DE2036114A1 - Tetramisolpraparate - Google Patents

Description

itramisolpräparate"

Priorität: 21. 7-1969 - Australien

Die Erfindung bezieht sich auf neue letramisolpräparate-Sie bezieht sich insbesondere auf Präparate, die für die Verabreichung durch Injektion an Warmblütler, wie z.B. Rinder, Schweine, Schafe oder Geflügel, geeignet sind. Aus der britischen Patentschrift 1 043 489 ist es bekannt, daß D,L-2,3,5,6-Tatrahydro-6~phenylimidazo-(2,1-b-)-thiazol (welches in der Folge als D,L-Tetramisol abgekürzt wird) und seine therapeutisch brauchbaren Säureadditionssalze wirksame Antihelmintica sind. In der genannten Patentschrift sind viele Säureadditionssalze von D,L-Tetramisol at^ezählt, die sich von den üblichen organischen und anorganischen Säuren ableiten. Es ist auch bekannt, daß linksdrehendes Tetramisol, welches in der Folge als L-Tetramisol bezeichnet wird, als Antihelminticum nahezu

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zweimal so aktiv wie D,L-Tetramisol ist, da3 heißt, daß

!-Tetramisol für nahezu die gesamte oder, den größten Teil

verantwortlich der antihelmintischen Wirkung |ist. Dies ist insbesondere bei Wiederkäuern, wie z.B. Schafe land Rinder, der Fall. In der deutschen Patentanmeldung P*1795217»9 ist ein Verfahren zur Herstellung von L-Tetramisol in hochreiner Form beschrieben. Da die bei Warmblütlera zulässige Menge an rechtsdrehenden Tetramisol (in der Folge als D-Tetramisol bezeichnet) nahezu gleich der zulässiges Menge an L-Tetra-' misol ist, machte es die Herstellung von reinem L-Tetramisol möglich, das Risiko von toxischen Reaktionen beim behandelten Tier beträchtlich zu verringern. Zwar besitzt das L,D-Tetramisol-Racemat bei den meisten Tierarten eine hohe Sicherheitsgrenze, aber die praktisch doppelte Sicherheitsgrenze des L-Isomers hat einen großen Wert wenn dieses L-Isomer draußen im Lande unter einer mehr oder weniger guten Kontrolle verabreicht wird, und zwar insbesondere unter den extremen Bedingungen der Schaf- und Rinderzucht im australischen Hinterland oder in den weiten Gebieten der USA, wo längere Dürreperioden die Widerstandsfähigkeit der einzelnen Tiere in unvorhersehbarer V/eise verringern können. Außerdem erleichtert die Herstellung von reinem L-Tetramisol die Verabreichung durch subcutane Injektion, da niedrigere Dosen erforderlich sind.

Zwar kann Tetramisol per os verabreicht werden, aber die Verabreichung durch Injektion wird bevorzugt. Rinder und insb. im Freien gezüchtete Rinder wiedersetzen sich einer Verabreichung von medizinischen Präparaten per os, weshalb komplizierte Gestelle und Geschirre erforderlich sind, um diese Verabreichung durchführen zu können. Die Verabreichung von medizinischen Präparaten an Rinder durch Injektion ist viel einfacher, erlaubt die Verabreichung an viel mehr Tiere je Zeiteinheit und beinhaltet weniger Risiko für Mensch und Tja:-. Auch bei Schafen, Schweinen und Geflügel wird zur Zeit die Injektion bevorzugt. Jedoch hat sich die Verabreichung

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von Totramisollösungen durch Injektion als nicht ganz zufriedenstellend erwiesen. Die.injizierte therapeutische Dosis ist dem Körpergewicht proportional und deshalb bei Bindern verhältnismäßig groß. Ein sehr kleiner Anteil der liere zeigt an der Injektionsstelle eine Empfindlichkeit und unter Umständen sogar unerwünschte paUfclogische Reaktionen, die von einer schwachen Reizung bis zur Bildung von Knoten reichen, welche einen Durchmesser? von eini£.eimm bis mehrere cm aufweisen können.

.'war 1st die statistische Häufigkeit dieser Erscheinung äußerst gering, aber trotzdem hat sie die Verabreichung durch Injektion an vielen Orten verhindert. Deshalb ist die Beseitigung M dieser Erscheinung nachwievor äußerst erwünscht. Die in vielen Ländern weit verbreitete Verabreichung von Tetramisol erfolgt nahesu ausschließlich in form seines Halogenid- und insbesondere Chloridsalzes in wässrigen Präparaten, wobei häufig kleine Zugaben eines Phosphat- oder Citratpuffers erfolien,und zwar gewöhnlich weniger als 0,03 Mol/l, um den pH etwas geringer zu halten als der normale pH des Hydrochlorids, der ungefähr 4- beträgt. Diese pH-Einstellung erfolgte nur au dem Zweck, die Lagerfähigkeit der Lösunpen zu erhöhen, da Tetramisol einer basisch katalysierten Hydrolyse in ein inaktives Derivat unterliegt.

