DE69632310T2 - Therapeutische inhibitoren der zellen der glatten gefässmuskulatur - Google Patents

Therapeutische inhibitoren der zellen der glatten gefässmuskulatur Download PDF

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Description

  • Gebiet der Erfindung
  • Die vorliegende Erfindung betrifft allgemein therapeutische Verfahren, die das operative oder intravenöse Einführen von Bindungspartnern beinhalten, die auf bestimmte Ziel- bzw. Target-Zellpopulationen gerichtet sind, wie etwa glatte Muskelzellen, Krebszellen, somatische Zellen, die eine Modulation zur Linderung eines Erkrankungszustands erfordern, sowie Effektorzellen des Immunsystems, insbesondere zur Behandlung von Zuständen, wie etwa Stenose in der Folge einer Gefäßverletzung oder Erkrankung, Krebs, Erkrankungen, die von Hyperaktivität oder Hyperplasie somatischer Zellen herrühren, sowie Erkrankungen, die durch Immunsystem-Effektorzellen vermittelt werden. Auch beschrieben wird das operative oder intravenöse Einführen aktiver Wirkstoffe, die in der Lage sind, die Proliferation oder Migration oder Konzentration glatter Muskelproteine zu verändern. Die Erfindung betrifft auch das Zuweisen oder die gezielte Verabreichung therapeutischer Wirkstoffe zu glatten Gefäßmuskelzellen, was zu einer Dilatation und Fixierung des Gefäßlumens führt (biologischer Stenteffekt). Auch offenbart wird die kombinierte Verabreichung eines cytocidalen Konjugats und einer Dauerfreigabe-Dosierungsform eines glatten Gefäßmuskel-Zellinhibitors.
  • Hintergrund der Erfindung
  • Perkutane transluminale Coronarangioplastik (PTCA) wird häufig als Primärbehandlungsmöglichkeit in vielen Patienten mit einer Coronararterienerkrankung angewendet. PTCA kann myokardiale Ischämie in Patienten mit einer Coronararterienerkrankung lindern, indem sie die Lumenverstopfung reduziert und den coronaren Fluss verbessert. Die Verwendung dieser operativen Prozedur ist schnell gewachsen, mit 39.000 Prozeduren, die 1983 durchgeführt wurden, nahezu 150.000 in 1987, 200.000 in 1988, 250.000 in 1989 und für 1994 werden über 500.000 PTCAs pro Jahr geschätzt (1, 2, 3). Stenose nach PTCA bleibt ein signifikantes Problem, wobei von 25% bis 35% der Patienten innerhalb 1 bis 3 Monaten eine Restenose entwicken. Restenose führt zu signifikanter Morbidität und Mortalität und erfordert häufig weitere Interventionen, wie etwa eine wiederholte Angioplastik oder eine Coronarbypassoperation. Keine operative Intervention oder postoperative Behandlung hat sich (bislang) als wirksam erwiesen, Restenose zu verhindern.
  • Die Prozesse, die für die Stenose nach einer PCTA verantwortlich sind, sind nicht vollständig verstanden worden, könnte jedoch aus einer komplizierten Wechselwirkung zwischen verschiedenen unterschiedlichen biologischen Wirkstoffen und Wegstrecken herrühren. Betrachtet man histologische Schnitte, können restenotische Läsionen ein Überwachstum glatter Muskelzellen in den Intimaschichten des Gefäßes aufweisen (3). Verschiedene mögliche Mechanismen für die glatte Muskelzellproliferation nach PTCA sind vorgeschlagen worden (1, 2, 4, 5).
  • Verbindungen, die Berichten zufolge glatte Muskelzellproliferation in vitro unterdrücken (4, 6, 7), haben ungewünschte pharmakologische Nebenwirkungen, wenn man sie in vivo anwendet. Heparin ist ein Beispiel einer solchen Verbindung, die Berichten zufolge die glatte Muskelzellproliferation in vitro hemmt, aber, wenn sie in vivo angewendet wird, die potenziell schädliche Nebenwirkung hat, Koagulation zu hemmen. Heparinpeptide haben, während sie eine reduzierte antikoagulante Aktivität haben, die ungewünschte pharmakologische Eigenschaft, dass sie eine kurze pharmakologische Halbwertzeit haben. Es sind Versuche durchgeführt worden, diese Probleme zu lösen, durch Verwendung eines Doppelballonkatheters, d. h. zur örtlichen Verabreichung des therapeutischen Wirkstoffs am Ort der Angioplastik (z. B. 8; U.S. Patent Nr. 4,824,436), und durch Verwenden biologisch abbaubarer Materialien, die mit einem Medikament imprägniert sind, d. h. zum Kompensieren der Probleme der kurzen Halbwertzeit (z. B. 9; U.S. Patent Nr. 4,929,602).
  • Verrucarine und Roridine sind trichothecene Medikamente, die als sekundäre Metabolite durch den Bodenpilz Myrothecium verrucaria und Myrothecium roridium erzeugt werden. Verrucarin ist ein makrozyklischer Triester. Roridin ist ein makrozyklischer Diester von Verrucarol (10). Als eine Gruppe beziehen sich Trichothecene strukturell auf sesquiterpenoide Mycotoxine, die von verschiedenen Pilzarten erzeugt werden, und sind gekennzeichnet durch die 12,13-Epoxytrichothec-9-en-Grundstruktur. Ihre cytotoxische Aktivität für eukaryotische Zellen ist eng korreliert mit ihrer Fähigkeit, an die Zelle zu binden, internalisiert zu werden und die Protein- und Makromolekülsynthese in der Zelle zu hemmen.
  • Zumindest fünf Überlegungen würden diesseits scheinbar die Verwendung inhibitorischer Medikamente ausschließen, um eine Stenose zu verhindern, die von Überwachstum glatter Muskelzellen herrührt. Erstens können inhibitorische Wirkstoffe die systemische Toxizität haben, die eine unakzeptable Risikohöhe für Patienten mit cardiovaskulären Erkrankungen erzeugen könnte. Zweitens könnten sich die inhibitorischen Wirkstoffe mit der Gefäßwundheilung nach der Operation stören, und dies könnte entweder die Heilung verzögern oder die Struktur oder Elastizität der frisch verheilten Gefäßwand schwächen. Drittens könnten inhibitorische Wirkstoffe, die glatte Muskelzellen abtöten, das umgebende Endothel und/oder andere mediale glatte Muskelzellen beschädigen. Tote und sterbende Zellen geben auch mitogene Wirkstoffe ab, die eine zusätzliche glatte Muskelzellproliferation stimulieren könnten und die Stenose verschlimmern könnten. Viertens könnte die Verabreichung therapeutisch wirksamer Mengen eines inhibitorischen Wirkstoffs von verschiedenen Standpunkten her problematisch sein: nämlich a) die Verabreichung einer großen Anzahl von Molekülen in die Intrazellularräume zwischen den glatten Muskelzellen könnte notwendig sein, d. h. um günstige Bedingungen zu etablieren, um zu erlauben, dass eine therapeutisch wirksame Dosis von Molekülen die Zellmembran quert; b) das Zuweisen eines inhibitorischen Wirkstoffs in den richtigen Intrazellularraum, d. h. dort, wo dessen Wirkung stattfindet, könnte schwierig zu steuern sein; und c) das Optimieren der Assoziation des inhibitorischen Medikaments mit dessen intrazellulärem Ziel bzw. Target, z. B. einem Ribosom, während eine intrazellulare Umverteilung des Medikaments minimiert wird, z. B. benachbarte Zellen, könnte schwierig sein. Fünftens, weil die glatte Muskelzellproliferation über mehrere Wochen hinweg stattfindet, wäre es a priori ersichtlich, dass die inhibitorischen Medikamente über mehrere Wochen hinweg verabreicht werden müssten, vielleicht dauerhaft, um eine günstige Wirkung zu erzielen.
  • Wie aus dem Vorstehenden ersichtlich, verbleiben bei der Verwendung inhibitorischen Medikamente, einschließlich cytotoxischer Wirkstoffe, viele Probleme zu lösen, um die glatte Muskelzellproliferation wirkungsvoll zu behandeln. Es wäre besonders vorteilhaft, neue Methoden zu entwickeln, um Stenose aufgrund des Proliferation glatter Gefäßmuskelzellen nach einer traumatischen Gefäßverletzung zu unterbinden, wie sie etwa während einer Gefäßoperation stattfindet. Zusätzlich vorteilhaft wäre die Verabreichung von Verbindungen, die inhibitorische Effekte verlängerter Dauer auf die glatten Gefäßmuskelzellen erzeugt. Eine örtliche Verabreichung dieser Dauerfreigabe-Verbindungen wäre auch bei der Behandlung anderer Zustände nützlich, wo die Targetzellpopulation für diese Verabreichung zugänglich ist.
  • Ein Aspekt der Erfindung beinhaltet die in vivo Platzierung eines Metall-, Kunststoff- oder biologisch abbaubaren intravaskulären Stents, der einen therapeutischen Wirkstoff aufweist. Auch angegeben werden Stents, die einen therapeutischen Wirkstoff aufweisen. Eine bevorzugte Ausführung der Erfindung ist ein Stent, der einen therapeutischen Wirkstoff, wie etwa einen cytoskelettalen Inhibitor oder einen Inhibitor glatter Muskelzellproliferation aufweist. Ein bevorzuger cytoskelettaler Inhibitor der Erfindung ist Cytochalasin, wie etwa Cytochalasin B oder ein strukturelles Analog davon, das funktionell äquivalent ist. Ein alternativer bevorzugter cytoskelettaler Inhibitor der Erfindung ist Taxol oder ein strukturelles Analog davon, das funktionell äquivalent ist.
  • Die Stents können eine biologisch abbaubare Beschichtung oder eine poröse oder permeable, nicht biologisch abbaubare Beschichtung aufweisen. Eine bevorzugte Ausführung der Erfindung ist ein Stent, der eine biologisch abbaubare Beschichtung oder eine poröse/permeable nicht biologisch abbaubare Beschichtung aufweist, die den therapeutischen Wirkstoff aufweist. Eine weiter bevorzugte Ausführung der Erfindung ist ein Stent, der eine biologisch abbaubare Beschichtung oder eine poröse oder nicht biologisch abbaubare Beschichtung aufweist, die eine Dauerfreigabe-Dosierungsform des therapeutischen Wirkstoffs aufweist.
  • In einer alternativen Ausführung kann ein Stent, z. B. ein biologisch abbaubarer Stent, darin, d. h. in der Stentmatrix, mit dem therapeutischen Wirkstoff imprägniert sein. Auch gedacht wird an die Anwendung eines biologisch abbaubaren Stents, der mit dem therapeutischen Wirkstoff imprägniert ist, und der ferner mit einer biologisch abbaubaren Beschichtung oder einer porösen oder permeablen nicht biologisch abbaubaren Beschichtung beschichtet ist, die eine Dauerfreigabe-Dosierungsform eines therapeutischen Wirkstoffs aufweist. Diese Ausführung der Erfindung kann eine differenzierte Freigaberate des therapeutischen Wirkstoffs vorsehen, d. h. es gäbe eine schnellere Freigabe des therapeutischen Wirkstoffs von der Beschichtung, gefolgt durch verzögerte Freigabe des therapeutischen Wirkstoffs, mit dem die Stentmatrix imprägniert ist, beim Abbau der Stentmatrix.
  • Der intravaskuläre Stent sieht ein mechanisches Mittel vor, um für eine Vergrößerung des Lumenquerschnitts eines Gefäßes zu sorgen, zusätzlich zu dem, der über die biologische Stentwirkung des cytoskelettalen Inhibitors vorgesehen wird, wie etwa Cytochalasin B oder Taxol, das darin freigebbar eingebettet ist. Ferner sorgt das Platzieren intravaskulärer Stents, die einen therapeutischen Wirkstoff aufweisen, der ein Inhibitor glatter Muskelzellproliferation ist, für eine vergrößerte Effizienz, indem es die Intimaproliferation reduziert oder verhindert. Diese Hemmung der glatten Intimamuskelzellen und des durch den glatten Muskel erzeugten Stroma erlaubt eine schnellere und vollständige Reendothelisierung nach dem intraventionalen Platzieren des Gefäßstents. Die erhöhte Rate der Reendothelisierung und Stabilisierung der Gefäßwand nach der Stentplatzierung kann den Verlust des Lumenquerschnitts und den verringerten Blutfluss reduzieren, der die primäre Ursache für Gefäßstentausfälle ist.
  • Für die Behandlung von Restenose glatter Gefäßmuskelzellen hemmen nutzbare therapeutische Wirkstoffe die Targetzellaktivität (z. B. Proliferation oder Migration), ohne die Targetzellen abzutöten. Bevorzugte therapeutische Gruppen zu diesem Zweck sind Proteinkinaseinhibitoren (z. B. Staurosporin oder dgl.), Inhibitoren glatter Muskelzellenmigration und/oder -kontraktion (z. B. die Cytochalasine, wie etwa Cytochalasin B, Cytochalasin C, Cytochalasin D oder dgl.), Suramin und Stickoxid-Freigabeverbindungen, wie etwa Nitroglycerin oder analoge oder funktionelle Äquivalente davon.
  • Beschreibung der Zeichnungen
  • 1 ist eine Mikrophotographie glatter Gefäßmuskelzellen in einer Arterie eines 24 Jahre alten männlichen Patienten mit einem glatten Gefäßmuskel-Bindungsprotein, das an die Zelloberfläche und Membrane gebunden ist. Der Patient erhielt das glatte Gefäßmuskel-Bindungsprotein durch i.v. Verabreichungn 4 Tage, bevor das arterielle Gewebe histologisch präpariert wurde.
  • 1B ist eine Mikrophotographie glatter Gefäßmuskelzellen in einer Arterie eines 24 Jahre alten männlichen Patienten mit einem glatten Gefäßmuskel-Bindungsprotein, das an die Zelloberfläche und Membrane gebunden ist. Der Schnitt wurde ex vivo mit HRP-konjugiertem Ziegen-Anti-Maus-IgG reagieren gelassen. Diese Reaktion wurde durch Hinzugabe von 4-Chlor-1-naphthol sichtbar gemacht. Das Reaktionsprodukt des Substrats bildet ein unlösliches violettes oder dunkelbraunes Präzipitat an dem Reaktionsort (bei #2 gezeigt). Eine Gegenfärbung wurde angewendet, um Zellkerne sichtbar zu machen (bei #1 gezeigt).
  • 2 zeigt ein erstes Schema für die chemische Kopplung eines therapeutischen Wirkstoffs mit dem glatten Gefäßmuskel-Bindungsprotein.
  • 3 zeigt ein zweites Schema für die chemische Kopplung eines therapeutischen Wirkstoffs mit einem glatten Gefäßmuskel-Bindungsprotein.
  • 4A zeigt graphisch experimentelle Daten, die die schnelle Bindung des glatten Gefäßmuskel-Bindungsproteins an marker-positiven Testzellen in vitro zeigen.
  • 4B zeigt graphisch experimentelle Daten, die die schnelle Bindung des glatten Gefäßmuskel-Bindungsproteins an glatte Gefäßmuskelzellen in vitro zeigen.
  • 5A zeigt graphisch experimentelle Daten, die die ungewünschte Cytotoxizität schon geringer Pegel eines therapeutischen Konjugats (d. h. RA-NR-AN-01) sowie den freien RA therapeutischen Wirkstoff zeigen, wenn glatte Gefäßmuskelzellen für 24 Stunden in vitro behandelt wurden.
  • 5B zeigt graphisch experimentelle Daten, die die Effekte von RA-NR-AN-01 therapeutischem Konjugat auf die metabolische Aktivität von markerpositiven und -negativen Zellen zeigt. Die Daten zeigen die ungewünschte nicht spezifische Cytotoxizität des Konjugats für alle diese Zellen in einer 24-Stunden-Behandlung in vitro. Die Nichtspezifität resultiert aus der extrazellulären Hydrolyse des Kopplungsliganden, der die getesteten Zellen freiem Medikament aussetzt.
  • 6A zeigt graphisch experimentelle Daten, die die ungewünschte nichtspezifische Cytotoxizität von PE-NR-AN-01 therapeutischem Konjugat für marker-positive und marker-negative Testzellen zeigt, nach einer 24-stündigen Behandlung in vitro, obwohl der 24-stündigen Behandlung eine Übernachterholungsperiode folgte, bevor die metabolische Aktivität getestet wurde.
  • 6B zeigt experimentelle Daten, die die nicht-spezifische Cytotoxizität des freien PE therapeutischen Wirkstoffs auf marker-positive und -negative Testzellen nach 24 Stunden Behandlung in vitro zeigen.
  • 7A zeigt graphisch experimentelle Daten, die zeigen, dass einer kurzen 5-minütigen "Impuls"-Behandlung, d. h. anstelle von 24 Stunden, eine [3H] Leucin-Exposition folgt, wobei der freie RA therapeutische Wirkstoff nicht spezifisch cytotoxisch war, d. h. für Kontroll-HT29-marker-negative Zellen, aber im Gegensatz hierzu das RA-NR-AN-01 therapeutische Konjugat in dieser "Impuls"-Behandlungn nicht cytotoxisch ist.
  • 7B zeigt graphisch experimentelle Daten, die zeigen, dass ein freier RA therapeutischer Wirkstoff für Kontroll HT29-marker-negative Zellen nicht spezifisch cytotoxisch ist, auch in einer 5' "Impuls"-Behandlung, gefolgt von einer 24-stündigen Erholungsperiode vor der [3H]Leucin-Exposition, jedoch im Gegensatz dazu das RA-NR-AN-01 therapeutische Konjugat für Zellen nicht cytotoxisch ist.
  • 7C zeigt graphisch die Ergebnisse von Experimenten, die zeigen, dass die "Impuls"-Behandlung von Zellen in vitro mit RA-NR-AN-01 therapeutischem Konjugat die zelluläre Aktivität in marker-positiven A375-Zellen hemmt, gemessen durch Proteinsynthese.
  • 7D zeigt graphisch experimentelle Daten, die zeigen, dass eine "Impuls"-Behandlung von Zellen in vitro mit RA-NR-AN-01 therapeutischem Konjugat keine langdauernden inhibitorischen Effekte auf die zelluläre Aktivität in marker-positiven Zellen ausgeübt hat, da die Proteinsynthese in A375-Zellen nicht gehemmt wurde, wenn den Zellen eine Übernachterholungsperiode vor dem Test in vitro zugestanden wurde.
  • 8A zeigt graphisch experimentelle Daten, die zeigen, dass, während eine "Impuls"-Behandlung von Zellen in vitro mit freien RA therapeutischem Wirkstoff, nicht spezifisch cytotoxisch war, das RA-NR-AN-01 therapeutische Konjugat keine langdauernden inhibitorischen Effekte auf die zelluläre Aktivität in glatten Gefäßmuskelzellen ausgeübt hat, wie sich durch die metabolische Aktivität in BO54 Zellen ergibt, denen eine 48-stündige Erholungszeit vor dem Test zugestanden wurde.
  • 8B zeigt graphisch experimentelle Daten ähnlich jenen, die in 8A oben gezeigt sind, jedoch unter Verwendung eines zweiten markerpositiven Zelltyps, nämlich A375, wobei die Daten zeigen, dass eine "Impuls"-Behandlung mit dem RA-RN-AN-01 therapeutischen Konjugat keine langdauernden inhibitorischen Effekte auf die zelluläre Aktivität ausgeübt hat, gemessen durch die metabolische Aktivität in A375-Zellen, denen eine 48-stündige Erholungsperiode vor dem Testen zugestanden wurde.
  • 8C zeigt graphische Ergebnisse ähnlich jenen, die in 8A und 8B oben aufgezeigt sind, jedoch unter Verwendung einer markernegativen Kontrollzelltyps, nämlich HT29. Diese Ergebnisse zeigen, dass die "Impuls"-Behandlung mit RA-NR-AN-01 therapeutischem Konjugat keine langdauernden inhibitorischen Erffekte auf die zelluläre Aktivität markernegativer Kontrollzellen ausgeübt hat, gemessen durch die metabolische Aktivität in HT29-Zellen, denen eine 24-stündige Erholungsdauer vor dem Test zugestanden wurde.
  • 9A zeigt eine Stenose aufgrund intimaler glatter Muskelzellproliferation in einem histologischen Schnitt einer unbehandelten Arterie 5 Wochen nach Angioplastik in einem Tiermodell.
  • 9B zeigt die Hemmung der Stenose in einem histologischen Schnitt einer Arterie, die mit therapeutischem Konjugat 5 Wochen nach der Angioplastik behandelt wurde, in einem Tiermodell.
  • 10A zeigt graphisch experimentelle Daten zum Vergleich der Proteinsynthese- und DNA-Synthesehemmleistung von Suramin in Bezug auf glatte Gefäßmuskelzellen.
  • 10B zeigt graphisch experimentelle Daten zum Vergleich von Proteinsynthese- und DNA-Synthesehemmleistung von Staurosporin in Bezug auf glatte Gefäßmuskelzellen.
  • 10C zeigt graphisch experimentelle Daten zum Vergleich von Proteinsynthese- und DNA-Synthesehemmleistung von Nitroglycerin in Bezug auf glatte Gefäßmuskelzellen.
  • 10D zeigt graphisch experimentelle Daten zum Vergleich von Proteinsynthese- und DNA-Synthesehemmleistung von Cytocyalasin B in Bezug auf glatte Gefäßmuskelzellen.
  • 11 zeigt einen tangentiellen Schnitt parallel zur Innenoberfläche einer glatten Gefäßmuskelzelle, die 62.500 Mal vergrößert ist und durch zahlreiche endocytische Vesikel gekennzeichnet ist, von denen einige antikörperbeschichtete Goldperlen enthalten, in dem Prozess, in dem sie durch die Zelle in vitro internalisiert werden.
  • 12 zeigt eine glatte Muskelzelle, die 62.500-fach vergrößert ist und gekennzeichnet ist durch eine markierte Akkumulation von Goldperlen in Lysosomen 24 Stunden, nachdem die Zellen in vitro den Perlen ausgesetzt wurden.
  • 13 zeigt eine glatte Muskelzelle, die 62.500-fach vergrößert ist und gekennzeichnet ist durch die Akkumulation von Goldperlen in Lysosomen in vivo.
  • 14 zeigt eine in vivo Dosis-Antwortstudie des Effekts von Cytochalasin B auf dem Lumenquerschnitt von Schweine-Femoralarterien.
  • Detaillierte Beschreibung der Erfindung
  • Die hierin benutzten folgenden Begriffe haben die nachfolgend angegebenen Bedeutungen.
  • "Therapeutisches Konjugat" bedeutet ein glatter Gefäßmuskel oder ein interstitielles Matrixbindungsprotein, das (z. B. optional durch einen Linker) mit einem therapeutischen Wirkstoff gekoppelt ist.
  • "Target" bzw. "Ziel" und "Marker" werden bei der Beschreibung der Konjugat-Aspekte der vorliegenden Erfindung austauschbar angewendet und bedeuten ein Molekül, das in einer spezifischen Weise durch das Matrix- oder Glatte-Gefäßmuskel-Bindungsprotein erkannt wird, z. B. ein Antigen, ein Polypeptidantigen oder ein Zelloberflächen-Kohlehydrat (z. B. ein Glykolipid, ein Glykoprotein oder ein Proteoglykan), das an den Zelloberflächenmembranen einer glatten Gefäßmuskelzelle oder einer Matrixstruktur exprimiert wird.
  • "Epitop" wird in Bezug auf eine spezifische Stelle innerhalb des "Target"-Moleküls verwendet, das durch das Matrix- oder Glatte-Muskel-Bindungsprotein gebunden wird, z. B. eine Sequenz von drei oder mehr Aminosäuren oder Sacchariden.
  • "Gekoppelt" wird angewendet, mit der Bedeutung einer kovalenten oder nicht kovalenten chemischen Assoziation (d. h. hydrophob durch van der Waals-Kräfte oder Ladungs-Ladungswechselwirkungen) des Matrix- oder Glatten-Gefäßmuskel-Bindungsproteins mit dem therapeutischen Wirkstoff. Aufgrund der Natur der angewendeten therapeutischen Wirkstoffe werden die Bindungsproteine normalerweise mittels kovalenter Bindung den therapeutischen Wirkstoffen zugeordnet.
  • "Linker" bedeutet einen Wirkstoff, der das Matrix- oder Glatte-Muskel-Bindungsprotein an einen therapeutischen Wirkstoff koppelt, z. B. einen organischen chemischen Koppler.
  • "Migration" glatter Muskelzellen bedeutet die Bewegung dieser Zellen in vivo von den medialen Schichten eines Gefäßes in die Intima, wie sie auch in vitro durch Verfolgen der Bewegung einer Zelle von einem Ort zu einem anderen untersucht werden können (z. B. mittels Zeitverlauf-Filmaufnahmen oder einem Videorekorder oder manueller Zählung der glatten Muskelzellmigration aus einer definierten Fläche in der Gewebekultur über die Zeit).
  • "Proliferation", d. h. von glatten Muskelzellen oder Krebszellen, bedeutet die Zunahme in der Zellzahl, d. h. durch Mitose der Zellen.
  • "Exprimiert" bedeutet die mRNA-Transkription und -Translation mit resultierender Synthese, Glykosylation und/oder Sekretion eines Polypeptids durch eine Zelle, z. B. CSPG, das durch eine glatte Gefäßmuskelzelle oder einenericyt synthetisiert wird.
  • "Makrozyklisches Trichothecen" soll irgend ein Mitglied der Gruppe strukturell bezogener sesquiterpenoider makrozyklischer Mycotoxine bedeuten, die durch verschiedene Pilzarten hergestellt werden, und gekennzeichnet durch die 12,13-Epoxytrichothec-9-en-Grundstruktur, z. B. Verrucarine und Roridine, die die Produkte des sekundären Metabolismus des Bodenpilzes Myrothecium verrucaria und Myrothecium roridium sind.
  • "Dauerfreigabe" bedeutet eine Dosierungsform, die ausgestaltet ist, um deren therapeutischen Wirkstoff über eine Zeitdauer freizugeben, die von etwa 3 bis etwa 21 Tagen reicht. Die Freigabe über eine längere Zeitdauer wird auch als eine "Dauerfreigabe"-Dosierungsform der vorliegenden Erfindung betrachtet.
  • "Dosierungsform" bedeutet eine freie (ungezielte oder nichtbindungspartnerassoziierte) therapeutische Wirkstoffformulierung sowie auch therapeutische Dauerfreigabe-Formulierungen, wie etwa jene, die mikropartikulares oder nanopartikulares, biologisch abbaubares oder nicht biologisch abbaubares polymeres Material enthalten, das in der Lage ist, an ein oder mehrere Bindungsproteine oder Peptide zu binden, um eine darin dispergierte therapeutische Gruppe einer Targetzellpopulation zuzuführen.
  • "Staurosporin" umfasst Staurosporin, einen Proteinkinase C-Inhibitor der folgenden Formel
    Figure 00130001
    sowie auch Diindoloalkaloide mit einer der folgenden allgemeinen Strukturen:
  • Figure 00130002
  • Insbesondere umfasst der Begriff "Staurosporin" K-252 (siehe z. B. japanische Patentanmeldung Nr. 62,164,626), BMY-41950 (U.S. Patent Nr. 5,015,578), UCN-01 (U.S. Patent Nr. 4,935,415), TAN-999 (japanische Patentanmeldung Nr. 01,149,791), TAN-1030A (japanische Patentanmeldung Nr. 01,246,288), RK-286C (japanische Patentanmeldung Nr. 02,258,724) und funktionelle Äquivalente und Derivate davon. Derivate von Staurosporin umfassen jene, die in den japanischen Patentanmeldungen Nr. 03,72,485; 01,143,877; 02,09,819 und 03,220,194 diskutiert sind, sowie jene in den internationalen PCT-Anmeldungen Nr. WO 89 07,105 und WO 91 09,034, und den europäischen Patentanmeldungen Nr. EP 410,389 und EP 296,110 . Derivate von K-252, einem natürlichen Produkt, sind bekannt. Siehe z. B. japanische Patentanmeldungen Nr. 63,295,988; 62,240,689; 61,268,687; 62,155,284; 62,155,285; 62,120,388 und 63,295,589, sowie die internationale PCT-Anmeldung Nr. WO 88 07,045 und die europäische Patentanmeldung Nr. EP 323,171 .
  • "Cytochalasin" beinhaltet fungale Metaboliten, die einen inhibitorischen Effekt auf den targetisierten bzw. abgezielten Zellstoffwechsel aufzeigen, einschließlich Verhinderung von Kontraktion oder Migration glatter Gefäßmuskelzellen. Bevorzugt hemmen Cytochalasine die Polymerisierung von monomerem Actin (G-Actin) in die polymere Form (F-Actin), um hierdurch die Zellfunktionen zu hemmen, die cytoplasmatische Mikrofilamente benötigen. Cytochalasine werden typischerweise von Phenylalanin (Cytochalasine), Tryptophan (Chaetoglobosine) oder Leucin (Aspochalasine) abgeleitet, was in einer Benzyl-, Indo-3-ylmethyl- oder Isobutylgruppe jeweils an der Position C-3 einer substituierten Perhydroisoindol-1-on-Komponente resultiert (Formel V oder VI).
  • Figure 00150001
  • Die Perhydroisoindolkomponente enthält wiederum einen 11-, 13- oder 14-Atom carbozyklischen oder sauerstoffhaltigen Ring, der an die Positionen C-8 und C-9 gekoppelt ist. Alle natürlich auftretenden Cytochalasine enthalten eine Methylgruppe bei C-5; eine Methyl- oder Methylengruppe bei C-12; und eine Methylgruppe bei C-14 oder C-16. Beispielhafte Moleküle umfassen Cytochalasin A, Cytochalasin B, Cytochalasin D, Cytochalasin E, Cytochalasin F, Cytochalasin G, Cytochalasin H, Cytochalasin J, Cytochalasin K, Cytochalasin L, Cytochalasin M, Cytochalasin N, Cytochalasin O, Cytochalasin P, Cytochalasin Q, Cytochalasin R, Cytochalasin S, Chaetoglobosin A, Chaetoglobosin B, Chaetoglobosin C, Chaetoglobosin D, Chaetoglobosin E, Chaetoglobosin F, Chaetoglobosin G, Chaetoglobosin J, Chaetoglobosin K, Deoxaphomin, Proxiphomin, Protophomin, Zygosporin D, Zygosporin E, Zygosporin F, Zygosporin G, Aspochalasin B, Aspochalasin C, Aspochalasin D und dgl., sowie funktionelle Äquivalente und Derivate davon. Bestimmte Cytochalasin-Derivate sind angegeben in den japanischen Patenten Nr. 72 01,925; 72 14,219; 72 08,533; 72 23,394; 72 01924; und 72 04,164. Cytochalasin B wird in dieser Beschreibung als prototypisches Cytochalasin angewendet.
  • Wie hierin angegeben, umfassen glatte Muskelzellen und Pericyten jene Zellen, die aus den medialen Schichten der Gefäße und der Adventitiagefäße abgeleitet sind, die in intimalen hyperplastischen Gefäßstellen infolge einer Verletzung proliferieren, wie etwa jene, die während PTCA hervorgerufen werden.
  • Charakteristika glatter Muskelzellen umfassen eine histologische Morphologie (unter lichtmikroskopischer Untersuchung) einer Spindelform mit einem länglichen Kern, der zentral in der Zelle angeordnet ist, mit vorhandenen Nucleoli und Myofibrillen im Sarcoplasma. Unter elektronenmikroskopischer Untersuchung haben glatte Muskelzellen lange schlanke Mitochondrien in dem juxtanuklearen Sarcoplasma, einige wenige tubuläre Elemente des granulären endoplasmatischen Retikulums und zahlreiche Cluster freier Ribosomen. Nahe einem Pol des Nucleus kann sich auch ein kleiner Golgi-Komplex befinden. Der Großteil des Sarcoplasmas ist durch dünne parallele Myofilamente belegt, die überwiegend längs der Achse der Muskelzelle orientiert sein können. Diese Actin-haltigen Myofibrillen können in Bündeln angeordnet sein, mit dazwischen verteilten Mitochondrien. Durch die kontraktive Substanz der Zelle können auch ovale dichte Bereiche verstreut sein, mit ähnlichen dichten Bereichen, die in Intervallen längs den Innenaspekten des Plasmalemma verteilt sind.
  • Die Stents der Erfindung sind nutzbar, um die Aktivität der glatten Gefäßmuskelzellen zu hemmen, zum Reduzieren, Verzögern oder Beseitigen einer Stenose nach Angioplastik. Der hierin benutzte Begriff "Reduzieren" bedeutet die Verringerung der Intimaverdickung, die von der Stimulation der glatten Muskelzellproliferation nach Angioplastik resultiert, entweder in einem Tiermodell oder in einem Menschen. "Verzögern" bedeutet die Verzögerung der Zeit bis zum Einsetzen einer sichtbaren Intimahyperplasie (z. B. histologisch beobachtet oder durch angiographische Untersuchung) nach Angioplastik, und kann auch von einer "reduzierten" Restenose begleitet sein. "Eliminieren" der Restenose nach Angioplastik bedeutet das vollständige "Reduzieren" und/oder vollständige "Verzögern" der Intimahyperplasie in einem Patienten in einem Ausmaß, das es nicht länger notwendig macht, operativ zu intervenieren, d. h. einen geeigneten Blutfluss durch das Gefäß durch wiederholte Angioplastik, Atherectomie oder Coronararterien-Bypassoperation wieder herzustellen. Die Effekte des Reduzierens, Verzögerns oder Eliminierens einer Stenose kann durch Methoden bestimmt werden, die für den Fachmann Routine sind, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf Angiographie, Ultraschallauswertung, fluoroskopische Abbildung, endoskopische Faseroptikuntersuchung oder Biopsie und Histologie. Die therapeutischen Konjugate der Erfindung erreichen diese vorteilhaften Effekte, indem sie spezifisch an die Zellmembranen glatter Muskelzellen und Pericyten binden.
  • Therapeutische Konjugate der Erfindung werden erhalten, indem ein Glatte-Gefäßmuskel-Bindungsprotein an einen therapeutischen Wirkstoff gekoppelt wird. In dem therapeutischen Konjugat hat das Glatte-Gefäßmuskel-Bindungsprotein die Funktion des Targetisierens (Zielens) des therapeutischen Konjugats zu den glatten Gefäßmuskelzellen oder Pericyten, und der therapeutische Wirkstoff hat die Funktion, die Zellaktivität der glatten Muskelzelle oder des Pericyts zu hemmen.
  • Therapeutische Dosierungsformen (vom Dauerfreigabetyp) der vorliegenden Erfindung haben die Fähigkeit, den therapeutischen Wirkstoff zu Targetzellen über eine gehaltene Zeitdauer abzugeben. Therapeutische Dosierungsformen dieses Aspekts der vorliegenden Erfindung können in jeglicher Form vorliegen, die für diesen Zweck geeignet sind. Bevorzugte therapeutische Dauerfreigabe-Dosierungsformen zeigen eine oder mehrere der folgenden Eigenschaften:
    • – eine mikropartikuläre (z. B. von 0,5 Mikrometer bis etwa 100 Mikrometer Durchmesser, wobei von etwa 0,5 bis etwa 2 Mikrometer bevorzugter ist) oder nanopartikuläre (z. B. von etwa 1,0 Nanometer bis etwa 1000 Nanometer Durchmesser, wobei von etwa 50 bis etwa 250 Nanometer bevorzugter ist) frei fließende Pulverstruktur;
    • – eine biologisch abbaubare Struktur, die so ausgebildet ist, dass sie über eine Zeitdauer zwischen etwa 3 bis etwa 180 Tagen biologisch abgebaut wird, wobei von etwa 10 bis etwa 20 Tagen bevorzugt ist, oder eine nicht biologisch abbaubare Struktur, um zu erlauben, dass eine Diffusion eines therapeutischen Wirkstoffs über eine Zeitdauer zwischen von etwa 3 bis etwa 180 Tagen stattfindet, wobei von etwa 10 bis etwa 120 Tagen bevorzugt ist;
    • – biokompatible mit Ziel- bzw. Targetgewebe und der örtlichen physiologischen Umgebung, in die Dosierungsform verabreicht wird, einschließlich biokompatiblen biologisch zersetzbaren Produkte;
    • – Erleichtern einer stabilen und reproduzierbaren Dispersion eines therapeutischen Wirkstoffs darin, bevorzugt zur Bildung einer therapeutischen Wirkstoff-Polymermatrix, wobei die Freigabe der therapeutischen Wirkstoffs durch einen oder beide der folgenden Wege stattfindet: (1) Diffusion des therapeutischen Wirkstoffs durch die Dosierungsform (wenn der therapeutische Wirkstoff in dem Polymer oder Polymergemisch lösbar ist, das die Dosierungsform bildet); oder (2) Freigabe des therapeutischen Wirkstoffs als die biologischen Zersetzungsprodukte der Dosierungsform; und
    • – die Fähigkeit, mit einem oder mehreren zellulären und/oder interstitiellen Matrixepitop(en) zu binden, wobei von etwa 1 bis etwa 10.000 Bindungsprotein/peptid-Dosierungsformbindungen bevorzugt ist, und wobei ein Maximum von etwa einer Bindungspeptid-Dosierungsform pro 150 Quadratangström der Partikeloberfläche bevorzugter sind. Die gesamte Bindungszahl ist von der eingesetzten Partikelgröße abhängig. Die Bindungsproteine oder -peptide sind in der Lage, die partikuläre therapeutische Dosierungsform durch kovalente Ligandensandwich oder nicht kovalente Modalitäten zu koppeln, wie sie hierin angegeben sind.
  • Nanopartikuläre therapeutische Dauerfreigabe-Dosierungsformen der bevorzugten Ausführungen der vorliegenden Erfindung sind biologisch abbaubar und binden an die glatten Gefäßmuskelzellen und dringen in diese Zellen primär durch Endozytose ein. Der biologische Abbau dieser Nanopartikel erfolgt über die Zeit (z. B. 10 bis 21 Tagen) in prälysomischen Vesikeln und Lysosomen. Die bevorzugten größeren therapeutischen mikropartikulären Dosierungsformen der vorliegenden Erfindung binden an die Targetzelloberfläche oder die interstitielle Matrix in Abhängigkeit von dem gewählten Bindungsprotein oder -peptid, und gegeben die therapeutischen Wirkstoffe zur anschließenden Aufnahme durch die Targetzelle frei, wobei nur wenige der kleineren Mikropartikel durch Phagocytose in die Zelle eindringen. Ein Praktiker der Technik will erkennen, dass der präzise Mechanismus, durch den eine Targetzelle eine Dosierungsform der vorliegenden Erfindung assimiliert und metabolisiert, von der Morphologie, Physiologie und den metabolischen Prozessen dieser Zellen abhängig ist.
  • Die Größe der targetisierten therapeutischen partikulären Dauerfreigabe-Dosierungsformen ist auch in Bezug auf die Art der zellulären Assimilation wichtig. Z. B. können kleinere Nanopartikel mit der Interstitialflüssigkeit zwischen den Zellen fließen und in das infundierte Gewebe eindringen, bis sie an das normale oder neoplastische Gewebe binden, welches als das Bindungs/Protein/Peptid ausgewählt ist. Dieses Merkmal ist z. B. wichtig, weil die Nanopartikel den lymphatischen Drainagekanälen von infundierten primären neoplastischen Foci, metastatischen Targetfoci entlang dem lymphatischen Trakt folgen. Die größeren Nanopartikel haben die Tendenz, dass sie leichter interstitiell in dem infundierten Primärgewebe gefangen werden.
  • Bevorzugte Dauerfreigabe-Dosierungsformen der vorliegenden Erfindung sind biologisch abbaubare Mikropartikulate oder Nanopartikulate. Besonders bevorzugt werden biologisch abbaubare Mikropartikel oder Nanopartikel aus einer polymerhaltigen Matrix gebildet, die durch zufällige nicht enzymatische hydrolytische Auftrennung biologisch abgebaut werden, um den therapeutischen Wirkstoff freizugeben, um hierdurch Poren innerhalb der partikulären Struktur zu bilden.
  • Zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung sind Polymere bevorzugt, die aus der Kondensation von Alpha-Hydroxycarboxylsäuren und zugeordneten Lactonen abgeleitet sind. Eine besonders bevorzugte Komponente wird aus einem Gemisch thermoplastischer Polyester (z. B. Polylactide oder Polyglycolide) oder einem Copolymer von Lactiden- und Glycoliden-Komponenten gebildet, wie ewta Poly(lactid-co-glycolid). Eine beispielhafte Struktur, ein Zufallspoly-(DL-lactid-co-glycolid) ist unten gezeigt, wobei die Werte von x und y vom Praktiker der Technik manipulierbar sind, um gewünschte mikropartikuläre oder nanopartikuläre Eigenschaften zu erhalten.
  • Figure 00200001
  • Andere Wirkstoffe, die zur Bildung von partikulären Dosierungsformen der vorliegenden Erfindung geeignet sind, beinhalten Polyorthoester und Polyacetale (Polymer Letters, 18: 293, 1980) und Polyorthocarbonate (U.S. Patent Nr. 4,093,709) und dgl.
  • Bevorzugt milchsäure/glycolsäurepolymerhaltige Matrixpartikulate der vorliegenden Erfindung werden durch emulsionsbasierende Prozesse hergestellt, die modifizierte Lösungsmittelextraktionsprozesse darstellen, wie etwa jene, die beschrieben sind in Cowsar et al., "Poly(Lactide-Co-Glycolide) Microcapsules for Controlled Release of Steroids", Methods Enzymology, 112: 101–116, 1985 (Steroideinschluss in Micropartikulaten); Eldridge et al., "Biodegradable and Biocompatible Poly(DL-Lactide-Co-Glycolide) Microspheres as an Adjuvant for Staphylococcal Enterotoxin B Toxoid Which Enhances the Level of Toxin-Neutralizing Antibodies", Infection and Immunity, 59: 2978–2986, 1991 (Toxoid-Einschluss); Cohen et al., "Controlled Delivery Systems for Proteins Based on Poly(Lactic/Glycolic Acid) Microspheres", Pharmaceutical Research, 8(6): 713–720, 1991 (Enzymeinschluss); und Sanders et al., "Controlled Release of a Luteinizing Hormone-Releasing Hormone Analogue from Poly(D,L-Lactide-Co-Glycolide) Microspheres", J. Pharmaceutical Science, 73(9): 1294–1297, 1984 (Peptideinschluss).
  • Allgemein enthält die Prozedur zur Bildung partikulärer Dosierungsformen der vorliegenden Erfindung das Lösen des Polymers in einem halogenierten Kohlenwasserstoff-Lösungsmittel, Dispergieren einer therapeutischen Wirkstofflösung (bevorzugt wässrig) darin, und Hinzufügen eines zusätzlichen Wirkstoffs, der als Lösungsmittel für das halogenierte Kohlenwasserstoff-Lösungsmittel wirkt, jedoch nicht für das Polymer. Das Polymer präzipitiert aus der Polymer-halogenierten Kohlenwasserstoff-Lösung auf Tröpfchen der therapeutischen Wirkstoff haltigen Lösung und schließt den therapeutischen Wirkstoff ein. Bevorzugt wird der therapeutische Wirkstoff im Wesentlichen gleichmäßig in der Dauerfreigabe-Dosierungsform der vorliegenden Erfindung dispergiert. Nach der Partikelbildung werden sie mit einem organischen Lösungsmittel gewaschen und gehärtet. Vor dem Trocknen bei Raumtemperatur unter Vakuum folgen Schritte des Wasserwaschens und des Waschens mit wässrigem nicht-ionischen oberflächenaktiven Stoff.
  • Zum Zwecke der Biokompatibilität werden partikuläre Dosierungsformen, die durch darin in Matrixform dispergiertem therapeutischen Wirkstoff gekennzeichnet sind, vor der Verpackung, Aufbewahrung oder Verabreichung sterilisiert. Das Sterilisieren kann in jeder hierfür geeigneten Art durchgeführt werden. Z.B. können die Partikulate mit Gamma-Strahlung bestrahlt werden, vorausgesetzt, dass das Aussetzen dieser Strahlung die Struktur oder Funktion des therapeutischen Wirkstoffs, der in der Therapeutischer-Wirkstoff-Polymermatrix oder dem daran angebrachten Bindungsprotein/peptid nicht nachteilig beeinflusst. Wenn der therapeutische Wirkstoff oder das Bindungsprotein/peptid so nachteilig beeinflusst ist, können die partikulären Dosierungsformen unter sterilen Bedingungen produziert werden.
  • Die Freigabe des therapeutischen Wirkstoffs aus den partikulären Dosierungsformen der vorliegenden Erfindung kann als Ergebnis sowohl von Diffusion als auch partikulärer Matrixerosion erfolgen. Die biologische Abbaurate beeinflusst direkt die Kinetiken der therapeutischen Wirkstofffreigabe. Die biologische Abbaurate ist durch Veränderung der Zusammensetzung und der Struktur der Dauerfreigabe-Dosierungsform regulierbar. Z. B. kann eine Veränderung des Lactid/Glycolid-Verhältnisses in bevorzugten Dosierungsformen der vorliegenden Erfindung so durchgeführt werden, wie beschrieben in Tice et al., "Biodegradable Controlled-Release Parenteral Systems", Pharmaceutical Technology, S. 26–35, 1984; durch Einschluss von Polymerhydrolyse-modifizierenden Mitteln, wie etwa Zitronensäure und Natriumcarbonat, wie beschrieben von Kent et al., "Microencapsulation of Water Soluble Active Polypeptides", U.S. Patent Nr. 4,675,189; durch Verändern der Beladung des therapeutischen Wirkstoffs in das Lactid/Glycolidpolymer, wobei die Abbaurate umgekehrt proportional zur Menge des darin enthaltenen therapeutischen Wirkstoffs ist, sowie durch sorgfältige Auswahl eines geeigneten Analogons einer gemeinsamen Familie therapeutischer Wirkstoffe, die unterschiedliche Potenzen aufzeigen, um die Kernladungen zu verändern; und durch Verändern der Partikelgröße, wie beschrieben in Beck et al., "Poly(DL-Lactide-Co-Glycolide)/Norethisterone Mücrocapsules: An Injectable Biodegradable Contraceptive", Biol. Reprod., 28: 186–195, 1983 oder dgl. Alle vorgenannten Methoden zum Regulieren der biologischen Abbaurate beeinflussen die intrinsische Viskosität der polymerhaltigen Matrix, um hierdurch deren Hydratationsrate zu verändern.
  • Die bevorzugte Lactid/Glycolid-Struktur ist mit der physiologischen Umgebung des Säugers biologisch kompatibel. Auch haben diese bevorzugten Dauerfreigabe-Dosierungsformen den Vorteil, dass deren biologische Zersetzung Milchsäure und Glycolsäure erzeugt, die beide normale Stoffwechselprodukte von Säugern sind.
  • Funktionelle Gruppen, die erforderlich sind, damit die Bindungsprotein/peptid-Partikel-Dosierungsform an die Partikel bindet, sind optional in der partikulären Struktur enthalten, zusammen mit den nicht zersetzbaren oder biologisch zersetzbaren Polymereinheiten. Funktionelle Gruppen, die zu diesem Zweck nutzbar sind, beinhalten jene, die mit Peptiden reaktiv sind, wie etwa Carboxylgruppen, Amingruppen, Sulfhydrylgruppen und dgl. Bevorzugte Bindungsverbesserungs-Komponenten enthalten die terminalen Carboxylgruppen der bevorzugten (Lactid-Glycolid) polymerhaltige Matrix oder dgl.
  • Ein nutzbares Glattes-Gefäßmuskel-Bindungsprotein ist eine Polypeptid-, peptidische oder mimetische Verbindung (wie unten beschrieben), die in der Lage ist, an ein Target bzw. Ziel oder einen Marker auf einer Oberflächenkomponente einer intakten oder zerstörten glatten Gefäßmuskelzelle derart zu binden, dass sie entweder die Freigabe des therapeutischen Wirkstoffs extrazellulär in die interstitielle Zwischenmatrix mit anschließender Diffusion des therapeutischen Wirkstoffs in die verbleibenden intakten glatten Gefäßmuskelzellen und/oder die Internalisierung durch die Zelle in ein intrazelluläres Kompartment der gesamten targetisierten biologisch abbaubaren Komponente, was die Ausgabe des therapeutischen Wirkstoffs gestattet. Repräsentative Beispiele nutzbarer Glatter-Gefäßmuskelzellen-Bindungsproteine beinhalten Antikörper (z. B. monoklonale oder polyklonale affinitätsgereinigte Antikörper), F(ab')2, Fab', Fab und Fv-Fragmente und/oder komplementäre determinierende Bereiche (CDR) von Antikörpern oder funktionellen Äquivalenten davon (z. B. Bindungspeptide und dgl.); Wachstumsfaktoren, Cytokine und polypeptide Hormone und dgl.; sowie Makromoleküle, die extrazelluläre Matrixrezeptoren erkennen (z. B. Integrin und Fibronectin-Rezeptoren und dgl.).
  • Andere bevorzugte Bindungspeptide, die beim Targetisieren der Dosierungsformausführung der vorliegenden Erfindung nützlich sind, beinhalten jene, die ein intrazelluläres Stoma und Matrix lokalisieren, die sich zwischen und unter den glatten Gefäßmuskelzellen befindet. Diese Bindungspeptide liefern den therapeutischen Wirkstoff zu dem Interstitialraum zwischen den Targetzellen. Der therapeutische Wirkstoff wird in diese Interstitialräume zur anschließenden Aufnahme durch die glatten Gefäßmuskelzellen freigegeben. Bevorzugte Bindungspeptide dieses Typs sind Epitopen an Collagen, extrazellulären Glykoproteinen, wie etwa Tenascin, Reticulum und elastischen Fasern und anderem interzellulären Matrixmaterial zugeordnet.
  • Therapeutische Wirkstoffe der Erfindung werden ausgewählt, die zelluläre Aktivität einer glatten Gefäßmuskelzelle zu hemmen, z. B. Proliferation, Migration, Zunahme im Zellvolumen, Zunahme in der extrazellulären Matrixsynthese (z. B. Collagene, Proteoglycane und dgl.) oder Sekretion extrazellulärer Matrixmaterialien durch die Zelle. Bevorzugt wirkt der therapeutische Wirkstoff entweder: a) als "cytostatischer Wirkstoff', um die Zellteilung in proliferierenden Zellen zu verhindern oder zu verzögern, indem die DNA-Replikation gehemmt wird (z. B. durch ein Medikament, wie etwa Adriamycin, Staurosporin oder dgl.) oder durch Hemmen der Spindelfaserbildung (z. B. ein Medikament, wie etwa Colchicin) und dgl.; oder b) als Inhibitor der Migration glatter Gefäßmuskelzellen von der medialen Wand in die Intima, z. B. ein "antimigratorischer Wirkstoff', wie etwa Cytochalasin; oder c) als ein Inhibitor der intralzellulären Zunahme im Zellvolumen (d. h. das von einer Zelle belegte Gewebevolumen; ein "cytoskelettaler Inhibitor" oder "metabolischer Inhibitor"); oder d) als ein Inhibitor, der die zelluläre Proteinsynthese und/oder Sekretion oder Organisation der extrazellulären Matrix blockiert (d. h. ein "Antimatrixwirkstoff").
  • Repräsentative Beispiele "cytostatischer Wirkstoffe" beinhalten z. B. modifizierte Toxine, Methotrexat, Adriamycin, Radionuklide (z. B. etwa jene, die offenbart sind in Fritzberg et al., U.S. Patent Nr. 4,897,255), Proteinkinaseinhibitoren (z. B. Staurosporin), Inhibitoren spezifischer Enzyme (z. B. wie etwa die Nuclearenzym-DNA-Topoisomerase II und DNA-Polymerase, RNA-Polymerase, Adenylguanylcyclase), Superoxiddismutaseinhibitoren, terminale Deoxynucleotidyltransferase, reverse Transkriptase, gegensinnige Oligonukleotide, die die glatte Gefäßmuskelzellen-Proliferation und dgl. unterdrücken, wie dann, wenn sie in ein Zellkompartment mit geeigneter Dosierung geliefert werden, die Wirkung haben, die Proliferation einer glatten Gefäßmuskelzelle oder eines Pericyten zu beeinträchtigen, ohne die Zelle abzutöten. Andere Beispiele "cytostatischer Wirkstoffe" enthalten peptidische oder mimetische Inhibitoren (d. h. Antagonisten, Agonisten oder kompetitive oder nicht kompetitive Inhibitoren) zellulärer Faktoren, die (z. B. in der Gegenwart extrazellulärer Matrix) die Proliferation glatter Gefäßmuskelzellen oder Pericyten auslösen können; z. B. Cytokine (z. B. Interleukine, wie etwa IL-1), Wachstumsfaktoren (z. B. PDGF, TGF-alpha oder -beta, Tumornekrosefaktor, glatte Gefäßmuskel- und endothelial abgeleitete Wachstumsfaktoren, z. B. Endothelin, FGF), Homingrezeptoren (z. B. für Plättchen oder Leukozyten) und extrazelluläre Matrixrezeptoren (z. B. Integrine). Repräsentative Beispiele nutzbarer therapeutischer Wirkstoffe in dieser Kategorie cytostatischer Wirkstoffe für die glatte Muskelproliferation enthalten: Subfragmente von Heparin, Triazolpyrimidin (Trapidil; ein PDGF-Antagonist), Lovastatin und Prostaglandine E1 oder I2.
  • Repräsentative Beispiele "antimigratorischer Wirkstoffe" beihalten Inhibitoren (d. B. Agonisten und Antagonisten, und kompetitive oder nicht kompetitive Inhibitoren) chemotaktischer Faktoren und ihrer Rezeptoren (z. B. komplementäre Chemotaxine, wie etwa C5a, C5a desarg oder C4a; extrazelluläre Matrixfaktoren, z. B. Collagenabbaufragmente) oder intrazelluläre cytoskelettale Proteine, die in der Lokomotion involviert sind (z. B. Actin, cytoskelettale Elemente und Phosphatasen und Kinasen, die bei der Lokomotion involviert sind). Repräsentative Beispiele nutzbarer therapeutischer Wirkstoffe in dieser Kategorie antimigratorischer Wirkstoffe enthalten: Kafteinsäurederivate und Nilvadipin (ein Calciumantagonist) und Steroidhormone. Bevorzugte antimigratorische therapeutische Wirkstoffe sind die Cytochalasine.
  • Repräsentative Beispiele von "cytoskelettalen Inhbitoren" enthalten Colchicine, Vinblastin, Cytochalasine, Taxol oder dgl., die auf die Mikrotubuli und mikrofilamenten Netzwerke innerhalb einer Zelle wirken.
  • Repräsentative Beispiele "metabolischer Inhibitoren" enthalten Staurosporin, Trichothecene und modifizierte Diphtherie- und Ricintoxine, Pseudomonas exotoxin und dgl. In einer bevorzugten Ausführung ist das therapeutische Konjugat mit einem therapeutischen Wirkstoff aufgebaut, der ein einfaches Trichothecen oder ein makrozyklisches Trichothecen ist, z. B. ein Verrucarin oder Roridin. Trichothecene sind Medikamente, die durch Bodenpilze der Klasse Funig imperfecti produziert werden oder aus Baccharus megapotamica isoliert sind (Bamburg, J. R. Proc. Molec. Subcell. Biol. 8: 41–110, 1983; Jarvis /Mazzola, Acc. Chem. Res. 15: 338–395, 1982). Sie scheinen die am stärksten toxischen Moleküle zu sein, die nur Kohlenstoff, Wasserstoff und Sauerstoff enthalten (Tamm, C. Fortschr. Chem. Org. Naturst. 31: 61–117, 1974). Von ihnen allen wird berichtet, dass sie in der Höhe des Ribosoms als Inhbitoren der Proteinsynthese bei den Initüerungs-, Elongations- oder Terminationsphasen wirken.
  • Es gibt zwei breite Klassen von Trichothecenen: jene, die nur eine zentrale sesquiterpenoide Struktur haben, und jene, die einen zusätzlichen makrozyklischen Ring haben (einfache bzw. makrozyklischen Trichothecene). Die einfachen Trichothecene können in drei Gruppen unterteilt werden (d. h. Gruppe A, B und C), wie in den U.S. Patenten Nr. 4,744,981 und 4,906,452 beschrieben (die hierin unter Bezugnahme aufgenommen werden). Repräsentative Beispiele der Gruppe A einfacher Trichothecene enthalten: Scirpen, Roridin C, Dihydrotrichothecen, Scirpen-4, 8-Diol, Verrucarol, Scirpentriol, T-2 Tetraol, Pentahydroxyscirpen, 4-Deacetylneosolaniol, Trichodermin, Deacetylcalonectrin, Calonectrin, Diacetylverrucarol, 4-Monoacetoxyscirpenol, 4,15-Diacetoxyscirpenol, 7-Hydroxydiacetoxyscirpenol, 8-Hydroxydiacetoxyscirpenol (Neosolaniol), 7,8-Dihydroxydiacetoxyscirpenol, 7-Hydroxy-8-acetyldiacetoxyscirpenol, 8-Acetylneosolaniol, NT-1, NT-2, HT-2, T-2 und Acetyl-T-2-toxin.
  • Repräsentative Beispiele der Gruppe B einfacher Trichothecene enthalten: Trichothecolon, Trichothecin, Deoxynivalenol, 3-Acetyldeoxynivalenol, 5-Acetyldeoxynivalenol, 3,15-Diacetyldeoxynivalenol, Nivalenol, 4-Acetylnivalenol (Fusarenon-X), 4,15-Idacetylnivalenol, 4,7,15-Triacetylnivalenol und Tetra-Acetylnivalenol. Repräsentative Beispiele der Gruppe C einfacher Trichothecene enthalten: Crotocol und Crotocin. Repräsentative Beispiele der makrozyklischen Trichothecene enthalten Verrucarin A, Verrucarin B, Verrucarin J (Satratoxin C), Roridin A, Roridin D, Roridin E (Satratoxin D), Roridin H, Satratoxin F, Satratoxin G, Satratoxin H, Vertisporin, Mytoxin A, Mytoxin C, Mytoxin B, Myrotoxin A, Myrotoxin B, Myrotoxin C, Myrotoxin D, Roritoxin A, Roritoxin B und Roritoxin D. Zusätzlich ist auch die allgemeine "Trichothecen"-sesquiterpenoide Ringstruktur in Verbindungen vorhanden, genannt "Baccharine", die aus der höheren Pflanze Baccharis megapotamica isoliert sind und die in der Literatur beschrieben sind, wie z. B. offenbart in Jarvis et al. (Chemistry of Alleopathy, ACS Symposium Series Nr. 268: Ed. A. C. Thompson, 1984, S. 149–159).
  • Repräsentative Beispiele von "Antimatrixwirkstoffen" enthalten Inhbitoren (d. h. Agonisten und Antagonisten und kompetitive und nicht kompetitive Inhibitoren) der Matrixsynthese, Sekretion und Zusammenbau, organisatorische Quervernetzer (z. B. Transglutaminasen quervernetzendes Collagen) und Matrixwiederaufbau (z. B. nach der Wundheilung). Ein repräsentatives Beispiel eines nützlichen therapeutischen Wirkstoffs ist in dieser Kategorie von Antimatrixwirkstoffen ist Colchicin, ein Inhibitor der Sekretion extrazellulärer Matrix.
  • Für die Dauerfreigabe-Dosierungsform-Ausführung der vorliegenden Erfindung sind therapeutische Wirkstoffe bevorzugt jene, die die Glatte-Gefäßmuskelzellaktivität hemmen, ohne die Zellen abzutöten (d. h. cytostatische therapeutische Wirkstoffe). Bevorzugte therapeutische Wirkstoffe zu diesem Zweck zeigen eine oder mehrere der folgenden Fähigkeiten: Hemmen der DNA-Synthese vor der Proteinsynthesehemmung, oder Hemmung der Migration der glatten Gefäßmuskelzellen in die Intima. Diese therapeutischen Wirkstoffe hemmen die Proteinsynthese nicht signifikant (d. h. sie töten die Targetzellen nicht ab), und erleichtern daher die zelluläre Reparatur und Matrixproduktion, um die Gefäßwandläsion zu stabilisieren, die durch Angioplastik hervorgerufen wird, um hierdurch die glatte Muskelzellproliferation zu reduzieren.
  • Beispiele dieser bevorzugten therapeutischen Wirkstoffe sind Proteinkinaseinhibitoren, wie etwa Staurosporin (Staurosporin ist erhältlich bei Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri), Cytochalasine, wie etwa Cytochalasin B (Sigma Chemical Co.) und Suramin (FBA Pharmaceuticals, West Haven, Connecticut), sowie auch Nitroglycerin (DuPont Pharmaceuticals, Inc. Manuti, Puerto Rico) oder analoge oder funktionelle Äquivalente davon. Diese Verbindungen sind cytostatisch und haben gezeigt, dass sie eine minimale Proteinsynthesehemmung und Cytotoxizität bei Konzentrationen ausüben, wo eine signifikante DNA-Synthesehemmung stattfindet (siehe Beispiel 8 und 10A10D). Ein nutzbares Protokoll zur Identifizierung therapeutischer Wirkstoffe, die in den Dauerfreigabe-Dosierungsformausführungen der vorliegenden Erfindung nutzbar sind, sind z. B. in Beispiel 8 aufgeführt. Ein Praktiker in der Technik ist in der Lage, im Wesentlichen äquivalente experimentelle Protokolle zu entwerfen, um eine solche Identifizierung unterschiedlicher Targetzellpopulationen durchzuführen, wie etwa adhärente einschichtige Targetzelltypen. Andere Ausführungen der vorliegenden Erfindung beinhalten Wirkstoffe, die für Krebszellen cytotoxisch sind. Bevorzugte Wirkstoffe für diese Ausführungen sind Roridin A, Pseudomonas exotoxin und dgl. oder analoge oder funktionelle Äquivalente davon. Eine Plethora dieser therapeutischer Wirkstoffe, einschließlich Radioisotopen und dgl., ist identifiziert worden und ist in der Technik bekannt. Zusätzlich sind Protokolle für die Identifikation cytotoxischer Gruppen bekannt und werden in der Technik routinemäßig angewendet.
  • Glatte-Gefäßmuskelzell-Bindungsproteine der Erfindung binden an Targets an der Obertläche glatter Gefäßmuskelzellen. Es wird erkannt, dass spezifische Targets, z. B. Polypeptide oder Carbohydrate, Proteoglycane und dgl., die den Zellmembranen glatter Gefäßmuskelzellen zugeordnet sind, zur Auswahl (z. B. durch Klonierung) oder Konstruktion (z. B. durch genetisches Engineering oder chemische Synthese) geeigneter spezifischer Glatter-Gefäßmuskelzell-Bindungsproteine nutzbar sind. Besonders nützliche "Targets" werden durch die glatten Muskelzellen internalisiert, z. B. wenn der Membranbestandteil- Antigenturnover bei der Erneuerung stattfindet. Die Internalisierung durch Zellen kann auch durch Mechanismen erfolgen, die Phagolysosome, Clathrinbeschichtete Pits, Rezeptor-vermittelte Neuverteilung oder Endocytose und dgl. involvieren. In einer bevorzugten Ausführung wird ein solches "Target" hier exemplifiziert durch Chondroitinsulfatproteoglacane (CSPGs), synthetisiert durch die glatten Gefäßmuskelzellen und Pericyten, und einen gesonderten Anteil (hierin Epitop genannt) des CSPG-Moleküls, wobei ein scheinbares Molekulargewicht von etwa 250 kD besonders bevorzugt ist. Dieses 250 kD Target ist ein N-verknüpftes Glycoprotein, das eine Komponente eines größeren 400 kD Proteoglycankomplexes ist (14). In einer gegenwärtig bevorzugten Ausführung der Erfindung wird ein Glattes-Gefäßmuskelzell-Bindungsprotein durch einen monoklonalen NR-AN-01 Antikörper (eine Subkultur von NR-ML-05) bereitgestellt, der an ein Epitop in einem Glatten-Gefäßmuskel CSPG-Targetmolekül bindet. Es wird berichtet, dass der NR-ML-05 genannte Antikörper an 250 kD CSPG bindet, das durch Melanomzellen synthetisiert ist (Morgan et al., U.S. Patent Nr. 4,897,255). Es wird auch berichtet, dass glatte Gefäßmuskelzellen und Pericyten ein 250 kD CSPG sowie auch andere CSPGs synthetisieren (11). NR-ML-05 Bindung an glatte Muskelzellen ist offenbart worden (Fritzberg et al., U.S. Patent Nr. 4,879,225). Monoklonale Antikörper NR-ML-05 und Subkultur NR-ML-05 Nr. 85-41-41-A2, Frost # A2106, sind beide bei der American Type Culture Collection, Rockville, MD hinterlegt worden und haben die Zugriffsnummern HB-5350 bzw. HB-9350 erhalten. NR-ML-05 ist der Verwandte von Subklon NR-AN-01, hierin offenbart, und strukturell und funktionell hierzu äquivalent. Es versteht sich, dass NR-AN-01 nur ein Beispiel eines Glatten-Gefäßmuskelzell-Bindungsproteins ist, das spezifisch dem 400 kD CSPG-Target assoziiert ist, und dass auch andere Bindungsproteine, die diesem Target und anderen Epitopen in diesem Target assoziiert sind (14), auch in den therapeutischen Konjugaten und Verfahren der Erfindung nutzbar sind. Im vorliegenden Fall sind auch sechs andere murine monoklonale Antikörper und zwei humane chimäre monoklonale Antikörper ausgewählt worden, wie hierin beschrieben, die spezifisch auf 250 kD CSPG glatter Gefäßmuskelzellen abzielen. Die Antikörper werden scheinbar auch durch glatte Muskelzellen nach der Bindung an die Zellmembrane internalisiert. Immunoreaktionsstudien haben auch die Bindung des murinen MAbs an 250 kD Antigen in 45 humanen normalen Geweben gezeigt und 30 verschiedene Neoplasmen und einige dieser Ergebnisse sind zuvor offenbart worden (U.S. Patent Nr. 4,879,225). In dieser Offenbarung und anderen humanklinischen Studien wurde MAbs auf CSPG 250 kD Antigen, lokalisiert in glatten Gefäßmuskelzellen in vivo, gerichtet. Ferner versteht es sich, dass die Aminosäurereste, die in der kinetischen Multipunktzuordnung der NR-AN-01 monoklonalen Antikörper mit einem CSPG Markerantigenepitop (d. h. Aminosäuren, die die komplementaritätsbestimmenden Regionen darstellen) durch computergestützte molekulare Modellbildung bestimmt werden und durch die Verwendung von Mutanten, die eine geänderte Antikörperbindungsaffinität haben. Diese Bindungsortaminosäuren und das dreidimensionale Modell des NR-AN-01 Antigenbindungsorts dienen als molekulares Modell zur Konstruktion funktioneller Äquivalente, z. B. kurzer Polypeptide ("minimale Polypeptide"), die eine Bindungsaffinität für CSPG haben, das durch glatte Gefäßmuskelzellen und Pericyten synthetisiert ist.
  • In einer gegenwärtig bevorzugten Ausführung zur Behandlung von Stenose nach operativen Gefäßprozeduren, z. B. PTCA, hatten gewählte Bindungsproteine, z. B. Antikörper oder Fragmente zur Verwendung bei der Durchführung der Erfindung, eine Bindungsaffinität von > 104 Liter/Mol für das glatte Gefäßmuskel 250 kD CSPG, und auch die Fähigkeit, an glatte Muskelzellen oder Pericyten zu binden oder von diesen aufgenommen zu werden.
  • Die dreidimensionale Modellbildung ist auch nutzbar, um andere funktionelle Äquivalente zu konstruieren, die die Bindung von NR-AN-01 an sein antigenes Epitop nachzuahmen, z. B. "mimetische" chemische Verbindungen, die die dreidimensionalen Aspekte von NR-AN-01 nachahmen, das an sein Epitop in einem CSPG Targetantigen bindet. In der hiesigen Anwendung bezieht sich "Minimalpolypeptid" auf eine Aminosäuresequenz von zumindeset sechs Aminosäuren Länge. In der hiesigen Anwendung bezieht sich der Begriff "mimetisch" auf ein organisches chemisches Polymer, das konstruiert ist, um den richtigen Zwischenraum zur Bindung an die Aminosäuren von z. B. NR-AN-01 CSPG Target zu erreichen, das durch glatte Gefäßmuskelzellen oder Pericyten synthetisiert wird.
  • Es versteht sich, dass die Erfinder auch den Nutzen humaner monoklonaler Antikörper oder "humanisierter" muriner Antikörper als Glattes-Gefäßmuskel-Bindungsprotein in therapeutischen Konjugaten ihrer Erfindung berücksichtigt haben. Z. B. kann ein muriner monoklonaler Antikörper "chimärisiert" werden, indem die Nukleotidsequenz genetisch rekombiniert wird, welche die murine Fv-Region (die z. B. die Antigenbindungsorte enthält) mit einer Nukleotidsequenz, die eine humane konstante Domänenregion und eine Fc-Region codiert, z. B. in ähnlicher Weise wie in der europäischen Patentanmeldung Nr. 0,411,893 A2 offenbart. Humanisierte Glatte-Gefäßmuskel-Bindungspartner haben, wie erkannt wird, den Vorteil, die Immunoreaktivität des Antikörpers oder Polypeptids in dem Wirtsrezipienten zu senken, was hierdurch nützlich sein kann, um in vivo die Halbwertszeit zu vergrößern und die Möglichkeit schädlicher Immunreaktionen zu senken.
  • Auch berücksichtigt als nützliche Bindungspeptide für Restenosebehandlungs-Dauerfreigabe-Dosierungsformen der vorliegenden Erfindung sind jene, die am intezlellularen Stroma oder der Matrix lokalisieren, die sich zwischen und unter den glatten Gefäßmuskelzellen befindet. Die Bindungspeptide liefern den therapeutischen Wirkstoff zu dem Interstitialraum zwischen den Targetzellen. Der therapeutische Wirkstoff wird in die Interstitialräume freigegeben, zur anschließenden Aufnahme durch die glatten Gefäßmuskelzellen. Bevorzugte Bindungspeptide dieses Typs sind Epitopen an Collagen, extrazellulären Glycoproteinen wie Tenascin, Reticulum und elastische Fasern, Cytokeratin und anderen intrazellulären Matrixkomponenten zugeordnet. Minimalpeptide, mimetische organische chemische Verbindungen, humane oder humanisierte monoklonale Antikörper und dgl., die am intrazellularen Stroma und der Matrix lokalisieren, sind auch als Bindungspeptide in dieser Ausführung der vorliegenden Erfindung nutzbar. Diese Bindungspeptide können gemäß bekannten Techniken identifiziert und konstruiert oder isoliert werden. In bevorzugten Ausführungen der vorliegenden Erfindung bindet das interstitielle Matrixbindungsprotein an ein Targetepitop mit einer Assoziationskonstante von zumindest 10–4 M.
  • Andere bevorzugte Bindungsproteine oder -peptide, die in der Praxis der vorliegenden Erfindung nutzbar sind, enthalten Komponenten, die in der Lage sind, pathologisch proliferierende normale Gewebe zu lokalisieren, wie etwa Pericyten der intraokularen Gefäße, die in regenerativer Augenerkrankung impliziert sind. Der therapeutische Wirkstoff wird in Targetzellen zur Internalisierung davon durch diese Dauerfreigabe-Dosierungsformen verabreicht. Minimalpeptide, mimetische organische Verbindungen und humane oder humanisierte Antikörper, die an die erforderlichen pathologisch proliferierenden normalen Zelltypen lokalisieren, sind auch als Bindungspeptide der vorliegenden Erfindung nutzbar. Diese Bindungspeptide können gemäß bekannten Techniken identifiziert und konstruiert oder isoliert werden. Bevorzugte Bindungspeptide dieser Ausführungen der vorliegenden Erfindung binden an ein Targetepitop mit einer Assoziationskonstante von zumindest etwa 10–6 M.
  • Repräsentative "Kopplungs"-Methoden zum Vernetzen des therapeutischen Wirkstoffs durch kovalente oder nicht kovalente Bindungen mit dem Glatten-Gefäßmuskel-Bindungsprotein enthalten chemische Quervernetzer und heterobifunktionelle Quernetzungsverbindungen (d. h. "Linker"), die reagieren, um eine Bindung zwischen reaktiven Gruppen (wie etwa Hydroxyl-, Amino-, Amido- oder Suulfhydrylgruppen) in einem therapeutischen Wirkstoff und anderen reaktiven Gruppen (ähnlicher Natur) in dem Glatten-Gefäßmuskel-Bindungsprotein zu bilden. Diese Bindung kann z. B. eine Peptidbindung, eine Disulfidbindung, eine Thioesterbindung, eine Amidbindung, eine Thioetherbindung und dgl. sein. In einem illustrativen Beispiel sind Konjugate monoklonaler Antikörper mit Medikamenten von Morgan und Foon zusammengefasst worden (Monoclonal Antibody Therapy to Cancer: Preclinical Models and Investigations, Basic and Clinical Tumor Immunology, Vol. 2, Kluwer Academic Publishers, Hingham, MA) und von Uhr J. of Immunol. 133: i–vii, 1984). In einem anderen illustrativen Beispiel, wo das Konjugat einen radionukleiden cytostatischen Wirkstoff enthält, U.S. Patent Nr. 4,897,255, Fritzberg et al., das hierin unter Bezug aufgenommen wird, enthält Hinweise zu Kupplungsmethoden, die nutzbar sein können. In einer gegenwärtig bevorzugten Ausführung enthält das therapeutische Konjugat ein Glattes-Gefäßmuskel-Bindungsprotein, das kovalent mit einem Trichothecen-Medikament gekoppelt ist. In diesem Fall kann die kovalente Bindung der Kopplung zwischen einer oder mehreren Amino-, Sulfhydryl- oder Carboxylgruppen des Glatten-Gefäßmuskel-Bindungsproteins gebildet werden und a) dem Trichothecen selbst; b) einer Trichothecen-Hemisuccinatcarboxylsäure; c) einem Trichothecen-Hemisuccinat (HS) N-hydroxysuccinimidatester; oder d) Trichothecenkomplexen mit Poly-L-Iysin oder irgend einem polymerischen Träger. Repräsentative Beispiele von Kupplungsmethoden zur Herstellung therapeutischer Konjugate, welche einen therapeutischen Trichothecenwirkstoff enthalten, sind in den U.S. Patenten Nr. 4,906,452 und 4,744,981 beschrieben. Andere Beispiele, die ein Hydrazid zur Bildung einer Schiffschen Basenkopplung zwischen Bindungsproteinen und Trichothecenen verwenden, sind in der anhängigen U.S. Patentanmeldung Nr. 07/415,154 offenbart.
  • Die Auswahl der Kupplungsmethode wird durch die Auswahl des Glatten-Gefäßmuskel-Bindungsproteins oder -Peptids, des Interstitialmatrix-Bindungsproteins oder -peptids und des therapeutischen Wirkstoffs beeinflusst, und auch durch physikalische Eigenschaften, wie etwa z. B. der Lagerstabilität und/oder biologische Eigenschaften, wie etwa z. B. Halbwertszeit in Zellen und Blut, interzellulärer Kompartimentalisierungsweg und dgl. z. B. haben in einem gegenwärtig bevorzugten therapeutischen Konjugat, Hemisuccinatkonjugate des therapeutischen Roridin A-Wirkstoffs eine längere Serumhalbwertszeit als jene von Verrucarin A, und diese erhöhte Stabilität führt zu einer signifikant erhöhten biologischen Aktivität.
  • Die Dauerfreigabe-Ausführung der vorliegenden Erfindung enthält einen therapeutischen Wirkstoff, der in einer biologisch nicht abbaubaren oder biologisch abbaubaren polymerischen Struktur dispergiert ist. Diese Dispersion wird durchgeführt gemäß dem Verfahren, das beschrieben ist durch Cowsar et al., "Poly(Lactide-Co-Glycolide) Mirocapsules for Controlled Release of Steroids", Methods Enzymology, 112: 101–116, 1985; Eldridge et al., "Biodegradable and Biocompatible Poly(DL-Lactide-Co-Glycolide) Microspheres as an Adjuvant for Staphylococcal Enterotoxin B Toxoid Which Enhances the Level of Toxin-Neutralizing Antibodies", Infection and Immunity, 59: 2978–2986, 1991; Cohen et al., "Controlled Delivery Systems for Proteins Based on Poly(Lactic/Glycolic Acid) Microspheres", Pharmaceutical Research, 8(6): 7113–720, 1991; und Sanders et al., "Controlled Release of a Luteinizing Hormone-Releasing Hormone Analogue from Poly(D,L-Lactide-Co-Glycolide) Microspheres", J. Pharmaceutical Science, 73(9): 1294–1297, 1984.
  • Der physikalische und chemische Charakter der Dauerfreigabe-Dosierungsform der vorliegenden Erfindung ist verschiedenen alternativen Anbringungsarten an Bindungsproteinen oder -peptiden zugänglich. Dosierungsformen (vom Dauerfreigabetyp) der vorliegenden Erfindung sind in der Lage, an Proteine/Peptide z. B. durch kovalente Bindung, intermediäre Ligandensandwich-Anlagerung oder nicht kovalente Adsorption oder teilweisen Einschluss zu binden. Wenn die bevorzugten Polymichsäure/glycolsäurepartikulate mit dem darin dispergierten therapeutischen Wirkstoff gebildet werden, ist das ungeladene Polymer-Rückgrat sowohl einwärts orientiert (mit dem darin enthaltenen quasilipophilen therapeutischen Wirkstoff) als auch auswärts entlang einem Großteil der terminalen Carboxygruppen. Diese Oberflächencarboxygruppen können als kovalente Bindungsstellen (wenn z. B. durch ein Carbodiimid aktiviert) für nukleophile Gruppen des Bindungsproteins/peptids dienen. Solche nukleophilen Gruppen enthalten Lysin-epsilon-aminogruppen (Amidbindung), Serinhydroxylgruppen (Esterbindung) oder Cysteinmercaptangruppen (Thioesterbindung). Reaktionen mit bestimmten Gruppen sind vom pH und dem Reduktionszustand der Reaktionsbedingungen abhängig.
  • Z. B. werden Polymichsäure/glycolsäurepartikulate, die terminale Carboxylsäuregruppen aufweisen, mit N-Hydroxybenztriazol in der Gegenwart von wasserlöslichem Carbodiimid der Formel R-N=C=N-R' reagiert (worin R eine 3-Dimethylaminopropylgruppe oder dgl. ist und R' eine Ethylgruppe oder dgl. ist). Die Benztriazol-derivatisierten Partikulate (d. h. aktivierte Imidattragende Gruppen) werden dann mit einer nukleophilen Protein/Peptidgruppe reagiert, wie etwa einer verfügbaren Epsilon-Aminokomponente. Alternativ sind p-Nitrophenol, Tetrafluorphenol, N-Hydroxysuccinimid oder ähnliche Moleküle nützlich, um einen aktiven Ester mit den terminalen Carboxygruppen der Polymichsäure/glycolsäurepartikulate in der Gegenwart von Carbodiimid zu bilden. Andere nukleophile Bindungsprotein/peptidgruppen enthalten Hydroxylgruppen von Serin, endogene freie Thiole von Cystein, Thiolgruppen, resultierend aus der Reduktion von Bindungsprotein/peptiddisulfidbrücken unter Verwendung reduzierender Mittel, die allgemein zu diesem Zweck angewendet werden (z. B. Cystein, Dithiotreitol, Mercaptoethanol und dgl.) und dgl. Zusätzlich sind die terminalen Carboxygruppen der Polymilchsäure/glycolsäurepartikulate durch Reaktion mit Thionylchlorid aktivierbar, um eine Acrylchlorid-derivatisierte Gruppe zu bilden. Die derivatisierten Partikulate werden dann mit nukleophilen Bindungspeptid/proteingruppen reagiert, um targetisierte Dosierungsformen der vorliegenden Erfindung zu bilden.
