DE3934366C2

DE3934366C2 -

Info

Publication number: DE3934366C2
Application number: DE3934366A
Authority: DE
Inventors: Ursula Dr. 6236 Eschborn De Dietrich; Michalina Dipl.-Biol. 6000 Frankfurt De Adamski; Hagen Von Dipl.-Biol. 6242 Kronberg De Briesen; Herbert Dr. 6073 Egelsbach De Kuehnel; Helga Prof. Dr. 6232 Bad Soden De Ruebsamen-Waigmann
Original assignee: CHEMOTHERAPEUTISCHES FORSCHUNGSINSTITUT 6000 FRANKFURT DE
Current assignee: CHEMOTHERAPEUTISCHES FORSCHUNGSINSTITUT 6000 FRANKFURT DE
Priority date: 1989-10-14
Filing date: 1989-10-14
Publication date: 1991-11-07
Also published as: DE3934366A1; JPH05505389A; US5861243A; ATE106748T1; ES2055922T3; JP3152433B2; EP0495896A1; WO1991005567A1; DK0495896T3; EP0495896B1; DE59006080D1

Description

Gegenstand der Erfindung sind Impfstoffe gegen HIV-Virusinfektionen, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung.

Bisherige antivirale Arzneimittel, denen auch eine Wir kung gegen HIV-Viren zugesprochen wird, haben den Nach teil, daß sie ein meist geringes antivirales Wirkungs spektrum besitzen, welches mit einer relativ hohen Toxi zität verbunden ist. Viele dieser Substanzen wirken gegen eine virale Thymidinkinase oder eine virale Polymerase. Jedoch ist bereits während der Therapie mit vielen dieser Substanzen eine Resistenzbildung der infizierenden Viren beobachtet worden.

Zur Gruppe der Substanzen, bei denen eine Wirkung gegen HIV-Viren festgestellt wurde, gehört Foscarnet (Phosphono formiat). Diese Substanz wirkt als Hemmstoff der viralen reversen Transkriptase, ist jedoch wegen seiner in klini schen Versuchen ermittelten Toxizität nicht für die Pro phylaxe oder Therapie von Retrovirus-Infektionen geeignet (B. Öberg, "Antiviral effects of phosphonoformiate (PFA, Foscarnet Sodium)", Pharm. Ther. 19 (1983) p. 387-415).

Ein weiterer Hemmstoff der reversen Transkriptase ist die Substanz Suramin. Sie ist jedoch aufgrund ihrer Toxizität für den Säugetierorganismus ebenfalls nicht für eine Pro phylaxe oder Therapie von HIV-Virusinfektionen geeignet (H. Mitsuya et al. "Suramin Protection of T-Cells in vitro against Infectivity and Cytopathic Effect of HTLV- III", Science 226 (1984), p. 172-174).

Die weitere Entwicklung führte dann zu Hemmstoffen der reversen Transkriptase, die weniger toxisch auf den Säugetier-Organismus sind. Dazu gehören Stoffe wie Dex transulfat und Pentosanpolysulfat, die nachweislich in vivo einen inhibierenden Effekt auf HIV I-Viren zeigen. Dies wird in den Offenlegungsschriften DE 36 01 136 und EP 02 93 826 beschrieben.

Bisherige Bemühungen, Mittel zur Prophylaxe und Therapie von HIV-Infektionen zu entwickeln, konzentrieren sich daher auf eine Hemmung der reversen Transkriptase des HIV I-Virus.

Neben der chemotherapeutischen Behandlung von HIV-Infek tionen besteht prinzipiell die Möglichkeit der Gen- oder Immuntherapie. Die Gentherapie umfaßt das Einschleusen von Teilen viraler Nukleinsäuren in menschliche Zellen, insbesondere in die Zielzellen des HIV-Virus, beispiels weise die CD4 positiven Zellen des Immunsystems. Durch Bildung einer "antisense" RNA, d. h. einer zur messenger RNA (m-RNA) komplementären RNA, kann dann die virale m-RNA neutralisiert werden und somit die Weitervermehrung des Virus unterbunden werden. In einer anderen Form kön nen auch direkt Oligonukleotide oder mit ihnen chemisch verwandte Strukturen, die zur m-RNA komplementär sind, eingesetzt werden. Bei der Immuntherapie werden nach der Infektion Antigene gegeben, von denen eine Unterstützung der Immunantwort gegen HIV erwartet wird.