Die pathologische Empfindlichkeit, die bei bestimmten Tieren Jj nach der Injektion des Hydrochloride beobachtet wurde, wurde bisher energischen Reaktionen gegen das organische Tetrainisolmolekül zugeschrieben, wie z.B. Reizwirkung oder Histaminabsonderung.

Aus diesem Grunde haben sich Überlegungen bezüglich der biologischen Verträglichkeit, insbesondere der Verträglichkeit bei Injektionen, bisher auf die Wirkung des Tetramisolmoleküls oder von Analogen desselben konzentriert.

Es wurde nunmehr gefunden, daß die Erfordernisse für die

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BAD ORIQiNAt

therapeutische Verträglichkeit von Tetrantisolsalzen für Injektionen sich von denjenigen für Verabreichung per- os unterscheiden. Insbesondere wurde festgestellt, daß das Anion des Tetramisolsalzes in der Lösung das lebende Gewebe in verschiedenem Ausmaß beeinflußt. Es wird angenommen, daß osmotische und elektroosmotische Effekte bei gewissen empfindlichen Tieren die Triebkraft für die Beschädigung in den Zellwandungen sind und daß diese durch die.Auswahl eines geeigneten Anions für das Tetramisolsalz beseitigt werden können.

Es wurde weiterhin gefunden, daß ein Haß für die therapeutische Verträglichkeit von Injektionen aus wässrigen Tetramisoladditionssalzlosungen durch einen einfachen Eämolysetest erhalten werden kann. Wenn eines der Tetramisolsalze, welches für subcutane Injektionen weniger geeignet ist, unter Standardbedingungen mit Rinderblut gemischt wird, dann erleidet ein Teil der roten Blutkörperchen eine Hä'jnolyse und das Blutserum verfärbt sich in einem Ausmaß, das vom Hämolyse· grad abhängt. Bei Salzen, die für Injektion geeignet sind, ist nur eine geringe oder gar keine solche Hämolyse au beobachten. Wenn die roten Blutkörperchen dann durch Zentrifugierung der Lösung abgetrennt werden, dann ist die verbleibende Farbe des Blutserums ein quantitatives Maß für die Hämolyse. Es ist nicht bekannt, ob in vivo eir.e gewisse Hämolyse im Gewebe des Tiers auftreten kann oder ob die Hämolyse, welche das Blut im in vitro-Test zeigt, bloß eine Erscheinung ist, die mit der Schädigung des Gewebes in vivo zusammenhängt, aber es wurde gefunden, daß der Grad der Hämolyse weitgehend mit dem Auftreten einer Empfindlichkeit gegen Injektionen bei solchen lebenden Tieren zusammenhängt, die eine Empfindlichkeit gegenüber Tetramisolhydrochloridinjektionen zeigen.

So wird also gemäß der Erfindung eine wässrige Lösung vorgeschlagen, die eine Me^ge Tetrami sol salz; enthält, welche mindestens 6 % (G/V) L-Tetramisolbasc entspricht,, -Wotei disse

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Lösung- wenn axe jilt Rind orb lut gemischt und dem vreiter unten be-sc'hi'Iebenen. Hämolysetest unterworfen wird» keine Hä~ moljBG 3 71 3i:.o.em Ausmaß zeigt, die über die Einstufung S des genannten Kaniolyse tests' hinausgeht.

Der Test wird tait einem jaeparinierten venösen Blut ausgeführt, das entweder von einseinen Tieren oder vorzugsweise von mehreren Tieren, die später injiziert werden sollen, stammt.

"Verfahren .

In eine Reihe von Sentrifugengläsehen mit einem Fassungsver- ' & mögen von mindestens 10 ml werden 2 ml der wässrigen Lösung des zu prüfenden Tetraniisolsalzes einpipettiert, vorauf rasch unter Rühren 4 ml eines ganzen heparlnierten venösen Bluts angesetzt werden und das Zantrifugengläschen 20 min in ein Wasserbad mit 38°C eingebracht wird. Hierauf wird unmittelbar mit mindestens der 1500-fachen Erdbeschleunigung zentrifugiert, um die roten Blutkörperchen abzuscheiden, worauf die Farbe des überstehenden Plasmas mit einer Seihe von Standards verglichen wird, die wie folgt hergestellt werden:

XÖsung^i

Es wird eine Menge Rinderserum (vorzugsweise aus dem gleichen

Blut) durch Zentrifugeenmg von nicht-hämolysiertem Blut wie H

oben beschrieben hergestellt.