  • Das Zuführen von Dauerfreigabe-Dosierungsform-Bindungsprotein oder -peptidkonjugation kann die Bindungsprotein/peptidtargetzellen-Erkennung unterbrechen. Ligandensandwichanlagerungstechniken sind nützliche Alternativen, um eine Dauerfreigabe-Dosierungsform-Bindungsprotein/peptid-Halterung zu erreichen. Diese Techniken beinhalten die Formung einer primären Peptid- oder Proteinhülle unter Verwendung eines Proteins, das an die Targetzellpopulation nicht bindet. Das Bindungsprotein/peptid wird dann an die primäre Peptid- oder Proteinhülle gebunden, um für das resultierende Partikulat mit funktionellem Bindungsprotein/peptid vorzusehen. Ein beispielhafter Ligandensandwichansatz beinhaltet das kovalente Binden von Avidin oder Streptavidin an die Partikulate durch funktionelle Gruppen, wie sie oben in Bezug auf den "direkten" Bindungsansatz beschrieben sind. Das Bindungsprotein oder Peptid wird derivatisiert, bevorzugt minimal, mit funktionalisiertem Biotin (z. B. durch aktiven Ester, Hydrazid, Iodoacetal, Maleimidyl oder ähnlich funktionelle Gruppen). Liganden (d. h. Bindungspeptid oder -protein-funktionalisiertes Biotin)-Bindung an den verfügbaren Biotinbindungsstellen der primären Avidin/Streptavidin-Proteinhülle erfolgt durch die Anwendung einer gesättigten Menge von biotinyliertem Protein/Peptid.
  • Z. B. werden Polymilchsäure/glycolsäurepartikulate, die terminale Carboxylsäuregruppen aufweisen, mit Carbodiimid aktiviert und anschließend mit Avidin oder Streptavidin reagiert. Das Bindungsprotein oder -peptid wird mit Biotinamidocaproat-N-hydroxysuccinimidester bei einem 1–3 molaren Zusatz einer biotinhaltigen Verbindung zu dem Bindungsprotein/peptid reagiert, um ein biotinyliertes Bindungsprotein/peptid zu bilden. Ein molarer Überschuss des biotinylierten Bindungsprotein/peptids wird mit den Avidin-derivatisierten Partikulaten inkubiert, um eine targetisierte Dosierungsform der vorliegenden Erfindung zu bilden.
  • Alternativ werden die partikulären Carboxygruppen biotinyliert (z. B. durch Carbodiimidaktivierung der Carboxygruppe und anschließende Reaktion mit Aminoalkylbiotinamid). Die biotinylierten Partikulate werden dann mit einer Sättigungskonzentration (d. h. molarem Überschuss) von Avidin oder Streptavidin inkubiert, um proteinbeschichtete Partikulate zu bilden, die freie Biotinbindungsstellen aufweisen. Diese beschichteten Partikel sind dann zu einer Reaktion mit einem molaren Überschuss eines biotinylierten Bindungsproteins in der Lage, das wie oben beschrieben gebildet ist. Eine andere Option beinhaltet ein Avidin- oder Streptavidin-gebundenes Bindungsprotein oder eine Proteinbindung mit biotinylierten Partikulaten.
  • Zusätzlich kann die Bindungsprotein/peptid-Partikulatanbringung durch Adsorption des Bindungspeptids an dem Partikulat erfolgen, was sich aus dem nicht-ionischen Charakter des teilweise freiliegenden Polymerrückgrats des Partikulats ergibt. Unter Bedingungen hoher Ionenstärke (z. B. 1,0 molares NaCl) sind Wasserstoff und hydrophobe partikulatbindende Protein/Peptidbindung bevorzugt.
  • Darüber hinaus kann das Bindungsprotein/peptid teilweise in der Partikulatpolymermatrix bei deren Bildung eingeschlossen werden. Unter diesen Umständen sorgt das so eingeschlossene Bindungsprotein/peptid für den selektiven Restbindungscharakter an dem Partikulat. Milde Partikulatbildungsbedingungen, wie etwa jene, die von Cohen et al., Pharmacuetical Research, 8: 713–720 (1991) angewendet werden, sind für diese Ausführung der vorliegenden Erfindung bevorzugt. Dieses eingeschlossene Bindungsprotein ist auch in der Targetzellwiederanlagerung eines teilweise abgebauten Partikulats nutzbar, das einer Exocytose unterzogen wurde. Andere polymere Partikulatdosierungsformen (z. B. nicht biologisch abbaubare Dosierungsformen), die unterschiedliche freiliegende funktionelle Gruppen aufweisen, können an Bindungsproteine oder -peptide gemäß den oben diskutierten Prinzipien gebunden werden.
  • Beispielhafte nicht biologisch abbaubare Polymere, die in der Praxis der vorliegenden Erfindung nutzbar sind, sind Polystyrole, Polypropylene, Styrolacrylcopolymere und dgl. Solche nicht biologisch abbaubaren Polymere beinhalten, oder können derivatisiert werden, um funktionelle Gruppen zum Anbringen von Bindungsprotein/peptid einzubauen, einschließlich Carboxylsäuregruppen, aliphatische primäre Aminogruppen, aromatische Aminogruppen und Hydroxylgruppen.
  • Funktionelle Carboxylsäuregruppen werden mit dem Bindungsprotein oder -peptid z. B. unter Verwendung der Reaktionsmechanismen gekoppelt, wie sie oben für Polymilchsäure/glycolsäure biologisch abbaubare Polymere partikuläre Dosierungsformen angegeben sind. Primäre aminofunktionelle Gruppen werden z. B. durch Reaktion derselben mit Succinanhydrid gekoppelt, um eine terminate Carboxygruppe zu bilden, die an Bindungspeptid/protein gebunden werden kann, wie oben beschrieben. Zusätzlich können primäre Aminogruppen mit Cyanogenbromid aktiviert werden und bilden Guanidinkopplungen mit primären Aminogruppen des Bindungsproteins/peptids. Aromatische funktionelle Aminogruppen werden z. B. mit salpetriger Säure diazotisiert, um Diazoniumkomponenten zu bilden, die mit Bindungsprotein/peptidtyrosinen reagieren, um hierdurch eine Diazobindung zwischen dem nicht biologisch abbaubaren Partikulat und dem Bindungsprotein/peptid herzustellen. Funktionelle Hydroxylgruppen werden mit den primären Aminogruppen des Bindungsproteins/peptids z. B. dadurch gekoppelt, dass die Hydroxylkomponente in eine terminale funktionelle Carboxylsäuregruppe umgewandelt wird. Eine solche Umwandlung kann z. B. durch Reaktion mit Chloressigsäure erreicht werden, gefolgt durch Reaktion mit Carbodiimid. Sandwich-, Adsorptions- und Einschlusstechniken, wie sie oben in Bezug auf biologisch abbaubare Partikulate diskutiert sind, sind analog auf nicht biologisch abbaubare Partikulat-Bindungsprotein/peptidfixierung anwendbar.
  • In einer bevorzugten Ausführung ist das Targeting für potenziell proliferierende Zellen spezifisch, die in vergrößertem glatten Muskel in der Intimaregion einer verletzten Gefäßstelle resultieren, z. B. infolge von Angioplastik, z. B. Pericyten und glatte Gefäßmuskelzellen. Aspekte der Erfindung beziehen sich auf therapeutische Modalitäten, in denen das therapeutische Konjugat der Erfindung verwendet wird, um Glatte-Muskelzellproliferation nach Angioplastik, z. B. PTCA, Atherektomie und perkutaner transluminaler Coronarrotationatheroblation zu verzögern, zu reduzieren oder zu beseitigen.
  • Dauerfreigabe-Dosierungsformen einer Ausführung der Erfindung brauchen gegebenenfalls nur in einer antiproliferativen therapeutischen Dosierung verabreicht werden, die ausreicht, um die proximalen (6 bis 9) Zellschichten der glatten Tunica media Muskelzellen, die das Lumen auskleiden, der Dosierungsform auszusetzen. Die Dosierung ist empirisch bestimmbar, z. B. durch a) Infundieren von Gefäßen aus geeigneten Tiermodellsystemen unter Verwendung immunohistochemischer fluoreszenter oder elektronenmikroskopischer Methoden zum Erfassen der Dosierungsform und von deren Wirkungen; und b) Durchführen geeigneter in vitro Studien.
  • In einem repräsentativen Beispiel wird diese therapeutisch wirksame Dosis erreicht, indem in einer Glatten-Muskelzellgewebekultur die perizelluluäre Wirkstoffdosis bestimmt wird, was bei kontinuierlicher Exposition zu einem therapeutischen Effekt zwischen den toxischen und minimal wirksamen Dosierungen führt. Dieser therapeutische Pegel wird in vivo erhalten, indem die Größe, Anzahl und die therapeutische Wirkstoffkonzentrations- und -freigaberate bestimmt wird, die für Partikel erforderlich ist, die zwischen die glatten Muskelzellen der Arterienwand infundiert wird, um diese perizelluluäre therapeutische Dosis beizubehalten. Die Dosierungsform sollte den therapeutischen Wirkstoff mit einer Rate freigeben, die der perizelluluären Dosis der folgenden beispielhaften therapeutischen Wirkstoffe angenähert ist: von etwa 0,01 bis etwa 100 Mikrogramm/ml Nitroglycerin, von etwa 1,0 bis etwa 1000 Mikrogramm/ml Suramin, von etwa 0,001 bis etwa 100 Mikrogramn/ml für Cytochalasin, und von etwa 0,1 bis etwa 105 Nanogramm/ml Staurosporin.
  • Es versteht sich für den Fachmann, dass die gewünschten therapeutisch wirksamen Dosierungen der Dauerfreigabe-Dosierungsform der Erfindung von verschiedenen Faktoren abhängig ist, einschließlich z. B.: a) der Bindungsaffinität des Bindungsproteins, das der Dosierungsform zugeordnet ist; b) dem Atmosphärendruck und der Dauer der Infusion; c) der Zeit, über die die verabreichte Dosierungsform an dem Zielort verbleibt; d) der Rate der therapeutischen Wirkstofffreigabe von der Partikeldosierungsform; e) der Natur des angewendeten therapeutischen Wirkstoffs; f) der Natur der Verletzung und/oder der gewünschten Therapie; und/oder g) der interzellulären und/oder intrazellulären Lokalisierung der Partikeldosierungsform. Erfahrene Praktiker, die zur Verabreichung von Medikamenten mit therapeutisch wirksamen Dosierungen geübt sind (z. B. durch Überwachung der therapeutischen Wirkstoffpegel und Beobachten der klinischen Effekte in Patienten) sind in der Lage, die optimale Dosierung für einen einzelnen Patienten auf der Basis der Erfahrung und professionellen Bewertung zu bestimmen.
  • Es versteht sich auch, dass die Auswahl eines therapeutischen Wirkstoffs, der seine Wirkungen intrazellulär ausübt, z. B. auf Ribosomen oder DNA-Metabolismus, die Dosierung und die Zeit beeinflusst, die erforderlich ist, eine therapeutisch wirksame Dosis zu erreichen, und dass dieser Prozess in vitro und in Tierstudien als Modell aufgestellt werden kann, wie etwa jene, die in den unten angegebenen Beispielen beschrieben sind, um den Konzentrationsbereich herauszufinden, über den die therapeutische Konjugatoder Dosierungsform verabreicht werden sollte, um ihre Wirkungen zu erreichen, eine Restenose infolge von Angioplastik zu verzögern, zu reduzieren oder zu verhindern. Z. B. sind therapeutische Konjugate, die mit alpha-, beta- oder gamme-Emitter bekannter spezifischer Aktivitäten radiomarkiert sind (z. B. Millicurie pro Millimol oder Milligramm Protein) nutzbar sind, um die therapeutisch wirksame Dosierung zu bestimmen, indem diese in Tierstudien und im Menschenversuch angewendet werden, mit quantitativer Bildgebung oder Autoradiographie histologischer Gewebeschnitte, um die Konzentration des therapeutischen Konjugats zu bestimmen, die für das therapeutische Protokoll erforderlich ist. Eine therapeutisch wirksame Dosis der therapeutischen Konjugat- oder Dosierungsform wird erreicht, wenn zumindest drei Bedingungen erfüllt sind: nämlich (1) die therapeutische Konjugat- oder Dosierungsform wird in den intimalen Schichten des traumatisch verletzten Gefäßes verteilt; (2) die therapeutische Konjugat- oder Dosierungsform wird innerhalb des gewünschten intrazellulären Kompartments der glatten Muskelzellen verteilt; d. h. im Kompartment, der zur Wirkung der therapeutischen Wirkstoffs erforderlich ist, oder der therapeutische Wirkstoff, der extrazellulär von der Dosierungsform freigegeben wird, wird innerhalb des relevanten intrazellulären Kompartments verteilt; und (3) der therapeutische Wirkstoff hemmt die gewünschte zelluläre Aktivität der glatten Gefäßmuskelzelle, z. B. Proliferation, Migration, vergrößertes Zellvolumen, Matrixsynthese, Zellkonzentration und dgl., wie oben beschrieben.
  • Optional kann ein zweites irrelevantes Glattes-Gefäßmuskelzell-Bindungsprotein einem Patienten verabreicht werden, bevor ihm eine therapeutische Konjugat- oder Dosierungsform verabreicht wird, um die nicht spezifische Bindung der therapeutischen Konjugat- oder Dosierungsform an Gewebe zu reduzieren. In einer bevorzugten Ausführung kann das irrelevante Bindungsprotein ein Antikörper sein, der nicht an Stellen in dem Patienten durch antigenspezifische Bindung bindet, sondern statt dessen in nicht spezifischer Weise bindet, z. B. durch Fc-Rezeptor-bindende reticuloendotheliale Zellen, Asialorezeptorbindung und durch Bindung an Ubiquitin-exprimierenden Zellen. Der irrelevante "Blocker" vermindert die nicht spezifische Bindung der therapeutischen Konjugat- oder Dosierungsform und reduziert somit Nebenwirkungen, z. B. Gewebetoxizität, die der Verwendung der therapeutischen Konjugat- oder Dosierungsform zugeordnet sind. Der irrelevante "Blocker" wird vorteilhaft von 5 Minuten bis 48 Stunden, am meisten bevorzugt von 15 Minuten bis eine Stunde, verabreicht, bevor die therapeutische Konjugat- oder Dosierungsform verabreicht wird, obwohl die Zeitdauer in Abhängigkeit von dem therapeutischen Konjugat und dem Weg oder der Methode der Injektion variieren kann. Repräsentative Beispiele irrelevanter "Blocker" enthalten Antikörper, die mit Humangewebe und Rezeptoren nicht reaktiv sind, oder zelluläre und Serumproteine, die aus tierischen Quellen hergestellt sind, sodass bei Tests herausgefunden wird, dass sie nicht in spezifischer Weise (z. B. mit Ka < 103 M–1) an Humanzellmembrantargets binden.
  • Es versteht sich, dass die Konjugate und Dosierungsformen der Erfindung nicht auf die Verwendung zur Therapie infolge von Angioplastik beschränkt sind; statt dessen wird die Nützlichkeit der therapeutischen Konjugate und Dosierungsformen durch ihre Fähigkeit vorgeschrieben, zelluläre Aktivitäten glatter Muskelzellen und Pericyten in der Gefäßwand zu hemmen. Somit enthalten andere Aspekte der Erfindung therapeutische Konjugate und Dosierungsformen und Protokolle, die in einer frühzeitigen therapeutischen Intervention nutzbar sind, um atherosklerotische Plaques und Bereiche von Gefäßwandhypertrophie und/oder -hyperplasie zu reduzieren, zu verzögern oder zu beseitigen (und sogar umzukehren). Therapeutische Konjugate und Dosierungsformen der Erfindung finden auch ihren Nutzen bei der frühzeitigen Intervention in präatherosklerotischen Zuständen, wobei sie z. B. in Patienten nutzbar sind, die ein hohes Risiko der Entwicklung von Atherosklerose und/oder Vorzeichen von Hypertension haben, resultierend von atherosklerotischen Veränderungen in Gefäßen oder Gefäßstenose aufgrund einer Hypertrophie der Gefäßwand.
  • Z. B. können in einer anderen Ausführung der Erfindung die therapeutischen Konjugate und Dosierungsformen in Situationen eingesetzt werden, in denen Angioplastik nicht ausreicht, um eine blockierte Arterie zu öffnen, wie etwa in solchen Situationen, die das Einsetzen eines intravaskuluären Stents erfordern. In dieser Ausführung der Erfindung wird ein metallischer, Kunststoff oder biologisch abbaubarer intravaskulärer Stent angewendet, der einen therapeutischen Wirkstoff aufweist. Nützliche therapeutische Wirkstoffe enthalten cytoskelettale Inhibitoren und Inhibitoren Glatter-Muskelzellproliferation. Ein bevorzugter Cytoskelettinhibiotor ist ein Cytochalasin, wie etwa Cytochalasin B oder ein Analog davon, das ein funktionelles Äquivalent ist. Ein anderer bevorzugter Cytoskelettinhibitor der Erfindung ist Taxol oder ein Taxolanalog, das ein funktionelles Äquivalent ist.
  • Der Stent umfasst bevorzugt eine biologisch abbaubare Beschichtung oder eine poröse oder permeable nicht biologisch abbaubare Beschichtung, die den therapeutischen Wirkstoff aufweist. Eine bevorzugtere Ausführung der Erfindung ist ein beschichteter Stent, worin die Beschichtung eine Dauerfreigabe-Dosierungsform des therapeutischen Wirkstoffs aufweist. In einer alternativen Ausführung kann der biologisch abbaubbare Stent auch mit dem therapeutischen Wirkstoff imprägniert sein, d. h. in der Stentmatrix.
  • Ein biologisch abbaubarer Stent mit dem darin imprägnierten therapeutischen Wirkstoff, der weiter mit einer biologisch abbaubaren Beschichtung oder mit einer porösen oder nicht biologisch abbaubaren Beschichtung beschichtet ist, die die Dauerfreigabe-Dosierungsform des therapeutischen Wirkstoffs dispergiert aufweist, ist auch eine Ausführung der Erfindung. Dieser Stent kann eine unterschiedliche Freigaberate des therapeutischen Wirkstoffs vorsehen, d. h. es kann eine schnellere Freigabe des therapeutischen Wirkstoffs von der Beschichtung vorliegen, gefolgt durch eine verzögerte Freigabe des therapeutischen Wirkstoffs, der in die Stentmatrix imprägniert ist, bei der Zersetzung der Stentmatrix. Bevorzugt ist in dieser Ausführung der Erfindung der therapeutische Wirkstoff in der Beschichtung ein Cytochalasin oder Taxol und ist am meisten bevorzugt Cytochalasin B oder Taxol oder Analoge davon, die funktionell äquivalent sind. Der intravaskuläre Stent sieht somit ein mechanisches Mittel vor, eine vergrößerte Lumenfläche eines Gefäßes vorzusehen, zusätzlich zu dem, das über die biologische Stentwirkung des cytoskelettalen Inhibitors vorgesehen wird, wie etwa Cytochalasin B oder Taxol, das darin lösbar eingebettet ist.
  • Ferner kann die Platzierung intravaskulärer Stents, die einen therapeutischen Wirkstoff aufweisen, der ein Inhibitor Glatter-Muskelzellproliferation ist, eine erhöhte Effizienz vorsehen, indem die Intimaproliferation reduziert oder verhindert wird. Daher ist auch ein Stent, der ferner ein Cytochalasin aufweist, um die Proliferation und Migration von Pericyten zu hemmen, die sich in glatten Muskelzellen umwandeln und zur Intimaverdickung beitragen können, auch eine Ausführung der Erfindung. Diese Hemmung der glatten Intima-Muskelzellen und des Stroma, das durch den glatten Muskel und die Pericyten erzeugt wird, kann eine schnellere und eine vollständigere Reendothelisierung nach der intraventionellen Platzierung des Gefäßstents erlauben. Die vergrößerte Reendothelisierungs- und Stabilisierungsrate der Gefäßwand nach der Stentplatzierung kann daher den Verlust der Lumenfläche und den verringerten Blutfluss reduzieren, der die primäre Ursache von Gefäßstentausfällen ist.
  • Bevorzugt haben, in der Praxis der Ausführung dieser Erfindung, die biologisch abbaubaren Mikropartikel, die den therapeutischen Wirkstoff enthalten, von etwa 1 bis 50 Mikron. Es ist weiter bevorzugt, dass die Mikropartikel über eine Dauer von 30 bis 120 Tagen biologisch abbaubar sind, bei Freigabe in die Tunica media und Intima einer Dauerzellkonzentration angenähert von etwa 0,05 μg/ml bis etwa 0,25 μg/ml Cytochalasin B in das Cytosol, um hierdurch die Diffusion therapeutischer Pegel von Cytochalasin B vorzusehen, ohne Toxizität für Zellen benachbart der Stent/Gefäßwandgrenze.
  • Es ist für den normalen Fachmann bekannt, dass periphere Gefäße, die für Gefäßimplantate in anderen peripheren Stellen oder in Coronararterien-Bypassimplantaten verwendet werden, häufig aufgrund postchirurgischer Stenose ausfallen. Da eine Cytochalasin B-Infusion die Gefäßlumenfläche in operativ verletzten Gefäßen aufgrund ihrer biologischen Stentaktivität beibehält, wird deren Verabreichung in diesem Prozess die Kontraktionsfähigkeit des Gefäßes verzögern, was zu einer größeren Lumenfläche führt. Ferner ist es ein Vorteil dieser Ausführung der vorliegenden Erfindung, dass das Verabreichen von Cytochalasin B auf diese Weise die Konstruktion oder einen Spasmus verhindert, der häufig auftritt, nachdem Gefäßimplantate an ihren beiden proximalen und distalen Stellen anastomisiert sind, was zu einer beeinträchtigten Funktion, wenn nicht dem totalen Ausfall, der Gefäßimplantate führen kann. Somit sollte die durch Cytochalasin B erzeugte Gefäßverstentung das Auftreten von Spasmen senken, die von einigen wenigen Tagen bis einigen Monaten nach der Implantierung auftreten können.
  • Die vorliegende Erfindung sieht auch eine kombinationstherapeutische Methode vor, die ein cytocidales therapeutisches Konjugat und einen cytostatischen therapeutischen Wirkstoff involviert. Das cytocidale Konjugat enthält einen Bindungspartner (wie etwa ein Protein oder ein Peptid), das in der Lage ist, spezifisch an glatte Gefäßmuskelzellen zu lokalisieren, sowie einen aktiven Wirkstoff, der in der Lage ist, diese Zellen abzutöten. Das cytocidale Konjugat wird, bevorzugt intravenös oder durch irgend einen anderen passenden Weg dafür, verabreicht, lokalisiert an die glatten Target-Muskelzellen und zerstört proliferierende Zellen, die in stenotischen oder restenotischen Ereignissen involviert sind. Diese zelluläre Zerstörung verursacht die Freigabe von mitogenen und anderen metabolischen Ereignissen, wobei diese Ereignisse allgemein wiederum zur Glatten-Gefäßmuskelzell-Proliferation führen. Die antiproliferativen oder antikontraktilen Dauerfreigabe-Dosierungsformen der vorliegenden Erfindung werden als Nächstes verabreicht, bevorzugt durch einen Infusionskatheter oder irgend eine passende Dosierungsform dafür. Die Dauerfreigabe-Dosierungsform verzögert die Glatte-Gefäßmuskelzell-Proliferation und/oder Migration und Kontraktion, um hierdurch den Lumendurchmesser beizubehalten. Diese Behandlungsmethode stellt eine biologische Arteromyectomie dar, die in stenotischen Gefäßen nutzbar sind, resultierend von Glatter-Gefäßmuskelzell-Hyperplasie und dgl.
  • Ein noch anderer Aspekt der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf therapeutische Modalitäten zum Beibehalten eines erweiterten luminalen Volumens nach Angioplastik oder anderer Gefäßverletzungen. Eine Ausführung dieses Aspekts der vorliegenden Erfindung involviert die Verabreichung eines therapeutischen Wirkstoffs, der in der Lage ist, die Konzentrationsfähigkeit glatter Gefäßmuskelzellen zu hemmen. Beispielhafte Wirkstoffe, die in der Praxis dieses Aspekts der vorliegenden Erfindung nutzbar sind, sind jene, die in der Lage sind, zu bewirken, dass eine traumatisierte Arterie ihren Gefäßtonus verliert, sodass der normale vaskuläre hydrostatische Druck (d. h. Blutdruck), das schlaffe Gefäß bis oder nahe seinem maximalen physiologischen Durchmesser erweitert. Der Verlust des Gefäßtonus kann durch Wirkstoffe hervorgerufen werden, die sich mit der Bildung oder Funktion kontraktiler Proteine stören (z. B. Actin, Myosin, Tropomyosin, Caldesmon, Calponin oder dgl.). Diese Störung kann direkt oder indirekt auftreten, durch z. B. Hemmung der Calciummodulation, Phosphorylierung oder anderer metabolischer Wege, die in der Kontraktion glatter Gefäßmuskelzellen impliziert sind.
  • Die Hemmung der zellulären Kontraktion (d. h. Verlust des Gefäßtonus) kann durch zwei Mechanismen wirken, um den Grad der vaskulären Stenose zu reduzieren. Erstens begrenzt die Hemmung der zellulären Kontraktion über eine verlängerte Zeitdauer die Anzahl glatter Muskelzellen, die von der Tunica media in die Intima wandern, deren Verdickung in luminaler Gefäßstenose resultiert. Zweitens bewirkt die Hemmung der zellulären Kontraktion, dass sich die glatte Muskelzellwand unter dem normalen hydrostatischen Gefäßdruck (d. h. Blutdruck) entspannt und erweitert. Therapeutische Wirkstoffe, wie etwa Cytochalasine, hemmen die glatte Muskelzellkontraktion, ohne die Proteinsynthese aufzuheben, die für traumatisierte, postangioplastische oder andere operativ oder erkrankungsbedingt beschädigte glatte Muskelzellen erforderlich sind, um sich selbst zu reparieren. Die Proteinsynthese ist für die glatten Muskelzellen auch notwendig, um die Matrix abzusondern, die das Lumen in einem Zustand nahe seinem maximalen systolischen Durchmesser fixiert oder zurückhält, wenn sich die Gefäßläsion stabilisiert (d. h. ein biologisch induzierter Stenteffekt).
  • Dieser biologische Stenteffekt resultiert nicht nur in einem erweiterten Gefäßlumenquerschnitt und einer erhöhten Blutflussrate durch das Gefäß, sondern reduziert auch signifikant das elastische Rückfedern infolge von Angioplastik. Das elastische Rückfedern ist ein akuter Verschluss des Gefäßes, der einem Vasospasmus oder einer frühen Relaxation der Muskelwand zugeordnet ist, aufgrund eines traumatischen Schocks, der vom Überstrecken des Gefäßes durch einen Ballonkatheter während der Angioplastik resultiert. Dieser Spasmus der Tunica media, der zur Verringerung des Lumenquerschnitts führt, kann innerhalb Stunden, Tagen oder Wochen nach der Ballondilatation auftreten, wenn die Wiederherstellung des Gefäßmuskelwandtonus stattfindet. Jüngste Beobachtungen während mikroskopischer Überprüfung von Atherectomie-Proben schlagen vor, dass das elastische Rückfedern in bis zu 25% der angioplastischen Prozeduren auftreten kann, die, auf der Basis des initialen Post-Behandlungs-Angiogramms als erfolgreich klassifiziert wurden. Weil die biologische Stentprozedur die Arterienwand nach der Ballonangioplastik entspannt, kann der Kliniker ein zu starkes Aufpumpen und seinen resultierenden traumatischen Schock als Mittel eliminieren, um den Gefäßspasmus oder das elastische Rückfedern zu verringern oder zu verzögern. Das Reduzieren oder Eliminieren des zu starken Aufpumpens senkt die Verletzung der Muskelwand des Gefäßes, um hierdurch die Determinanten der Glatten- Muskelzellproliferation in der Intima zu reduzieren und dadurch das Auftreten oder die Ernsthaftigkeit der Restenose zu reduzieren.
  • Das biologische Stent senkt auch das Auftreten von Thrombusbildung. Z. B. wurde in Femoralarterien von Schweinen, die mit Cytochalasin B behandelt wurden, das Auftreten muraler Mikrothrombi reduziert im Vergleich Ballontraumatisierten Arterien, die nicht mit dem therapeutischen Wirkstoff behandelt wurden. Dieses Phänomen erscheint als sekundärer Nutzen, der sich aus dem verstärkten Blutfluss durch das traumatisierte Gefäß ergeben könnte, wobei der Nutzen durch die Praxis der vorliegenden Erfindung erhalten wird.
  • Cytochalasine sind beispielhafte therapeutische Wirkstoffe, die in der Lage sind, einen biologischen Stenteffekt an glatten Gefäßmuskelzellen zu generieren. Man glaubt, dass Cytochalasine sowohl die Migration als auch Kontraktion der glatten Gefäßmuskelzellen durch Wechselwirkung mit Actin hemmen. Die Cytochalasine interagieren mit den Enden des filamentösen Actins, um die Längung der Aktinfilamente zu hemmen. Niedrige Dosen von Cytochalasinen (z. B. Cytochalasin B) unterbrechen auch die Mikrofilamentnetzwerke von Actin. In vitro Daten zeigen auch, dass, nachdem die glatten Gefäßmuskelzellen frei von Cytochalasin B geworden sind, Zellen ausreichend polymerisiertes Actin regenerieren, um die Migration innerhalb 24 Stunden wieder aufzunehmen. In vivo-Einschätzungen zeigen auf, dass glatte Gefäßmuskelzellen den Gefäßtonus innerhalb vom 2 bis 4 Tagen wiedergewinnen. Es ist während dieser Erholungsperiode, in der der Lumendurchmesserfixierungs- und biologische Stenteffekt auftritt.
  • Der therapeutische Wirkstoff kann targetisiert werden, wird jedoch bevorzugt direkt zu dem traumatisierten Gefäß nach der Angioplastik oder dem anderen traumatischen Ereignis verabreicht. Der biologische Stenteffekt, z. B. von Cytochalasin B, ist erreichbar mittels einer einzigen Infusion des therapeutischen Wirkstoffs in den traumatisierten Bereich der Gefäßwand mit einer Dosierungskonzentration im Bereich von 0,1 Mikrogramm/ml bis etwa 1,0 Mikrogramm/ml.
  • Die Hemmung der Glatten-Gefäßmuskelzell-Migration (von der Tunica media zur Intima) ist in dem gleichen Dosierungsbereich demonstriert worden (Beispiel 11); jedoch ist eine Dauereinwirkung des therapeutischen Wirkstoffs auf das Gefäß bevorzugt, um diese antimigratorischen Effekte zu maximieren. Wenn die glatten Gefäßmuskelzellen nicht in die Intima wandern können, können sie dort nicht proliferieren. Sollten glatten Gefäßmuskelzellen in die Intima wandern, hemmt eine anschließend verabreichte post-proliferative Dauerfreigabe-Dosierungsform die intimate Proliferation. Im Ergebnis kann die Dauerfreigabe-Dosierungsform der vorliegenden Erfindung, die ein Cytochalasin oder einen anderen proliferativen therapeutischen Wirkstoff enthält, in Kombination mit einem Cytochalasin-freien therapeutischen Wirkstoff verabreicht werden. Auf diese Weise kann der biologische Stenteffekt sowie ein antiproliferativer oder antimigratorischer Effekt in einem einzigen Verabreichungsprotokollerziell werden.
  • Wirkstoffe, die in den Protokollen der vorliegenden Erfindung anwendbar sind, sind z. B. gemäß den folgenden Prozeduren identifizierbar. Ein potenzieller Wirkstoff für eine wirkstofftreie (d. h. nicht targetisierte bzw. ungezielte) Verabreichung zeigt ein oder mehrere der folgenden Charakteristika:
    • (i) hält ein erweitertes Lumenvolumen nach Angioplastik (z. B. PTCA, perkutane transluminale Angioplastik (PTA) oder dgl.) oder einem anderen Trauma, einschließlich Atherectomie (z. B. Rotoblater, Laser und dgl.); Coronararterien-Bypassbbehandlungen oder dgl; oder resultierend von einer Gefäßerkrankung (z. B. Arterosklerose, sekundäre Augenerkrankungen auf Gefäßstenose oder Atropie, stenotische cerebrate Gefäßerkrankungen oder dgl.);
    • (ii) die anfängliche Zunahme des Gefäßquerschnitts, durch den Wirkstoff erleichtert, führt nicht zu einer oder betonten chronischen Stenose des Lumens;
    • (iii) die Targetzellkonzentration oder Migration; und
    • (iv) ist cytostatisch.
  • Bevorzugt hat ein hierin angewendeter therapeutischer Wirkstoff alle vier Eigenschaften; jedoch sind für die Praxis der vorliegenden Erfindung die erste und die dritte wichtiger als die zweite und die vierte. Z. B. wurde Cytochalasin B ausgewertet, um die Eignung für die Verwendung in therapeutischen wirkstofffreien Protokollen zu bestimmen. Der biologische Stenteffekt von Cytochalasin B ist erreichbar mittels einer einzigen Infusion des therapeutischen Wirkstoffs in den traumatisierten Bereich der Gefäßwand mit einer Dosiskonzentration im Bereich von etwa 0,1 Mikrogramm/ml bis etwa 1,0 Mikrogramm/ml. Ein Wirkstoff, der für die Dauerfreigabeausführung der vorliegenden Erfindung nutzbar ist, zeigt ein oder mehrere der folgenden Eigenschaften:
    • (i) hält ein erweitertes Lumenvolumen nach Angioplastik (z. B. PTCA, perkutaner transluminaler Angioplastik (PTA) oder dgl.) oder einem anderen Trauma, einschließlich Atherectomie (z. B. Rotoblater, Laser und dgl.); Coronararterien-Bypassbbehandlungen oder dgl; oder resultierend von einer Gefäßerkrankung (z. B. Arterosklerose, sekundäre Augenerkrankungen auf Gefäßstenose oder Atropie, stenotische cerebrale Gefäßerkrankungen oder dgl.);
    • (ii) hemmt die Targetzellproliferation (z. B. 5 Minuten und 24 Stunden nach der Exposition des Wirkstoffs, in vitro glatte Gefäßmuskelgewebekulturen demonstrieren einen Hemmpegel von 3H-Thymidinaufnahme und zeigen bevorzugt eine relativ geringe Hemmung der 3H-Leucinaufnahme);
    • (iii) produziert bei einer Dosis, die zur Hemmung der DNA-Synthese ausreicht, nur milde bis mäßige (z. B. Grad 2 oder 3 in den unten beschriebenen Assays) morphologische cytotoxische Effekte;
    • (iv) hemmt die Targetzellkonzentration; und
    • (v) ist cytostatisch.
  • Bei der Identifikation eines therapeutischen Wirkstoffs, der ein oder mehrere der vorstehenden Attribute aufzeigt, wird der Wirkstoff einem zweiten Testprotokoll unterzogen, der beinhaltet, glatte Gefäßmuskelzellen dem therapeutischen Wirkstoff länger auszusetzen.
  • Ein Wirkstoff, der in den Dauerfreigabeausführungen der vorliegenden Erfindung nutzbar ist, zeigt die folgenden Eigenschaften:
    • (i) bei langfristiger (z. B. 5 Tage) Exposition erzeugt der Wirkstoff den gleichen oder ähnlichen in vitro Effekt auf eine DNA-Synthese und Proteinsynthese der Glatten-Gefäßmuskel-Gewebekultur, wie sie oben für die 5 Minuten und 24 Stunden Exposition beschrieben wurde; und
    • (ii) bei einer effektiven Dosis in dem langzeitigen in vitro Assay für DNA-Synthesehemmung zeigt der Wirkstoff milde bis mäßige morphologische cytotoxische Effekte über einen längere Dauer (z. B. 10 Tage).
  • Eine weitere Auswertung potenzieller antiproliferativer Wirkstoffe innerhalb der vorliegenden Erfindung erfolgt in einem in vivo Ballon-traumatisierten Schweine-Femoralarterien-Modell. Bevorzugt demonstrieren diese Wirkstoffe eine 50%ige oder stärkere Hemmung der Zellprollferation in den Tunica media glatten Gefäßmuskelzellen, gemäß Indikation durch eine 1-stündige "BRDU Flash-Markierung" vor dem Sammeln des Gewebes und der histologischen Auswertung. Wenn ein Wirkstoff für eine Zeitdauer wirksam ist, die ausreicht, um eine intimate Glatte-Gefäßmuskelproliferation von 50% oder größer bei einer einzigen Einwirkung zu hemmen, ist es ein Wirkstoff innehralb der vorliegenden Erfindung, der keine Verabreichung in einer Dauerfreigabe-Dosierungsform erfordert. Wirkstoffe mit einer kürzeren Aktivitätsdauer werden für die Dauerfreigabe ausgewertet, wenn die systemische Toxizität und der potenzielle therapeutische Index scheinbar eine intravenöse Verabreichung gestatten, um die 50%ige Hemmung zu erreichen, oder wenn der Wirkstoff für die lokale Verabreichung zu den glatten Gefäßmuskelzellen mit Dauerfreigabe bei einer effektiven antiproliferativen Dosis geeignet ist. Dauerfreigabewirkstoffe werden in einer Dauerfreigabe-Dosierungsform für Dosisoptimierungs- und -wirksamkeitsstudien ausgewertet. Bevorzugt senken antiproliferative Wirkstoffe, die in der Praxis der vorliegenden Erfindung nutzbar sind, die Gefäßstenose um etwa 50% in Ballon-traumatisierten Schweine-Femoralarterien und, noch bevorzugter, senken die Gefäßstenose auf ein ähnliches Ausmaß in Schweine-Coronararterien. Diese Wirkstoffe sind dann in klinischen Versuchen am Menschen auswertbar.
  • Die Zellproliferation (d. h. DNA-Synthese)-Hemmung ist die primäre Eigenschaft für die Dauerfreigabe von Wirkstoffen. Z. B. hemmt Staurosporin eine Differenz zwischen 3H-Leucin und 3H-Thymidin-Aufnahme derart, dass es bei verabreichten Dosierungen cytostatisch ist. Längerfristige Toxizitätsstudien zeigten nicht an, dass eine verlängerte Exposition dem therapeutischen Wirkstoff die Targetzellen nachteilig beeinflussen würde. Zusätzlich zeigte BRDU-Pulsing an, dass Staurosporin die Targetzellproliferation hemmt. Jedoch kann alternativ jede geeignete Methode angewendet werden, um die Fähigkeit auszuwerten, die Zellproliferation zu hemmen. Demzufolge ist Staurosporin wirksam darin, ein expandiertes Lumenvolumen zu erhalten.
  • Die Erfindung wird in Bezug auf die folgenden spezifischen Beispiele besser verständlich.
  • BEISPIEL 1
  • Bindung an glatte Gefäßmuskelzellen in der Blutgefäßwand in vivo
  • 1 zeigt die Bindung von NR-AN-01 (ein murines IgG2b Mab) an glatten Gefäßmuskelzellen in der Gefäßwand einer Arterie in einem 24 Jahre alten männlichen Patienten, 4 Tage nach der i.v. Verabreichung von NR-AN-01. 1 ist eine Mikrophotographie eines histologischen Schnitts durch den medialen Bereich einer Arterienwand des Patienten nach NR-AN-01 Verabreichung, wobei der Schnitt ex vivo mit HRP-konjugiertem Ziegen-anti-Maus-IgG reagiert wurde. Die Reaktion des HRP-Konjugats mit NR-AN-01 MAb wurde sichtbar gemacht durch Zugabe von 4-Chlor-1-naphthol oder 3,3'-Diaminobenzidintetrahydrochlorid als Peroxidasesubstrat (Chromogen). Das Reaktionsprodukt des Substrats bildet ein unlösliches violettes oder dunkelbraunes Präzipitat am Reaktionsort (bei #2 gezeigt, 1). Es wurde eine Gegenfärbung angewendet, um collagenes extrazelluläres Matrixmaterial (bei #2 gezeigt, 1) oder Zellkerne (#1, 1) sichtbar zu machen.