Um eine weitere Ausbreitung der AIDS Epidemie zu verhin dern, wäre es jedoch dringend erforderlich, einen Impfstoff zum Schutz vor HIV-Infektionen zu entwickeln. Das Haupt problem hierbei ist die hohe Variabilität der HIV-Viren: eine Schutzimpfung soll und muß alle möglichen Virusvari anten erfassen. Ein Weg dazu ist, durch Vergleich mög lichst vieler und evolutionär weit entfernter HIV-Virus varianten, konservierte Bereiche in den viralen Antigenen festzustellen, die dann als Peptide im Menschen die Bil dung von protektiven Antikörpern hervorrufen können. Al ternativ können die Peptide in einem anderen Organismus zur Bildung von Antikörpern eingesetzt werden, so daß die Antikörper direkt dem Menschen als Schutz gegeben werden. Neben konservierten Peptiden muß eine wirkungsvolle Vak zine aber auch solche Peptide erfassen, die von sehr divergenten Stämmen abstammen.

In der älteren, aber nicht vorveröffentlichten EP 89 710 057.4 wird eine HIV-2-Virusvariante, nämlich HIV-2_D205 beschrieben, die aus dem entsprechenden Virusisolat HIV-2_D205 kloniert werden kann. Das Virusisolat HIV-2_D205 ist gemäß Budapester Vertrag unter der Nummer ECACC V 87 122 304 hinterlegt worden. Ebenfalls beschrieben wer den die RNA und die davon abgeleiteten DNAs sowie die Proteine der Virusisolate.

Bei der bisherigen Entwicklung eines Impfstoffes gegen HIV- Virusinfektionen ergibt sich die Schwierigkeit, daß es zur Zeit kein geeignetes Tiermodell für die Krankheit gibt. Deshalb kommt die Entwicklung von Impfstrategien, beispielsweise gegen die Eigenschaft des Virus, die Zu sammensetzung seiner Proteinhülle zu verändern und seine eigenen Gene in das Erbmaterial des Wirtes einzubauen, nur langsam voran. Weiterhin muß der Impfstoff einen aus reichenden Schutz gegen die vollständige Palette der bisher gefundenen zahlreichen HIV-Varianten gewährlei sten. Der Impfstoff selbst darf aber auch nicht das Ri siko einer HIV-Infektion bergen.

Bei der weiteren Sequenzierung des HIV-2_D205-Virus und anschließend durchgeführten Stammbaumanalysen wurde jetzt überraschenderweise gefunden, daß HIV-2_D205 genetisch gleich weit von den bisher beschriebenen HIV-2-Stämmen und den Affenviren SIV_mac und SIV_sm entfernt ist. HIV- 2_D205 ist somit ein gemeinsamer Vorläufer der HIV-2/ SIV_mac/SIV_sm-Gruppe und dieser evolutionär sehr nahe und somit ein sehr altes Virus.

Daher bietet sich dieses Virus als Ausgangsstoff zur Herstellung eines Impfstoffs, eines Gen- oder Immuntherapeu tikums mit breitem Schutzspektrum gegen die Viren dieser Gruppe an. Gleichzeitig könnte sich HIV-2_D205 aufgrund seiner engen Verwandtschaft zu den Affenviren besonders gut zur Etablierung eines Tiermodells eignen. Für die Etablierung eines Tiermodells wird HIV-2_D205 auf geeig nete Primaten (z. B. Rhesusaffen) übertragen und die Etablierung der Infektion und gegebenenfalls das Auftre ten von Symptomen beobachtet. Die Etablierung eines Tier modells mit HIV-2_D205 als Virus erlaubt zugleich die Testung des hergestellten Impfstoffs, Gentherapeutika oder Immuntherapeutika.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, einen Impfstoff zum Schutz vor HIV-Virusinfektionen zur Verfügung zu stellen, der ein möglichst breites Wirkungsspektrum gegen verschiedene Typen der HIV-2/SIV-Gruppe besitzt.

