DE60037664T2

DE60037664T2 - Langkettige n-alkyl verbindungen und deren oxa-derivate zur verwendung als anitvirale mittel

Info

Publication number: DE60037664T2
Application number: DE60037664T
Authority: DE
Inventors: Nicole Zitzmann; Terry D. Garsington BUTTERS; Frances M. Long Hanborough PLATT; Sandra Carrouee; Gary S Creve Coeur JACOB; Donald H. Waren PICKER; George W.J Oxford FLEET; Raymond A Oxford DWEK; David Durantel; Anand Landenberg MEHTA; Timothy M Doylestown BLOCK
Original assignee: University of Oxford; Thomas Jefferson University; Synergy Pharmaceuticals Inc
Current assignee: University of Oxford; Thomas Jefferson University; Synergy Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1999-08-10
Filing date: 2000-08-10
Publication date: 2008-12-24
Anticipated expiration: 2020-08-11
Also published as: US9089515B2; EP1210082A2; US20100137365A1; DE60037664D1; JP2003506406A; EP1210082B1; WO2001010429A2; WO2001010429A3; HK1046869A1; AU1840101A; US7816560B1; ATE382351T1; ES2302697T3; US20110184019A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von N-alkylierten Piperidinen und Pyrrolidinen unter Einbeziehung von daraus abgeleiteten Verbindungen und Oxaderivaten davon, und zwar zur Behandlung von Infektionen bei Tier und Mensch durch Pestiviren und Flaviviren.
Das HCV stellt ein RNS-Virus dar, welches zu der Familie der Flaviviridae gehört. Individuelle Isolate bestehen aus nahe verwandten. jedoch heterologen Populationen viraler Genome. Diese genetische Vielfalt ermöglicht es dem Virus, dem Immunsystem des Wirtes zu entwischen, was zu einer hohen Rate chronischer Infektionen führt. Es ist bekannt, dass die Gruppe der Flaviviren, zu der das HCV gehört, die ursächlichen Auslöser zahlreicher Humanerkrankungen, die durch Arthropodenträger übertragen werden, mit einschließt. Humanerkrankungen, deren Ursache Flaviviren bilden, schließen verschiedene hämorrhagische Fiebererkrankungen, Hepatitis sowie Enzephalitis mit ein. Viren, welche dafür bekannt sind, dass sie diese Erkrankungen beim Menschen verursachen, wurden identifiziert, wobei sie zum Beispiel das Gelbfiebervirus, die Dengueviren 1–4, das japanische Enzephalitisvirus, das Enzephalitisvirus Murray Valley, das Rociovirus, das Virus des Westnilfiebers, das Enzephalitisvirus St. Louis, das Enzephalitisvirus mit Zecken als Verursacher, das Virus der Loupingkrankheit, das Powassan-Virus, das Virus des hämorrhagischen Fiebers von Omsk sowie das Virus für die Erkrankungen des Kyasanurforstes mit einschließen. Es besteht aus diesem Grunde noch ein kritischer Bedarf nach einer Behandlung sowohl von Tieren als auch von menschlichen Patienten mit einer Infektion mit mindestens 1 Virus, wie zum Beispiel dem Flavivirus und/oder Pestivirus.
Weltweit sind mehr als 40 Millionen Patienten mit dem Virus von Hepatitis C (HCV) chronisch infiziert, wobei diese Situation eine der schlimmsten Bedrohungen der öffentlichen Gesundheit der entwickelten Nationen darstellt [Hoofnagle et al. in New Engl. J. Med., 336, S. 347–356, (1997)]. Infektionen in Form von Hepatitis C bilden die Ursache von mehr als 10 000 Todesfällen pro Jahr in den Vereinigten Staaten (Washington Post, 11. November, 1997, zum Zeitpunkt A2), wobei davon ausgegangen wird, dass sich diese Anzahl innerhalb der nächsten zwanzig Jahre verdreifachen dürfte, sofern wirksame Gegenmaßnahmen unterbleiben. Eine chronische Erkrankung durch das HCV erhöht auch das Risiko für ein Leberkarzinom. Es sind mehr als 40 Millionen Patienten mit dem Virus von Hepatitis C (HCV) weltweit chronisch infiziert, wobei diese Situation eine der schlimmsten Bedrohungen der öffentlichen Gesundheit der entwickelten Nationen darstellt [Hoofnagle et al., siehe oben). Bei nicht weniger als 85% der Patienten mit dem HCV entwickeln sich permanente Infektionen, wobei die chronische Infektion bei mindestens 20% dieser Patienten innerhalb von zwanzig Jahren nach der Manifestation der Infektion zu einer Zirrhose führt. Bei einer geschätzten Anzahl von 3,9 Millionen Nordamerikanern, die chronisch infiziert sind, stellen die Komplikationen durch die Infektion von Hepatitis C in den Vereinigten Staaten nunmehr die wichtigste Ursache für eine Lebertransplantation dar.
Einen weiteren ursächlichen Auslöser für akute und chronische Lebererkrankungen unter Einschluss der Leberfibrose, der Zirrhose, der entzündlichen Lebererkrankungen und des Lebercarcinoms stellt das Hepatitis B-Virus (HBV) dar [Joklik in Virology, 3. Auflage bei Appleton & Lange, Norwalk, Connecticut, (1988)]. Obschon wirksame Impfstoffe erhältlich sind, gibt es weltweit immer noch mehr als 300 Millionen Patienten, das bedeutet 5% der Weltbevölkerung, welche chronisch mit dem Virus infiziert sind [Locamini et al. in Antiviral Chemistry & Chemotherapy, Bd. 7, S. 53–64, (1996)]. Bei solchen Patienten, die bereits mit dem Virus infiziert sind, sind derartige Impfstoffe ohne therapeutischen Nutzen. In Europa und Nordamerika sind zwischen 0,1% bis 1 der Bevölkerung infiziert. Schätzungen besagen, dass 15% bis 20% von individuellen Patienten nach dem Erwerb der Infektion eine Zirrhose oder eine andere chronische Behinderung durch eine Infektion mit dem HBV entwickeln. In dem Moment, wo sich eine Leberzirrhose manifestiert hat, besteht eine ganz massive Morbidität und Mortalität bei einer Überlebenszeit von ungefähr 5 Jahren [Blume et al. in Advanced Drug Delivery Reviews, Bd. 17, S. 321–331, (1995)]. Es besteht deshalb bei höchster Priorität die Notwendigkeit, effiziente Therapien gegen Hepatitiden durch den HBV aufzufinden (Locamini et al., siehe oben).
Therapeutische Interventionen, die bei der Behandlung von Infektionen durch den HCV wirksam sind, unterliegen in Bezug auf ihre Anzahl und ihrer Effizienz einer Begrenzung. Die standardisierte Behandlung einer Infektion den HCV schließt die Verabreichung von α-Interferon mit ein. Allerdings ist das α-Interferon bei etwa 20% der mit HCV infizierten Bevölkerung nur von begrenztem Nutzen (Hoofnagle et al., siehe oben), wobei die Behandlung mit dieser Verbindung lediglich bei 5% der Patienten zu einer Besserung führt. Ferner begrenzen die Komplikationen und Beschränkungen des α-Interferons in ernsthafter Weise die Anwendbarkeit der Behandlung. Eine experimentelle Behandlung unter Einbeziehen einer Verabreichung von α-Interferon und Ribavirin (1-β-D-Ribofuranosyl-1H-1,2,4-triazol-3-carboxamid) führte lediglich bei der Hälfte der Patienten, welche an einem Wiederaufflammen der Infektion durch das HCV litten [Washington Post, 11. November, (1997), nach A2] langfristig zu einer Besserung. Es ist dabei klar, dass die enttäuschenden Resultate mit dem Interferon eine Suche nach effizienteren und weniger toxischen Therapeutika bewirken. Somit besteht weiterhin ein kritischer Bedarf nach therapeutischen Gegenmaßnahmen zu einer wirksamen Behandlung von Infektionen durch das HCV oder zusätzlichen Maßnahmen, soweit solche überhaupt andernorts zur Verfügung stehen.
Darüber hinaus gibt es zusätzlich zu den Patienten mit einer chronischen Infektion durch das HCV noch mehr als 350 Millionen Patienten mit einer chronischen Infektion durch das Hepatitisvirus B (HBV). Sehr wahrscheinlich kommen mehr als 150 Millionen dieser Patienten bei Ausbleiben von Gegenmaßnahmen zu Tode. In den entwickelten Ländern gibt es nicht weniger als 20 Millionen Träger des HBV, ebenso wie die meisten Träger von HCV. Eine große Anzahl individueller Patienten mit einer Infektion durch das HCV ist gleichzeitig mit dem HBV infiziert. Die Therapie mit einer kombinierten Infektion mit dem HBV und dem HCV stellt eine besondere Herausforderung dar, und zwar deswegen, weil sich die Viren HBV und HCV in signifikanter Weise im Hinblick auf die Therapie voneinander unterscheiden. Das HBV gilt als Hepa-DNS-Virus, wogegen das HCV als Pestivirus gilt. Der HBV ist ein Virus mit einem Gehalt an DNS, dessen Genom im Nukleus der infizierten Zelle vervielfältigt wird, wobei eine Kombination einer RNS-Polymerase, die von DNS abhängig ist und eine DNS-Polymerase, die von RNS abhängig ist, verwendet wird (das heißt, eine reverse Transkriptase). Das HCV stellt ein Virus mit einem Gehalt an RNS dar, dessen Genom im Zytoplasma der infizierten Zelle vervielfältigt wird, wobei ein Typus oder mehrere Typen von RNS-Polymerasen zum Einsatz gelangen. Trotz dem häufigen Konkurrieren einer Infektion mit HBV und HCV nebeneinander sind eine Anzahl von Verbindungen bekannt, welche bei der Behandlung einer Infektion durch den HBV wirksam sind, jedoch nicht gegen das HCV wirksam sind. Beispielsweise ist das Lamivudin (ein Nukleosid analog dem 3TC) bei der Behandlung einer Infektion von HBV von Nutzen, aber bei der Behandlung einer Infektion durch HCV unnütz. Der Unterschied bei der Empfindlichkeit des HBV und HCV gegenüber antiviralen Wirkstoffen beruht zweifellos auf den Verschiedenheiten auf Basis ihrer genetisch bedingten Replikation(sweise). Es besteht daher weiterhin ein besonders kritischer Bedarf an therapeutischen Gegenmaßnahmen, mittels denen sowohl Infektionen durch HBV als auch HCV behandelbar sind.
Weitere Hepatitisviren, welche als Auslöser von Humanerkrankungen agieren, schließen Hepatitis A, Hepatitis Delta, Hepatitis E, Hepatitis F sowie die Hepatitis G mit ein [Coates et al. in Exp. O-pin. Ther. Patents, Bd. 5, S. 747–756, (1995)] mit ein. Darüber hinaus gibt es bei Tieren Viren, welche artspezifisch sind. Diese schließen zum Beispiel solche mit ein, welche Enten, Waldmurmeltiere sowie Mäuse infizieren. Dadurch, dass Tiermodelle zur Verfügung stehen, werden präklinische Austestungen antiviraler Verbindungen für jede einzelne Virusklasse ermöglicht. Ferner können Tierviren signifikante Verluste beim gewerblichen Viehbestand verursachen [Sullivan et al. in Virus Res., Bd. 38, S. 231–239, (1995)]. Derartige Tierviren schließen Pestiviren und Flaviviren wie zum Beispiel das Virus der viralen Rinderdiarrhoe (BVDV), das klassische Ferkelfiebervirus, das Virus der Bordererkrankung sowie das Virus der Hogcholera mit ein.
In der WO 98/35 685 sind gewisse Verbindungen beschrieben, welche strukturell mit solchen verwandt sind, die im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung stehen und deren Nutzen in der Behandlung von Hepatitis zu sehen ist, die durch das HBV verursacht wird.
In der US-A-3 530 138 wird die Verwendung von bestimmten kurzkettigen, durch N-Alkyl substituierten Pyridiniumverbindungen vom Thioether- und Thiolaktamtyp zur Behandlung des japanischen Enzephalitisvirus B beschrieben.