  • Glatte Muskelzellen werden unter mikroskopischer Untersuchung als violett gefärbte Zellen sichtbar gemacht. Diese Mikrophotographie demonstriert die Fähigkeit von MAb, in vivo spezifisch an humanen glatten Gefäßmuskel zu binden, und wird durch die Zellen internalisiert und verbleibt für verlängerte Dauern in den Zellen.
  • BEISPIEL 2
  • Therapeutische Konjugate, die Trichothecen-therapeutische Wirkstoffe enthalten
  • Konjugate von NR-AN-01 und Roridin A wurden durch chemische Kupplung eines Hemisuccinatderivats des Trichothecencytotoxins (wie unten beschrieben) an einen monoklonalen Antikörper namens NR-AN-01 gebaut. Es wurden zwei Konjugate hergestellt, wobei einer an die Roridin A 2'-Position gekoppelt wurde und einer an die 13'-Position. In dieser Synthese wurden zwei Schemata angewendet, wie in 2 und 3 dargestellt. Das Konjugat wurde dann von unreagiertem Roridin A durch PD-10 SEPHAROSE® Säulenchromatographie (Pharmacia; Piscataway, NJ) gereinigt, durch Größenausschluss-Hochdruckflüssigkeitschromatographie analysiert, und die Säulenfraktionen wurden durch SDS-PAGE und isoelektrische Fokussierung (IEF) charakterisiert, wie unten beschrieben.
  • 2 zeigt schematisch das erste Reaktionsschema für die Synthese von Roridin A-Hemisuccinylsuccinimidat (RA-HS-NHS) durch einen zweistufigen Prozess mit den Reagenzien: Succinanhydrid, Triethylamin (NEt3) und Dimethylaminopyridin (DMAP) vorliegend in Dichlormethan (CH2Cl2) bei Raumtemperatur (RT); und N-Hydroxysuccinimid (NHS) und Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) Reagenzien, ebenfalls in CH2Cl2 bei RT.
  • 3 zeigt schematisch das zweite Reaktionsschema für die Synthese von Roridin A-Hemisuccinylsuccinimidat (RA-HS-NHS) durch einen fünfstufigen Prozess mit den Reagenzien: t-Butyldimethylsilylchlorid (TBMS-Cl) und Imidazol in Dimethylformamid (DMF) bei Raumtemperatur (RT); Acetanhydrid, Triethylamin (TEA) und Diethylaminopyridin in Dichlormethan (CH2Cl2) bei RT; Succinanhydrid, Triethylamin (TEA) und Dimethylaminopyridin (DMAP) in (CH2Cl2) bei RT; und N-Hydroxysuccinimid (NHS) und Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) Wirkstoffe.
  • Synthese von 2'-Roridin-A-Hemisuccinsäure (2):
  • Zu 0,5 g (0,94 mmol) Roridin A wurde 15 ml Dichlormethan hinzugefügt. Zu dieser Lösung wurde unter Rühren 0,104 g (1,04 mmol) Succinanhydrid hinzugefügt. Zu diesem Reaktionsgemisch wurde 0,2 ml Triethylamin in 5 ml Dichlormethan hinzugefügt. Zu dem homogenen Reaktionsgemisch wurde eine katalytische Menge von Dimethylaminopyridin hinzugefügt und bei Raumtemperatur über 15 Stunden gerührt. Dem Abschluss der Reaktion folgte eine Dünnschichtchromatographie (CH2Cl2 : CH3OH = 9,7 : 0,3 mit wenigen Tropfen Essigsäure). Am Ende der Reaktion wurden 0,3 ml Eisessigsäure hinzugefügt, und das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck entfernt. Der getrocknete rohe Rest wurde zwischen Wasser und Methylchlorid aufgeteilt. Die kombinierten Methylenchloridextrakte (3 × 50 ml) wurden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, wobei das Lösungsmittel unter Vakuum entfernt wurde, und getrocknet, zum Erhalt von 0,575 g (96%) eines Rohgemisches dreier Verbindungen. Die präparative C18 HPLC-Separation des Rohgemisches in 50%igem Acrylonitrilwasser mit 2%iger Essigsäure ergab 0,36 g (60%) von 2 als weißem Feststoff.
  • Synthese von Succinimidyl-2'-Roridin A-Hemisuccinat (3):
  • Zu 0,3 g (0,476 mmol) 2'-Roridin A-Hemisuccinsäure in 30 ml Dichlormethan wurden 0,055 g (0,478 mmol) N-Hydroxysuccinimid hinzugefügt. Zu dem klaren Reaktionsgemisch wurden 0,108 g (0,524 mmol) Dicyclohexylcarbodümicd hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur für 6 Stunden gerührt. Dem Abschluss der Reaktion folgte TLC (CH2Cl2 : CH3OH = 9,7 : 0,3 mit wenigen Tropfen Essigsäure) als Entwicklungs-Lösungsmittel. Einige wenige Tropfen von Eisessigsäure wurden zu dem Reaktionsgemisch hinzugefügt, und das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck entfernt. Zu dem getrockneten Rest wurde Dichlormethan hinzugefügt, und das präzipitierte DCU wurde gefiltert. Lösungsmittel von dem Filtrat wurde unter reduziertem Druck beseitigt, um einen weißen Feststoff zu erhalten. Aus dem Rohprodukt wurde 0,208 g (60%) von 3 durch präparative HPLC in 50%igem Acetonitril mit 2% Essigsäure als mobiler Phase gereinigt.
  • Synthese von 13'-t-Butyldimethylsilyl-Roridin A (4):
  • Zu 72,3 mg (0,136 mmol) Roridin A in 0,5 ml Dimethylformamidlösung wurden 0,055 g (0,367 mmol) t-Butyldimethylsilylchlorid und 0,025 g (0,368 mmol) Imidazol hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur für 15 Stunden gerührt. Dem Abschluss der Reaktion folgte eine Silikageldünnschichtchromatographie mittels 1%iger MeOH-CHCl3 als Entwicklungs-Lösungsmittel. Das Lösungsmittel aus dem Reaktionsgemisch wurde in Vakuum entfernt und getrocknet. Das Rohprodukt wurde zwischen Wasser und Methylchlorid aufgeteilt. Lösungsmittel aus den kombinierten Methylenchloridextrakten wurde unter reduziertem Druck entfernt und getrocknet. Das Rohprodukt wurde durch Flashchromatographie mittels EtOAc : Hexan (1 : 3) als Eluierungslösungsmittel gereinigt. Lösungsmittel aus den Eluanten wurde unter reduziertem Druck beseitigt, um 0,66 g (75%) von 4 als Feststoff zu gewinnen.
  • Synthese von 13'-t-Butyldimethylsilyl-2'-Acetyl-Roridin A (5):
  • Zu 0,1 g (0,155 mmol) von 13'-t-Butyldimethylsilyl-Roridin A in 10 ml Dichlormethan wurden 0,3 ml Acetanhydrid, 0,2 ml Triethylamin und einige Kristalle Dimethylaminopyridin hinzugefügt und bei Raumtemperatur für 2 Stunden aufbewahrt. Dem Abschluss der Reaktion folgte TLC in 1%gem Methanolmethylenchlorid als Entwicklungs-Lösungsmittel. Das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck entfernt und durch eine Silikagelsäule mittels 1 % Methanolchloroform als Eluierungslösungsmittel gereinigt. Das Lösungsmittel von den Eluanten wurde unter Vakuum beseitigt, um 0,085 g (80 %) 5 als Feststoff zu gewinnen.
  • Synthese von 2'-Acetyl-Roridin A (6):
  • Zu 0,05 g (0,073 mmol) 2'-Acetyl-13'-t-Butyldimethylsilyl-Roridin A in 5 ml Tetrahydrofuran wurden 0,3 ml von 1 M Tetrabutylammoniumfluoridlösung in THF hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerührt. Dem Abschluss der Reaktion folgte eine Silikagel-Dünnschichtchromatographie mittels 1%igem MeOH-CHCl3 als dem Entwicklungs-Lösungsmittel. Das Lösungsmittel aus dem Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck entfernt und getrocknet. Das Rohprodukt wurde auf einer Silikagelsäule mittels 1%igem CH3OH-CHCl3 als Eluierungslösungsmittel gereinigt. Lösungsmittel aus den kombinierten Eluanten wurde unter Vakuum beseitigt, um 0,020 g (48%) von 6 als Feststoff zu gewinnen.
  • Synthese von 2'-Acetyl-13-Hemisuccinyl-Roridin A (7):
  • Zu 0,05 g (0,087 mmol) von 2'-Acetyl-Roridin A in 1 ml Dichlormethan wurden 0,025 g (0,25 mmol) Succinanhydrid und 35 ml von Triethylamin hinzugefügt. Einige wenige Kristalle von Dimethylaminopyridin wurden als Katalysator hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur für 24 Stunden gerührt. Dem Abschluss der Reaktion folgte eine Dünnschichtchromatographie mittels 5%igem McOH-CH2Cl2 als Entwicklungs-Lösungsmittel. Am Ende der Reaktion wurden 30 ml Eisessigsäure hinzugefügt. Lösungsmittel von dem Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck entfernt und getrocknet. Das Rohprodukt wurde zwischen Wasser und Ethylacetat aufgeteilt. Lösungsmittel von den kombinierten Ethylacetatfraktionen wurde unter reduziertem Druck entfernt. Das Rohprodukt wurde gereinigt, indem es durch eine Silikagelsäule geschickt wurde, um 0,039 g (66%) von 7 als weißem Feststoff zu gewinnen.
  • Synthese von Succinimidyl-2'-Acetyl-13'-Roridin A-Hemisuccinat(8):
  • Zu 0,036 g (0,0050 mmol) von 2'-Acetyl-13'-Roridin A-Hemisuccinsäure in 2 ml Dichlormethan wurden 0,009 g (0,09 mmol) N-Hydroxysuccinimid hinzugefügt. Zu einer gerührten Lösung wurde 0,012 g (0,059 mmol) Dicyclohexylcarbodiimid hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur für 8 Stunden gerührt. Dem Abschluss der Reaktion folgte eine Silikageldünnschichtchromatographie mittels 5%igem MeOH-CH2Cl2 als Entwicklungs-Lösungsmittel. Einige wenige Tropfen von Eisessigsäure wurden zu dem Reaktionsgemisch hinzugefügt. Lösungsmittel von dem Reaktionsgemisch wurde unter reduziertem Druck entfernt und getrocknet. Das Rohprodukt wurde auf einer Silikagelsäule mittels 5% MeOH-CH2Cl2 als Eluierungslösungsmittel gereinigt. Das Lösungsmittel von den kombinierten Eluanten wurde unter Vakuum beseitigt, um 0,025 g (61%) von 8 als weißem Feststoff zu gewinnen.
  • Konjugation von Succinimidyl-2'-Roridin A-Hemisuccinat (3) und Succinimidyl-2'-acetyl-13'-Roridin A-Hemisuccinat (8) mit NR-AN-01 Gesamt-Antikörper (MAb):
  • Konjugationsreaktionen wurden bei pH 8,0 in Boratpuffer in der Gegenwart von 25% Dimethylsulfoxid (DMSO)-Lösungsmittel bei Raumtemperatur bei leichtem Mischen für 45 Minuten vor der Reinigung durch Gelpermeationschromatographie durchgeführt. Die molaren Trichothecen-Medikamentenprecursor zu Antikörperangebote betrugen 25 : 1 und 40 : 1 für die 2'- bzw. 13'-Roridin A-Analoge (3 und 8). Die Antikörperkonzentration war 0,9 bis 1,0 mg/ml während der Konjugationsreaktion.
  • Eine typische 2'-Analogen (3)-Reaktion mit 25 mg Antikörper war wie folgt: Zu 4,7 ml von 5,3 mg Ab/ml in Phosphat-gepufferter Salzlösung (d. h. PBS; 150 mM NaCl; 6,7 mM Phosphat; pH 7,3) wurden 10 ml PBS und 5 ml Boratpuffer (0,5 M, pH 8,0) hinzugefügt. Unter leichtem Rühren wurden dem Reaktionsgemisch 6,3 ml DMSO, das 1,37 mg Succinimidyl-2'-Roridin A-Hemisuccinat (3) enthielt, dann tropfenweise über eine 15 Sekundendauer hinzugefügt.
  • Reinigung:
  • Zur Reinigung wurden 1 ml Reaktionsaliquots auf Pharmacia PC-10 Sepharose® Säulen gegeben, äquilibriert in PBS. Das eluierte Konjugat wurde in 2,4 bis 4,8 ml Fraktionen gesammelt. Die PD-10 gereinigten Konjugataliquots wurden dann gepoolt und auf einem Amicon PM-10DiAflo® Konzentrator auf 1,5 bis 2,0 mg Ab/ml konzentriert; steril durch eine 0,2 μ Gelman Acarodisc® gefiltert und in sterile Glasfläschchen in 5 ml Volumen abgefüllt.
  • Das 2'-Konjugat wurde in flüssigem Stickstoff schnellgefroren und dann bis zum Gebrauch bei –70°C aufbewahrt. Das 13'-Rorodin A NR-AN-01-Konjugat wurde geforen oder gekühlt aufbewahrt (d. h. bei 5 bis 10°C).
  • Charakterisierung der Konjugate:
  • Die Proteinkonzentration wurde durch BCA-Assay mittels der Kupferreaktionsmethode bestimmt (Pierce Chemical Corp.).
  • Die Abschätzung des Grads der Antikörperderivatisierung wurde durchgeführt durch zuerst Hydrolysieren eines Aliquots des Konjugats in 0,2 M Carbonat, pH 10,3 für 4 Stunden (bei Raumtemperatur für 2'-Konjugat oder bei 37°C für das 13'-Konjugat), gefolgt durch Filtration durch eine PM-30 Membran. Das Filtrat wurde dann für Roridin A auf C-18 reverse Phase HPLC untersucht, mittels einer mobilen Phase eines 50 : 48 : 2 Verhältnisses von CH3CN : H2O : HOAC. Es wurde ein Korrekturfaktor von 1,32 angewendet, um eine parallele makrozyklische Ringzersetzung zu korrigieren, die während der Hydrolyse des 13'-Konjugats polare Produkte ergibt.
  • Es wurde auch eine Größenausschluss-Chromatographie auf DuPont Zorbax® HPLC und isoelektrischer Fokussierung mittels Serva® Gelplatten (pH 3 bis 10) durchgeführt. Durch HPLC wurde keine Indikation einer Aggregation beobachtet.
  • Immunoassay von Roridin A-Antikörperkonjugaten erfolgt durch entweder kompetitive ELISA mittels biotinyliertem Ab mit Streptavidin/Peroxidase-Detektion oder durch kompetitiven Zellbindungsassay mittels 125I-arkiertem Antikörper. Altenrativ wurde die Immunoreaktivität unter Bedingungen der Antigensättigung in einem Zellbindungsassay gemessen, worin der Antikörper zuerst mit I-125 durch die Chloramin-T-Methode spurenmarkiert wurde und dann anschließend mit 2'- und 13'-Roridin A-Precursorn derivatisiert wurde.
  • Die Strukturformel des Trichothecens ist unten gezeigt:
    Figure 00580001
  • BEISPIEL 3
  • Bindungskinetik glatter Muskelzellen
  • Zur Verabreichung durch einen i.v. Katheter ist es erwünscht, dass die therapeutischen Konjugate der Erfindung in weniger als 3 bis 5 Minuten verabreicht werden, sodass der Blutfluss in dem Patienten wieder hergestellt werden kann. Daher wurden Studien durchgeführt, um die Bindungskinetiken des Glatten-Muskel-Bindungsproteins mit einem Ka von > 109 Liter/mol zu bestimmen. Weil menschliche glatte Gefäßmuskelzellen in der Kultur langsam wachsen und sich herausstellte, dass glatte Muskelzellen des Pavians den humanen CSPG-Zelloberflächenmarker exprimieren, wurden glatte Arterienmuskelzellen vom Pavian und menschliche A375 M/M (Melanom: ATCC #CRL 1619) Zellen, die den CSPG-Oberflächenmarker trugen, in vielen der Studien verwendet, die in den Beispielen unten beschrieben sind.
  • Für die Bindungskinetikstudien wurden A375 M/M- und BO54-Zellen in sterilen 96 Well-Mikrotiterplatten mit 2500 Zellen/Well angesetzt. Die Platten wurden in Aluminiumfolie eingewickelt und bei 37°C über Nacht in einer feuchten Atmosphäre von 5% CO2/95% Luft inkubiert. Nach angenähert 18 Stunden wurden die Inkubationsplatten entfernt, und die Zellen wurden mit 0,05% Glutaraldehyd für 5 Minuten fixiert, um einen Membranturnover zu verhindern. Nach dem Fixieren wurden die Platten im Überschuss mit PBS, das 0,5% Tween-20® enthielt, gewaschen. Serielle Zweifachverdünnungen eines NR-AN-01 therapeutischen Konjugats, das Roridin A enthielt, wurden mit Proteinkonzentrationen von 10 mg/ml bis 20 ng/ml hergestellt, und jede Lösung wurde in zwei Wells aliquotisiert. Die Platten wurden bei 4°C mit dem NR-AN-01 für 5, 15, 30 und 60 Minuten inkubiert, wonach das ungebundene Protein durch Absaugen entfernt wurde, und es wurde zu jedem Well 100 ml CS-Puffer hinzugefügt (55% Hühnerserum/0,5% Tween-20® in PBS). CS-Puffer wurde beseitigt, und das NR-AN-01 therapeutische Konjugat, gebunden an die Zellen, wurde sichtbar gemacht durch Hinzufügen von 100 ml HRP-konjugiertem Ziegen-anti-Maus-IgG (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) zu jedem Well; Inkubieren bei 4°C für eine Stunde; Waschen mit PBS/0,055% Tween®, um ungebundenes Ziegen-IgG zu beseitigen; und Hinzufügen von 2,2'-Azino-bis (3-ethylbenzthiazol-6-sulfonsäure (ABTS) chromogenes Substrat (d. h. für HRP). Nach Inkubation für 30 Minuten wurde die an die Zelle gebundene Menge von NR-AN-01 quantifiziert, durch Messung der Absorption bei 415 nm und 490 nm mittels ELISA Plattenlesegeräts, ausgestattet für die Datenerfassung mit einem Compaq Computer.
  • 4A zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, worin A375 M/M marker-positive Zellen bei 4°C (d. h. um Membranturnover zu verhindern) für 5 Minuten (offene Quadrate, 4A), 15 Minuten (geschlossene Rauten, 4A), 30 Minuten (geschlossene Quadrate, 4A) oder 60 Minuten (offene Rauten, 4A) mit unterschiedlichen Konzentrationen von NR-AN-01 (NRAND01 μg/ml) gehalten wurden. Die Bindung des NR-AN-01 MAb an die A375-Zellen wurde quantifiziert durch Waschen, um ungebundenen Antikörper zu beseitigen, Hinzufügen von HRP-konjugiertem Ziegen-anti-Maus-IgG zur Reaktion mit dem zellgebundenen MAb, Waschen, um ungebundenen sekundären Ziegen-Antikörper zu beseitigen, und Hinzufügen von 2,2'-Azinobis(3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonsäure) (ABTS) Substrat für Peroxidase. Die Farbentwicklung wurde nach 30 Minuten sowohl bei 415 nm als auch 490 nm überwacht (ABS415.490).
  • 4B zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, die in ähnlicher Weise durchgeführt wurden, wie oben in Bezug auf 4A beschrieben wurde, jedoch mittels BO54 marker-positiven glatten Muskelzellen, d. h. anstatt der A375 m/m Zellen.
  • Die in 4A und 4B dargestellten Ergebnisse zeigen eine signifikante Bindung von NR-AN-01 an A375 und BO54 Zellen innerhalb 5 Minuten bei 4°C auch bei der geringsten Dosis von 20 nm/ml.
  • BEISPIEL 4
  • Wirkungen von Roridin A und RA-NR-AN-01 Konjugaten
  • Die Wirkungen von Roridin A (RA) und RA-NR-AN-01 Konjugaten auf die zelluläre Proteinsynthese (d. h. durch 3H-Leucinaufnahme) und die metabolische Aktivität (d. h. durch mitochondrialen MTT-Assay) wurden in den Experimenten geprüft, die unten in BEISPIEL 5 und BEISPIEL 6 im Detail angegeben sind. Die Studien in BEISPIEL 4 enthalten Experimente zur Bestimmung der Wirkungen der langdauernden (d. h. 24-stündigen) Behandlung mit den Wirkstoffen. Die Studien in BEISPIEL 5 enthalten Experimente zur Bestimmung der Effekte einer "Puls" (d. h. 5-minütigen) Behandlung der Zellen. In beiden Studien wurde die zelluläre Spezifität der Wirkung durch Aufnahme von "Target"-Zellen (d. h. Zellen, die den CSPG "Marker" tragen) und Nicht-Targetzellen ausgewertet. Zu Vergleichszwecken wurde auch freies RA (d. h. ungekoppeltes) in den Studien eingebunden. Die Effekte auf die zelluläre Proteinsynthese oder metabolische Aktivität wurde entweder unmittelbar nach der Behandlung ausgewertet, oder es wurde eine "Erholungsdauer" zugelassen (d. h. einschließlich der Inkubation der Zellen über Nacht bei 37°C), um die langfristigen Effekte der Wirkstoffe auf die Zellpopulationen zu bestimmen.
  • Metabolische Effekte nach 24-stündiger Exposition:
  • Während es bekannt ist, dass monoklonale Antikörper-Medikamentenkonjugate einen Spezifitätsgrad für Zellen haben können, die Markerantigene tragen, wenn in vivo angewendet, hat es sich herausgestellt, dass es in vielen Systemen schwieriger ist, die in vitro Spezifität der Wirkung zu demonstrieren, insbesondere mit Verbindungen, die lipophil sind. Daher wurden die vorliegenden Experimente durchgeführt, worin die inhibitorischen Effekte des NR-AN-01 Roridin A-Konjugats auf Target- und Nichttargetzellen über 24 Stunden getestet wurden. Die Ergebnisse mit RA-NR-AN-01 wurden mit dem Effekt von freiem Roridin A über die gleiche 24-Stundendauer verglichen. Ein modifiziertes Methyltetrazoliumblau (MTT)-Assay wurde mit 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid (Sigma) genutzt, um die zelluläre metabolische Aktivität zu bestimmen. Dieser Assay ist dazu gedacht, die zelluläre mitochondriale Dehydrogenaseaktivität zu messen. Für einige dieser Studien wurden M14 (Melanom) und BO54 (glatter Muskel)-Zelllinien als marker-positive Targetzellen verwendet, und es wurden HT29-Zellen (Colonkarzinom; ATCC#HTB38) als Nichttargetspezifitätskontrolle verwendet. In anderen Studien wurde A375 als marker-positive Zelle verwendet. Die HT29- und M14-Zellen wurden in 96-Well Mikrotiterplatten mit einer Konzentration von 5,0 × 103 Zellen/Well angesetzt, und die B054-Zellen wurden mit 2,5 × 103 Zellen/Well angesetzt. Serielle Zweifachverdünnungen von freiem Roridin A und 2'RA-HS-NR-AN-01 (d. h. Roridin A, gekopelt durch Hemisuccinat (HS)-Kopplungsmittel and er 2'-Position an NR-AN-01) wurden in DMEM über einen Bereich von Proteinkonzentrationen von 20 mg/ml bis 40 pg/ml hergestellt. Es wurden Testwirkstoffe (doppelt) zu Mikrotiterwells (100 ml/Wlell) hinzufügt, und die Platten wurden in Aluminiumfolie eingewickelt und bei 37°C in angefeuchteter Atmosphäre, bestehend auf 5% CO2/95% Luft, für 24 Stunden inkubiert. Nach 24 Stunden wurde das Medium entfernt (durch Absaugen), wurde frisches DMEM hinzugefügt (100 ml/Well), und die Zellen wurden umgedreht, um für eine zusätzliche über Nacht (d. h. 16–18 Stunden) "Erholungsdauer" zu inkubieren. Am Ende der "Erholungsdauer" wurde die zelluläre metabolische Aktivität bestimmt, indem zu jedem Well 20 ml einer 5 mg/ml MTT-Lösung hinzugegeben wurde. Die Platten wurden abgedeckt und bei 37°C für 4 Stunden inkubiert, und dann wurde die Reaktion entwickelt, indem 100 ml/Well 10%iger SDS/0,1 N Hcl hinzugefügt wurde. Das dunkelblaue, in Lösung gebrachte Formazanreaktionsprodukt wurde bei Raumtemperatur nach 16–18 Stunden entwickelt und mittels eines ELISA Mikrotiterplattenlesegeräts bei einer Absorption von 570 nm quantifiziert.
  • 5A zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, worin BO54 marker-positve glatte Muskelzellen mit unterschiedlichen Konzentrationen von RA-NR-AN-01 (NRAN01-RA; offene Quadrate, 5A) oder freiem Roridin A (freies RA; geschlossene Rauten; 5A) für eine Dauer von 24 Stunden inkubiert wurden, gewaschen wurden und dann zur Kultur für eine zusätzliche 16–18-stündige Übernacht (o/n) Erholungsdauer zurückgebracht wurden, bevor die metabolische Aktivität in einem MTT-Assay getestet wurde. Die Konzentrationen von freiem RA und RA-NR-AN-01 werden ausgedrückt als die berechnete Konzentration von Roridin A (in mg/ml aufgetragen auf einer logarithmischen Skala) in dem Assay (d. h. anstatt dem totalen mg/ml von NR-AN-01 Protein in dem Assay), sodass direkte Vergleiche möglich sein können. Die metabolische Aktivität der Zellen in dem MTT-Assay wird dargestellt als Prozentsatz der metabolischen Aktivität, gemessen in einer unbehandelten Kontrollkultur von Zellen, d. h. % Kontrolle).
  • 5B zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, die in ähnlicher Weise ausgeführt wurden wie jene, die oben in Bezug auf 5A beschrieben wurden, jedoch unter Vergleich der Effekte von nur RA-NR-AN-01 (NRAN01-RA) an drei unterschiedlichen Zelltypen: nämlich BO54 markerpositiven glatten Muskelzellen (BO54-NRAN01-RA; offene Quadrate, 5B); HT 29 marker-negativen Kontrollzellen (HT29-NRAN01-RA; geschlossene Rauten, 5B); und M14 marker-positiven Zellen (M14-NRAN01-RA; geschlossene Quadrate, 5B). Wie oben in Bezug auf 5A beschrieben, werden die Konzentrationen in dem vorliegenden Experiment als μg/ml Roridin A ausgedrückt. Die metabolische Aktivität der Zellen wird in ähnlicher Weise wie in 5A ausgedrückt, d. h. als Prozentsatz der Aktivität, gemessen in einer unbehandelten Kontrollkultur von Zellen (% Kontrolle).
  • Die in 5A und 5B dargestellten Ergebnisse zeigen, dass die in dem MTT-Assay gemessene metabolische Aktivitäten in allen Populationen von Testzellen signifikant abnahmen, sogar 16–18 Stunden nach einer 24-stündigen Inkubation in entweder freiem Roridin A oder den 2'- oder 13'-RA-NR-AN-01 Konjugaten. Die Effekte der RA-NR-AN-01 Konjugate schienen nicht spezifisch inhibitorisch für sowohl Target (BO54 und M14)- als auch Nichttarget (HT29)-Zellen (5A und 5B) zu sein. Die inhibitorischen Effekte wurden bei einer freien Roridin A- oder RA-Konjugatkonzentration von > 10 ng/ml beobachtet.
  • Zu Vergleichszwecken wurde eine zweite Studie durchgeführt, worin die Effekte von Pseudomonas exotoxin (PE)-Konjugaten auf Zellen in einem ähnlichen Protokoll ausgewertet wurden. Für diese Studie wurden Target- und Nichttargetzellen mit PE oder PE-NR-AN-01 für 24 Stunden behandelt, und erhielten dann eine "Erholungsperiode" (wie oben), bevor die metabolische Aktivität in einem MTT-Assay getestet wurde.
  • 6A zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, die in ähnlicher Weise durchgeführt wurden, die oben in Bezug auf 5A beschrieben wurden, jedoch so ausgestaltet, um die metabolischen Effekte auff PE-NR-AN-01 (NRAN01-PE) auf Zellen zu untersuchen, d. h. anstatt RA-NR-AN-01. Drei unterschiedliche Zelltypen wurden angewendet: nämlich BO54 marker-positive glatte Muskelzellen (BO54; offene Quadrate, 6A); HT29 markernegative Kontrollzellen (HT29; geschlossene Rauten, 6A); und M14 marker-positive Zellen (MT14; geschlossene Quadrate, 6A). In dieser Studie ist die Konzentration des Konjugats in μg/ml NR-AN-01 Protein ausgedrückt (aufgetragen auf einer log-Skala), und die metabolische Aktivität wird ausgedrückt als Prozentsatz der MTT-Aktivität, gemessen in einer unbehandelten Kontrollkultur (% Kontrolle).
  • 6B zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, die in ähnlicher Weise ausgeführt wurden wie jene, die oben in Bezug auf 6A diskutiert wurden, jedoch ausgeführt, um die mit freiem PPE (PE) erhaltenen Effekte mit den oben erhaltenen zu vergleichen, d. h. in 6A, mit PE-NR-AN-01. Die Zellen, die Kulturbedingungen, die Berechnungen und die Präsentation der Ergebnisse sind die gleichen wie in 6A oben.
  • Die in 6A und 6B dargestellten Ergebnisse zeigen, dass eine 24-stündige Exposition von PE-NR-AN-01 oder freiem PE nicht spezifisch inhibitorisch für Zellen der Konzentration von > 100 ng/ml war.
  • Während dieser Typ nicht-spezifischer Hemmung als ein potenzieller Wert für die biologische Atherectomie gewertet wurde, wurde er nicht als wünschenswert für die Behandlung von Restenose nach Angioplastik angesehen, wo tote und sterbende Zellen Faktoren freigeben können, die die Glatte-Muskelproliferation stimulieren.
  • BEISPIEL 5
  • Effekte der Pulsbehandlung auf zelluläre Aktivität
  • Es wurden zusätzliche Studien durchgeführt, um die Effekte davon auszuwerten, Zellen kurzfristig, d. h. 5 Minuten, einem Roridin A-haltigen therapeutischen Konjugat auszusetzen. In diesen Studien wurde sowohl die metabolische Aktivität (gemessen in MTT-Assays) als auch die zelluläre Proteinsynthese (gemessen durch 3H-Leucinaufnahme) ausgewertet.
  • Effekte nach 5 Minuten der Exposition: Proteinsynthese
  • Die Effekte einer 5-minütigen Exposition für freies Roridin A (RA) oder ein therapeutisches Konjugat wurden ausgewertet. Angewendet wurde Roridin A-NR-AN-01, gekoppelt durch Hemisuccinyl (HS) an entweder der 2'-Position (2'RA-HS-NR-AN-01) oder der 13'-Position (13'RA-HS-NR-AN-01). (Im Falle von 13'RA-HS-NR-AN-01 wurde die 2'-Position von Roridin A auch acetyliert.) Die RA-, 2'- oder 13'RA-NR-AN-01 Konjugate wurden in sterilem DMEM über einen Konzentrationsbereich von 400 ng/ml bis 780 pg/ml Roridin A zweifach verdünnt. (DieTestproben wurden alle auf Roridin A normalisiert, sodass direkte Vergleiche der Effekte bei vergleichbaren Dosierungen durchgeführt werden konnten.) Proben wurden (doppelt) in doppelte Mikrotiterplatten mit 100 ml/Well zum Aliquot gebracht und bei Raumtemperatur für 5 Minuten inkubiert.
  • Sowohl kurzfristige als auch langfristige Effekte der Testproben auf markerpositive A375- als auch marker-negative HT29-Zellen wurden bestimmt. Zur Untersuchung der kurzfristigen Effekte wurde 100 ml/Well [3H]-Leucin (0,5 mCi/ml) unmittelbar nach der 5-minütigen Behandlung mit Konjugat (oder RA) hinzugefügt, und die Proteinsynthese wurde über eine 5-stündige Dauer ausgewertet. Zur Bestimmung der langfristigen Effekte wurden die Zellen für 5 Minuten behandelt, gewaschen und dann zur Kultur für eine 24-stündige "Erholungs"-Periode im DMEM-Medium zurückgebracht, das entweder 5% NBS/5% Serum Plus®, d. h. für A375- oder NT29-Zellen) oder 10% FBS (d. h. für BO54-Zellen) enthielt. Am Ende der "Erholungs"-Periode wurde das Inkubationsmedium entfernt (d. h. durch Absaugen), und es wurde 3H-Leucin hinzugefügt (wie oben). In beiden Fällen (d. h. ob kurzfristig oder langfristig) wurde die Proteinsynthese der Zellen ausgewertet durch Inkubieren der Zellen mit 3H-Leucin für 4 Stunden bei 37°C in einer feuchten Kammer (wie oben) und alle Ergebnisse wurden durch Vergleich mit nicht behandelten Zellen (d. h. 100% Kontrolle) berechnet. Nach 4 Stunden wurde das 3H-Leucin entfernt, wurden die Zellen von dem Substrat durch Trypsinbehandlung entfernt, abgesaugt (mittels eines PHDTM Zellerntegeräts (Cambridge Technology, Inc., Cambridge, MA)) und durch Filtration auf Glasfaserfiltern gesammelt. Die Glasfaserfilter wurden getrocknet und durch Flüssigszintillationsspektroskopie in einem Beckman Flüssigszintillationszähler radioaktiv quantifiziert.
  • 7A zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, die durchgeführt wurden, um die Effekte zu untersuchen, Kontroll HT29 marker-negative Zellen über 5 Minuten unterschiedlichen Konzentrationen von Roridin A (freies RA; offene Quadrate, 7A) oder 2'-RAN-NR-AN-01 (2'RA-NRAN01; geschlossene Quadrate, 7A) oder 13'RA-NR-AN-01 (13'RA-NRAN01; geschlossene Dreiecke, 7A) Konjugaten auszusetzen. Die Konzentrationen von freiem RA, 2'RA-NR-AN-O1 oder 13'NR-AN-01 werden ausgedrückt als die berechnete Konzentration von Roridin A in dem Assay (in μg/ml, aufgetragen auf einer log-Skala), d. h. anstatt dem gesamten μg/ml von NR-AN-01 Protein, sodass direkte Vergleiche der Ergebnisse durchgeführt werden können. Für diese Studien wurden die Zellen für 5 Minuten behandelt, gewaschen und dann zur Kultur für 4 Stunden zurückgebracht, wobei während dieser Zeit die zelluläre Proteinsynthese ausgewertet wurde, indem 0,5 mCi/ml von 3H-Leucin dem Kulturmedium hinzugefügt wurde. Am Ende der 4-stündigen Dauer wurden die zellulären Proteine gesammelt, und die Radioaktivität wurde bestimmt. Die Ergebnisse sind ausgedrückt als der Prozentsatz der Radioaktivität, die in einer Kontroll (nicht behandelten) NT29-Zellkultur aufgezeichnet wurde (d. h. % Kontrolle).
  • 7B zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, die die Effekte davon untersuchen, Kontroll H29 marker-negative Zellen 5 Minuten unterschiedlichen Konzentrationen von freiem RA (offene Quadrate, 7B), 2'RA-NRAN01 (geschlossene Quadrate, 7B) oder 13'RA-NRAN01 (geschlossene Dreiecke, 7B) auszusetzen, wie oben in Bezug auf 7A beschrieben, wobei jedoch in den vorliegenden Experimenten die Zellen für eine 16–18-stündige Erholungsperiode (d. h. über Nacht; o/n) inkubiert wurden, bevor die Proteinsynthese in einem 4-stündigen 3H- Leucinproteinsyntheseassay getestet wurde. Die Ergebnisse sind in ähnlicher Weise dargeboten wie oben in 7A.
  • Die in 7A und 7B dargestellten Ergebnisse zeigen die kurzfristigen bzw. langfristigen Effekte von RA, 2'RA-HS-NR-AN-01 und 13'RA-HS-NR-AN-01 auf die Proteinsynthese durch HT29-Kontrollzellen. Die Ergebnisse zeigen eine Dosis-Antworthemmung der zellulären Proteinsynthese durch freies Roridin A, jedoch nicht durch RA-NR-AN-01 in HT29-ZeIIen. Die Hemmung, die durch RA während den 5 Minuten Inkubation ausgelöst wurde, war nach den 16–18 Stunden Erholungsdauer (7B) noch immer vorhanden. Im Gegensatz hierzu führte die Behandlung von Nichttarget HT29-Zellen mit 2'RA-HS-NR-AN-01 oder 13'RA-HS-NR-AN-01 zu einer detektierbaren Hemmung der Proteinsynthese. Somit legen diese Ergebnisse (im Gegensatz zu jenen, die über 24 Stunden hinweg erhalten wurden) einen überraschenden Grad an Spezifität in der in vitro Wirkung der NR-AN-01-Konjugate nahe, wenn die Behandlung in einem 5-minütigen "Puls" verabreicht wurde. Jedoch war es auch möglich, dass das NR-AN-01-Konjugat inaktiv war, sodass zusätzliche Experimente durchgeführt wurden, um den Effekt der Konjugate auf die Targetzellen auszuwerten.
  • 7C zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, die die Effekte darauf untersuchen, A375 m/m marker-positive Zellen 5 Minuten unterschiedlichen Konzentrationen von freiem RA (offene Quadrate, 7C), 2'RA-NR-AN-01 (geschlossene Quadrate, 7C) oder 13'RA-NR-AN-01 (geschlossene Dreiecke, 7C) auszusetzen, wie oben in Bezug auf 7A beschrieben. In den vorliegenden Studien wurden die A375-Zellen für 5 Minuten in einem Testwirkstoff inkubiert, gewaschen und auf Proteinsynthese über die nächsten 4 Stunden getestet, indem 0,5 mCi/ml 3H-Leucin zu dem Kulturmedium hinzugefügt wurde. Die Ergebnisse der Experimente sind in ähnlicher Weise aufgetragen, wie sie oben in Bezug auf 7A beschrieben sind.
  • 7D zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, welche die Effekte darauf untersuchen, A375 m/ml marker-positive Zellen 5 Minuten unterschiedlichen Konzentrationen von freiem RA (offene Quadrate, 7D), 2'RA-NRAN01 (geschlossene Quadrate, 7D), 13'RA-NRAN01 (geschlossene Dreiecke, 7D) auszusetzen, wie oben in Bezug auf 7B beschrieben. In den vorliegenden Studien wurden die A375-Zellen für 5 Minuten in diem Testwirkstoff inkubiert, gewaschen und dann zu der Kultur für eine 16–18-stündige Erholungsdauer (d. h. über Nacht; o/n) Erholung zurückgebracht, wobei nach dieser Zeit die Proteinsynthese während eines 4-stündigen 3H-Leucinproteinsyntheseassays ausgewertet wurde. Die Ergebnisse der Experimente sind in ähnlicher Weise aufgetragen, wie sie oben in Bezug auf 7A beschrieben sind.
  • Die in den 7C und 7D dargestellten Ergebnisse zeigen die kurzfristigen und langfristigen Effekte jeweils ovn RA, 2'RA-HS-NR-AN-01 und 13'-RA-HS-NR-AN-01 auf die Proteinsynthese durch A375-Targetzellen. Die Behandlung von Targetzellen mit entweder dem 2'- oder 13'RA-NR-AN-01 therapeutischen Konjugat führte zu einer kurzfristigen Hemmung der Proteinsynthese, d. h. beobachtet unmittelbar nach der 5-minütigen Pulsbehandlung (7C). Diese Feststellungen, in Kombination mit den Feststellungen in 7A und 7B, oben, legen nahe, dass die RA-NR-AN-01-Konjugate aktiv waren und dass sie spezifisch inhibitorisch für Targetzelten waren, jedoch nicht für Nichttargetzellen. Interessanterweise wurden, wenn "Puls"-behandelte Targetzellen zur Kultur zurückgebracht werden, keine langfristigen inhibitorischen Effekte beobachtet (7D). Die in den 7C und 7D dargestellten Ergebnisse zeigen wiederum, dass Roridin A für Testzellen nicht spezifisch inhibitorisch ist (d. h. in ähnlicher Weise wie in 7A und 7B, oben) und dass deren Effekt auf die Zellen auch nach einer 16–18-stündigen Erholungsdauer vorhanden ist. Somit scheinen die spezifischen Effekte von RA-NR-AN-01-Konjugaten auf die Targetzellen während einer "Puls"-Behandlung eine Eigenschaft des NR-AN-01-Bindungsproteins zu sein.
