DE2612948C2 - Wiederbenutzbares immobilisiertes Immunoadsorbens für ein Verfahren zur quantitativen Analyse der Antigenkonzentration einer Probenlösung - Google Patents

Wiederbenutzbares immobilisiertes Immunoadsorbens für ein Verfahren zur quantitativen Analyse der Antigenkonzentration einer Probenlösung

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Description

Die Erfindung bezieht sich auf ein wiederbenutzbares
ίο immobilisiertes Immunoadsorbens gemäß dem Oberbegriff des Anspruchs 1 für ein Verfahren zur quantitativen Analyse der Antigenkonzentration einer Probenlösung.
Radioimmunologische Verfahren, wie z. B. in der DE-OS 24 12 833 beschrieben, stellen eine Analysentechnik dar, die auf der Affinität eines Antigens an Antikörper-Molekülen beruht. Danach werden Standardkurven aus Werten abgeleitet, die aus einer Anzahl Proben gewonnen wurden, die jeweils (a) die gleiche Konzentration an markiertem Antigen und (b) unterschiedliche bekannte Konzentrationen an unmarkiertem Antigen aufweisen. Die Antigene werden mit einem radioaktiven Isotop als Indikator (Tracer) markiert.
Die Probe wird nach der genannten DE-OS in einer Kontaktkammer mit einer örtlich festgelegten Masse von für die Antigene spezifischen Antikörpern (Immunoadsorbens) in Kontaki gebracht, um eine Bindung eines Teils der markierten und unmarkierten Antigene an den Antikörpern zu bewirken. Das freie Antigen wird von der örtlich festgelegten Masse von Antikörpern und dem daran gebundenen Antigen getrennt und dann wird mittels eines geeigneten Detektors, etwa eines Gamma- oder Betastrahlendetektors, der Prozcntgehalt von gebundenem oder freiem markierlem Antigen oder von beiden bestimmt. Dieser Vorgang wird für eine Anzahl Proben mit verschiedenen bekannten Konzentrationen an unmarkierten Aniigenen wiederholt, und die Ergebnisse werden aufgezeichnet. Normalerweise nimmt die relative Menge des an den Antikörpern gebundenen Tracer-Antigens mit zunehmender Konzentration des Gesamtantigens ab. Nachdem die Standardkurven aufgestellt sind, werden sie zur Bestimmung der Konzentration von Antigen in den zu analysierenden Proben verwendet.
Bei der eigentlichen Analyse wird die Probe, von der die Antigenkonzentration bestimmt werden soll, mit einer bekannten Menge Tracer-Antigen vermischt. Das Tracer-Antigen ist das gleiche Antigen, dessen Vorkommen in der Probe bekannt ist, das aber durch ein geeignetes radioaktives Isotop markiert worden ist. Die Probe mit dem Tracer wird dann in Kontakt mit dem Antikörper bebrütet. Danach kann nach Trennung des freien vom gebundenen Antigen das in der Probe verbliebene freie Antigen oder das am Immunoadsorbcns gebundene Antigen in einem geeigneten Detektor gezählt werden. Dann wird aus der Standardkurvc die Konzentration von Antigen in der untersuchten Probe bestimmt. Gemäß der DE-OS 24 12 833 kann der Immunoadsorbens jeweils durch Lösen der Bindung der Antigene an den Antikörpern zur Wiederbenulzung für eine quantitative Analyse regeneriert werden, indem er von einem Lösungsmittel durchspült wird.
Soll das Immunoadsorbens mehrfach verwendet werden, wie in der angeführten DE-OS 24 12 833 beschrieben, so ergeben sich gewisse Schwierigkeiten insofern, als über einen längeren Benutzungszeitraum hinweg das Durchströmverhalten des Immunoadsorbens und dessen Fähigkeit, Antigene zu binden, nicht
verändert werden darf, d. h. die Reproduzierbarkeil der Ergebnisse gewährleistet sein muß.
