DE3040005A1 - Enzyme-stabiliser mixt. reducing inactivation after freeze-drying - contg. cane sugar and bovine or human serum albumin pref. in aq. soln. - Google Patents

Enzyme-stabiliser mixt. reducing inactivation after freeze-drying - contg. cane sugar and bovine or human serum albumin pref. in aq. soln.

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DE3040005A1 DE19803040005 DE3040005A DE3040005A1 DE 3040005 A1 DE3040005 A1 DE 3040005A1 DE 19803040005 DE19803040005 DE 19803040005 DE 3040005 A DE3040005 A DE 3040005A DE 3040005 A1 DE3040005 A1 DE 3040005A1
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    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions

Abstract

Enzyme-stabiliser mixt. contains cane sugar and bovine- or human serum albumin. The stabiliser mixt. is pref. used as an aq. soln. in which sugar:albumin wt. ratio is 1:0.4 to 1:2.5 (1:1 to 1:2.5) esp. 1:1 to 1:2, at a cane sugar content of 0.5-10 (1-10) esp. 2.5-10% (wt./vol.). An opt. freeze-dried aq. enzyme-contg. compsn. stabilised with the sugar- and albumin-contg. mixt. is claimed. Enzyme-contg. compsns. are used (i) in clinical analysis, (ii) as standard enzyme compsns. and (iii) as catalyst. Enzyme compsn. inactivation after freeze-drying and storage is reduced.

Description

Enzymstabilisator Enzyme stabilizer

Die Erfindung bezieht sich auf die Stabilisierung von Enzymen und betrifft insbesondere Stabilisatoren für enzymenthaltende Zusammensetzungen, um eine Inaktivierung der Enzyme zu verhindern und die enzymenthaltenden Zusammensetzungen zu stabilisieren.The invention relates to the stabilization of enzymes and particularly relates to stabilizers for enzyme-containing compositions to prevent inactivation of the enzymes and the enzyme-containing compositions to stabilize.

Enzymenthalt ende Zusammensetzungen werden gewöhnlich in klinischen Analysen als enzymenthaltende Wirkstoffe, Standardenzympräparate oder als Katalysatoren in Form von löslichen Enzympräparaten verwendet. Es ist jedoch notwendig, die Aktivität cler Enzyme derartiger enzymenthaltender Zusammensetzungen zu stabilisieren, da eine derartige Aktivität auf Grund des Gefriertrocknen, Lagern und Wiederbereitstellen abnimmt.Enzyme-containing compositions are commonly used in clinical applications Analyzes as active ingredients containing enzymes, standard enzyme preparations or as catalysts used in the form of soluble enzyme preparations. However, it is necessary to the activity to stabilize the enzymes of such enzyme-containing compositions, since such activity due to freeze drying, storage and retrieval decreases.

Bisher wurden Proteinpräparate, wie z. B. Rinderalbuminserum (BSA) und Humanalbuminserum (HSA) als Stabilisatoren für enzymenthaltende Zusammensetzungen verwendet. Man dachte, daß diese Albumine auf die Enzyme eine stabilisierende Wirkung haben, indem sie als Schutzkolloide für die Enzyme in den enzymenthaltenden Zusammensetzungen wirken. Ebenfalls wurde Rohrzucker und seine Abkömmlinge zur Stabilisierung gewisser enzymenthaltenden Zusammensetzungen verwendet.So far, protein preparations such. B. Beef Albumin Serum (BSA) and human albumin serum (HSA) as stabilizers for enzyme-containing compositions used. It was thought that these albumins had a stabilizing effect on the enzymes by acting as protective colloids for the enzymes in the enzyme-containing compositions works. Cane sugar and its derivatives were also used for stabilization purposes enzyme-containing compositions used.

Eine enzymenthaltende Zusammensetzung, die entweder mit BSA , HSA oder mit Rohrzucker alleine stabilisiert wurde, neigt jedoch beim Gefriertrocknen und darauffolgenden Lagern zur Inaktivierung. Setzt man gefriergetrocknete Präparate starken Deaktivierungsbedingungen (370C oder 400C) aus, so wird eine merkliche Veränderung der Aktivität der Enzyme im Verlauf der Zeit bewirkt.An enzyme-containing composition that is compatible with either BSA, HSA or stabilized with cane sugar alone, but tends to be freeze-drying and subsequent storage for inactivation. If you put freeze-dried preparations strong deactivation conditions (370C or 400C), there will be a noticeable change the activity of the enzymes over time.

Man hat herausgefunden, daß ein Stabilisator, der sowohl Proteine als auch Rohrzucker enthält,bewirkt, daß enzymenthaltende Zusammensetzungen ihre Enzym-Aktivität ungeachtet des Gefriertrocknens und darauffolgenden Lagerns beibehalten.It has been found that a stabilizer that works with both proteins as well as cane sugar causes enzyme-containing compositions to do their job Maintain enzyme activity regardless of freeze-drying and subsequent storage.

Eine derartige Stabilisierung kann nicht durch die Verwendung entweder von Rohrzucker oder Albumin alleine erreicht werden.Such stabilization cannot be achieved by using either can be achieved from cane sugar or albumin alone.

Es ist daher Aufgabe der vorliegenden Erfindung einen Enzymstabilisator zur Schaffung stabilisierter enzymenthaltender Zusammensetzungen zu schaffen, der weniger zur Inaktivierung auf Grund des Gefriertrocknens neigt. Dabei sollen die enzymenthaltenden Zusammensetzungen sowohl während als auch nach dem Gefriertrocknen eine stabilisierte Enzym-Aktivität aufweisen. Weiter sollen gefriergetrocknete enzymenthaltende Zusammensetzungen geschaffen werden, die eine stabilisierte Enzym-Aktivität haben.It is therefore an object of the present invention to provide an enzyme stabilizer to create stabilized enzyme-containing compositions, the less prone to inactivation due to freeze-drying. The enzyme-containing compositions both during and after freeze drying a stabilized Have enzyme activity. Next should be freeze-dried Enzyme-containing compositions are created which have a stabilized enzyme activity to have.