Durch die vorliegende Erfindung wird gemäß einem ersten Gesichtspunkt die Verwendung einer wirksamen Menge einer Verbindung in Form eines N-alkylierten Piperidins, das von N-Nonyl-1,5-desoxy-1,5-imino-D-glucitol (N-Nonyl-DNJ) verschieden ist, oder in Form eines N-alkylierten Pyrrolidins oder auch in Form eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Verfügung gestellt, wobei die Verbindung die Morphogenese eines Pesti- oder Flavivirus hemmt, und
worin das genannte Piperidin oder Pyrrolidin mit einem N-C₈-C₁₆-Alkylrest in N-alkylierter Form vorliegt oder ein oxasubstituiertes Derivat davon darstellt.
Bei der Behandlung relevanter Virusinfektionen können die langkettigen N-Alkylverbindungen sowie die oxasubstituierten Derivate davon in einer Zelle oder bei individuellen Patienten angewen det werden. Bei einem Patienten kann die Infektion zu einer chronischen oder auch akuten Erkrankung führen, wobei die Behandlung dieser Erkrankung die Schwere der Infektion (zum Beispiel die Produktion von Viren) oder die Erkrankungssymptome vermindern kann. Die langkettigen N-Alkylverbindungen können die Aktivität der Glukosidase oder die Synthese von Glykolipiden in einem messbaren Ausmaß hemmen, oder auch nicht; bevorzugt sind dabei Verbindungen, welche die Aktivität der α-Glukosidase in einem messbaren Ausmaß nicht hemmen, jedoch immer noch bei der Behandlung von Infektionen wirksam sind.
worin das genannte Piperidin oder Pyrrolidin mit einem N-C₈-C₁₆-Alkylrest in N-alkylierter Form vorliegt oder ein oxa-substituiertes Derivat davon darstellt.
Vorzugsweise schließt eine Verbindung, die eingesetzt wird, eine N-C₈-C₁₀-Alkylgruppe (zum Beispiel die N-Nonyl oder N-Decylgruppe) oder eine N-C₈-C₁₀-Oxa-alkylgruppe wie zum Beispiel eine N-(CH₂)₆O(CH₂)_nCH₃-Gruppe oder eine N-(CH₂)₂O(CH₂)_n+4CH₃-Gruppe, sofern n = 1, 2 oder 3 bedeutet, mit ein. Die Virus hemmende Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff kann eine Hemmkonzentration (IC₅₀) von ungefähr 20 μM oder weniger, vorzugsweise von etwa 10 μM oder weniger und in noch bevorzugterer Weise etwa 5 μM oder weniger aufweisen, und zwar zum Hemmen von einem oder mehreren Pestiviren oder Flaviviren in einer analytischen Testanordnung (zum Beispiel Plaquebildung, Ausbeute). insbesondere wird eine Verbindung bevorzugt, die sowohl gegenüber einem Pestivirus als auch einem Flavivirus wirksam ist.
Die Erfindung ist in einem Verfahren zur Behandlung eines individuellen Patienten, der mit einem Virus infiziert ist, von Nutzen. Das Verfahren schließt die Verabreichung einer wirksamen Menge an der einen Virus hemmenden Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon mit ein, wobei die Applikation an einen mit dem Virus infizierten Patienten erfolgt. Die Behandlung vermag bei Tieren oder Menschen die Virusinfektion vermindern, lindern oder minimieren. Bei dem Tier kann es sich dabei um einen Vogel oder ein Säugetier (zum Beispiel um ein Schwein, Kuh oder Mäuse) handeln. Die Virus hemmende Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff kann peroral verabreicht werden.
Eine pharmazeutische Zusammensetzung gemäß der Erfindung lässt sich in der Weise herstellen, dass mindestens 1 derartige Virus hemmende Verbindung unter Einschluss der N-C₈-C₁₀-Alkylgruppe oder eines oxa-substituierten Derivats davon zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger kombiniert wird.
In bestimmten Ausgestaltungen weist die Verbindung eine der folgenden Formeln auf:
R¹ ein C₈-C₁₆-Alkylrest oder ein oxa-substituiertes Derivat davon darstellt,
R⁴ Wasserstoff ist, und
R⁵ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxyl, Amino, substituiertem Amino, Carboxy, Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, Alkyl, Aryl, Aralkyl, Alkoxy, Hydroxyalkyl, Acyloxy und Aroyloxy besteht,
wobei X jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Carboxy, C₁-C₄-Alkylcarboxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Hydroxyalkyl, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht und
wobei Y jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Carboxy, C₁-C₄-Alkylcarboxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Hydroxyalkyl, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht.
Die Virus hemmende Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff kann in Form von N-alkylierten Piperidinen, N-oxa-alkylierten Piperidinen, N-alkylierten Pyrrolidinen, oder auch N-oxa-alkylierten Pyrrolidinen vorliegen. Bei bestimmten Ausgestaltungen kann die N-alkylierte Piperidin-, N-oxa-alkylierte Piperidin-, N-alkylierte Pyrrolidin- oder N-oxa-alkylierte Pyrrolidinverbindung einen Iminozucker darstellen. Beispielsweise stellen bevorzugte Virus hemmende Verbindungen mit einem Gehalt an Stickstoff folgende dar: N-Nonyl-1,5-didesoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-Nonyl-desoxy-galacto-nojirimycin oder N-Nonyl-DGJ), N-(7-Oxanonyl)-1,5-didesoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-7-Oxanonyl-DGJ), N-Nonyl-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-Nonyl-Me-DGJ), N-(7-Oxa-nonyl-1,5,6-trideoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-7-oxa-nonyl-Me DGJ), N-Nonyl-altrostatin, N-Nonyl-2R,5R-dihydroxymethyl-3R,4R-dihydroxypyrrolidin (N-Nonyl-DMDP), N-Nonyl-2- aminobenzamid (2-ABC₉) oder ein Derivat, Enantiomer oder ein Stereoisomer davon. Die Strukturen der nicht substitutierten Verbindungen sind in der 1 aufgezeigt.
Infektionen durch Flaviviren schließen, allerdings ohne Beschränkung darauf, solche mit ein, welche durch folgende Viren hervorgerufen werden: ein Gelbfiebervirus, Denguevirus (zum Beispiel Dengueviren 1–4), ein japanisches Enzephalitisvirus, ein Enzephalitisvirus Murray Valley, ein Rociovirus, ein Virus des Westnilfiebers, ein Enzephalitisvirus St. Louis, ein Enzephalitisvirus im Zusammenhang mit einer Zecke, ein Virus der Loupingkrankheit (insbes. an Schafe durch Zecken übertragen), ein Powassan-Virus, ein Virus des hämorrhagischen Fiebers von Omsk sowie ein Virus für die Erkrankungen des Kyasanurforstes. Infektionen durch Pestiviren schließen, allerdings ohne Beschränkung darauf, solche mit ein, welche durch folgende Viren hervorgerufen werden: Viren von Hepatitis C (HCV), Rubellavirus, ein Rindervirus der viralen Diarrhoe (BVDV), ein Virus Für das klassische Schweinefieber, ein Virus der Bordererkrankung oder ein Virus für die Hogcholera (infolge Schweineviren).
Die Erfindung lässt sich bei der Herstellung eines Arzneimittels in einem prophylaktischen Verfahren zum Schutz eines Säugers einsetzen, der durch ein Virus infiziert wurde, um das Entwickeln einer Hepatitis oder Leberzellencarcinoms, die sich unter den Folgeerscheinungen der Infektion durch das Virus finden, zu vermeiden, wobei das Verabreichen einer wirksamen, gegen das Virus gerichtete Menge an der Virus hemmenden Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff mit eingeschlossen ist.
In der Erfindung ist eine Verbindung oder ein physiologisch annehmbares Salz oder Solvat davon gemäß der folgenden Formel mit eingeschlossen:
worin R⁵ Wasserstoff bedeuten kann und
R¹ ein oxa-substituiertes Derivat eines C₈-C₁₆-Alkylrestes sein kann.
Geeignete Verbindungen schließen die folgenden mit ein: N-Nonyl-1,5-didesoxy-1,5-imino-D-galactitol-(N-Nonyl-DGJ):
N-(7-Oxa-nonyl)-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-galactitol(N-7-Oxa-nonyl-MeDGJ):
N-(7-Oxa-nonyl)-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-galactitol(N-7-Oxa-Nonyl-MeDGJ):
N-(7-Oxa-nonyl)-1,5,-didesoxy-1,5-imino-D-galactitol(N-7-Oxa-nonyl-DGJ):
oder das N-Nonyl-Altrostatin.
Die Erfindung schließt ferner eine Verbindung oder ein physiologisch annehmbares Solvat davon gemäß der folgenden Formel mit ein:
worin
R¹ ein C₈-C₁₆-Alkylrest oder ein oxasubstituiertes Derivat davon darstellt,
R⁴ Wasserstoff ist,
R⁵ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxyl, Amino, substituiertem Amino, Carboxy, Alkoxycarbonyl, Ami nocarbonyl, Alkyl, Aryl, Aralkyl, Alkoxy, Hydroxyalkyl, Acyloxy und Aroyloxy besteht,
wobei X jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Carboxy, C₁-C₄-Alkylcarboxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Hydroxyalkyl, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht und
wobei Y jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Carboxy, C₁-C₄-Alkylcarboxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Hydroxyalkyl, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht.
Derartige Verbindungen schließen das N-alkylierte Pyrrolidin in Form von N-Nonyl-2R,5R-dihydroxymethyl-3R,4R-dihydroxypyrrolidin mit ein.
Kurzbeschreibung der Zeichnungen:
1 gibt die chemischen Strukturen von Verbindungen wieder, welche bei dieser Untersuchung verwendet wurden.
2 gibt die Prozente der BVDV-Plaques an, die durch eine infizierte Zellkultur in Anweenheit verschiedener Konzentrationen der Verbindungen: N-Butyl-DGJ (♦), N-Nonyl-DGJ
N-Nonyl-Me-DGJ
oder N-Nonyl-DNJ (X) produziert wurden.
3 zeigt die IC₅₀ verschiedener Alky-Kettenlängen von N-alkylierten Verbindungen und
5 zeigt die IC₅₀ von Nonylverbindungen.
4 gibt die Prozente der BVDV-Plaques an, die durch eine infizierte Zellkultur in Anwesenheit verschiedener Konzentrationen an N-Nonyl-DGJ
oder N-Decyl-DGJ (X) produziert wurden.
6 zeigt die Prozente der BVDV-Plaques an, die durch eine infizierte Zellkultur in Anwesenheit verschiedener Konzentrationen an den N-Nonylverbindungen 2-ABC₉ (♦), Nonylamin
N-Nonyl-Altrostatin
N-Nonyl-DGJ (X), N-Nonyl-Me-DGJ
N-Nonyl-DNJ
oder N-Nonyl DMDP (+) produziert wurden.
7 gibt die Prozente der BVDV-Plaques an, die durch eine infizierte Zellkultur in Anwesenheit verschiedener Konzentrationen an N-7-Oxa-nonyl-Me-DGJ produziert wurden.
8 zeigt die zunehmende Aufnahme von ³H-markierten Hemmstoffen in Hep-G2-Zellen in der folgenden Reihenanordnung auf: N-Butyl-DNJ (♦), N-Hexyl-DNJ
N-Octyl-DNJ
N-Nonyl-DNJ (X), N-Decyl-DNJ
N-Dodecyl-DNJ
N-Hexadecan-DNJ(+) oder N-Octadecan-DNJ(–).
Gemäß des vorliegenden Usus weisen die Gruppen die folgenden Merkmale auf, sofern die Anzahl der Kohlenstoffatome nicht auf andere Weise spezifiziert sind: Alkylreste weisen 1 bis 16 Kohlenstoffatome auf und sind gerad- oder verzweigtkettig, substituiert oder nicht substituiert. Alkoxyreste weisen 1 bis 16 Kohlenstoffatome auf und sind gerad- oder verzweigtkettig, substituiert oder nicht substituiert. Alkoxycarbonylreste stellen Estergruppen mit 2 bis 16 Kohlenstoffatome dar. Alkenyloxyreste besitzen 2 bis 16 Kohlenstoffatome, 1 bis 6 Doppelbindungen und sind gerad- oder verzweigtkettig, substituiert oder nicht substituiert. Alkinyloxyreste haben 2 bis 16 Kohlenstoffatome, 1 bis 3 Dreifachbindungen und sind gerad- oder verzweigtkettig, substituiert oder nicht substituiert. Arylreste weisen 6 bis 14 Kohlenstoffatome (zum Beispiel Phenylgruppen) auf und sind substituiert oder nicht substituiert. Aralkyloxy-(zum Beispiel Benzyloxy) und Aroyloxyreste (zum Beispiel Benzoyloxy) weisen 7 bis 15 Kohlenstoffatome auf und sind substituiert oder nicht substituiert. Aminogruppen können als primäre, sekundäre, tertiäre, oder quaternäre Aminogruppen (zum Beispiel substituierte Amiogrouppen) vorliegen. Aminocarbonylreste stellen Amidogruppen (zum Beispiel substituierte Amidogruppen) mit 1 bis 32 Kohlenstoffatomen dar. Substituierte Reste können einen Substituenten mit einschließen, der aus der Gruppe ausgewählt wird, die aus Halogen, Hydroxy, C_1-10-Alkyl, C_2-10-Alkenyl, C_1-10-Acyl, oder C_1-10-Alkoxy besteht.