Glas und andere feste anorganische Substanzen als Trägermasse für die Antikörper böten eine Möglichkeit, gleichbleibende Durchströmverhältnisse zu gewährleislen. da Substanzen dieser Art nicht zusammenfallen und auch bei häufiger Verwendung nicht austrocknen. Die Bindung von Antikörpern an poröses Glas, wobei ein Silan als Kop,iiungsagens dient, ist in der US-PS 36 52 761 beschrieben. Die dort mitgeteilten Werte )0 lassen jedoch erkennen, daß die wiederverwendete Säule, in der das gebundene Antigen aus dem Antikörper-Immunoadsorbens eluiert wurde, ein unberechenbares Ergebnis erbrachte, weil die Auflösung der Bindung Antikörper-Antigen zwischen 74% und 100% schwankte. Das beschriebene Sysiem scheint daher zwar brauchbar als Trennsystem, hat aber erhebliche Nachteile für die quantitative Analyse, für die eine im wesentlichen stöchiometrische Freigabe des Antigens erfolgen muß.
Wenn das Glas, wie in der US-PS 36 52 761 angegeben, sehr porös ist, gibt es soviel aktive Glasoberfläche, daß eine ausgedehnte Bindung von Antikörpern stattfindet, aber nicht spezifische Bindung von Antigen ebenfalls auftritt. Das an das Glas gebundene Antigen wird nicht vollständig freigegeben. so daß keine stöchiometrische Freigabe bei jeder Benutzung stattfindet, wie es für die quantitative Analyse erforderlich wäre.
Eine weitere Schwierigkeit bei sehr porösem Glas bereiten die zahlreichen Risse in den Poren, was zu Einschlüssen von Antigen in den Rissen und zu einer nur langsamen Freigabe wegen der geringen Diffusion in den Rissen führt. Wenn ein schnelles Ansprechen erforderlich ist, wie beispielsweise bei automatisch arbeitenden Geräten, stellt die im allgemeinen relativ langsame Diffusion der Reaktionsparincr einen Faktor dar, der die Ansprechgeschwindigkeit begrenzt. Wenn das Antigen auch nicht an die Trägermasse gebunden ist, so erscheint es dennoch auf Grund der verhältnismäßig langsamen Diffusion des Antigens bei einem schnellen automatisierten Analysegerät wie gebunden, da es nicht schnell und stöchiometrisch freigegeben wird.
Zur Verwendung in der Chromatographie ist oberflächenporöses Trägermaterial bekannt, vgl. beispielsweise die US-PS 35 05 785. Dieses als Packung für eine chromatographische Säule verwendete Trägermaterial besteht aus TrägerpcHen, z. B. aus Glas, die auf undurchlässigen Kernen irreversibel Schichten einer Vielzahl von gallertartigen Mikropartikeln umfassen. Auf diese Weise tragen kugelförmige Glasperlen von etwa 30 Mikron Durchmesser eine poröse Oberflächenhaut, die ungefähr I Mikron stark ist. Wird ein solches Trägermaterial verwendet, so ergibt sich eine beträchtliehe Oberflächengröße für die gewünschte Aktivität, aber das Trägermaterial muß sorgfältig hergestellt werden, wenn das richtige schnelle Ansprechen und die stöchiometrische Freigabe gewährleistet sein soll.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein so mehrfach verwendbares Immunoadsorbcns zu schaffen, das das Antigen für jeden Versuch stöchiometrisch freigibt. Dieses Immunoadsorbens soll außerdem nicht austrocknen und sich so packen lassen, daß die Strömungsverhältnisse Jurch die Masse während der μ Nutzungsdauer des Immuno.ndsorbens den Anforderungen entspricht.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß mit einem wiederbenutzbaren imnobilisierten Immunoadsorbens geschaffen, wie es durch den Anspruch 1 gekennzeichnet ist. Weiterbildungen der Erfindung sowie ein Verfahren zum Herstellen und die Verwendung eines wiederbenutzbaren immobilisierten Immunoadsorbens sind in den Unteransprüchen beschrieben.