Lösung 2

Es wird hämolysiertes BIub hergestellt, indem 4 Yolumiaa Blut mit 2 Volumina 15%ige (G/V) Tetramisolhydrochloridlösuns verdünnt werden und die Mischung 20 min auf 38°ö gehalten

Hierauf werden Standards durch Mischung der Lösungen 1 und 2 in den in .der-folge angegsbenen Verhältnissen hergestellt.

0 09886/2161 BAD ÖRIGUNAt

Hämolyseoinstufung

! Mischung

jmlTosung T~"

ml Lösung 2 "~1

brauchbar

nicht brauchbar

~_r-

10
9,95.

9,9 9,75

o 0,05

.0,1 0,25

9,0	1,0
7,5	2,5
6,0	4,C
4,5	5,5
3,0	7,0
1,5	8,5
0,5	9,5
0	10

Die Einstufung 0 wird gegeben, wenn überhaupt keine Hämolyse auftritt. Die Einstufung S zeigt einen vernach3~ässigbar-en Effekt an. Diese Einstufungen charakterisieren die erfindungsgemäßen Salze. Die Einstufungen von 1 bis 10 bezeichnen verschiedene Hämolysegrade bis zur vollständigen Hämolyse, Sie treten bei den bisher' verwendeten Salzen auf, die für Injektion weniger brauchbar sind.

Bisher hat die Reizwirkung von ü'etramisolsalzen, wie z,B. des weit verwendeten Tetramisolhydrochlorids, die Wirkstoffkonzentration, die mit der gewünschten hohen Sicherheitsgrenze injiziert werden konnte, beschränkt und Kompromisse zwischen dem injizierten Volumen und der verabreichten therapeutic sehen Dosis nötig gemacht. Bei einigen Vurmarte».» insbesondere in ihrem frühen Entwicklunggstadium, sind höhere Dosen erforderlich, um einen vollständigen Erfolg zu erzielen* Eine höhere Dosis kann natürlich durch ei» gröBerea Xn.iektionsvolumen oder durch eine höhere Konzentration ermöglicht werden.

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aber bei den bisher in der Praxis verwendeten Salzen wird das Gewebe an der Injektionsstelle bei beiden Alternativen einem höheren ochadigungsrisiko ausgesetzt.

JJs ist bemerkenswert, daß die Tetramisolsalze, die bisher nahezu ausschließlich sowohl für die orale Verabreichung als iiuch für die Injektion verwendet wurden, nämlich das Hydroc.hlorid und im geringeren Ausmaß das Acetat, für Injektionen viel v.eniger brauchbar sind als die erfindungsgemäßen Salze.

Es wurde gefunden, daß die Tetramisolsalze, welche den Hämolysetest zufriedenstellend bestehen, das heißt die Salze von Zitronensäure, Weinsäure und insbesondere Phosphorsäure, therapeutisch für Injektionen brauchbar sind. Besonders brauchbar 'ind günstig von allen bisher geprüften Sal sen ist das Phosphor säur esa Iz--, welches deshalb bevorzugt wird.

Demgemäß w5.rd eine wässrige Lösung eines Tetramisolcitrats, -tartrats oder phosphate vorgeschlagen, die eine Konzentration entsprechend mindestens 6% (G/V) Tetramisolbase besitzt. Bei mehrbasischen Säuren mit geeigneten Dissociationskonstanten sind Mono- und Ditetrasaiaolsalze brauchbar, aber einige der Ditetramisolsalze, wie z.B. Di?eträmisolphosphat, sind ziemlich alkalisch und würden zu wässrigen Präparaten führen, die einen pH von mehr als 5 aufweisen, das ißt ein pE, der über dem für die Lagerstabilität verträglichen Wert liegt, da Tetramisol bei pH-Werten von mehr als 5 hydrolytisch instabil ist, Infolge dessen ist der Zusatz von überschüssigen therapeutisch '2-ulässigen Anionen, beispielsweise Weinsäure oder Phosphorsäure, ratsam, wenn eine längere Lagerung bevorsteht. Demgemäß enthalten die am meisten bevorzugten wässrigen Präparate Tetramisoldihydrogenphosphat.

Es wurde weiterhin gefunden, daß die Löslichkeit von L-Tetralaisoldihydrogencitrat, -hydrogentartrat und insbesondere "dihydrogenphcsphat in Wasser äußerst hoch ist und daß die vorliegaf.dsn "biologischen 2rkenntnisse d:.e Ausnutzung dieser

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Erscheinung in einer neuartigen Weise erlauben. Insbesondere wurde gefunden, daß L-Tetramisoldihydrogenphosphat in überraschend hohen Konzentrationen löslich ist (mehr als 60 % (G/V) bei O⁰C). Eine Verringerung der Menge der injizierten Flüssigkeit verringert die Empfindlichkeit nur gering« Jedoch war bei den bisher bekannten Tetramisolsalzpräparaten eine bestimmte Zunahme der Häufigkeit von Reizungen bei einer Erhöhung der Konzentration des Salzes in den injizierbaren Lösungen zu beobachten. Die Tetramisoldihydrogenphosphatlösungen sind dagegen besonders bei höheren Konzentrationen brauchbar. Weiterhin bestehen Anzeichen, daß die konzentrierteren Phosphatsalalösungen vom Standpunkte der Hyperästhesie eine verbesserte therapeutische Verträglichkeit zeigen«.

