DE19502912A1 - G-Cap Stabilisierte Oligonucleotide - Google Patents

G-Cap Stabilisierte Oligonucleotide

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DE19502912A1
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Description

Antisense Oligonucleotide (AO), Tripel Helix Bildende Oligonucleotide (TFO) und sense Oligonucleotide erwiesen sich als spezifische Inhibitoren der Genexpression in einer Vielzahl von Systemen, sowohl in vitro als auch in vivo [Uhlmann & Peyman, Chem. Rev. 1990, 90, 543; Milligan et al., J. Med. Chem. 1993, 36, 1923; Stein & Cheng, Science 1993, 261, 1004; Bielinski et al., Science 1990, 250, 997].
Eines der Hauptprobleme bei der Verwendung natürlich vorkommender Phosphodiester (PO) Oligonucleotide ist deren rascher Abbau durch verschiedene nucleolytische Aktivitäten sowohl in Zellen, wie auch im Zellkultur- Medium. Zur Stabilisierung von Oligonucleotiden wurden verschiedene chemische Modifikationen eingesetzt. Eine Übersicht über den Stand der Technik geben beispielsweise Uhlmann & Peyman, supra und P.D. Cook [Antisense Research and Applications, Crooke und Lebleu, Eds., Chapter 9, S. 149ff, CRC Press Boca Raton 1993]. Die Stabilisierung gegen nucleolytischen Abbau kann durch die Modifikation oder Ersatz der Phosphatbrücke, des Zuckerbausteins, der Nucleobase oder durch Ersatz des Zucker-Phosphat-Rückgrats der Oligonucleotide erfolgen. Da die Phosphatbrücke das Zentrum des nucleolytischen Angriffs ist, wurden insbesondere zahlreiche Modifikationen der Internucleosidbrücke beschrieben. Die am häufigsten verwendeten nucleaseresistenten Internucleosidbrücken sind Phosphorothioat- (PS), Methylphosphonat- (MeP) und Phosphorothioat- (PA) Brücken. Eine weitere Möglichkeit der Stabilisierung sind "hairpin" oder "self-stabilized" Oligonucleotide wie sie z. B. bei Tang et al. [Nucl. Acids Res. 21 : 2729, 1993] beschrieben werden.
Ein weiteres Problem der Antisense Technologie ist die oft unzureichende Zellpenetration der Oligonucleotide. Zur Verbesserung wurden auch hier zahlreiche chemische Modifikationen eingesetzt. Eine Übersicht über den Stand der Technik geben Uhlmann & Peyman, supra und P.D. Cook, supra. Diese Modifikationen beinhalten u. a. lipophile Konjugat-Gruppen am 5′- oder 3′-Ende der Oligonucleotide und neutrale oder ionische "backbone"-Modifikationen sowie 2′-Modifikationen am Pentofuranosylring. Hughes [Antisense Research and Development 4 : 211, 1994] zeigen, daß die Zell-Aufnahme von einem 10-meren Homo-G Phosphorothioat etwa um den Faktor 2 höher ist als die Zell-Aufnahme der 10-meren Homo-Oligomeren Phosphorothioate von T, A, oder C.
Blackburne [Nature 350 : 569, 1991] beschreibt Strukturen, die von G-reichen Oligonucleotiden eingenommen werden können. G-reiche Oligonucleotide mit mindestens vier kurzen Abschnitten mit G-Resten sind in der Lage, in Gegenwart von Na⁺ oder K⁺ kompakte intramolekulare Strukturen zu bilden, die als stabilisierendes Element sogenannte G-Quartette enthalten, dies sind vier in einer Ebene über Hoogsten Basenpaarung verknüpfte Guanin-Reste. Mehrere solche Elemente sind übereinander angeordnet. Oft sind Oligonucleotide zu kurz, um solche intramolekularen Strukturen auszubilden. In solchen Fällen können G- Quartett Strukturen durch Assoziation zweier Oligonucleotide gebildet werden.
Es wurde nun gefunden, daß es eine sehr einfache Möglichkeit gibt, unmodifizierte oder modifizierte (Art der Modifikation siehe ab Seite 4) Oligonukleotide hinsichtlich ihrer Nuclease-Resistenz und Zellpenetration deutlich zu verbessern nämlich durch Verlängerung der Oligonucleotide am 3′- und/oder 5′-Ende um ein bis 10 Guanine, so daß die Wirksamkeit erheblich verbessert wird.
Überraschenderweise zeigen auch die erfindungsgemäßen Oligonucleotide eine Tendenz zur Assoziation bzw. Aggregation. Möglicherweise bilden auch sie G-Quartett Strukturen durch Assoziation zweier oder mehrerer Oligonucleotide. Solche Strukturen würden gegen Exonuclease Abbau schützen und zu einer erhöhten Aufnahme in die Zelle führen. Da die assoziierten Strukturen immer auch im Gleichgewicht mit den "freien", Oligonucleotiden stehen, stünde auch immer genügend "freies" Oligonucleotid zur Translations- bzw. Transkriptionskontrolle zur Verfügung.
Gegenstand der Erfindung sind Oligonucleotide der Formel
5′-(CAP)-(Oligo)-(CAP)-3′
wobei Oligo beispielsweise für
und CAP für Gm steht, wobei m eine ganze Zahl von null bis zehn, bevorzugt von zwei bis sechs, besonders bevorzugt von drei bis fünf und ganz besonders bevorzugt vier bedeutet und wobei beide im Molekül vorkommenden CAP′s unabhängig voneinander definiert sein können und im Falle, wenn m am 5′- oder 3′-Ende gleich null ist und das Ende der "Oligo"-Sequenz von keinem Guanin gebildet wird, verschieden sein müssen.
In den Fällen, in denen das Oligonucleotid (Oligo) am 5′- bzw. 3′-Ende mit einem oder mehreren Guaninen endet, kann es vorteilhaft sein, wenn CAP für G(m-n) steht, wobei m wie oben definiert ist und n die Zahl der natürlicherweise am 5′- oder 3′-Ende des Oligonucleotids (Oligo) vorkommenden Guanine bedeutet und wobei (m-n) bevorzugt für zwei bis sechs, besonders bevorzugt für drei bis fünf, ganz besonders bevorzugt für vier steht.
Die so abgewandelten Oligonucleotide können unmodifiziert oder modifiziert sein, wobei folgende Varianten zugelassen sein sollen:
  • a) Vollständiger oder teilweiser Ersatz der 3′- und/oder der 5′-Phosphorsäurediesterbrücken, beispielsweise durch eine Phosphorothioat-, Phoshorodithioat-, (NR¹R²)-Phosphoramidat-, Boranophosphat-, Phosphat- (C₁-C₂₁)-O-Alkylester, Phosphat-[(C₆-C₁₂)Aryl-(C₁-C₂₁-O-Alkyl]ester, 2,2,2-Trichlorodimethylethylphosphonat-, (C₁-C₈)Alkylphosphonat-, (C₆-C₁₂)- Arylphosphonat-Brücke.
Bevorzugt ist der Ersatz durch eine Phosphorothioat-, Phoshorodithioat-, NR¹R²-Phosphoramidat-, Phosphat-O-Methylester-, Phosphat-O-ethylester-, Phosphat-O-isopropylester-, Methylphosphonat-, Phenylphosphonat-Brücke. Besonders bevorzugt ist der Ersatz durch eine Phosphorothioat-, Phoshorodithioat-, Methylphosphonat-Brücke. Ganz besonders bevorzugt ist der Ersatz durch eine Phosphorothioat-Brücke.
R¹ und R² stehen unabhängig voneinander für Wasserstoff oder für (C₁-C₁₈)- Alkyl, (C₆-C₂₀)-Aryl, (C₆-C₁₄)-Aryl-(C₁-C₈)-alkyl, -(CH₂)c -[NH(CH₂)c d-NR³R³ steht, worin c eine ganze Zahl von 2 bis 6 und d eine ganze Zahl von 0 bis 6 ist, und R³ unabhängig voneinander Wasserstoff, (C₁-C₆)-Alkyl oder (C₁-C₄)-Alkoxy- C₁-C₆-alkyl ist; bevorzugt steht R¹ und R² für Wasserstoff, (C₁-C₈)-Alkyl oder Methoxyethyl, besonders bevorzugt für Wasserstoff, (C₁-C₄)-Alkyl oder Methoxyethyl. R¹ und R² können auch zusammen mit dem sie tragenden Stickstoffatom einen 5-6-gliedrigen heterocyclischen Ring bilden, der zusätzlich ein weiteres Heteroatom aus der Reihe O, S, N enthalten kann.