Eine N-alkylierte Aminosäure kann eine N-alkylierte, natürlich vorkommende Aminosäure sein, wie zum Beispiel eine N-alkylierte α-Aminosäure. Eine natürlich vorkommende Aminosäure ist eine unter den 20 herkömmlichen α-Aminosäuren (Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Asp, Asn, Lys, Glu, Gin, Arg, His, Phe, Cys, Trp, Tyr, Met und Pro) und anderen Aminosäuren, welche natürliche Produkte darstellen, wie zum Beispiel Norleucin, Ethylglycin, Ornithin, Methyibutenyl-methyl-threonin sowie Phenylglycin. Beispiele für Aminosäureseitenketten (zum Beispiel R⁵) schließen H (Glycin), Methyl (Alanin), -CH₂C(O)NH₂ (Asparagin), -CH₂-SH (Cystein) sowie -CH(OH)CH₃ (Threonin) mit ein.
Eine langkettige N-alkylierte Verbindung lässt sich durch eine reduzierende Alkylierung einer Amino-(oder Imino-)Verbindung synthetisieren. Beispielsweise kann die Amino- oder Iminoverbindung gegenüber einem langkettigen Aldehyd zusammen mit einem Reduktionsmittel (zum Beispiel Natriumcyanoborhydrid) exponiert werden, um das Amin zu alkylieren. In ähnlicher Weise lässt sich eine langkettige N-oxa-alkylierte Verbindung durch eine reduzierende Alkylierung einer Amino-(oder Imino-)Verbindung synthetisieren. Beispielsweise kann die Amino- oder Iminoverbindung gegenüber einem langkettigen Oxa-aldehyd zusammen mit einem Reduktionsmittel (zum Beispiel Natriumcyanoborhydrid) exponiert werden, um das Amin zu einem N-Oxa-amin zu alkylieren.
Die Verbindungen können Schutzgruppen mit einschließen. Verschiedene Schutzgruppen sind wohlbekannt. Im allgemeinen ist die Art der Schutzgruppe nicht kritisch, jedoch nur unter der Voraussetzung, dass sie im Hinblick auf die Bedingungen einer oder mehrerer nachfolgender Reaktion(en) an anderen Positionen der Verbindung stabil ist und zum passenden Zeitpunkt ohne nachteilige Beeinflussung des restlichen Moleküls entfernt werden können. Darüber hinaus kann eine Schutzgruppe weiter substituiert werden, nachdem substanzielle synthetische Transformationen vervollständigt wurden. Es ist klar, dass in dem Falle, dass sich eine Verbindung von einer vorliegend offenbarten Verbindung nur dadurch unterscheidet, dass eine oder mehr Schutzgruppen mit einer unterschiedlichen Schutzgruppe substituiert worden ist, eine solche Verbindung innerhalb der Erfindung liegt. Weitere Beispiele und Bedingungen sind in Greene, Protective Groups in Organic Chemistry, [1. Auflage, (1981), Greene & Wuts, 2. Auflage, (1991)] zu finden.
Die Verbindungen lassen sich reinigen, so zum Beispiel durch Umkristallisation oder chromatographische Verfahren. Die Verbindung lässt sich auch stereospezifisch unter Einsatz einer stereospezifischen Amino- oder Iminoverbindung als Ausgangsmaterial darstellen.
Die Amino- und Iminoverbindungen, die als Ausgangsmaterialien bei der Synthese der langkettigen N-alkylierten Verbindungen eingesetzt werden, sind im Handel erhältlich (Sigma, St. Louis, MO; Cambridge Research Biochemicals, Norwich, Cheshire, United Kingdom; Toronto Research Chemicals, Ontario, Canada) oder lassen sich mittels bekannter synthetischer Verfahren darstellen. Zum Beispiel können die Verbindungen in Form von langkettigen N-alkylierten Iminozuckerverbindungen oder oxa-substituierten Derivaten davon vorliegen. Der Iminozucker kann beispielsweise als Desoxygalactonojirmycin (DGJ), 1-Methyl-desoxygalactonojirimycin (Me-DGJ), Desoxynorjirimycin (DNJ), Altrostatin, 2R,5R-Dihydroxymethyl-3R,4R-dihydroxypyrrolidin (DMDP) oder in Form von deren Derivaten, Enantiomeren oder Stereoisomeren vorliegen.
Die Synthesen einer Vielfalt von Iminozuckerverbindungen wurden bereits beschrieben. Zum Beispiel sind Verfahren zur Synthese von DNJ-Derivaten bekannt; sie sind in den folgenden Dokumenten beschrieben: beispielsweise in den US-Patenten Nr. 5 622 972 , 5 200 523 , 5 043 273 , 4 994 572 , 4 246 345 , 4 266 025 , 4 405 714 und 4 806 650 sowie in der US-Patentanmeldung 07/851 818 , eingereicht am 16. März 1992. Verfahren zur Synthese anderer Iminozuckerderivate sind bekannt und zum Beispiel beschrieben in den US-Patenten Nr. 4 861 892 , 4 894 388 , 4 910 310 , 4 996 329 , 5 011 929 , 5 013 842 , 5 017 704 , 5 580 884 , 5 286 877 sowie 5 100 797 . Die enantiomerenspezifische Synthese von 2R, 5R-Dihydroxymethyl-3R, 4R-dihydroxypyrrolidin (DMDP) ist von Fleet & Smith [Tetrahedron Letter, 26, S. 1469–1472, (1985)] beschrieben.
Die Substituenten an der Iminozuckerverbindung vermag die Potenz der Verbindung als antiviriler Wirkstoff beeinflussen, wobei sie zusätzlich noch in bevorzugter Weise das Molekül zu einem bestimmten Organ im Vergleich zu anderen Organen lenken können. In den Beispielen werden Verfahren zum Vergleich der Potenzen verschiedener substituierter Verbindungen aufgezeigt.
Die vorliegend beschriebenen Verbindungen lassen sich in Form des freien Amins oder in Form eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes zum Einsatz bringen. Pharmazeutische Salze und Verfahren zur Darstellung der Salzformen wurden durch Berge et. al. [3. Pharm. Sci., Bd. 66, S. 1–18, (1977)] zugänglich gemacht. Pharmazeutisch annehmbare Salze können im Zusammenhang mit Verbindungen bevorzugt sein, bei denen Solubilisierungsprobleme im Hinblick auf die pharmazeutische Zusammensetzung bestehen (zum Beispiel bei Verbindungen mit längeren Alkylketten). Eine Salzform wird beispielsweise durch das HCl-Salz eines Aminoderivats veranschaulicht. Die Verbindungen lassen sich auch in der Form von Prodrugs einsetzen, wie zum Beispiel die Derivate von 6-phosphoryliertem DNJ, wie sie in den US-Patenten Nr. 5 043 273 und 5 103 008 beschrieben sind. Die Verwendung der Zusammensetzungen umfasst ferner einen pharmazeutisch annehmbaren Träger, wobei Zusammensetzungen, welche darüber hinaus noch Bestandteile mit einschließen, die für die Verabreichung solcher Zusammensetzungen an Tiere von Nutzen sind, ausdrücklich in Betracht gezogen werden. Zahlreiche pharmazeutisch annehmbare Träger, die für die Verabreichung der Zusammensetzungen an Humanpatienten zweckmäßig sind und Bestandteile, die für die Verabreichung an andere Tiere als Weidevieh von Nutzen sind, gehören zum Stand der Technik. Der Zusatz derartiger Träger und Bestandteile für die Zusammensetzung gemäß der Erfindung liegt ohne weiteres innerhalb des Könnens des Durchschnittsfachmannes. Beispielsweise kann es sich bei den Stoffen um Di- oder Tetra-acetate, Propionate, Butyrate oder Isobutyrate handeln.
Die Erfindung schließt auch mit Isotopen markierte Gegenstücke der vorliegend offenbarten Verbindungen mit ein. Eine mit Isotopen markierte Verbindung gemäß der Erfindung weist ein oder mehrere Atome auf, die durch ein Isotop ersetzt sind, das ein detektierbares Teilchen oder einen Röntgenstrahlen aussendenden (radioaktiven) oder einen magnetisch drehenden Kern besitzt. Beispiele für derartige Kerne schließen ²H, ³H, ¹³C, ¹⁵N, ¹⁹F, ²⁹Si, ³¹P, ³²P und ¹²⁵I mit ein. Mit Isotopen markierte Verbindungen gemäß der Erfindung sind insbesondere von Nutzen als Sonden oder Forschungswerkzeuge für spektrometrische Analysen, Radioimmunoassays, Bindungsassays auf Basis von Szintillation, Fluorographie, Autoradiographie und kinetischen Studien, wie zum Beispiel Untersuchungen zur Hemmung oder Bestimmung von primären und sekundären Isotopeneffekten.
Die Viren hemmende Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff lässt sich an eine Zelle oder einen individuellen Patienten, der von dem Virus betroffen ist, verabreichen. Die Verbindung vermag die Morphogenese des Virus zu hemmen, oder sie ermöglicht die Behandlung des individuellen Patienten. Die Behandlung kann die Virusinfektion beim Tier vermindern, lindern oder abschwächen. So zum Beispiel sind die N-Nonyl-, N-Decyl-, N-3-Oxa-nonyl-, N-3-Oxa-decyl-, N-7-Oxanonyl- und N-7-Oxa-decyl-Verbindungen antiviril. Die antivirile Aktivität ist im Wesentlichen ohne Bezug zu den übrigen Funktionsweisen der Verbindung.
Die Viren hemmende Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff lässt sich mit mindestens einer weiteren anderen antiviralen Verbindung kombinieren, wie zum Beispiel einem Hemmstoff (Inhibitor) einer viralen DNS- oder RNS-Polymerase und/oder Protease, und/oder mindestens einem Hemmstoff der Expression viraler Gene, der Replikation des viralen Genoms, und/oder der Anordnung eines viralen Teilchens. Bei der supplementären antiviralen Verbindung kann es sich um einen beliebigen antiviralen Wirkstoff, der zum gegenwärtigen Zeitpunkt erkannt ist, oder einen beliebigen antiviralen Wirkstoff handeln, der erst später erkannt werden mag. Beispielhaft kann die supplementäre antivirale Verbindung vorliegen in Form von α-Interferon, β-Interferon, Ribavirin, Lamivudin, Brefeldin A, Monensin, TUVIRUMAB^® (Protein Design Labs) PENCICLOVIR^® (SmithKline Beecham), FAMCICLOVIR^® (Smith-Kline Beecham), BETASERON^® (Chiron), THERADIGM-HBV^® (Cytel), Adefovir Dipivoxil (GS 840, Gilead Sciences), INTRON A^® (Schering Plough), ROFERON^® (Roche Labs), BMS 200 475 (Bristol Myers Squibb), LOBUCAVIR^® (Bristol Myers Squibb), FTC (Triangle Pharmaceuticals), DAPD (Triangle Pharmaceuticals), Thymosin-α-peptid, Glycovir [Block et al. in Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Bd. 91, S. 2235–2240, (1994)], der eine Kolonie aus Granulozyten und Makrophagen stimulierende Faktor [Martin et al. in Hepatology, Bd. 18, S. 775–780, (1993)], ein "Immunocytokin" [Guidotti et al. in J Virol., Bd. 68, S. 1265–1270, (1994)], CDG [Fourel et al. in J. Virol., Bd 68, S. 1059–1065, (1994)] oder dergleichen.
Langkettige N-Alkylverbindungen stellen Wirkstoffe dar, die auf die virale Expression einen Hemmeffekt ausüben. Dagegen sind kurzkettige N-Alkylderivate von Iminozuckern (zum Beispiel N-Butyl-DNJ potente Hemmstoffe der Enzyme, die über Stickstoff verknüpfte Oligosaccharide zerlegen, wie zum Beispiel die α-Glukosidase I und α-Glukosidase II [Saunier et al. in J Biol. Chem., Bd. 257, S. 14.155–14.161, (1982); Elbein in Ann. Rev. Biochem., Bd. 56, S. 497–534, (1987)]. Einige langkettige N-Alkylverbindungen gemäß der Erfindung vermögen im Prinzip nur eine geringe oder gar keine Hemmung eines Glukosidase-Enzyms auszuüben, insbesondere im Vergleich zu N-Butyl-DNJ oder N-Nonyl-DNJ. In unerwarteter Weise jedoch hemmen einige langkettige N-Alkylverbindungen die virale Morphogenese bei Zellen, welche mit einem Virus, wie zum Beispiel einem Flavivirus oder Pestivirus, infiziert sind, in effizienter Weise. Beispielsweise kann die Viren hemmende Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff zur Hemmung von BVDV oder eines anderen Virus eine IC₅₀ bei etwa 10 μMol oder weniger aufweisen, vorzugsweise etwa 3 μMol oder weniger; die gleichen Verbindungen zeigen möglicherweise nur eine geringe Wirkung gegenüber Glukosidasen oder bei der Hemmung der Glykolipidsynthese.
