
                       /编码起始  ＝1
                       /产物＝″PDE2A3″
                       /蛋白质号＝″AAC51320.1″
                       /db_xref＝″PID：g2108052″
                       /db_xref＝″GI：2108052″
                       /翻译     ＝″MGQACGHSILCRSQQYPAARPAEPRGQQVFLKPDEPPPPPQPCA
                       DSLQDALLSLGSVIDISGLQRAVKEALSAVLPRVETVYTYLLDGESQLVCEDPPHELP
                       QEGKVREAIISQKRLGCNGLGFSDLPGKPLARLVAPLAPDTQVLVMPLADKEAGAVAA
                       VILVHCGQLSDNEEWSLQAVEKHTLVALRRVQVLQQRGPREAPRAVQNPPEGTAEDQK
                       GGAAYTDRDRKILQLCGELYDLDASSLQLKVLQYLQQETRASRCCLLLVSEDNLQLSC
                       KVIGDKVLGEEVSFPLTGCLGQVVEDKKSIQLKDLTSEDVQQLQSMLGCELQAMLCVP
                       VISRATDQVVALACAFNKIEGDLFTDEDEHVIQHCFHYTSTVLTSTLAFQKEQKLKCE
                       CQALLQVAKNLFTHLDDVSVLLQEIITEARNLSNAEICSVFLLDQNELVAKVFDGGVV
                       DDESYEIRIPADQGIAGHVATTGQILNIPDAYAHPLFYRGVDDSTGFRTRNILCFPIK
                       NENQEVIGVAELVNKINGPWFSKFDEDLATAFSIYCGISIAHSLLYKKVNEAQYRSHL
                       ANEMMMYHMKVSDDEYTKLLHDGIQPVAAIDSNFASFTYTPRSLPEDDTSMAILSMLQ
                       DMNFINNYKIDCPTLARFCLMVKKGYRDPPYHNWMHAFSVSHFCYLLYKNLELTNYLE
                       DIEIFALFISCMCHDLDHRGTNNSFQVASKSVLAALYSSEGSVMERHHFAQAIAILNT
                HGCNIFDHFSRKDYQRMLDLMRDIILATDLAHHLRIFKDLQKMAEVGYDRNNKQHHRL
                LLCLLMTSCDLSDQTKGWKTTRKIAELIYKEFFSQGDLEKAMGNRPMEMMDREKAYIP
                ELQISFMEHIAMPIYKLLQDLFPKAAELYERVASNREHWTKVSHKFTIRGLPSNNSLD
                FLDEEYEVPDLDGTRAPINGCCSLDAE″
碱基数     902a    1260c      1202g    876t
来源
   1 cagcagagct ggattggggt gttgagtcca ggctgagtag ggggcagccc actgctcttg
  61 gtccctgtgc ctgctggggg tgccctgccc tgaactccag gcagcgggga cagggcgagg
 121 tgccacctta gtctggctgg ggaggcggac gatgaggagt gatggggcag gcatgcggcc
 181 actccatcct ctgcaggagc cagcagtacc cggcagcgcg accggctgag ccgcggggcc
 241 agcaggtctt cctcaagccg gacgagccgc cgccgccgcc gcagccatgc gccgacagcc
 301 tgcaggacgc cttgctgagt ctgggctctg tcatcgacat ttcaggcctg caacgtgctg
 361 tcaaggaggc cctgtcagct gtgctccccc gagtggaaac tgtctacacc tacctactgg
 421 atggtgagtc ccagctggtg tgtgaggacc ccccacatga gctgccccag gaggggaaag
 481 tccgggaggc tatcatctcc cagaagcggc tgggctgcaa tgggctgggc ttctcagacc
 541 tgccagggaa gcccttggcc aggctggtgg ctccactggc tcctgatacc caagtgctgg
 601 tcatgccgct agcggacaag gaggctgggg ccgtggcagc tgtcatcttg gtgcactgtg
 661 gccagctgag tgataatgag gaatggagcc tgcaggcggt ggagaagcat accctggtcg
 721 ccctgcggag ggtgcaggtc ctgcagcagc gcgggcccag ggaggctccc cgagccgtcc
 781 agaacccccc ggaggggacg gcggaagacc agaagggcgg ggcggcgtac accgaccgcg
 841 accgcaagat cctccaactg tgcggggaac tctacgacct ggatgcctct tccctgcagc
 901 tcaaagtgct ccaatacctg cagcaggaga cccgggcatc ccgctgctgc ctcctgctgg
 961 tgtcggagga caatctccag ctttcttgca aggtcatcgg agacaaagtg ctcggggaag
1021 aggtcagctt tcccttgaca ggatgcctgg gccaggtggt ggaagacaag aagtccatcc
1081 agctgaagga cctcacctcc gaggatgtac aacagctgca gagcatgttg ggctgtgagc
1141 tgcaggccat gctctgtgtc cctgtcatca gccgggccac tgaccaggtg gtggccttgg
1201 cctgcgcctt caacaagcta gaaggagact tgttcaccga cgaggacgag catgtgatcc
1261 agcactgctt ccactacacc agcaccgtgc tcaccagcac cctggccttc cagaaggaac
1321 agaaactcaa gtgtgagtgc caggctcttc tccaagtggc aaagaacctc ttcacccacc
1381 tggatgacgt ctctgtcctg ctccaggaga tcatcacgga ggccagaaac ctcagcaacg
1441 cagagatctg ctctgtgttc ctgctggatc agaatgagct ggtggccaag gtgttcgacg
1501 ggggcgtggt ggatgatgag agctatgaga tccgcatccc ggccgatcag ggcatcgcgg
1561 gacacgtggc gaccacgggc cagatcctga acatccctga cgcatatgcc catccgcttt
1621 tctaccgcgg cgtggacgac agcaccggct tccgcacgcg caacatcctc tgcttcccca
1681 tcaagaacga gaaccaggag gtcatcggtg tggccgagct ggtgaacaag atcaatgggc
1741 catggttcag caagttcgac gaggacctgg cgacggcctt ctccatctac tgcggcatca
1801 gcatcgccca ttctctccta tacaaaaaag tgaatgaggc tcagtatcgc agccacctgg
1861 ccaatgagat gatgatgtac cacatgaagg tctccgacga tgagtatacc aaacttctcc
1921 atgatgggat ccagcctgtg gctgccattg actccaattt tgcaagtttc acctataccc
1981 ctcgttccct gcccgaggat gacacgtcca tggccatcct gagcatgctg caggacatga
2041 atttcatcaa caactacaaa attgactgcc cgaccctggc ccggttctgt ttgatggtga
2101 agaagggcta ccgggatccc ccctaccaca actggatgca cgccttttct gtctcccact
2161 tctgctacct gctctacaag aacctggagc tcaccaacta cctcgaggac atcgagatct
2221 ttgccttgtt tatttcctgc atgtgtcatg acctggacca cagaggcaca aacaactctt
2281 tccaggtggc ctcgaaatct gtgctggctg cgctctacag ctctgagggc tccgtcatgg
2341 agaggcacca ctttgctcag gccatcgcca tcctcaacac ccacggctgc aacatctttg
2401 atcatttctc ccggaaggac tatcagcgca tgctggatct gatgcgggac atcatcttgg
2461 ccacagacct ggcccaccat ctccgcatct tcaaggacct ccagaagatg gctgaggtgg
2521 gctacgaccg aaacaacaag cagcaccaca gacttctcct ctgcctcctc atgacctcct