Diese Aufgabe wird dadurch gelöst, daß der Impfstoff als Wirkstoff die Peptide

1. LFETSIKPCVKL
2. ESCDKHYWD
3. RFRYCAPPG
4. LLRCNDTNYSGF
5. STWFGFNGTRAENRYIYWH
6. DNRTIISLN
7. NELDRFGLAESLLE
8. PLVPTGSENLKSL
9. PLSPRTLNAWVKL
10. EEKKFGAEVVPGFQALSEGCTPYEINQMLNCV
11. GLQKCVRMYNPTNILD
12. FQSYVDRFYKSLRAEQTD
13. QNANPDCKLVLKGL
14. NPTLEEMLTACQG
15. GGPGQKARLMAEALKE
16. ARQCRAPRRQGCWKCGK

oder Kombinationen derselben enthält.

Eine bevorzugte Ausführungsform ist ein Impfstoff, der zum therapeutischen Einsatz vor der Infektion geeignet ist. Eine weitere bevorzugte Ausführungsform ist, daß der Impfstoff als Immuntherapeutikum zum Einsatz nach der Infek tion geeignet ist und ebenfalls ein breites Varianten spektrum abdeckt.

Weiterhin ist auch ein Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffs zum Schutz vor HIV-Virusinfektionen aus dem Virus HIV-2_D205 sowie die Verwendung des Virus HIV-2_D205 zur Herstellung eines Impfstoffs Gegenstand der Erfindung.

In einer weiteren Ausführungsform wird das Virus in ein geeignetes Wirtstier übertragen und dort vermehrt. Die gebildeten Antikörper werden sodann nach entsprechender Aufarbeitung, wie dies auch im Stand der Technik für andere Impfstoffe bekannt ist, als Passiv-Impfstoff gegen HIV-Virusinfektionen verwendet. Als Wirtstiere können insbesondere geeignete Affenarten verwendet werden, aber auch Tiere, die immunisiert werden können, ohne krank zu werden (z. B. Kaninchen) (Filice et al., Nature 335, 366- 369, 1988).

Auch humane monoklonale Antikörper gegen HIV-2_D205 bieten sich als möglicher Schutzmechanismus an.

In einer weiteren Ausführungsform wird in einem geeigne ten Vektor DNA, von der eine zu der viralen m-RNA komple mentäre RNA vollständig oder partiell transkribiert werden kann, in menschliche Zellen des Immunsystems transfiziert und so in den Menschen gebracht. Die virale m-RNA wird so mit kompetitiv vom weiteren Vermehrungscyclus ausgeschlos sen. Desgleichen können synthetische Oligonukleotide zur Neutralisierung der viralen m-RNA angewendet werden.

Für die Differentialdiagnostik werden ausgewählte Be reiche der DNA von HIV-2_D205 herangezogen, die bei dem Prototyp HIV-2_ROD entweder gar nicht vorkommen oder er heblich abweichen (mehr als 30%). Von diesen Bereichen werden Peptide oder Nukleinsäuren für die Diagnostik nach den üblichen Methoden hergestellt (Markierung mit radio aktiven Isotopen, Immunfluoreszenztest, ELISA, etc.). Ein Bereich, der bei HIV-2_D205 einzigartig ist, ist z. B. eine 54 Basenpaare (bp) Insertion im Überlappungsbereich der beiden offenen Leserahmen gag und pol mit der Sequenz

AACCCAGCAGAGGGCATGACACCTCGGGGGGCGACACCATCTGCGCCCCCTGCA.

Andere sehr variable Bereiche sind neben dem Hüllprotein env die Gene rev und vif.

Bisherige Untersuchungen des HIV-2_D205-Virus, einem Iso lat einer asymptomatischen Ghanesin, zeigten Wachstum auf Lymphocyten ohne zytopathische Effekte und ein gutes Wachstum auf Makrophagen (Kühnel, H. et al., Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A. 86, p. 2383-2387 (1989)).