Vorzugsweise sollen ein, zwei oder drei Phosphorsäurediesterbrücken am 5′-Ende und/oder am 3′-Ende ersetzt werden, bevorzugt am 5′- und am 3′-Ende. Bevorzugt soll auch der Ersatz der Phosphorsäurediesterbrücken an den Pyrimidin-Positionen erfolgen.
  • b) Vollständiger oder teilweiser Ersatz der 3′- oder 5′-Phosphorsäurediesterbrücken durch "Dephospho"-Brücken [s. z. B. Uhlmann und Peyman in "Methods in Molecular Biology", Vol. 20: "Protocols for Oligonucleotides and Analogs", S. Agrawal, Ed., Humana Press, Totowa 1993, Chapter 16, 355ff], beispielsweise durch Formacetal, 3′-Thioformacetal, Methylhydroxylamin, Oxim, Methylendimethylhydrazo, Dimethylensulfon, Silylgruppen.
Bevorzugt ist der Ersatz durch Formacetale und 3′-Thioformacetale.
Vorzugsweise sollen ein, zwei oder drei Phosphorsäurediesterbrücken am 5′-Ende und/oder am 3′-Ende ersetzt werden, bevorzugt am 5′- und am 3′-Ende. Bevorzugt soll auch der Ersatz der Phosphorsäurediesterbrücken an den Pyrimidin-Positionen erfolgen.
  • c) Vollständiger oder teilweiser Ersatz des Zuckerphosphat-Rückgrats, beispielsweise durch "Morpholinonucleosid"-Oligomere [E. P. Stirchak et al., Nucleic Acids Res. 17 : 6129, 1989] oder "Peptide Nucleic Acids" (PNA′s) [P. E. Nielsen et all, Bioconl. Chem. 5 : 3, 1994], oder auch PNA/DNA-Hydride, wie in der deutschen Patentanmeldung P 44 08 528.1 beschrieben.
  • d) Vollständiger oder teilweiser Ersatz der β-D-2′-Desoxyriboseeinheiten, beispielsweise durch α-D-2′-Desoxyribose, L-2′-Desoxyribose, 2′-F-2′- Desoxyribose, 2′-O-(C₁-C₆)Alkyl-Ribose, 2′-O-(C₂-C₆)Alkenyl-Ribose, 2′-NH₂- 2′-desoxyribose, β-D-Xylofuranose, α-Arabinofuranose, 2,4-Dideoxy-β-D- erythro-hexo-pyranose, und carbocyclische [z. B. Froehler, J.Am.Chem.Soc. 114 : 8320, 1992] und offenkettige Zuckeranaloga [z. B. Vandendriessche et al., Tetrahedron 49 : 7223, 1993], Bicyclo-Zuckeranaloga [z. B. M. Tarkov et al., Helv. Chim. Acta 76 : 481, 1993].
Bevorzugt ist der Ersatz durch 2′-F-2′-Desoxyribose, 2′-O-(C₁-C₆)Alkyl-Ribose, 2′-O-(C₂-C₆)Alkenyl-Ribose, 2′-NH₂-2′-desoxyribose.
Besonders bevorzugt ist der Ersatz durch 2′-F-2′-Desoxyribose, 2′-O-(C₁- C₄)Alkyl-Ribose, 2′-O-(C₂-C₄)Alkenyl-Ribose, 2′-NH₂-2′-desoxyribose.
Ganz besonders bevorzugt ist der Ersatz durch 2′-O-Methyl-, 2′-O-Allyl-, 2′-O-Butylribose.
Vorzugsweise sollen ein, zwei oder drei Riboseeinheiten am 5′-Ende und/oder am 3′-Ende ersetzt werden, bevorzugt am 5′- und am 3′-Ende. Bevorzugt soll auch der Ersatz der Riboseeinheiten an den Pyrimidin-Positionen erfolgen.
  • e) Vollständiger oder teilweiser Ersatz der natürlichen Nucleosid-Basen, beispielsweise durch 5-(Hydroxymethyl)uracil, 5-Aminouracil, Pseudouracil, Dihydrouracil, 5-(C₁-C₆)-Alkyl-uracil, 5-(C₂-C₆)-Alkenyl-uracil, 5-(C₂-C₆)-Alkinyl­ uracil, 5-(C₁-C₆)-Alkyl-cytosin, 5-(C₂-C₆)-Alkenyl-cytosin, 5-(C₂-C₆)-Alkinyl­ cytosin, 5-Fluoruracil, 5-Fluorcytosin, 5-Chloruracil, 5-Chlorcytosin, 5-Bromuracil, 5-Bromcytosin, 7-Deaza-7-substituierte Purine. Bevorzugt ist der Ersatz durch 5-(C₁-C₆)-Alkyl-uracil, 5-(C₂-C₆)-Alkenyl-uracil, 5-(C₂-C₆)-Alkinyl-uracil, 5-(C₁-C₆)-Alkyl-cytosin, 5-(C₂-C₆)-Alkenyl-cytosin, 5-(C₂-C₆)-Alkinyl-cytosin, 5-Fluoruracil, 5-Fluorcytosin, 5-Chloruracil, 5-Chlorcytosin, 5-Bromuracil, 5-Bromcytosin, 7-Deaza-7-Alkinyl, bevorzugt hexinyl-substituierte Purine, 7-Deaza-7-Methyl-substituierte Purine, 7-Deaza-7- brom subsitituierte Purine.
Besonders bevorzugt ist der Ersatz durch 5-(C₃-C₆)-Alkyl-uracil, 5-(C₂-C₆)- Alkenyl-uracil, 5-(C₂-C₆)-Alkinyl-uracil, 5-(C₁-C₆)-Alkyl-cytosin, 5-(C₂-C₆)- Alkenyl-cytosin, 5-(C₂-C₆)-Alkinyl-cytosin. Ganz besonders bevorzugt ist der Ersatz durch 5-Hexinylcytosin, 5-Hexinyluracil, 5-Hexinylcytosin, 5-Propinyluracil, 5-Propinylcytosin. Der Ersatz der Nucleosid-Basen soll nicht in den CAP-Bereichen erfolgen.
Von den obengenannten Modifikationen sind vor allem die Modifikationen aus den Gruppen a), b), c) und d), vor allem aus den Gruppen a) und d), insbesondere aus der Gruppe a) bevorzugt.
Zusätzlich können die erfindungsgemäßen Oligonucleotide beispielsweise am 3′- oder 5′-Ende mit Molekülen verbunden (konjugiert) sein, welche die Eigenschaften von Antisense-Oligonucleotiden oder von Tripelhelix bildenden Oligonucleotiden (wie beispielsweise Zellpenetration, Nucleaseabbau, Affinität zur Target-RNA/DNA, Pharmakokinetik) günstig beeinflussen. Beispiele sind Konjugate mit Poly-Lysin, mit Interkalatoren wie Pyren, Acridin, Phenazin, Phenanthridin, mit fluoreszierenden Verbindungen wie Fluorescein, mit Cross- Linkern wie Psoralen, Azidoproflavin, mit lipophilen Molekülen wie (C₁₂-C₂₀)- Alkyl, mit Lipiden wie 1,2-di-hexadecyl-rac-glycerin, mit Steroiden wie Cholesterin oder Testosteron, mit Vitaminen wie Vitamin E, mit Poly- bzw. Oligo-ethylengylcol, mit (C₁₂-C₁₈)-Alkyl-Phosphatdiestern, mit -O-CH₂-CH(OH)-O-(C₁₂-C₁₈)-Alkyl. Bevorzugt sind Konjugate mit lipophilen Molekülen wie (C₁₂-C₂₀)-Alkyl, mit Steroiden wie Cholesterin oder Testosteron, mit Poly- oder Oligoethylenglykol, mit Vitamin E, mit Interkalatoren wie Pyren, mit (C₁₄-C₁₈)-Alkyl-Phosphatdiestern, mit -O-CH₂-CH(OH)-O-(C₁₂-C₁₆)-Alkyl. Die Darstellung solcher Oligonucleotid-Konjugate ist dem Fachmann bekannt (s. z. B. Uhlmann & Peyman, Chem. Rev. 90: 543,1990; M. Manoharan in "Antisense Research and Applications", Crooke and Lebleu, Eds., CRC Press, Boca Raton, 1993, Chapter 17, S. 303ff, EP 0552766A2).
