DE1598133B2 - Verfahren und diagnostisches Mittel zur Bestimmung von Hydroperoxiden bzw. peroxidatisch wirksamen Substanzen - Google Patents

Verfahren und diagnostisches Mittel zur Bestimmung von Hydroperoxiden bzw. peroxidatisch wirksamen Substanzen

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Description

R1-C-(N)n-N=C R6
X R7
(I)
20
verwendet, in der bedeutet R1 eine Aminogruppe, gegebenenfalls ein- oder mehrfach substituierte aliphatische, aromatische oder heterocyclische Reste, oder die Gruppe
R4
C-(N)n-N=C R6
35
R2 Wasserstoff, gegebenenfalls ein- oder mehrfach substituierte aliphatische, aromatische oder heterocyclische Reste, R3 Wasserstoff, eine Alkyl- oder gegebenenfalls ein- oder mehrfach substituierte Phenylgruppe, R4 eine Amino-, Hydroxy- oder Alkoxygruppe, R5 und R6 Wasserstoff, Amino-, Hydroxy-, Alkoxy- oder Alkylgruppen, X Sauerstoff, Schwefel oder eine gegebenenfalls mit R1 substituierte Iminogruppe, η die Zahlen O oder 1, wobei X zusammen mit R1 oder R1 zusammen mit R2 oder R1 zusammen mit R3 einen gegebenenfalls substituierten Ring bilden können.
2. Diagnostisches Mittel zur Bestimmung von Hydroperoxiden bzw. Substanzen, die unter Freisetzung von Hydroperoxid reagieren, enthaltend Peroxidase oder eine peroxidatisch wirksame Substanz und ein Chromogen, dadurch gekennzeichnet, daß als Chromogen Substanzen der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1 enthalten sind.
3. Diagnostisches Mittel zur Bestimmung von Hämoglobin oder anderen peroxidatisch wirksamen Substanzen, enthaltend ein Hydroperoxid oder Hydroperoxid bildende Substanzen und ein Chromogen, dadurch gekennzeichnet, daß als Chromogen Substanzen der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1 enthalten sind.
55
60 Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung von Hydroperoxiden, bzw. von Substanzen, die unter Freisetzung von Hydroperoxid reagieren, sowie von Peroxidase bzw. peroxidatisch wirksamen Substanzen mit Hilfe eines Chromogens unter Verwendung der Reaktion der Hydroperoxide mit Peroxidase bzw. den peroxidatisch wirksamen Substanzen durch Auswertung der Verfärbung. Die Erfindung betrifft ferner diagnostische Mittel zur Durchführung derartiger Verfahren.
Von besonderem diagnostischem Interesse ist der Nachweis von Glukose im Harn, Blut und Serum bei Diabetes sowie der Nachweis von peroxidatisch wirkenden Substanzen, wie Hämoglobin im Harn und Blut, und der Nachweis von Hydroperoxiden z. B. in der Milchwirtschaft, Kosmetik und Polymerchemie.
Es sind eine Reihe von Verbindungen bekannt, die von Wasserstoffperoxid und Peroxidase als Katalysator zu einem Farbstoff oxidiert werden (vgl. schweizerische Patentschrift 339 755 und britische Patentschrift 1035 911). Die Substanzen, die bevorzugt verwendet werden, sind z. B.: Benzidin, o-Dianisidin, o-Tolidin, Guajakol usw. Diese Verbindungen sind aber teilweise nicht sehr stabil und können nach den neuesten Erkenntnissen gesundheitsschädlich sein, so daß ihre Handhabung nicht ungefährlich erscheint. Der Erfindung liegt deshalb die Aufgabe zugrunde, Substanzen zu finden, die als Chromogene für ein Verfahren der obengenannten Art geeignet und zugleich stabil und unschädlich sind.