2581 gtgacctctc tgaccagacc aagggctgga agactacgag aaagatcgcg gagctgatct
2641 acaaagaatt cttctcccag ggagacctgg agaaggccat gggcaacagg ccgatggaga
2701 tgatggaccg ggagaaggcc tatatccctg agctgcaaat cagcttcatg gagcacattg
2761 caatgcccat ctacaagctg ttgcaggacc tgttccccaa agcggcagag ctgtacgagc
2821 gcgtggcctc caaccgtgag cactggacca aggtgtccca caagttcacc atccgcggcc
2881 tcccaagtaa caactcgctg gacttcctgg atgaggagta cgaggtgcct gatctggatg
2941 gcactagggc ccccatcaat ggctgctgca gccttgatgc tgagtgatcc cctccaggac
3001 acttccctgc ccaggccacc tcccacagcc ctccactggt ctggccagat gcactgggaa
3061 cagagccacg ggtcctgggt cctagaccag gacttcctgt gtgaccctgg acaagtacta
3121 ccttcctggg cctcagcttt ctcgtctgta taatggaagc aagacttcca acctcacgga
3181 gactttgtaa tttgcttctc tgagagcaca ggggtgacca atgagcagtg ggccctactc
3241 tgcacctctg accacacctt ggcaagtctt tcccaagcca ttctttgtct gagcagcttg
3301 atggtttctc cttgccccat ttctgcccca ccagatcttt gctcctttcc ctttgaggac
3361 tcccaccctt tgggtctcca ggatcctcat ggaaggggaa ggtgagacat ctgagtgagc
3421 agagtgtggc atcttggaaa cagtccttag ttctgtggga ggactagaaa cagccgcggc
3481 gaaggccccc tgaggaccac tactatactg atggtgggat tgggacctgg gggatacagg
3541 ggccccagga agaagctggc cagaggggca gctcagtgct ctgcagagag gggccctggg
3601 gagaagcagg atgggattga tgggcaggag ggatccccgc actgggagac aggcccaggt
3661 atgaatgagc cagccatgct tcctcctgcc tgtgtgacgc tgggcgagtc tcttcccctg
3721 tctgggccaa acagggagcg ggtaagacaa tccatgctct aagatccatt ttagatcaat
3781 gtctaaaata gctctatggc tctgcggagt cccagcagag gctatggaat gtttctgcaa
3841 ccctaaggca cagagagcca accctgagtg tctcagaggc cccctgagtg ttccccttgg
3901 cctgagcccc ttacccattc ctgcagccag tgagagacct ggcctcagcc tggcagcgct
3961 ctcttcaagg ccatatccac ctgtgccctg gggcttggga gaccccatag gccgggactc
4021 ttgggtcagc ccgccactgg cttctctctt tttctccgtt tcattctgtg tgcgttgtgg
4081 ggtgggggag ggggtccacc tgccttacct ttctgagttg cctttagaga gatgcgtttt
4141 tctaggactc tgtgcaactg tcgtatatgg tcccgtgggc tgaccgcttt gtacatgaga
4201 ataaatctat ttctttctac caaaaaaaaa aaaaaaaaaa
4.NPY
基因座     HUMNPY      551bp      mRNA         PRI       07-JAN-1995
定义       人神经肽Y(NPY)mRNA，完全的cds.
登记号     K01911
NID        g189273
译本       K01911.1 GI：189273
关键词     神经肽Y.
来源       Human pheochromocytoma，cDNA to mRNA，clone pNPY3-75.
生物体     Homo sapiens
           Eukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；
           Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.
参比       1(bases 1 to 551)
作者       Minth，C.D.，Bloom，S.R.，Polak，J.M.and Dixon，J.E.
题目       编码神经肽酪氨酸的克隆、表征和DNA序列
杂志        Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81(14)，4577-4581(1984)
MEDLINE     84272678
注释        神经肽Y(NPY)是一种哺乳动物神经系统中最丰富的肽，其广泛分布的
            特点暗示起神经传递或调节作用.NPY在肾上腺髓质的某些嗜铬细胞中
            也被发现.
特征        Location/Qualifiers
来源        1..551
            /生物体  ＝″Homo sapiens″
            /db_xref＝″taxon：9606″
            /组织型＝″嗜铬细胞瘤″
            /map＝″7pter-q22″
mRNA        <1..551
            /基因＝″NPY″
            /note＝″G00-119-456″
基因        1..551
            /基因＝″NPY″
信号肽      87..170
            /基因＝″NPY″
            /note＝″G00-119-456″
CDS         87..380
            /基因＝″NPY″
            /编码起始＝1
            /db_xref＝″GDB：G00-119-456″
            /产物＝″神经肽Y″
            /蛋白质号＝″AAA59944.1″
            /db_xref＝″PID：g189274″
            /db_xref＝″GI：189274″
            /翻译    ＝″MLGNKRLGLSGLTLALSLLVCLGALAEAYPSKPDNPGEDAPAED
            MARYYSALRHYINLITRQRYGKRSSPETLISDLLMRESTENVPRTRLEDPAMW″
成熟肽      171..278
            /基因＝″NPY″
            /note＝″G00-119-456″
            /产物＝″神经肽Y″
碱基数    131a      171c       129g      120t
来源    RsaI位点上游51bp
  1 accccatccg ctggctctca cccctcggag acgctcgccc gacagcatag tacttgccgc
 61 ccagccacgc ccgcgcgcca gccaccatgc taggtaacaa gcgactgggg ctgtccggac
121 tgaccctcgc cctgtccctg ctcgtgtgcc tgggtgcgct ggccgaggcg tacccctcca
181 agccggacaa cccgggcgag gacgcaccag cggaggacat ggccagatac tactcggcgc
241 tgcgacacta catcaacctc atcaccaggc agagatatgg aaaacgatcc agcccagaga
301 cactgatttc agacctcttg atgagagaaa gcacagaaaa tgttcccaga actcggcttg
361 aagaccctgc aatgtggtga tgggaaatga gacttgctct ctggcctttt cctattttca
421 gcccatattt catcgtgtaa aacgagaatc cacccatcct accaatgcat gcagccactg
481 tgctgaattc tgcaatgttt tcctttgtca tcattgtata tatgtgtgtt taaataaagt
541 atcatgcatt c
5.NPY Y1受体
基因座       A26481    2624bp    mRNA    PAT    17-OCT-1995
定义         人NPY受体Y1基因cDNA.
登记号       A26481
NID          g1247452
译本         A26481.1 GI：1247452
关键词       .
来源        人
生物体      Homo sapiens
            Eukaryota；Metazoa；Chordata；Vertebrata；Mammalia；Eutheria；
            Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.
参比        1(bases 1 to 2624)
作者        .