Weiterhin können die erfindungsgemäßen Oligonucleotide am 3′ und/oder am 5′-Ende 3′-3′- und 5′-5′-Inversionen [beschrieben beispielsweise in M. Koga et al., J. Org. Chem. 56 : 3757, 1991] tragen.
Gegenstand der Erfindung sind weiterhin Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen nach dem Fachmann bekannten Verfahren, insbesondere die chemische Synthese, die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels sowie ein Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man die erfindungsgemäßen Oligonucleotide mit einem physiologisch annehmbaren Träger sowie gegebenenfalls geeigneten Zusatz- und/oder Hilfsstoffen vermischt.
Ganz generell erstreckt sich die vorliegende Erfindung auch auf die Verwendung von therapeutisch wirksamen Oligonucleotiden zur Herstellung eines Arzneimittels, bei denen mindestens ein nichtenständiges Pyrimidin-Nucleosid modifiziert ist. Als therapeutisch wirksame Oligonucleotide versteht man im allgemeinen Antisense Oligonucleotide, Tripelhelix-bildende-Oligonucleotide, Aptamere (RNA oder DNA-Moleküle die an spezifische Zielmoleküle, z. B. Proteine oder Rezeptoren, binden können (z. B. L.C. Bock et al., Nature 355: 564, 1992) oder Ribozyme (katalytische RNA, s. z. B. Castanetto et al., Critical Rev. Eukar. Gene Expr. 2 : 331, 1992), insbesondere Antisense-Oligonucleotide.
Darüberhinaus ist ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung die Verwendung von Oligonucleotiden mit mindestens einem nichtendständigen und modifizierten Pyrimidin-Nucleosid als Diagnostikum, beispielsweise zur Detektion der Präsenz oder Absenz oder der Menge eines spezifischen doppelsträngigen oder einzelsträngigen Nucleinsäuremoleküls in einer biologischen Probe.
Die Oligonucleotide haben für die erfindungsgemäße Verwendung eine Länge von ca. 6 bis 60, vorzugsweise von ca. 10 bis 40, insbesondere von ca. 12 bis 31 Nucleotiden. Ansonsten gelten auch hier die oben beschriebenen Vorzugsbereiche, Modifikationen bzw. Konjugationen.
Die Arzneimittel der vorliegenden Erfindung können beispielsweise zur Behandlung von Erkrankungen, die durch Viren hervorgerufen werden, beispielsweise durch HIV, HSV-1, HSV-2, Influenza, VSV, Hepatitis B oder Papilloma Viren, verwendet werden.
Erfindungsgemäße Antisense Oligonucleotide, die gegen solche Targets wirksam sind, sind beispielsweise:
  • a) gegen HIV, z. B.
  • b) gegen HSV-1, z. B.
Die hier angegebenen arabischen Zahlen beziehen sich auf die weiter vorne angegebenen ionischen Zahlen; die hier angegebenen Oligonucleotide sind zusätzlich mit den erfindungsgemäßen CAP′s versehen.
Die durch eine Phosphorothioatbrücke (P=S) ersetzten Phosphordiesterbindungen wurden in den Sequenzen mit einem Sternchen (*) markiert.
Die Arzneimittel der vorliegenden Erfindung eignen sich beispielsweise auch zur Behandlung von Krebs oder der Restenose. Beispielsweise können dabei Oligonucleotid-Sequenzen zum Einsatz kommen, die gegen Targets gerichtet sind, die für Krebsentstehung bzw. Krebswachstum verantwortlich sind. Solche Targets sind beispielsweise:
  • 1) Nucleare Onkoproteine wie beispielsweise c-myc, N-myc, c-myb, c-fos, c-fos/jun, PCNA, p120
  • 2) Cytoplasmische/Membran-assoziierte Onkoproteine wie beispielsweise EJ-ras, c-Ha-ras, N-ras, rrg, bcl-2, cdc-2, c-raf-1, c-mos, c-src, c-abl
  • 3) Zelluläre Rezeptoren wie beispielsweise EG F-Rezeptor, c-erbA, Retinoid- Rezeptoren, Protein-Kinase regulatorische Untereinheit, c-fms
  • 4) Cytokine, Wachstumsfaktoren, Extrazelluläre Matrix wie beispielsweise CSF- 1, IL-6, IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-4, bFGF, Myeloblastin, Fibronectin, VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor).
Erfindungsgemäße Antisense-Oligonucleotide, die gegen solche Targets wirksam sind, sind beispielsweise
  • a) gegen c-Ha-ras, z. B.
  • c) c-myc, z. B.
  • d) c-myb, z. B.
  • e) c-fos, z. B.
  • f) p120, z. B.
  • g) EGF-Rezeptor, z. B.
  • h) D53 Tumorsuppressor, z. B.
  • i) bFGF, z. B.
  • j) VEGF, z. B.
Die Arzneimittel der vorliegenden Erfindung eignen sich beispielsweise ferner zur Behandlung von Erkrankungen, die durch Integrine oder Zell-Zell- Adhäsionsrezeptoren beeinflußt werden, beispielsweise durch VLA-4, VLA-2, ICAM oder ELAM.
Erfindungsgemäße Antisense-Oligonucleotide, die gegen solche Targets wirksam sind, sind beispielsweise
  • a) VLA-4, z. B.
  • b) ICAM, z. B.
  • c) ELAM-1, z. B.
Die Arzneimittel der vorliegenden Erfindung eignen sich beispielsweise ferner zur Behandlung von Erkrankungen, die durch Faktoren wie TNF alpha ausgelöst werden.
Erfindungsgemäße Antisense-Oligonucleotide, die gegen solche Targets wirksam sind, sind beispielsweise
  • a) TNF-alpha, z. B.
Bezüglich der Numerierung der beispielhaften Oligonucleotide und dem Sternchen-Symbol gilbt obengesagtes. Die erfindungsgemäßen Oligonucleotide können auch zur Herstellung eines Diagnostikums wenigstens gegen alle genannten Krankheiten verwendet werden.
Die Arzneimittel können z. B. in Form von pharmazeutischen Präparaten, die man oral, z. B. in Form von Tabletten, Dragees, Hart- oder Weichgelatinekapseln, Lösungen, Emulsionen oder Suspensionen verabreichen kann, verwendet werden. Sie können auch rektal z. B. in Form von Suppositorien oder parenteral z. B. in Form von Injektionslösungen verabreicht werden. Für die Herstellung von pharmazeutischen Präparaten können diese Verbindungen in therapeutisch inerten organischen und anorganischen Trägern verarbeitet werden. Beispiele von solchen Trägern für Tabletten, Dragees und Hartgelatinekapseln sind Laktose, Maisstärke oder Derivate davon, Talg und Stearinsäure oder Salze davon. Geeignete Träger für die Herstellung von Lösungen sind Wasser, Polyole, Saccharose, Invertzucker und Glucose. Geeignete Träger für Injektionslösungen sind Wasser, Alkohole, Polyole, Glycerol und pflanzliche Öle. Geeignete Träger für Suppositorien sind pflanzliche und gehärtete Öle, Wachse, Fette und halbflüssige Polyole. Die pharmazeutischen Präparate können auch Konservierungsmittel, Lösemittel, Stabilisierungsmittel, Netzmittel, Emulgatoren, Süßstoffe, Farbstoffe, Geschmacksmittel, Salze zur Veränderung des osmotischen Drucks, Puffer, Überzugsmittel, Antioxidantien, sowie ggf. andere therapeutische Wirkstoffe enthalten.