Es wurde überraschenderweise eine Substanzgruppe gefunden, die zum Teil bessere Indikatoreigenschaften als die bisher verwendeten Benzidinkörper zeigt, aber dabei absolut beständig ist und sich demzufolge besonders gut dazu eignet, Wasserstoffperoxid und andere Hydroperoxide sowohl im optischen Test als auch mit Hilfe von Reagenzpapieren zu bestimmen. Die Substanzen sind physiologisch unschädlich und besitzen die allgemeine Formel I
45
R1-C-(N)n-N=C
X R,
in welcher bedeutet R1 eine Aminogruppe, gegebenenfalls ein- oder mehrfach substituierte aliphatische, aromatische oder heterocyclische Reste, oder die Gruppe
R2 Wasserstoff, gegebenenfalls ein- oder mehrfach
substituierte aliphatische, aromatische oder heterocyclische Reste, R3 Wasserstoff, eine Alkyl- oder gegebenenfalls ein-oder mehrfach substituierte Phenylgruppe, R4 eine Amino-, Hydroxy- oder Alkoxygruppe, R5 und R6 Wasserstoff, Amino-, Hydroxy-, Alkoxy- oder Alkylgruppen, X Sauerstoff, Schwefel oder eine gegebenenfalls mit R1 substituierte Iminogruppe, η die Zahlen 0 oder 1, wobei X zusammen mit R1 oder R1 zusammen mit R2 oder R1 zusammen mit R3 einen gegebenenfalls substituierten Ring bilden können.
Die erfindungsgemäße Aufgabe wird somit dadurch gelöst, daß man in einem Verfahren der eingangs genannten Art als Chromogene Substanzen der allgemeinen Formel I verwendet. Die Bestimmung von Hydroperoxiden nach dem erfindungsgemäßen Verfahren ist für gekoppelte und ungekoppelte Enzymreaktionen geeignet, wie z. B. für die Bestimmung von Glukose, Galaktose, Aminosäuren, Harnsäure, Peroxiden, Hämoglobin, Peroxidase oder anderen peroxidatisch wirksamen Substanzen sowie Enzymaktivitäten.
Bei der Bestimmung von Glukose beispielsweise wird diese von Glukoseoxidase zu Glukonsäure oxidiert, wobei der Luftsauerstoff zu Wasserstoffperoxid reduziert wird. Das Wasserstoffperoxid oxidiert dann mittels Peroxidase oder einer peroxidatisch wirksamen Substanz den erfindungsgemäß verwendeten Indikator zum entsprechenden Farbstoff. Weitere Beispiele für derartige analytisch brauchbare Enzymsysteme, die unter Freisetzung von Wasserstoffperoxid reagieren, sind L-Aminosäureoxidase + L-Aminosäuren, D-Aminosäureoxidase + D-Aminosäuren, Uricase + Harnsäure, Xanthinoxidase + Hypoxanthin bzw. Xanthin, Glycinoxidase + Glycin, Monoaminooxidase + Monoamin (wie Adrenalin, Mescalin usw.), Diaminoxidase + Diamine (wie Histamin), Luciferase + Luciferin, D-Asparaginsäureoxidase + D-Asparaginsäure, Leber-Aldehydoxidase + Aldehyd, Galaktoseoxidase + Galaktose, Edsons Flavinenzym + Milchsäure.
Die Auswertung der Verfärbung erfolgt beispielsweise durch optische Ausmessung im Spektralphotometer oder bei Verwendung von Testpapierstreifen durch Vergleich der Farbstärke mit Blindproben bekannter Zusammensetzung bzw. Farbtafeln.
Das erfindungsgemäße Verfahren und zu seiner Durchführung geeignete diagnostische Mittel werden an Hand der folgenden Beispiele näher erläutert.
50
Beispiel 3
Nachweis von Peroxiden in Flüssigkeiten Beispiel 2
Nachweis von Glukose im Harn
7,5 mg Peroxidase und 143 mg Glukoseoxidase werden in 100 ml eines 0,1-m Citrat- oder Phosphatpuffers vom pH 5,6 gelöst. Mit dieser Lösung imprägniert man Filterpapier (2316 der Firma Schleicher & Schüll). Danach werden 0,30 g 2,3-Dihydroxybenzal-(vanilloyl)-hydrazon in 100 ml Alkohol gelöst und das Filterpapier noch einmal imprägniert. Beim Eintauchen in glukosehaltigen Harn zeigt das Papier ab etwa 50mg-% eine Rosafärbung, die je nach Intensität den Glukosegehalt angibt.