题目        人神经肽Y-Y1受体
杂志        专利：  WO 9309227-A 3 13-MAY-1993；
特征                Location/Qualifiers
来源                1..2624
                    /生物体＝″Homo sapiens″
                    /db_xref＝″taxon：9606″
CDS                 152..1306
                    /编码起始＝1
                    /产物＝″神经肽Y Y1受体″
                    /蛋白质号＝″CAA01819.1″
                    /db_xref＝″PID：e205126″
                    /db_xref＝″PID：g1247453″
                    /db_xref＝″GI：1247453″
                    /db_xref＝″SWISS-PROT：P25929″
                    /翻译     ＝″MNSTLFSQVENHSVHSNFSEKNAQLLAFENDDCHLPLAMIFTLA
                    LAYGAVIILGVSGNLALIIIILKQKEMRNVTNILIVNLSFSDLLVAIMCLPFTFVYTL
                    MDHWVFGEAMCKLNPFVQCVSITVSIFSLVLIAVERHQLIINPRGWRPNNRHAYVGIA
                    VIWVLAVASSLPFLIYQVMTDEPFQNVTLDAYKDKYVCFDQFPSDSHRLSYTTLLLVL
                    QYFGPLCFIFICYFKIYIRLKRRNNMMDKMRDNKYRSSETKRINIMLLSIVVAFAVCW
                    LPLTIFNTVFDWNHQIIATCNHNLLFLLCHLTAMISTCVNPIFYGFLNKNFQRDLQFF
                    FNFCDFRSRDDDYETIAMSTMHTDVSKTSLKQASPVAFKKINNNDDNEKI″
碱基数       791a      479c    473g      878t    3others
来源
   1 attgttcagt tcaagggaat gaagaattca gaataatttt ggtaaatgga ttccaatatc
  61 gggaataaga ataagctgaa cagttgacct gctttgaaga aacatactgt ccatttgtct
 121 aaaataatct ataacaacca aaccaatcaa aatgaattca acattatttt cccaggttga
 181 aaatcattca gtccactcta atttctcaga gaagaatgcc cagcttctgg cttttgaaaa
 241 tgatgattgt catctgccct tggccatgat atttacctta gctcttgctt atggagctgt
 301 gatcattctt ggtgtctctg gaaacctggc cttgatcata atcatcttga aacaaaagga
 361 gatgagaaat gttaccaaca tcctgattgt gaacctttcc ttctcagact tgcttgttgc
 421 catcatgtgt ctccccttta catttgtcta cacattaatg gaccactggg tctttggtga
 481 ggcgatgtgt aagttgaatc cttttgtgca atgtgtttca atcactgtgt ccattttctc
 541 tctggttctc attgctgtgg aacgacatca gctgataatc aaccctcgag ggtggagacc
 601 aaataataga catgcttatg taggtattgc tgtgatttgg gtccttgctg tggcttcttc
 661 tttgcctttc ctgatctacc aagtaatgac tgatgagccg ttccaaaatg taacacttga
 721 tgcgtacaaa gacaaatacg tgtgctttga tcaatttcca tcggactctc ataggttgtc
 781 ttataccact ctcctcttgg tgctgcagta ttttggtcca ctttgtttta tatttatttg
 841 ctacttcaag atatatatac gcctaaaaag gagaaacaac atgatggaca agatgagaga
 901 caataagtac aggtccagtg aaaccaaaag aatcaatatc atgctgctct ccattgtggt
 961 agcatttgca gtctgctggc tccctcttac catctttaac actgtgtttg attggaatca
1021 tcagatcatt gctacctgca accacaatct gttattcctg ctctgccacc tcacagcaat
1081 gatatccact tgtgtcaacc ccatatttta tgggttcctg aacaaaaact tccagagaga
1141 cttgcagttc ttcttcaact tttgtgattt ccggtctcgg gatgatgatt atgaaacaat
1201 agccatgtcc acgatgcaca cagatgtttc caaaacttct ttgaagcaag caagcccagt
1261 cgcatttaaa aaaatcaaca acaatgatga taatgaaaaa atctgaaact acttatagcc
1321 tatggtcccg gatgacatct gtttaaaaac aagcacaacc tgcaacatac tttgattacc
1381 tgttctccca aggaatgggg ttgaaatcat ttgaaaatga ctaagatttt cttgtcttgc
1441 ttttttactg cttttgttgt agtgtcataa ttacatttgg aacaaaaggt gtgggctttg
1501 gggtcttctg gaaatagttt tgaccagaca tctttgaagt gctttttgtg aatttatgca
1561 tataatataa agacttttat actgtactta ttggaatgaa atttctttaa agtattacga
1621 tnnnctgact tcagaagtac ctgccatcca atacggtcat tagattgggt catcttgatt
1681 agattagatt agattagatt gtcaacagat tgggccatcc ttactttatg ataggcatca
1741 ttttagtgtg ttacaatagt aacagtatgc aaaagcagca ttcaggagcc gaaagatagt
1801 cttgaagtca ttcagaagtg gtttgaggtt tctgtttttt ggtggttttt gtttgttttt
1861 tttttttttc accttaaggg aggctttcat ttcctcccga ctgattgtca cttaaatcaa
1921 aatttaaaaa tgaataaaaa gacatacttc tcagctgcaa atattatgga gaattgggca
1981 cccacaggaa tgaagagaga aagcagctcc ccaacttcaa aaccattttg gtacctgaca
2041 acaagagcat tttagagtaa ttaatttaat aaagtaaatt agtattgctg caaatagcta
2101 aattatattt atttgaattg atggtcaaga gattttccat tttttttaca gactgttcag
2161 tgtttgtcaa gcttctggtc taatatgtac tcgaaagact ttccgcttac aatttgtaga
2221 aacacaaata tcgttttcca tacagcagtg cctatatagt gactgatttt aactttcaat
2281 gtccatcttt caaaggaagt aacaccaagg tacaatgtta aaggaatatt cactttacct
2341 agcagggaaa aatacacaaa aactgcagat acttcatata gcccatttta acttgtataa
2401 actgtgtgac ttgtggcgtc ttataaataa tgcactgtaa agattactga atagttgtgt
2461 catgttaatg tgcctaattt catgtatctt gtaatcatga ttgagcctca gaatcatttg
2521 gagaaactat attttaaaga acaagacata cttcaatgta ttatacagat aaagtattac
2581 atgtgtttga ttttaaaagg gcggacattt tattaaaatc aagg
6.NPY Y2受体
基因座        HSU36269    1200bp     mRNA           PRI    14-NOV-1995
定义          人神经肽Y/肽YY Y2受体mRNA，完全的cds.
登记号        U36269
NID           g1063633
译本          U36269.1 GI：1063633
关键词        .
来源          人
生物体        Homo sapiens
              Eukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；
              Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.
参比          1(bases 1 to 1200)
作者          Gerald，C.，Walker，M.W.，Vaysse，P.J.，He，C.，Branchek，T.A.and
              Weinshank，R.L.