Demgemäß werden therapeutisch verträgliche injizierbare wässrige Lösungen vorgeschlagen, dio L-Tetramisoldihydrogen~ phosphat in Konzentrationen von 12,5 % (G/V) bis zur Löslichkeit sgrenze bei der gewünschten Lagerungstemperatur enthalten. Es wurden Lösungen hergestellt und erfolgreich verabreicht, die bis zu und über 50 % (G/V) Tetramisoldihydrogenphosphat enthalten.

Da L-Tetramisol therapeutisch besser verträglich ist als das Racematund da eine konaentriertere Form des aktiven Bestandteils in kleineren Mengen injizierter Flüssigkeit verabreicht werden kann, basieren die bevorzugten Salze deshalb auf L-Tetramisol.

Es wurde weiterhin gefunden, daß irgendwelche restliche unerwünschte Hebeneffekte der Teträmisoladditionsaalae durch die Zugabe von wasserlöslichen und therapeutisch vertrag-13.ch.en Salzen, insbesondere von Natriumsalzen, nocii weiter verringert werden können, und daß die auf diese Weise hergestellen Lösungen therapeutisch noch vertraglicher sind, wenn sie in Tiere injiziert werden. Der Zusatz dieser Salze, insbesondere der Hatriumsalze, welcher dea Gegenstand einer Patentanmeldung vom gleichen Tage bildet, kann deshalb, wie es in dör Anmeldung beschrieben wird, dazu verwendet

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.-werden, die väi?.ig«r bevorzugten !Eetramisollösungen des Standes der Technik, ή±θ a«3. der-Setramisolliydrochlorid- oder Tetramiisolacetaüjösungen, verträglicher zu machen« Sie können auch dazu verwendet κ erden, eirciß .-weitere geringe aber /wertvolle Verbesserung der erfindungsgemäßen Tstramisolsalae, nämlich Tetrand solcitrat-,, 'Tetramisoltartrat und insbesondere Tetramiso lphosphat, zustande zu bringen. Geeignete Natriumsalze sind die Salze der Anionen, von denen gefunden wurde, daß sie in Tetramisolsalzezi therapeutisch verträglicher sind, nämlich Watriumcitrat, Hatriumtartrat und liatriumphosphat. Auch hier •werden die Hatriumphosphate stärker bevorzugt. Besonders bevorzugt wird iiatriumdihydrogenphosphat. Andere weniger günstige Salze sind die Magnesiumsalse und in den biologisch zulässigen Mengen die Kaliumsalze» Gemische der definierten M geeigneten Salze können ebenfalls verwendet werden. Gewöhnlich wird das Mononatriumsalz verwendet, obwohl vom Standpunkte der therapeutischen und biologischen Verträglichkeit die stärkex' alkalischen Salze nicht ausgeschlossen sind. Jedoch sind sie im Hinblick auf die Lagerungserfordernisse nicht praktisch, v;eil Tetramisol hydrolytisch instabil ist, wie dies oben erläutert wurde»

Dengemäß wird eine wässrige injizierbare Lösung vorgeschlagen, die eines der oben definierten Tetramisolsalze in einer Konzentration entsprechend mindestens 6 °/o (G/V) freie Tetramisolbase und zusätzlich 0,1 bis 0,5 MoI₁ vorzugsweise 0,15 bis 0,5 Hol eines wasserlöslichen natrium- oder Kaliumaalzes/1 β Lösung enthält.

Wenn als INo.Ige der Auswahl eines speziellen Tetramisol salze s oder eines speziellen Ülatriumsalzes der pH das Optimum von 4· überschreitet, dann kann der pH durch Zusatz einer Säure mit einem therapeutisch verträglichen Anion, beispielsweise Weinsäure, Zitronensäure oder vorzugsweise Phosphorsäure, eingestellt werden»

Demgemäß werden Präpamte vorgeschlagen, wie sie oben definiert wurden, bei denen der pH durch Zusatz von Zitronensäure,

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BAD ORIGINAL

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Weinsäure oder Phosphorsäure auf einen Bereich, von 2 bis 4-eingestellt worden ist»

Schließlich wird auch ein Verfahren zur Bekämpfung von HeI-minthiasis bei Warmblütlern vorgeschlagen, welches dadurch ausgeführt wird, daß man in den Warmblutler eine oben definierte Tetramisollösung injiziert.