  • Die Ergebnisse, die mit BO54 arteriellen glatten Muskelzellen erhalten wurden, waren ähnlich wie jene, die mit den obigen A375-Zellen erhalten wurden, d. h. freies Roridin A zeigte eine Dosis-Antworthemmung der Proteinsynthese im Kurzzeitversuch von gleich 60%, 66% und 90% Kontrolle bei 200 ng/ml, 100 ng/ml und 50 ng/ml; und im langfristigen Versuch waren die Effekte auf die Proteinsynthese gleich 27%, 46% und 98% der Kontrolle bei den gleichen Dosierungen. Im Gegensatz hierzu zeigte das 2'- oder 13'RA-NR-ANA-01 nur eine 10–20%ige Hemmung für die kurz- odere langfristigen Effekte auf die Proteinsynthese (d. h. > 80% der Kontrolle).
  • Somit zeigen die Ergebnisse einen kurzfristigen spezifischen umkehrbaren Effekt des Roridin A-konjugierten NR-AN-01 auf Targetzellen, wenn sie als "Puls"-Behandlung verabreicht werden. Da jedoch nur die Proteinsynthese in diesen Experimenten ausgewertet wurde, war es möglich, dass die zelluluäre metabolische Aktivität in den Zellen als Ergebnis der "Puls"-Behandlung beeinträchtigt werden könnte. Daher wurden zusätzliche Studien durchgeführt, worin die zelluläre metabolische Aktivität nach einer "Puls"-Behandlung ausgewertet wurde.
  • Effekte nach 5 Minuten der Exposition: metabolische Aktivität
  • MTT-Assays wurden 48 Stunden ausgeführt, nachdem Target- und Nichttargetzellen für 5 Minuten RA oder RA-NR-AN-01-Konjugaten ausgesetzt wurden. Die Targetzellen in diesen Studien enthielten BO54- und A375- und die Nichttargetzellen enthielten HT29-ZeIIen. Sterile 96 Well-Mikrotiterplatten wurden mit 2500 Zellen/Well angesetzt, in Aluminiumfolie eingewickelt und in einer feuchten Kammer, die 5% CO2/95% Luft für 16–18 Stunden inkubiert. Serielle zweifache Verdünnungen von Roridin A (RA), 2'RA-HS-NR-AN-01 und 13'RA-HS-NR-AN-01 wurden aus 400 ng/ml bis 780 pg/ml hergestellt, und 100 ml Aliquots der Verdünnungen wurden in doppelte Wells eingegeben. Nachdem die Testproben 5 Minuten ausgesetzt waren, wurden die Zellen gewaschen, um die Testproben zu beseitigen, und es wurde frisches Medium hinzugefügt. Die Zellen durften sich 48 Stunden vor dem Test erholen: D. h. die Platten wurden für 48 Stunden inkubiert, und dann wurde die zelluläre metabolische Aktivität bestimmt, indem 20 ml/Well einer 5 mg/ml MTT-Lösung hinzugefügt wurde. Die Platten wurden abgedeckt und bei 37°C für 4 Stunden inkubiert, und dann wurde die Reaktion, wie oben beschrieben entwickelt (siehe BEISPIEL 4, oben). Das dunkelblau gelöste Formazanreaktionsprodukt wurde bei Raumtemperatur nach 16–18 Stunden Inkubation entwickelt. Die Proben wurden mittels eines ELISA Mikrotiterplattenlesegeräts bei einer Absorptions von 570 nm quantifiziert.
  • 8A zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, welche die Effekte darauf untersuchen, BO54 marker-positive glatte Muskelzellen 5 Minuten unterschiedlichen Konzentrationen von Roridin A (offene Quadrate, 8A), 2'RA-NR-AN-01 (NRAN01-2'RA; geschlossene Rauten, 8A) oder 13'RA-NR-AN-01 (NRAN01-13'RA; geschlossene Quadrate, 8A) auszusetzen. Die Ergebnisse wurden in ähnlicher Weise ausgeführt wie oben in Bezug auf 7B beschrieben, wobei aber die metabolische Aktivität durch einen MTT-Assay geprüft wurde, d. h. anstatt der Proteinsynthese wie in 7B, und den Zellen wurden auch 48 Stunden Erholung gegeben (anstatt 24 Stunden wie in 7B). Die Ergebnisse der Experimente sind in ähnlicher Weise aufgetragen wie jene, die (oben) in Bezug auf 7A beschrieben sind.
  • 8B zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, die die Effekte darauf untersuchen, A375 m/m marker-positive Zellen für 5 Minuten unterschiedlichen Konzentrationen von Roridin A (offene Quadrate, 8B), 2'RA-NR-AN-01 (NRAN01-2'RA; geschlossene Rauten, 8B), 13'RA-NR-AN-01 (NRAN01-13'RA; geschlossene Quadrate, 8B) auszusetzen. Die Experimente wurden in ähnlicher Weise durchgeführt (und die Ergebnisse aufgetragen) wie jene, die oben in Bezug auf 8A beschrieben sind.
  • 8C zeigt graphisch die Ergebnisse von in vitro Studien, die die Effekte darauf untersuchen, HT29 marker-negative Zellen für 5 Minuten unterschiedlichen Konzentrationen von Roridin A (offene Quadrate, 8C), 2'RA-NR-AN-01 (NRAN01-2'RA; geschlossene Rauten, 8C), 13'RA-NR-AN-01 (NRAN01-13'RA; geschlossene Quadrate, 8C) auszusetzen. Die Experimente wurden in ähnlicher Weise ausgeführt (und die Ergebnisse aufgetragen) wie jene, die oben in Bezug auf 8A beschrieben sind.
  • Die in den 8A bis 8C dargestellten Ergebnisse zeigen leichte Unterschiede zwischen den unterschiedlichen RA-NR-AN-01-Konjugaten bei den höchsten Dosen, wobei aber bei den geringeren Dosierungen das 2'- und 13'RA-NR-AN-01 die metabolischen Aktivität der Targeszellen (d. h. BO54 und A375) oder Nichttargetzellen (d. h. HT29) über die längere Frist (d. h. 48 Stunden) nicht signifikant hemmte. Somit legen die Ergebnisse nahe, dass die kurzfristige Hemmung der Targetzellproteinsynthese (7C bis 7D, oben) nicht zu langfristigen metabolischen Effekten auf die Zellen führt, wie messbar in MTT-Assays. Dass diese Assays in der Lage waren, metabolische Veränderungen in den Zellen infolge einer 5-minütigen Exposition zu detektieren, ergibt sich aus den Resultaten, die mit freiem Roridin erhalten wurden. In diesem Fall war freies Roridin A für Target- und Nichttargetzelltypen nicht spezifisch hemmend, auch wenn die Zellen dem Wirkstoff für nur 5 Minuten ausgesetzt wurden und dann zur Kultur für die 48-stündige Erholungsdauer zurückgebracht wurden (8A bis 8C).
  • Somit legen die Feststellungen mit freiem Roridin A nahe, dass MTT-Assay in der Lage war, metabolische Veränderungen zu erfassen, die während einer 5-minütigen Einwirkung induziert wurden. Zusammengenommen legen diese Feststellungen nahe, dass die RA-NR-AN-01-Konjugate die Targezellaktivität spezifisch hemmen können (d. h. die Proteinsynthese), wenn sie in einer "Puls"-Behandlung verabreicht werden, und dass diese Effekte reversibel waren, ohne signifikante langfristige Effekte auf entweder die Proteinsynthese oder die zelluläre metabolische Aktivität (gemessen in einem MTT-Assay). Diese in vitro Eigenschaften von RA-NR-AN-01-Konjugaten wurden als hochnützlich für die Hemmung der Glatten-Muskelzellaktivität in vivo bewertet.
  • Daher wurden als Nächstes Tiermodellstudien durchgeführt, um die Effekte dieser therapeutischen Konjugate in vivo auszuwerten.
  • BEISPIEL 6
  • Bestimmung der Infusionsbedingungen in einem Tiermodell
  • Die therapeutischen Konjugate der Erfindung sind nutzbar, um eine Stenose nach einem Gefäßtrauma oder einer Gefäßerkrankung zu hemmen. In einem illustrativen Beispiel wird ein Gefäßtrauma, das während Angioplastik induziert wird, während der operativen Prozedur behandelt, indem der Katheter entfernt wird, der zur Durchführung der Angioplastik verwendet wird, und indem ein Balloninfusionskatheter in das Gefäß eingeführt wird. Der Infusionskatheter wird mit der Eintröpfelöffnung (oder alternativ einem permeablen Membranbereich) in dem traumatisierten Bereich des Gefäßes positioniert und dann wird Druck angelegt, um das therapeutische Konjugat einzuführen. Z. B. kann ein Infusionskatheter mit zwei Ballonen angewendet werden, und wenn ein Ballon jederseits des Verletzungsorts aufgepumpt wird, entsteht ein Fluidraum, der mit einem geeigneten Infusionsfluid gefüllt werden kann, das das therapeutische Konjugat enthält. Es ist früher berichtet worden, dass die Infusion von Meerrettichperoxidase (HRP) Markerenzym bei einem Druck von 300 mmHg über 45 Sekunden in Hund- oder Menschen-Coronararterien dazu führte, dass das HRP in die Gefäßwand eindringt (6). Jedoch ist HRP ein kleineres Molekül als NR-AN-01, und Menschen- und Hunde-Coronararterien sind auch beträchtlich kleiner als die Carotis- oder Femoralarterien in dem vorliegenden Hausschwein-Modellsystem. Es wurden daher Experimente ausgeführt, um in einem Hausschwein-Modellsystem die Infusionsbedingungen zu bestimmen, die zum Verabreichen eines therapeutischen Konjugats zu den glatten Gefäßmuskelzellen in Carotis- und Femoralarterien geeignet sind. Die Verabreichungsbedingungen wurden überwacht, indem das Eindringen des therapeutischen Konjugats in die Gefäßwand sowie die spezifische Bindung des therapeutischen Konjugats an die glatten Gefäßmuskelzellen in der Gefäßwand ausgewertet wurden.
  • Unter Verwendung eines Infusionskatheters wurden die Coronar- und Femoralarterien von Hausschweinen oder nicht-menschlichen Primaten mit NR-AN-01 für 45 Sekunden bis 3 Minuten bei mehreren Drücken im Bereich von etwa 0,4 Atmosphären (300 mmHg) bis 3 Atmosphären infundiert. Nach der Infusion wurden die Gefäße mit steriler Salzlösung gespült und immunohistochemisch präpariert, unter Verwendung von HRP-konjugiertem Ziegen-anti-Maus-IgG, um das NR-AN-01-Maus-IgG in der Gefäßwand zu detektieren. Es wurde bestimmt, dass eine volle Durchdringung von NR-AN-01 in die Gefäßwände bei einem Druck von 3 Atmosphären nach 3 Minuten erreicht wurden.
  • Es wurd auch Immunohistologie angewendet, um zu bestimmen, welche Tiermodellsysteme das Targetantigen für NR-AN-01 exprimiert hatten. Gefäßgewebeschnitte von leicht verfügbaren Versuchstierarten wurden NR-AN-01 ausgesetzt, gewaschen und mit HRP-konjugiertem Ziegen-anti-Maus-IgG in Reaktion gebracht. Es stellte sich heraus, dass nur nicht-menschliche Primaten und Schweine sich 250 kD NR-AN-01 Targetantigen mit dem Menschen teilen.
  • Um zu bestimmen, ob NR-AN-01 in spezifischer Weise an sein Targetantigen in vivo binden könnte, wurden die Coronar- und Femoralarterien von Hausschweinen mit therapeutischen Konjugaten mittels eines Infusionskatheters infundiert, wurden die Infusionsstellen mit steriler Salzlösung gespült und dann wurden die Operationsstellen geschlossen, und die Tiere wurden für zusätzliche 3–5 Tage gehalten. Am Ende dieser Zeit wurden die Gefäßinfusionsstellen herausgenommen und zur Immunohistologie präpariert, wiederum unter Verwendung von Ziegen-anti-Maus-IgG, um NR-AN-01 zu identifizieren. NR-AN-01 wurde in der Gefäßwand von Schweinecoronar- und -femoralarterien 3–5 Tage nach der Operation identifiziert, und es erschien, dass NR-AN-01 nur glatten Gefäßmuskelzellen assoziiert war. Diese Feststellungen legen nahe, dass NR-AN-01 in der Lage ist, spezifisch an sein Targetantigen in vivo zu binden.
  • BEISPIEL 7
  • Hemmung glatter Gefäßmuskelzellen in vivo
  • Die intimale Glatte-Muskelproliferation, die einem Ballonkatheter-induzierten Trauma folgt, ist ein gutes Modell, um die therapeutische Wirksamkeit von Konjugaten zur Hemmung der Glatten-Muskelzellaktivität in vivo in Antwort auf ein Gefäßtrauma, einschließlich Restenose nach Angioplastik, auszuwerten. Hausschweine wurden angewendet, um die Effekte von NR-AN-01 zu untersuchen (d. h. in diesen Studien als Glattes-Gefäßmuskelbindungsprotein oder einfach VSMBP bezeichnet; und die therapeutischen Konjugate mit Roridin A sind mit VSMBP-RA bezeichnet). Die Ereignisse, die normalerweise einer Ballonangioplastik in der Schweinearterie folgen, sind zuvor beschrieben worden (12). In diesen Studien führte die Dilatation der Caortisarterie mittels eines übergroßen Ballons (Ballon : Arterienverhältnis angenähert 1,5 : 1) in einer kompletten endothelialen Denudation über einen Bereich von 1,5–2 cm Länge. Obwohl diese Länge der traumatischen Verletzung im Versuch ausgewählt wurde, eine Thrombose zu minimieren, gab es noch immer eine merkliche Plättchenablagerung und Thrombusbildung. Die Prozdur resultierte auch in einer Dissektion durch die interne elastische Schicht in die artielle Media und Necrose der medialen glatten Muskelzellen. Eine Intimaverdickung aufgrund der glatten Muskelproliferation erschien 7 Tage nach der Verletzung und erreichte eine mittlere maximale Dicke von 85 mm nach 14 Tagen. Das histologische Bild dieser Neointima ist sehr ähnlich dem proliferativen neointimalen Gewebe einer humanen Restenose (13).
  • Es wurde ein Einzeldosis-Testprotokoll in Hausschweinen mit NR-AN-01-Roridin A-Konjugaten durchgeführt. Eine lokalisierte Verabreichung der Testkonjugate, d. h. durch einen Katheter in einen Bereich eines traumatisierten Gefäßes, das durch temporäre Schlupfligaturen begrenzt wurde, war ausgestaltet, um die systemische Toxizität zu reduzieren, während für einen hohen Pegel dafür gesorgt wurde, die glatten Targetmuskelzellen auszusetzen. Dieser intraarterielle Verabreichungsweg in Tiermodellstudien simuliert die vorgeschlagene Route in humanen Coronararterien. Das Testprotokoll war ausgestaltet als initiales in vivo Screening von intraarteriolaren, ortsspezifischen, katheterverabreichten, glatten Gefäßmuskelbindungsprotein (VSMBP)-Konjugaten.
  • Die Toxizität des freien Medikaments wurde auch ausgewertet, d. h. für pathobiologische Effekte auf arteriolare glatte Muskelzellen. Die therapeutisch wirksame Dosis von Roridin A-NR-AN-01-Konjugat wurde durch in vitro Studien bestimmt, und der richtige intraarteriolare Verabreichungsdruck wurde bestimmt, indem freie MAb- und Mab-Konjugate Tieren verabreicht wurde, wie oben in BEISPIEL 7 beschrieben.
  • Sechs Mischlings-Hausschweine (Duroc X), entwöhnte Ferkel von angenähert 30 Pfund Körpergewicht, wurden in dem Experiment verwendet. Die Tiere wurden nach Zufall dem folgenden Behandlungsregime zugeordnet, wobei jedes Schwein vier unterschiedliche Behandlungen hatte, aufgeteilt zwischen den rechten und linken Caortis- und Femoralarterien, deren eine eine PBS-Kontrolle war (Tabellen 1–3, unten).
  • Tabelle 1
    Figure 00760001
  • Operative Prozedur:
  • Testkonjugate und Kontrollverbindungen wurden als einzel-intraarterielle Infusion am Ort der endothelialen Denudierung und des Traumas, induziert durch einen Ballonkatheter, verabreicht. Beide carotiden und femoralen Arterien wurden über 1 cm bis 2 cm Endothel durch intraluminale Passage eines 23 cm, Größe 3 (femoral) und Größe 4 (carotid) Uresil Vascu-Flo® Silikonverschlussballonkatheters (Uresil Technology Center, Skokie, IL) abgeschliffen, ausreichend mit Salzlösung gedehnt, um einen leichten Widerstand zu erzeugen. Diese Technik erzeugte eine leichte Dehnung der Arterie. Nach dieser Behandlung wurden proximate und distale Schlupfligaturen, 3-0 Seide, nahe den Enden des abgeschliffenen Bereichs platziert, und ein Größe 8 French Infant Feeding Katheter (Cutter-Resiflex, Berkeley, CA), der an einer Inflation Pro® (USCI, C. R. Bard, Inc., Billerica, MA) Druckspritze angebracht war, wurde verwendet, um die Testkonjugate und die Kontrollverbindungen direkt zu dem denudierten Segment bei einem Druck von 3 Atmosphären für 3 Minuten zu verabreichen. Die Schlupfligaturen wurden nach der 3-minütigen Aussetzdauer und der Wiederherstellung der arteriellen Bluflusses entfernt. In diesen Studien wurden Zweige der Femoral- oder Carotisarterien mit einer 00 Seidennaht ligiert, um eine Druckinfusion in dem behandelten Bereich zu erreichen. Der größte distale Zweig der Femoralarterie (der Saphena-Arterie) wurde eingeschnitten und als Eintrittsort für die Katheter verwendet, die dann in die Hauptfemoralarterie eingeführt wurden. Nach dieser Katheterisierungsprozedur in der Hauptfemoralarterie wurde der sekundäre Zweig ligiert. In diesen Fällen wurde Ligation oder Inzision verwendet, um den Eintritt der Katheter zu erlauben, und die Öffnung wurde dann mit 3 bis 4 Nähten aus 5-0 Monosilamen-Polybutester (Novafil, D & G Monofil Inc., Monati, PR) verschlossen.
  • Nachfolgende Prozeduren:
  • Nach der Operation wurden die Schweine während der Quarantäne und Operationserholungsdauern in 3 × 5 Fuß Innenlaufställen mit Zementböden gehalten. Sie wurden dann für den Rest der 5-wöchigen Heilungsdauer vor dem Sammeln der Gewebe zur Histologie zu Innen/Außenlaufställen transferiert. Die Tiere erholten sich von der Operation normal, ohne Evidenz einer Blutung oder Entzündung an den Operationsstellen. Alle sechs Tiere wurden 5 bis 6 Tage nach der Behandlung mit einem Dopplerstethoskop untersucht, und in jedem der Tiere waren alle Arterien durchgängig. Nach der Behandlung hatten alle Tiere einen normalen Appetit, normale Aktivität und normale Gewichtszunahme.
  • Makroskopische pathologische und histologische Auswertung:
  • Fünf Wochen nach der Traumatisierung und Behandlung der Arterien wurden die Tiere mit 0,6 ml Telazol® (Tiletaminhydrochlorid; A. H. Robins Co., Richmond, VA) und 0,5 ml Xylazin (Lloyd Laboratories, Shenandoah, IA) pro 30 Pfund Körpergewicht durch intramuskulare Injektion sediert, heparinisiert (i.v. 2 ml Natriumheparin, 1000 Einheiten/ml) und durch i.v. Pentobarbital euthanasiert. Es wurden beide rechten und linken Carotis- und Femoralarterien entfernt, wobei das normale Gefäß sowohl das proximale als auch das distale bis zum behandelten Segment enthielt. Die Arterien wurden gemessen und der Ort der Ligaturen und allgemeine Abnormalitäten wurden notiert. Die Arterien wurden mit 2 mm Abständen durch Schnitte und in der Reihenfolge in Cryoform mit O.C.T (optimaler Schneidtemperatur) Verbindung (Tissue Tek®, Miles Laboratories Inc., Elkhart, IN) angeordnet und in flüssigem Stickstoff gefroren. Die Blöcke wurden auf 5 um geschnitten und mit H/E, Massons Trichrome und Movats Pentachrome für morphologische Untersuchungen gefärbt. Die Schnitte wurden auch für die immunohistologische Färbung von glattem Gefäßmuskel verwendet.
  • Die histologische Untersuchung der Stufenschnitte der Arterien ergab eine merkliche Hemmung der intimalen Glatten-Muskelproliferation in den Bereichen, die traumatisiert und mit RA-NR-AN-01-Konjugaten behandelt waren (Tabelle 2). Diese Hemmung war auch in der submakroskopischen Auswertung der Gefäße evident. Die Hemmung der intimalen Glatten-Gefäßmuskelproliferation wrude mit minimaler oder keiner histologischen Evidenz des Glatten-Muskelzelltodes in der Arterienwand erzeugt. Ein Querschnitt einer solchen traumatisierten Arterie ist in den 9A und 9B angegeben.
  • Tabelle 2 INTIMALE GLATTE GEFÄßMUSKELPROLIFERATION IN TRAUMATISIERTEN UND BEHANDELTEN SCHWEINEARTERIEN
    Figure 00790001
  • Die in 9A dargestellten Ergebnisse zeigen (bei 160-facher Vergrößerung) einen Querschnitt einer unbehandelten Arterie 5 Wochen nach Angioplastik. Dominante histologische Merkmale der Arterie enthalten eine Verlagerung des Endothels (siehe #1 in 9A) von der internen elastischen Schicht weg (sieh #2, 9A), scheinbar aufgrund der intimalen Glatten-Muskelproliferation (siehe #3, 9A).
  • Die in 9B dargestellten Ergebnisse zeigen (bei 160-facher Vergrößerung) einen Querschnitt einer behandelten Arterie 5 Wochen nach Angioplastik und Infusion des therapeutischen RA-NR-AN-01-Konjugats. Das Gefäß in diesem Schnitt wurde größeren mechanischen Belastungen unterzogen als das in 9A gezeigte Gefäß, mit mehreren Stellen, wo die externe elastische Membran riss, und es wurde eine zugeordnete Proliferation glatter Muskelzellen in den äußeren Schichten der Media beobachtet (siehe #4 in 9B). Die Behandlung mit therapeutischem Konjugat hemmte die intimate Hypertrophie, wie sich aus dem Fehlen der Verlagerung des Endothels (siehe #1, 9B) von der internen elastischen Schicht (siehe #2, 9B) ergibt. Überraschenderweise wurde dieser inhibitorische Effekt auf die intimalen glatten Muskelzellen erreicht, ohne die Hypertrophie der medialen glatten Muskelzellen in Bereichen zu hemmen, wo die externe elastische Membran gerissen war (siehe #4, 9B).
  • Dies ist ein besonders glückliches Ergebnis, weil die Wundheilung in dem behandelten Gefäß fortschreitet, ohne nachteilige Konsequenzen der Intimahyperplasie und Stenose oder Nekrose glatter Muskelzellen in der Media.
  • In diesen histologischen Studien wurden auch Vergleiche der Wirksamkeit sowohl des 2'- als auch 13'-Roridin A-Konjugats durchgeführt, mit der Feststellung, dass das 13'-Konjugat (d. h. 13'RA-HS-NR-AN-01) stärker aktiv bei der Hemmung der intimalen Hyperplasie der glatten Muskelzellen erschien als das 2'-Konjugat (d. h. 2'RA-HS-NR-AN-01). In dieser Studie schien die Niederdruckinfusion des 13'-Konjugats die glatte Muskelzellproliferation effizienter zu hemmen als der hohe Druck, und auch das 13'-Konjugat schien effizienter zu sein als das 2'-Konjugat.
  • In 9B führte das therapeutische Konjugat, das am Ort nach Angioplastik verabreicht wurde, in einer angenähert 95%igen Hemmung der Glatten-Muskelhypertrophie, die das Lumen des unbehandelten Gefäßes einschränkte (9A). Das therapeutische Konjugat übte signifikant seine Effekte auf die glatten Muskelzellen aus, die von den medialen glatten Muskelschichten in die Intima wandern, ohne das Endothel zu beeinträchtigen noch irgend welche Anzeichen von Nekrose (d. h. Zelltod) in den glatten Muskelzellen in den medialen Schichten der Arterienwand zu erzeugen. Die Studien zeigten auch keinerlei histologische Anzeichen einer mononuklearen Infiltration oder Fibrose, die aus toxischen Effekten auf die Gefäßwand resultieren könnten. Auch wurden sichtbare Anzeichen der Heilung in den intimalen Schichten behandelter Gefäße beobachtet, und mit beobachtetem Nachwachstum des Endothels, d. h. Endothelzellen, die über die dünne Schicht glatter Muskelzellen in der Intima hinweg wachsen, die zwischen dem Endothel und der internen elastischen Schicht liegen (d. h. #1 und #2 in 9B). Diese kombinierten histologischen Beobachtungen belegen die hocherwünschten Merkmale der Wundheilung, des Neuwachstums von Endothel und einer verbesserten Gefäßstabilität nach einer Behandlung mit einem therapeutischen Konjugat, das Glatte-Muskelhyperplasie in den intimalen Schichten des Gefäßes hemmt.
  • BEISPIEL 8
  • Glatte-Gefäßmuskelzell-in vitro-DNA- und Proteinsynthesehemmung
  • Die Fähigkeit verschiedener therapeutischer Wirkstoffe, die DNA-Synthese und Proteinsynthese in glatten Gefäßmuskelzellen zu hemmen, wurde getestet. 3H-Thymidinaufnahme und Cytotoxizitätsassays wurden gemäß den folgenden Protokollen durchgeführt.
  • 5-Minuten-Exposition: 3H-Leucinaufnahme:
  • Glatte Gefäßmuskelzellen wurden mit 40.000 Zellen/ml in sterile 24 Wellplatten mit 1 mlM/ell angesetzt. Die Platten wurden über Nacht bei 37°C, 5% CO2, 95 Luft in einer angefeuchteten Atmosphäre (Sättigung) inkubiert. Logarithmische Verdünnungen des interessierenden therapeutischen Wirkstoffs wurden mit glatten Gefäßmuskelzellen für 5 Minuten oder 24 Stunden inkubiert. Proben der therapeutischen Wirkstoffe wurden in DMEM F-12 Medium (Whittaker Bioproducts, Walkersville, Maryland) mit 5%igem fötalem Rinderserum (FBS, Gibco BRL, Gaithersbur, MD) und 5% Serum Plus® (JRH Biosciences, Lenexa, KS) verdünnt. Nach der Inkubation mit therapeutischem Wirkstoff wurde die Lösung abgesaugt, und es wurde 1 ml/Well von 0,5 Mikrocurie/ml 3N-Leucin in leucinfreiem DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) mit 5% Serum Plus® hinzugefügt. Die Platten wurden über Nacht bei 37°C, 5% CO2 in angefeuchteter Atmosphäre nachinkubiert. Die Zellen wurden visuell mittels eines Umkehrmikroskops unter Verwendung einer Bewertungsskala eingeteilt, um die Lebensfähigkeit und Zellzahl zu bestimmen. Die 1 bis 3 Einteilung basiert auf dem Prozentsatz der Zelllebensfähigkeit und der Anzahl im Vergleich zu Kontrollwells, wobei 3 = 100%, 2 = 70% bis 100% und 1 = 0% bis 70%. Eine Aufzeichnung dieser Bewertung unterstützte die Bestimmung des unmittelbaren cytotoxischen Effekts der therapeutischen Wirkstoffe. Das Medium wurde dann abgesaugt, und die Zellen wurden zwei Mal mit kaltem 5%igem TCA gewaschen. 400 Mikroliter 0,2 M NaOH wurden pro Well hinzugefügt, und die Platten wurden für 2 Stunden bei Raumtemperatur auf einer rotierenden Plattform inkubiert. 200 Mikroliter/Well der Zelllösung wurden in Kunststoffszintillationsfläschchen überführt (Bio-Rad Laboratories), und 4 Milliliter Bio-Safe® II flüssige Szintillationsflüssigkeit (Research Products InterCorp. Mount Prospect, IL) wurden vor dem Umrühren hinzugefügt. Die Fläschchen wurden an einem Beckman LS2800 Flüssigszintillationszähler gezählt, Schnittstelle mit Beckman "Data Capture" Software zur Umwandlung in eine Lotus 1-2-3® Datei und Analyse mittels Lotus 1-2-3®.
  • 5-Minuten Exposition: 3H-Thymidinaufnahme:
  • Glatte Gefäßmuskelzellen wurden in einem vollständigen Medium mit 5% FBS (Gibco) über Nacht bei 37°C in einer angefeuchteten 5%igen CO2-Umgebung in sterilen 24 Wellplatten inkubiert. Das Medium wurde von den Wells abgesaugt, und serumfreies Medium wurde hinzugefügt, ergänzt mit Wachstumsfaktoren (DMEM : F12 Grundmedium, ergänzt mit einem Wachstumsfaktorcocktail, Katalognummer 11884, welches enthält Insulin (5 Mikrogramm/ml), Transferrin (5 Mikrogramm/ml) und Natriumselenit (5 Nanogramm/ml), erhältlich bei Sigma Chemical, St. Louis; Missouri). Die Zellen wurden in diesem Medium für 24 Stunden inkubiert. Für eine 5-minütige Exposition einem therapeutischen Wirkstoff wurden logarithmische Verdünnungen des therapeutischen Wirkstoffs mit den Zellen in komplettem Medium inkubiert. Nach 5 Minuten und Absaugen des Mediums wurden 1 ml/Well von 1,0 Mikrocurie/ml 3H-Thymidin, dispergiert in komplettem Medium, hinzugefügt. Die 24-stündige Exposition involvierte die Inkubation der Zellen mit 1 ml/Well von 1,0 Mikrocurie/ml von 3H-Thymidin, dispergiert in einem kompletten Medium, und es wurden logarithmische Verdünnungen des therapeutischen Wirkstoffs getestet. In beiden Expositions-Versuchen wurden die Zellen über Nacht bei 37°C in einer angefeuchteten 5%igen CO2-Umgebung behandelt. Die Zellen wurden auf Lebensfähigkeit und Zellzahl visuell bewertet. Die Zellen wurden gewaschen und präpariert, um sie in Kunststoffszintillationsfläschchen zu überführen, wie für das 3H-Leucinprotokoll beschrieben. Die Fläschchen wurden an einem Beckman LS2800 Flüssigszintillationszähler gezählt, mit Schnittstelle zu Beckman "Data Capture" Software zur Umwandlung in eine Lotus 1-2-3® Datei und Analyse mittels Lotus 1-2-3®.
  • Diese Protokolle sind zur Verwendung mit anderen Targetzellpopulationen geeignet, insbesondere adhärenten einschichtigen Zelltypen.
  • Morphologische Auswertung der Cytotoxizität-Puls-Exposition:
  • Glatte Gefäßmuskelzellen wurden mit 4,0 × 104 Zellen/ml Medium/Well auf einem kommerziell vorbereiteten Vierwellobjektträger (Nunc. Inc., Naperville, Illinois) angesetzt. Es wurden ausreichend Objektträger angesetzt, um zwei gepulste Expositionsdauern (5 Minuten und 24 Stunden) sowie eine vorgeschriebene Stufung von Auswertungspunkten (24 Stunden bis 128 Stunden) aufzunehmen. Alle Objektträger wurden doppelt gefahren, um etwaige Assayanomalien zu entdecken. Der therapeutische Wirkstoff wurde in dem gleichen Medium verdünnt, das in den 3H-Leucin- und 3H-Thymidinassays benutzt wurde. Jeder Vierwellobjektträger wurde konzentrationsmäßig gruppiert, zu einer log-größeren Konzentration (Welt "B"), einer log-niedrigeren Konzentration (Welt "D"), der minimalen wirksamen Konzentration (Weil "C"), bestimmt durch die 3H-Leucin- und 3H-Thymidinassays, wie oben beschrieben. Als Kontrolle für normale Morphologie wurde ein Well (Weil "A") unbehandelt belassen (nur Medium). Die Inkubation erfolgte in einem 37°C, 5 % CO2 befeuchteten Inkubator. Nach jeweils zwei (5 Minuten und 24 Stunden) Expositionspunkten wurde das therapeutische Wirkstoffmedium aus jedem Well abgesaugt, einschließlich dem unbehandelten Well. Dann wurde 1 ml frisches Medium hinzugefügt, um das abgesaugte Medium zu ersetzen. Die Reinkubation erfolgte, bis jeder der gestuften Auswertungspunkte erreicht wurde. An diesen Punkten wurde das Medium abgesaugt und anschließend durch 1 ml 10%igem neutral gepufferten Formalin für 1 Stunde ersetzt, um die richtige Fixierung zu erlauben. Diese fixierten Objektträger wurden in Hematoxylin (nuklear) und Eosin (cytoplasmatisch) zur morphologischen Auswertung und Einteilung gefärbt.
  • Ergebnisse:
  • Die Ergebnisse des 24-Stunden 3H-Leucin-Proteinhemmassays und des 24-Stunden 3H-Thymidin-DNA-Synthesehemmassays sind in den 10A10D für Suramin, Staurosporin, Nitroglycerin bzw. Cytochalasin B gezeigt. Alle der getesteten Verbindungen zeigten einen verfügbaren therapeutischen Bereich (die Fläche unter der Kurve des 3H-Leucin-Assays ist größer als jene, die von dem 3H-Thymidin-Assay herrührt), was die Nutzbarkeit in der Praxis von Dauerfreigabe-Dosierungsformausführungen der vorliegenden Erfindung anzeigt. Insbesondere hemmten die Verbindungen die Fähigkeit glatter Gefäßmuskelzellen, einer DNA-Synthese zu unterliegen, in der Gegenwart von 5% FPS um ein größeres Ausmaß als sie die Proteinsynthese glatter Gefäßmuskelzellen hemmten. Die Protein- und DNA-Synthesehemmeffekte von Suramin, Staurosporin, Nitroglycerin und Cytochalasin B während einer 5-minütigen und 24-stündigen gepulsten Exposition sind jeweils in 10AD gezeigt.
  • BEISPIEL 9
  • Spezifische Bindung und Internalisierung von targetisierten Partikeln durch glatte Gefäßmuskelzellen
  • Die Fähigkeit glatter Gefäßmuskelzellen, an mit Bindungsprotein oder -peptid beschichtete Partikel zu binden oder diese zu internalisieren, wurde mit monoklonalem Antikörper (NR-AN-01) beschichteten Goldperlen sowol in vitro als auch in vivo demonstriert. Die Glatten-Gefäßmuskelzell-Gewebekulturen (BO54), eine antigenpositive Kontrollzelllinie (A375) sowie eine antigennegative Kontrollzelllinie (HT29) wurden mit 10 nm Goldperlen inkubiert, mit einer Gruppe, die mit NR-AN-01 beschichtet war, und einer zweiten unbeschichteten Kontrollgruppe. Diese Zellen wurden den Perlen als einschichtige und Zellsuspensionskulturen ausgesetzt, und wurden auf Bindung und Internalisierung durch Elektronenmikroskopie zu sechs Zeitpunkten überprüft (d. h. 1 Minute, 5 Minuten, 15 Minuten, 30 Minuten, 50 Minuten und 24 Stunden).
  • Tabelle 3 zeigt diese Ergebnisse der Experimente, was anzeigt, dass die Bindung an die Zelloberfläche spezifisch ist. Das relative Einteilungssystem, das in Tabelle 3 insgesamt angewendet wurde, repräsentiert eine subjektive Bewertung der Partikelbindung, worin 0 = keine, 1 = minimal, 2 = mäßig, 3 = moderat und 4 = deutlich. Wenn sich Partikelaggregate auf der einschichtigen Oberfläche sowohl der glatten Muskelzellen als auch der Kontrollzellen ansiedelten, wurden die Partikel durch Makro- und Mikrophagocytose nicht spezifisch internalisiert. Wenn die Zellen in der Zellsuspension verblieben, war die nicht spezifische Internalisierung minimal oder fehlte. Das nicht spezifσsche Anhaften der Goldperlen ohne NR-AN-01 auf dem von HT29-ZeIIen erzeugten Oberflächenmucin wurde beobachtet, was zur mäßigsten nicht spezifischen Internalisierung davon führte. Die Glatte-Gefäßmuskel-Aufnahme von NR-AN-01 targetisierten Goldperlen war in Zellsuspensionskulturen hochspezifisch.
  • Tabelle 3
    Figure 00860001
  • Tabelle 3, Fortsetzung
    Figure 00870001
  • Tabelle 3, Fortsetzung
    Figure 00880001
  • 11 zeigt einen tangentialen Schnitt parallel zur Innenoberfläche einer glatten Muskelzelle, gekennzeichnet durch zahlreiche endocytische Vesikel, von denen einige antikörperbeschichtete Goldperlen enthalten, im Prozess der Internalisierung durch die Zelle. Diese endocytischen Vesikel mit an Zelloberflächenantigenen haftenden Partikeln wurden zur Verschmelzung mit Lysosomen angeregt, mit einer höheren als der erwarteten Rate für den normalen Zelloberflächenmembranumsatz. Die resultierende merkliche Ansammlung internalisierter Partikel wurde an dem 24-stündigen Zeitpunkt beobachtet und ist in 12 gezeigt.
  • Die targetisierte Goldperlen-Glatte-Gefäßmuskelzell-Oberflächenbindung, Internalisierung und Lysosomenkonzentration wurde auch in vivo beobachtet. NR-AN-01-beschichtete Goldperlen wurden über einen intravaskulären Katheter infundiert, offenendig mit einem behandelten Bereich, der proximal und distal mit Schlupfligaturen verschlossen war, bei 3 atm Druck angelegt für 3 Minuten in die Wand einer Schweinefemoralarterie unmittelbar nach einem Ballontrauma. Die Perleninternalisierungsrate variierte mit dem Grad der Beschädigung, der während des Ballontraumas von der glatten Gefäßmuskelzelle gehalten wurde. Zellen mit minimaler oder keiner Beschädigung internalisierten die Partikel durch Endocytose und Phagocytose schnell, wobei die internalisierten Partikel in Lysosomen konzentriert wurden.
  • Zellen, die durch das Trauma getötet wurden, zeigten eine Oberflächenperlenbinden. Zellen, die durch das Trauma beschädigt wurden, jedoch überlebten, waren durch Perlenoberflächenbindung mit verzögerter Internalisierung und Lysosomenkonzentration gekennzeichnet. 13 zeigt die Partikelkonzentration in Lysosomen in vivo eine Woche nach Verabreichung der Perlen.
  • BEISPIEL 10
  • Glatte Gefäßmuskel in vitro DNA- und Proteinsynthesehemmung durch Staurosporin und Cytochalasin
  • Die Fähigkeit von Staurosporin und Cytochalasin, DNA- und Proteinsynthese in glatten Gefäßmuskelzellen in vitro zu hemmen, wurde getestet. 3H-Leucin- und 3H-Thymidinaufnahme und Cytotoxizitätsassays wurden gemäß den folgenden Protokollen durchgeführt.
  • Kulturzellen:
  • B054-Zellen (glatte Gefäßmuskelzellen vom Pavian) wurden von Explantaten von Aorta-Glatten-Gefäßmuskelzellen vom Pavian erhalten. Die Zellen wurden in DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium): F-12 Medium (Whittaker Bioproducts, Walkersville, Maryland) mit 5% fötalem Rinderserum (FBS, Gibco) und 5% Serum Plus® ("komplettes Medium") ausgebreitet, und eine Ansatzmenge von Zellen wurde im flüssigen Stickstoff zur künftigen Verwendung in Durchlauf sieben gefroren.