题目          人海马神经肽Y/肽YY Y2受体亚型的表达克隆和药理特性
杂志          J.Biol.Chem.270(45)，26758-26761(1995)
MEDLINE       96070760
参比          2(bases 1 to 1200)
作者          Gerald，C.A，
题目          Direct Submission
杂志          Submitted(13-SEP-1995)Christophe A.Gerald，Synaptic
              Pharmaceutical Corporation，Molecular Biology，215 College Road，
              Paramus，NJ 07652，USA
特征                   Location/Qualifiers
来源                   1..1200
                       /生物体＝″Homo sapiens″
                       /db_xref＝″taxon：9606″
                       /克隆＝″hhY2″
                       /sex＝″male″
                       /组织型＝″brain hippocampus″
                       /dev_stage＝″adult″
5′UTR                 1..20
CDS                    21..1166
                       /note＝″NPY/PYY Y2 receptor″
                       /编码起始＝1
                       /产物＝″neuropeptide Y/peptide YY Y2 receptor″
                       /蛋白质号＝″AAC50281.1″
                       /db_xref＝″PID：g1063634″
                       /db_xref＝″GI：1063634″
                       /翻译     ＝″MGPIGAEADENQTVEEMKVEQYGPQTTPRGELVPDPEPELIDST
                       KLIEVQVVLILAYCSIILLGVIGNSLVIHVVIKFKSMRTVTNFFIANLAVADLLVNTL
                       CLPFTLTYTLMGEWKMGPVLCHLVPYAQGLAVQVSTITLTVIALDRHRCIVYHLESKI
                       SKRISFLIIGLAWGISALLASPLAIFREYSLIEIIPDFEIVACTEKWPGEEKSIYGTV
                       YSLSSLLILYVLPLGIISFSYTRIWSKLKNHVSPGAANDHYHQRRQKTTKMLVCVVVV
                       FAVSWLPLHAFQLAVDIDSQVLDLKEYKLIFTVFHIIAMCSTFANPLLYGWMNSNYRK
                       AFLSAFRCEQRLDAIHSEVSVTFKAKKNLEVRKNSGPNDSFTEATNV″
3′UTR                 1164..1200
碱基数           292a     295c    299g     314t
来源
   1 caagtggacc tgtactgaaa atgggtccaa taggtgcaga ggctgatgag aaccagacag
  61 tggaagaaat gaaggtggaa caatacgggc cacaaacaac tcctagaggt gaactggtcc
 121 ctgaccctga gccagagctt atagatagta ccaagctgat tgaggtacaa gttgttctca
 181 tattggccta ctgctccatc atcttgcttg gggtaattgg caactccttg gtgatccatg
 241 tggtgatcaa attcaagagc atgcgcacag taaccaactt tttcattgcc aatctggctg
 301 tggcagatct tttggtgaac actctgtgtc taccgttcac tcttacctat accttaatgg
 361 gggagtggaa aatgggtcct gtcctgtgcc acctggtgcc ctatgcccag ggcctggcag
 421 tacaagtatc cacaatcacc ttgacagtaa ttgccctgga ccggcacagg tgcatcgtct
 481 accacctaga gagcaagatc tccaagcgaa tcagcttcct gattattggc ttggcctggg
 541 gcatcagtgc cctgctggca agtcccctgg ccatcttccg ggagtattcg ctgattgaga
 601 tcatcccgga ctttgagatt gtggcctgta ctgaaaagtg gcctggcgag gagaagagca
 661 tctatggcac tgtctatagt ctttcttcct tgttgatctt gtatgttttg cctctgggca
 721 ttatatcatt ttcctacact cgcatttgga gtaaattgaa gaaccatgtc agtcctggag
 781 ctgcaaatga ccactaccat cagcgaaggc aaaaaaccac caaaatgctg gtgtgtgtgg
 841 tggtggtgtt tgcggtcagc tggctgcctc tccatgcctt ccagcttgcc gttgacattg
 901 acagccaggt cctggacctg aaggagtaca aactcatctt cacagtgttc cacatcatcg
 961 ccatgtgctc cacttttgcc aatccccttc tctatggctg gatgaacagc aactacagaa
1021 aggctttcct ctcggccttc cgctgtgagc agcggttgga tgccattcac tctgaggtgt
1081 ccgtgacatt caaggctaaa aagaacctgg aggtcagaaa gaacagtggc cccaatgact
1141 ctttcacaga ggctaccaat gtctaaggaa gctgtggtgt gaaaatgtat ggatgaattc
7.NPY Y5受体
基因座       HSU66275    1370bp    mRNA    PRI    18-OCT-1996
定义         人神经肽Y5受体(NPYR5)mRNA，完全的cds.
登记号       U66275
NID          g1620655
译本         U66275.1 GI：1620655
关键词       .
来源         人
生物体       Homo sapiens
             Eukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；
             Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.
参比         1(bases 1 to 1370)
作者        Hu，Y.，Bloomquist，B.T.，Cornfield，L.J.，DeCarr，L.B.，
            Flores-Riveros，J.R.，Friedman，L.，Jiang，P.，Lewis-Higgins，L.，
            Sadlowski，Y.，Schaefer，J.，Velazquez，N.and McCaleb，M.L.
题目        一种新的与进食行为有关的下丘脑神经肽Y受体的鉴别
杂志        J.Biol.Chem.271(42)，26315-26319(1996)
MEDLINE     96421636
参比        2(bases 1 to 1370)
作者        Hu，Y.，Bloomquist，B.T.，Cornfield，L.J.，DeCarr，L.B.，
            Flores-Riveros，J.R.，Friedman，L.，Jiang，P.，Lewis-Higgins，L.，
            Sadlowski，Y.，Schaefer，J.，Velazquez，N.and McCaleb，M.L.