Beispiel 3
Nachweis von Glukose im Blut
7,5 mg Peroxidase, 143 mg Glukoseoxidase und 200 mg alginsaures Natrium werden in 100 ml 0,4-m Citrat- oder Phosphatpuffer von pH 5,6 gelöst. Mit dieser Lösung wird ein Filterpapier (23 S der Firma Schleicher & Schüll) imprägniert. In einem zweiten Imprägniervorgang wird dasselbe Papier mit einer Lösung von 0,316 g o-Vanillin-(vanilloyl)-hydrazon in 100 ml Alkohol getränkt. Danach wird das Papier in einem dritten Imprägniervorgang mit einer Lösung von 3 g Paraffin in 100 ml Petroläther imprägniert. Bringt man auf ein so hergestelltes Papier einen Tropfen Blut mit 50mg-% Glukose, läßt 1 Minute einwirken und wäscht das Blut mit Wasser ab, so zeigt das Papier eine deutlich violette Färbung. Die Farbintensität hängt von der Glukosekonzentration im Blut ab.
Beispiel 4
Nachweis von Glukose in Flüssigkeiten
Es werden Tabletten folgender Zusammensetzung gepreßt:
o-Vanillin-(vanilloyl)-hydrazon 0,002 g
Peroxidase 0,001 g
Glucoseoxidase 0,002 g
sek. Natriumphosphat 0,0069 g
prim. Natriumphosphat 0,013 g
Eine solche Tablette wird in 5 ml Alkohol/Wasser (1:1) gelöst, mit 0,2 ml der zu messenden Glukoselösung versetzt, mit Alkohol auf 10 ml aufgefüllt und bei einer Wellenlänge von 520 nm colorimetrisch gemessen. Aus der gemessenen Extinktion wird der Glukosegehalt auf Grund einer Eichkurve ermittelt.
7,5 mg Peroxidase werden in 100 m! eines 0,1-m Citrat- oder Phosphatpuffers von pH 5,6 gelöst und damit ein Filterpapier (2316 der Firma Schleicher & Schüll) imprägniert. Danach werden 0,31 g o-Vanil!in-(o-vanilloyl)-hydrazon in 100 ml Alkohol gelöst und das Filterpapier nochmals imprägniert.
Beim Eintauchen in Lösungen von Wasser-Stoffperoxid verschiedener Konzentrationen werden die Papiere, entsprechend der Konzentration, verschieden stark violett gefärbt.
Beispiel 5
Nachweis von Glukose mit weiteren Indikatoren
Je 1 mMol der in nachstehender Tabelle aufgeführten Indikatoren wird in 1 ml Methanol gelöst bzw. suspendiert, mit ! ml einer Lösung von 143 mg Glukoseoxidase, 7,5 mg Peroxidase in 100 ml Phosphat- oder Citratpuffer (pH 5,6) sowie 1 ml einer Glukoselösung versetzt. Man erhält die in der Tabelle angeführten Farbreaktionen:
R4
R1-C-(N)n-N=C R6
X R2 R3
Substanz
Nr.
R4
Farbe des Reaktionsproduktes
5a
OH
OCH,
OH
OCH,
OH
OCH,
OH
OCH3
OH
OCH3
OCH,
OH
CH
O=K
OH
OCH,
OH
OCH3
OH
OC2H5
OH
OH
OH
OH
OCH,
OH
Braun
Violett
Braun
Gelblichbraun
Rotviolett
Rotbraun
Fortsetzung
Substanz
Nr.
Farbe des Reaktionsproduktes
10
11
12
12a
OH
OCH,
OH
OCH,
OH
OCH,
OH
OCH,
OH
OCH,
OH
OCH3
OCH3
OH
N /
OH
OH OCH3
OH
CH3
NH2
CH,
OH
OCH,
NH2
OH OCH3
OH 0CH3
Rotviolett
Grau
Braunviolett
Braunviolett
Blauviolett
Braun
Violett
Rotbraun
409 521/153
Fortsetzung
Substanz Nr.
η 1 X R2 R3
1 O H H
1 O H H
1 O H H
1 O H H
1 O H H
1 O H H
1 O H H
1 O H H
O H H
Farbe des Reaktionsproduktes
12b
CH,
NO,
OH
OH
OH
NH,-
OCH3 OH
ν/
CH=N- NH-C-0
OH
OCH3
OH
OCH,
OH
OCH,
OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH
OCH3
OH
OCH3
OH
Blauviolett
Rosa
Rosa
Rosa
Rosa
Blaßviolett
Rotviolett
Orange
Gelblichrot
11
Fortsetzung
Substanz Nr.