Bevorzugt sind orale Verabreichung und Injektionen. Für die Injektion werden die Antisense-Oligonucleotide in einer flüssigen Lösung, vorzugsweise in einem physiologisch annehmbaren Puffer, wie z. B. Hank′s Lösung oder Ringer′s Lösung, formuliert. Die Antisense-Oligonucleotide können aber auch in fester Form formuliert werden und vor dem Gebrauch gelöst oder suspendiert werden.
Die für die systematische Verabreichung bevorzugten Dosierungen betragen ca. 0,01 mg/kg bis ca. 50 mg/kg Körpergewicht und Tag.
Die folgenden Beispiele sollen nun die Erfindung näher erläutern. Tabelle 1 zeigt Oligonucleotide, die auf ihre in vitro Aktivität gegen HSV-1 geprüft wurden. Das Oligonucleotid No. 4 ist wie bei Mann et al. (Bioconj. Chem. 3 : 554, 1 992) beschrieben durch die Einführung eines [4-(1-pyrenyl)butanyl]phosphodiesters am 5′-Ende modifiziert. Die erfindungsgemäßen Oligonucleotide wirken bereits bei einer minimalen Hemmkonzentration von 9 µM (Bspe. 1 und 4) oder sogar schon von 3 µM (Bspe. 2 und 3).
Beispiel 1 Oligonucleotidsynthese
Unmodifizierte Oligonucleotide wurden auf einem automatischen DNA Synthesizer (Applied Biosystems Model 380B oder 394) unter Anwendung der Standard Phosphoramidit-Chemie und Oxidation mit Jod synthetisiert. Zur Einführung von Phosphorthioat-Brücken in gemischten Phosphorothioaten und Phosphodiester Oligonucleotiden wurde anstelle von Jod mit TETD (Tetraethylthiuramdisulfid) oxidiert (Applied Biosystems User Bulletin 65). Nach Abspaltung vom festen Träger (CPG oder Tentagel) und Entfernung der Schutzgruppen mit konz. NH₃ bei 55°C während 18h, wurden die Oligonucleotide zunächst durch Butanol-Fällung (Sawadogo, Van Dyke, Nucl. Acids Res. 19 : 674, 1991 ) gereinigt. Anschließend wurde das Natriumsalz erhalten durch Ausfällung aus einer 0.5 M NaCl Lösung mit 2.5 Volumenteilen Ethanol.
Die Analyse der Oligonucleotide erfolgte durch
  • a) Analytische Gelelektrophorese in 20% Acrylamid, 8M Harnstoff, 45 mM Tris­ borat Puffer, pH 7.0 und/oder
  • b) HPLC-Analyse: Waters GenPak FAX, Gradient CH₃CN (400ml), H₂O (1 .6l), NaH₂PO₄ (3.1g), NaCl (11.7g), pH6.8 (0.1M an NaCl) nach CH₃CN (400ml), H₂O (1.6l), NaH₂PO₄ (3.1g), NaCl (175.3g), pH6.8 (1.5M an NaCl) und/oder
  • c) Kapillargelelektrophorese Beckmann Kapillare eCAPTM, U100P Gel Column, 65 cm length, 100 mm I.D., window 15 cm from one end, Puffer 140 pM Tris, 360mM Borsäure, 7M Harnstoff und/oder
  • d) Elektrospray Massenspektroskopie
a
Die Analyse der Oligonucleotide ergab, daß diese jeweils in einer Reinheit von größer als 90% vorlagen.
Beispiel 2 Untersuchung der antiviralen Aktivität von Prüfsubstanzen gegen Herpesviren in vitro
Die antivirale Aktivität der Prüfsubstanzen gegen verschiedene humanpathogene Herpesviren wird im Zellkulturtestsystem untersucht.
Für den Versuch werden Affennierenzellen (Vero, 2×10⁵/ml) in serumhaltigem Dulbecco′s MEM (5% Fötales Kälberserum (FCS)) in 96-Napf-Mikrotiterplatten ausgesät und 24 h bei 37°C und 5% CO₂ inkubiert. Das serumhaltige Medium wird dann abgesaugt und die Zellen werden zweimal mit serumfreiem Dulbecco′s MEM überspült.
Die Testsubstanzen werden in H₂O auf eine Konzentration von 600 µM vorverdünnt und bei -18°C aufbewahrt. Für den Test erfolgen weitere Verdünnungsschritte in Dulbecco′s Minimal Essential Medium (MEM). Je 100 µl der einzelnen Prüfsubstanzverdünnungen werden zusammen mit 100 µl serumfreiem Dulbecco′s MEM (-FCS) zu den gespülten Zellen gegeben.
Nach 3 h Inkubation bei 37°C und 5% CO₂ werden die Zellen mit Herpes Simplex Virus Typ 1 (ATCC VR733, HSV-1 F-strain) oder mit Herpes Simplex Virus Typ 2 (ATCC VR734, HSV-2 G-Strain) infiziert in Konzentrationen, bei denen der Zellrasen innerhalb von 3 Tagen vollkommen zerstört wird. Bei HSV-1 beträgt die Infektionsstärke 500 Plaque-bildende Einheiten (PFU) pro Napf, bei HSV-2 350 PFU/Napf. Die Versuchsansätze enthalten dann Prüfsubstanz in Konzentrationen von 80 µM bis 0,04 µM in MEM, ergänzt durch 100 U/ml Penicillin G und 100 mg/l Streptomycin. Alle Versuche werden als Doppelbestimmung durchgeführt mit Ausnahme der Kontrollen, die achtfach je Platte durchgeführt werden.
Die Versuchsansätze werden 17 h bei 37°C und 5% CO₂ inkubiert. Die Cytotoxizität der Prüfsubstanzen wird nach 20 h Gesamtinkubationszeit durch mikroskopische Begutachtung der Zellkulturen bestimmt. Als Dosis tolerata maxima (DTM) wird die höchste Präparatkonzentration bezeichnet, die unter den genannten Versuchsbedingungen noch keine mikroskopisch erkennbaren Zellschädigungen hervorruft.
Es erfolgt daraufhin die Zugabe von FCS auf eine Endkonzentration von 4% mit weiterer Inkubation für 55 h bei 37°C und 5% CO₂. Die unbehandelten Infektionskontrollen zeigen dann einen kompletten cytopathischen Effekt (CPE). Nach mikroskopischer Begutachtung der Zellkulturen werden diese dann mit Neutralrot entsprechend dem Vitalfärbungsverfahren nach Finter (1966) angefärbt. Die antivirale Aktivität einer Testsubstanz wird definiert als minimale Hemmkonzentration (MHK), die benötigt wird, um 30-60% der Zellen vor dem virusbedingten cytopathogenen Effekt zu schützen.
Tabelle 1: Aktivität von verschieden modifizierten Antisense-Oligonucleotiden gegen HSV-1 in Zellkultur. Die durch eine Phosphorothioatbrücke (P=S) ersetzte Phosphodiesterbindungen wurden in der Sequenz mit * markiert; HMK = minimale Hemmkonzentration; DTM = Dosis tolerata maxima; Py = Pyren.
Tabelle 1

Claims (17)

1.) Oligonucleotide der Formel 5′-(CAP)-(Oligo)-(CAP)-3′wobei (Oligo) für eine Nucleotidsequenz der Länge 10 bis 40 Nucleotide steht und CAP für Gm steht, wobei m eine ganze Zahl von null bis zehn, bevorzugt von zwei bis sechs, besonders bevorzugt von drei bis fünf und ganz besonders bevorzugt vier bedeutet und wobei beide im Molekül vorkommenden CAP′s unabhängig voneinander definiert sein können und im Falle, wenn m am 5′- oder 3′-Ende gleich null ist und das Ende der "Oligo"-Sequenz von keinem Guanin gebildet wird, verschieden sein müssen.
2.) Oligonucleotide nach Anspruch 1, wobei die Nucleotidsequenz des "(Oligo)"-Anteils aus solchen Bereichen von Genen stammt, die für die Transkription der DNA oder die Translation der korrespondierenden mRNA bedeutsam sind.