Diese Aufgabe wird durch die in Anspruch 1 und 6 angegebene Erfindung gelöst.This object is achieved by the invention specified in claims 1 and 6 solved.

Mit der Erfindung werden Stabilisatoren für Enzyme geschaffen. Ein Stabilisator für Enzyme gemäß der vorliegenden Erfindung besteht in einer Zusammensetzung,die Rohrzucker in Verbindung entweder mit Rinderalbuminserum (BSA) oder Humanalbuminserum (HSA) enthält. Der Enzymstabilisator gemäß der Erfindung besteht in einer Ausführungsform in einer wässerigen Zusammensetzung, die Rohrzucker und BSA oder HSA in einem entsprechenden Gewichtsverhältnis zwischen 1 : 0,4 und 1 : 2,5 bei einem Rohrzuckergehalt zwischen 0,5 und 10,0 (Gew«Vol.) enthält und in einer anderen Ausführungsform in einer wässerigen Zusammensetzung die Rohrzucker und BSA oder HSA in einem entsprechenden Gewichtsverhältnis zwischen 1 : 1 und 1 : 2,5 mit einem Rohrzuckergehalt zwischen 1,0 und 10,0 % (GexJVoQ und in einer weiteren Ausführungsform aus einer wässerigen Zusammensetzung,die Rohrzucker, BSA oder HSA in einem entsprechenden Gewichtsverhältnis zwischen 1 : 1 und 1 : 2 mit einem Rohrzuckergehalt zwischen 2,5 und 15,0 % (Gew/Vol.) enthält.The invention provides stabilizers for enzymes. A Stabilizer for enzymes according to the present invention consists in a composition which Cane sugar combined with either beef albumin serum (BSA) or human albumin serum (HSA) contains. The enzyme stabilizer according to the invention consists in one embodiment in an aqueous composition, the cane sugar and BSA or HSA in a corresponding one Weight ratio between 1: 0.4 and 1: 2.5 with a cane sugar content between 0.5 and 10.0 (wt. «Vol.) Contains and in another embodiment in an aqueous Composition the cane sugar and BSA or HSA in an appropriate weight ratio between 1: 1 and 1: 2.5 with a cane sugar content between 1.0 and 10.0% (GexJVoQ and in a further embodiment from an aqueous composition, the cane sugar, BSA or HSA in a corresponding weight ratio between 1: 1 and 1: 2 with a cane sugar content between 2.5 and 15.0% (w / v).

In anderer Hinsicht umfaßt die Erfindung stabilisierte enzymenthaltende Zusammensetzungen, die Rohrzucker in Kombination entweder mit BSA oder HSA enthalten. In einer Ausführungsform enthält die enzymenthaltende Zusammmensetzung Rohrzucker und BSA oder HSA in einem entsprechenden Gewichtsverhältnis zwischen 1 : 0,4 und 1 : 2,5 bei einem Rohrzuckergehalt zwischen 1,0 und 10,0 % (Gew/Vol». In einer anderen Ausführungsform enthält die Zusammensetzung Transaminase, Phosphatase oder Dehydrogenase und in einer weiteren Ausführungsform enthält die Zusammensetzung Glutamat-Oxalacetat-Transaminase, Glutamat-Pyruvat-Transaminase, alkalische Phosphatase oder Laktat-Dehydrogenase als Enzyme.In other respects, the invention encompasses stabilized enzyme-containing ones Compositions containing cane sugar in combination with either BSA or HSA. In one embodiment includes the enzyme-containing composition Cane sugar and BSA or HSA in a corresponding weight ratio between 1: 0.4 and 1: 2.5 with a cane sugar content between 1.0 and 10.0% (w / v ». In another embodiment the composition contains transaminase, phosphatase or dehydrogenase and in a further embodiment the composition contains Glutamate oxaloacetate transaminase, glutamate pyruvate transaminase, alkaline phosphatase or lactate dehydrogenase as enzymes.

In einer weiteren Ausführungsform unfaßt die Erfindung gefriergetrocknete Präparate stabilisierter enzymenthaltender Zusammensetzungen.In a further embodiment the invention comprises freeze-dried Preparations of stabilized enzyme-containing compositions.

zinke enzymenthaltende Zusammensetzung, die gemäß der Erfindung stabilisiert wurde, kann ohne wesentliche Verminderung der Enzymaktivität gefriergetrocknet werden, wobei das gefriergetrocknete Produkt seine Enzymaktivität über eine längere Zeitdauer behält.zinc enzyme-containing composition stabilizing according to the invention can be freeze-dried without any significant reduction in enzyme activity, whereby the freeze-dried product retains its enzyme activity for an extended period of time retains.

Ausführungsbeispiele der Erfindung werden im folgenden beschrieben.Embodiments of the invention are described below.

Der erfindungsgemäße Enzymstabilisator ist eine Zusammensetzung,die Rohrzucker in Verbindung entweder mit BSA oder HSA enthält. Besondere Verhältnisse von Rohrzucker zu BSA oder HSA in dem Stabilisator stabilisieren die Enzyme auf bezeichnende Weise. Das Gewichtsverhältnis des Rohrzuckers zu BSA oder HSA in dem Stabilisator bewegt sich von 1 : 0,4 bis 1 : 2,5. Ein bevorzugtes Verhältnis besteht aus 1 Teil Rohrzucker zu 1 bis 2,5 Teilen BSA oder HSA und ein noch bevorzugteres Verhältnis besteht aus 1 Teil Rohrzucker zu 1 bis 2 Teilen BSA oder HSA.The enzyme stabilizer of the present invention is a composition which Contains cane sugar in association with either BSA or HSA. Special conditions from cane sugar to BSA or HSA in the stabilizer stabilize the enzymes on significant way. The weight ratio of the cane sugar to BSA or HSA in the Stabilizer ranges from 1: 0.4 to 1: 2.5. A preferred relationship exists from 1 part cane sugar to 1 to 2.5 parts BSA or HSA and one still more preferred ratio consists of 1 part cane sugar to 1 to 2 parts BSA or HSA.