  • 5 Minuten-Exposition: Proteinsyntheseassay:
  • Glatte Gefäßmuskelzellen mit 40.000–50.000 Zellen/ml wurden angesetzt und bearbeitet, wie in BEISPIEL 8 beschrieben, "5 Minuten Exposition; 3H-Leucinaufnahme". Logarithmische Verdünnungen von Staurosporin (200 ng/ml, 20 ng/ml, 2 ng/ml, 0,2 ng/ml und 0,02 ng/ml) wurden im kompletten Medium verteilt. Für Cytochalasin B wurden log-Verdünnungen mit 20 μg/ml, 2,0 μg/ml, 0,2 μg/ml, 0,02 μg/ml und 0,002 μg/ml im kompletten Medium verteilt. Das komplette Medium wurde dann zu den Kontrollwells gegeben. Ein ml/Well jeder therapeutischen Wirkstoffverdünnung wurde in Vierfachwells gegeben, und der interessierende Wirkstoff wurde mit den glatten Gefäßmuskelzellen für 5 Minuten bei Raumtemperatur in einer steril gelüfteten Haube inkubiert. Nach der Inkubation des therapeutischen Wirkstoffs wurden die Wells anschließend so behandelt, wie in BEISPIEL 8 beschrieben, "5 Minuten Exposition; 3H-Leucinaufnahme".
  • 5 Minuten Exposition: DNA-Syntheseassay:
  • Glatte Gefäßmuskel (BO54) Zellen wurden in 24 Wellplatten ausgesetzt und verarbeitet, wie oben beschrieben, unter "5 Minuten Exposition: Proteinsyntheseassay". Nach 5 Minuten Inkubation mit dem therapeutischen Testwirkstoff wurde das Medium abgesaugt, und 1 ml/Well von 1,0 μCi/ml 3H-Thymidin (anstatt von 3H-Leucin), dispergiert im kompletten Medium, wurde hinzugefügt. Die Zellen wurden dann über Nacht bei 37°C in einer feuchten 5 % CO2 Umgebung inkubiert. Der toxische Effekt des therapeutischen Wirkstoffs wurde dann bestimmt, wie oben in dem Proteinsyntheseassay beschrieben.
  • 24 und 120 Stunden Exposition: Proteinsyntheseassay:
  • Glatte Gefäßmuskel (BO54) Zellen mit 20.000 Zellen/ml wurden in sterilen 24 Wellplatten angesetzt und im kompletten Medium (1 ml/Well) über Nacht bei 37°C, 5% CO2, 95% Luft in einer feuchten Atmosphäre (Sättigung) inkubiert. Log-Verdünnungen von Staurosporin (100 ng/ml, 10 ng/ml, 1 ng/ml, 0,1 ng/ml und 0,01 ng/ml) wurden sequenziell in den zwei Medien verteilt, wie oben beschrieben. Für Cytochalasin B wurden log-Verdünnungen mit 10 μg/ml, 1,0 μg/ml, 0,1 μg/ml, 0,01 μg/ml und 0,001 μg/ml sequenziell in den zwei Medien verteilt, wie oben beschrieben:
    Medium (1) = komplettes Medium; und
    Medium (2) = DMEM (Leucin-frei) mit 0,5 μCi/ml 3H-Leucin.
  • Medium (2) wird für die letzte 24 Stunden Inkubationsdauer des Experiments verwendet.
  • Insbesondere wurde in dem 24 Stunden-Assay jeder therapeutische Wirkstoff in dem Medium (2) verdünnt, wie oben erwähnt. Medium (1) wurde aus den Wells abgesaugt, und Aliquots therapeutischer Wirkstoffverdünnungen in Medium (2) wurden vierfach zu den geeigneten Wells gegeben. Medium (2) wurde dann zu den Kontrollwells gegeben.
  • In dem 120 Stunden-Assay wurde jeder therapeutische Wirkstoff in Medium (1) verdünnt, wie oben erwähnt. Medium (1) wurde von den Wells abgesaugt, und Aliquots der therapeutischen Wirkstoffverdünnungen in Medium (1) wurden vierfach zu den geeigneten Wells gegeben. Medium (1) wurde dann zu den Kontrolwells gegeben. Das Medium wurde alle 24 Stunden gewechselt, und es wurde frischer therapeutischer Wirkstoff zu den Testwells gegeben. Bei 96 Stunden (d. h. dem vierten Tag) wurde jeder therapeutische Wirkstoff in Medium (2) verdünnt, wie oben erwähnt. Medium (1) wurde von den Wells abgesaugt, und Aliquots der therapeutischen Wirkstoffverdünnungen in Medium (2) wurden vierfach zu den geeigneten Wells gegeben. Medium (2) wurde dann zu den Kontrollwells gegeben.
  • Die Testwirkstoffe in 3H-Leucin (und Kontrollen) wurden über Nacht bei 37°C, 5% CO2 in einer feuchten Atmosphäre inkubiert. Der toxische Effekt der therapeutischen Wirkstoffe wurde dann bestimmt, wie oben beschrieben in 5 Minuten Exposition: Proteinsyntheseassay, oben beschrieben. Zusätzlich wurden Änderungen in den Zellen bei jeder Verdünnung mittels eines Zeiss Mikroskops (Zeiss, Westdeutschland) bei 320X fotografiert. Das Medium wurde dann abgesaugt und die Zellen wurden mit TCA bearbeitet, wie oben beschrieben.
  • 24 und 120 Stunden Exposition: DNA-Syntheseassay:
  • Dieser Assay wurde entsprechend der Prozedur durchgeführt, wie beschrieben für "24 und 120 Stunden Exposition: Proteinsyntheseassay", außer dass Medium (2) in diesem 24 und 120 Stunden DNA-SYntheseassay ist:
    Medium (2) = komplettes Mediudum mit 1,0 μCi/ml 3H-Thymidin.
    Medium (2) wird für die letzte 24-stndige Inkubation des Experiments verwendet.
  • Diese Protein- und DNA-Syntheseassays sind zur Verwendung mit anderen Targetzellpopulationen geeignet, insbesondere anhaftende einschichtige Zelltypen.
  • Ergebnisse:
  • Die minimal wirksame Dosis (MED) jedes Wirkstoffs wurde als Prozentsatz der Kontrolle bestimmt, die nur mit Medium behandelt wurde; 50% der Kontrollwerte wurden als die cytotoxische Grenzmarke gewählt. Bei 5 Minuten Exposition zeigte Staurosporin ein MED von 100 ng/ml in dem Proteinsyntheseassay und 1 ng/ml in dem DNA-Assay. Die 24 Stunden MED für Staurosporin war 10 ng/ml in dem Proteinsyntheseassay und 1 ng/ml in dem DNA-Syntheseassay. Beide Assays ergaben eine MED von 1 ng/ml für eine 120 Stunden Exposition von Staurosporin.
  • Nach 5 Minuten Exposition zeigte Cytochalasin B eine MED von 10 μg/ml in dem Proteinsyntheseassay sowie auch in dem DNA-Assay. Die 24 Stunden MED für Cytochalasin B war 1,0 μg/ml in dem Proteinsyntheseassay und 0,1 μg/ml in dem DNA-Syntheseassay. Beide Assays ergaben eine MED von angenähert 0,1 μg/ml für eine 120 Stunden Exposition von Staurosporin.
  • Therapeutische Cytochalasin C und Cytochalasin D-Wirkstoffe wurden in 24 und 48 Stunden Expositionen unter Verwendung der gleichen Verdünnungen getestet, wie sie oben für Cytochalasin B beschrieben sind. In 24 Stunden zeigte Cytochalasin C eine MED von 1,0 μg/ml in dem Proteinsyntheseassay und eine MED 0,01 μg/ml in dem DNA-Syntheseassay. In 24 Stunden zeigte Cytochalasin C eine MED von 0,1 μg/ml in dem Proteinsyntheseassay, und 0,01 μg/ml in dem DNA-Syntheseassay. Cytochalasin D zeigte eine MED von 1,0 μg/ml in dem 24 Stunden Proteinsyntheseassay, und eine MED von 0,1 μg/ml in dem 24 Stunden DNA-Syntheseassay. Eine 48 Stunden Exposition für Cytochalasin D ergab eine MED im Bereich zwischen 0,1 und 0,01 μg/ml sowohl in den Proteinsynthese- als auch DNA-Syntheseassays.
  • BEISPIEL 11
  • Migrationshemmung der glatten Gefäßmuskelzellen
  • Es wurden Kratzassays gemäß dem folgenden Protokoll durchgeführt, um das Ausmaß der Migrationshemmung der glatten Gefäßmuskelzellen durch Cytochalasin B zu bestimmen:
  • Glatte Gefäßmuskelzellen (BO54) wurden aus Explantaten des glatten Aortenmuskels vom Pavian erhalten, wie in BEISPIEL 10 beschrieben. Die Zellen wurden in flachbödigen 6 Well-Gewebekulturplatten gezüchtet, die etwa 5 ml Medium enthielten. Die glatten Gefäßmuskelzellen wurden mit 200.000 Zellen/Well plattiert und bei 37°C in einem befeuchteten 5% CO2 Inkubator für 18 Stunden platziert. Die Wells wurden dann mit einem sterilen Teil einer einschneidigen Rasierklinge abgekratzt, die mit einer Klemme oder einer Pinzette gehalten wurde, und wurden aseptisch mit einem 90°-Winkel in Kontakt mit dem Boden des Wells gebracht. Die Zellen von der kleinen Fläche entlang dem Kratzer wurden mit einem sterilen Baumwollspitzenapplikator entfernt, während die Klinge in Kontakt mit dem Boden des Wells war. Nach der Inkubation zeigt das Vorhandensein der Zellen in der "abgekratzten" Fläche die Zellmigration über die Kratzlinie hinweg an. Eine Kontrollinkubation zeigte eine signifikante Zellmigration und dient als Standard, gegenüber dem die Migration der Zellen, die dem therapeutischen Wirkstoff ausgesetzt waren, verglichen wird.
  • Kurz gesagt, wurde eine Vorratslösung von Cytochalasin B (Simga Chemical Co.) in Dimethylsulfoxid (DMSO) mit 1 mg/ml hergestellt. Testverdünnungen von Cytochalasin B oder Kontrollmedium wurden hinzugefügt. Jedes Experiment enthielt zwei Sätze von Platten:
    Satz A: Testwirkstoff-Exposition für nur 1, 3, 6, 8 und 10 Tage; und
    Satz B: Testwirkstoff-Exposition für 1, 3, 6, 8 und 10 Tage, gefolgt von einer siebentägigen Erholungszeit mit Kontrollmedium.
  • Am Ende der zeitgesteuerten Expositionen wurden beide Plattensätze fixiert (10% Formalin in PBS) und gefärbt (0,02% Kristallviolett). Die Testkonzentrationen für Cytochalasin B waren 1, 01 und 0,01 μg/ml, und eingeschlossen war eine negative Mediumkontrolle. Frisches Medium und Medikament wurden drei Mal pro Woche zugeführt.
  • Tabelle 4 zeigt die Ergebnisse dieser Experimente. In dieser Tabelle bezeichnet "M" den Migrationsgrad, wobei – = keine Migration; +1 = minimal; +2 = mäßig; +3 = moderat; und +4 = deutlich (maximale Dichte; Grenze der Zellkontakthemmung) Migration glatter Gefäßmuskelzellen in den freien Bereich neben dem Kratzer. In dieser Tabelle bezeichnet "T" einen morphologischen Toxizitätsgrad; wobei – = keine Toxizität; +1 = minimal; +2 = mäßig; +3 = moderat; und +4 = deutliche Toxizität. Die Migrationsergebnisse sind ausgedrückt als "Grad in dem freien Bereich des Wells; Grad in einem ungestörten Bereich des Wells). Die Toxizitätswerte repräsentieren einen Grad für alle Zellen in jedem Well.
  • Die Daten zeigen an, dass Cytochalasin B die Migration glatter Gefäßmuskelzellen in dem freien Bereich benachbart dem Kratzer hemmt (+1 bis +2) bei einer Dosis von 0,1 μg/ml mit nur minimaler (– bis +1) morphologischer Toxizität. Die Daten zeigen auch, dass die behandelten Zellen (0,1 μg/ml) die Migrationsfähigkeit wiedergewinnen (+3 bis +4) nach der Entfernung des therapeutischen Wirkstoffs, auch nach 10 Tagen fortlaufender Exposition dem therapeutischen Wirkstoff.
  • Tabelle 4 KRATZ-MIGRATIONSASSAY: MIGRATIONSHEMMUNG GLATTER GEFÄSSMUSKELZELLEN DURCH CYTOCHALASIN B
    Figure 00950001
  • BEISPIEL 12
  • Cytotoxische Effekte des therapeutischen Wirkstoffs auf glatte Gefäßmuskelzellen – Puls- und kontinuierliche Exposition
  • Glatte Gefäßmuskelzellen wurden einem therapeutischen Wirkstoff in einem von zwei Expositionsformaten ausgesetzt:
  • Puls-Exposition: Das Puls-Expositionsprotokoll ist oben in BEISPIEL 8 beschrieben (siehe "Morphologische Toxizitätsauswertung – Puls-Exposition").
  • Kontinuierliche Exposition:
  • Es wurde die gleiche Methodik für die morphologische Toxizitätsauswertung der kontinuierlichen Exposition angewendet wie für die Puls-Exposition, mit der
  • Ausnahme, dass die Testwells kontinuierlich dem therapeutischen Wirkstoff in dem Medium während der Expositionsdauer ausgesetzt wurden. Das Medium und der therapeutische Wirkstoff wurden aus jedem Well täglich abgesaugt, einschließlich von dem unbehandelten Kontrollwell, und wurden mit 1 ml frischem Medium und therapeutischem Wirkstoff ersetzt (oder Medium allein für die Kontrollwells). Es folgte eine Reinkubation, bis jeder der stufigen Auswertungspunkte des langfristigen kontinuierlichen Expositionsprotokolls erreicht war. Diese gestuften Auswertungszeitpunkte lagen bei 6, 24, 48, 72, 96, 120, 168, 216 und 264 Stunden. Zu der bezeichneten Zeitdauer wurden die jeweiligen Zellen fixiert, gefärbt und ausgewertet, wie in dem Puls-Expositionsprotokoll. Die Ergebnisse eines kontinuierlichen Expositionsexperiments sind in Tabelle 5 für Suramin, Staurosporin und Cytochalasin B gezeigt. Die in Tabelle 5 dargebotenen 5 Minuten- und 24 Stundendaten sind Korrelate der Daten, die in den 10A, 10B und 10C enthalten sind.
  • Figure 00970001
  • In einer in vitro-wirksamen Dosierung zeigten Cytochalasin B (1 μg/ml; eine antimigratorische konzentrationswirksame Dosis) und Staurosporin (1 ng/ml; eine antiproliferative wirksame Dosis) einen Toxizitätsgrad von 1 (minimal) bzw. 2 (mäßig). Unabhängige Studien haben aufgezeigt, dass ein Grad von 3 (moderat) oder weniger für einen cytostatischen, antiproliferativen Wirkstoff der vorliegenden Erfindung bevorzugt ist.
  • BEISPIEL 13
  • In vivo BRDU Assay: Hemmung der Glatten-Gefäßmuskel-Proliferation
  • BRDU Assay:
  • In vivo Glatte-Gefäßmuskel-Proliferation wurde quantifiziert durch Messung der Aufnahme des Basisanalogen 5-Borm-2'-deoxyuridin (BRDU, erhältlich bei Sigma Chemical Co.) in DNA während der zellulären DNA-Synthese und Proliferation. Die BRDU-Aufnahme wurde histochemisch mittels monoklonaler Anti-BRDU-Antikörper aufgezeigt. Diese einstündige Pulsmarkierung gestattet die Auswertung der Zellenanzahl, die während der Pulsperiode einer Teilung unterliegen.
  • Das oben beschriebene BRDU-Pulsmarkierungsprotokoll wird als Standardauswertungstechnik mit in vivo Schweine-Gefäßstudien angewendet. Die folgenden operativen und Behandlungsprozeduren (hierin z. B. in den Beispielen 7 und 11 diskutiert) und einer postoperativen Erholungsdauer wurden die Schweine sediert und 1 Stunde vor dem Sammeln des Gewebes mit BRDU gepulst.
  • Kurz gesagt, die Schweine wurden durch intramuskuläre Injektion mit Triletaminhydrochlorid und Xylazin sediert (wie in Beispiel 7, "Allgemeine Pathologie und histologische Auswertung"). Das BRDU wurde dann intravenös über die laterale Ohrvene verabreicht. Jedem 30–40 Pfund Schwein wurden zwei ml BRDU bei einer Konzentration von 50 mg/ml verabreicht. Eine Stunde später wurden die Schweine durch intravenös verabreichtes Pentobarbital getötet. Dann wurden Testarteriensegmente entfernt (ein Segment enthielt ein proximal angeordnetes normales Gefäß, und falls möglich, distal in Bezug auf das behandelte Arteriensegment). Die Arteriensegmente wurden in 2 mm Abständen durchschnitten; der Reihenfolge nach in Cryoformen mit O.C.T. (optimaler Schneidtemperatur) Verbindung (Tissue Tek®, Miles Laboratories, Inc., Elkhart, IN) angeordnet; und in flüssigem Sticktstoff gefroren. Die Blöcke wurden auf 5 Mikrometer geschnitten und mittels der folgenden Prozedur immunohistologisch gefärbt, um BRDU zu erfassen:
  • BRDU-markierte Zellerfassung:
  • Nach der BRDU (1 g BRDU, verdünnt in 17 ml sterilem Wasser und 3 ml 1 N NaOH) Pulsmarkierung, Entfernung und Schnitt des Testarteriensegments (wie oben), liefert die immunohistochemische Färbung mit monoklonalem BRDU-Antikörper ein visuelles Mittel zur Bestimmung eines Mitoseindex über eine bestimmte Zeitperiode. Die immunohistochemische Färbemethode wurde wie folgt durchgeführt:
    • 1) 5 μm Schnitte der Testarterie wurden in kaltem Aceton (–20°C) für 10 Minuten dehydriert;
    • 2) die Schnitte wurden auf Glasmikroskopobjektträgern angebracht, und die Objektträger wurden in einem 37°C-Ofen für 10 Minuten getrocknet;
    • 3) die Objektträger wurden in PBS für 10 Minuten rehydriert;
    • 4) die Objektträger wurden einer Feulgensäure-Hydrolyse mittels 1 N HCl unterzogen, worin vor der Prozedur zwei Aliquots 1N HCl auf 37°C und 60°C vorgewärmt waren;
    • 5) die Objektträger wurden mit 1 ml 1 N HCl bei 37°C für 1 Minute gespült;
    • 6) die Objektträger wurden auf 60°C 1 N HCl für 15 Minuten überführt;
    • 7) die Objektträger wurden mit 1 ml 1 N HCl bei 37°C für 1 Minute gespült;
    • 8) die Objektträger wurden bei Raumtemperatur PBS gewaschen, mittels 3 Wechseln von PBS in 5 Minutenintervallen;
    • 9) endogene kreuzreaktive Orte an den Sektionen wurden mit normalem Ziegenserum (1 : 25 in PBS) für 20 Minuten blockiert;
    • 10) die Objektträger wurden mit PBS gewaschen wie in Schritt 8;
    • 11) die Schnitte wurden mit Maus-anti-BRDU-Antikörper (DAKO Corporation, Carpinteria, CA) mit 10 μg/ml für 30 Minuten inkubiert;
    • 12) die Objektträger wurden mit PBS gewaschen wie in Schritt 8;
    • 13) die Schnitte wurden mit Meerrettichperoxidase markiertem (HRPO)-Ziegen-anti-Maus-IgG, (Jackson Immunoresearch Laboratories, Inc., West Grove, PA; Verdünnung 1 : 20 in PBS) und 4% humanem AB-Serum für 30 Minuten inkubiert;
    • 14) die Objektträger wurden mit PBS gewaschen wie in Schritt 8;
    • 15) die Schnitte wurden mit Farbstoff (3,3'-Diaminobenzidin (DAB; Sigma) mit 5 mg/ml in 200 ml PBS) und 200 μl von 30% H2O2 für 10 Minuten inkubiert;
    • 16) die Objektträger wurden mit PBS gewaschen wie in Schritt 8;
    • 17) die Proben wurden mit Gill I Hämatoxylin gegengefärbt (Gill 1 Lerner Laboratories, Pittsburgh, PA; 30 Eintauchungen);
    • 18) die Objektträger wurden mit PBS gewaschen wie in Schritt 8; mit Bläuelösung gespült (1 g Lithiumcarbonat in 500 ml dH2O); mit deionisiertem Wasser gewaschen; und
    • 19) die Testproben wurden dann dehydriert, gereinigt und mit Deckglas versehen.
  • Als Schlussfolgerung dieser Prozedur zeigt eine positive immunohistologische Färbung an der Reaktionsstelle(n) eine braune Farbe.
  • Cytocidale Wirkstoffe hemmten die BRDU-Aufnahme relativ zu einer PBS-Kontrolle; jedoch hemmten Cytochalasin B und Staurosporin die BRDU-Aufnahme (d. h. Zellproliferation), ohne die glatten Gefäßmuskelzellen abzutöten. Die Anzahl der mit BRDU markierten glatten Gefäßmuskelzellen wurde bei 400-facher Vergrößerung wie folgt zugeordnet:
    • 1 = ≤ 1/Hochleistungsfeld (HPF);
    • 2 = 2 bis 5/HPF;
    • 3 = > 5 bis ≤ 10/HPF; und
    • 4 = > 10/HPF.
  • Sowohl Cytochalasin B als auch Staurosporin hemmten die Proliferation für 24 Stunden nach einem Ballontrauma (Grad 1), was einen BRDU-Markierungsgrad ergibt, äquivalent jenem einer vortraumatischen Grundlinie (Grad 1). PBS und monoklonale Antikörperkontrollen zeigten einen Grad von 2,5 bis 4 BRDU-Markierung während der gleichen Zeitdauer. Vier Tage nach dem Trauma zeigten die Arterien, die mit Cytochalasin B oder Staurosporin behandelt wurden, sowie die PBS- und monoklonalen Antikörperkontrollen einen BRDU-Markierungsgrad von 4. Die antiproliferativen, nicht cytocidalen Eigenschaften von Cytochalasin B und Staurosporin legen nahe, dass diese Wirkstoffe für die Dauerfreigabe-Dosierungsformulierungen zur Reduktion von Gefäßstenose geeignet sind.
  • BEISPIEL 14
  • Biologische Stentung von ballontraumatisierten Schweinarterien
  • Verwendung von Cytochalasin B
  • Ballontraumatisierte Schweinearterien, die mit Cytochalasin B behandelt worden waren, zeigten einen größeren Lumenquerschnitt an den 4 Tage und 3 Wochen Postbehandlungszeitpunkten im Vergleich zu Arterien, die mit anderen Testwirkstoffen behandelt waren, oder Kontrollen. Zehn Femoralarterien (zwei Arterien, erhalten von jedem der 5 Schweine, die gemäß dem in Beispiel 7 beschriebenen Einzeldosisprotokoll behandelt worden waren) wurden histologisch ausgewertet. Der maximale Lumenquerschnitt jeder Arterie wurde aus digitalisierten mikroskopischen Bildern mit einem BQ System IV computierisierten morphometrischen Analysesystem (R & M Biometrics, Inc., Nashville, TN) gemessen und berechnet. Dieses Experiment wurde mit 5 zusätzlichen Schweinen (zwei Arterien pro Schwein; Cytochalasin B-Dosis = 0,1 μg/ml, Einwirkung für 3 Minuten bei 1 atm Druck; gleiche Zeitpunkte) wiederholt. Die aus den zwei Experimenten erhaltenen Daten wurden zusammengefasst. Es wurde eine Vergrößerung des Lumenquerschnitts an dem 3 Wochen nach Cytochalasin B-Behandlungszeitpunkt beobachtet.
  • Der Lumenquerschnitt der traumatisierten und Cytochalasin B-behandelten Arteriensegmente wurden auch mit dem Lumenquerschnitt des normalen unbehandelten Bereichs der Femoralarterie proximal des Testbereichs verglichen. Die Ergebnisse zeigten, dass der Lumenquerschnitt in dem Testbereich angenähert zwei Mal so groß war wie der Bereich des normalen Kontrollsegments derselben Arterie. Die negativen Kontrollwirkstoffe, PBS und monoklonaler Antikörper NR-AN-01, zeigten keine Vergrößerung oder eine leichte Verringerung des Lumenquerschnitts im Vergleich zu dem normalen Kontrollsegment derselben Arterie.
  • Eine Cytochalasin B-Dosis-Antwortstudie wurde dann an 10 Schweinen, nach dem in Beispiel 7 beschriebenen Experimentalprotokoll, durchgeführt. Kurz gesagt, beide Arterien in jedem von zwei Schweinen wurden mit einer der folgenden Dosen Cytochalasin B behandelt: 0,0 μg/ml (d. h. eine PBS-Negativkontrolle); 0,01 μg/ml; 0,10 μg/ml; 1,0 μg/ml; und 10,0 μg/ml. Der Wirkstoff wurde durch einen intraluminalen Katheter bei 1 atm Druck für 3 Minuten verabreicht, und die Arterien wurden 3 Wochen später durch das oben beschriebene morphometrische Analysesystem ausgewertet. Das VerhäΠtnis des behandelten Arterienlumenquerschnitts zu dem proximalen normalen Arterienlumenquerschnitt wurde als prozentuale Änderung in der behandelten gegenüber der normalen Fläche bestimmt. Ein signifikanter Schwelleneffekt wurde bei Dosierungen von 0,1 μg/ml (= 140%ige Zunahme) zu 1,0 μg/ml beobachtet (14). Die 10 μg/ml Dosis schien für die glatten Gefäßmuskelzellen toxisch zu sein (Daten nicht gezeigt). Die Subschwellenwertdosis (0,01 μg/ml) und negative Kontrolle (PBS) zeigten eine a ± ≈20%ige Änderung im Lumenquerschnitt. Diese Daten legen nahe, dass Cytochalasin B als "biologischer Stent" wirkt, wenn es traumatisierten Arterien verabreicht wird.
  • BEISPIEL 15
  • Direkte Konjugation von NR-AN-01-Antikörper zu funktionellen carboxylischen Gruppen eines Latexpartikels
  • Antikörper-beschichtete Latexpartikel (ein Modell einer Antikörperbeschichteten Dauerfreigabe-Dosierungsform) kann mittels der folgenden aseptischen Technik erhalten werden:
  • Konjugation:
  • Zu 4 ml 0,05 M Natriumborat, pH 8,5, enthaltend 0,01% Tween-200 (Polyoxyethylensorbitanmonolaurat, Sigma) wird 0,5 ml PBS, enthaltend 5 mg NR-AN-01 monoklonaler Antikörper, hinzugefügt. Zu dieser Lösung bei Raumtemperatur werden, unter Mischen, 2,5 ml einer wässrigen Suspension, enthaltend 50 μg carboxylierter Latexpartikel mit 1 μm Durchmesser, hinzugefügt. Unmittelbar danach wird 0,50 ml Wasser, enthaltend 100 mg frisch gelösten 1(3-Dimethylaminopropyl)3-ethylcarbodiimid HCl unter Vermischen hinzugefügt. Die Lösung wird dann unter Schütteln für 1–2 Stunden bei Raumtemperatur inkubiert. Das Reaktionsgemisch wird dann mit 50 ml 50 mM Phosphatpuffer, pH 6,6 verdünnt, enthaltend 0,2% Gelatinstabilisator (Phosphat/Gelatinpufter). Dieses Gemisch wird mit 40.000 × g für 2 Stunden bei 4–10°C zentrifugiert. Der Überstand wird dekantiert und der Pellet wird in 50 ml Phosphat/Gelatinpufter mittels leistungsschwacher Beschallung für 10 Sekunden resuspendiert. Die Zentrifugation wird wiederholt, und der Pellet wird zwei Mal resuspendiert, gefolgt durch Resuspension in dem Phosphat/Gelatinpuffer. Die konjugierten Partikel werden dann mittels Standardprotokollen und Sorbitolexzipienten lyophilisiert.
  • Charakterisierung:
    • (a) Größeneinteilung: Die Partikelgrößenhomogenität wird durch Laseranisotropie oder, für Partikel größer als 1 μm, durch mikroskopische Untersuchung bewertet.
    • (b) Spezifische Bindungsbewertung: Die spezifische Bindung an glatte Muskelzellen wird durch histologische Untersuchung des Gewebes oder von Zellpellet-Mikrotomscheibchen nach der Inkubation von Protein/Peptidkonjugaten mit konjugierten Partikeln bestimmt, mit oder ohne Blockerprotein/peptid, das in dem Inkubationsgemisch enthalten ist. Bevorzugte Detektionstechniken beinhalten zweite Antikörperassays (d. h. Anti-Maus-IgG) oder Kompetitionsassays (d. h. radioszintigraphische Detektion in Verbindung mit radioisotopisch markierten Protein/Peptidkonjugaten).
    • (c) Bewertung des Ausmaßes der Protein/Peptidderivatisierung: Diese Bestimmung erfolgt durch Beschichtung der Latexpartikel mit einem radioisotopisch markierten Antikörper, gefolgt durch Detektion der Radioaktivität, die den beschichteten Partikeln zugeordnet ist.
  • Die Charakterisierung der Antikörper-beschichteten Partikel ist in Tabelle 6 beschrieben.
  • Tabelle 6 Charakterisierung von NR-AN-01-beschichteten Latexparikeln
    Figure 01040001
  • Der Partikelaggregationseffekt des pH während der Antikörperkonjugation ist in Tabelle 7 angegeben.
  • Tabelle 7 pH-Effekt während Antikörper-Konjugation-Partkelaggregation
    Figure 01050001
  • Diese Daten legen nahe, dass Proteine oder Peptide direkt mit Dauerfreigabe-Dosierungsformen der vorliegenden Erfindung konjugiert werden können. Insbesondere werden Polymilch-glycolsäurepartikulate, die terminate Carboxylsäuregruppen aufweisen, gemäß der hierin beschriebenen Prozedur oder alternativen Prozeduren, die in der Beschreibung hiervon beschrieben sind, konjugiert.
  • Zitate
    • 1. Popma J. J. et al. 1990. Factors influencing restenosis after coronary angioplasty. Amer. J. Med. 88: 16N–24N.
    • 2. Fanelli, C. et al. 1990. Restenosis following coronary angioplasty. Amer. Heart Jour. 119: 357–368.
    • 3. Johnson, D. E. et al. 1988. Coronary atherectomy: Light microscopic and immunochemical study of excised tissue (abstract). Circulation 78 (Suppl. II): II-82.
    • 4. Liu. M. W. et al. 1989. Restenosis after coronary angiopiasty; Potential biologic determinants and role of intimal hyperplasia. Circulation 79: 1374–1387.
    • 5. Clowes, A. W. et al. 1985. Significance of quiescent smooth muscle migration in the injured rat carotic artery. Circ. Res. 56: 139–145.
    • 6. Goldman. B. et al. I 987. Influence of pressure on permeability of normal and diseased muscular arteries zu horseradish peroxidase: A new catheter approach. Atherosclerosis 65: 215–225.
    • 7. Wolinsky, H. et al. 1990. Use of a perforated balloon catheter to deliver concentrated heparin into the wall of the normal canine artery. JACC 15 (2): 475–481.
    • 8. Nabel, E. G. et al. 1989. Recombinant gene expression in vivo within endothelial cells of the arterial wall. Science 244: 1342–1344.
    • 9. Middlebrook, J. L. et al. 1989. Binding of T-2 toxin to eukaryotic cell ribosomes. Biochem. Pharm. 38 (18): 3101–3110.
    • 10. Barbacid, M. et al. 1974. Binding of [acetyl-"C] trichodermin to the peptidyl vansferase center of eukaryotic ribosomes. Eur. J. Biochem. 44: 437–444
    • 11. Sclingemann et al. 1990. Am. J. Pathol. 136: 1393–1405.
    • 12. Steele P. M., Chesebro J. H.. Stanson A. W.. et al. 1985. Balloon angioplasty: natural history of the pathophysiological response to injury in a pig model. Circ. Res. 57: 105–112.
    • 13. Schwartz R. S.. Murphy J. G., Edwards W. D.. Camrud A. R, Vliestra R. E., Holmes D. R. Restenosis after balloon angioplasty. A practical proliferative model in porcine coronary arteries. Circulation 1990; 82: 2190–2200.
    • 14. Bumol, T. F. and R. A. Reisfeld. 1982. Unique gelycoprotein-proteoglycan complex defined by monoclonal antibody on human melanoma cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79: 1245–1249.
  • Während die bevorzugte Ausführung der Erfindung dargestellt und beschrieben wurde, versteht es sich, dass darin verschiedene Änderungen vorgenommen werden können, ohne vom Geist und Umfang der Erfindung abzuweichen.

Claims (15)

  1. Intravaskulärer Stent, umfassend eine Matrix und eine Beschichtung auf der Matrix, worin die Beschichtung und die Matrix zusammen eine Menge eines zytoskelettalen Inhibitors und/oder eine zytostatische Menge eines Inhibitors glatter Muskelzellproliferation aufweist, die wirksam ist, um nach dem Platzieren des Stents in einem Gefäß eine Stenose zu unterbinden oder eine Restenose zu reduzieren.
  2. Intravaskulärer Stent nach Anspruch 1, der dazu ausgelegt ist, eine differenzielle Freigaberate des Inhibitors aus dem Stent vorzusehen.
  3. Intravaskulärer Stent nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, der dazu ausgelegt ist, nach Angioplastie eine aufgeweitete Gefäßluminquerschnittsfläche beizubehalten.
  4. Intravaskulärer Stent nach einem der Ansprüche 1 bis 3, worin der Stent eine biologisch abbaubare oder eine poröse oder permäable nicht biologisch abbaubare Beschichtung aufweist, die den Inhibitor aufweist.
  5. Intravaskulärer Stent nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin der Inhibitor in einer Dauerfreigabe-Dosierungsform vorliegt.
  6. Intravaskulärer Stent nach Anspruch 5, worin der Stent eine Beschichtung aufweist, die die Dauerfreigabe-Dosierungsform aufweist.
  7. Intravaskulärer Stent nach Anspruch 5, worin die Dauerfreigabeform des Inhibitors ein Bindungspeptid oder Protein aufweist, das in der Lage ist, spezifisch an glatte Muskelzellen, Stromazellen oder die interstitiale Matrix, welche die glatten Muskelzellen umgibt, zu binden.
  8. Intravaskulärer Stent nach einem der Ansprüche 1 bis 7, worin der intravaskuläre Stent Metall oder Kunststoff aufweist.
  9. Intravaskulärer Stent nach einem der Ansprüche 1 bis 7, worin die Matrix des Stents aus einem biologisch abbaubaren Material gebildet ist.
  10. Intravaskulärer Stent nach einem der Ansprüche 1 bis 9, worin der zytoskelettale Inhibitor ein Zytochalasin oder ein Analog davon aufweist.
  11. Intravaskulärer Stent nach Anspruch 10, worin der zytoskelettale Inhibitor Zytochalasin B aufweist.
  12. Intravaskulärer Stent nach einem der Ansprüche 1 bis 11, worin die Beschichtung eine Menge des zytoskelettalen Inhibitors aufweist und die Matrix eine zytostatische Menge des Inhibitors glatter Muskelzellproliferation aufweist.
  13. Verfahren zum Herstellen eines beschichteten intravaskulären Stents, wie nach einem der Ansprüche 1 bis 12 beansprucht, und wirksam ist, um eine Gefäßlumenquerschnittsfläche in einem Säuger beizubehalten, wobei das Verfahren umfasst: Behandeln des intravaskulären Stents mit einer Menge eines zytoskelettaren Inhibitors und/oder einer zytostatischen Menge eines Inhibitors glatter Muskelproliferation, die wirksam ist, eine Stenose zu unterbinden oder eine Restenose des Gefäßes zu reduzieren, indem nach dem Platzieren des Stents in dem Gefäß eine glatte Gefäßmuskelzellproliferation und eine Migration gehemmt wird.
  14. Verfahren nach Anspruch 13 zur Herstellung eines intravaskulären Stents, der eine Matrix und eine Beschichtung auf der Matrix aufweist, wobei das Verfahren umfasst: Einführen der Menge eines zytoskelettaren Inhibitors in die Beschichtung und der zytostatischen Menge eines Inhibitors glatter Muskelzellproliferation in die Matrix des intravaskulären Stents.
  15. Verfahren nach Anspruch 13 zur Herstellung eines beschichteten intravaskulären Stents, der eine Matrix und eine Beschichtung auf der Matrix aufweist, wobei das Verfahren umfasst: Einführen der zytostatischen Menge eines Inhibitors glatter Muskelzellproliferation in die Beschichtung und der Menge eines zytoskelettaren Inhibitors in die Matrix des intravaskulären Stents.