Bei der weiteren Untersuchung des HIV-2_D205-Virus wurde gefunden, daß der Klon 7817 Basenpaare (bp) eines provi ralen Genoms ausgehend von dem linken "long terminal repeat" (LTR) enthält. Der Klon besitzt folgende virale Gene vollständig: "gag" für die Kernproteine des Virus, "pol" für die Integration und Replikation (Protease, re verse Transkriptase, Integrase), den Infektivitätsfaktor "vif", das für HIV-2 und die Affenviren SIV_mac und SIV_sm typische Gen "vpx", das für schnelles Wachstum verant wortliche Gen "vpr" und die beiden ersten Exons der posi tiven Regulatorgene "tat" und "rev". Der für das äußere Hüllprotein kodierende Bereich ist zu 4/5 im Klon enthal ten, die Sequenz des negativ regulierenden Faktors "nef" zur Hälfte insofern als er mit der rechten LTR überlappt und die linke und rechte LTR identisch sind.

Die Sequenz wurde verglichen mit den bisher bekannten HIV und SIV Sequenzen (siehe Tabelle 1). Überraschenderweise wurde gefunden, daß die Nukleotidhomologie des gesamten Klons HIV-2_D205 zu den bereits bekannten HIV-2-Sequenzen nur 76,2-76,8% beträgt, während die Homologie der anderen HIV-2 Sequenzen untereinander mit 87,0-89,3% weit größer ist. Die Homologie zu SIV_sm und SIV_mac be trägt 76,4 bzw. 75,0%, d. h. HIV-2_D205 ist gleich weit von diesen beiden Affenvirus-Sequenzen entfernt wie von HIV-2. Die Homologie zu SIV_AGM und HIV-1 liegt im glei chen Rahmen wie für die übrigen HIV-2 Isolate.

Sequenzvergleiche einzelner genetischer Abschnitte von HIV-2_D205, HIV-2_ROD, SIV_sm und SIV_mac zeigten, daß die Variabilität im Nukleotid-Bereich von 4,6% (für R) bis zu 35,9% (für rev exon 1) und im Aminosäure-Bereich 12,8% (für gag) bis zu 47,6% (für rev exon 1) reicht (siehe Tabelle 2) .

Trotz dieser Variablilität waren funktionell relevante Sequenzen oder Proteincharakteristika wie Hydrophilie oder Ladung in hohem Grade erhalten.

Der sequenzierte Teil des externen Glycoproteins (gp) des HIV-2_D205 unterschied sich zwar um 33% von dem des HIV- 2_ROD, hatte aber dasselbe Muster von konservierten und variablen Bereichen wie die anderen HIV-2 und SIV_sm/SIV_mac Sequenzen (siehe Fig. 2). Alle Cystein-Reste, die in den externen Glycoproteinen des HIV-2_ROD gefunden wurden, wa ren erhalten. Abweichungen in den externen Glycoproteinen beruhen auf dem Austausch einzelner Aminosäuren und ge ringfügiger Deletionen oder Insertionen meist in den va riablen Regionen. Zusätzlich wurde eine große Anzahl ver änderter Glycosylierungsstellen beobachtet. Bei dem exter nen gp von HIV-2_D205 sind lediglich 13 von 21 potentiellen N-Glycosylierungsstellen des entsprechenden gp von HIV- 2_ROD enthalten, was die Bedeutung der Glycosylierung bei der Erzeugung der Hüllenvariabilität unterstreicht.

Durch Immunpräzipitation viraler Proteine aus infizierten Zellen und anschließender Analyse mit Hilfe der SDS-Poly acrylamid Gelelektrophorese wurde gefunden, daß die äuße ren Hüllproteine des HIV-2_D205-Virus größere Molekularge wichte besitzen als die des HIV-2_ROD-Typs.

Der Vorläufer des Hüllproteins bildet bei HIV-2_D205 im Gegensatz zu den anderen HIV-2 und SIV_mac/SIV_sm Stämmen kein Dimer (siehe Fig. 3).