Der oben erwähnte Stabilisator enthält Rohrzucker in Mengen von 0,5 bis 10,0 % (Gew./VoL) vorzugsweise 1,0 bis 10,0 % (Gew./Vol.) und noch bevorzugter 2,5 bis 10,0 z (Gew/Vol.).The stabilizer mentioned above contains cane sugar in amounts of 0.5 to 10.0% (w / v), preferably 1.0 to 10.0% (w / v), and more preferably 2.5 to 10.0 z (w / v).

Der erfindungsgemäße Enzymstabilisator kann zur Stabilisierung der verschiedensten Enzyme verwendet werden. Enzyme, wie z. B. Transaminase, Phosphatase und Dehydrogenase und besondere Enzyme wie z. B. Glutamat-Oxalacetat-Transaminase (GOT),Glutamat-Pyruvat-Transaminase (GPT), alkalische Phosphatase (ALP) und Laktat-Dehydrogenase (LDH) werden mit dem vorliegenden Stabilisator auf bezeichnende Weise stabilisiert.The enzyme stabilizer according to the invention can be used to stabilize the various enzymes can be used. Enzymes such as B. transaminase, phosphatase and dehydrogenase and special enzymes such as. B. Glutamate oxaloacetate transaminase (GOT), glutamate pyruvate transaminase (GPT), alkaline phosphatase (ALP) and lactate dehydrogenase (LDH) are significantly stabilized with the present stabilizer.

Im Handel erhältliche Stoffe können zur Herstellung der Erfindung verwendet werden. Der erfindungsgemäße Enzymstabilisator wird hergestellt, indem bestimmte Mengen Rohrzucker und BSA oder HSA in destilliertem Wasser aufgelöst werden. Eine bestimmte vorgeschriebene Menge des Stabilisators wird dann zu einem Enzym oder zu einer enzymenthaltenden Zusammensetzung hinzugegeben. Alternativ kann Rohrzucker, Albumin und Enzym oder eine enzymenthaltende Zusammensetzung in bestimmten vorgeschriebenen Mengen destilliertem Wasser gleichzeitig zugegeben und zur Herstellung einer fertigen Mischung, die von jedem die gewünschte Konzentration enthält, gemischt werden.Commercially available fabrics can be used to make the invention be used. The enzyme stabilizer according to the invention is produced by certain amounts of cane sugar and BSA or HSA can be dissolved in distilled water. A certain prescribed amount of the stabilizer then becomes an enzyme or added to an enzyme containing composition. Alternatively, cane sugar, Albumin and enzyme or an enzyme-containing composition in certain prescribed Quantities of distilled water are added at the same time and used to make a finished Mixture containing the desired concentration of each can be mixed.

Das Präparat einer enzymenthaltenden Zusammensetzung und des Stabilisators kann unmittelbar nach der Herstellung verwendet oder gefriergetrocknet und darauffolgend nach Wiederbereitstellung mittels destillierten Wassers verwendet werden.The preparation of an enzyme-containing composition and the stabilizer can be used immediately after manufacture or freeze-dried and subsequently after recovery used by means of distilled water will.

Die Erfindung soll durch die folgenden Beispiele erläutert werden, in denen Änderungen der Enzymaktivität der Proben bestimmt wurden, wobei die Proben eine wässerige Lösung eines von verschiedenen Enzymen und eine besondere Stabilisatorverbindung enthielten. Verschiedene Stabilisatorverbindungen sind in Tabelle 1 gezeigt. Besonderer Rohrzucker (hergestellt von Kishida Chemical Co., Ltd.) und eine BFA-Fraktion V (hergestellt von Armour Pharmazeutical Co., Ltd.) wurden in allen Proben verwendet.The invention is to be illustrated by the following examples, in which changes in the enzyme activity of the samples were determined, the samples an aqueous solution of one of several enzymes and a particular stabilizer compound contained. Various stabilizer compounds are shown in Table 1. Special Cane sugar (manufactured by Kishida Chemical Co., Ltd.) and a BFA fraction V (manufactured by Armor Pharmaceutical Co., Ltd.) were used in all samples.

Tabelle 1 Gehalt von Stabilisatoranteilen in den Proben Proben Nr. BSA oder HSA Rohrz ucker 10 % 5 % 2,5 % 1,0 % 0,5 % Gew./Vol. Gew./Vol Gew./Vol.Gew./Vol. 10% Gew./Vol 1 Gew./Vol. Gew./Vol Gew./Vol. 6 11 16 21 5% Gew./Vol. 2 7 12 17 22 2,5% Gew./Vol. 3 8 13 18 23 1,0% Gew . /Vol . 4 9 14 19 24 0,58 Gew./Vol. 5 10 15 20 25 Jede Probe wurde hergestellt, indem man die erforderliche Menge Rohrzucker und BSA, wie in Tabelle 1 gezeigt, in destilliertem Wasser gelöst hat (z. B. Probe 1, 10 mg Rohrzucker und 10mg BSA) und 10 ßl Enzymlösung hinzugefügt hat (etwa 25000 bis 30000 mU bei 370C), woraufhin ausreichend destilliertes Wasser hinzugefügt wurde um ein Endvolumen von 100 ml zu erreichen.Table 1 Content of stabilizer components in the samples Sample no. BSA or HSA Cane sugar 10% 5% 2.5% 1.0% 0.5% Weight / volume W / v w / v w / v 10% w / v 1 w / v W / v w / v 6 11 16 21 5% w / v 2 7 12 17 22 2.5% w / v 3 8 13 18 23 1.0% wt. / Vol. 4 9 14 19 24 0.58 w / v 5 10 15 20 25 Each sample was prepared by dissolving the required amount of cane sugar and BSA as shown in Table 1 in distilled water (e.g. sample 1, 10 mg cane sugar and 10 mg BSA) and adding 10 μl of enzyme solution (about 25,000 to 30000 mU at 370C), whereupon sufficient distilled water was added to achieve a final volume of 100 ml.