题目        Direct Submission
杂志        Submitted(06-AUG-1996)Metabolic Disorders，Bayer Corporation，400
            Morgan Lane，West Haven，CT 06516，USA
特征                 Location/Qualifiers
来源                 1..1370
                     /生物体  ＝″Homo sapiens″
                     /db_xref＝″taxon：9606″
基因                 18..1355
                     /基因＝″NPYR5″
CDS                  18..1355
                     /基因＝″NPYR5″
                     /功能＝″G蛋白质-偶联受体″
                     /编码起始＝1
                     /产物＝″神经肽Y5受体″
                     /protein_id＝″AAC50741.1″
                     /db_xref＝″PID：g1620656″
                     /db_xref＝″GI：1620656″
                     /翻译     ＝″MDLELDEYYNKTLATENNTAATRNSDFPVWDDYKSSVDDLQYFL
                     IGLYTFVSLLGFMGNLLILMALMKKRNQKTTVNFLIGNLAFSDILVVLFCSPFTLTSV
                     LLDQWMFGKVMCHIMPFLQCVSVLVSTLILISIAIVRYHMIKHPISNNLTANHGYFLI
                     ATVWTLGFAICSPLPVFHSLVELQETFGSALLSSRYLCVESWPSDSYRIAFTISLLLV
                     QYILPLVCLTVSHTSVCRSISCGLSNKENRLEENEMINLTLHPSKKSGPQVKLSGSHK
                     WSYSFIKKHRRRYSKKTACVLPAPERPSQENHSRILPENFGSVRSQLSSSSKFIPGVP
                     TCFEIKPEENSDVHELRVKRSVTRIKKRSRSVFYRLTILILVFAVSWMPLHLFHVVTD
                     FNDNLISNRHFKLVYCICHLLGMMSCCLNPILYGFLNNGIKADLVSLIHCLHM″
碱基数     392a    263c    257g    458t
来源
   1 ccaagcagga ctataatatg gatttagagc tcgacgagta ttataacaag acacttgcca
  61 cagagaataa tactgctgcc actcggaatt ctgatttccc agtctgggat gactataaaa
 121 gcagtgtaga tgacttacag tattttctga ttgggctcta tacatttgta agtcttcttg
 181 gctttatggg gaatctactt attttaatgg ctctcatgaa aaagcgtaat cagaagacta
 241 cggtaaactt cctcataggc aatctggcct tttctgatat cttggttgtg ctgttttgct
 301 cacctttcac actgacgtct gtcttgctgg atcagtggat gtttggcaaa gtcatgtgcc
 361 atattatgcc ttttcttcaa tgtgtgtcag ttttggtttc aactttaatt ttaatatcaa
 421 ttgccattgt caggtatcat atgataaaac atcccatatc taataattta acagcaaacc
 481 atggctactt tctgatagct actgtctgga cactaggttt tgccatctgt tctccccttc
 541 cagtgtttca cagtcttgtg gaacttcaag aaacatttgg ttcagcattg ctgagcagca
 601 ggtatttatg tgttgagtca tggccatctg attcatacag aattgccttt actatctctt
 661 tattgctagt tcagtatatt ctgcccttag tttgtcttac tgtaagtcat acaagtgtct
 721 gcagaagtat aagctgtgga ttgtccaaca aagaaaacag acttgaagaa aatgagatga
 781 tcaacttaac tcttcatcca tccaaaaaga gtgggcctca ggtgaaactc tctggcagcc
 841 ataaatggag ttattcattc atcaaaaaac acagaagaag atatagcaag aagacagcat
 901 gtgtgttacc tgctccagaa agaccttctc aagagaacca ctccagaata cttccagaaa
 961 actttggctc tgtaagaagt cagctctctt catccagtaa gttcatacca ggggtcccca
1021 cttgctttga gataaaacct gaagaaaatt cagatgttca tgaattgaga gtaaaacgtt
1081 ctgttacaag aataaaaaag agatctcgaa gtgttttcta cagactgacc atactgatat
1141 tagtatttgc tgttagttgg atgccactac accttttcca tgtggtaact gattttaatg
1201 acaatcttat ttcaaatagg catttcaagt tggtgtattg catttgtcat ttgttgggca
1261 tgatgtcctg ttgtcttaat ccaattctat atgggtttct taataatggg attaaagctg
1321 atttagtgtc ccttatacac tgtcttcata tgtaataatt ctcactgttt
8.VIP
基因座      VIP           1511bp     mRNA        PRI       19-MAR-1999
定义        Homo sapiens血管活性肠肽(VIP)mRNA.
登记号      NM_003381
NID         g4507896
译本        NM_003381.1 GI：4507896
关键词      .
来源        人
生物体      Homo sapiens
            Eukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；
            Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.
参比        1(bases 1 to 1511)
作者        DeLamarter，J.F.，Buell，G.N.，Kawashima，E.，Polak，J.M.and
            Bloom，S.R.
题目        血管活性肠肽：细菌细胞中激素原的表达
杂志        Peptides 6 Suppl 1，95-102(1985)
MEDLINE     86016352
注释        REFSEQ：由M36634衍生的参比序列.
            临时参比序列：这是一种仍未进行人体评价的临时的参比序列。最终处理
            的参比序列记录可与此略有不同。
特征                  Location/Qualifiers
来源                  1..1511
                      /生物体＝″Homo sapiens″
                      /db_xref＝″taxon：9606″
                      /map＝″6q24-q27″
                      /组织型＝″胰腺癌″
基因                  1..1511
                      /基因＝″VIP″
                      /db_xref＝″MIM：192320″
                      /db_xref＝″LocusID：7432″
信号肽                67..129
                      /产物＝″血管活性肠肽″
CDS                   67..579
                      /基因＝″VIP″
                      /编码起始＝1
                      /产物＝″血管活性肠肽″
                      /蛋白质号＝″NP_003372.1″
                      /db_xref＝″PID：g4507897″
                      /db_xref＝″GI：4507897″
                      /翻译     ＝″MDTRNKAQLLVLLTLLSVLFSQTSAWPLYRAPSALRLGDRIPFE
                      GANEPDQVSLKEDIDMLQNALAENDTPYYDVSRNARHADGVFTSDFSKLLGQLSAKKY
                      LESLMGKRVSSNISEDPVPVKRHSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNGKRSSEGE
                      SPDFPEELEK″
成熟肽                307..387
                      /产物＝″血管活性肠肽″
成熟肽                439..522
                      /产物＝″血管活性肠肽″
polyA信号             1326..1331
碱基数          541a    255c    276g    439t
来源
   1 ggtcagctcc aaaacaatcc ggaacggcca gctccggggg agcacgactg ggcgagaggc
  61 acagaaatgg acaccagaaa taaggcccag ctccttgtgc tcctgactct tctcagtgtg
 121 ctcttctcac agacttcggc atggcctctt tacagggcac cttctgctct caggttgggt
 181 gacagaatac cctttgaggg agcaaatgaa cctgatcaag tttcattaaa agaagacatt
 241 gacatgttgc aaaatgcatt agctgaaaat gacacaccct attatgatgt atccagaaat
 301 gccaggcatg ctgatggagt tttcaccagt gacttcagta aactcttggg tcaactttct
 361 gccaaaaagt accttgagtc tcttatggga aaacgtgtta gcagtaacat ctcagaagac
 421 cctgtaccag tcaaacgtca ctcagatgca gtcttcactg acaactatac ccgccttaga
 481 aaacaaatgg ctgtaaagaa atatttgaac tcaattctga atggaaagag gagcagtgag
 541 ggagaatctc ccgactttcc agaagagtta gaaaaatgat gaaaaagacc tttggagcaa
 601 agctgatgac aacttcccag tgaattcttg aaggaaaatg atacgcaaca taattaaatt
 661 ttagattcta cataagtaat tcaagaaaac aacttcaata tccaaaccaa ataaaaatat
 721 tgtgttgtga atgttgtgat gtattctagc taatgtaata actgtgaagt ttacattgta
 781 aatagtattt gagagttcta aattttgtct ttaactcata aaaagcctgc aatttcatat
 841 gctgtatatc ctttctaaca aaaaaatata ttttaatgat aagtaatgct aggttaatcc
 901 aattatatga gacgtttttg gaagagtagt aatagagcaa aattgatgtg tttatttata
 961 gagtgtactt aactattcag gagagtagaa cagataatca gtgtgtctaa atttgaatgt
1021 taagcagatg gaatgctgtg ttaaataaac ctcaaaatgt ctaagatagt aacaatgaag
1081 ataaaaagac attcttccaa aaagattttc agaaaatatt atgtgtttcc atattttata
1141 ggcaaccttt atttttaatg gtgttttaaa aaatctcaaa tttggattgc taatcaccaa
1201 aggctctctc ctgatagtct ttcagttaag gagaacgacc cctgcttctg acactgaaac
1261 ttccctttct gcttgtgtta agtatgtgta aaatgtgaag tgaatgaaac actcagttgt
1321 tcaataataa atatttttgc cataatgact cagaatattg ctttggtcat atgagcttcc
1381 ttctgtgaaa tacattttgg agacacaact atttttccaa aataatttta agaaatcaaa
1441 gagagaaaat aaagaccttg cttatgattg cagataaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa
1501 aaaaaaaaaa a
9.VPAC1受体
基因座        VIP    1511bp     mRNA    PRI    19-MAR-1999
定义          Homo sapiens vasoactive intestinal peptide(VIP)mRNA.