Die Dimerbildung, die für eine korrekte Prozessierung der Hüllproteinvorläufer dieser Virusgruppe, im Gegensatz zu den HIV-1 Viren, notwendig sein soll, ist also entweder eine relativ neue Entwicklung innerhalb der HIV-2/SIV_mac/ SIV_sm Gruppe oder HIV-2_D205 stellt einen eigenständigen Virustyp dar. Für den letzteren Punkt spricht die Einord nung von HIV-2_D205 innerhalb des phylogenetischen Stamm baums der HIV/SIV Viren (Fig. 4). Der Stammbaum basiert auf der Nukleotidvariation im 3′-Teil des HIV-2_D205. Da rin ist zu erkennen, daß sich HIV-2_D205 um 24,8% vom HIV-2 Prototyp HIV-2_ROD unterscheidet und um 26,1% bzw. 26,4% von SIV_sm und SIV_mac. Dieser phylogenetische Ab stand stimmt gut überein mit den durch Sequenzvergleiche direkt bestimmten Abweichungen in der Nukleotidsequenz (Tabelle 1). Nach der Stammbaumanalyse wird das HIV-2_D205 Virus einem gemeinsamen Vorläufer der Typen HIV-2/SIV_sm/ SIV_mac mit einer Divergenz von 8,6% zugeordnet. Es wird daher die Bezeichnung HIV-2_ALT für HIV-2_D205 vorge schlagen.

Es ist dem Fachmann bekannt, daß die Pathogenität eines Virus mit zunehmender Adaptationszeit an seinen Wirt abnimmt. So ist zum Beispiel das Virus SIV_sm aus sooty mangabey nicht pathogen für diese Affenart, wird es aber in eine andere Affenart neu eingebracht, z. B. in die Makaken, so wird es für diese Art pathogen. HIV-2_D205 stammt aus einer asymptomatischen Person, macht keinen zytopathischen Effekt auf Lymphocyten und ist ein relativ altes Virus. Es könnte sich also bei diesem Virus um einen nicht pathogenen Subtyp aus der HIV-2 Gruppe han deln. Es ist deshalb ebenso Bestandteil dieser Erfindung, HIV-2_D205 oder Antigene, Peptide oder Nukleinsäuren da von, für die differentielle Diagnostik zur Unterscheidung zwischen Infektionen des Typs HIV-2_D205 und solchen des Prototyps HIV-2_ROD einzusetzen. Das Virus HIV-2_D205 eignet sich daher auch zur Herstellung von Gen-, Immun therapeutika und Diagnostika.

Durch Vergleichen der Aminosäuresequenzen der Proteine von HIV-2_D205 mit den Aminosäure-Consensus-Sequenzen, die für die einzelnen Gene aus allen bereits veröffentlichten HIV-2 und SIV_mac/SIV_sm Sequenzen abgeleitet wurden, erge ben sich für den vorhandenen env-Bereich 6 konservierte Bereiche mit mindestens 9 100%ig konservierten Aminosäu ren, für gag 11 Bereiche mit mindestens 13 100%ig kon servierten Aminosäuren (Fig. 5). Peptide aus diesen Bereichen bieten sich vorzugsweise für einen Impfstoff mit breitem Wirkungsspektrum an, besonders, wenn der Impfstoff noch aus einer Kombination dieser Peptide besteht. Es handelt sich dabei um folgende Peptide:

Diese Peptide werden synthetisch hergestellt und wenn vorteilhaft chemisch modifiziert. Diese Peptide sowie kürzere bis zu 7 Aminosäuren lange Unterpeptide davon sind ebenso Bestandteil dieser Erfindung wie ihre modifi zierten Formen. Weiterhin sind auch Peptide aus konstan ten Bereichen anderer Gene von HIV-2_D205 Bestandteil dieser Erfindung, sofern die Abweichung von der Consensus- Sequenz nicht mehr als 20% beträgt.