Lösungsteilmengen von 1 ml wurden in Ampullen gefüllt, gefriergetrocknet und bei 400C über verschieden lange Zeiträume gelagert.1 ml aliquots of solution were filled into ampoules, freeze-dried and stored at 400C for different periods of time.

Beispiel 1: Stabilisierung von Glutamat-Oxalacetat-Transaminase (GOT)-Aktivität Die verschiedenen Proben enthielten eine Flüssigkeitsfraktion GOT (s-GOT), die sich über den Zellen abscheidet, als Enzym. Die gefriergetrockneten Präparate wurden mit 1,0 ml destilliertem Wasser wieder bereitgestellt und 0,2 ml Teilmengen wurden von jeder Ampulle genommen.Example 1: Stabilization of Glutamate Oxaloacetate Transaminase (GOT) Activity The different samples contained a liquid fraction GOT (s-GOT), which deposited over the cells as an enzyme. The freeze-dried preparations were Resupplied with 1.0 ml of distilled water and 0.2 ml aliquots were made taken from each ampoule.

Das GOT-Aktivitätsniveau (mU/ml bei 370C) jeder Teilmenge wurde mittels eines Raten-Analysenverfahrens unter Verwendung von LKB 8600-GOT-W Testreagenz (hergestellt von Boehringer Co., Ltd. ), untersucht und die Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt. Das nach verschiedenen Lagerzeiten verbleibende GOT-Aktivitätsniveau wird als prozentuales Verhältnis der unmittelbar nach dem Gefriertrocknen verbleibenden Aktivität ausgedrückt, wobei letzteres als 100 % definiert ist.The GOT activity level (mU / ml at 370C) of each aliquot was measured using a rate analysis method using LKB 8600-GOT-W test reagent (manufactured by Boehringer Co., Ltd. ), and the results are shown in Table 2. The GOT activity level remaining after various storage times is expressed as a percentage Expressed the ratio of the activity remaining immediately after freeze-drying, the latter being defined as 100%.

Tabelle 2 Aktivitätsänderung von GOT in Abhängigkeit von der Zeit Proben Nr. unmittelbar verstrichene Lagerzeit nach dem nach Gefrier- 1 Woche 1 Monat 2 Monate 3 Monate trocknen 1 100 100.6 101.2 96.3 94.9 2 100 101.9 98.9 91.8 (75.4) 3 100 81.5 (72.0) (62.5) (57.8) 4 100 87.3 (65.0) (58.9) - 5 100 (75.1) - - - 6 100 98.0 85.2 (53.6) - 7 100 101.6 91.0 85.4 (77.0) 8 100 94.5 90.6 81.7 (73.0) 9 100 83.3 (63.8) (52.2) - 10 100 80.1 (55.9) - - 11 100 89.4 (60.5) 12 100 102.5 (71.1) (55.1) - 13 100 100.6 94.2 81.9 (57.8) 14 100 96.6 90.9 (74.3) (51.8) 15 100 90.0 (59.2) 16 100 77.3 - - - 17 100 (77.6) (50.1) - - 18 100 91.3 (67.5) - - 19 100 94.1 81.9 (58.8) - 20 100 95.2 (72.5) (55.5)- 21 100 (64.2) - - - 22 100 - - - - 23 100 (72.1) (64.3) - - 24 100 (77.6) (56.9) - - 25 100 86.7 (63.2) (51.4) - Bemerkungen: -: GOT Aktivitätsniveau weniger als 50 % (): GOT Aktivitätsniveau 50 % bis 80 % Diese Ergebnisse zeigen, daß eine bezeichnende Stabilisierungswirkung in den Proben Nr. 1, 2, 6, 7, 8, 12, 13, 14, .l8 und 19 erhalten wurde.Table 2 Change in activity of GOT as a function of time Sample No. Immediate Elapsed Storage Time after after Freezer 1 week 1 month 2 months 3 months dry 1 100 100.6 101.2 96.3 94.9 2 100 101.9 98.9 91.8 (75.4) 3 100 81.5 (72.0) (62.5) (57.8) 4 100 87.3 (65.0) (58.9) - 5 100 (75.1) - - - 6 100 98.0 85.2 (53.6) - 7 100 101.6 91.0 85.4 (77.0) 8 100 94.5 90.6 81.7 (73.0) 9 100 83.3 (63.8) (52.2) - 10 100 80.1 (55.9) - - 11 100 89.4 (60.5) 12 100 102.5 (71.1) (55.1) - 13 100 100.6 94.2 81.9 (57.8) 14 100 96.6 90.9 (74.3) (51.8) 15 100 90.0 (59.2) 16 100 77.3 - - - 17 100 (77.6) (50.1) - - 18 100 91.3 (67.5) - - 19 100 94.1 81.9 (58.8) - 20 100 95.2 (72.5) (55.5) - 21 100 (64.2) - - - 22 100 - - - - 23 100 (72.1) (64.3) - - 24 100 (77.6) (56.9) - - 25 100 86.7 (63.2) (51.4) - Remarks: -: GOT activity level less than 50% (): GOT activity level 50% to 80% These results show that a significant stabilizing effect was found in Samples Nos. 1, 2, 6, 7, 8, 12, 13, 14,. 18 and 19 was obtained.