Mit der Erfindung wird ein verbessertes immobilisiertes Immunoadsorbens angegeben, das für wiederholte Benutzung bei Radioimmununtersuchungen verwendbar ist. Das Substrat oder das Trägermaterial ist stabil gegenüber Austrocknung und Verdichten und hat die Form einer Masse fester Teilchen, deren Außenseite jeweils eine große Oberfläche aufweist. Ein typisches Substrat dieser Art besteht aus hochtemperaturbeständigen, oberflächlich porösen Teilchen, die jeweils einen undurchlässigen Kern aufweisen, auf den eine genügend große Zahl von Schichten aus Mikroparlikeln aufgebracht ist, so daß sich eine äußere poröse Beschichtung auf dem Kern mit großer Oberflächenentfaltung ergibi.
Mit dem Substrat ist ein wasserunlc iiches Polymermaterial verbunden. Das Polymer kait'i gebunden werden, indem Jas Substrat so behandelt wird, daß sich ein Aminoalkylsilun-Derivat bildet, worauf eine Behandlung zur Bildung eines Isothiozyanalkylsilan-Deri'at erfolgt, an das das Polymer gebunden wird. Zu den geeigneten Polymermaterialien gehört Dextran.
Das Dextran wirkt wie eine Schranke, die die aktiven Bereiche auf dem Substrat, an die Antigen bei den nachfolgenden Untersuchungen gebunden werden könnte, bedeckt. Wenn das Immunoadsorbens nach der Erfindung mehrfach benutzt wird, indem ein Eluierungsmedium verwendet wird, das das Antigen von den gebundenen Antikörpern trennt, würde die Ablösung von Antigen, das direkt an das Substrat gebunden ist. zu Fehlern in den nachfolgenden Untersuchungen führen, da diese Ablösung nach nicht vorhersehbaren Gesetzmäßigkeiten abläuft.
Das Polymer wird dann zum Binden der Antikö, per durch eine kcvalente Bindung durch eine Behandlung mit Zyanbromid aktiviert.
Daj sich ergebende immobilisierte Immunoadsorbens wird dann in einen Kammerhalter speziellen Aufbaus gegeben, der in einer automatischen Anlage nach der oben genannten DE-OS 24 12 833 verwendet wird.
Die Erfindung wird nachfolgend an Hand beigefügter Zeichnung näher erläutert, die in vergrößerter Darstellung, teilweise geschnitten, ein Beispiel eines Partikels eines erfindungsgemäßen Immunoadsorbens zeigt.
Gemäß der Zeichnung besitzt das oberflächlich poröse, hochtcmperauirbeständige Teilchen 10, das das Substrat für das immobilisierte Immunoadsorbcns bildet, einen Makropartike! in Form eines undurchlässigen n!.h·. porösen Kerns 12. Der Kern 12 ist kugelförmig gezeichnet, weil diese Form aus Packungsgründen zu bevorzugen ist. Der kugelförmige Kern hat einen Durchmesser zwischen 5 und 500 Mikron und besieht aus Glas, kann aber auch aus Sanden, Keramikmaterial ui<d dergleichen bestehen.
Die Kerne haben vorzugsweise übereinstimmende Abmessungen, d. h. sie liegen alle innerhalb eines Bereichs von ungefähr 50% um den mittleren Durchmesser. Um den Kern 12 ist eine Anzahl von Schichten aus Mikropartikeln 14 angeordnet, die eine äußere poröse Beschichtung 15 bilden. Die Größe der Mikropartikel kann zwischen 5 Millimikron und I Mikron liegen, die Anzahl der Schichten zwischen 2 und 30. Die Mikropartikel können aus amorphem Siliziumoxid. Aluminiumoxid, Thoriumoxid und dergleichen
bestehen.