Verfahren zur Behandlung eines Säugers unter Einsatz von DNJ-Derivaten, der durch das Virus RSV (respiratory syncytial Virus) infiziert wurde, sind in dem US-Patent Nr. 5 622 972 beschrieben. Die Verwendung von DNJ und N-Methyl-DNJ ist ebenfalls bereits offenbart im Hinblick auf die Replikation kompletter Retroviren, wie zum Beispiel von HIV (Human immunodeficiency Virus), des Virus der Katzenleukämie, des Virus der ansteckenden Pferdeanämie sowie der Lentiviren von Schafen und Ziegen [ US-Patente Nr. 5 643 888 und 5 264 356 ; Acosta et al. in Ant. J. Hosp. Pharm., Bd. 51, S. 2251–2267, (1994)].
In Abwesenheit eines geeigneten Zellkultursystems, das dazu befähigt ist, das humane HCV zu replizieren, dient das Virus der viralen Rinderdiarrhoe (BVDV) als der Modellorganismus für das HCV, zumal beide in einem signifikanten Ausmaß eine Homologie der lokalen Proteinregion [Miller & Purcell in Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Bd. 87, S. 2057–2061, (1990)], gemeinsame Strategien bei der Replikation und wahrscheinlich die gleiche subzellulare Platzierung für die virale Hülle teilen. Verbindungen, bei denen es sich herausgestellt hat, dass sie einen antiviralen Effekt gegenüber dem BVDV aufweisen, werden dringend als potentielle Kandidaten für die Behandlung von HCV-Infektionen empfohlen.
Die Zytotoxizität, die von der Exposition von Säugerzellen gegenüber dem Virus der viralen Diarrhoe (BVDV) in einer Gewebekultur herrührt, wird dadurch verhindert, dass eine Viren hemmende Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff zu dem Medium der Gewebekultur hinzugefügt wird. Die Virushemmstoffe, die gemäß den unten stehenden Beispielen eingesetzt wurden, schlossen langkettige N-Alkylderivate von DGJ mit ein. Aufgrund der Tatsache, dass das BVDV ein akzeptiertes Gewebekulturmodell für das HCV [Henzler & Kaiser in Nature Biotechnology, Bd. 16, S. 1077–1078, (1998)] darstellt, sind die vorliegend beschriebenen Zusammensetzungen zum Hemmen der Morphogenese des BVDV auch bei der Hemmung der Morphogenese von HCV von Nutzen.
Die Menge an dem antiviralen Wirkstoff, welche an ein Tier oder an eine Tierzelle verabreicht wird, und zwar mittels der Verfahren gemäß der Erfindung stellt eine Menge dar, die für die Hemmung der viralen Morphogenese im Hinblick auf die Zelle wirksam ist. Der Ausdruck "Hemmen" gemäß des vorliegenden Gebrauchs bezieht sich auf die messbare Verminderung und/oder Beseitigung einer biologischen Aktivität, die in Abwesenheit einer Viren hemmenden Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff gemäß der Erfindung sichtbar wird. Der Ausdruck "wirksame Menge" bezieht sich auf eine solche Menge an einer Zusammensetzung, welche dazu benötigt wird, den bezeichneten Effekt zu erzielen. Der Ausdruck "Behandlung" gemäß dem vorliegenden Gebrauch bezieht sich auf die Verminderung oder Beseitigung von Symptomen bei einem Patienten, das Vermeiden von Symptomen einer Verschlimmerung oder eines Fortschreitens, die Hemmung oder Beseitigung des verursachenden Agens, oder der Verhinderung der Infektion oder Störung bei einem Patienten, der davon frei ist.
Somit schließt beispielsweise die Behandlung einer viralen Infektion die Zerstörung des infizierenden Agens, die Hemmung oder Beeinträchtigung hinsichtlich seiner Größe oder Ausreifung, die Neutralisation seiner pathologischen Effekte und dergleichen mit ein. Die Menge der Zusammensetzung, welche an die Zelle oder an das Tier verabreicht wird, liegt in bevorzugter Weise in einem solchen Maße vor, dass keinerlei toxische Effekte induziert werden, welche die Vorteile aufwiegen würden, welche mit deren Verabreichung verbunden sind.
Die aktuellen Dosierungsbereiche der Wirkstoffe in den pharmazeutischen Zusammensetzungen gemäß der vorliegenden Erfindung können in der Weise variiert werden, dass sie in einer solchen Menge an der wirksamen Verbindung verabreicht werden, dass die gewünschte therapeutische Antwort bei einem speziellen Patienten erzielt wird.
Der ausgewählte Dosisbereich dürfte von der Aktivität der ausgewählten Verbindung und dem Weg der Verabreichung, der Schwere des Zustandes, der Kondition und der medizinischen Vorgeschichte des zu behandelnden Patient abhängig sein. Es liegt allerdings beim fachmännischen Wissensstand, mit Dosierungen der Verbindung(en) in einem jeweiligen Dosisbereich zu beginnen, die benötigt werden, um den gewünschten therapeutischen Effekt zu erzielen und um die Dosierung schrittweise so lange zu erhöhen, bis der gewünschte Effekt erzielt wird. Falls gewünscht, lässt sich die wirksame Tagesdosis in mehrfache Dosen zum Zwecke der Verabreichung teilen, beispielsweise in zwei bis vier Dosen täglich. Allerdings wird darunter verstanden, dass der spezielle Dosisbereich für einen beliebigen Patienten von einer Vielzahl von Faktoren, einschließlich Körpergewicht, allgemeinem Gesundheitszustand, einer Diät, der Zeitdauer und der Art des Verabreichungsweges sowie der Kombination mit anderen Arzneistoffen und der Schwere der zu behandelnden Erkrankung abhängig ist. Es ist zu erwarten, dass die Tagesdosierung beim Erwachsenen normalerweise in dem Bereich von zwischen 1 μg bis zu etwa 1 g, in bevorzugter Weise zwischen 10 mg und 100 mg im Hinblick auf die Viren hemmende Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff liegt. Selbstverständlich ist die Verabreichungsmenge der Zusammensetzung, welche bei einer Zelle appliziert werden soll, von zahlreichen Faktoren abhängig, die von den Fachleuten auf diesem Gebiet gut verstanden sind, so zum Beispiel vom Molekulargewicht der Viren hemmenden Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff, dem Verabreichungsweg und dergleichen.
Pharmazeutische Zusammensetzungen, die bei den Verfahren gemäß der Erfindung zweckmäßig sind, können systemisch mittels oraler fester Formulierungen, oder Augenpräparate, Suppositorien, Aerosolen, topischen oder anderen ähnlichen Formulierungen appliziert werden. Beispielsweise können diese in der physikalischen Form von Pulver, Tabletten, Kapseln, Pastillen, Gelen, Lösungen, Suspensionen, Sirup oder dergleichen vorliegen. Zusätzlich zu der Viren hemmenden Verbindung mit einem Gehalt an Stickstoff können derartige Zusammensetzungen pharmazeutisch annehmbare Trägerstoffe oder andere Bestandteile enthalten, die dafür bekannt sind, dass sie die Darreichung des Arzneistoffs verbessern oder erleichtern. Andere mögliche Formulierungen, wie zum Beispiel Nanopartikel, Liposomen, wieder hermetisch abgeschlossene Erythrozyten sowie auf Immunologie basierende Systeme lassen sich bei der Darreichung der Verbindung gemäß des Verfahrens der Erfindung einsetzen. Derartige Zusammensetzungen können auf jegliche bekannte Art und Weise verabreicht werden. Der Ausdruck "parenteral" nach dem vorliegenden Gebrauch schließt die subkutane, intravenöse, intra-arterielle und intrathekale Verabreichung und Injektionen sowie Infusionstechniken ohne Beschränkungen mit ein. Beispielhaft können die pharmazeutischen Zusammensetzungen peroral, topisch, parenteral, systemisch oder über den Weg über die Lunge verabreicht werden.
Diese Zusammensetzungen lassen sich gemäß den Verfahren nach der Erfindung in einer einfachen Dosis oder in mehrfachen Dosen verabreichen, wobei die Applikation zu verschiedenen Zeitpunkten erfolgt. Aufgrund der Tatsache, dass der Hemmeffekt der Zusammensetzung auf das Virus andauern kann, lässt sich das Dosierungsschema so einregulieren, dass die Ausbreitung des Virus verzögert wird, während die Wirtszelle nur minimal betroffen ist. In beispielhafter Weise kann einem Tier eine Dosis der Zusammensetzung gemäß der Erfindung einmal pro Woche verabfolgt wer den, wodurch die Ausbreitung des Virus für eine ganze Woche verzögert wird, wogegen aber die Funktionen der Wirtszelle nur für eine kurze Zeitdauer während dieser Woche behindert werden.
Die folgenden speziellen Beispiele sind so aufzufassen, dass sie lediglich der Erläuterung, nicht aber der Beschränkung in Bezug auf den Rest der Erfindung dienen.
BEISPIELE
Synthese von N-Nonyl-DGJ (NN-DGJ), N-Nonyl-methyl-DGJ (NN-MeDGJ), N-Nonyl-Altrostatin, N-Nonyl-DNJ (NN-DNJ), N-Nonyl-DMDP (NN-DMDP) sowie N-Nonyl-2-aminobenzamid
Die jeweils verwandte Amino oder Iminovrbindung (DGJ, MeDGJ, Altrostatin, DNJ, DMDP, oder 2-Aminobenzamid (2-ABC₉) wurde unter Reduktionsbedingungen mit 1,2 Mol Äquivalenten Nonylaldehyd in Anwesenheit von 1 Mol Äquivalent Natriumcyanoborhydrid 3 Stunden lang bei Raumtemperatur in angesäuertem Methanol alkyliert. Typische Ausbeuten bei dieser Reaktion waren höher als 95% gemäß einer Bestimmung durch amperometrische Messung nach der Chromatographie auf Basis von Hochleistungskationenaustausch (Dionex). Die N-Nonyl-Verbindungen wurden aus dem Reaktionsgemisch heraus mittels der Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) wie folgt gereinigt: Eine Probe wurde in eine Kationenaustauschersäule SCX (7,5 × 50 mm) in 20% igem (V/V) Acetonitril verbracht und bei einem linearen Gradienten von 20% Acetonitril mit einem Gehalt an 500 mMol Ammoniumformiat bei einem pH von 4.4 eluiert. Die N-Nonylverbindung wurde zurückgewonnen und in eine Umkehrphasensäule C18 (4.6 × 250 mm) verbracht, welche mit 10% igem Acetonitril mit einem Gehalt an 0,1% Trifluoressigsäure (TFA) äquilibriert war. Die Verbindung wurde aus der Säule unter Einsatz eines linearen Gradienten aus 80% Acetonitril, enthaltend 0,1% Trifluoressigsäure, eluiert, bis zur Trockne Iyphilisiert und in Methanol aufgelöst. Es wurden Proben der gereinigten Verbindung durch die Flugzeitmassenspekrometrie auf Basis der durch eine Matrix unterstützten Laserionisation (MALDI-TOF) analysiert, und zwar unter Einsatz von 2,5-Dihydroxybenzoesäure als die Matrix.
Verbindungen mit einer unterschiedlichen Länge der N-Alkylkettenlänge wurden durch den Ersatz des Nonylaldehyds durch den Aldehyd der gewünschten Kettenlänge synthetisiert. Mit Tritium markierte Verbindungen werden in der Weise synthetisiert, dass mit Tritium versehenes Natriumcyanoborhydrid als Reduktionsmittel bei der Reaktion benutzt wird.