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Families Citing this family (381)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6515009B1 (en) 1991-09-27 2003-02-04 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US5811447A (en) * 1993-01-28 1998-09-22 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US5981568A (en) 1993-01-28 1999-11-09 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US6663881B2 (en) 1993-01-28 2003-12-16 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US20070117862A1 (en) * 1993-02-22 2007-05-24 Desai Neil P Novel formulations of pharmacological agents, methods for the preparation thereof and methods for the use thereof
ATE502664T1 (de) * 1993-07-19 2011-04-15 Angiotech Pharm Inc Herstellungsmethode eines stents mit anti- angiogener zusammensetzung
US20030203976A1 (en) 1993-07-19 2003-10-30 William L. Hunter Anti-angiogenic compositions and methods of use
US20030083733A1 (en) * 1997-10-10 2003-05-01 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US20020091433A1 (en) * 1995-04-19 2002-07-11 Ni Ding Drug release coated stent
US6099562A (en) * 1996-06-13 2000-08-08 Schneider (Usa) Inc. Drug coating with topcoat
US5837313A (en) * 1995-04-19 1998-11-17 Schneider (Usa) Inc Drug release stent coating process
US6774278B1 (en) * 1995-06-07 2004-08-10 Cook Incorporated Coated implantable medical device
US7550005B2 (en) 1995-06-07 2009-06-23 Cook Incorporated Coated implantable medical device
US7611533B2 (en) 1995-06-07 2009-11-03 Cook Incorporated Coated implantable medical device
US6441025B2 (en) 1996-03-12 2002-08-27 Pg-Txl Company, L.P. Water soluble paclitaxel derivatives
EP0932399B1 (de) * 1996-03-12 2006-01-04 PG-TXL Company, L.P. Wasserlösliche paclitaxel-prodrogen
BR9808109A (pt) * 1997-03-31 2000-03-08 Neorx Corp Inibidor terapêutico de células vasculares da musculatura lisa
AU6959898A (en) * 1997-04-11 1998-11-11 David J. Grainger Compounds and therapies for the prevention of vascular and non-vascular pathol ogies
US6240616B1 (en) * 1997-04-15 2001-06-05 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method of manufacturing a medicated porous metal prosthesis
US10028851B2 (en) * 1997-04-15 2018-07-24 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Coatings for controlling erosion of a substrate of an implantable medical device
US8172897B2 (en) * 1997-04-15 2012-05-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Polymer and metal composite implantable medical devices
US6776792B1 (en) * 1997-04-24 2004-08-17 Advanced Cardiovascular Systems Inc. Coated endovascular stent
WO1998056312A1 (en) * 1997-06-13 1998-12-17 Scimed Life Systems, Inc. Stents having multiple layers of biodegradable polymeric composition
EP2272504A3 (de) * 1997-06-27 2014-02-26 Abraxis BioScience, LLC Zusammensetzungen von pharmakologischen Wirkstoffen, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
US20030199425A1 (en) * 1997-06-27 2003-10-23 Desai Neil P. Compositions and methods for treatment of hyperplasia
US6306166B1 (en) 1997-08-13 2001-10-23 Scimed Life Systems, Inc. Loading and release of water-insoluble drugs
CA2298543A1 (en) * 1997-08-13 1999-02-25 James Barry Loading and release of water-insoluble drugs
US6485514B1 (en) 1997-12-12 2002-11-26 Supergen, Inc. Local delivery of therapeutic agents
US7208011B2 (en) * 2001-08-20 2007-04-24 Conor Medsystems, Inc. Implantable medical device with drug filled holes
US7208010B2 (en) * 2000-10-16 2007-04-24 Conor Medsystems, Inc. Expandable medical device for delivery of beneficial agent
US6241762B1 (en) 1998-03-30 2001-06-05 Conor Medsystems, Inc. Expandable medical device with ductile hinges
US20040254635A1 (en) 1998-03-30 2004-12-16 Shanley John F. Expandable medical device for delivery of beneficial agent
US7713297B2 (en) * 1998-04-11 2010-05-11 Boston Scientific Scimed, Inc. Drug-releasing stent with ceramic-containing layer
US20020099438A1 (en) * 1998-04-15 2002-07-25 Furst Joseph G. Irradiated stent coating
US20030040790A1 (en) * 1998-04-15 2003-02-27 Furst Joseph G. Stent coating
US8070796B2 (en) * 1998-07-27 2011-12-06 Icon Interventional Systems, Inc. Thrombosis inhibiting graft
US7967855B2 (en) * 1998-07-27 2011-06-28 Icon Interventional Systems, Inc. Coated medical device
WO2000006244A2 (en) * 1998-07-30 2000-02-10 Hainfeld James F Loading metal particles into cell membrane vesicles and metal particle use for imaging and therapy
WO2000010622A1 (en) 1998-08-20 2000-03-02 Cook Incorporated Coated implantable medical device
CA2338788A1 (en) * 1998-09-02 2000-03-09 Scimed Life Systems, Inc. Drug delivery device for stent
CA2353606A1 (en) * 1998-12-03 2000-06-08 Boston Scientific Limited Stent having drug crystals thereon
US20050171594A1 (en) * 1998-12-31 2005-08-04 Angiotech International Ag Stent grafts with bioactive coatings
US20020065546A1 (en) * 1998-12-31 2002-05-30 Machan Lindsay S. Stent grafts with bioactive coatings
US6120847A (en) * 1999-01-08 2000-09-19 Scimed Life Systems, Inc. Surface treatment method for stent coating
US6333347B1 (en) 1999-01-29 2001-12-25 Angiotech Pharmaceuticals & Advanced Research Tech Intrapericardial delivery of anti-microtubule agents
US6419692B1 (en) 1999-02-03 2002-07-16 Scimed Life Systems, Inc. Surface protection method for stents and balloon catheters for drug delivery
US6156373A (en) * 1999-05-03 2000-12-05 Scimed Life Systems, Inc. Medical device coating methods and devices
US6790228B2 (en) * 1999-12-23 2004-09-14 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Coating for implantable devices and a method of forming the same
DE60037264D1 (de) * 1999-10-06 2008-01-10 Penn State Res Found System und vorrichtung zur vermeidung von restenose in körpergefässen
EP1235598A2 (de) * 1999-11-12 2002-09-04 Angiotech Pharmaceuticals, Inc. Zusammensetzung von ein kombination von radioaktive therapie und zellzyklus inhibitoren
US20070055367A1 (en) * 2000-03-15 2007-03-08 Orbus Medical Technologies, Inc. Medical device with coating that promotes endothelial cell adherence and differentiation
US8088060B2 (en) 2000-03-15 2012-01-03 Orbusneich Medical, Inc. Progenitor endothelial cell capturing with a drug eluting implantable medical device
US8460367B2 (en) * 2000-03-15 2013-06-11 Orbusneich Medical, Inc. Progenitor endothelial cell capturing with a drug eluting implantable medical device
EP1263484B1 (de) * 2000-03-15 2007-05-16 OrbusNeich Medical, Inc. Beschichtung welche ein anhaften von endothelzellen stimuliert
US20160287708A9 (en) * 2000-03-15 2016-10-06 Orbusneich Medical, Inc. Progenitor Endothelial Cell Capturing with a Drug Eluting Implantable Medical Device
US20070141107A1 (en) * 2000-03-15 2007-06-21 Orbusneich Medical, Inc. Progenitor Endothelial Cell Capturing with a Drug Eluting Implantable Medical Device
US20030229393A1 (en) * 2001-03-15 2003-12-11 Kutryk Michael J. B. Medical device with coating that promotes cell adherence and differentiation
US20050271701A1 (en) * 2000-03-15 2005-12-08 Orbus Medical Technologies, Inc. Progenitor endothelial cell capturing with a drug eluting implantable medical device
US9522217B2 (en) 2000-03-15 2016-12-20 Orbusneich Medical, Inc. Medical device with coating for capturing genetically-altered cells and methods for using same
US20020077290A1 (en) 2000-03-17 2002-06-20 Rama Bhatt Polyglutamic acid-camptothecin conjugates and methods of preparation
AU3313000A (en) * 2000-03-22 2001-10-03 Zenon Kyriakides Coronary artery stent covered with endothelin receptor antagonist
AU2001263760A1 (en) 2000-04-11 2001-11-07 Polyzenix Gmbh Poly-tri-fluoro-ethoxypolyphosphazene coverings and films
WO2001078626A1 (en) * 2000-04-13 2001-10-25 Sts Biopolymers, Inc. Targeted therapeutic agent release devices and methods of making and using the same
US6527801B1 (en) * 2000-04-13 2003-03-04 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biodegradable drug delivery material for stent
US7875283B2 (en) * 2000-04-13 2011-01-25 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biodegradable polymers for use with implantable medical devices
US8109994B2 (en) 2003-01-10 2012-02-07 Abbott Cardiovascular Systems, Inc. Biodegradable drug delivery material for stent
US8236048B2 (en) * 2000-05-12 2012-08-07 Cordis Corporation Drug/drug delivery systems for the prevention and treatment of vascular disease
US20040243097A1 (en) * 2000-05-12 2004-12-02 Robert Falotico Antiproliferative drug and delivery device
US6776796B2 (en) 2000-05-12 2004-08-17 Cordis Corportation Antiinflammatory drug and delivery device
US20050002986A1 (en) * 2000-05-12 2005-01-06 Robert Falotico Drug/drug delivery systems for the prevention and treatment of vascular disease
ATE343969T1 (de) * 2000-09-29 2006-11-15 Cordis Corp Beschichtete medizinische geräte
US7261735B2 (en) * 2001-05-07 2007-08-28 Cordis Corporation Local drug delivery devices and methods for maintaining the drug coatings thereon
US20020051730A1 (en) * 2000-09-29 2002-05-02 Stanko Bodnar Coated medical devices and sterilization thereof
US20020111590A1 (en) * 2000-09-29 2002-08-15 Davila Luis A. Medical devices, drug coatings and methods for maintaining the drug coatings thereon
DE60112318D1 (de) 2000-10-16 2005-09-01 Conor Medsystems Inc Expandierbare medizinische vorrichtung zum zuführen eines heilmittels
US6783793B1 (en) * 2000-10-26 2004-08-31 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Selective coating of medical devices
US9080146B2 (en) 2001-01-11 2015-07-14 Celonova Biosciences, Inc. Substrates containing polyphosphazene as matrices and substrates containing polyphosphazene with a micro-structured surface
CN1492759A (zh) 2001-01-16 2004-04-28 Ѫ�������������ι�˾ 预防或治疗血液透析中血管通路和其它血管移植物故障的装置及方法
US20040204756A1 (en) * 2004-02-11 2004-10-14 Diaz Stephen Hunter Absorbent article with improved liquid acquisition capacity
US20040073294A1 (en) 2002-09-20 2004-04-15 Conor Medsystems, Inc. Method and apparatus for loading a beneficial agent into an expandable medical device
GB0104383D0 (en) 2001-02-22 2001-04-11 Psimedica Ltd Cancer Treatment
US7771468B2 (en) * 2001-03-16 2010-08-10 Angiotech Biocoatings Corp. Medicated stent having multi-layer polymer coating
DE10115740A1 (de) 2001-03-26 2002-10-02 Ulrich Speck Zubereitung für die Restenoseprophylaxe
US6613083B2 (en) * 2001-05-02 2003-09-02 Eckhard Alt Stent device and method
US6565659B1 (en) * 2001-06-28 2003-05-20 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Stent mounting assembly and a method of using the same to coat a stent
ATE340551T1 (de) 2001-08-17 2006-10-15 Polyzenix Gmbh Vorrichtung auf basis von nitinol mit polyphosphazenüberzug
US7842083B2 (en) 2001-08-20 2010-11-30 Innovational Holdings, Llc. Expandable medical device with improved spatial distribution
US20040249443A1 (en) * 2001-08-20 2004-12-09 Shanley John F. Expandable medical device for treating cardiac arrhythmias
US7056338B2 (en) * 2003-03-28 2006-06-06 Conor Medsystems, Inc. Therapeutic agent delivery device with controlled therapeutic agent release rates
JP2003079647A (ja) * 2001-09-10 2003-03-18 Yasuyoshi Uchida 血管治療用器具
US7285304B1 (en) * 2003-06-25 2007-10-23 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Fluid treatment of a polymeric coating on an implantable medical device
US7989018B2 (en) * 2001-09-17 2011-08-02 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Fluid treatment of a polymeric coating on an implantable medical device
US6863683B2 (en) * 2001-09-19 2005-03-08 Abbott Laboratoris Vascular Entities Limited Cold-molding process for loading a stent onto a stent delivery system
US7776379B2 (en) * 2001-09-19 2010-08-17 Medlogics Device Corporation Metallic structures incorporating bioactive materials and methods for creating the same
US20030060873A1 (en) * 2001-09-19 2003-03-27 Nanomedical Technologies, Inc. Metallic structures incorporating bioactive materials and methods for creating the same
US7195640B2 (en) * 2001-09-25 2007-03-27 Cordis Corporation Coated medical devices for the treatment of vulnerable plaque
US7108701B2 (en) * 2001-09-28 2006-09-19 Ethicon, Inc. Drug releasing anastomosis devices and methods for treating anastomotic sites
US20030065377A1 (en) * 2001-09-28 2003-04-03 Davila Luis A. Coated medical devices
US20030065345A1 (en) * 2001-09-28 2003-04-03 Kevin Weadock Anastomosis devices and methods for treating anastomotic sites
US20030077310A1 (en) * 2001-10-22 2003-04-24 Chandrashekhar Pathak Stent coatings containing HMG-CoA reductase inhibitors
US20030077279A1 (en) * 2001-10-24 2003-04-24 Cedars-Sinai Medical Center Methods for treating vascular disease by inhibiting toll-like receptor-4
US8740973B2 (en) * 2001-10-26 2014-06-03 Icon Medical Corp. Polymer biodegradable medical device
US20030088307A1 (en) * 2001-11-05 2003-05-08 Shulze John E. Potent coatings for stents
US6939376B2 (en) 2001-11-05 2005-09-06 Sun Biomedical, Ltd. Drug-delivery endovascular stent and method for treating restenosis
WO2003041756A1 (en) * 2001-11-08 2003-05-22 Dsb Invest Holding Sa Endoluminal devices coated with latrunculin to prevent ingrowth of cells
US20030148986A1 (en) * 2001-12-17 2003-08-07 Cedars-Sinai Medical Center Methods for treating vascular disease by inhibiting myeloid differentiation factor 88
US20030194421A1 (en) * 2001-12-28 2003-10-16 Angiotech Pharmaceuticals, Inc. Treatment of uveitis
ATE495769T1 (de) 2002-07-12 2011-02-15 Cook Inc Beschichtete medizinische vorrichtung
US8016881B2 (en) * 2002-07-31 2011-09-13 Icon Interventional Systems, Inc. Sutures and surgical staples for anastamoses, wound closures, and surgical closures
JP3887588B2 (ja) * 2002-08-30 2007-02-28 株式会社リガク X線回折による応力測定法
DE10244847A1 (de) 2002-09-20 2004-04-01 Ulrich Prof. Dr. Speck Medizinische Vorrichtung zur Arzneimittelabgabe
JP2006500996A (ja) * 2002-09-26 2006-01-12 エンドバスキュラー デバイセス インコーポレイテッド 溶出性生体適合性移植可能医療器具を介してマイトマイシンを送達するための装置および方法
KR20050084599A (ko) * 2002-09-26 2005-08-26 안지오테크 인터내셔날 아게 혈관주위 랩
EP1549254A4 (de) * 2002-09-27 2007-11-07 Medlogics Device Corp Implantierbarer stent mit modifizierten enden
US20060271168A1 (en) * 2002-10-30 2006-11-30 Klaus Kleine Degradable medical device
US20040143321A1 (en) * 2002-11-08 2004-07-22 Conor Medsystems, Inc. Expandable medical device and method for treating chronic total occlusions with local delivery of an angiogenic factor
US20040142014A1 (en) * 2002-11-08 2004-07-22 Conor Medsystems, Inc. Method and apparatus for reducing tissue damage after ischemic injury
CA2513721C (en) * 2002-11-08 2013-04-16 Conor Medsystems, Inc. Method and apparatus for reducing tissue damage after ischemic injury
US7758881B2 (en) * 2004-06-30 2010-07-20 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Anti-proliferative and anti-inflammatory agent combination for treatment of vascular disorders with an implantable medical device
US8435550B2 (en) * 2002-12-16 2013-05-07 Abbot Cardiovascular Systems Inc. Anti-proliferative and anti-inflammatory agent combination for treatment of vascular disorders with an implantable medical device
AU2003300022A1 (en) * 2002-12-30 2004-07-29 Angiotech International Ag Silk-containing stent graft
US20040202692A1 (en) * 2003-03-28 2004-10-14 Conor Medsystems, Inc. Implantable medical device and method for in situ selective modulation of agent delivery
US20050010170A1 (en) * 2004-02-11 2005-01-13 Shanley John F Implantable medical device with beneficial agent concentration gradient
ATE526038T1 (de) * 2003-03-28 2011-10-15 Innovational Holdings Llc Implantierbares medizinprodukt mit kontinuierlichem mittel-konzentrationsgefälle
US8109987B2 (en) 2003-04-14 2012-02-07 Tryton Medical, Inc. Method of treating a lumenal bifurcation
US7306580B2 (en) * 2003-04-16 2007-12-11 Cook Incorporated Medical device with therapeutic agents
US20050038498A1 (en) * 2003-04-17 2005-02-17 Nanosys, Inc. Medical device applications of nanostructured surfaces
US7972616B2 (en) * 2003-04-17 2011-07-05 Nanosys, Inc. Medical device applications of nanostructured surfaces
US20050221072A1 (en) * 2003-04-17 2005-10-06 Nanosys, Inc. Medical device applications of nanostructured surfaces
US7803574B2 (en) * 2003-05-05 2010-09-28 Nanosys, Inc. Medical device applications of nanostructured surfaces
US7186789B2 (en) * 2003-06-11 2007-03-06 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Bioabsorbable, biobeneficial polyester polymers for use in drug eluting stent coatings
US20050063937A1 (en) * 2003-09-16 2005-03-24 Cheng Li Multiple-arm peptide compounds, methods of manufacture and use in therapy
US7785653B2 (en) 2003-09-22 2010-08-31 Innovational Holdings Llc Method and apparatus for loading a beneficial agent into an expandable medical device
US7198675B2 (en) * 2003-09-30 2007-04-03 Advanced Cardiovascular Systems Stent mandrel fixture and method for selectively coating surfaces of a stent
US7208172B2 (en) * 2003-11-03 2007-04-24 Medlogics Device Corporation Metallic composite coating for delivery of therapeutic agents from the surface of implantable devices
WO2005049105A2 (en) * 2003-11-10 2005-06-02 Angiotech International Ag Medical implants and anti-scarring agents
US20050100577A1 (en) * 2003-11-10 2005-05-12 Parker Theodore L. Expandable medical device with beneficial agent matrix formed by a multi solvent system
WO2005044142A2 (en) * 2003-11-10 2005-05-19 Angiotech International Ag Intravascular devices and fibrosis-inducing agents
US20060085062A1 (en) * 2003-11-28 2006-04-20 Medlogics Device Corporation Implantable stent with endothelialization factor
US20050119723A1 (en) * 2003-11-28 2005-06-02 Medlogics Device Corporation Medical device with porous surface containing bioerodable bioactive composites and related methods
EP1699527A1 (de) * 2004-01-02 2006-09-13 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Mit lipoprotein hoher dichte beschichtete medizinprodukte
US7211108B2 (en) * 2004-01-23 2007-05-01 Icon Medical Corp. Vascular grafts with amphiphilic block copolymer coatings
WO2005086831A2 (en) * 2004-03-10 2005-09-22 Orbus Medical Technologies, Inc. Endothelial ligand binding coated medical device
US20050214339A1 (en) * 2004-03-29 2005-09-29 Yiwen Tang Biologically degradable compositions for medical applications
US20050220835A1 (en) * 2004-03-30 2005-10-06 Jayaraman Ramesh B Agent eluting bioimplantable devices and polymer systems for their preparation
US20050220836A1 (en) * 2004-03-31 2005-10-06 Robert Falotico Drug delivery device
EP2946666B1 (de) * 2004-04-30 2017-11-15 OrbusNeich Medical, Inc. Medizinische vorrichtung mit beschichtung zur erfassung von genetisch veränderten zellen und anwendungsverfahren dafür
US20050288481A1 (en) * 2004-04-30 2005-12-29 Desnoyer Jessica R Design of poly(ester amides) for the control of agent-release from polymeric compositions
US20050245905A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Schmidt Steven P Local drug-delivery system
EP1604697A1 (de) 2004-06-09 2005-12-14 J.A.C.C. GmbH Implantierbare Vorrichtung
US20050277696A1 (en) * 2004-06-14 2005-12-15 Igor Sokolov Novel use of cytotoxic drugs for treatment and prophylasxis of aging diseases by reversing the loss of elasticity of epithelial cells due to aging
US20050287287A1 (en) * 2004-06-24 2005-12-29 Parker Theodore L Methods and systems for loading an implantable medical device with beneficial agent
US8568469B1 (en) 2004-06-28 2013-10-29 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Stent locking element and a method of securing a stent on a delivery system
WO2006004774A2 (en) * 2004-06-28 2006-01-12 Stanford University Laulimalide analogues as therapeutic agents
US8241554B1 (en) 2004-06-29 2012-08-14 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method of forming a stent pattern on a tube
US20060009839A1 (en) * 2004-07-12 2006-01-12 Scimed Life Systems, Inc. Composite vascular graft including bioactive agent coating and biodegradable sheath
US7731890B2 (en) * 2006-06-15 2010-06-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Methods of fabricating stents with enhanced fracture toughness
US8747879B2 (en) * 2006-04-28 2014-06-10 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method of fabricating an implantable medical device to reduce chance of late inflammatory response
US8747878B2 (en) 2006-04-28 2014-06-10 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method of fabricating an implantable medical device by controlling crystalline structure
US8778256B1 (en) 2004-09-30 2014-07-15 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Deformation of a polymer tube in the fabrication of a medical article
US7971333B2 (en) * 2006-05-30 2011-07-05 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Manufacturing process for polymetric stents
US20060020330A1 (en) * 2004-07-26 2006-01-26 Bin Huang Method of fabricating an implantable medical device with biaxially oriented polymers
US20060041102A1 (en) * 2004-08-23 2006-02-23 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Implantable devices comprising biologically absorbable polymers having constant rate of degradation and methods for fabricating the same
US9283099B2 (en) * 2004-08-25 2016-03-15 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Stent-catheter assembly with a releasable connection for stent retention
EP1789029A2 (de) * 2004-08-30 2007-05-30 Interstitial Therapeutics Verfahern und zusammensetzungen zur behandlung von zellproliferation
US7229471B2 (en) * 2004-09-10 2007-06-12 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Compositions containing fast-leaching plasticizers for improved performance of medical devices
US7901451B2 (en) 2004-09-24 2011-03-08 Biosensors International Group, Ltd. Drug-delivery endovascular stent and method for treating restenosis
US8043553B1 (en) 2004-09-30 2011-10-25 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Controlled deformation of a polymer tube with a restraining surface in fabricating a medical article
US7875233B2 (en) 2004-09-30 2011-01-25 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method of fabricating a biaxially oriented implantable medical device
US8173062B1 (en) 2004-09-30 2012-05-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Controlled deformation of a polymer tube in fabricating a medical article
ATE448813T1 (de) * 2004-10-21 2009-12-15 Medtronic Inc Angiotensin-(1-7) freisetzende polymerbeschichtete medizinische vorrichtung zur reduzierung von restenose und zur verbesserung von endothelzellfunktionen
US20060088571A1 (en) * 2004-10-21 2006-04-27 Medtronic Vascular, Inc. Biocompatible and hemocompatible polymer compositions
US20210299056A9 (en) 2004-10-25 2021-09-30 Varian Medical Systems, Inc. Color-Coded Polymeric Particles of Predetermined Size for Therapeutic and/or Diagnostic Applications and Related Methods
US9114162B2 (en) 2004-10-25 2015-08-25 Celonova Biosciences, Inc. Loadable polymeric particles for enhanced imaging in clinical applications and methods of preparing and using the same
US9107850B2 (en) 2004-10-25 2015-08-18 Celonova Biosciences, Inc. Color-coded and sized loadable polymeric particles for therapeutic and/or diagnostic applications and methods of preparing and using the same
US20060093647A1 (en) * 2004-10-29 2006-05-04 Villafana Manuel A Multiple layer coating composition
US20060127443A1 (en) * 2004-12-09 2006-06-15 Helmus Michael N Medical devices having vapor deposited nanoporous coatings for controlled therapeutic agent delivery
USH2260H1 (en) 2005-02-17 2011-07-05 Angiotech International Ag Stents combined with paclitaxel derivatives
US8735394B2 (en) * 2005-02-18 2014-05-27 Abraxis Bioscience, Llc Combinations and modes of administration of therapeutic agents and combination therapy
EP2301531B1 (de) 2005-02-18 2018-06-06 Abraxis BioScience, LLC Kombinationen und modi zur verabreichung therapeutischer mittel und kombinationstherapie
US7540995B2 (en) 2005-03-03 2009-06-02 Icon Medical Corp. Process for forming an improved metal alloy stent
US20060201601A1 (en) * 2005-03-03 2006-09-14 Icon Interventional Systems, Inc. Flexible markers
WO2006096251A2 (en) * 2005-03-03 2006-09-14 Icon Medical Corp. Improved metal alloys for medical device
WO2006110197A2 (en) * 2005-03-03 2006-10-19 Icon Medical Corp. Polymer biodegradable medical device
US8323333B2 (en) * 2005-03-03 2012-12-04 Icon Medical Corp. Fragile structure protective coating
US20060200048A1 (en) * 2005-03-03 2006-09-07 Icon Medical Corp. Removable sheath for device protection
US20060264914A1 (en) * 2005-03-03 2006-11-23 Icon Medical Corp. Metal alloys for medical devices
US9107899B2 (en) 2005-03-03 2015-08-18 Icon Medical Corporation Metal alloys for medical devices
US20060216431A1 (en) * 2005-03-28 2006-09-28 Kerrigan Cameron K Electrostatic abluminal coating of a stent crimped on a balloon catheter
US20060224226A1 (en) * 2005-03-31 2006-10-05 Bin Huang In-vivo radial orientation of a polymeric implantable medical device
US7381048B2 (en) * 2005-04-12 2008-06-03 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Stents with profiles for gripping a balloon catheter and molds for fabricating stents
US7291166B2 (en) * 2005-05-18 2007-11-06 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Polymeric stent patterns
US7622070B2 (en) * 2005-06-20 2009-11-24 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method of manufacturing an implantable polymeric medical device
US20070038176A1 (en) * 2005-07-05 2007-02-15 Jan Weber Medical devices with machined layers for controlled communications with underlying regions
US7658880B2 (en) * 2005-07-29 2010-02-09 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Polymeric stent polishing method and apparatus
US7297758B2 (en) * 2005-08-02 2007-11-20 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method for extending shelf-life of constructs of semi-crystallizable polymers
US20070038290A1 (en) * 2005-08-15 2007-02-15 Bin Huang Fiber reinforced composite stents
US7476245B2 (en) * 2005-08-16 2009-01-13 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Polymeric stent patterns
US20070045255A1 (en) * 2005-08-23 2007-03-01 Klaus Kleine Laser induced plasma machining with an optimized process gas
US9248034B2 (en) * 2005-08-23 2016-02-02 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Controlled disintegrating implantable medical devices
US20070045252A1 (en) * 2005-08-23 2007-03-01 Klaus Kleine Laser induced plasma machining with a process gas
US7452372B2 (en) * 2005-09-22 2008-11-18 Boston Scientific Scimed, Inc. Bifurcated stent
US7867547B2 (en) 2005-12-19 2011-01-11 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Selectively coating luminal surfaces of stents
US20070151961A1 (en) * 2006-01-03 2007-07-05 Klaus Kleine Fabrication of an implantable medical device with a modified laser beam
US20070156230A1 (en) 2006-01-04 2007-07-05 Dugan Stephen R Stents with radiopaque markers
US7951185B1 (en) 2006-01-06 2011-05-31 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Delivery of a stent at an elevated temperature
US20070179219A1 (en) * 2006-01-31 2007-08-02 Bin Huang Method of fabricating an implantable medical device using gel extrusion and charge induced orientation
US20070224235A1 (en) * 2006-03-24 2007-09-27 Barron Tenney Medical devices having nanoporous coatings for controlled therapeutic agent delivery
US8187620B2 (en) * 2006-03-27 2012-05-29 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical devices comprising a porous metal oxide or metal material and a polymer coating for delivering therapeutic agents
US20070231361A1 (en) * 2006-03-28 2007-10-04 Medtronic Vascular, Inc. Use of Fatty Acids to Inhibit the Growth of Aneurysms
US7964210B2 (en) * 2006-03-31 2011-06-21 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Degradable polymeric implantable medical devices with a continuous phase and discrete phase
US20070254012A1 (en) * 2006-04-28 2007-11-01 Ludwig Florian N Controlled degradation and drug release in stents
US8003156B2 (en) * 2006-05-04 2011-08-23 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Rotatable support elements for stents
US8304012B2 (en) 2006-05-04 2012-11-06 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method for drying a stent
US7985441B1 (en) 2006-05-04 2011-07-26 Yiwen Tang Purification of polymers for coating applications
US20070264303A1 (en) * 2006-05-12 2007-11-15 Liliana Atanasoska Coating for medical devices comprising an inorganic or ceramic oxide and a therapeutic agent
US7761968B2 (en) * 2006-05-25 2010-07-27 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method of crimping a polymeric stent
US7951194B2 (en) 2006-05-26 2011-05-31 Abbott Cardiovascular Sysetms Inc. Bioabsorbable stent with radiopaque coating
US20130325104A1 (en) 2006-05-26 2013-12-05 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Stents With Radiopaque Markers
US8343530B2 (en) * 2006-05-30 2013-01-01 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Polymer-and polymer blend-bioceramic composite implantable medical devices
US7959940B2 (en) * 2006-05-30 2011-06-14 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Polymer-bioceramic composite implantable medical devices
US20070282434A1 (en) * 2006-05-30 2007-12-06 Yunbing Wang Copolymer-bioceramic composite implantable medical devices
US7842737B2 (en) 2006-09-29 2010-11-30 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Polymer blend-bioceramic composite implantable medical devices
US20080058916A1 (en) * 2006-05-31 2008-03-06 Bin Huang Method of fabricating polymeric self-expandable stent
US8486135B2 (en) 2006-06-01 2013-07-16 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Implantable medical devices fabricated from branched polymers
US20070281073A1 (en) * 2006-06-01 2007-12-06 Gale David C Enhanced adhesion of drug delivery coatings on stents
US20070282433A1 (en) * 2006-06-01 2007-12-06 Limon Timothy A Stent with retention protrusions formed during crimping
US8034287B2 (en) 2006-06-01 2011-10-11 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Radiation sterilization of medical devices
US20080124372A1 (en) * 2006-06-06 2008-05-29 Hossainy Syed F A Morphology profiles for control of agent release rates from polymer matrices
US20070286941A1 (en) * 2006-06-13 2007-12-13 Bin Huang Surface treatment of a polymeric stent
US8603530B2 (en) * 2006-06-14 2013-12-10 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Nanoshell therapy
US8048448B2 (en) * 2006-06-15 2011-11-01 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Nanoshells for drug delivery
US8535372B1 (en) 2006-06-16 2013-09-17 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Bioabsorbable stent with prohealing layer
US8333000B2 (en) 2006-06-19 2012-12-18 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Methods for improving stent retention on a balloon catheter
US20070290412A1 (en) * 2006-06-19 2007-12-20 John Capek Fabricating a stent with selected properties in the radial and axial directions
US8017237B2 (en) 2006-06-23 2011-09-13 Abbott Cardiovascular Systems, Inc. Nanoshells on polymers
US9072820B2 (en) * 2006-06-26 2015-07-07 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Polymer composite stent with polymer particles
US8128688B2 (en) * 2006-06-27 2012-03-06 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Carbon coating on an implantable device
US20070299511A1 (en) * 2006-06-27 2007-12-27 Gale David C Thin stent coating
US8815275B2 (en) 2006-06-28 2014-08-26 Boston Scientific Scimed, Inc. Coatings for medical devices comprising a therapeutic agent and a metallic material
WO2008002778A2 (en) * 2006-06-29 2008-01-03 Boston Scientific Limited Medical devices with selective coating
US7794776B1 (en) 2006-06-29 2010-09-14 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Modification of polymer stents with radiation
US7740791B2 (en) * 2006-06-30 2010-06-22 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Method of fabricating a stent with features by blow molding
US20080009938A1 (en) * 2006-07-07 2008-01-10 Bin Huang Stent with a radiopaque marker and method for making the same
US7823263B2 (en) 2006-07-11 2010-11-02 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Method of removing stent islands from a stent
US7757543B2 (en) 2006-07-13 2010-07-20 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Radio frequency identification monitoring of stents
WO2008008291A2 (en) * 2006-07-13 2008-01-17 Icon Medical Corp. Stent
US7998404B2 (en) * 2006-07-13 2011-08-16 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Reduced temperature sterilization of stents
US20080014244A1 (en) * 2006-07-13 2008-01-17 Gale David C Implantable medical devices and coatings therefor comprising physically crosslinked block copolymers
US7794495B2 (en) * 2006-07-17 2010-09-14 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Controlled degradation of stents
US7886419B2 (en) * 2006-07-18 2011-02-15 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Stent crimping apparatus and method
US8016879B2 (en) * 2006-08-01 2011-09-13 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Drug delivery after biodegradation of the stent scaffolding
US20080091262A1 (en) * 2006-10-17 2008-04-17 Gale David C Drug delivery after biodegradation of the stent scaffolding
US8703169B1 (en) 2006-08-15 2014-04-22 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Implantable device having a coating comprising carrageenan and a biostable polymer
US9173733B1 (en) 2006-08-21 2015-11-03 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Tracheobronchial implantable medical device and methods of use
US20080051881A1 (en) * 2006-08-24 2008-02-28 Feng James Q Medical devices comprising porous layers for the release of therapeutic agents
US7923022B2 (en) * 2006-09-13 2011-04-12 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Degradable polymeric implantable medical devices with continuous phase and discrete phase
JP2010503469A (ja) 2006-09-14 2010-02-04 ボストン サイエンティフィック リミテッド 薬物溶出性皮膜を有する医療デバイス
EP2084310A1 (de) * 2006-10-05 2009-08-05 Boston Scientific Limited Durch plasmaelektrolytische abscheidung gebildete polymerfreie überzüge für medizinische vorrichtungen
KR101083471B1 (ko) 2006-10-10 2011-11-16 셀로노바 바이오사이언시즈, 인코포레이티드 폴리포스파젠을 갖는 생체인공심장판막
US20080103584A1 (en) 2006-10-25 2008-05-01 Biosensors International Group Temporal Intraluminal Stent, Methods of Making and Using
US20100055147A1 (en) * 2006-10-27 2010-03-04 Edze Jan Tijsma Angiotensin (1-7) eluting stent
US7981150B2 (en) 2006-11-09 2011-07-19 Boston Scientific Scimed, Inc. Endoprosthesis with coatings
US8998846B2 (en) 2006-11-20 2015-04-07 Lutonix, Inc. Drug releasing coatings for balloon catheters
US8414526B2 (en) 2006-11-20 2013-04-09 Lutonix, Inc. Medical device rapid drug releasing coatings comprising oils, fatty acids, and/or lipids
US8414909B2 (en) 2006-11-20 2013-04-09 Lutonix, Inc. Drug releasing coatings for medical devices
US20080276935A1 (en) 2006-11-20 2008-11-13 Lixiao Wang Treatment of asthma and chronic obstructive pulmonary disease with anti-proliferate and anti-inflammatory drugs
US8425459B2 (en) 2006-11-20 2013-04-23 Lutonix, Inc. Medical device rapid drug releasing coatings comprising a therapeutic agent and a contrast agent
US8414525B2 (en) 2006-11-20 2013-04-09 Lutonix, Inc. Drug releasing coatings for medical devices
US8414910B2 (en) 2006-11-20 2013-04-09 Lutonix, Inc. Drug releasing coatings for medical devices
US9700704B2 (en) 2006-11-20 2017-07-11 Lutonix, Inc. Drug releasing coatings for balloon catheters
US9737640B2 (en) 2006-11-20 2017-08-22 Lutonix, Inc. Drug releasing coatings for medical devices
US8099849B2 (en) 2006-12-13 2012-01-24 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Optimizing fracture toughness of polymeric stent
US8597673B2 (en) 2006-12-13 2013-12-03 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Coating of fast absorption or dissolution
US8431149B2 (en) 2007-03-01 2013-04-30 Boston Scientific Scimed, Inc. Coated medical devices for abluminal drug delivery
US8070797B2 (en) 2007-03-01 2011-12-06 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical device with a porous surface for delivery of a therapeutic agent
US20080243228A1 (en) * 2007-03-28 2008-10-02 Yunbing Wang Implantable medical devices fabricated from block copolymers
US8067054B2 (en) 2007-04-05 2011-11-29 Boston Scientific Scimed, Inc. Stents with ceramic drug reservoir layer and methods of making and using the same
US8262723B2 (en) 2007-04-09 2012-09-11 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Implantable medical devices fabricated from polymer blends with star-block copolymers
US8147769B1 (en) 2007-05-16 2012-04-03 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Stent and delivery system with reduced chemical degradation
US7976915B2 (en) * 2007-05-23 2011-07-12 Boston Scientific Scimed, Inc. Endoprosthesis with select ceramic morphology
US9056155B1 (en) 2007-05-29 2015-06-16 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Coatings having an elastic primer layer
US7829008B2 (en) * 2007-05-30 2010-11-09 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Fabricating a stent from a blow molded tube
US7959857B2 (en) * 2007-06-01 2011-06-14 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Radiation sterilization of medical devices
US8293260B2 (en) * 2007-06-05 2012-10-23 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Elastomeric copolymer coatings containing poly (tetramethyl carbonate) for implantable medical devices
US8202528B2 (en) * 2007-06-05 2012-06-19 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Implantable medical devices with elastomeric block copolymer coatings
US20080306582A1 (en) * 2007-06-05 2008-12-11 Yunbing Wang Implantable medical devices with elastomeric copolymer coatings
US8425591B1 (en) 2007-06-11 2013-04-23 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Methods of forming polymer-bioceramic composite medical devices with bioceramic particles
US8109904B1 (en) 2007-06-25 2012-02-07 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Drug delivery medical devices
US8048441B2 (en) 2007-06-25 2011-11-01 Abbott Cardiovascular Systems, Inc. Nanobead releasing medical devices
US7901452B2 (en) * 2007-06-27 2011-03-08 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Method to fabricate a stent having selected morphology to reduce restenosis
US7955381B1 (en) 2007-06-29 2011-06-07 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Polymer-bioceramic composite implantable medical device with different types of bioceramic particles
US9192697B2 (en) 2007-07-03 2015-11-24 Hemoteq Ag Balloon catheter for treating stenosis of body passages and for preventing threatening restenosis
US8002823B2 (en) * 2007-07-11 2011-08-23 Boston Scientific Scimed, Inc. Endoprosthesis coating
US7942926B2 (en) * 2007-07-11 2011-05-17 Boston Scientific Scimed, Inc. Endoprosthesis coating
EP2187988B1 (de) 2007-07-19 2013-08-21 Boston Scientific Limited Endoprothese mit nicht verschmutzender oberfläche