登记号        NM_003381
NID           g4507896
译本          NM_003381.1 GI：4507896
关键词        .
来源          人
生物体        Homo sapiens
              Eukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；
              Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.
参比          1(bases 1 to 1511)
作者          DeLamarter，J.F.，Buell，G.N.，Kawashima，E.，Polak，J.M.and
              Bloom，S.R.
题目          血管活性肠肽：细菌细胞中激素原的表达
杂志          Peptides 6 Suppl 1，95-102(1985)
MEDLINE       86016352
注释          RESEQ：由M36634衍生的参比序列.
              临时参比序列：这是一种仍未进行人体评价的临时参比序列。最终处理
              的参比序列记录可与此略有不同。
特征                    Location/Qualifiers
来源                    1..1511
                        /生物体＝″Homo sapiens″
                        /db_xref＝″taxon：9606″
                        /map＝″6q24-q27″
                  /组织型＝″胰腺癌″
基因              1..1511
                  /基因＝″VIP″
                  /db_xref＝″MIM：192320″
                  /db_xref＝″LocusID：7432″
信号肽            67..129
                  /产物＝″血管活性肠肽″
CDS               67..579
                  /基因＝″VIP″
                  /编码起始＝1
                  /产物＝″血管活性肠肽″
                  /蛋白质号＝″NP_003372.1″
                  /db_xref＝″PID：g4507897″
                  /db_xref＝″GI：4507897″
                  /翻译     ＝″MDTRNKAQLLVLLTLLSVLFSQTSAWPLYRAPSALRLGDRIPFE
                  GANEPDQVSLKEDIDMLQNALAENDTPYYDVSRNARHADGVFTSDFSKLLGQLSAKKY
                  LESLMGKRVSSNISEDPVPVKRHSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNGKRSSEGE
                  SPDFPEELEK″
成熟肽            307..387
                  /产物＝″血管活性肠肽″
成熟肽            439..522
                  /产物＝″血管活性肠肽″
polyA信号         1326..1331
碱基数        541a      255c       276g      439t
来源
   1 ggtcagctcc aaaacaatcc ggaacggcca gctccggggg agcacgactg ggcgagaggc
  61 acagaaatgg acaccagaaa taaggcccag ctccttgtgc tcctgactct tctcagtgtg
 121 ctcttctcac agacttcggc atggcctctt tacagggcac cttctgctct caggttgggt
 181 gacagaatac cctttgaggg agcaaatgaa cctgatcaag tttcattaaa agaagacatt
 241 gacatgttgc aaaatgcatt agctgaaaat gacacaccct attatgatgt atccagaaat
 301 gccaggcatg ctgatggagt tttcaccagt gacttcagta aactcttggg tcaactttct
 361 gccaaaaagt accttgagtc tcttatggga aaacgtgtta gcagtaacat ctcagaagac
 421 cctgtaccag tcaaacgtca ctcagatgca gtcttcactg acaactatac ccgccttaga
 481 aaacaaatgg ctgtaaagaa atatttgaac tcaattctga atggaaagag gagcagtgag
 541 ggagaatctc ccgactttcc agaagagtta gaaaaatgat gaaaaagacc tttggagcaa
 601 agctgatgac aacttcccag tgaattcttg aaggaaaatg atacgcaaca taattaaatt
 661 ttagattcta cataagtaat tcaagaaaac aacttcaata tccaaaccaa ataaaaatat
 721 tgtgttgtga atgttgtgat gtattctagc taatgtaata actgtgaagt ttacattgta
 781 aatagtattt gagagttcta aattttgtct ttaactcata aaaagcctgc aatttcatat
 841 gctgtatatc ctttctaaca aaaaaatata ttttaatgat aagtaatgct aggttaatcc
 901 aattatatga gacgtttttg gaagagtagt aatagagcaa aattgatgtg tttatttata
 961 gagtgtactt aactattcag gagagtagaa cagataatca gtgtgtctaa atttgaatgt
1021 taagcagatg gaatgctgtg ttaaataaac ctcaaaatgt ctaagatagt aacaatgaag
1081 ataaaaagac attcttccaa aaagattttc agaaaatatt atgtgtttcc atattttata
1141 ggcaaccttt atttttaatg gtgttttaaa aaatctcaaa tttggattgc taatcaccaa
1201 aggctctctc ctgatagtct ttcagttaag gagaacgacc cctgcttctg acactgaaac
1261 ttccctttct gcttgtgtta agtatgtgta aaatgtgaag tgaatgaaac actcagttgt
1321 tcaataataa atatttttgc cataatgact cagaatattg ctttggtcat atgagcttcc
1381 ttctgtgaaa tacattttgg agacacaact atttttccaa aataatttta agaaatcaaa
1441 gagagaaaat aaagaccttg cttatgattg cagataaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa
1501 aaaaaaaaaa a
10.VPAC2受体
基因座     HUMHVRP       1640bp       mRNA      PRI    16-FEB-1995
定义       人helodermin-优选VIP受体(VIP2/PACAP受体)mRNA，完全的cds.
登记号       L36566
NID          g550477
译本         L36566.1 GI：550477
关键词       PACAP受体；VIP受体；helodermin-优选VIP受体.
来源         Homo sapiens cDNA to mRNA.
生物体       Homo sapiens
             Eukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；
             Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.
参比         1(bases 1 to 1640 )
作者         Svoboda，M.，Tastenoy，M.，Van Rampelbergh，J.，Goossens，J.F.，De
             Neef，P.，Waelbroeck，M.and Robberecht，P.