3.) Oligonucleotide nach den Ansprüchen 1 und 2, wobei (Oligo) für
4.) Oligonucleotide nach den Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie die Sequenzen C*A*GGAGGAT*GC*T*GAGGA*G*G, bevorzugt G*G*G*CAGGAGGAT*GC*T*GAGGAGG*G*G*G, PY-G*G*G*GGAGGAT*GC*TGAGG*G*G*G, und besonders bevorzugt G*G*G*GGAGGAT*GC*T*GAGGAGG*G*G*G und G*G*G*GGAGGAT*GC*TGAGG*G*G*G haben.
5.) Oligonucleotide nach den Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Oligonucleotide modifiziert sind.
6.) Oligonucleotide nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß 2 bis 10 nichtendständige Pyrimidin-Nucleoside modifiziert sind.
7.) Oligonucleotide nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Oligonucleotide am 5′-endständigen und/oder am 3′-entständigen Nucleotid modifiziert sind.
8.) Oligonucleotide nach einem der Ansprüche 5 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß ein oder mehrere Gruppen von mindestens 1 bis 4 miteinander verbundenen Nukleotiden nicht modifiziert sind.
9.) Oligonucleotide nach einem der Ansprüche 5 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß die Modifikation definiert ist als
  • (a) vollständiger oder teilweiser Ersatz der 3′- und/oder 5′-Phosphorsäurediesterbrücken und/oder
  • (b) vollständiger oder teilweiser Ersatz der 3′- oder 5′-Phosphorsäurediesterbrücken durch "Dephospho"-Brücken und/oder
  • (c) vollständiger oder teilweiser Ersatz des Zuckerphosphat-Rückgrats und/oder
  • (d) vollständiger oder teilweiser Ersatz der β-D-2′-Desoxyriboseeinheiten und/oder
  • (e) vollständiger oder teilweiser Ersatz der natürlichen Nucleosid-Basen.
10.) Oligonucleotide nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß die Modifikation definiert ist als
  • (a) eine Phosphorothioat-, Phoshorodithioat-, (NR¹R²)-Phosphoramidat-, Boranophosphat-, Phosphat-(C₁-C₂₁)-O-Alkylester, Phosphat- [(C₆-C₁₂)Aryl-(C₁-C₂₁)-O-Alkyl]ester, 2,2,2-Trichlorodimethylethylphosphonat-, (C₁-C₈)Alkylphosphonat-, (C₆-C₁₂)-Arylphosphonat-Brücke, bevorzugt eine Phosphorothioat-, Phoshorodithioat-, (NR¹R²)-Phosphoramidat-, Phosphat-O-Methylester-, Phosphat-O-ethylester-, Phosphat-O-isopropylester-, Methylphosphonat-, Phenylphosphonat-Brücke, besonders bevorzugt eine Phosphorothionat-, Phosphorodithioat-, Methylphosphonat-Brücke und ganz besonders bevorzugt eine Phosphorothioat-Brücke,
    wobei
    R¹ und R² unabhängig voneinander für Wasserstoff oder für (C₁-C₁₈)- Alkyl, (C₆-C₂₀)-Aryl, (C₆-C₁₄)-Aryl-(C₁-C₈)-alkyl, -(CH₂)c-[NH(CH₂)c]d- NR³R³ steht, worin c eine ganze Zahl von 2 bis 6 und d eine ganze Zahl von 0 bis 6 ist, und R³ unabhängig voneinander Wasserstoff, (C₁-C₆)- Alkyl oder (C₁-C₄)-Alkoxy-C₁-C₆-alkyl ist; bevorzugt steht R¹ und R² für Wasserstoff, (C₁-C₈)-Alkyl oder Methoxyethyl, besonders bevorzugt für Wasserstoff, (C₁-C₄)-Alkyl oder Methoxyethyl stehen oder R¹ und R² zusammen mit dem sie tragenden Stickstoffatom einen 5-6-gliedrigen heterocyclischen Ring bilden, der zusätzlich ein weiteres Heteroatom aus der Reihe O, S, N enthalten kann;
  • (b) Formacetal, 3′-Thioformacetal, Methylhydroxylamin, Oxim, Methylendimethylhydrazo, Dimethylensulfon oder Silylgruppen, bevorzugt Formacetale und 3′-Thioformacetale;
    wobei vorzugsweise ein, zwei oder drei Phosphorsäurediesterbrücken am 5′-Ende und/oder am 3′-Ende ersetzt werden, bevorzugt am 5′- und am 3′-Ende, vorzugsweise der Ersatz der Phosphorsäurediesterbrücken an den Pyrimidin-Positionen erfolgen soll;
  • (c) "Morpholinonucleotid"-Oligomer;
  • (d) α-D-2′-Desoxyribose, L-2′-Desoxyribose, 2′-F-2′-Desoxyribose, 2′-O-(C₁-C₆)Alkyl-Ribose, 2′-O-(C₂-C₆)Alkenyl-Ribose, 2′-NH₂-2′- desoxyribose, β-D-Xylofuranose, α-Arabinofuranose, 2,4-Dideoxy-β-D- erythro-hexo-pyranose, carbocyclische, offenkettige oder Bicyclo- Zuckeranaloga, vorzugsweise als 2′-F-2′-Desoxyribose, 2′-O- (C₁-C₆)Alkyl-Ribose, 2′-O-(C₂-C₆)Alkenyl-Ribose, 2⁹-NH₂-2¹- desoxyribose, besonders bevorzugt als 2′-F-2′-Desoxyribose, 2′-O- (C₁-C₄)Alkyl-Ribose, 2′-O-(C₂-C₄)Alkenyl-Ribose, 2′-NH₂-2′- desoxyribose, ganz besonders bevorzugt als 2′-O-Methyl-, 2′-O-Allyl-, 2′-O-Butylribose,
    wobei vorzugsweise ein, zwei oder drei Riboseeinheiten am 5′-Ende und/oder am 3′-Ende ersetzt werden, bevorzugt am 5′- und am 3′-Ende, vorzugsweise der Ersatz der Riboseeinheiten an den Pyrimidin-Positionen erfolgen soll;
  • (e) 5-(Hydroxymethyl)uracil, 5-Aminouracil, Pseudouracil, Dihydrouracil, 5-(C₁-C₆)-Alkyl-uracil, 5-(C₂-C₆)-Alkenyl-uracil, 5-(C₂-C₆)-Alkinyl-uracil, 5-(C₁-C₆)-Alkyl-cytosin, 5-(C₂-C₆)-Alkenyl-cytosin, 5-(C₂-C₆)-Alkinyl­ cytosin, 5-Fluoruracil, 5-Fluorcytosin, 5-Chloruracil, 5-Chlorcytosin, 5-Bromuracil, 5-Bromcytosin, bevorzugt als 5-(C₁-C₆)-Alkyl-uracil, 5-(C₂-C₆)-Alkenyl-uracil, 5-(C₂-C₆)-Alkinyl-uracil, 5-(C₁-C₆)-Alkyl-cytosin, 5-(C₂-C₆)-Alkenyl-cytosin, 5-(C₂-C₆)-Alkinyl-cytosin, 5-Fluoruracil, 5-Fluorcytosin, 5-Chloruracil, 5-Chlorcytosin, 5-Bromuracil, 5- Bromcytosin, besonders bevorzugt als 5-(C₃-C₆)-Alkyl-uracil, 5-(C₂-C₆)- Alkenyl-uracil, 5-(C₂-C₆)-Alkinyl-uracil, 5-(C₁-C₆)-Alkyl-cytosin, 5-(C₂-C₆)- Alkenyl-cytosin, 5-(C₂-C₆)-Alkinyl-cytosin, ganz besonders bevorzugt als 5-Pentinylcytosin, 5-Hexinyluracil, 5-Hexinylcytosin,
    wobei der Ersatz der Nucleosid-Basen nicht in den CAP-Bereichen erfolgen soll,
wobei von den obengenannten Modifikationen vor allem die Modifikationen aus den Gruppen a), b), c) und d), vor allem aus den Gruppen a) und d), insbesondere aus der Gruppe a) bevorzugt sind.