η X R2 R3
1 O H H
1 O H H
1 O H H
1 S H H
1 O H CH3
1 NH H H
1 O H H
1 O H H
0 O ■I- H
Farbe des Reaktionsproduktes
22
24
25
26 27 28 29
OCH3 OH
CH3-
CH3
CH3-N-CH2-CH,
NH,-
NH,-
NH,-
CH,
OH
Or
OH
NH-,
OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH
NH2
OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH
Himbeerfarben
Blauviolett
Violett
Blauviolett
Braun
Dunkelkarmin
Rosa
Blau
Weinrot
13
Fortsetzung
14
Substanz Nr.
.R4
Farbe des Reaktionsproduktes
33 34
36
38 39
40
41
CH3
OH
CH3
H7N-CH2-
CH,
CH,
CH2-
ι—CH,-
OCH3
HO-/Λ
NH,
C—
OH
OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH
Rosa
Orange
Rosa
Purpur
Dunkelrot
Blau
Graubraun
Rotviolett
Violett
15
Fortsetzung
Substanz Nr.
R,
Farbe des Realctionsproduktes
42
43
44
45
46
47
48
49
OH
OH
OH
OCH3
OCH,
OH
OH
OCH3 OCH3
OH OH I OH
<f N-CH,
C2H5-O-C-
OCH, OCH,
OCH, OH OCH3 OH
OCH3 OH
OCH, OH
OCH,
OH
OCH,
OH
OCH,
OH
Graubraun
Violett
Violett
Rot
Rotviolett
Braun
Weinrot
Orange
409 521/153
17
Fortsetzung
18
Substanz Nr.
Farbe des Reaktionsproduktes
50
Il
H,N— C-
CH = N-NH-C=O OH (CHOH)2-
OCH,
OCH,
OH
OCH,
OH
Purpur
Rot
Substanz Ri — C- -(N)
Nr. Il I
χ R,
Farbe des Reaktionsproduktes
30
N-
O O
HN
O^
-N-
CH,
Ν—Ν
OH
J=N
V1/
CH,
-N—
OCH3 OH
OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH OCH3
OH
Violett
Lila
Blau
Blau
Violett
Fortsetzung
Substanz
Nr.
R2
Farbe des
Reaktionsproduktes
54
55
Ν—Ν
N-
56
OCH,
OH
OCH1
OH
OCH,
OH
Hellblau
Hellblau
Hellblau
Beispiel 6
Nachweis von Blut im Urin
Ein Filterpapier (2316 der Firma Schleicher & Schüll) wird mit einer Lösung von 0,316 g o-Vanillin-(vanilloyl)-hydrazon in 100 ml Methanol imprägniert.
500 ml Akazien pflanzenschleim, der durch Kochen von 200 g Akazien in 500 ml Wasser hergestellt wurde, und 25 ml Cumolhydroperoxid werden zusammengegeben und 5 Minuten im Mixer heftig gerührt. Weiter werden in 1,51 Wasser 163 g Natriumeitrat und 37 g Zitronensäure gelöst. In dem auf diese Weise erhaltenen Citratpuffer werden 3,5 g Gelatine gelöst, worauf man die obengenannte Lösung zugibt. Die vereinigten Lösungen vermischt man mit 5 ml einer l%igen wäßrigen Emulsion einer peroxidhaltigen Stärke und — nachdem wieder gut durchgemischt wurde — mit 50 ml Natriumlaurylsulfat und rührt 5 Minuten weiter. Die so erhaltene Emulsion wird dann 5 Minuten in einen Homogenisator mit 100 kg/cm2 Druck gegeben. Zu der homogenisierten Mischung gibt man 250 ml des wie oben hergestellten Citratpuffers. Die mit dem Indikator imprägnierten Papiere werden in die erhaltene Emulsion getaucht und 16 Stunden bei 5Ö°C in einem Umlufttrockenschrank getrocknet. Die so erhaltenen Testpapiere ergeben beim Eintauchen in einen bluthaltigen Urin eine violette Farbreaktion.