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele nelier erläutert, in denen alle Verhältnisse als Gewicht/Volumen-Äquivalent zur freien Tetramisolbase angegeben sind, sofern nichts anderes erwähnt wird*

Beispiele 1 bis 7

Sterile wässrige Lösungen, die sich für injektion eigneten, wurden aus L-Tetramisoldihydrogenphosphat, L-Tetramisolhydrogentartrat, L-Tetramisoldihydrogeneitrat, L-Tetraaiisol» acetat und L-Tetramisolhydrochlorid mit den in den Tabellen 1 und 2 angegebenen Konzentrationen hergestellt. Weiterhin wurden zu diesen Salzen die folgenden Verbindungen zugegeben, die bisher in der üblichen Weise in den Tetramisolpräparaten des Standes der Technik verwendet wurden: 2 g Hatriummetabisulfit, 0,5 g Methyl-para-oxybenzoat und 0,05 g Propylpara-oxybenzoat je 1000 ml Wasser.

Aus verschiedenen großen Herden wurden Hinder ausgewählt, welche während früherer Versuche eine Empfindlichkeit gegen Tetramisolhydrochloridinjektionen zeigten. Diese Auswahl war nötig, da der größte Teil der Tiere keinerlei ungünstige Reaktion gegen die Injektion von Tetramisol zeigt und die Häufigkeit einer Empfindlichkeit unter normalen Hindern so extrem gering ist, daß eine sehr große Anzahl von Bindern behandelt werden müßte,bevor irgendeine wesentliche Neigung für eine Heizung beobachtet werden kann. Es ist bekannt, daß die Empfindlichkeit gegen Injektionen Irgendwelcher Medikamente zwischen verschiedenen Tieren verschieden ist und daß sie sogar bei einem einzigen Tier von Injektionsstelle zu In-

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jektionsstelio sich ändert. Um diese Nebeneffekte zu beseitigen oder gering au halten wurden verschiedene Behandlungen willkürlich an verschiedenen Stellen, wie auch an verschiedenen Tieren Tcrgenommen, wobei soweit wie möglich Paare von identischen linken und rechten Stellen ausgewählt wurden» Die sterilen Präparate wurden subcutan injiziert, nachdem an der Injektionsstelle die Haare abrasiert worden waren, um die Beobachtung zu erleichtern.

Eine Überprüfung der Gewebereaktion an der Injektionsatelle wurde in regelmäßigen Abständen während 14 Tage durchgeführt. Die Art der Reaktion an jeder Stelle wurde wie folgt eingestuft:

keine Reaktion .

schwache Hautverdickung und leichte Schwellung des suboutanen Gewebes, unterste Grenze, die nur durch Palpation feststellbar ist.

ähnlich wie Einstufung 1, aber etwas ausgeprägter

Schwellung bis zu ungefähr 25 nun Durchmesser sichtbar, leichte Erhebung über die Körperoberfläche

starke Schwellung bis zu 10 ca Durchmesser mit einer Erhebung von ungefähr 6 bis 25 mm vom der Körperoberfläche

16 größere Schwellung als bei 8

Die escponentielle Zunahme der Einstufungswerte stellt des sunehaende Ausmaß der Reibung in Rechnung»

Die Einstufungen 0 bis 4 wären ohne Abrasieren der Haare in der Praxis überhaupt nicht zu bemerken, aber Einstufungen von S und darüber sind merklich und unerwünscht; die Einstufung 16 ist» unannehmbar.

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BAD

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Da eine große Anzahl von Behandlungen nicat gleichzeitig in zufriedenstellender Weise paarweiseund mit einer ausreichenden Anzahl Tieren statistisch durchgeführt werden kann, und um einen Hinweis auf die statistischen "Veränderungen auf Grund des Klimas, der Biologie (Alter, physischer Zustand, Geschlecht) und andere zufällige Faktoren zu erhalten, wurden verschiedene Gruppen von Versuchen ausgeführt, und ihre Ergebnisse wurden in gesonderten* Tabellen festgehalten. Die Summe der Einstufungen der Tiere in einer· jeden Gruppe (gesamte Einstufung), dividiert durch die Anzahl der Tiere ergab den Parameter Einstufung/Tier, der ein umgekehrt proportionaler Ausdruck für die "Verträglichkeit des injizierten Präparats ist. Einstufungen unter 4,0 sind zufriedenstellend, •unter 2,0 sind sie gut und unter 1,5 sind sie vorzüglich. Alle in den Tabellen angegebenen Zahlen sind statistisch beim 1 in 100 Wert oder höher bedeutsam.

Gleichzeitig wurden Hämolyseversuche wie oben beschrieben ausgeführt, um den Zusammenhang zwischen der Hämolyse und der "Verträglichkeit, nämlich der Einstufung/TJs^Zahl, zu bestimmen»

Die Resultate der Versuche 1 bis 7 sind in den Tabellen 1 und 2 angegeben. Jede Tabelle wurde mit einer gesonderten Versuchsreihe erhalten« Die Versuche 1 bis 4- aind erfindungsgemäße Versuche und die Versuche 5 bis 7 sind Versuche gemäß dem Stand der Technik.