Um weiter die Wirkung des Enzymstabilisators gemäß der Erfindung darzustellen, wurde eine Reihe von 4 Lösungen mitochondrialem GOT (m-GOT) hergestellt. Die erste Lösung enthielt Enzyme ohne irgendein hinzugefügtes Stabilisierungsmittel und die zweite Lösung enthielt Enzyme mit 10 % (Gew./Vol.) BSA, die dritte Lösung enthielt Enzyme mit 10 % (Gew./Vol.) Rohrzucker und die vierte Lösung enthielt Enzyme sowohl mit 10 % (Gew./Vol.) BSA und 10% (Gew./Vol.) Rohrzucker, d. h. eine besondere Form des Stabilisators. Eine ähnliche Reihe Lösungen wurde hergestellt, indem man als Enzym die sich über der Zellen abscheidende Flüssigkeitsfraktion von GOT (s-GOT) verwendete.In order to further illustrate the effect of the enzyme stabilizer according to the invention, a series of 4 mitochondrial GOT (m-GOT) solutions was prepared. The first Solution contained enzymes without any added stabilizer and that second solution contained enzymes with 10% (w / v) BSA, the third solution contained Enzymes with 10% (w / v) cane sugar and the fourth solution contained enzymes both with 10% (w / v) BSA and 10% (w / v) cane sugar, i.e. H. a special shape of the stabilizer. A similar series of solutions was prepared by using as Enzyme the liquid fraction of GOT (s-GOT) deposited on the cells used.

Die Enzymaktivität jeder Lösung in den zwei Reihen wurde unmittelbar vor dem Gefriertrocknen, unmittelbar danach und nach zwei Monaten Lagerzeit bei 40 QC gemessen.The enzyme activity of each solution in the two rows became immediate before freeze-drying, immediately after and after two months of storage 40 QC measured.

Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 gezeigt.The results are shown in Table 3.

Tabelle 3 Aktivitätsniveau (mU) GOT vor Gefrier- nach Gefrier-- nach 2 Monaten mit Additiv trocknen trocknen bei 400C ohne Stabili- sator m-GOT 142.9 1.3 0 s-GOT 132.9 1.0 0 ~~~~~ 10 Gew./Vol % BSA m-GOT 142.4 140.8 11.4 s-GOT 133.2 72.0 7.5 10 Gew./Vol.% Rohrz ucker m-GOT 142.9 3.8 0 s-GOT 132.5 13.1 0 10 Gew./Vol. % BSA und 10 Gea./Vol.% Rohrucker m-GOT 142.6 142.4 137.3 s-GOT 132.9 130.3 129.6 Diese Versuche zeigen, daß eine GOT-Lösung mit dem erfindungsgemäßen Stabilisator aus Rohrzucker und BSA weit besser stabilisiert war als eine, die nur Rohrzucker oder nur BSA enthielt. Sogar bei strengen Inaktivierungsversuchen, die eine 2-monatige Lagerung der gefriergetrockneten Lösung bei 400C umfaßten wurde die GOT-Aktivität mittels Verwendung des erfindungsgemäßen Stabilisators beibehalten.Table 3 Activity level (mU) GOT before freezing - after freezing - after 2 months dry with additive dry at 400C without stabilization sator m-GOT 142.9 1.3 0 s-GOT 132.9 1.0 0 ~~~~~ 10 w / v% BSA m-GOT 142.4 140.8 11.4 s-GOT 133.2 72.0 7.5 10% w / v Cane sugar m-GOT 142.9 3.8 0 s-GOT 132.5 13.1 0 10 w / v % BSA and 10 Gea./Vol.% Cane sugar m-GOT 142.6 142.4 137.3 s-GOT 132.9 130.3 129.6 These experiments show that a GOT solution with the stabilizer according to the invention made from cane sugar and BSA was far better stabilized than one which contained only cane sugar or only BSA. Even in strict inactivation tests, which included storage of the freeze-dried solution at 40 ° C. for 2 months, the GOT activity was retained by using the stabilizer according to the invention.

Beispiel 2 Stabilisation von Glutemat-Pyrovat-Transaminase (GPT) -Aktivität Die verschiedenen Proben enthielten GPT als Enzym.Example 2 Stabilization of Glutemate Pyrovate Transaminase (GPT) Activity The various samples contained GPT as an enzyme.

Die gefriergetrockneten Präparate wurden mit 1 ml destilliertem Wasser wieder bereitgestellt und zwei 0,2 ml Teilmengen wurden von jeder Ampulle entnommen.The freeze-dried preparations were washed with 1 ml of distilled water replenished and two 0.2 ml aliquots were withdrawn from each vial.

Das GPT-Aktivitätsniveau jeder Teilmenge wurde mittels Raten-Analyseverfahren unter Verwendung von LKB 8600-GPT UV Testwirkstoff (hergestellt von Boehringer Co., Ltd,), gemessen und die Ergebnisse sind in Tabelle 4 dargestellt. Das verbleibende GPT-Aktivitätsniveau nach verschiedenen Lagerzeiten wird als prozentuales Verhältnis der unmittelbar nach dem Gefriertrocknen verbleibenden Aktivität, die als 100 % definiert ist, ausgedrückt.The GPT activity level of each subset was determined using rate analysis methods using LKB 8600-GPT UV test drug (manufactured by Boehringer Co., Ltd,), and the results are shown in Table 4. The remaining GPT activity level after different storage times is expressed as a percentage the activity remaining immediately after freeze-drying, which is considered to be 100% is defined, expressed.