11.) Oligonucleotide nach einem der Ansprüche 1 bis 10, dadurch gekennzeichnet, daß sie am 5′- und/oder am 3′-Ende mit Molekülen ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Poly-Lysin, Interkalatoren wie Pyren, Acridin, Phenazin, Phenanthridin, fluoreszierenden Verbindungen wie Fluorescein, Cross- Linkern wie Psoralen, Azidoproflavin, lipophilen Molekülen wie (C₁₂-C₂₀)-Alkyl, Lipiden wie 1,2-di-hexadecyl-rac-glycerin, Steroiden wie Cholesterin oder Testosteron, Vitaminen wie Vitamin E und Poly- bzw. Oligoethylenglycol, (C₁₂-C₁₈)-Alkyl-Phosphatdiestern, -O-CH₂-CH(OH)-O-(C₁₂-C₁₈)-Alkyl, bevorzugt aus lipophilen Molekülen wie (C₁₂-C₂₀)-Alkyl und Steroiden wie Cholesterin oder Testosteron, Poly- oder Oligoethylenglykol, Vitamin E, Interkalatoren wie Pyren und (C₁₄-C₁₈)-Alkyl-Phosphatdiestern und -O-CH₂-CH(OH)-O-(C₁₂-C₁₆)-Alkyl verbunden sind.
12.) Oligonucleotide nach einem der Ansprüche 1 bis 1 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie am 5′- und/oder ein 3′-Ende 3′-3′- und/oder 5′-5′- Inversionen enthalten.
13.) Verfahren zur Herstellung der Oligonucleotide gemäß einem der Ansprüche 1 bis 12, dadurch gekennzeichnet, daß sie chemisch synthetisiert werden.
14.) Arzneimittel enthaltend ein oder mehrere Oligonucleotide gemäß einem der Ansprüche 1 bis 12 und einen physiologisch annehmbaren Träger sowie gegebenenfalls geeignete Zusatz- und/oder Hilfsstoffe.
15.) Verwendung der Oligonucleotide gemäß einem der Ansprüche 1 bis 12 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Erkrankungen, die durch Viren hervorgerufen werden, zur Behandlung von Krebs, Restenose oder von Erkrankungen, die durch Integrine oder Zell-Zell-Adhäsionsrezeptoren beeinflußt werden oder die durch diffusible Faktoren wie TNF alpha ausgelöst werden.
16.) Verwendung der Oligonucleotide gemäß einem der Ansprüche 1 bis 12 zur Herstellung eines Diagnostikums für Erkrankungen, die durch Viren hervorgerufen werden, für Krebs, Restenose oder für Erkrankungen, die durch Integrine oder Zell-Zell-Adhäsionsrezeptoren beeinflußt werden oder durch diffusible Faktoren wie TNF alpha ausgelöst werden.
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997039120A2 (en) * 1996-04-17 1997-10-23 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibitors of vascular endothelial growth factor (vefg/vpf) expression
WO1999025819A2 (de) * 1997-11-15 1999-05-27 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Antisense oligonukleotide gegen tenascin zur behandlung von vitiligo
EP0978561A1 (de) * 1998-08-07 2000-02-09 Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH Antisense Oligonukleotide zur Hemmung von VEGF-Expression
EP0979869A1 (de) * 1998-08-07 2000-02-16 Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH Kurze Oligonukleotide zur Hemmung von VEGF-Expression

Families Citing this family (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0642712U (ja) * 1992-11-16 1994-06-07 三笠産業株式会社 容器の中蓋
US6323185B1 (en) * 1993-04-23 2001-11-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Anti-viral guanosine-rich oligonucleotides and method of treating HIV
US6727230B1 (en) * 1994-03-25 2004-04-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US20030026782A1 (en) * 1995-02-07 2003-02-06 Arthur M. Krieg Immunomodulatory oligonucleotides
DE19502912A1 (de) * 1995-01-31 1996-08-01 Hoechst Ag G-Cap Stabilisierte Oligonucleotide
US6776986B1 (en) 1996-06-06 2004-08-17 Novartis Ag Inhibition of HIV-1 replication by antisense RNA expression
US9096636B2 (en) 1996-06-06 2015-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation
US7812149B2 (en) 1996-06-06 2010-10-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
PL334197A1 (en) * 1996-12-27 2000-02-14 Icn Pharmaceuticals Oligonucleotidic aptamers of high g content and methods of modulating immunilogical response
WO1998037914A1 (fr) * 1997-02-26 1998-09-03 Toray Industries, Inc. Remedes contre l'hepatite
US20030022854A1 (en) 1998-06-25 2003-01-30 Dow Steven W. Vaccines using nucleic acid-lipid complexes
AU778057B2 (en) * 1999-01-29 2004-11-11 Avi Biopharma, Inc. Non-invasive method for detecting target RNA
US7084125B2 (en) * 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
US8114850B2 (en) * 1999-04-08 2012-02-14 Advanced Cancer Therapeutics, Llc Antiproliferative activity of G-rich oligonucleotides and method of using same to bind to nucleolin
US20080318890A1 (en) * 1999-04-08 2008-12-25 Antisoma Research Limited Antiproliferative activity of G-rich oligonucleotides and method of using same to bind to nucleolin
US20080318889A1 (en) * 1999-04-08 2008-12-25 Antisoma Research Limited Antiproliferative activity of G-rich oligonucleotides and method of using same to bind to nucleolin
AU775412B2 (en) 1999-04-08 2004-07-29 Advanced Cancer Therapeutics, Inc. Antiproliferative activity of G-rich oligonucleotides and method of using same to bind to nucleolin
US7960540B2 (en) * 1999-04-08 2011-06-14 Advanced Cancer Therapeutics, Llc Antiproliferative activity of G-rich oligonucleotides and method of using same to bind to nucleolin
DE19935302A1 (de) * 1999-07-28 2001-02-08 Aventis Pharma Gmbh Konjugate und Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung zum Transport von Molekülen über biologische Membranen
DE19935303A1 (de) 1999-07-28 2001-02-08 Aventis Pharma Gmbh Oligonukleotide zur Inhibierung der Expression von humanem eg5
US6949520B1 (en) * 1999-09-27 2005-09-27 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon
US7585847B2 (en) * 2000-02-03 2009-09-08 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory nucleic acids for the treatment of asthma and allergy
WO2002022809A2 (en) * 2000-09-15 2002-03-21 Coley Pharmaceutical Gmbh PROCESS FOR HIGH THROUGHPUT SCREENING OF CpG-BASED IMMUNO-AGONIST/ANTAGONIST
EP1333811A4 (de) * 2000-10-16 2004-03-03 Neopharm Inc Liposomale mitoxantron-formulierung
ATE398175T1 (de) * 2000-12-08 2008-07-15 Coley Pharmaceuticals Gmbh Cpg-artige nukleinsäuren und verfahren zu ihrer verwendung
US6818787B2 (en) * 2001-06-11 2004-11-16 Xenoport, Inc. Prodrugs of GABA analogs, compositions and uses thereof
DE10226702A1 (de) * 2002-06-14 2004-09-09 Grünenthal GmbH Antisense Oligonukleotide gegen PIM1
AR040996A1 (es) * 2002-08-19 2005-04-27 Coley Pharm Group Inc Acidos nucleicos inmunoestimuladores
BR0314236A (pt) * 2002-09-13 2005-08-09 Replicor Inc Formulação de oligonucleotìdeo, composição farmacêutica, kit, composto antiviral, preparação de oligonucleotìdeo e métodos para seleção de um oligonucleotìdeo antiviral para uso como um agente antiviral, para profilaxia ou tratamento de uma infecção viral em um paciente, para tratamento profilático de câncer causado por oncovìrus, para identificação de um composto que altera a ligação de um oligonucleotìdeo a pelo menos um componente viral, para purificação da ligação de oligonucleotìdeos a pelo menos um componente viral e para enriquecimento de oligonucleotìdeos a partir de um agrupamento de oligonucleotìdeos
US20050196382A1 (en) * 2002-09-13 2005-09-08 Replicor, Inc. Antiviral oligonucleotides targeting viral families
EP1549614A4 (de) 2002-10-03 2008-04-16 Targegen Inc Vaskulostatische mittel und verfahren zu deren anwendung