Da bei den üblichen Konzentrationen an L-Tatramisölhydrochlorid (6,38 %(G/V),ausgedrückt als freie Base) sogar mit ausgewählten empfindlichen Testtieren die Hauffekeit von Reizungen so klein ist, daß sie nur bei sehr groß angelegten Versuchen gezeigt werden kann, wurde die Konzentration an L-Tetramisolhydrochlorid und -acetat erhöht '(auf 12,75 % (G/V), ausgedrückt als freie Base) um die Empfindlichkeit zu steigern

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-

Ver-

L-Tetramisol~ :

I I

1

ο ι σ »-·

•

4

Konzentration !

h

• Dihydrogen- phosphat

12,75 ί

Tabelle 1

I

LStU

funs

ί

2

._ Einstufung

8|

-

.er 3·.

2 ί 1 S

19

ι

Ai3.zahl

Gesamt»

Stufung/

Hämolyseteat-

CD CO CD

V

such I salz Sf

s i

..■. i 2

CD Τ Ο» , OO

5

&(G/v)besogen

Hydrogensul fat (Stand d.T.

12,75

jj 1 JjQ

1

16

Zahl 6 einer

6

5

Tiere a Gruppe

2

S

der In

e inst1,!.-

Tier

eiaat'uf u.nis

I 3 L_j

-^ SYer-

6

I Iauf freie Base

Hydrochlorid (Stand d. T.)

/O (TC . (

8 Tk

.er

Gruppe

3

-

7

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4

! ί ..... S

jektionen

fung

^ '.such

7

i ϊ Dihydrogen·» I phosphat

Acetat (Stand d. T.)

einer

(■-'— 1

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0,89

O

CD

I Dihydrogen- citrat j

-

5

2

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G

Hydrogen- I tartrat I !

Konzentration

|o

1

6

9

1.16 j i

1,78

I

ß(G/V)bezogen

1

ό

§ i

auf freie Base

Tabelle 2

.n

.n

L-Tetramisol-

12,75

8

Anzahl

Gesamt

Stufung/

salz

12,75

O

der In~

einstu

Tier

12,75

Rektionen i

fung

12,75

-M.

36

47

1,31

0 I i S

36

152

4,2

36

194

5,3

36

174

4,8 j ' .

Hämolysetest-i ^

einstufung \

O

3-4

10 • ' 1

! 10 j ί J

20361U

Bei den Präparaten des Standes der Technik wurde festgestellt, daß die Empfindlichkeit mit einer Erhöhung der Konzentration des Tetramisolsalzes steigt. Es sind aber höhere Konzentrationen erwünscht, um dia Verabreichung au erleichtern und um die Wirksamkeit gegen gewisse resistente Stämme zu verbessern.

Um die Zunahme der Häufigkeit der Heizungen bei Präparaten des Standes der Technik und bei Präparaten der vorliegenden Erfindimg zu vergleichen, wurden 2 Versuchsreihen unter Verwendung steigender Konzentrationen an !-Tetramisol in der Weise ausgeführt, wie es in den Beispielen 1 bis 7 beschrieben ist. Die in Tabellen 3 und 4 angegebenen Resultate zeigen, daß bei den Präparaten des Standes der Technik in Tabelle 3, wobei wieder Tiere mit einer bekannten relativ hohen Empfindlichkeit ausgewählt wurden, die oberen Konzentrationsgrensen, bei. denen die Verträglichkeit vorzüglich war, rasch überschritten wurden. Unter identischen Bedingungen konnte bei den Präparaten der vorliegenden Erfindung der Tabelle 4· im Gegensatz hierzu keine obere Verträglichkeitsgrenze festgestellt werden, auch wenn höhere als die 5-fachen Konzentrationen verwendet wurden, als sie bisher bei den Präparaten des Standes der Technik zur Verwendung gelangten. So zeigt also Tabelle 4 die vorzügliche Verträglichkeit des Dihydrogenphospfcatsalzes bei sehr hohen Konzentrationen.

Tabelle 3

,Versuch Nr.

L-Tetramisolsals

Hydrochiorid (Stand d. T.)

Konsentration jAnzahl !Einstufung/

%(G/V), bezo- I der Tier

gen auf die (Tiere freie Base

15

10
7,5

36

31 14

5,3

4,1 2,0

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Tabelle 4

'Versuch 'L-Tetramisolsalz 'Konzentration !Anzahl -Einstufung/

Nr..