Tabelle 4 Aktivitätsänderung von GPT in Abhängigkeit von der Zeit urnittelbar verstrichene Lagerzeit Proben Nr. nach dan - Gefriert 1 Woche 1 Monat 2 Monate 3 Monate trocknen 1 100 96.1 93.3 89.3 (78.4) 2 100 86.2 80.7 (72.4) - 3 100 (59.3) ~ ~ ~ 4 100 82.1 (67.2) - - 5 100 (78.3) (68.8) - - 6 100 98.3 92.7 86.3 (72.8) 7 100 98.9 95.4 94.1 92.2 8 100 89.8 81.3 (73.5) - 9 100 (76.3) (62.9) - - 10 100 69.1 - - - 11 100 93.2 (69.6) - - 12 100 99.5 92.3 87.6 (78.0) 13 100 92.1 88.7 82.4 (75.1) 14 100 86.3 82.5 (79.8) - 15 100 (73.8) - - - 16 100 (79.4) - - - 17 100 82.5 (68.1) - - 18 100 92.1 89.0 83.5 - 19 100 90.6 87.3 (78.9) - 20 100 (78.9) - - - 21 100 (73.4) - - - 22 100 (67.6) - - - 23 100 (79.8) - - - 24 100 90.3 (80.0) - - 25 100 88.6 (71.1) - - Bemerkungen: - : GPT-Aktivitätsniveau weniger als 50 % (): GPT-Aktivitätsniveau 50 bis 80 % Diese Ergebnisse zeigen, daß eine bezeichnende Stabilisierungswirkung in den Proben 1, 2, 6, 7, 8, 12, 13, 14, 18 und 19 erhalten wurde.Table 4 Change in activity of GPT as a function of time Immediately elapsed storage time Sample No. after dan - Freezes 1 week 1 month 2 months 3 months dry 1 100 96.1 93.3 89.3 (78.4) 2 100 86.2 80.7 (72.4) - 3 100 (59.3) ~ ~ ~ 4 100 82.1 (67.2) - - 5 100 (78.3) (68.8) - - 6 100 98.3 92.7 86.3 (72.8) 7 100 98.9 95.4 94.1 92.2 8 100 89.8 81.3 (73.5) - 9 100 (76.3) (62.9) - - 10 100 69.1 - - - 11 100 93.2 (69.6) - - 12 100 99.5 92.3 87.6 (78.0) 13 100 92.1 88.7 82.4 (75.1) 14 100 86.3 82.5 (79.8) - 15 100 (73.8) - - - 16 100 (79.4) - - - 17 100 82.5 (68.1) - - 18 100 92.1 89.0 83.5 - 19 100 90.6 87.3 (78.9) - 20 100 (78.9) - - - 21 100 (73.4) - - - 22 100 (67.6) - - - 23 100 (79.8) - - - 24 100 90.3 (80.0) - - 25 100 88.6 (71.1) - - Comments: -: GPT activity level less than 50% (): GPT activity level 50 to 80% These results show that there was a significant stabilizing effect in samples 1, 2, 6, 7, 8, 12, 13, 14, 18 and 19 was obtained.

Beispiel 3 Stabilisierung von alkalischer Phosphatase (ALP)-Aktivität Die verschiedenen Proben enthielten ALP als Enzym.Example 3 Stabilization of alkaline phosphatase (ALP) activity The various samples contained ALP as an enzyme.

Das gefriergetrocknete Präparat wurde mit 1,0 ml destilliertem Wasser wieder bereitgestellt und zwei o,2 ml Teilmengen wurden von jeder Ampulle entnommen. Das ALP-Aktivitätsniveau jeder Teilmenge wurde mittels des Raten-Analysenverfahrens unter Verwendung von LKB 8600-ALP Aktivitätsbestimmungsreagenz (hergestellt von Boehringer Co., Ltd.), gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 gezeigt.The freeze-dried preparation was mixed with 1.0 ml of distilled water replenished and two 0.2 ml aliquots were withdrawn from each vial. The ALP activity level of each subset was determined by the rate analysis method using LKB 8600-ALP activity determination reagent (manufactured by Boehringer Co., Ltd.). The results are shown in Table 5.

Das ALP-Aktivitätsniveau nach verschiedenen Lagerzeiten wird als prozentuales Verhältnis der Aktivität unmittelbar nach dem Gefriertrocknen, die als 100 % definiert ist, ausgedrückt.The ALP activity level after different storage times is expressed as a percentage Ratio of activity immediately after freeze-drying, which is defined as 100% is expressed.

Tabelle 5 Aktivitätsänderung von ALP in Abhängigkeit von der Zeit urmittelbar verstrichene Lagerzeit Proben Nr. nach dem Gefrier- 1 Woche 1 Monat 2 Monate 3 Monate trocknen 1 100 96.8 92.2 88.9 (76.3) 2 100 88.2 80.6 (73.4) - 5 100 89.1 (75.0) - - 6 100 1 (80.0) (80.0) (68.5) - 7 100 99.1 97.3 95,2 93.6 8 100 99.4 95-.8 88.6 (74.3) 11 100 95.3 (76.6) - - 12 100 91.5 82.3 (70.8) - 13 100 99.2 91.7 86.3 (76.6) 14 100 93.3 89.6 82.3 (75.2) 17 100 87.7 (72.0) (53.4) - 18 100 91.6 85.2 (74.0) - 19 100 93.5 88.8 (79.3) (58.1) 20 100 89.2 (67.6) - - 23 100 86.5 (62.8) - - 24 100 92.1 80.5 (51.7) - 25 100 91.2 (71.3) (50.3) - Bemerkungen: - : ALP-Aktivitätsniveau weniger als 50 % (): ALP-Aktivitätsniveau 50 bis 80 % Diese Ergebnisse zeigen, daß bei den Proben 1, 2, 6, 7, 8, 12, 13, 14, 18 und 19 eine bemerkenswerte Stabilisierungswirkung erhalten wurde.Table 5 Change in activity of ALP as a function of time immediately elapsed storage time Sample No. after Freezer 1 week 1 month 2 months 3 months dry 1 100 96.8 92.2 88.9 (76.3) 2 100 88.2 80.6 (73.4) - 5 100 89.1 (75.0) - - 6 100 1 (80.0) (80.0) (68.5) - 7 100 99.1 97.3 95.2 93.6 8 100 99.4 95-.8 88.6 (74.3) 11 100 95.3 (76.6) - - 12 100 91.5 82.3 (70.8) - 13 100 99.2 91.7 86.3 (76.6) 14 100 93.3 89.6 82.3 (75.2) 17 100 87.7 (72.0) (53.4) - 18 100 91.6 85.2 (74.0) - 19 100 93.5 88.8 (79.3) (58.1) 20 100 89.2 (67.6) - - 23 100 86.5 (62.8) - - 24 100 92.1 80.5 (51.7) - 25 100 91.2 (71.3) (50.3) - Notes: -: ALP activity level less than 50% (): ALP activity level 50 to 80% These results show that in samples 1, 2, 6, 7, 8, 12, 13, 14, 18 and 19 a remarkable Stabilizing effect was obtained.