Min auf diese Weise aufgebautes Substrat hat eine verhältnismäßig große Oberflächenenifaltung. isi aber verhältnismäßig porenfrei im Kernmaierial. Bei Perlen mit einem durchschnittlichen Durchmesser vein )0 Mikron und einer porösen Randbeschichümg von I Mikron ergibt sich eine Oberfläche von 0.8 bis 1.0 Mi-Vg bei einer Packungsdichte von 1.1JgZCm1. Die gleichmäßige geometrische Form, die Beständigkeit gegenüber Austrocknung und Verdichtung und die Packiingsverhiillnissc lassen das oben beschriebene Material als pan/ außerordentlich gut geeignet für ein wiederverwendbares Immiinoadsorbens erscheinen.
ledoch isl auch dieses Material besirebt. wenn es in tier angegebenen Form ,ils I'rägcrmalenal für die Antikörper benutzt wird, aktive l'läi/e für Antigene aufzuweisen. Dieses Problem erhält dann (iewichl. wenn das immobilisierte liiimunoadsorbens wie vorliegeiui mehrfach benutzt wird. Da die i'iiiersuiiiiiugstjenauigkeit und -geschwindigkeit nut der l-'ähigkeit der Antikörper verknüpft ist. das Antigen zu binden und beim Waschen slöchiometrisch freizugehen, beeinträchtigt alles direkt am Substr.it gebundene und in nicht vorhersehbarer Weise freigegebene Antigci die Genauigkeit der nachfolgenden I Intersuchungen.
Diese lendenz wird ausgeschaltet, indem eine PolvmersperrbeschichüiMg verwendet wird, die an dem Substrat (.lurch Vermittlung eines Silaiis .ils Kopplungsagens haftet, d.h. das PoKmer ist unm 'elbar an die ()berflächenabschnitte des Substrats durch Silanbindungen gebunden. Dann wird das PoIvmer durch eine Behandlung mil Zvanbroinid aktiviert, wodurch das Protein (Antikörper) kovalent an das partikelförmige Substrat mit aktiviertem PoIvmer gebunden wird. Die Polvmerschieht dient nicht nur als Schranke, um Plat/e mit latenter Aktivität auf dem eigentlichen Substrat abzudecken, sondern sie bietet eine aktive Fläche, an der der Antikörper kovalent gebunden werden kann, d. h. mn einer als verhältniimäßig stark erachteten Bindung.
Bei einem typischen Herstellungsverfahren wurden !2 g -.!·.". !cüchciiförivig·.'" ^,.Κο.-.,ί,,,.,ι.,^;.,;,: ;,,K..rflw-hlieh poröse hoehtemperaturbeständige Partikel von 30 Mikron Durchmesser der oben beschriebenen Art) in einen 500 ml Kolben gegeben und 20 ml (18.84 g) i-.Aminopropyltriäthoxysilan und 100 ml Toluol zugefügt. Das Gemisch wurde 22 Stunden umgewälzt, um das Aminoalkylsilan-Dcrivat des Glassubstrats herzustellen. Das Derivat wurde abgefiltert, auf dem Filterträger mit 200 ml Toluol gewaschen und in Luft getrocknet, darauf zum zweiten Male gewaschen (100 ml Chloroform) und anschließend in Luft getrocknet.
Das Isoihiozyanoalkylsilan-Derivat wurde hergestellt, indem das gewonnene Aminoalkylsilan-Glas-Derivat mit !6.6 ml (25 g) Thiophosgen und 150 ml Chloroform behandelt wurde. Das Reakiionsgefäß wurde vor Licht geschützt, und es wurde 18 Std. lang durchmischt, um das angegebene Derivat zu erhalten, das anschließend gefiltert, in Chloroform gewaschen und in Luft getrocknet wurde.
Das Ergebnis dieser Schritte war die Gewinnung eines »aktivierten« Substrats, an das das wasserunlösliche Polymer gebunden werden kann.
Gemäß der Erfindung wird die Verwendung von Dextran mit einem Molekulargewicht von 70 000 bevorzugt, jedoch können auch andere Substanzen verwendet werden.
Demnach wurden 200 ml einer I "/»igen Lösung von Dextran in 0.1 m Nalriumbikarboiial (ph 4.0) zu dem »aktivierten« Substrat gegeben. Das Gemisch wurde drei Stunden lang gerührt, gefiltert, mit 300 ml Wasser gewaschen, dann mit 100 ml Azeton gewaschen und in Luft getrocknet; es entstanden I Lb g polymerbcschichteles partikelförmigcs Substrat.