题目         来自SUP-T1成淋巴细胞的人VIP受体的分子克隆和功能表征
杂志         Biochem.Biophys.Res.Commun.205(3)，1617-1624(1994)
MEDLINE      95110300
特征                 Location/Qualifiers
来源                 1..1640
                     /生物体＝″Homo sapiens″
                     /db_xref＝″taxon：9606″
                     /细胞系＝″SUP T1淋巴母细胞″
                     /克隆文库＝″lamda ZAP II″
信号肽               163..231
                     /note＝″推定的″
CDS                  163..1479
                     /note＝″人VIP2受体先前称为″helodermin优选VIP受体″；
                     跨膜结构域位于下列位置：637-696；772-844；880-948；
                     1003-1071；1147-120g；1243-1302；潜在的糖基化位
                     点位于334-336；424-426；436-438.″
                     /编码起始＝1
                     /功能＝″VIP和PACAP受体″
                     /蛋白质号＝″AAC37569.1″
                     /db_xref＝″PID：g550478″
                     /db_xref＝″GI：550478″
                     /翻译     ＝″MRTLLPPALLTCWLLAPVNSIHPECRFHLEIQEEETKCTELLRS
                     QTEKHKACSGVWDNITCWRPANVGETVTVPCPKVFSNFYSKAGNISKNCTSDGWSETF
                     PDFVDACGYSDPEDESKITFYILVKAIYTLGYSVSLMSLATGSIILCLFRKLHCTRNY
                     IHLNLFLSFILRAISVLVKDDVLYSSSGTLHCPDQPSSWVGCKLSLVFLQYCIMANFF
                     WLLVEGLYLHTLLVAMLPPRRCFLAYLLIGWGLPTVCIGAWTAARLYLEDTGCWDTND
                     HSVPWWVIRIPILISIIVNFVLFISIIRILLQKLTSPDVGGNDQSQYKRLAKSTLLLI
                     PLFGVHYMVFAVFPISISSKYQILFELCLGSFQGLVVAVLYCFLNSEVQCELKRKWRS
                     RCPTPSASRDYRVCGSSFSHNGSEGALQFHRASRAQSFLQTETSVI″
成熟肽               232..1476
                     /功能＝″VIP和PACAP受体″
碱基数           315a      512c      461g      352t
来源
  1 cgggacgagg gggcggcccc cgcgctcggg gcgctcggct acagctgcgg ggcccgaggt
 61 ctccgcgcac tcgctcccgg cccatgctgg aggcggcgga acccggggga cctaggacgg
121 aggcggcggg cgctgggcgg cccccggcac gctgagctcg ggatgcggac gctgctgcct
181 cccgcgctgc tgacctgctg gctgctcgcc cccgtgaaca gcattcaccc agaatgccga
241 tttcatctgg aaatacagga ggaagaaaca aaatgtacag agcttctgag gtctcaaaca
301 gaaaaacaca aagcctgcag tggcgtctgg gacaacatca cgtgctggcg gcctgccaat
361 gtgggagaga ccgtcacggt gccctgccca aaagtcttca gcaattttta cagcaaagca
421 ggaaacataa gcaaaaactg tacgagtgac ggatggtcag agacgttccc agatttcgtc
481 gatgcctgtg gctacagcga cccggaggat gagagcaaga tcacgtttta tattctggtg
541 aaggccattt ataccctggg ctacagtgtc tctctgatgt ctcttgcaac aggaagcata
 601 attctgtgcc tcttcaggaa gctgcactgc accaggaatt acatccacct gaacctgttc
 661 ctgtccttca tcctgagagc catctcagtg ctggtcaagg acgacgttct ctactccagc
 721 tctggcacgt tgcactgccc tgaccagcca tcctcctggg tgggctgcaa gctgagcctg
 781 gtcttcctgc agtactgcat catggccaac ttcttctggc tgctggtgga ggggctctac
 841 ctccacaccc tcctggtggc catgctcccc cctagaaggt gcttcctggc ctacctcctg
 901 atcggatggg gcctccccac cgtctgcatc ggtgcatgga ctgcggccag gctctactta
 961 gaagacaccg gttgctggga tacaaacgac cacagtgtgc cctggtgggt catacgaata
1021 ccgattttaa tttccatcat cgtcaatttt gtccttttca ttagtattat acgaattttg
1081 ctgcagaagt taacatcccc agatgtcggc ggcaacgacc agtctcagta caagaggctg
1141 gccaagtcca cgctcctgct tatcccgctg ttcggcgtcc actacatggt gtttgccgtg
1201 tttcccatca gcatctcctc caaataccag atactgtttg agctgtgcct cgggtcgttc
1261 cagggcctgg tggtggccgt cctctactgt ttcctgaaca gtgaggtgca gtgcgagctg
1321 aagcgaaaat ggcgaagccg gtgcccgacc ccgtccgcga gccgggatta cagggtctgc
1381 ggttcctcct tctcccacaa cggctcggag ggcgccctgc agttccaccg cgcgtcccga
1441 gcccagtcct tcctgcaaac ggagacctcg gtcatctagc cccacccctg cctgtcggac
1501 gcggcgggag gcccacggtt cggggcttct gcggggctga gacgccggct tcctccttcc
1561 agatgcccga gcaccgtgtc gggcaggtca gcgcggtcct gactccgtca agctggttgt
1621 ccactaaacc ccatacctgg

Claims (78)

1.一种制备药物组合物的方法，包括：将活性剂与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合以形成所述药物组合物；将所述组合物包装用于女性性功能障碍(FSD)治疗的施用；其中所述活性剂是中性内肽酶的抑制剂(I:NEP)。
2.权利要求1的方法，其中所述I:NEP增强患有FSD的女性性生殖器中的cAMP；其中所述cAMP是内源性cAMP；其中所述内源性cAMP是由性刺激(性唤起)产生的cAMP。
3.权利要求1或权利要求2的方法，其中I:NEP对cAMP有间接增强作用。
4.权利要求3的方法，其中I:NEP作用于天然存在的和座落的血管活性肠肽(VIP)。
5.前述权利要求任一项的方法，其中药物组合物是用于口服施用。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述FSD为女性性唤起障碍(FSAD)。
7.前述权利要求任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约100nM的Ki值。
8.前述权利要求任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约75nM的Ki值。
9.前述权利要求任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约50nM的Ki值。
10.前述权利要求任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约25nM的Ki值。
11.前述权利要求任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约20nM的Ki值。
12.前述权利要求任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约15nM的Ki值。
13.前述权利要求任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约10nM的Ki值。
14.前述权利要求任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约5nM的Ki值。
15.一种方法，包括步骤：