Claims (1)

Patentansprüche:
1. Verfahren zur Bestimmung von Hydroperoxiden bzw. von Substanzen, die unter Freisetzung von Hydroperoxid reagieren, sowie von Peroxidase bzw. peroxidatisch wirksamen Substanzen mit. Hilfe eines Chromogens unter Verwendung der Reaktion der Hydroperoxide mit Peroxidase bzw. den peroxidatisch wirksamen Substanzen durch Auswertung der Verfärbung, dadurch gekennzeichnet, daß man als Chromogene Substanzen der allgemeinen Formel I
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Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR204182A1 (es) * 1973-12-20 1975-11-28 Boehringer Mannheim Gmbh Tira de ensayo para la comprobacion de substancias de actividad peroxidica en los liquidos del cuerpo
CS175782B1 (de) * 1974-10-16 1977-05-31
US3998969A (en) * 1975-05-07 1976-12-21 The Upjohn Company Formamidine insecticides
US4203921A (en) * 1978-10-30 1980-05-20 Technicon Instruments Corporation Stabilized reagents
JPS56500521A (de) * 1979-04-16 1981-04-23
US4334017A (en) * 1979-04-16 1982-06-08 Massachusetts Institute Of Technology Method for detecting cancer in mammalian tissue
US4282169A (en) * 1980-02-19 1981-08-04 Olin Corporation Selected 2-acyl- or 2-thioacyl-1-trichloroacetimidoylhydrazines and their use as fungicides
JPS5829297B2 (ja) * 1981-08-14 1983-06-22 北興化学工業株式会社 ベンゾイルヒドラゾン誘導体および殺虫剤
US4956300A (en) * 1982-01-05 1990-09-11 Helena Laboratories Corporation Aid for determining the presence of occult blood, method of making the aid, and method of using the aid
US4521511A (en) * 1982-09-22 1985-06-04 Enzyme Technology Company Catalyzed colorimetric and fluorometric substrates for peroxidase enzyme determinations
US5702913A (en) * 1983-12-21 1997-12-30 Helena Laboratories Corporation Chromgen-reagent test system
US5273888A (en) * 1984-01-16 1993-12-28 Helena Laboratories Corporation Chemical test kit and method for determining the presence of blood in a specimen and for verifying the effectiveness of the chemicals
US4770748A (en) * 1987-02-24 1988-09-13 Roncell, Inc. Vacuum distillation system
US4897485A (en) * 1987-03-18 1990-01-30 Ciba-Geigy Corporation Insecticidal pyrid-3-yl-2,3-diaza-butadien-1-yl-disulfies
US5081040A (en) * 1987-06-29 1992-01-14 Helena Laboratories Corporation Composition and kit for testing for occult blood in human and animal excretions, fluids, or tissue matrixes
US4895798A (en) * 1987-11-13 1990-01-23 Miles, Inc. Test devices for determination of occult blood
US4994238A (en) * 1988-06-09 1991-02-19 Daffern George M Constant volume chemical analysis test device
US5217874A (en) * 1989-04-04 1993-06-08 Helena Laboratories Corporation Fecal occult blood test product with positive and negative controls
US5196167A (en) * 1989-04-04 1993-03-23 Helena Laboratories Corporation Fecal occult blood test product with positive and negative controls
US5543298A (en) * 1991-11-29 1996-08-06 Oxis International S.A. Method for assaying the sod activity by using a self-oxidizable compound necessary for its implementation, self-oxidizable compounds and preparation thereof
AUPQ262499A0 (en) * 1999-09-02 1999-09-23 University Of Queensland, The Novel iron chelators
US9034593B2 (en) 2010-11-22 2015-05-19 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Vaginal indicator to detect biomarkers of good health
JP7162830B2 (ja) * 2018-04-24 2022-10-31 国立大学法人信州大学 グリシンオキシダーゼを用いた物質検出方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3233974A (en) * 1961-08-28 1966-02-08 Miles Lab Diagnostic compositions
US3290228A (en) * 1964-07-29 1966-12-06 Miles Lab Test composition and device for detecting glucose

Also Published As

Publication number Publication date
DE1773839A1 (de) 1971-11-25
FI49882B (de) 1975-06-30
NL163022B (nl) 1980-02-15
US3558435A (en) 1971-01-26
AT288603B (de) 1971-03-10
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FI48782C (fi) 1974-12-10
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CH500488A (de) 1970-12-15
DE1773899A1 (de) 1971-11-25
NL6711965A (de) 1968-03-04
DE1598133C3 (de) 1975-01-09
FI48782B (de) 1974-09-02
DE1598133A1 (de) 1970-05-21
FR2014605A1 (de) 1970-04-17
GB1131560A (en) 1968-10-23
GB1215778A (en) 1970-12-16

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