(a) N-Nonyl-DGJ: Die MALDI-TOF-Massenspektrometrie zeigte bei der Atommasse 288,83 Einheiten erwartungsgemäß nach der in der 1 dargestellten Struktur einen Gipfel.
(b) N-Nonyl-MeDGJ: Die MALDI-TOF-Massenspektrometrie zeigte bei der Atommasse 273,93 Einheiten erwartungsgemäß nach der in der 1 dargestellten Struktur einen Gipfel.
(c) N-Nonyl-Altrostatin: Die MALDI-TOF-Massenspektrometrie zeigte bei der Atommasse 289,44 Einheiten erwartungsgemäß nach der in der 1 dargestellten Struktur einen Gipfel.
(d) N-Nonyl-DMDP: Die MALDI-TOF-Massenspektrometrie zeigte bei der Atommasse 287,66 Einheiten erwartungsgemäß nach der in der 1 dargestellten Struktur einen Gipfel.
(e) N-Nonyl-2-Aminobenzamid (2-ABC₉):.Die MALDI-TOF-Massenspektrometrie zeigte bei der Atommasse 261,57 Einheiten erwartungsgemäß nach der in der 1 dargestellten Struktur einen Gipfel.

Synthese von N-(7-Oxa-Nonyl)-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-Galactitol
Schritt 1: Synthese von 2,3,5,6-Di-O-isopropyliden-D-gulono-1,4-lakton
Es wurde 1 g p-Toluolsulfonsäure Monohydrat unter Rühren zu einer Lösung von D-Gulonolakton (20 g, 0,11 Mol) in 2,2-Dimethoxypropan (60 ml) und trockenem Aceton (200 ml) hinzu gegeben. Nach 24 Stunden machte die Dünnschichtchromatographie (DC) mit Ethylacetat den Verbrauch an Ausgangsmaterial (R_f 0,0) und die Bildung einer größeren Produktmenge (R_f 0,8) sichtbar. Das Reaktionsgemisch wurde mit einem Überschuss an Natriumhydrogencarbonat neutralisiert, danach abfiltriert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen. Der Rückstand wurde aus dem Gemisch Ethylacetat/Hexan umkristallisiert, wobei 26,3 g von 2,3, 5,6-Di- O-isopropyliden-D-gulono-1,4-lakton (0,1 Mol) in Form weißer Kristalle in 91% iger Ausbeute erhalten wurden.
Fp. 150–153°C; [α]D²² +76.2 (c. 0.88 in Aceton); δH (200 MHz, CDCl₃): 1.28 (s, 6H, C(CH₃)₂), 1.33, 1.37 (2 × s, 6H, C(CH₃)₂), 3.90 (dd, 1H, J 6.0 Hz, J 9.0 Hz), 4.02-4.10 (m, 1H), 4.18-4.27 (m, 1H), 4.49 (dd, 1H, J_3,4 3 Hz, J_4,5 9 Hz, H-4), 4.92 (dd, 1H, J_2,3 6 Hz, J_3,4 3 Hz, H-3), 4.96 (d, 1H, J_2.3 6 Hz. H-2): δc (50 MHz, CDCl₃): 25.6 (C(CH₃)₂), 26.3 (C(CH₃)₂), 27.1 (C(CH₃)₂), 27.2 (C(CH₃)₂). 65.6 (CH₂, C-2), 75.7, 76.4, 76.5. 81.3 (4 × CH, C-2, C-3, C-4), 110.9 (C(CH₃)₂), 114.7 (C(CH₃)₂). 173.3 (C=O). Schritt 2: Synthese von 2,3-O-Isopropyliden-D-gulon-lakton
Es wurden 26 g von 2,3, 5,6-Di-O-isopropyliden-D-gulono-1,4-lakton (0,1 Mol) in 200 ml wässriger Essigsäure (80%) aufgelöst, wonach die Lösung über Nacht bei Raumtemperatur gerührt wurde. Die Dünnschichtchromatographie (DC) mit Ethylacetat machte den Verbrauch an Ausgangsmaterial (R_f 0.8) und die Bildung einer größeren Produktmenge (R_f 0.4) sichtbar. Das Reaktionslösungsmittel wurde entfernt und der Rückstand aus dem Gemisch Ethylacetat/Hexan umkristallisiert, wobei 20,7 g von 2,3-O-Isopropyliden-D-gulono-1,4-lakton (95 mMol, 95 rein) in Form eines weißen Feststoffes erhalten wurden.
Fp. 139–141°C; [α]D²² +73.1 (c, 2.4 in Aceton); δH (200 MHz, CDCl₃): 1.21, 1.22 (2 × s, 6H, C(CH₃)₂), 3.46-3.57 (m, 2H), 3.64-3.73 (m, 1H), 4.48 (dd, 1H, J_3,4 5 Hz, J_4,5 3Hz, H-4), 4.75 (d, 1H, J_2,3 5 Hz, H-2), 4.81 (dd, 1H, J_2,3 5 Hz, J_3,4 3 Hz, H-3); δC (50 MHz, CDCl₃): 26.0 (C(CH₃)₂), 26.1 (C(CH₃)₂), 62.7 (CH₂, C-6), 71.3 (CH, C-3), 76.7, 77.1 (2 × CH, C-4, C-5), 81.8 (CH, C-2), 113.9 (C(CH₃)₂), 175.5 (C=O). Schritt 3: Synthese von 2,3-O-Isopropyliden-L-lyxono-1,4-lakton
Es wurden 10.9 g (50 mMol) 2,3-O-Isopropyliden-D-gulonolakton in 250 ml THF unter Stickstoffatmosphäre aufgelöst. Sodann wurden 12.8 g Perjodsäure (56 mMol, 1.12 Äquival.) hinzugefügt. Nach 5 Minuten wurde die Lösung wolkig; sodann wurde sie weitere 15 Minuten lang kräftig gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mittels Eluieren über einen Kieselgeleinsatz gereinigt, welcher mit Ethylacetat eluiert wurde. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck abgezogen, wobei ein gelbes Öl gewonnen wurde, das in 150 ml Essigsäure aufgelöst wurde. Sodann wurden 3,22 g Natriumcyanoborhydrid (51 mMol) hinzugefügt; danach wurde die Lösung 90 Minuten lang gerührt. Zum Abschrecken des Reaktionsgemisches wurde eine Lösung aus gesättigtem, wässrigem Ammoniumchlorid dazu gegeben, wonach das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen wurde. Der Rückstand wurde in 200 ml Ethylacetat aufgelöst und mit 50 ml einer Lösung aus gesättigtem, wässrigem Ammoniumchlorid, 50 ml Wasser und 50 ml Kochsalzlösung gewaschen. Die wässrige Schicht wurde 3 Mal mit jeweils 50 ml Ethylacetat nochmals extrahiert. Die organischen Fraktionen wurden miteinander vereinigt, über Magnesiumsulfat getrocknet, das Ganze abfiltriert und das Lösungsmittel abgezogen. Die Reinigung mittels der Entspannungs(Flash)chromatographie (Ethylacetat) erbrachten 7,93 g 2,3-O-Isopropyliden-L-lyxono -1,4-lakton (42 mMol) in 84% iger Ausbeute als einen weißen Feststoff.
Fp. 94–95°C; [α]D 23-90.8 (c, 1.08 in Aceton); δH (500 MHz, CDCl₃): 1.41, 1.49 (6H, 2 × s, C(CH₃)₂), 2.18 (1H, br, OH), 3.87 (1H, dd, J_4,5' 5.3 Hz, J_5,5' 12.3 Hz, H-5'), 4.15 (1H, dd, J_4,5 6.4 Hz, J_5,5' 12.3 Hz, H-5), 4.56 (1H, ddd, J_4,5' 5.3 Hz, J_4,5 6.6 Hz, J_3,4 3.6 Hz, H-4), 4.82 (1H, d, J_2,3 5.5 Hz, H-2), 4.85 (1H, dd, J_3,4 3.6 Hz, J_2,3 5.5 Hz, H-3), δC (50 MHz, CDCl₃): 26.2 (C(CH₃)₂), 27.1 (C(CH₃)₂), 61.3 (CH₂, C-5), 76.6, 76.7, 79.8 (3 × CH, C-2, C-3, C-4), 114.9 (C(CH₃)₂), 174.3 (C=O). Schritt 4: Synthese von 5-Azido-5-desoxy-2,3-O-isopropyliden-L-lyxono-1,4-lakton
Es wurden 5.8 g 2,3-O-Isopropylidene-L-lyxono-1,4-lakton (30,9 mMol) unter einer Stickstoffatmosphäre in 140 ml wasserfreiem Dichlormethan aufgelöst. Die Lösung wurde auf-30°C abgekühlt und sodann 12 ml wasserfreies Pyridin hinzu gegeben. Im Anschluss daran wurden 6,5 ml Trifluormethansulfonsäureanhydrid tropfenweise zu der Lösung hinzugefügt, welche bei –30°C gerührt wurde. Nach 60 Minuten ergab die Dünnschichtchromatographie (DC) in dem Gemisch Ethylacetat/Hexan im Verhältnis 1:1 eine vollständige Reaktion. Die Lösung wurde bis zur Erwärmung auf 0°C stehen gelassen; danach wurden 250 ml trockenes DMF und 8,2 g Natriumazid (126 mMol, 4 Äquival.) hinzugefügt. Die Suspension wurde bei Raumtemperatur 4 Stunden lang gerührt und dann zum Abschrecken der Reaktion 25 ml Wasser dazu gegeben. Anschließend wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen und zusammen mit Toluol evaporiert. Im Anschluss daran wurde der Rückstand in 250 ml Dichlormethan aufgelöst und 2 Mal mit 50 ml Wasser und einmal mit 50 ml Kochsalzlösung gewaschen. Die wässrige Schicht wurde nochmals extrahiert, und zwar 3 Mal mit 50 ml Dichlormethan. Die organischen Fraktionen wurden miteinander vereinigt, über Magnesiumsulfat getrocknet, abfiltriert und sodann das Lösungsmittel abgezogen. Die Reinigung mittels der Flash-Chromatographie mittels Hexan/Ethylacetat im Verhältnis 1:1 erbrachte 5.8 g 5-Azido-5-desoxy-2,3-O-isopropyliden-L-lyxono-1,4-lakton (27,2 mMol) in 88% iger Ausbeute in Form weißer Kristalle.
[α]D 23-71.0 (c, 2.0 in CHCl₃); ν_max (film/cm^-1) 1784 (C=O), 2101 (N3); δH (500 MHz, CDCl₃): 1.42, 1.50 (6H, 2 × s, C(CH₃)₂), 3.66 (1H, dd, J_4,5' 6.3 Hz, J_5,5' 12.9 Hz, H-5'), 3.72 (1H, dd, J_4,5 7.1 Hz, J_5,5' 12.9 Hz, H-5), 4.62 (1H, ddd, J_4,5' 6.3 Hz, J_4,5 7.1 Hz, J_3,4 3.5 Hz, H-4), 4.83 (1H, dd, J_3,4 3.5 Hz, J_2,3 5.4 Hz, H-3), 4.86 (1H, d, J_2,3 5.4 Hz, H-2); δC (50 MHz, CDCl₃): 26.3 (C(CH₃)₂), 26.5 (C(CH₃)₂), 50.4 (CH₂, C-5), 76.1, 76.4, 77.6 (3 × CH, C-2, C-3, C-4), 115.1 (C(CH₃)₂), 173.4 (s, C=O); m/z (Cl, NH₃): 218 (100%), 186 (35%, MH+N₂);
(Gefunden: C, 45.26; H, 5.43; N, 19.24. C₈H₁₁O₄N₃
erforderlich: C, 45.07; H, 5.20; N, 19.71%). Step 5: Synthese von 6-Azido-1,6-didesoxy-3,4-O-isopropyliden-L-lyxo-2,5-hexulose
4 g 5-Azido-5-desoxy-2,3-O-isopropyliden-L-lyxono-1,4-lakton (18.8 mMol) wurden in 70 ml trockenem THF unter einer Stickstoffatmosphäre in Anwesenheit von 4 Å-Molekularsieben aufgelöst. Sodann wurde die Lösung auf –78°C abgekühlt. Dazu wurden 18 ml Methyllithium (25,2 mmol, 1,4 M Lösung in Diethylether) gegeben, wonach die Lösung bei –78°C gerührt wurde. 2 Stunden später ergab die Dünnschichtchromatographie in dem Gemisch Ethylacetat/Hexan im Verhältnis 1:1) das Verschwinden des Ausgangsmaterials (R_f 0.62) und ein neues Produkt (R_f 0.72). Es wurden 10 ml gesättigte, wässrige Ammoniumchloridlösung hinzugefügt und die Lösung 30 Minuten lang gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde im Anschluss daran 4 Mal mit 50 ml Dichlormethan extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt, über Magnesiumsulfat getrocknet, abfiltriert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen. Der daraus resultierende gelbe Feststoff wurde mittels der Flash-Chromatographie über das Gemisch Ethylacetat/Hexan im Verhältnis 1:2 gereinigt, wobei 3,49 g 6-Azido-1,6-didesoxy-3,4-O-isopropyliden-L-lyxo-2,5-hexulose in 91% iger Ausbeute in Form eines weißen Feststoffes erhalten wurden.