US20050282814A1 (en) * 2002-10-03 2005-12-22 Targegen, Inc. Vasculostatic agents and methods of use thereof
WO2004044138A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation
CA2504929C (en) 2002-11-05 2014-07-22 Charles Allerson Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation
CA2505090A1 (en) * 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated oligomeric compounds and their use in gene modulation
US7956043B2 (en) 2002-12-11 2011-06-07 Coley Pharmaceutical Group, Inc. 5′ CpG nucleic acids and methods of use
US20040235770A1 (en) * 2003-04-02 2004-11-25 Coley Pharmaceutical Group, Ltd. Immunostimulatory nucleic acid oil-in-water formulations and related methods of use
WO2005030259A2 (en) 2003-09-25 2005-04-07 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid-lipophilic conjugates
US7480382B2 (en) * 2003-09-30 2009-01-20 Microsoft Corporation Image file container
US8569474B2 (en) 2004-03-09 2013-10-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand
EP1809614B1 (de) 2004-04-08 2014-05-07 TargeGen, Inc. Benzotriazin-kinasehemmer
US8394947B2 (en) 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
NZ588896A (en) 2004-08-25 2012-05-25 Targegen Inc Heterocyclic compounds and methods of use
WO2006119619A1 (en) * 2005-05-06 2006-11-16 Replicor Inc. Oligonucleotides inhibiting cell proliferation
BRPI0606172A2 (pt) * 2005-06-08 2009-06-02 Targegen Inc métodos e composições para o tratamento de distúrbios oculares
US8604042B2 (en) * 2005-11-01 2013-12-10 Targegen, Inc. Bi-aryl meta-pyrimidine inhibitors of kinases
RU2448959C2 (ru) * 2005-11-01 2012-04-27 Таргеджен, Инк. Би-арил-мета-пиримидиновые ингибиторы киназы
US8133900B2 (en) * 2005-11-01 2012-03-13 Targegen, Inc. Use of bi-aryl meta-pyrimidine inhibitors of kinases
WO2007058323A1 (ja) * 2005-11-17 2007-05-24 Napa Jenomics Co., Ltd. 核酸ホモポリマー結合機能性核酸医薬品の製造法
JPWO2007058323A1 (ja) * 2005-11-17 2009-05-07 Ｎａｐａ Ｊｅｎｏｍｉｃｓ 株式会社 核酸ホモポリマー結合機能性核酸医薬品の製造法
EP1976567B1 (de) * 2005-12-28 2020-05-13 The Scripps Research Institute Natürliche antisense- und nicht-kodierende rna-transkripte als arzneitargets
WO2007127366A2 (en) * 2006-04-25 2007-11-08 Targegen, Inc. Kinase inhibitors and methods of use thereof
MX2009003398A (es) 2006-09-27 2009-08-12 Coley Pharm Gmbh Analogos de oligonucleotidos cpg que contienen analogos t hidrofobos con actividad inmunoestimuladora mejorada.
US20090131351A1 (en) * 2007-11-16 2009-05-21 Antisoma Research Limited Methods, compositions, and kits for modulating tumor cell proliferation
MX339820B (es) * 2008-10-03 2016-06-13 Curna Inc Compuestos oligonucleottidos designados para inhibir el transcrito antisentido natrual apra apolipoproteina-a1.
RU2746478C2 (ru) 2008-12-04 2021-04-14 КьюРНА, Инк. Лечение связанных с геном-супрессором опухолей заболеваний посредством ингибирования природного транскрипта в антисмысловой ориентации относительно этого гена
KR101829469B1 (ko) * 2008-12-04 2018-03-30 큐알엔에이, 인크. Ｅｐｏ에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의해 에리트로포에틴(ｅｐｏ) 관련된 질환의 치료
JP5971948B2 (ja) * 2008-12-04 2016-08-17 クルナ・インコーポレーテッド Ｖｅｇｆに対する天然アンチセンス転写物の抑制による血管内皮増殖因子（ｖｅｇｆ）関連疾患の治療
KR101682735B1 (ko) 2009-02-12 2016-12-06 큐알엔에이, 인크. 뇌 유래된 신경영양성 인자 (ｂｄｎｆ)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 뇌 유래된 신경영양성 인자 (ｂｄｎｆ) 관련된 질환의 치료
ES2656290T3 (es) 2009-03-16 2018-02-26 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con el factor nuclear (derivado de eritroide 2) similar al 2 (NRF2) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a NRF2
EP2408920B1 (de) 2009-03-17 2017-03-08 CuRNA, Inc. Behandlung von erkrankungen im zusammenhang mit dem delta-like-1-homolog (dlk1) mittels hemmung des natürlichen antisense-transkripts gegen dlk1
WO2010129746A2 (en) 2009-05-06 2010-11-11 Curna, Inc. Treatment of tristetraproline (ttp) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ttp
JP5883782B2 (ja) 2009-05-06 2016-03-15 クルナ・インコーポレーテッド 脂質輸送代謝遺伝子に対する天然アンチセンス転写物の抑制による脂質輸送代謝遺伝子関連疾患の治療
KR101742334B1 (ko) 2009-05-08 2017-06-01 큐알엔에이, 인크. Ｄｍｄ 패밀리에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 디스트로핀 패밀리 관련된 질환의 치료
DK2432881T3 (en) 2009-05-18 2018-02-26 Curna Inc TREATMENT OF REPROGRAMMING FACTOR-RELATED DISEASES BY INHIBITING NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPTS TO A REPROGRAMMING FACTOR
KR101703695B1 (ko) 2009-05-22 2017-02-08 큐알엔에이, 인크. 전사 인자 ｅ3(ｔｆｅ3)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의해 ｔｆｅ3 및 인슐린 수용체 기질 2(ｉｒｓ2)의 치료
CN103221541B (zh) 2009-05-28 2017-03-01 库尔纳公司 通过抑制抗病毒基因的天然反义转录物来治疗抗病毒基因相关疾病
JP6128846B2 (ja) 2009-06-16 2017-05-17 クルナ・インコーポレーテッド パラオキソナーゼ（ｐｏｎ１）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるｐｏｎ１遺伝子関連疾患の治療
WO2010148050A2 (en) 2009-06-16 2010-12-23 Curna, Inc. Treatment of collagen gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a collagen gene
US8859515B2 (en) 2009-06-24 2014-10-14 Curna, Inc. Treatment of tumor necrosis factor receptor 2 (TNFR2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to TNFR2
EP2446037B1 (de) 2009-06-26 2016-04-20 CuRNA, Inc. Behandlung von krankheiten im zusammenhang mit dem down-syndrom-gen durch hemmung des natürlichen antisense-transkripts zu einem down-syndrom-gen
US20120252869A1 (en) 2009-07-24 2012-10-04 Opko Curna, Llc Treatment of sirtuin (sirt) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a sirtuin (sirt)
CA2769665A1 (en) 2009-08-05 2011-02-10 Opko Curna, Llc Treatment of insulin gene (ins) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an insulin gene (ins)
CN102625841A (zh) 2009-08-11 2012-08-01 欧科库尔纳有限责任公司 通过抑制脂连蛋白(adipoq)的天然反义转录物治疗脂连蛋白(adipoq)相关疾病
US8791087B2 (en) 2009-08-21 2014-07-29 Curna, Inc. Treatment of ‘C terminus of HSP70-interacting protein’ (CHIP)related diseases by inhibition of natural antisense transcript to CHIP
CN102482671B (zh) 2009-08-25 2017-12-01 库尔纳公司 通过抑制‘含有iq模体的gtp酶激活蛋白’(iqgap)的天然反义转录物而治疗iqgap相关疾病
ES2664591T3 (es) 2009-09-25 2018-04-20 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con la filagrina (flg) mediante la modulación de la expresión y actividad del gen FLG
WO2011084455A2 (en) 2009-12-16 2011-07-14 Opko Curna, Llc. Treatment of membrane bound transcription factor peptidase, site 1 (mbtps1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to mbtps1
KR101891352B1 (ko) 2009-12-23 2018-08-24 큐알엔에이, 인크. 간세포 성장 인자(ｈｇｆ)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 ｈｇｆ 관련 질환의 치료
RU2619185C2 (ru) 2009-12-23 2017-05-12 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с разобщающим белком 2 (ucp2), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к ucp2
JP5982288B2 (ja) 2009-12-29 2016-08-31 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド 腫瘍タンパク質６３（ｐ６３）に対する天然アンチセンス転写物の阻害による腫瘍タンパク質６３関連疾患の治療
EP2519633B1 (de) 2009-12-29 2017-10-25 CuRNA, Inc. Behandlung von erkrankungen im zusammenhang mit dem nuclear-respirator-faktor 1 (nrf1) mittels hemmung des natürlichen antisense-transkripts gegen nrf1
US20120289583A1 (en) 2009-12-31 2012-11-15 Curna, Inc. Treatment of insulin receptor substrate 2 (irs2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to irs2 and transcription factor e3 (tfe3)
NO2521784T3 (de) 2010-01-04 2018-05-05