Beispiel 4 Stabilisierung von Laktat-Dehydrogenase (LDH)-Aktivität Die verschiedenen Proben enthielten LDH als Enzym.Example 4 Stabilization of lactate dehydrogenase (LDH) activity The various samples contained LDH as an enzyme.

Die gefriergetrockneten Präparate wurden mit 1,0 ml destilliertem Wasser wi-eder bereitgestellt und es wurden zwei 0,2 ml Teilmengen von jeder Ampulle entnommen. Das LDH-Aktivitätsniveau jeder Teilmenge wurde mittels des Raten-Analysenverfahren unter Verwendung von LKB 8600-LDH Aktivitätsbestimmungsreagenz (hergestellt von Boehringer Co., Ltd.), bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 6 dargestellt.The freeze-dried preparations were distilled with 1.0 ml Water was again provided and two 0.2 ml aliquots were made from each vial taken. The LDH activity level of each subset was determined by the rate analysis method using LKB 8600-LDH activity determination reagent (manufactured by Boehringer Co., Ltd.). The results are shown in Table 6.

Das nach den verschiedenen Lagerzeiten verbleibende Aktivitätsniveau ist als prozentuales Verhältnis der unmittelbar nach dem Gefriertrocknen verbleibenden Aktivität, die als 100 % definiert ist, ausgedrückt.The level of activity remaining after the various storage times is as a percentage of the remaining immediately after freeze drying Activity defined as 100% expressed.

Tabelle 6 Aktivitätsänderung von LDH in Abhängigkeit von der Zeit urncittelbar- verstrichene Lagerzeit Proben Nr. nach dem Gefrier- 1 Woche 1 Monat 2 Monate 3 Monate trocknen 1 100 97.5 92.5 88.7 (75.1) 2 100 89.3 84.4 (76.1) - 6 100 89.7 81.1 (58.5) - 7 100 99.5 98.3 95.7 91.8 8 100 99.5 97.3 89.7 (79.6) 11 100 96.8 (76.8) (51.6)' - 12 100 92.4 85.8 (51.5) - - i3 100 94.0 90.1 84.7 (76.1) 14 100 99.5 91.3 85.9 (74.1) 17 100 - 92.3 (71.6) (54.2) - 18 100 94.3 89.7 (77.1) (57.6) 19 100 96.8 90.1 (78.3) - 20 100 90.2 (61.6) - - 23 100 90.1 (65.6) - - 24 100 93.5 80.9 (55.5) - 25 100 93.0 (71.8) - - Bemerkungen: - : LDH-Aktivitätsniveautweniger als 50 % (): LDH-Aktivitätsniveau 50 bis 80 % Diese Ergebnisse zeigen eine bemerkenswerte Stabilisierungswirkung der Proben 1, 2, 6, 7, 8, 12, 13, 14, 18 und 19.Table 6 Change in activity of LDH as a function of time urncittelbar- elapsed storage time Sample No. after Freezer 1 week 1 month 2 months 3 months dry 1 100 97.5 92.5 88.7 (75.1) 2 100 89.3 84.4 (76.1) - 6 100 89.7 81.1 (58.5) - 7 100 99.5 98.3 95.7 91.8 8 100 99.5 97.3 89.7 (79.6) 11 100 96.8 (76.8) (51.6) '- 12 100 92.4 85.8 (51.5) - - i3 100 94.0 90.1 84.7 (76.1) 14 100 99.5 91.3 85.9 (74.1) 17 100 - 92.3 (71.6) (54.2) - 18 100 94.3 89.7 (77.1) (57.6) 19 100 96.8 90.1 (78.3) - 20 100 90.2 (61.6) - - 23 100 90.1 (65.6) - - 24 100 93.5 80.9 (55.5) - 25 100 93.0 (71.8) - - Remarks: -: LDH activity level less than 50% (): LDH activity level 50 to 80% These results show a remarkable stabilizing effect of samples 1, 2, 6, 7, 8, 12, 13, 14, 18 and 19.

Die beschriebenen Beispiele zeigen, daß man eine bezeichnende Stabilisierungswirkung bei Enzymen erhalten kann, wenn man Rohrzucker in Verbindung entweder mit BSA oder HSA in einem entsprechenden Gewichtsverhältnis zwischen 1 : 0,4 und 1 : 2,5 bei einem Rohrzuckergehalt zwischen 0,5 und 10,0 % (Gew./Vol.) verwendet. Eine noch größere Stabilisierungswirkung kann man erhalten, wenn man Rohrzucker und Albumin in einem entsprechenden Gewichtsverhältnis zwischen 1 : 1 und 1 : 2,5 bei einem Rohrzuckergehalt zwischen 1,0 und 10 % (Gew./Vol.) verwendet. Noch größer ist die Sthbilisierungswirkung, wenn man Rohrzucker und Albummin in einem entsprechenden Gewichtsverhältnis zwischen 1 : 1 und 1 : 2 bei einem Rohrzuckergehalt zwischen 2,5 und 10 z (Gew./Vol.) verwendet.The examples described show that there is a significant stabilizing effect in the case of enzymes can be obtained by combining either BSA or cane sugar HSA in a corresponding weight ratio between 1: 0.4 and 1: 2.5 a cane sugar content between 0.5 and 10.0% (w / v) is used. One more greater stabilizing effect can be obtained by using cane sugar and albumin in a corresponding weight ratio between 1: 1 and 1: 2.5 for one Cane sugar content between 1.0 and 10% (w / v) is used. It is even bigger Stabilizing effect if you combine cane sugar and albummin in a corresponding one Weight ratio between 1: 1 and 1: 2 with a cane sugar content between 2.5 and 10 z (w / v) used.