a)实施一种用于鉴定可用于治疗女性性功能障碍(FSD)的活性剂的检测，该检测方法包括：确定所述活性剂是否直接或间接增强cAMP；其中在活性剂存在下cAMP的增强是所述活性剂可用于治疗FSD的指征；其中所述活性剂是中性内肽酶的抑制剂(I:NEP)；
b)鉴定一种或多种可直接或间接增强cAMP的活性剂；且
c)制备一定量的所述一种或多种鉴定的活性剂；
d)将所鉴定的一种或多种活性剂与可药用载体、稀释剂或赋形剂混合以形成药物组合物；
e)包装所述药物组合物用于治疗FSD的施用。
16.权利要求15的方法，其中所述I:NEP增强患有FSD的女性性生殖器中的cAMP；其中所述cAMP是内源性cAMP；其中所述内源性cAMP是由性刺激(性唤起)产生的cAMP。
17.权利要求15或权利要求16的方法，其中I:NEP对cAMP有间接增强作用。
18.权利要求17的方法，其中I:NEP作用于天然存在的和座落的血管活性肠肽(VIP)。
19.权利要求15-18中任一项的方法，其中药物组合物是用于口服施用。
20.权利要求15-19中任一项的方法，其中所述FSD为女性性唤起障碍(FSAD)。
21.权利要求15-20中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约100nM的Ki值。
22.权利要求15-21中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约75nM的Ki值。
23.权利要求15-22中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约50nM的Ki值。
24.权利要求15-23中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约25nM的Ki值。
25.权利要求15-24中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约20nM的Ki值。
26.权利要求15-25中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约15nM的Ki值。
27.权利要求15-26中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约10nM的Ki值。
28.权利要求15-27中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约5nM的Ki值。
29.一种通过施用所述活性剂用于鉴定可治疗女性中女性性功能障碍(FSD)的活性剂的检测方法，所述检测方法包括：将活性剂施用于动物模型，且在施用所述活性剂后测量该动物生殖器官内血流中cAMP的任何增强；其中所述活性剂是中性内肽酶的抑制剂(I:NEP)；且其中所述活性剂能够治疗FSD；且所述动物模型包括一种或多种：
i)一种经麻醉的雌性动物，其中包括在其骨盆神经受刺激后测量所述动物的生殖器血流改变的单元；其中所述活性剂能在施用后增强性生殖器中的cAMP，其中所述活性剂是I:NEP；其中所述活性剂治疗FSD；或
ii)一种经麻醉的雌性动物，其中包括在其骨盆神经受刺激后测量所述动物的生殖器血流改变的单元；其中所述活性剂能在口服施用后增强性生殖器中的cAMP，其中所述活性剂是I:NEP；其中所述活性剂通过口服施用治疗FSD。
30.权利要求29的方法，其中所述I:NEP增强患有FSD的女性性生殖器中的cAMP；其中所述cAMP是内源性cAMP；其中所述内源性cAMP是由性刺激(性唤起)产生的cAMP。
31.权利要求29或权利要求30的方法，其中I:NEP对cAMP有间接增强作用。
32.权利要求31的方法，其中I:NEP作用于天然存在的和座落的血管活性肠肽(VIP)。
33.权利要求29-32中任一项的方法，其中药物组合物是用于口服施用。
34.权利要求29-33中任一项的方法，其中所述FSD为女性性唤起障碍(FSAD)。
35.权利要求29-34中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约100nM的Ki值。
36.权利要求29-35中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约75nM的Ki值。
37.权利要求29-36中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约50nM的Ki值。
38.权利要求29-37中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约25nM的Ki值。
39.权利要求29-38中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约20nM的Ki值。
40.权利要求29-39中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约15nM的Ki值。
41.权利要求29-40中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约10nM的Ki值。
42.权利要求29-41中任一项的方法，其中所述I:NEP具有小于约5nM的Ki值。
43.一种用于治疗女性性功能障碍(FSD)的药物组合物；所述药物组合物包含中性内肽酶的抑制剂(I:NEP)；额外的药物活性剂；和可药用载体、稀释剂或赋形剂；优选地所述额外的活性剂能增强患有FSD的女性性生殖器中的cAMP。
44.权利要求43的药物组合物，其中所述I:NEP增强患有FSD的女性性生殖器中的cAMP；其中所述cAMP是内源性cAMP；其中所述内源性cAMP是由性刺激(性唤起)产生的cAMP。
45.权利要求43或权利要求44的药物组合物，其中I:NEP对cAMP有间接增强作用。
46.权利要求45的药物组合物，其中I:NEP作用于天然存在的和座落的血管活性肠肽(VIP)。
47.权利要求43-46中任一项的药物组合物，其中药物组合物是用于口服施用。
48.权利要求43-47中任一项的药物组合物，其中所述FSD为女性性唤起障碍(FSAD)。
49.权利要求43-48中任一项的药物组合物，其中所述I:NEP具有小于约100nM的Ki值。
50.权利要求43-49中任一项的药物组合物，其中所述I:NEP具有小于约75nM的Ki值。
51.权利要求43-50中任一项的药物组合物，其中所述I:NEP具有小于约50nM的Ki值。
52.权利要求43-51中任一项的药物组合物，其中所述I:NEP具有小于约25nM的Ki值。
53.权利要求43-52中任一项的药物组合物，其中所述I:NEP具有小于约20nM的Ki值。
54.权利要求43-53中任一项的药物组合物，其中所述I:NEP具有小于约15nM的Ki值。
55.权利要求43-54中任一项的药物组合物，其中所述I:NEP具有小于约10nM的Ki值。
56.权利要求43-55中任一项的药物组合物，其中所述I:NEP具有小于约5nM的Ki值。
57.权利要求43-56中任一项的药物组合物，其中所述额外的活性剂为另一种I:NEP或I:PDE或I:NPY或其任一组合。
58.中性内肽酶抑制剂(I:NEP)与额外的药物活性剂的组合用于制备治疗FSD的药物的用途，优选的其中所述额外的活性剂能在患有女性性功能障碍(FSD)的女性性生殖器中增强cAMP。
59.权利要求58的用途，其中所述I:NEP增强患有FSD的女性性生殖器中的cAMP；其中所述cAMP是内源性cAMP；其中所述内源性cAMP是由性刺激(性唤起)产生的cAMP。
60.权利要求58或权利要求59的用途，其中I:NEP对cAMP有间接增强作用。
61.权利要求60的用途，其中I:NEP作用于天然存在的和座落的血管活性肠肽(VIP)。
62.权利要求58-61中任一项的用途，其中药物组合物是用于口服施用。
63.权利要求58-62中任一项的用途，其中所述FSD为女性性唤起障碍(FSAD)。
64.权利要求58-63中任一项的用途，其中所述I:NEP具有小于约100nM的Ki值。
65.权利要求58-64中任一项的用途，其中所述I:NEP具有小于约75nM的Ki值。
66.权利要求58-65中任一项的用途，其中所述I:NEP具有小于约50nM的Ki值。
67.权利要求58-66中任一项的用途，其中所述I:NEP具有小于约25nM的Ki值。
68.权利要求58-67中任一项的用途，其中所述I:NEP具有小于约20nM的Ki值。
69.权利要求58-68中任一项的用途，其中所述I:NEP具有小于约15nM的Ki值。
70.权利要求58-69中任一项的用途，其中所述I:NEP具有小于约10nM的Ki值。
71.权利要求58-70中任一项的用途，其中所述I:NEP具有小于约5nM的Ki值。
72.权利要求58-71中任一项的用途，其中所述额外的活性剂为另一种I:NEP或I:PDE或I:NPY或其任一组合。
73.一种诊断方法，所述方法包括从女性中分离样品；确定所述样品是否含有以引起FSD的量存在的或以该量存在用于引起FSD的成分；其中所述成分对女性性生殖器中的cAMP之水平或活性具有直接或间接作用；且其中所述成分能被调节以通过使用活性剂实现有益的作用；且其中所述活性剂是I:NEP。
74一种诊断组合物，其包括用于从女性样品分离物中检测一种成分的单元；其中所述单元可用于确定所述样品是否含有以引起FSD的量存在的或以该量存在用于引起FSD的成分；其中所述成分对女性性生殖器中的cAMP之水平或活性具有直接或间接作用；且其中所述成分能被调节以通过使用活性剂实现有益的作用；且其中所述活性剂是I:NEP。
75.一种诊断试剂盒，其包括用于从女性样品分离物中检测一种成分的单元；其中所述单元可用于确定所述样品是否含有以引起FSD的量存在的或以该量存在用于引起FSD的成分；其中所述成分对女性性生殖器中的cAMP之水平或活性具有直接或间接作用；且其中所述成分能被调节以通过使用活性剂实现有益的作用；且其中所述活性剂是I:NEP，且其中所述试剂盒还包含I:NEP。
76.权利要求1-75的发明，其中所述I:NEP增强患有FSD的女性性生殖器中的cAMP，其中所述cAMP是内源性cAMP；其中所述内源性cAMP是由性刺激(性唤起)产生的cAMP。
77.权利要求1-76的发明，其中I:NEP对cAMP有间接增强作用。
78.权利要求1-77的发明，其中I:NEP作用于天然存在的和座落的血管活性肠肽(VIP)。
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