Π 12 13 14 15

,., ., , bezo" igen auf die freie Base

{Dihydro genpho sphat

42,3 28,2

21,15

14,1

10,5

der
Tiere

2
2
2
2
2

Tier

1,5 1,5 1,5 1,5 0,5

Beispiele 16 Ms 16

3s wui'de eine weitere Reihe von,Injektionen entsprechend den Beispielen 1 bis 7 ausgeführt, aber zusätzlich zum L-TetraiEisojBfiydrogenphosphat wurde ein Natriumsalz in die Injektioni'lÖaung (Beispiele 1? und 18) eingearbeitet. Beispiel 16 ist ein Vergleich gemäß der vorliegenden Erfindung, aber ohne Uatriumsalz.

Die in Tabelle 5 angegebenen Resultate zeigen, daß eine weitere sehr erwünschte Unterdrückung der Reizungseinötufung/Tier erreicht wurde.

BAD

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onzentration
l/V),bezogen
auf die freie
Base

15,3 (-0,75
Mol)

Zusatz und Konzentration %(G/V)

Insahl lEinstu-

Nicfrts Vergleich

Na₂SO₄,1,5% C 0,11 Mol)

Na H₂PO₄.2H₂O

3,3% (~0,2i"

Mol)

der Tiere

24 19

19

iung/ Tier

1,83 1,0

0,63

Beispiele 19 und 20

Die Testiere der Versuche 1 bis 18, die wegen ihrer hohen Empfindlichkeit ausgewählt worden waren, wurden durch eine normale Herde ersetzt. Diesen Tieren wurden L-Tetramisoldihydrogenphosphatlösungen injiziert, wie es in den Beispielen 1 bis 7 beschrieben ist, wobei jedoch die in Tabelle angegebenen Konzentrationen verwendet wurden. Eine vollständige Unterdrückung der Reizung, das heißt eine vollständige Freiheit von unerwünschten Reaktionen, läßt sich aus den beobachteten Einstufung/Tier-Daten ersehen. Diese Beispiele sind repräsentativ für die Reaktion von normalen Rindern im freien Feld.

	Tabelle	6	Präparat	Konzentration % (G/V), be zogen auf freie Base	Anzahl der Tiere	Einstu fung/ Tier
		L-Tetramisoldihydrögen- phosphat L-Tetramisο!dihydrogen- phosphat + 2,0%(G/V) NaH2PC4C0,167 Mol)	12,75 12,75	94 94	0,18 · 0,03
Versuch Nr.
19 20

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ES. le__21 JM.^

Es wurde eine weitere Seihe von Versuchen in einer normalen Herde wie in den Beispielen 19 und 20 ausgeführt, wobei hohe Konzentrationen von sowohl -Tetramisölsalζ als auch von Natriumsalz verwendet wurden. Die Resultate in Tabelle 7 zeigen eine vorzügliche Verträglichkeit in allen Fällen.

yersuch

Präparat

JTetramisolfkonzentration
bezofreie

cen

Anzahl

der

Tiere

Einstufung/ Tier

21

22

Ir-Tetramisoldihydrogen phosphat + 2,54 %(G/V) HaH₂PO₄ (0,212 Mol)

L-Tetramisoldihydrogenphosphat + 5,08 % (G/V) NaH₀PO. (0,424 Hol) ^d *

15,3

30,6

0,5

0,7

Beispiele 23 bis 25

Die Beispiele 19 und 20 wurden auf einer Rinderzucht in Südaustralien ausgeführt, wo ein mäßiges Klima herrscht. Die Versuche der Beispiele 23 bis 25 wurden an Sinderherden in verschiedenen Gegenden von Queensland ausgeführt, wo ein Klima von sub-tropisch bis tropisch herrscht« Den Tieren wurden L-Tetramisoldihydrogenphosphatlösungen injiziert, die wie in Beispiel 1 hergestellt worden waren. Die Lösungen enthielten zusätzlich 0_>s071 Mol Natriumdihydrogencitrat und 0,142 Mol Natriumdihydrogenphosphatdihydrato Der pH der Lösungen wurde durch Zusatz kleiner Mengen Phosphorsäure auf 3»5 eingestellt» Die verschiedenen verwendeten Konzentrationen an L-Tetramisoldihydrogenphosphat, die Gesamt-

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BAD ORiGiNAL

20361U

zahl der getesteten Tiere und die Einstufung je Tier sind in (Tabelle 8 angegeben. Die Resultate der Tabelle 3 neigen die vorzügliche Verträglichkeit des Dihydrogenphosphatsalzes in Gegenwart von Natriumdihydrogencitrat unter den härteren klinatischen Bedi?^gungen von Queensland.