EP2521785B1 (de) 2010-01-06 2022-03-09 CuRNA, Inc. Inhibition des natürlichen antisense-transkripts des pankreasentwicklungsgens zur verwendung in der behandlung von pankreatischen entwicklungsgenbezogenen krankheiten
ES2664866T3 (es) 2010-01-11 2018-04-23 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con la globulina fijadora de hormonas sexuales (shbg) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a shbg
CA2786568A1 (en) 2010-01-25 2011-07-28 Curna, Inc. Treatment of rnase h1 related diseases by inhibition of natural antisense transcript to rnase h1
JP5976548B2 (ja) 2010-02-22 2016-08-23 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド Ｐｙｃｒ１に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるピロリン−５−カルボン酸レダクターゼ１（ｐｙｃｒ１）関連疾患の治療
WO2011123745A2 (en) 2010-04-02 2011-10-06 Opko Curna Llc Treatment of colony-stimulating factor 3 (csf3) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to csf3
WO2011127337A2 (en) 2010-04-09 2011-10-13 Opko Curna Llc Treatment of fibroblast growth factor 21 (fgf21) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to fgf21
WO2011133871A2 (en) * 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5'-end derivatives
WO2011139387A1 (en) 2010-05-03 2011-11-10 Opko Curna, Llc Treatment of sirtuin (sirt) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a sirtuin (sirt)
TWI586356B (zh) 2010-05-14 2017-06-11 可娜公司 藉由抑制ｐａｒ４天然反股轉錄本治療ｐａｒ４相關疾病
RU2585229C2 (ru) 2010-05-26 2016-05-27 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с атональным гомологом 1 (атон1), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта гена атон1
RU2620978C2 (ru) 2010-05-26 2017-05-30 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с метионинсульфоксидредуктазой а (msra), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта гена msra
ES2863526T3 (es) 2010-06-23 2021-10-11 Curna Inc Tratamiento de enfermedades relacionadas con la subunidad alfa del canal de sodio (SCNA), controlado por voltaje, mediante inhibición de la transcripción antisentido natural a SCNA
RU2611190C2 (ru) 2010-07-14 2017-02-21 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с геном dlg, путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта гена dlg
ES2640755T3 (es) 2010-10-06 2017-11-06 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con la Sialidasa 4 (neu4) mediante inhibición del transcrito antisentido natural al gen neu4
WO2012054723A2 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Opko Curna Llc Treatment of alpha-l-iduronidase (idua) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to idua
AU2010363329A1 (en) 2010-11-07 2013-05-09 Targegen, Inc. Compositions and methods for treating myelofibrosis
US10000752B2 (en) 2010-11-18 2018-06-19 Curna, Inc. Antagonat compositions and methods of use
CA2818824A1 (en) 2010-11-23 2012-05-31 Joseph Collard Treatment of nanog related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nanog
ES2653247T3 (es) 2011-06-09 2018-02-06 Curna, Inc. Tratamiento de enfermedades relacionadas con la frataxina (FXN) mediante inhibición del transcrito antisentido natural al gen FXN
JP6125505B2 (ja) 2011-09-06 2017-05-10 カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド 小分子による電位開口型ナトリウムチャネル・アルファサブユニット関連疾患の治療
AU2012216792A1 (en) 2011-09-12 2013-03-28 International Aids Vaccine Initiative Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing HIV-1 proteins by broadly neutralizing antibodies
EP2586461A1 (de) 2011-10-27 2013-05-01 Christopher L. Parks Von einem eingehüllten Virus abgeleitete Virenpartikel
CA2867262C (en) 2012-03-15 2021-03-16 Curna, Inc. Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf
US9347065B2 (en) 2012-03-29 2016-05-24 International Aids Vaccine Initiative Methods to improve vector expression and genetic stability
WO2015012060A1 (ja) * 2013-07-23 2015-01-29 Ｎｅｃソリューションイノベータ株式会社 ターゲット分析用センサ、ターゲット分析用デバイス、および、これを用いたターゲットの分析方法
AU2016206475B2 (en) 2015-01-16 2021-11-04 City Of Hope Cell penetrating antibodies
US20170145394A1 (en) 2015-11-23 2017-05-25 The Regents Of The University Of California Tracking and manipulating cellular rna via nuclear delivery of crispr/cas9
US11453891B2 (en) 2017-05-10 2022-09-27 The Regents Of The University Of California Directed editing of cellular RNA via nuclear delivery of CRISPR/CAS9
US20220220473A1 (en) * 2019-04-16 2022-07-14 The Regents Of The University Of California Protein translational control

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4514577A (en) 1982-10-15 1985-04-30 Ethyl Corporation Chemical process for preparing di-ortho benzyl phenols
US5514577A (en) * 1990-02-26 1996-05-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide therapies for modulating the effects of herpes viruses
CA2102804A1 (en) * 1991-05-10 1992-11-11 Sudhir Agrawal 3'-end blocked oligonucleotides
WO1992020348A1 (en) * 1991-05-23 1992-11-26 Temple University - Of The Commonwealth System Of Higher Education Treatment of colorectal carcinoma with antisense oligonucleotides to c-myb proto-oncogene
KR930016437A (ko) * 1992-01-22 1993-08-26 귀틀라인, 슈미트 올리고뉴클레오티드 유사체, 이의 제조방법 및 용도
RU95104940A (ru) * 1992-07-27 1997-01-10 Хайбрайдон Способ введения в олигонуклеотид алкилфосфонотиоатной или арилфосфонотиоатной межнуклеотидной связи, способ получения олигонуклеотида, олигонуклеотиды, способ ингибирования генной экспрессии, способ лечения
DE4321946A1 (de) * 1993-07-01 1995-01-12 Hoechst Ag Methylphosphonsäureester, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
DE4408528A1 (de) * 1994-03-14 1995-09-28 Hoechst Ag Peptid-Oligonucleotid-Derivate, deren Herstellung und Verwendung
DE19502912A1 (de) * 1995-01-31 1996-08-01 Hoechst Ag G-Cap Stabilisierte Oligonucleotide

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997039120A2 (en) * 1996-04-17 1997-10-23 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibitors of vascular endothelial growth factor (vefg/vpf) expression
WO1997039120A3 (en) * 1996-04-17 1998-02-19 Aronex Pharmaceuticals Inc Antisense inhibitors of vascular endothelial growth factor (vefg/vpf) expression
WO1999025819A2 (de) * 1997-11-15 1999-05-27 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Antisense oligonukleotide gegen tenascin zur behandlung von vitiligo
WO1999025819A3 (de) * 1997-11-15 1999-09-10 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Antisense oligonukleotide gegen tenascin zur behandlung von vitiligo
EP0978561A1 (de) * 1998-08-07 2000-02-09 Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH Antisense Oligonukleotide zur Hemmung von VEGF-Expression
EP0979869A1 (de) * 1998-08-07 2000-02-16 Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH Kurze Oligonukleotide zur Hemmung von VEGF-Expression
WO2000008140A2 (en) * 1998-08-07 2000-02-17 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Antisense oligonucleotides for the inhibition of vegf expression
WO2000008141A2 (en) * 1998-08-07 2000-02-17 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Short oligonucleotides for the inhibition of vegf expression
WO2000008140A3 (en) * 1998-08-07 2000-05-18 Aventis Pharma Gmbh Antisense oligonucleotides for the inhibition of vegf expression
WO2000008141A3 (en) * 1998-08-07 2000-05-18 Aventis Pharma Gmbh Short oligonucleotides for the inhibition of vegf expression

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