Ebenso werden die sehr abweichenden Proteinbereiche (wie z. B. rev (aa 2-11), vif (aa 186-202), env (aa 2-23; 118-204;, etc.) für die Impfstoff-Herstellung als geeignet angesehen, da bei ihnen die Induktion von Mechanismen angenommen wird, die die natürliche (und erfolgreiche) Abwehr gegen HIV-2_D205 bedingen.

Die gleichen Bereiche wie für den Impfstoff gelten auch für die Gen- und Immuntherapie. Von konstanten Bereichen er hofft man sich ein möglichst breites Spektrum an Virusva rianten, das durch die Therapeutika erfaßt wird. Die weni ger konstanten Bereiche könnten gerade die speziellen Im munantworten verursachen, die die Viren in Schach halten.

Für die Differentialdiagnostik kommen Peptide oder Nuk leinsäuren in Frage, die möglichst unterschiedlich von dem Prototyp HIV-2_ROD sind. Solche sind neben der einzig artigen 54 bp Insertion (s. o.) im gag/pol Überlappungs bereich besonders in den Genen rev und vif zu finden.

Durch die verwandtschaftliche Nähe zu den Affenviren und ausgehend von dem Grundsatz, daß Impfstoffe aus Vorstämmen eine breitere Schutzwirkung entfalten können ist HIV- 2_D205 besonders geeignet zur Herstellung von Impfstoffen zum Schutz vor HIV-Infektionen. Dieser Virus kann im Affen als geeignetem Wirt vermehrt werden, und die entstandenen Antikörper können als Impfstoff für eine Anwendung beim Menschen Verwendung finden. Der Impfstoff schützt damit vor der Infektion eines möglichst breiten Spektrums von Virusvarianten.

Weiterhin ist es möglich Peptidteste oder PCR-Tests auf der Basis des HIV-2_D205 einzusetzen, mit deren Hilfe man HIV-2_D205 von anderen HIV-Viren unterscheiden kann.

Im folgenden werden die Figuren sowie die Tabelle be schrieben:

Tabelle 1 zeigt die Nukleotidsequenzhomologie zwischen HIV und SIV-Viren in Prozent. Die Sequenzen wurden ver glichen unter Benutzung von Mikrogenie^TM-Sequenz Software der Fa. Beckmann.

Tabelle 2 zeigt die erhaltenen Sequenzen der genetischen Elemente des Nukleotid- und Aminosäurebereichs.

Fig. 1 zeigt die Analyse der deduzierten Aminosäurese quenz des ORF-Y (open reading frame) der Positionen 1851 bis 1651 in dem unteren Bereich der HIV-2_D205-Sequenz. a) zeigt die Aminosäurenausrichtung der putativen Proteine des ORF-Y verschiedener HIV-2-Stränge, SIV_sm und SIV_mac. b) zeigt die Profile der deduzierten Proteine des ORF-Y von HIV-2_D205 unter Benutzung des Mikrogenie^TM-Analyse programms von Beckmann.

Fig. 2 zeigt die Aminosäuresequenz der externen Glyco proteine der Viren der HIV-2/SIV_sm/SIV_mac-Gruppe. Der se quenzierte Klon HIV-2_D205 enthielt nur 75% des externen Glycoproteins. Die potentiellen N-Glyosylationsstellen sind unterstrichen. Die erhaltenen Cysteinstellen sind mit einem Sternchen versehen.

Fig. 3 zeigt einen Größenvergleich der externen Glyco proteine des HIV-2_ROD mit denen des HIV-2_D205. ³⁵S-Cy stein angereicherte Proteine von Zellen wurden mit HIV- 2_ROD (Spalte 1 und 2) und HIV-2_D205 (Spalte 3 und 4) in fiziert, mit HIV-2 positivem Serum immunopräzipitiert und mit einem 8,5%igen SDS-Polyacrylamidgel aufgetrennt. Das externe Glycoprotein von HIV-2_ROD (gp 125) und seine Vorstufe (gp 140), die dimere Form des gp 140 (gp 300) und die Positionen der molekularen Größenangaben sind in Dalton angegeben. Bei HIV-2_D205 infizierten Zellen ist die ein Dimer kennzeichnende Bande nicht zu erkennen. Auch nach Behandlung mit Castanospermin, Spalte 4, einem Inhibitor der Glukosidase 1, tritt die dimere Form nur bei HIV-2_ROD, Spalte 2, auf. Weiterhin bemerkenswert ist, daß das externe Glycoprotein und seine Vorstufe bei HIV-2_D205 größer sind als bei HIV-2_ROD.