Wie oben beschrieben, kann der Enzymstabilisator gemäß der Erfindung die Enzymaktivität enzymenthaltender Zusammensetzungen stabilisieren, wodurch derartige Zusammensetzungen wenigerzur Inaktivierung während des Gefriertrocknens und der darauf folgenden Lagerung neigen. Durch eine derartige Stabilisation bleiben gefriergetrockente enzymenthaltende Zusammensetzungen als klinische Reagenzien und als Katalysatoren geeignet.As described above, the enzyme stabilizer according to the invention can the enzyme activity of enzyme-containing compositions stabilize, whereby such Compositions less susceptible to inactivation during freeze drying and the tend to subsequent storage. Such stabilization leaves freeze-dried ones enzyme-containing compositions as clinical reagents and as catalysts suitable.

Es wird ein Enzymstabilisator beschrieben, der Rohrzucker in Kombination entweder mit Rinderalbuminserum oder Humanalbuminserum enthält und der eine weitaus bessere Wirkung zur Aufrechterhaltung der Enzymaktivität aufweist, als Rohrzucker oder Albumin alleine. Eine mit diesem Stabilisator stabilisierte enzymenthaltende Zusammensetzung neigt weniger zum Verlust der Enzymaktivität auf Grund der Gefriertrocknens und dem darauf folgenden Lagern als eine unstabilisierte Zusammensetzung.An enzyme stabilizer is described, the cane sugar in combination containing either bovine albumin serum or human albumin serum and the one by far better effect to maintain the Has enzyme activity, as cane sugar or albumin alone. One stabilized with this stabilizer enzyme-containing composition is less prone to loss of enzyme activity Reason of freeze-drying and subsequent storage as unstabilized Composition.

Claims (13)

Enzymstabilisator PATENTANSPRÜCHE 1. Enzymstabilisator, dadurch g e k e n n z e i c h n e t, daß er Rohrzucker und eine aus einer Gruppe, bestehend aus Rinderalbuminserum und Humanalbuminserum, ausgewähltes Albumin aufweist. Enzyme stabilizer PATENT CLAIMS 1. Enzyme stabilizer, thereby g I do not note that he is cane sugar and one of a group consisting of albumin selected from bovine albumin serum and human albumin serum. 2. Enzymstabilisator nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Stabilisator eine wässerige Lösung ist.2. enzyme stabilizer according to claim 1, characterized in that the stabilizer is an aqueous solution. 3. Enzymstabilisator nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Stabilisator Rohrzucker und Albumin in einem Gewichtsverhältnis zwischen 1 : 0,4 und 1 : 2,5 bei einem Rohrzuckergehalt zwischen 0,5 und 10 % (Gew./Vol.) aufweist.3. enzyme stabilizer according to claim 2, characterized in that the stabilizer cane sugar and albumin in a weight ratio between 1: 0.4 and 1: 2.5 with a cane sugar content between 0.5 and 10% (w / v). 4. Enzymstabilisator nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Stabilisator Rohrzucker und ein Albumin in einem Gewichtsverhältnis zwischen 1 : 1 und 1: 2,5 bei einem Rohrzuckergehalt zwischen 1,0 und 10,0 % (GewiVol.) aufweist.4. enzyme stabilizer according to claim 2, characterized in that the stabilizer cane sugar and an albumin in a weight ratio between 1: 1 and 1: 2.5 with a cane sugar content between 1.0 and 10.0% (by weight). 5. Enzymstabilisator nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Stabilisator Rohrzucker und Albumin in einem Gewichtsverhältnis zwischen 1:1 und 1:2 bei einem Rohrzuckergehalt zwischen 2,5 und 10,0 % (Gew/Vol.) aufweist.5. enzyme stabilizer according to claim 2, characterized in that the stabilizer cane sugar and albumin in a weight ratio between 1: 1 and 1: 2 with a cane sugar content between 2.5 and 10.0% (w / v). 6. Wässerige enzymenthaltende Zusammensetzung verbesserter Stabilität, dadurch gekennzeichnet, daß sie mit Rohrzucker und einem Albumin, ausgewählt aus einer Gruppe, bestehend aus Rinderalbuminserum und Humanalbuminserum, stabilisiert ist.6. Aqueous enzyme-containing composition of improved stability, characterized in that it is made with cane sugar and an albumin selected from a group consisting of bovine albumin serum and human albumin serum is. 7. Enzymenthaltende Zusammensetzung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß das Gewichtsverhältnis von Rohrzucker zu Albumin in der Zusammensetzung zwischen 1 : 0,4 und 1 : 2,5 liegt, wobei der Rohrzuckergehalt zwischen 0,5 und 10,0 z (Gew/Vol.) liegt.7. Enzyme-containing composition according to claim 6, characterized in that that the weight ratio of cane sugar to albumin in the composition is between 1: 0.4 and 1: 2.5, with the cane sugar content between 0.5 and 10.0 z (w / v) lies. 8. Enzymenthaltende Zusammensetzung nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym aus einer Gruppe, bestehend aus Transaminase, Phosphatase, Dehydrogenase, ausgewählt wird.8. Enzyme-containing composition according to claim 6 or 7, characterized characterized in that the enzyme is selected from a group consisting of transaminase, phosphatase, Dehydrogenase. 9. Enzymenthaltende Zusammensetzung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym Glutamat-Oxalacetat-Transaminase ist.9. Enzyme-containing composition according to claim 8, characterized in that that the enzyme is glutamate oxaloacetate transaminase. 10. Enzymenthaltende Zusammensetzung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym Glutamat-Pyruvat-Transaminase ist.10. Enzyme-containing composition according to claim 8, characterized in that that the enzyme is glutamate pyruvate transaminase. 11. Enzymenthaltende Zusammensetzung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym alkalische Phosphatase ist.11. Enzyme-containing composition according to claim 8, characterized in that that the enzyme is alkaline phosphatase. 12. Enzymenthaltende Zusammensetzung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das Enzym Laktat-Dehydrogenase ist.12. Enzyme-containing composition according to claim 8, characterized in that that the enzyme is lactate dehydrogenase. 13. Enzymenthaltende Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 6 bis 12, dadurch gekennzeichnet, daß sie gefriergetrocknet ist.13. Enzyme-containing composition according to any one of claims 6 to 12, characterized in that it is freeze-dried.
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