Fp. 89–90°C; [α]D²¹ –12.5 (c, 1.01 in CHCl₃); ν_max (KBr)/cm^–1: 3436 (br, OH), 2101 (N₃); dH (500 MHz, CDCl₃): 1.33, 1.48 (6H, 2 × s, C(CH₃)₂), 1.54 (3H, s, CH₃), 2.13 (1H, br, OH), 3.54 (2H, d, J_6',6 6.4 Hz, H-6, H-6'), 4.23 (1H, app. dt, J_5,4 3.9 Hz, J_5,6 6.4 Hz, H-5), 4.48 (1H, d, J_3,4 5.9 Hz, H-3), 4.78 (1H, dd, J5.9 Hz, J_4,5 3.9 Hz, H-4); δC (50 MHz, CDCl₃): 22.9 (CH₃, C-1), 25.2, 26.5 (2 × CH₃, C(CH₃)₂), 50.4 (CH₂, C-6), 77.9, 80.9, 85.8 (3 × CH, C-3, C-4, C-5), 105.9 (C-2), 113.4 (C(CH₃)₂); m/z (APCI+): 216 (92%), 202 (MH⁺-N₂, 38%), 184 (MH⁺-H₂O-N₂, 100%);
(Gefunden: C, 47.38; H, 6.53; N, 18.03%; C₉H₁₅O₄N₃;
erforderlich: 47.16; H, 6.60; N, 18.33%). Schritt 6: Synthese of 1,5,6-Tridesoxy-1,5-imino-3,4-O-isopropyliden-D-galactitol
Es wurde 1,0 g 6-Azido-1,6-didesoxy-3,4-O-isopropyliden-L-lyxo-2,5-hexulose (4,4 mMol) in 25 ml Ethanol aufgelöst und 300 mg Palladiumschwarz hinzugefügt. Die Lösung wurde 3 Mal entgast und die Luft durch Wasserstoff ersetzt. Die Lösung wurde bei Raumtemperatur unter einer Wasserstoffatmosphäre gerührt. Nach 24 Stunden wurde die Lösung durch einen Celite-Einsatz hindurch abfiltriert und mit Ethanol eluiert. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wobei ein gelber Feststoff gewonnen wurde, der durch die Flash-Chromatographie mittels Chloroform/Methanol im Verhältnis 4:1 gereinigt wurde, wobei 700 mg 1,5,6-Tridesoxy-1,5-imino-3,4-O-isopropyliden-D-galactitol in Form eines weißen Feststoffes (3,7 mMol, in 84% iger Ausbeute gewonnen wurden.
Fp. 164–166°C; [α]D²² +84.0 (c, 1.01 in CHCl₃); ν_max (cm^–1): 3434 (br, OH, NH); δH (500 MHz, CDCl₃): 1.27 (3H, d, J_5,6 6.3 Hz, CH₃), 1.38, 1.55 (6H, 2 × s, C(CH₃)₂), 1.95 (1H, br, OH), 2.48 (1H, dd, J_1a,2 10.6 Hz, J_1e,1a 13.0 Hz, H-1a), 3.08 (1H, dq, J_4,5 2.6 Hz, J_5.6 6.3 Hz, H-5), 3.12 (1H, dd, J_1e,2 5.1 Hz, J_1a,1e 13.0 Hz, H-1e), 3.67 (1H, ddd, J_1',2 5.1 Hz J_1,2 10.6 Hz, J_2,3 7.1 Hz, H-2), 3.88 (1H, dd, J_2,3 7.1 Hz, J_3,4 5.3 Hz, H-3), 4.04 (1H, dd, J_4,5 2.6 Hz, J_3,4 5.3 Hz, H-4); δC (50 MHz, CDCl₃): 18.0 (CH₃, C-6), 26.7, 28.7 (2 × CH₃, C(CH₃)₂), 48.7 (CH₂, C-1), 51.6 (CH, C-5), 71.1, 77.0, 80.5 (3 × CH, C-2, C-3, C-4), 109.5 (C(CH₃)₂); m/z (APCI+): 188 (MH⁺, 100%), 130 (19%).
(Gefunden: C, 57.26; H, 9.40; N, 7.24%. C₉H₁₇O₃N;
erforderlich: C, 57.73; H, 9.15; N, 7.48%) Schritt 7: Synthese von N-Nonyl-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-3,4-O-isopropyliden-D-galactitol
804 mg 1,5,6-Tridesoxy-1,5-imino-3,4-O-isopropyliden-D-galactitol (4.3 mmol) wurden in 15 ml gelöst, wonach 0,1 ml Eisessig sowie 1.83 g 6-Ethoxy-hexanol (12,9 mMol, 2,2 ml, 3 Äquiv.) hinzu gegeben wurden. Nachdem das Reaktionsgemisch 20 Minuten lang bei Raum temperatur unter einer Stickstoffatmosphäre gerührt worden war, wurden 300 mg Palladiumschwarz hinzugefügt. Die Lösung wurde sodann 3 Mal entgast und der Stickstoff durch Wasserstoff ersetzt. Im Anschluss daran wurde die Lösung 16 Stunden später durch einen Celite-Einsatz hindurch abfiltriert und mit 50 ml Ethanol sowie 40 ml Ethylacetat eluiert. Dann wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen, wonach ein gelber Feststoff gewonnen wurde, der mittels der Flash-Chromatographie über Ethylacetat gereinigt wurde; dabei wurden 829 mg N-Nonyl-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-3,4-O-isopropyliden-D-galactitol als weißer Feststoff (2,7 mMol) in 63% iger Ausbeute erhalten.
Fp. 41–43°C; δH (200 MHz, CDCl₃): 0.99 (3H, t, J 7.3 Hz, CH₃), 1.22-1.51 (15H, 6 × CH₂, CH₃, C-6), 1.35, 1.53 (6H, 2 × s, C(CH₃)₂), 2.32 (1H, t, J 10.3 Hz, H-1a), 2.52-2.96 (m, 3H, H-5, N-CH₂), 3.82-3.94 (2H, m, H-1e, H-4); 4.12 (1H, m, H-2); δC (50 MHz, CDCl₃): 14.6 (CH₃), 16.0 (CH₃, C-6), 23.1, 24.4 (2 × CH₃, C(CH₃)₂), 27.9, 29.7, 29.9, 32.3 (4 × CH₂), 53.4 (CH₂, C-1), 54.1 (CH₂, N-CH₂), 55.1 (CH, C-5), 70.2, 78.1, 79.7 (3 × CH, C-2, C-3, C-4), 109.6 (C(CH₃)₂). Schritt 8: Synthese von N-(7-Oxa-nonyl)-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-galactitol
1,4 g N-Nonyl-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-3,4-O-isopropyliden-D-galactitol (4,5 mMol) wurden in 10 ml 50% iger wässriger Trifluoressigsäure aufgelöst, wonach die Lösung 2 Stunden lang gerührt wurde. Dann wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt, wobei 2 Mal mit 5 ml Toluol ko-eluiert wurde. Die Reinigung an Hand der Flash-Chromatographie mit dem Gemisch (CHCl₃/CH₃OH im Verhältnis 3:1 lieferte 1,18 g N-Nonyl-1,5,6-tridesoxy- 1,5-imino-D-galactitol (4.3 mMol) in 96% iger Ausbeute.
Fp. 49–51°C; ν_max (cm^–1): 3434 (br, OH), 2845 (N-CH2), 1672 (N-CH₂), 1203, 1133; δH (200 MHz, δ⁴-MeOH): 0.99 (3H, t, J 7.3 Hz, CH₃), 1.22-1.51 (15H, 6 × CH₂, CH₃, C-6), 2.88 (1H, t, J 10.6 Hz, H-1a), 3.16 (2H, m, N-CH₂), 3.31 (1H, m, H-5), 3.42 (1H, dd, J_1e,2 5.0 Hz, J_1a,1e 10.6 Hz, H-1e), 3.51 (1H, dd, J_4,5 2.6 Hz, J_3,4 5.3 Hz, H-4); 3.91 3.51 (1H, dd, J_4,5 2.6 Hz, J_3,4 5.3 Hz, H-4); 4.08 (1H, ddd, J_1,2 5.1 Hz J_1,2 10.6 Hz, J_2,3 7.1 Hz, H-2), δC (50 MHz, CDCl₃): 13.4 (CH₃), 13.6 (CH₃, C-6), 22.1, 22.7, 26.7, 29.3, 29.5, 32.0 (6 × CH₂), 52.9 (CH₂, N-CH₂), 54.2 CH₂, C-1), 60.9, 65.5, 71.9, 74.1 (4 × CH, C-2, C-3, C-4, C-5); m/z (APCI+): 274.2 (MH⁺, 100%).
Synthese von N-7-Oxa-nonyl-DGJ, N-7-Oxa-nonyl-methyl-DGJ, N-7-Oxa- nonyl-DMDP sowie N-7-Oxa-nonyl-2-aminobenzamid.
Die jeweils verwandte Aminoverbindung DGJ, MeDGJ, DMDP, oder 2-Aminobenzamid (2-ABC₉) wurde unter reduzierenden Bedingungen mit 1,2 Molaquivalenten 6-Ethoxyhexanal in Anwesenheit von 1 Moläquivalent Natriumcyanoborhydrid 3 Stunden lang bei Raumtemperatur in angesäuertem Methanol alkyliert. Die jeweils typische Ausbeute bei dieser Reaktion war höher als 95% gemäß der amperometrischen Messung im Anschluss an die Hochleistungschromatographie auf Basis von Kationenaustauscher (Dionex). Die N-7-Oxanonyl-Verbindungen wurden aus dem Reaktionsgemisch mittels der Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) wie folgt gereinigt: In eine SCX- Kationenaustauschersäule (7.5 × 50 mm) wurde eine Probe über 20% iges Acetonitril (V/V) verbracht und mit einem linearen Gradienten (20% Acetonitril mit einem Gehalt an 500 mMol Ammoniumformiat, pH 4,4) eluiert. Die N-7-Oxa-nonylverbindung wurde zurückgewonnen und in eine C18-Umkehrphasensäule (4.6 × 250 mm), die mit 10% igem Acetonitril mit einem Gehalt an 0,1% Trifluoressigsäure (TFA) äquilibriert war, verbracht. Sodann wurde die Verbindung aus der Säule eluiert, wobei ein linearer Gradient von 80% Acetonitril mit einem Gehalt an 0,1% Trifluoressigsäure verwendet wurde; sodann wurde sie bis zur Trockne lyophilisiert und schließlich in Methanol gelöst. Danach wurden Proben der gereinigten Verbindung mittels der matrixgestützten Flugzeitmassenspektrometrie auf Basis der Laserdesorptionsionisation (MALDI-TOF) unter Einsatz von 2,5- Dihydroxybenzoesäure als die Matrix analysiert.
Verbindungen mit unterschiedlichen N-7-Oxa-alkyl-Kettenlängen wurden durch den Ersatz des Oxa-nonyl-aldehyds durch einen Aldehyd mit der gewünschten Kettenlänge synthetisiert. Es wurden mit Tritium markierte Verbindungen durch den Einsatz von tritiiertem Natriumcyanoborhydrid als Reduktionsmittel bei der Reaktion dargestellt.
Charakterisierung von synthetisierten Verbindungen:
N-(7-Oxa-nonyl)-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-galactitol (Chloridsalz)
Es wurden 70 mg N-(7-Oxa-nonyl)-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-3,4-O-isopropyliden-D-galactitol (0,22 mMol) in 1 ml 50% iger wässriger Trifluoressigsäure aufgelöst, wobei die Lösung 2 Stunden lang gerührt wurde. Dann wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen. Die Reinigung mittels der Flash-Chromatographie mit CHCl₃/CH₃OH im Verhältnis von 3:1 lieferte 60 mg N-(7-Oxa-nonyl)-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-galactitol (0,21 mMol) in 96% iger Ausbeute. Die Verbindung wurde in 1 ml Wasser und 0,18 ml wässriger Salzsäurelösung (2M, 1 Äquiv., pH 2) hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 Stunden lang gerührt, wonach im Anschluss daran die Dünnschichtchromatographie in einem Gemisch aus CHCl₃/MeOH im Verhältnis von 4:1 den Verbrauch des Ausgangsmaterials (R_f = 0.19) und 1 Fleck an der Basislinie aufzeigte. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wonach der verbliebene Feststoff 24 Stunden lang gefriergetrocknet wurde; dies ergab 65 mg gelben Feststoff (0,23 mMol) in 99% iger Ausbeute. Die folgenden Werte gelten für das Produkt vor der Behandlung mit Salzsäure:
δH (200 MHz, d⁴-MeOH): 1.15 (3H. t. J 7.1, CH₃), 1.39 (3H, d, J 6.5, CH₃, C-6), 1.45-1.81 (10H, 5 × CH₂), 2.92 (1H, t, J 10.6 Hz, H-1a), 3.02-3.18 (2H, m, H-1e, H-5); 3.22-3.62 (8H, m, N-CH₂, 2 × O-CH₂, H-2, H-4), 4.04-4.12 (2H, m, H-3, H-4); δc (50 MHz, CDCl₃): 13.6 (CH₃), 14.5 (CH₃, C-6), 22.0, 25.8, 26.5, 29.5 (4 × CH₂), 52.8 (CH₂, C-1), 54.2 (CH₂, N-CH₂), 61.0 (CH, C-5), 66.2, 70.4, (2 × CH₂, CH₂-O-CH₂), 65.5, 71.9, 74.1 (3 × CH, C-2, C-3, C-4); m/z (APCI+): 276.2 (MH⁺, 100%).
Die Toxizität verschiedener Kettenlängen in N-Alkyl-DNJ in MDBK-Zellen wird in Tabelle 1 gezeigt: TABELLE 1