Zu den restlichen I lerstellungsschrilten gehört die Aktivierung ties polaincrbeschichletcn Substrats und ίο wahlweise die Reinigung des Antikörpers und die Bindung des Antikörpers an das beschichtete Substrat, w as ι Ii a nehm a I auch als Koniugation des Antikörpers an präpariertes Substrat bezeichnet wird.
Zur Aktivierung ties Dextrans wurden 20g Zyanbro Ii mid in 200 ml Wasser gelöst: Zvanbrouiid ist sehr giftig. weshalb tlie einschlägigen Vorsichtsmaßnahmen beach let weitlen müssen. Das dextranbeschichtete Substrat (ll.bg) wurde hinziigcl'ugi und tlas Gemisch gerührt.
j.ti uiui.-'-
wer |Mi uimii*
b η NainiimlndroMtl aul pll 10—11 erhöht, tier pll wurde auf Werten zwischen 10 und I I gehalten, indem 2 Min. lang b η Natriumlndroxid zugegeben wurden. Dann wurde das aktivierte dextranbeschichlctc Sub Mtilt mit 40(1 ml Wasser. 400 ml Mischung von Wasser
2, und Azeton zu gleichen Volumenicilcn. 4(K) ml Mi schung aus 25 Volumenprozent Wasser und 75 Volumenprozent Azeton und abschließend 4(X) ml Azeton e· jw aschen. Danach wurde in Luft getrocknet.
Die Behandlung des polvmerbeschnhtelen Substrats
in mit Zvanhroniid führt zu einer Umsetzung mit benachbarten I Ivd'owlgruppen ;.uf dem Polymer und zur Bildung eines Imitlokarbonats. tlas sich mit den nukleophilen Gruppen (Amino) auf dem Antikörper verbindet und hei llvdrolvse Kohlensäureester bildet.
ι-) Schnelle Hvilrolvse ties Imitlokarbonats in saurer Umgebung führt zur Bildung eines Zvklokarbonals. das nicht die gleiche Bintlewirkung hai wie tlas Imidokarbo nat. Hs ist also darauf zu achten, daß Bedingungen vermieden werden, die zur Bildung eines Zvklokarbo
jn nals führen.
Line einfache Reinigung des Antikörpers vor der k'.imiiij-iiinn HiUi Mrh etwa folgendermaßen vornehmen: I ml I8'v»iges Natriumsulfat wird in 0.1 ml des Antiserums gegeben. Die Lösung wurde stark durehwirbelt und eine Stunde lang bebrütet, um Gammaglobuline auszufällen. Dann wurde das entstandene Gemisch 5 Min. lang bei Zimmertemperatur mit 1000 g zentrifugiert, anschließend dekantiert und der Überstand verworfen. Die Tablette wurde in 10 ml IS^oigcm Natriumsulf.it unter Zugabe von 0.10 ml Wasser aufgenommen. Das entstandene Gemisch wurd<_ stark gerührt und wiederum zentrifugiert. Der Überstand wurde dekantiert und die Tablette in 0.8 ml 0.1 m Natriumbikarbonatlösung gelöst.
Vorzugsweise wurde der Antikörper mit dem Substrat konjugiert, während dieser mit dem Antigen, auf das er anspricht, gesättigt ist. Der Grund dafür ist. daß man eine e-rhöhte Aktivität erzielen will, indem die aktiven Plätze auf dem Antikörper während des Konjugationsvorgangs geschützt werden, wodurch nämlich erreicht wird, daß der Antikörper eine Verbindung mit dem Substrat eingeht, bei der die Verfügbarkeit von aktiven Plätzen gewährleistet ist. In gewissem Sinne ermöglicht die Bindung der aktiven Plätze an Antigen eine Orientierung des Antikörpers. die die Abdeckung der Plätze durch den Konjugationsvorgang reduziert.