Fig. 4 zeigt den Evolutionsstammbaum minimaler Länge, der den Zusammenhang des HIV-2_D205 mit den anderen HIV-/ SIV-Subtypen zeigt. Der Stammbaum wurde erstellt durch einzelne Basensubstitutionen im 3′-Bereich der HIV-2_D205- Sequenz unter Benutzung von PAUP (Smith, T.F. et al., Nature 333, 573-575 (1988)) und der Version 3,21 des PHYLIP bootstrapping alogarythmus.

Fig. 5 zeigt die Aminosäuresequenzen, abgeleitet von den einzelnen Genen der HIV-2_D205, 7 bzw. HIV-2_ROD Sequenz, wurde mit den Aminosäure-Consensus-Sequenzen verglichen, die aus allen bereits sequenzierten HIV-2 und SIV_mac/SIV_sm Sequenzen abgeleitet wurden. Unter den von der Consensus- Sequenz abweichenden Aminosäuren von HIV-2_D205, 7 (5a) bzw. HIV-2_ROD (5b) wurde ermittelt, welcher Prozentsatz mit der HIV-2 Consensus-Sequenz identisch ist (schwarze Balken), welcher mit der SIV_mac/SIV_sm Consensus-Sequenz identisch ist (graue Balken) und welcher Prozentsatz neuen Aminosäuren entspricht (helle Balken).

Tabelle 1

Nukleotid Sequenzhomologie zwischen HIV und SIV (in %)

Tabelle 2

Erhaltene Sequenzen der genetischen Elemente (Nukleotid-/Aminosäure-Bereich)

Claims

1. Impfstoff gegen HIV-Virusinfektionen enthaltend als Wirkstoff die Peptide
1. LFETSIKPCVKL
2. ESCDKHYWD
3. RFRYCAPPG
4. LLRCNDTNYSGF
5. STWFGFNGTRAENRYIYWH
6. DNRTIISLN
7. NELDRFGLAESLLE
8. PLVPTGSENLKSL
9. PLSPRTLNAWVKL
10. EEKKFGAEVVPGFQALSEGCTPYEINQMLNCV
11. GLQKCVRMYNPTNILD
12. FQSYVDRFYKSLRAEQTD
13. QNANPDCKLVLKGL
14. NPTLEEMLTACQG
15. GGPGQKARLMAEALKE
16. ARQCRAPRRQGCWKCGK
oder Kombinationen dieser.

2. Impfstoff nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß er aus dem Virus HIV-2_D205 (ECACC V 87 122 304) hergestellt wird.

3. Impfstoff nach Anspruch 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, daß er als Immuntherapeutikum zum Einsatz nach der Infektion geeignet ist.

4. Impfstoff nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß er bis zu 7 Aminosäuren lange Unterpeptide enthält.

5. Impfstoff nach Anspruch 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß Peptide aus konstanten Bereichen andere Gene von HIV_D205, deren Abweichung von der Consensus-Sequenz 20% ist oder Kombinationen derselben enthalten sein können.

6. Impfstoff nach Anspruch 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß die abweichenden Proteinbereiche rev (aa 2-11), vif (aa 186-202) und env (aa 2-33); (118-204 etc.) für die Vakzineherstellung geeignet sind.

7. Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffs nach den An sprüchen 1 bis 6 zum Schutz vor HIV-Virusinfektionen aus dem Virus HIV-2_D205, dadurch gekennzeichnet, daß das Virus HIV-2_D205 in einen Affen implantiert, in diesem vermehrt und die gebildeten Antikörper als Impfstoff verwendet werden.