N-Alkylkettenlänge % Lebensfähigkeit bei 10% μMol % Lebensfähigkeit bei 100% μMol

C₄ 74 77

C₅ 80 70

C₆ 73 71

C₈ 70 71

C₉ 56 41

C₁₀ 73 43

C₁₂ 86 1

C₁₆ 88 4

C18 84 2

Die Hemmaktivität (IC₅₀) und die Zelttoxizität (IC₅₀) sind in der Tabelle 2 dargestellt: TABELLE 2

Verbindung	Hemmung der α-Glukosidase	Hemmung der Glykolipidsynthese	Antiviraler Effekt gegenüber BVDV in MDBK-Zellen
			IC₅₀	CC₅₀	Selektivitätsindex (CC₅₀/IC₅₀)
DNJ	ja	nein	Ja 20 μMol	ND	ND
N-Butyl-DNJ	ja	ja	Ja 60–120 μMol	>> 10 mMol	>> 100
N-Nonyl-DNJ	ja	ja	Ja 2–3 μMol	250 μMol	23-125
N-Butyl-DGJ	nein	ja	nein
N-Nonyl-DNJ	nein	ja	Ja 5 μMol	250 μMol	50
N-Nonyl-MeDGJ	nein	nein	Ja 2–3 μMol	ND	ND
N-7-Oxadecyl-DNJ	ja	ja	Ja 15–20 μMol	8 mMol	400–533
N-7-Oxanonyl-MeDGJ	nein	nein	Ja 1,5 μMol	2,1 mMol	1400
Beachte das Fehlen der Zytotoxizität bei den N-Alkyl-oxa-substituierten Verbindungen und ihr überlegener Selektivitätsindex

Andere Materialien und Verfahren:
Zellen und Transfektion: CHO, MDBK und Hep-G2-Zellen wurden in RPMI 1640 (Gibco-BRL, Rockville, MD) mit einem Gehalt an 10% fötalem Rinderserum (Gibco-BRL) gezogen. Die Hep-G-2.2.15-Zellen waren freundlicherweise von Dr. George Acs (Mt. Sinai Medical College, New York, NY) zur Verfügung gestellt worden; sie wurden in derselben Art und Weise aufbewahrt wie Hep-G2-Zellen, jedoch erfolgte im Unterschied dazu ein Zusatz von 200 μg/ml G418 (Gibco-BRL). Die DNS-Transfektion der Hep-G2-Zellen wurde so durchgeführt, wie erst kürzlich beschrieben wurde [Bruss & Ganem in Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Bd. 88: S. 1059-1063, (1991)]. Das N-Butyl-desoxynojiricmycin (NB-DNJ) wurde durch Monsanto/Searle (St. Louis, MO) zur Verfügung gestellt. N- Nonyl-desoxygalactojirimycin (N-Nonyl-DGJ) und das N-Nonyl-desoxynojiricmycin (N-Nonyl-DNJ) wurden von der Synergy Pharmaceuticals (Somerset, NJ) zur Verfügung gestellt.
Plaque-Verminderung und Assays zur Ausbeute(bestimmung): MDBK-Zellen wurden auf Platten mit 6 Näpfchen in An- oder Abwesenheit eines Hemmstoffes gezogen, wobei die Infektion mit cp BVDV (moi = 0.005; 500 pfu pro Näpfchen) während 1 Stunde bei 37°C erfolgte. Sodann wurde das Inoculum durch das Zuchtmedium allein oder durch das Zuchtmedium zusammen mit dem antiviralen Wirkstoff ersetzt, wonach 2 oder 3 Tage lang in An- oder Abwesenheit des Hemmstoffes (Plaqueverminderungsassay) die Inkubation erfolgte. Nach der visuellen Auszählung der Plaques unter dem Mikroskop wurde der Überstand mit den ausgeschiedenen infektiösen Viren den Näpfchen entnommen und dazu benutzt, eine frische Monoschicht von MDBK-Zellen auf Platten mit 6 Näpfchen zu infizieren. Nach 3 Tagen wurden die entstandenen Plaques unter dem Mikroskop (Ausbeuteassay) ausgezählt.
Die 5 stellt ein Histogramm dar, welches die durchschnittlichen Werte der IC₅₀ für N- Nonyl-DGJ, N-Nonyl-MeDGJ, N-Nonyl-DNJ, N-DMDP, N-Nonyl-2-aminobenzamid (ABC₉), Nonylamin sowie N-Nonyl-Altrostatin zeigt. Der jeweilige Prozentsatz an BVDV-Plaques, produziert durch eine infizierte Zellkultur in Anwesenheit unterschiedlicher Konzentrationen an 2-ABC₉ (♦), Nonylamin
N-Nonyl-Altrostatin
N-Nonyl-DGJ (X), N-Nonyl-MeDGJ
N-Nonyl-DNJ
sowie N-Nonyl-DMDP (+) ist in der 6 dargestellt.
Die Werte der IC₅₀ in Bezug auf das N-Nonyl-MeDGJ betrugen weniger als etwa 2,5 μM, wie aus der 7 hervorgeht.
Analyse ausgeschiedener DNS: Die Analyse der ausgeschiedenen DNS wurde an Hand des Verfahrens nach Wei et al. in J. Virol., Bd. 70, S. 6455-6458, (1996) vorgenommen. Hep-G2.1.15-Zellen wurden in einer Konfluenz von 85-90% in Flaschen T 75 ausgesät und 3 Tage später der bezeichnete Arzneistoff in jeweils spezifischer Konzentration dazu gegeben: 3 TC (1 μMol, sofern nichts anderes angegeben): N-Butyl-DNJ (4,52 mMol); N-Nonyl-DNJ (entweder 7 μMol, 70 μMol oder 100 μMol wie angegeben); N-Nonyl-DGJ (entweder 7 μMol, 70 μMol oder 100 μMol wie angegeben). Die Medien mit einem Gehalt an dem Arzneistoff wurden alle 2 Tage ausgetauscht, wobei am siebten Tag das Medium jeweils entnommen und das Virus durch Pelletisieren mittels 20 iger Saccharose für die Dauer von 16 Stunden (SW 41 Rotor, 36 000 UpM) angereichert wurde. Das Virus wurde in 400 μl 10 mMol TRIS (pH 7,9), 10 mMol EDTA von pH 8,0, und 10 mMol MgCl₂. nochmals suspendiert. Die Proben wurden in 2 aliquote Mengenanteile aufgetrennt und als +DN-ase und -DN-ase markiert. In beide Röhrchen wurden 15 μl Proteinase K bis zu einer Endkonzentration von 750 μg/ml verbracht, und zwar für die Dauer von 1 Stunde bei 37°C. Nach 1 Stunde wurde in das mit +DN-ase markierten Röhrchen (die Endkonzentration betrug 50 Einheiten/ml) 10 μl DN-ase verbracht und bei 37°C 1 Stunde lang inkubiert. Sodann wurde SDS bis zu einer Endkonzentration von 1% eingetragen und noch eine zusätzliche Menge an Proteinase K bis zu einer Endkonzentration von 500 μg/ml hinzugefügt, wobei die Reaktion 37°C für die Dauer von 3–4 Stunden ablaufen konnte. Die DNS wurde dann durch eine Extraktion mittels Phenol und Chloroform gereinigt. Die DNS wurde über 1% iges Agarosegel abgetrennt und mit ³²P-Sonden gemäß der Beschreibung nach Mehta et al. in Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Bd. 94, S. 1822–1827, (1997) der Sondenprüfung unterzogen.
Intrazellulare DNS-Analyse: Hep-G2.2.15 Zellen wurden entweder unbehandelt gelassen oder wurden 7 Tage lang mit den Verbindungen behandelt, die oben stehend aufgelistet sind, wobei die gesamte DNS gemäß der Beschreibung nach Mehta, ibidem extrahiert wurde. Sodann wurden 20 μg DNS mit HindIII verdaut, durch ein 1,2% iges Agarosegel resolviert und auf Nylonmembranen transferiert. Danach wurden die Membranen mit einer ³²P-markierten Sonde mit einem Gehalt an dem gesamten HBV-Genom hybridisiert und entwickelt, wie von Lu et al. in Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Bd. 94, S. 2380–2385, (1997) beschrieben. Die entspannte zirkuläre (rc), lineare (lin) und geschlossene (CCC) DNS wurde durch die enzymatische Digestion bestätigt.
Endogener Polymerase-Assay: Das jeweilige Medium mit einem Gehalt an HBV von Hep-G-2.2.15-Zellen wurde mittels 20% iger Saccharose pelletisiert (SW 28 Rotor, 24 000 UpM), und zwar für die Dauer von 16 Stunden, wonach das Pellet in 50 μl eines Gemisches mit einem Gehalt an 50 mMol Tris (pH 7,5), 75 mMol NH₄Cl, 1 mMol EDTA, 25 mMol MgCl₂, 0,1% β-Mercaptoethanol, 0,5% NP-40, jeweils 0,4 mMol jeweils von dATP, dGTP, dTTP und 10 μl ³²P-markiertem dCTP nochmals suspendiert. Der Arzneistoff wurde jeweils bis zu einer Endkonzentration von 3TC (7 μMol), NB-DNJ (5 mMol), NN-DNJ (100 μM) hinzugefügt; danach wurden die Proben über Nacht bei 37°C stehen gelassen. Am nächsten Tag wurde Proteinase K bis zu einer endgültigen Konzentration von 500 μg/ml dazu gegeben und bei 37°C 1 Stunde lang inkubiert. Die DNS wurde durch eine Extraktion mit Phenol und Chloroform und eine Fällung in Ethanol gereinigt.
Abscheidung von infektiösem BVDV in der Anwesenheit von langkettigen N-Alkylverbindungen:
Es wurden MDBK-Zellen bis zur Semikonfluenz in individuellen Näpfchen auf 24er-Platten gezogen. Anschließend wurden die Zellen mit dem BVDV durch Zellinkubation für die Dauer von 1 Stunde bei 37°C in Anwesenheit von annähernd 500 PFU des Stammes NADL von BVDV, der im Zuchtmedium suspendiert war, infiziert. Das Inoculum wurde sodann durch das Zuchtmedium alleine oder das Zuchtmedium mit einem Gehalt an einer speziellen Konzentration einer langkettigen N- Alkyl Verbindung ersetzt. Nach 3 Tagen wurden die Monoschichten der Zellen mikroskopisch überprüft, und zwar vor und nach dem Anfärben mit 0,2% igem Kristallviolett (G/V) in Ethanol, um die Plaques auszuzählen bzw. nach dem Färben mit Neutralrot zur Bestimmung der Lebensfähigkeit sowie der Anwesenheit und Anzahl der durch die Viren induzierten Plaques. Die Ergebnisse wurden in Form des jeweiligen Prozentgehalts an der Anzahl der Plaques, die von der Infektion mit dem von Hemmstoff freien Überstand (= 100%) des Plaque-Assays herrührten, ausgedrückt. Die Resultate dieser Versuche sind in den in der 2, 3 und 4 gezeigten Diagrammen dargestellt. Die 2 stellt ein Diagramm dar, das die Variation bei der IC₅₀ für die N-alkylierten DNJ-Verbindungen mit den folgenden Kettenlängen aufzeigt: Pentyl, Hexyl, Octyl, Nonyl, Decyl, Dodecyl, Hexadecyl und Octadecyl.
Die Hemmkonstanten für verschiedene Kettenlängen bei den N-Alkyl-DNJ-Derivaten im Hinblick auf die Ceramid-glucosyl-transferase (CerGlcT) und α-Glucosidase sind in der Tabelle 3 zusammengefasst: TABELLE 3