Tabelle 8

Beispiel

23 24

L-Tetramisolsalz

Dihydro genpho s phat

Konsentration (Anzahl % (G/V), bezo~ der gen auf freie Tiere-Base

6,36
11,6

195 318 143

Einstufung/ Tier

0_;62 1,26 1.,49

20 gekreuzte Kälber einer Milchrinderzucht mit Gewichten zwischen 52,2 und 93,4 kg wurden mit 2 Lösungen (a) und (b), die weiter unten beschrieben sind, injiziert, und zwar mit einer Dosis von 1 ml Lösung je 18,1 kg Körpergewicht, Die Lösungen wurden wie in Beispiel 1 hergestellt, enthielten aber L~Tetramisoldihydrogenphosphat entsprechend 11,6 % (G/V) freie Base- Die Lösungen wurden durch Zusatz von Phosphorsäure auf pH 3_S5 eingestellt und enthielten 0,212 Mol/l Natriumdihydrogencitrat in der Lösung (a) und 0,424 Mol/1 Natriumdihydrogencitrat in der Lösung (b). Bei jedem Tier wurde die Lösung (a) auf der einen Seite und die Lösung: (b) auf der anderen Seite injiziert. Nach 14 Tagen war die Ein-.. stufung/Tier 0,45 bei Lösung (a) und 0 bei Lösung Cb), Dieses Beispiel zeigt die Wirkung der erhöhten Konzentration der wasserlöslichen Natriumsalze im Präparat.

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2.1-V RInc^rer einer normalen Herde wurden mit L-Tetramisoldihydrogenphosphatlösunken wie in den Beispielen i bis 7 injiziert. Die Konzentration des L-Tetrandsoldihydrogenphosphats betrug 17,5 % (G/V) ausgedrückt als freie Base. Die Lösung enthielt 0,212 Mol/l Natriumdihydrogenphospliat und war mit Phosphorsäure auf pH 3»5 eingestellt. Die Einsbufung/Tier betrug 2,6.

Beispiel 27 wurde wiederholt, wobei jedoch das Natriumdihydrogenphosphat jenes Beispiels durch 0,212 Mol/l Kaliumdihydrogenphosphat ersetzt wurde. Die Einsibufung/Tier betrug 2,2.

12 Rinder wurden mit einer Lösung injiziert, die durch das Verfahren der Beispiele 1 bis 7 hergestellt worden war. Die Ansätze waren L-Tetramisolcitrat mit einer Tetramisolkonzentration von 15,3 % (G/V), ausgedrückt als freie Base, plus 0,212 Mol/l Na^PO^.SHpO. Der pH des Präparats wurde durch Zusatz von Zitronensäure auf 3i5 eingestellt. Die Einstufung/ Tier betrug 3,9·

Beispiel 30

12 Rinder wurden mit einer Lösung indiziert, die durch das Verfahren der Beispiele 1 bis 7 hergestellt worden war. Das Präparat enthielt L-Tetramisoltartrat νei einer Tetraaisolkonsentration von 15*3 % (G/V), ausgedrückt als freie Base, plus 0,212 Mol/l NaH₃PO^.2H₂O. Der pH di-s Präparats war durch Weinsäure a-of 3,5 eingestellt worden. Die Einstufung/Tier betrug 2,7-

SAOORiCMNAL

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Claims (6)

Patentansprüche

1. Wässriges Tetraaisolpräparat, dadurch gekennzeichnet, daß es das Tetramisol in lorm des Citrats, Taftrats oder Phosphats entsprechen!mindestens 6 % (G/V) der Tetramisolbase enthält.

2» Präparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es Tetramisoldihydrogenphosphat entsprechend Mindestens . 6 % (G/V) der Tetramisolbase enthält«

3. Präparat nach Anspruch 2, dadurch gekennselehnet» daß es L-Tetramisoldihydrogenphosphat in einer Konzentration von 12,5 % (G/V) bis zur Lösliehkeitsgrenze bei der gewünschten-Lagerungstemperatiir enthält.

4. Präparat nach Anspraeb, 5« dadurch gekennzeichnet, daß

es das L-Tetramisoldihydrogenpfeosphat in einer Konaemti'ation von 12,5 %(G/V) bis 23 % (G/?) enthält.

5« Präparat nach eimern der voÄergehemieB Ansprüche _s da- durch gekennzeichnet, daß ©s TOsätalich 0,1 bis "0,-5 eines wasserlöslichen latritmsalses/l Lösung enthält«

6. Präparat nach Anspruch 5s dadurch gekeaazeiclinet, das wasserlösliche Hatriumsalz in einer Konzentration von 0,15 bis 0,5 Hol/l Lösmig vorliegt.

7· Präparat nach, einem d©r Ansprüche 1 "bis 4, dadurch gekennzeichnet, .daß es auaätBlieh 0₉1 bis O₉5 Mol eines wasser» löslichen Kalitamsalsses/1 Losiaag enthält _o

8« Präparat nach einem der Ansprüche 5 his 7i. dadurch gekennzeichnet, daß der pH der Lösung durch Zusatz von Zitronensäure, Weinsäure oder Phosphorsäure auf einen Bereich

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von d bis 4 eingeetel.lt ist.

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