Eine Menge von 0.5 ml einer für den Antikörper
spezifischen Lösung von 0.1 mg/ml eines für ilen Antikörper spezifischen Antigens wurde in einer Äthanol-Wiisser-I.ösiing (2 Teile Äthanol. I Teil Wasser) gelöst und in uneni Testrohr mit Stickstoffgas getrocknet. Das gereinigte Antiserum. gelost in 0.8 ml > 0.1 m Natriumbikarboniit oder 0.1 ml Antisera in 0.3 ml 0,1 m Natriumbikarbonat, wurde in das Rohr mit getrockn,- em Antigen gegeben und anschließend eine Stunde lang in einem bedeckten Kuliiirrnhr bebrütet. Danach wurden JOO mg des zyanuktiviertcn, polymer- in beschichteten .Substrats iii das die Antikörperlösung enthaltende Rohr gegeben und dann unter Mischen ein bis drei Tage lang bei 4 C bebn'itet. Wahrend des Bcbrütens erfolgt die Koniugation. wobei die Antigen bindiingspliit/e des Antikörpers durch gebundenes π Antigen geschützt sind.
Nach dem Bebrüten wurde die Suspension "> Min. lang mit 1000 u zentrifugiert und das I Iberstehetkii. de!;an-• ■er; ·.!!;■.! \er1.1.'..τ!·.·!1.. I1!·.1 ! .ih !·_'!'. e «.ι_ιγ<_!·_» /wi'im.il n> 10 ml !>.'") in Natriumbikarbonatlosung gewaschen. Nach :u jedem Waschvorgang wurde die Suspension zentrifugiert und der Überstand verworfen. Das antikörperbeschichtete Substrat wurde dann zweimal mit IO ml 0.1 m Acetatpuffer. pH 4. gewaschen. Dann wurde das antikörperbeschichtete Substrat gewaschen mit Html .·-, 0.05 m l'hosphatpufier. pH 7.3. in dem 0,0) in Ν·'·ι umchlond und 0.5'Ί. Rindersenimalbumm und 0.02'Ί· Natriuma/id als Konservierungsmittel enthalten waren. Das entstandene Produkt wurde dann in 10 ml ucr letzten Waschlösiing wieder aufgenommen und bei 4 C in aufbew: in.
Vorder Verwendung zu I intcrsuchiings/w ecken wird das resultierende Produkt mit einer der beschriebenen Losungen gewaschen, um das ,m den immobilisierten Antikörper gebundene Antigen /υ entfernen. Heim r> Aufbewahren ist es jedoch zweckmäßiger, das Antigen an den Antikörper gebunden /u behissen.
Rs ist auch möglich, den Antikörper in freiem Zustand mit dem Substrat zu konjugieren. Dazu muß der Antikörper mit dem zyanaktivierten polymerbcschichtclen Substrat vermischt Lind anschließend bebrütet und nachbehandelt werden, wie bereits oben beschrieben.
Als brauchbares Polymer ist Dextran angegeben worden. Man kann aber auch andere wasserunlösliche Polymermaterialien mit freien Hydroxy-Gruppen zur Zyanbromid-Aktivierung verwenden, ζ. Π. Zellulose und dergleichen. Dextran wird jedoch deswegen bevo.zugt. weil dieses Material bereits früher in erheblichen Umfang bei Radioimmiinuntersuchungen angewendet worden ist. /. H. als dexti ,inbeschichtete Holzkohle, und sein Verhallen in tier Umgebung beeinträchtigt den Vorgang nicht.
Mit dem erfindungsgemaßen Ininiiinoadsorbens lassen sich beispielsweise die folgenden Substanzen untersuchen: ()striol. [)igo\in. Digito\in. Testosteron Östradiol. Aldosteron. Progesteron. Cortison. 11-Desoxy -C'oriisteron. 11 -Desoxvcortison. Thyroid-Hormone beispielsweise Thyroxin (Tj)lrij()dothyronin (Ti)· Poly peptide, z. H. Angiotensm. TSH (Thyroid-stimulierende* Hormon), \("TH. CiH (Größen-Hormon). HP (Placento-l.uteotropin). Parathormon. C'alcitonin. Insulin. CiIu cagen. Pokpepiid-Proteme. z.B. (T-A (Carcino-F.m liryo-Antigen). Alpha-Ietn-Protein. Interferon. Virer (wie z.B. australisches Antigen). Vitamine, wie D um Bi;. I-ölsäure und Medikamente, wie z. B. Dilantin unc Barbiturate.