N-Alkylkettenlänge CerGlcT (IC50, μMol) α-Glucosidase (IC50, μMol)

C₄ 34,4 0,57

C₅ 26,8

C₆ 23,8

C₈ 16,8

C₉ 7,4

C₁₀ 3,1 0,48

C₁₂ 5,2

C₁₆ 3,4

C₁₈ 4,1
Aufnahme von radioakiv markierten Hemmstoffen bei unterschiedlichen Zelttypen:
MDBK- und Hep-G2-Zellen wurden bis zur Konfluenz auf Platten mit 12 Näpfchen kultiviert und in Anwesenheit von tritiierten langkettigen N-alkylierten Verbindungen (100 000 cpm/Näpfchen) während der in der Abbildung angegebenen jeweiligen Zeitdauer inkubiert. Der Überstand wurde abgenommen und aufbewahrt. Die Zellen wurden 2 Mal mit 500 μl PBS gewaschen, mit 500 μl eiskalter 10% iger Perchlorsäure und 2% iger Phosphorwolframsäure fixiert und 2 Mal mit 500 μl eiskaltem Ethanol gewaschen und an der Luft getrocknet; danach erfolgte über Nacht die Lyse bei Raumtemperatur mit 500 μl 0,5 M NaOH. Der Prozentsatz der radioaktiven Zählimpulse in dem Überstand, der PBS-Waschflüssigkeit und den lysierten Zellen wurde mittels Zählen auf Basis der Flüssigkeitsszintillation bestimmt. Die Ergebnisse sind in der 8 graphisch dargestellt.

Claims

Verwendung einer wirksamen Menge einer Verbindung in Form eines N-alkylierten Piperidins, das von N-Nonyl-1,5-desoxy-1,5-imino-D-glucitol (N-Nonyl-DNJ) verschieden ist, oder eines N-alkylierten Pyrrolidins oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung der Morphogenese eines Pesti- oder Flavivirus, worin das genannte Piperidin oder Pyrrolidin mit einem N-C₈-C₁₆-Alkylrest in N-alkylierter Form vorliegt oder ein oxasubstituiertes Derivat davon darstellt.
Verwendung nach Anspruch 1, bei welcher die Verbindung ein N-alkyliertes Piperidin der folgenden Formel darstellt:
worin R¹ einen C₈-C₁₆-Alkylrest oder ein oxasubstituiertes Derivat davon bedeutet, R⁴ Wasserstoff ist, R⁵ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxyl, Amino, substituiertem Amino, Carboxy, Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, Alkyl, Aryl, Aralkyl, Alkoxy, Hydroxyalkyl, Acyloxy und Aroyloxy besteht, wobei X jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Carboxy, C₁-C₄-Alkylcarboxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Hydroxyalkyl, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht und wobei Y jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Carboxy, C₁-C₄-Alkylcarboxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Hydroxyalkyl, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht.
Verwendung nach Anspruch 2, worin X jeweils Wasserstoff bedeutet und Y jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Hydroxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Hydroxyalkyl, C₁-C₆-Acyloxy und Aroyloxy besteht.
Verwendung nach Anspruch 3, bei der sowohl R⁴ als auch R⁵ Wasserstoff bedeuten.
Verwendung nach Anspruch 2, bei der R¹ ein oxasubstituiertes Derivat eines C₈-C₁₆-Alkylrestes bedeutet.
Verwendung nach Anspruch 1, bei welcher die Verbindung ein N-alkyliertes Piperidin darstellt, das aus der aus N-Nonyl-1,5-didesoxy-1,5-imino-D-galactitol-(N-Nonyl-DGJ)
N-Nonyl-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-Nonyl-MeDGJ)
N-(7-Oxa-nonyl)-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-7-Oxa-nonylMeDGJ)
N-(7-Oxa-nonyl)-1,5-didesoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-7-Oxa-Nonyl-DGJ)
bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
Verwendung nach Anspruch 6, bei welcher das N-alkylierte Piperidin als N-(7-Oxa-nonyl)-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-7-Oxa-nonyl-MeDGJ) vorliegt:
Verwendung nach Anspruch 6, bei der das N-alkylierte Piperidin als N-(7-Oxa-nonyl)-1,5-didesoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-7-Oxa-nonyl-DGJ) vorliegt:
Verwendung nach Anspruch 1, bei die Verbindung als ein N-alkyliertes Piperidin in Form von N-Nonyl-Altrostatin vorliegt.
Verwendung nach Anspruch 1, bei welcher die Verbindung als ein N-alkyliertes Pyrrolidin gemäß der folgenden Formel vorliegt:
worin R¹ einen C₈-C₁₆-Alkylrest oder ein oxasubstituiertes Derivat davon bedeutet und R⁴ Wasserstoff darstellt, R⁵ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxyl, Amino, substituiertem Amino, Carboxy, Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, Alkyl, Aryl, Aralkyl, Alkoxy, Hydroxyalkyl, Acyloxy und Aroyloxy besteht, wobei X jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Carboxy, C₁-C₄-Alkylcarboxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Hydroxyalkyl, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht und wobei Y jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Carboxy, C₁-C₄-Alkylcarboxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Hydroxyalkyl, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht.
Verwendung nach Anspruch 10, bei der das N-alkylierte Pyrrolidin als N-Nonyl-2R,5R-dihydroxymethyl-3R,4R-dihydroxypyrrolidin vorliegt.
Verbindung oder eines ihrer physiologisch annehmbaren Salze oder Solvate gemäß der Formel, wie sie im Anspruch 2 dargestellt ist, worin R¹ einen C₈-C₁₆-Alkylrest oder ein oxasubstituiertes Derivat davon darstellt, R⁴ Wasserstoff bedeutet, R⁵ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxyl, Amino, substituiertem Amino, Carboxy, Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, nicht substituiertem Alkyl, Aryl, Aralkyl, Alkoxy, Acyloxy und Aroyloxy besteht, wobei X jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Carboxy, C₁-C₄-Alkylcarboxy, nicht substituiertem C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht und wobei Y jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Carboxy, C₁-C₄-Alkylcarboxy, nicht substituiertem C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht.
Verbindung nach Anspruch 12, worin X jeweils Wasserstoff bedeutet und Y jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Hydroxy, nicht substituiertem C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht.
Verbindung nach Anspruch 13, worin R⁵ Wasserstoff bedeutet
Verbindung nach Anspruch 13, worin R¹ ein oxasubstituiertes Derivat eines C₈-C₁₆-Alkylrestes bedeutet.
Verbindung nach Anspruch 6, worin die Verbindung als N-Nonyl-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-Nonyl-MeDGJ):
N-(7-Oxa-nonyl-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-7-oxa-nonyl-MeDGJ) vorliegt:
Verbindung nach Anspruch 16, worin die Verbindung als N-(7-Oxa-nonyl-1,5,6-tridesoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-7-Oxa-nonyl-MeDGJ) vorliegt:
Verbindung in Form von N-(7-Oxa-nonyl)-1,5-didesoxy-1,5-imino-D-galactitol (N-7-Oxa-nonyl-DGJ):
N-alkyliertes Piperidin, das als N-Nonyl-Altrostatin vorliegt.
Verbindung oder eines ihrer physiologisch annehmbaren Salze oder Solvate gemäß der Formel, wie sie im Anspruch 10 dargestellt ist, worin R¹ einen C₈-C₁₆-Alkylrest oder ein oxasubstituiertes Derivat davon darstellt, R⁴ Wasserstoff bedeutet, R⁵ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxyl, Amino, substituiertem Amino, Carboxy, Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, Alkyl, Aryl, Aralkyl, Alkoxy, Hydroxyalkyl, Acyloxy und Aroyloxy besteht, wobei X jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Carboxy, C₁-C₄-Alkylcarboxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Hydroxyalkyl, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht und wobei Y jeweils unabhängig aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Wasserstoff, Hydroxy, Amino, Carboxy, C₁-C₄-Alkylcarboxy, C₁-C₄-Alkyl, C₁-C₄-Alkoxy, C₁-C₄-Hydroxyalkyl, C₁-C₆-Acyloxy sowie Aroyloxy besteht.
Verbindung nach Anspruch 20, die in Form von N-Nonyl-2R,5R-dihydroxymethyl-3R,4R-dihydroxypyrrolidin vorliegt.
Verbindung nach einem der Ansprüche 10 bis 21 zur Verwendung in einem Verfahren zur therapeutischen Behandlung.