Die Antiseren für die genannten \ntigcne sini bekannt, ebenso die markierten Antigene, die in l-orii eines radioaktiven markierten Materials, im allgemei nen in Γ ort« des Isotops |-"' oder des Isotops Il erhältlich sind.
Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

Claims (10)

Patentansprüche:
1. Wiederbenutzbares immobilisiertes Immunoadsorbens für ein Verfahren zur quantitativen Analyse der Antigenkonzentration einer Probenlösung, bestehend aus einer Masse fester Partikel, an denen für die Antigene spezifische Antikörper gebunden sind, dadurch gekennzeichnet, daß die festen Partikel (10) der Masse jeweils eine große Oberflächenausdehnung aufweisen und an die Oberfläche der Partikel ein wasserunlösliches Polymermaterial chemisch gebunden ist, wobei an das Polymermatenai seinerseits die Antikörper gebunden sind.
2. Immunoadsorbens nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch eine Masse aus oberflächlich porösen, hochtemperaturbeständigen Partikeln (10), die jeweils einen undurchlässigen Kern (12) aufweisen, an den sich eine so große Zahl von Schichten aus Mikropartikein (14) anschließt, daß um den genannten Kern eine äußere poröse Schicht (15) entsteht, an den das wasserunlösliche Polymer gebunden ist.
3. Immunoadsorbens nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Polymer mit den Partikeln (10) durch eine Silanbindung verbunden ist.
4. Immunoadsorbens nach einem der Ansprüche I bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß das wasserunlösliche Polymer Hydroxylgruppen aufweist und die Antikörper durch Imidokarbonat-Bindungen an das Polymer gebunden sind.
5. Immunoadsorbens nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß als Polymer Dextran gewählt ist.
6. Immunoadsorbens nach einem der Ansprüche 2 bis 5. dadurch gekennzeichnet, daß die Partikel (10) Glaskugeln als Kern (12) aufweisen, die von Mikrokugeln (14) umhüllt sind.
7. Immunoadsorbens nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Glaskugeln (12) einen Durchmesser zwischen 5 und 500 Mikron und die Mikrokugeln (14) einen Durchmesser zwischen 5 Millimikron und 1 Mikron aufweisen.
8. Immunoadsorbens nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß die spezifische Oberfläche der Partikelmasse zwischen 0,8 und 1,0 m2/g beträgt.
9. Verfahren zum Herstellen eines wiederbenutzbaren immobilisierten Immunoadsorbens nach einem der Ansprüche I bis 8, gekennzeichnet durch folgende Schritte:
Aktivieren einer Partikclmasse für die Bindung eines Polymermaterials,
Binden eines Polymermaterials an die aktivierie Partikelmasse.
Aktivieren des Polymermaterials für die Bindung von Antikörpern,
Binden von für die Antigene spezifische Antikörpern an das Polymermaterial.
10. Verwendung eines wiederbenutzbaren immobilisierten Immunoadsorbens nach einem der Ansprüche I bis 8 bei einem Verfahren zur quantitativen Analyse der Antigenkonzentratioi. einer Probenlösung durch Radioimmunoanalyse, bei welchem Verfahren die Probenlösung mit einer bekannten Menge markierter Antigene gemischt und die gemischte Probenlösung mit dem Immunoadsorbens in Kontakt gebracht wird, um eine Bindung eines Teils der markierten und unmarkierten Antigene an
den Antikörpern zu bewirken, und der Anteil der gebundenen und/oder der nicht gebundenen markierten Antigene ermittelt und mit Standardkurven verglichen wird.
DE2612948A 1973-03-19 1976-03-26 Wiederbenutzbares immobilisiertes Immunoadsorbens für ein Verfahren zur quantitativen Analyse der Antigenkonzentration einer Probenlösung Expired DE2612948C2 (de)

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