US8815273B2 (en) * 2007-07-27 2014-08-26 Boston Scientific Scimed, Inc. Drug eluting medical devices having porous layers
US7931683B2 (en) 2007-07-27 2011-04-26 Boston Scientific Scimed, Inc. Articles having ceramic coated surfaces
US8221822B2 (en) * 2007-07-31 2012-07-17 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical device coating by laser cladding
WO2009020520A1 (en) * 2007-08-03 2009-02-12 Boston Scientific Scimed, Inc. Coating for medical device having increased surface area
US20090118813A1 (en) * 2007-11-02 2009-05-07 Torsten Scheuermann Nano-patterned implant surfaces
US8029554B2 (en) * 2007-11-02 2011-10-04 Boston Scientific Scimed, Inc. Stent with embedded material
US7938855B2 (en) * 2007-11-02 2011-05-10 Boston Scientific Scimed, Inc. Deformable underlayer for stent
US20090118809A1 (en) * 2007-11-02 2009-05-07 Torsten Scheuermann Endoprosthesis with porous reservoir and non-polymer diffusion layer
US20090118818A1 (en) * 2007-11-02 2009-05-07 Boston Scientific Scimed, Inc. Endoprosthesis with coating
US8216632B2 (en) 2007-11-02 2012-07-10 Boston Scientific Scimed, Inc. Endoprosthesis coating
JP5519524B2 (ja) 2007-12-06 2014-06-11 ナノシス・インク. 吸収性ナノ強化止血構造体及び包帯材料
US8319002B2 (en) * 2007-12-06 2012-11-27 Nanosys, Inc. Nanostructure-enhanced platelet binding and hemostatic structures
WO2009131911A2 (en) 2008-04-22 2009-10-29 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical devices having a coating of inorganic material
WO2009132176A2 (en) 2008-04-24 2009-10-29 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical devices having inorganic particle layers
WO2009135125A2 (en) 2008-05-01 2009-11-05 Bayer Schering Pharma Ag Catheter balloon drug adherence techniques and methods
EP2303350A2 (de) 2008-06-18 2011-04-06 Boston Scientific Scimed, Inc. Endoprothesen-beschichtung
US9198968B2 (en) 2008-09-15 2015-12-01 The Spectranetics Corporation Local delivery of water-soluble or water-insoluble therapeutic agents to the surface of body lumens
US8114429B2 (en) 2008-09-15 2012-02-14 Cv Ingenuity Corp. Local delivery of water-soluble or water-insoluble therapeutic agents to the surface of body lumens
US8257722B2 (en) 2008-09-15 2012-09-04 Cv Ingenuity Corp. Local delivery of water-soluble or water-insoluble therapeutic agents to the surface of body lumens
US8128951B2 (en) 2008-09-15 2012-03-06 Cv Ingenuity Corp. Local delivery of water-soluble or water-insoluble therapeutic agents to the surface of body lumens
US9512196B2 (en) 2008-09-22 2016-12-06 Cedars-Sinai Medical Center Short-form human MD-2 as a negative regulator of toll-like receptor 4 signaling
EP2328911A4 (de) 2008-09-22 2012-03-14 Cedars Sinai Medical Center Kurzes menschliches md-2 als negativer regulator der toll-like-rezeptor-4-signalisierung
US8500687B2 (en) 2008-09-25 2013-08-06 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Stent delivery system having a fibrous matrix covering with improved stent retention
US8076529B2 (en) * 2008-09-26 2011-12-13 Abbott Cardiovascular Systems, Inc. Expandable member formed of a fibrous matrix for intraluminal drug delivery
US8049061B2 (en) 2008-09-25 2011-11-01 Abbott Cardiovascular Systems, Inc. Expandable member formed of a fibrous matrix having hydrogel polymer for intraluminal drug delivery
US8226603B2 (en) * 2008-09-25 2012-07-24 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Expandable member having a covering formed of a fibrous matrix for intraluminal drug delivery
US8231980B2 (en) * 2008-12-03 2012-07-31 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical implants including iridium oxide
US8071156B2 (en) * 2009-03-04 2011-12-06 Boston Scientific Scimed, Inc. Endoprostheses
UA93922C2 (ru) 2009-03-20 2011-03-25 Михаил Викторович Разуменко Способ получения пептидов, которые специфически распознают клетки определенного типа, и предназначены для терапевтических целей
US8287937B2 (en) * 2009-04-24 2012-10-16 Boston Scientific Scimed, Inc. Endoprosthese
US20100274352A1 (en) * 2009-04-24 2010-10-28 Boston Scientific Scrimed, Inc. Endoprosthesis with Selective Drug Coatings
CN102427834A (zh) 2009-04-28 2012-04-25 苏尔莫迪克斯公司 用于递送生物活性剂的装置和方法
US20100285085A1 (en) * 2009-05-07 2010-11-11 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Balloon coating with drug transfer control via coating thickness
US9265633B2 (en) 2009-05-20 2016-02-23 480 Biomedical, Inc. Drug-eluting medical implants
US9309347B2 (en) 2009-05-20 2016-04-12 Biomedical, Inc. Bioresorbable thermoset polyester/urethane elastomers
US8888840B2 (en) * 2009-05-20 2014-11-18 Boston Scientific Scimed, Inc. Drug eluting medical implant
US8992601B2 (en) 2009-05-20 2015-03-31 480 Biomedical, Inc. Medical implants
CA3186201A1 (en) * 2009-05-20 2010-11-25 Lyra Therapeutics, Inc. Self-expandable medical device comprising polymeric strands and coatings thereon
US20110319987A1 (en) 2009-05-20 2011-12-29 Arsenal Medical Medical implant
US8366763B2 (en) 2009-07-02 2013-02-05 Tryton Medical, Inc. Ostium support for treating vascular bifurcations
WO2011005421A2 (en) 2009-07-10 2011-01-13 Boston Scientific Scimed, Inc. Use of nanocrystals for a drug delivery balloon
EP2453938B1 (de) 2009-07-17 2015-08-19 Boston Scientific Scimed, Inc. Nukleierung von wirkstofffreisetzungsballons für verbesserte kristallgrösse und -dichte
US8372133B2 (en) 2009-10-05 2013-02-12 480 Biomedical, Inc. Polymeric implant delivery system
WO2011057216A1 (en) * 2009-11-06 2011-05-12 The Pennsylvania State Research Foundation Bioconjugation of calcium phosphosilicate nanoparticles for selective targeting of cells in vivo
US8568471B2 (en) 2010-01-30 2013-10-29 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Crush recoverable polymer scaffolds
US8808353B2 (en) 2010-01-30 2014-08-19 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Crush recoverable polymer scaffolds having a low crossing profile
US8398916B2 (en) 2010-03-04 2013-03-19 Icon Medical Corp. Method for forming a tubular medical device
US10660965B2 (en) 2010-03-29 2020-05-26 Abraxis Bioscience, Llc Methods of enhancing drug delivery and effectiveness of therapeutic agents
SI2552415T1 (sl) 2010-03-29 2017-03-31 Abraxis Bioscience, Llc Metode za zdravljenje raka
EP2380604A1 (de) 2010-04-19 2011-10-26 InnoRa Gmbh Verbesserte Beschichtungsformulierung zum Einritzen oder Schneiden von Ballonkathetern
AU2011261685B2 (en) 2010-06-04 2016-02-11 Abraxis Bioscience, Llc Methods of treatment of pancreatic cancer
WO2012031236A1 (en) 2010-09-02 2012-03-08 Boston Scientific Scimed, Inc. Coating process for drug delivery balloons using heat-induced rewrap memory
US10213529B2 (en) 2011-05-20 2019-02-26 Surmodics, Inc. Delivery of coated hydrophobic active agent particles
US9861727B2 (en) 2011-05-20 2018-01-09 Surmodics, Inc. Delivery of hydrophobic active agent particles
US9757497B2 (en) 2011-05-20 2017-09-12 Surmodics, Inc. Delivery of coated hydrophobic active agent particles
US8726483B2 (en) 2011-07-29 2014-05-20 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Methods for uniform crimping and deployment of a polymer scaffold
WO2013028208A1 (en) 2011-08-25 2013-02-28 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical device with crystalline drug coating
WO2013146376A1 (ja) 2012-03-27 2013-10-03 テルモ株式会社 コーティング組成物および医療機器
EP3219335B1 (de) 2012-03-27 2018-12-19 Terumo Kabushiki Kaisha Beschichtungszusammensetzung und medizinische vorrichtung
US9956385B2 (en) 2012-06-28 2018-05-01 The Spectranetics Corporation Post-processing of a medical device to control morphology and mechanical properties
US10898700B2 (en) 2012-10-26 2021-01-26 Urotronic, Inc. Balloon catheters for body lumens
WO2016172343A1 (en) 2015-04-24 2016-10-27 Urotronic, Inc. Drug coated balloon catheters for nonvascular strictures
US10850076B2 (en) 2012-10-26 2020-12-01 Urotronic, Inc. Balloon catheters for body lumens
CN111166942A (zh) 2012-10-26 2020-05-19 优敦力公司 用于非血管狭窄的药物涂层球囊导管
US10881839B2 (en) 2012-10-26 2021-01-05 Urotronic, Inc. Drug-coated balloon catheters for body lumens
US11504450B2 (en) 2012-10-26 2022-11-22 Urotronic, Inc. Drug-coated balloon catheters for body lumens
US10806830B2 (en) 2012-10-26 2020-10-20 Urotronic, Inc. Drug-coated balloon catheters for body lumens
US11246963B2 (en) 2012-11-05 2022-02-15 Surmodics, Inc. Compositions and methods for delivery of hydrophobic active agents
JP6438406B2 (ja) 2012-11-05 2018-12-12 サーモディクス,インコーポレイテッド 疎水性生理活性物質を送達するための組成物および方法
US10525171B2 (en) 2014-01-24 2020-01-07 The Spectranetics Corporation Coatings for medical devices
CN106535826A (zh) 2014-06-24 2017-03-22 怡康医疗股份有限公司 用于医疗装置的改进的金属合金
US9999527B2 (en) 2015-02-11 2018-06-19 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Scaffolds having radiopaque markers
US11904072B2 (en) 2015-04-24 2024-02-20 Urotronic, Inc. Drug coated balloon catheters for nonvascular strictures
US9700443B2 (en) 2015-06-12 2017-07-11 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Methods for attaching a radiopaque marker to a scaffold
WO2017151548A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 Mirus Llc Stent device for spinal fusion
CN109715224B (zh) 2016-09-19 2022-02-22 百多力股份公司 无聚合物的药物洗脱血管支架
US10898446B2 (en) 2016-12-20 2021-01-26 Surmodics, Inc. Delivery of hydrophobic active agents from hydrophilic polyether block amide copolymer surfaces
WO2018114992A1 (en) 2016-12-22 2018-06-28 Biotronik Ag Drug releasing coatings for medical devices and methods of making same
CN110573099B (zh) 2017-05-03 2023-01-03 美敦力瓦斯科尔勒公司 组织移除导管
US11690645B2 (en) 2017-05-03 2023-07-04 Medtronic Vascular, Inc. Tissue-removing catheter
US20200190219A1 (en) * 2017-07-14 2020-06-18 Horiba, Ltd. Method of inhibiting nonspecific binding to binding proteins that bind to surface molecules of exosomes or eukaryotic cell membranes immobilized on carrier
US11648135B2 (en) 2017-09-13 2023-05-16 Boston Scientific Scimed, Inc. Coated stent
EP3866867A4 (de) * 2018-10-18 2022-07-13 The Regents of the University of California Verfahren zur herstellung von modularen hydrogelen aus makromolekülen mit orthogonaler physikochemischer reaktion
US11357534B2 (en) 2018-11-16 2022-06-14 Medtronic Vascular, Inc. Catheter
US11819236B2 (en) 2019-05-17 2023-11-21 Medtronic Vascular, Inc. Tissue-removing catheter

Family Cites Families (585)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2914563A (en) 1957-08-06 1959-11-24 Wm S Merrell Co Therapeutic composition
BE564542A (de) 1957-02-05
US3168565A (en) 1959-11-20 1965-02-02 Richardson Merrell Inc Trifluoromethyl derivatives of amino triarylethanols, -ethanes, and -ethylenes
GB1015787A (en) 1962-08-03 1966-01-05 Giuseppe Carlo Sigurta Tris-(p-methoxyphenyl)ethylene derivatives
US3279996A (en) 1962-08-28 1966-10-18 Jr David M Long Polysiloxane carrier for controlled release of drugs and other agents
BE637389A (de) 1962-09-13
US3288806A (en) 1964-03-23 1966-11-29 Parke Davis & Co Alpha-(aminoethoxyphenyl)-alpha-alkylstilbenes
US3445473A (en) 1965-04-10 1969-05-20 Hoechst Ag 3-anilino-thiophene-4-carboxylic acids,esters,and amides
GB1205743A (en) 1966-07-15 1970-09-16 Nat Res Dev Surgical dilator
US3526005A (en) 1967-06-29 1970-09-01 Gulf General Atomic Inc Method of preparing an intravascular defect by implanting a pyrolytic carbon coated prosthesis
US3634517A (en) 1968-08-19 1972-01-11 Richardson Merrell Inc Triarylalkenones
US3738365A (en) 1969-07-22 1973-06-12 R Schulte Spring reinforced extensible catheter
US5521171A (en) 1975-03-31 1996-05-28 Sorenson; John R. J. Anti-inflammatory and anti-ulcer compounds and process
US5082834A (en) 1978-05-30 1992-01-21 Sorensen John R J Anti-inflammatory and anti-ulcer compounds and process
US4221785A (en) 1978-05-30 1980-09-09 Sorenson John R J Anti-inflammatory and anti-ulcer compounds and process
US3879516A (en) 1972-12-07 1975-04-22 Technibiotics Method of constructing a catheter
JPS5640710B2 (de) 1973-01-18 1981-09-22
US4070484A (en) 1973-01-18 1978-01-24 Kissei Pharmaceutical Co., Ltd. Antiallergic composition containing aromatic carboxylic amide derivatives and method of using the same
IT1070993B (it) 1973-12-24 1985-04-02 Bioindustria Spa Derivati del tiofene ad attivita antimicotica e tricomonicida
US3932627A (en) 1974-02-04 1976-01-13 Rescue Products, Inc. Siver-heparin-allantoin complex
US3952334A (en) 1974-11-29 1976-04-27 General Atomic Company Biocompatible carbon prosthetic devices
US4093709A (en) 1975-01-28 1978-06-06 Alza Corporation Drug delivery devices manufactured from poly(orthoesters) and poly(orthocarbonates)
US4230862A (en) 1975-10-28 1980-10-28 Eli Lilly And Company Antifertility compounds
US4323707A (en) 1975-10-28 1982-04-06 Eli Lilly And Company Antifertility compounds
US4133814A (en) 1975-10-28 1979-01-09 Eli Lilly And Company 2-Phenyl-3-aroylbenzothiophenes useful as antifertility agents
US4428963A (en) 1976-08-23 1984-01-31 Hoffmann-La Roche Inc. Novel thiophene derivatives
US4317915A (en) 1976-08-23 1982-03-02 Hoffmann-La Roche Inc. Novel thiophene derivatives
CH628628A5 (en) 1976-08-23 1982-03-15 Hoffmann La Roche Process for the preparation of cyclic compounds
JPS6012381B2 (ja) 1976-10-06 1985-04-01 久光製薬株式会社 温熱湿布剤
US4235988A (en) 1976-12-13 1980-11-25 Imperial Chemical Industries Limited Delivery means for biologically active agents
US4391797A (en) 1977-01-05 1983-07-05 The Children's Hospital Medical Center Systems for the controlled release of macromolecules
DE2861560D1 (en) 1977-11-28 1982-03-04 Barry Boettcher Complexes of bivalent copper, methods of preparation thereof and compositions containing said complexes
DE2817157A1 (de) 1978-04-17 1979-10-25 Schering Ag Verwendung von antioestrogenen und antigonadotrop wirkenden antiandrogenen zur prophylaxe und therapie der prostatahyperplasie
US4440754A (en) 1978-05-30 1984-04-03 Sorenson John R J Anti-inflammatory and anti-ulcer compounds and process
US4233968A (en) * 1978-07-26 1980-11-18 Shaw Jr Seth T IUD Arrangement
US4219520A (en) 1978-08-30 1980-08-26 Medical Evaluation Devices And Instruments Corp. Method of making thrombo-resistant non-thrombogenic objects formed from a uniform mixture of a particulate resin and colloidal graphite
US4239778A (en) 1978-09-12 1980-12-16 The University Of Illinois Foundation Azaprostanoic acid analogs and their use as inhibitors of platelet aggregation
US4732763A (en) 1978-10-17 1988-03-22 Stolle Research And Development Corporation Active/passive immunization of the internal female reproductive organs
US4219656A (en) 1978-10-24 1980-08-26 American Cyanamid Company 3,4-Disubstituted thiophenes
US4315028A (en) 1978-12-22 1982-02-09 Scheinberg Israel H Method of treatment of rheumatoid arthritis
US4292965A (en) 1978-12-29 1981-10-06 The Population Council, Inc. Intravaginal ring
ATE1418T1 (de) 1979-05-15 1982-08-15 Imperial Chemical Industries Plc 1-hydrocarbyloxyphenyl-1.2-diphenylalkenderivate, ihre herstellung und sie enthaltende pharmazeutische zusammensetzung.
US4382143A (en) 1979-07-23 1983-05-03 American Cyanamid Company Hypolipidemic and antiatherosclerotic novel (monosubstituted-amino)heteroaryl carboxylic acids and analogs
AU532174B2 (en) 1979-08-15 1983-09-22 Stephen James Beveridge Copper chelate compounds
US4487780A (en) 1979-09-18 1984-12-11 Scheinberg Israel H Method of treatment of rheumatoid arthritis
US4300244A (en) 1979-09-19 1981-11-17 Carbomedics, Inc. Cardiovascular grafts
US5658951A (en) 1980-03-07 1997-08-19 Research Corporation Technologies Diphenylcyclopropyl analogs
US4879315A (en) 1982-03-30 1989-11-07 The Board Of Regents For The University Of Oklahoma Cyclopropyl analogs as anti-estrogenic, anti-tumor and female fertility agents
US4282246A (en) 1980-03-07 1981-08-04 Pfizer Inc. Antidiabetic furancarboxylic and thiphenecarboxylic acids
US5658927A (en) 1980-03-07 1997-08-19 Research Corporation Technologies Diphenylcyclopropyl analogs
US5324736A (en) 1980-03-07 1994-06-28 Research Corporation Technologies, Inc. Diphenylcyclopropyl analogs as antiestrogenic and antitumor agents
US5098903A (en) 1980-03-07 1992-03-24 Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Diphenylcyclopropyl analogs as antiestrogenic and antitumor agents
EP0038867B1 (de) 1980-04-29 1983-09-28 Blendax-Werke R. Schneider GmbH &amp; Co. Zahnpasta
EP0038868B1 (de) 1980-04-29 1983-09-28 Blendax-Werke R. Schneider GmbH &amp; Co. Zahnpasta
US4442119A (en) 1980-07-07 1984-04-10 The Board Of Regents For The University Of Oklahoma Cyclopropyl analogs as estrogenic and anti-fertility agents
JPS5737905A (en) * 1980-08-14 1982-03-02 Toshiba Corp Envelope curve wave detecting circuit
US4389330A (en) 1980-10-06 1983-06-21 Stolle Research And Development Corporation Microencapsulation process
US4956129A (en) 1984-03-30 1990-09-11 Ici Americas Inc. Microencapsulation process
US4675189A (en) 1980-11-18 1987-06-23 Syntex (U.S.A.) Inc. Microencapsulation of water soluble active polypeptides
DE3046719C2 (de) 1980-12-11 1983-02-17 Klinge Pharma GmbH, 8000 München 1,1,2-Triphenyl-but-1-en-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und Arzneimittel
US4380635A (en) 1981-04-03 1983-04-19 Eli Lilly And Company Synthesis of acylated benzothiophenes
US4418068A (en) 1981-04-03 1983-11-29 Eli Lilly And Company Antiestrogenic and antiandrugenic benzothiophenes
US4678466A (en) 1981-06-25 1987-07-07 Rosenwald Peter L Internal medication delivery method and vehicle
US4670428A (en) 1982-02-01 1987-06-02 International Copper Research Association, Inc. Method for treating convulsions and epilepsy with organic copper compounds
SE8200751L (sv) 1982-02-09 1983-08-10 Olle Larm Forfarande for kovalent koppling for framstellning av konjugat och hervid erhallna produkter
US4485096A (en) 1982-02-26 1984-11-27 Massachusetts Institute Of Technology Tissue-equivalent and method for preparation thereof
US4867973A (en) 1984-08-31 1989-09-19 Cytogen Corporation Antibody-therapeutic agent conjugates
US4389393A (en) 1982-03-26 1983-06-21 Forest Laboratories, Inc. Sustained release therapeutic compositions based on high molecular weight hydroxypropylmethylcellulose
US5015666A (en) 1982-03-30 1991-05-14 Board of Reagents of the University of Oklahoma Triarylcyclopropanes as antiestrogens and antitumor agents
SE445884B (sv) 1982-04-30 1986-07-28 Medinvent Sa Anordning for implantation av en rorformig protes
DE3245665A1 (de) 1982-05-04 1983-11-10 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur herstellung permanenter tierischer und humaner zellinien und deren verwendung
US4485097A (en) 1982-05-26 1984-11-27 Massachusetts Institute Of Technology Bone-equivalent and method for preparation thereof
FI77839C (fi) 1982-05-27 1989-05-10 Farmos Oy Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt effektiva trifenylalkan- och alkenderivat.
GB2126576B (en) 1982-06-25 1985-06-19 Farmos Group Limited Alkane and alkene derivatives
US4952607A (en) 1982-05-27 1990-08-28 International Copper Research Association, Inc. Copper complex for treating cancer
US4657928A (en) 1982-05-27 1987-04-14 International Copper Research Association, Inc. Organic copper complexes as radioprotectants
USRE33403E (en) 1982-06-03 1990-10-23 Stolle Research & Development Corporation Method for treating disorders of the vascular and pulmonary systems
US5491173A (en) 1982-06-25 1996-02-13 Orion-Yhtyma Oy Tri-phenyl alkene derivatives and their preparation and use
US5656587A (en) 1982-09-24 1997-08-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Promotion of cell proliferation by use of transforming growth factor beta (TGF-β)
US5705477A (en) 1982-09-24 1998-01-06 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Compositions of transforming growth factor β(TGF-β) which promotes wound healing and methods for their use
US4577636A (en) 1982-11-23 1986-03-25 The Beth Israel Hospital Association Method for diagnosis of atherosclerosis
US4512762A (en) 1982-11-23 1985-04-23 The Beth Israel Hospital Association Method of treatment of atherosclerosis and a balloon catheter for same
US4491574A (en) 1983-03-02 1985-01-01 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University, A Division Of Yeshiva University Reduction of high dose aspirin toxicity by dietary vitamin A
US4629694A (en) 1983-07-12 1986-12-16 Cornell Research Foundation, Inc. Detecting and distinguishing between plasminogen activators
US4656083A (en) 1983-08-01 1987-04-07 Washington Research Foundation Plasma gas discharge treatment for improving the biocompatibility of biomaterials
US5034265A (en) 1983-08-01 1991-07-23 Washington Research Foundation Plasma gas discharge treatment for improving the compatibility of biomaterials
JPS6041489A (ja) 1983-08-12 1985-03-05 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 新規生理活性物質k―252
IL69686A (en) 1983-09-11 1988-03-31 Yeda Res & Dev Compositions containing cell membrane proteins and process for their preparation
US4549913A (en) 1984-01-27 1985-10-29 Sony Corporation Wafer construction for making single-crystal semiconductor device
US5197977A (en) 1984-01-30 1993-03-30 Meadox Medicals, Inc. Drug delivery collagen-impregnated synthetic vascular graft
US4687482A (en) 1984-04-27 1987-08-18 Scripps Clinic And Research Foundation Vascular prosthesis
US4753652A (en) 1984-05-04 1988-06-28 Children's Medical Center Corporation Biomaterial implants which resist calcification
US4664097A (en) 1984-05-09 1987-05-12 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Nuclear transplantation in the mammalian embryo by microsurgery and cell fusion
EP0170063B1 (de) 1984-07-31 1988-08-24 Mitsubishi Petrochemical Co., Ltd. Leitfähige Beschichtungszusammensetzung vom Kupfertyp
CA1289077C (en) 1984-08-13 1991-09-17 Harry H. Leveen Treatment of cancer with phlorizin and its derivatives
US4758554A (en) 1984-08-14 1988-07-19 International Copper Research Association Method for treating convulsions and epilepsy with organic copper compounds
US4757059A (en) 1984-08-14 1988-07-12 International Copper Research Association Method for treating convulsions and epilepsy with organic copper compounds
US4758555A (en) 1984-08-14 1988-07-19 International Copper Research Association Method for treating convulsions and epilepsy with organic copper compounds
US5226430A (en) 1984-10-24 1993-07-13 The Beth Israel Hospital Method for angioplasty
DE3442736A1 (de) 1984-11-23 1986-06-05 Tassilo Dr.med. 7800 Freiburg Bonzel Dilatationskatheter
IT1196390B (it) 1984-12-28 1988-11-16 Consiglio Nazionale Ricerche Uso di derivati del tiofene nel trattamento dei tumori,composizioni farmaceutiche che li contengono e composti atti allo scopo
US4897255A (en) 1985-01-14 1990-01-30 Neorx Corporation Metal radionuclide labeled proteins for diagnosis and therapy
US4760051A (en) 1985-01-24 1988-07-26 Pickart Loren R Use of GHL-Cu as a wound-healing and anti-inflammatory agent
US4605644A (en) 1985-02-07 1986-08-12 Regents Of The University Of Minnesota Method for stimulating recovery from ischemia employing ribose and adenine
US4689046A (en) 1985-03-11 1987-08-25 Carbomedics, Inc. Heart valve prosthesis
US5284763A (en) 1985-03-22 1994-02-08 Genentech, Inc. Nucleic acid encoding TGF-β and its uses
US4824436A (en) 1985-04-09 1989-04-25 Harvey Wolinsky Method for the prevention of restenosis
US5262319A (en) 1985-04-19 1993-11-16 Oncogene Science, Inc. Method for obtaining bone marrow free of tumor cells using transforming growth factor β3
US4826672A (en) 1985-06-07 1989-05-02 President And Fellows Of Harvard College Astatinated organic compounds
WO1986007541A1 (en) 1985-06-19 1986-12-31 Yasushi Zyo Composition which can impart antithrombotic ability and medical apparatus to be in contact with blood
US5470876A (en) 1985-07-18 1995-11-28 Proctor; Peter H. Topical sod for treating hair loss
DE3532860C1 (de) 1985-09-14 1987-03-12 Blendax Werke Schneider Co Mittel zur oralen Hygiene
US4853377A (en) 1985-10-15 1989-08-01 Pollack Robert L Method and composition for increasing production of serotonin
US4744981A (en) 1985-10-17 1988-05-17 Neorx Corporation Trichothecene antibody conjugates
US5102417A (en) 1985-11-07 1992-04-07 Expandable Grafts Partnership Expandable intraluminal graft, and method and apparatus for implanting an expandable intraluminal graft
US4733665C2 (en) * 1985-11-07 2002-01-29 Expandable Grafts Partnership Expandable intraluminal graft and method and apparatus for implanting an expandable intraluminal graft
DE3640745A1 (de) 1985-11-30 1987-06-04 Ernst Peter Prof Dr M Strecker Katheter zum herstellen oder erweitern von verbindungen zu oder zwischen koerperhohlraeumen
DE3544663A1 (de) 1985-12-13 1987-06-19 Schering Ag Thrombosebehandlung mit fibrinolytika und prostacyclinen
US5120535A (en) 1986-11-26 1992-06-09 Oncogen Oncostatin M and novel compositions having anti-neoplastic activity
EP0257091B1 (de) 1986-02-24 1993-07-28 Robert E. Fischell Vorrichtung zum aufweisen von blutgefässen, sowie system zu deren einführung
DE3608158A1 (de) 1986-03-12 1987-09-17 Braun Melsungen Ag Mit vernetzter gelatine impraegnierte gefaessprothese und verfahren zu ihrer herstellung
JPS62220196A (ja) 1986-03-20 1987-09-28 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 新規物質ucn―01
US5955584A (en) 1986-03-31 1999-09-21 Charter Ventures Atherosclerotic plaque specific antigens, antibodies thereto, and uses thereof
US5350395A (en) 1986-04-15 1994-09-27 Yock Paul G Angioplasty apparatus facilitating rapid exchanges
US5040548A (en) 1989-06-01 1991-08-20 Yock Paul G Angioplasty mehtod
US5061273A (en) 1989-06-01 1991-10-29 Yock Paul G Angioplasty apparatus facilitating rapid exchanges
US4859585A (en) 1986-04-17 1989-08-22 Trustees Of Tufts College In-vitro methods for identifying compositions which are agonists and antagonists of estrogens
SE453258B (sv) 1986-04-21 1988-01-25 Medinvent Sa Elastisk, sjelvexpanderande protes samt forfarande for dess framstellning
US4919939A (en) * 1986-04-29 1990-04-24 Pharmetrix Corporation Periodontal disease treatment system
US4962091A (en) 1986-05-23 1990-10-09 Syntex (U.S.A.) Inc. Controlled release of macromolecular polypeptides
US4879225A (en) 1986-06-20 1989-11-07 Neorx Corporation Enhanced production of antibodies utilizing insolubilized immune complexes
US4786500A (en) 1986-06-26 1988-11-22 Alza Corporation Programmable agent delivery system
DE3621350A1 (de) 1986-06-26 1988-01-14 Bonzel Tassilo Dilatationskatheter mit einem aufweitbaren ballon
US5264422A (en) 1986-06-30 1993-11-23 Fidia S.P.A. Esters of alginic acid with steroidal alcohols
US5314679A (en) 1986-07-03 1994-05-24 Advanced Magnetics Inc. Vascular magnetic resonance imaging agent comprising nanoparticles
US5216021A (en) 1986-08-28 1993-06-01 Sorenson John R J Analgesic method
US4999347A (en) 1986-08-28 1991-03-12 Sorenson John R J Analgesic method
EP0260066B1 (de) 1986-09-11 1990-05-09 National Research Development Corporation Tamoxifenderivate
HU199281B (en) 1986-10-17 1990-02-28 Biogal Gyogyszergyar Synergetic unsenziting face- and body-cosmetics
US4793348A (en) 1986-11-15 1988-12-27 Palmaz Julio C Balloon expandable vena cava filter to prevent migration of lower extremity venous clots into the pulmonary circulation
US4994384A (en) 1986-12-31 1991-02-19 W. R. Grace & Co.-Conn. Multiplying bovine embryos
US4748982A (en) 1987-01-06 1988-06-07 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Reinforced balloon dilatation catheter with slitted exchange sleeve and method
US4959355A (en) 1987-03-16 1990-09-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method of inhibiting osmotic water flow
US5075321A (en) 1987-03-24 1991-12-24 University Of Pennsylvania Methods of treating diseases characterized by interactions of IgG-containing immune complexes with macrophage Fc receptors using antiestrogenic benzothiophenes
JP2564386B2 (ja) 1987-04-16 1996-12-18 クリスチャン ビンチャエドラー 水不溶性ポリマーの粉末の調整方法
DE3781546D1 (de) 1987-04-21 1992-10-08 Heumann Pharma Gmbh & Co Stabile loesungsmitteladdukte von z-1-(p-beta-dimethylamino-ethoxyphenyl)-1-(p-hydroxyphenyl)-2-phenylbut-1-en.
US5114719A (en) 1987-04-29 1992-05-19 Sabel Bernhard A Extended drug delivery of small, water-soluble molecules
AU1539188A (en) 1987-05-04 1988-11-10 Bristol-Myers Squibb Company TGF-B2 and novel compositions having anti-neoplastic activity
SE8702254D0 (sv) 1987-05-29 1987-05-29 Kabivitrum Ab Novel heparin derivatives
US5093330A (en) 1987-06-15 1992-03-03 Ciba-Geigy Corporation Staurosporine derivatives substituted at methylamino nitrogen
WO1988010259A1 (en) 1987-06-19 1988-12-29 Syracuse University Cytochalasin purification methods and compositions
US5527337A (en) 1987-06-25 1996-06-18 Duke University Bioabsorbable stent and method of making the same
US4835002A (en) 1987-07-10 1989-05-30 Wolf Peter A Microemulsions of oil in water and alcohol
US5216024A (en) 1987-07-28 1993-06-01 Baylor College Of Medicine Cell growth inhibitors and methods of treating cancer and cell proliferative diseases
US5221620A (en) 1987-10-06 1993-06-22 Oncogen Cloning and expression of transforming growth factor β2
US4886062A (en) 1987-10-19 1989-12-12 Medtronic, Inc. Intravascular radially expandable stent and method of implant
DE3737340A1 (de) 1987-11-04 1989-05-24 Bayer Ag Neue fluormethoxyphenyl-dihydropyridine, verfahren zur herstellung und ihre verwendung in arzneimitteln
US4929602A (en) 1987-11-25 1990-05-29 Scripps Clinic And Research Foundation Method of inhibiting platelet dependent arterial thrombosis
US4916193A (en) 1987-12-17 1990-04-10 Allied-Signal Inc. Medical devices fabricated totally or in part from copolymers of recurring units derived from cyclic carbonates and lactides
US5185408A (en) 1987-12-17 1993-02-09 Allied-Signal Inc. Medical devices fabricated totally or in part from copolymers of recurring units derived from cyclic carbonates and lactides
US4997652A (en) 1987-12-22 1991-03-05 Visionex Biodegradable ocular implants
JP2702953B2 (ja) 1988-01-30 1998-01-26 オリンパス光学工業株式会社 薬液含浸セラミックス
US5030637A (en) 1988-02-08 1991-07-09 Regents Of The University Of Minnesota Anisodamine to prevent and treat eye disease
US5019096A (en) 1988-02-11 1991-05-28 Trustees Of Columbia University In The City Of New York Infection-resistant compositions, medical devices and surfaces and methods for preparing and using same
US5234957A (en) 1991-02-27 1993-08-10 Noven Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for topical administration of pharmaceutically active agents
US5446070A (en) 1991-02-27 1995-08-29 Nover Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for topical administration of pharmaceutically active agents
US4942184A (en) * 1988-03-07 1990-07-17 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Water soluble, antineoplastic derivatives of taxol
DE68927479T2 (de) 1988-05-02 1997-04-03 Phanos Tech Inc Verbindungen, zusammensetzungen und verfahren zum binden von bio-affektions-substanzen an oberflächenmembranen von bioteilchen
US4973601A (en) 1988-06-01 1990-11-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Control of insects by fungal tremorgenic mycotoxins
US5262451A (en) 1988-06-08 1993-11-16 Cardiopulmonics, Inc. Multifunctional thrombo-resistant coatings and methods of manufacture
US5338770A (en) 1988-06-08 1994-08-16 Cardiopulmonics, Inc. Gas permeable thrombo-resistant coatings and methods of manufacture
US5182317A (en) 1988-06-08 1993-01-26 Cardiopulmonics, Inc. Multifunctional thrombo-resistant coatings and methods of manufacture
DE3821544C2 (de) 1988-06-25 1994-04-28 H Prof Dr Med Just Dilatationskatheter
US5705609A (en) 1988-06-28 1998-01-06 La Jolla Cancer Research Foundation Decorin fragments inhibiting cell regulatory factors
US5468746A (en) 1988-07-29 1995-11-21 Zambon Group S.P.A. Compounds active on the cardiovascular system
US5167960A (en) 1988-08-03 1992-12-01 New England Deaconess Hospital Corporation Hirudin-coated biocompatible substance
US5328471A (en) 1990-02-26 1994-07-12 Endoluminal Therapeutics, Inc. Method and apparatus for treatment of focal disease in hollow tubular organs and other tissue lumens
US5213580A (en) 1988-08-24 1993-05-25 Endoluminal Therapeutics, Inc. Biodegradable polymeric endoluminal sealing process
US5634946A (en) 1988-08-24 1997-06-03 Focal, Inc. Polymeric endoluminal paving process
US5226913A (en) 1988-09-01 1993-07-13 Corvita Corporation Method of making a radially expandable prosthesis
US5019090A (en) * 1988-09-01 1991-05-28 Corvita Corporation Radially expandable endoprosthesis and the like
US5092877A (en) 1988-09-01 1992-03-03 Corvita Corporation Radially expandable endoprosthesis
US5053048A (en) 1988-09-22 1991-10-01 Cordis Corporation Thromboresistant coating
US5066789A (en) 1988-09-30 1991-11-19 Neorx Corporation Targeting substance-diagnostic/therapeutic agent conjugates having Schiff base linkages
SE462364B (sv) 1988-09-30 1990-06-18 Goeran Hansson Anvaendning av gamma-interferon foer beredning av ett preparat foer behandling av vaskulaer stenos
CA1322628C (en) 1988-10-04 1993-10-05 Richard A. Schatz Expandable intraluminal graft
US4956188A (en) 1988-10-20 1990-09-11 Zinpro Corporation Copper complexes with alpha hydroxy organic acids and their use as nutritional supplements
US4886811A (en) 1988-10-24 1989-12-12 Merrell Dow Pharmaceuticals Qunolyloxazole-2-ones useful as proteinkinase C inhibitors
US5393785A (en) 1988-10-31 1995-02-28 Endorecherche, Inc. Therapeutic antiestrogens
US5395842A (en) 1988-10-31 1995-03-07 Endorecherche Inc. Anti-estrogenic compounds and compositions
CA2002011A1 (en) 1988-11-14 1990-05-14 Anthony F. Purchio Normal human growth regulatory receptor for tgf-beta
US5162430A (en) 1988-11-21 1992-11-10 Collagen Corporation Collagen-polymer conjugates
US5268358A (en) 1988-12-08 1993-12-07 Cor Therapeutics, Inc. PDGF receptor blocking peptides
US5304541A (en) 1988-12-15 1994-04-19 Bristol-Myers Squibb Company Methods using novel chimeric transforming growth factor-β1/β2
US5380716A (en) 1988-12-15 1995-01-10 Glycomed, Inc. Sulfated polysaccharides as inhibitors of smooth muscle cell proliferation
US5032679A (en) 1988-12-15 1991-07-16 Glycomed, Inc. Heparin fragments as inhibitors of smooth muscle cell proliferation
CA2005120A1 (en) 1988-12-15 1990-06-15 Anthony F. Purchio Tgf-beta 1/beta 2: a novel chimeric transforming growth factor-beta
US5571714A (en) 1988-12-22 1996-11-05 Celtrix Pharmaceuticals, Inc. Monoclonal antibodies which bind both transforming growth factors β1 and β2 and methods of use
DE3844247A1 (de) 1988-12-29 1990-07-12 Minnesota Mining & Mfg Vorrichtung, insbesondere pflaster zum transdermalen verabreichen eines medikaments
US4900561A (en) 1989-01-03 1990-02-13 Zinpro Corporation Copper complexes of alpha-amino acids that contain terminal amino groups, and their use as nutritional supplements
US4948594A (en) 1989-01-03 1990-08-14 Zinpro Corporation Copper complexes of alpha-amino acids that contain terminal amino groups, and their use as nutritional supplements
US5284869A (en) 1991-12-17 1994-02-08 Emil Bisaccia Photophoresis methods for treating atherosclerosis and for preventing restenosis following angioplasty
US5356630A (en) 1989-02-22 1994-10-18 Massachusetts Institute Of Technology Delivery system for controlled release of bioactive factors
US6146358A (en) 1989-03-14 2000-11-14 Cordis Corporation Method and apparatus for delivery of therapeutic agent
US5019504A (en) 1989-03-23 1991-05-28 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Production of taxol or taxol-like compounds in cell culture
US5073633A (en) 1989-03-23 1991-12-17 Bristol-Myers Company BMY-41950 antitumor antibiotic
US5015578A (en) 1989-03-23 1991-05-14 Bristol-Myers Squibb Company BMY-41950 antitumor antibiotic
FR2645160B1 (de) 1989-03-31 1992-10-02 Rhone Poulenc Chimie
US5364632A (en) 1989-04-05 1994-11-15 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Medicinal emulsions
US5026537A (en) 1989-04-06 1991-06-25 Centocor, Inc. Methods for imaging atherosclerotic plaque
JPH03505744A (ja) 1989-04-28 1991-12-12 シラキューズ ユニバーシティ サイトカラシン組成物および治療法
US5288735A (en) 1989-05-02 1994-02-22 Trager Seymour F Treatment of glaucoma
CA2050911C (en) 1989-05-04 1997-07-15 Thomas R. Tice Encapsulation process and products therefrom
US4990158A (en) 1989-05-10 1991-02-05 United States Surgical Corporation Synthetic semiabsorbable tubular prosthesis
WO1990013332A1 (en) * 1989-05-11 1990-11-15 Cedars-Sinai Medical Center Stent with sustained drug delivery
US4994071A (en) 1989-05-22 1991-02-19 Cordis Corporation Bifurcating stent apparatus and method
US5268455A (en) 1989-05-25 1993-12-07 Genentech, Inc. Process for making biologically active polypeptides based on transforming growth factor-βsequences
US5118791A (en) 1989-05-25 1992-06-02 Genentech, Inc. Biologically active polypeptides based on transforming growth factor-β
US4994033A (en) 1989-05-25 1991-02-19 Schneider (Usa) Inc. Intravascular drug delivery dilatation catheter
DE3918736C2 (de) 1989-06-08 1998-05-14 Christian Dr Vallbracht Kunststoffüberzogene Metallgitterstents
US5248764A (en) 1989-06-16 1993-09-28 Merck Frosst Canada, Inc. Chelate derivatives of atrial natriuretic factor (ANF)
US5208238A (en) 1989-06-19 1993-05-04 Burroughs Wellcome Company Agents for potentiating the effects of antitumor agents and combating multiple drug resistance
GB8914060D0 (en) 1989-06-19 1989-08-09 Wellcome Found Agents for potentiating the effects of antitumour agents and combating multiple drug resistance
GB8914061D0 (en) 1989-06-19 1989-08-09 Wellcome Found Agents for potentiating the effects of antitumour agents and combating multiple drug resistance
GB8914040D0 (en) 1989-06-19 1989-08-09 Wellcome Found Agents for potentiating the effects of antitumour agents and combating multiple drug resistance
US5242397A (en) 1989-06-20 1993-09-07 Cedars-Sinai Medical Center Catheter device and method of use for intramural delivery of protein kinase C and tyrosine protein kinase inhibitors to prevent restenosis after balloon angioplasty
HU212760B (en) 1989-06-20 1997-02-28 Denes Method and device for the apportion of chemical materials into the vein wall
AU5751290A (en) 1989-06-27 1991-01-03 C.R. Bard Inc. Coaxial ptca catheter with anchor joint
DE3924538A1 (de) 1989-07-25 1991-01-31 Goedecke Ag Indolocarbazol und dessen verwendung
US5580774A (en) 1989-07-31 1996-12-03 Eli Lilly And Company Chimeric antibodies directed against a human glycoprotein antigen
US5100885A (en) 1989-08-01 1992-03-31 Johnson Matthey, Inc. Copper radiosensitizers
US5240913A (en) 1989-08-18 1993-08-31 Biogen, Inc. Inhibitors of thrombin
US4990538A (en) 1989-08-23 1991-02-05 Harris Adrian L Use of toremifene and its metabolites for the reversal of multidrug resistance of cancer cells against cytotoxic drugs
US5145838A (en) 1989-08-30 1992-09-08 Procyte Corporation Methods and compositions for healing ulcers
US5023237A (en) 1989-08-30 1991-06-11 Procyte Corporation Methods and compositions for healing ulcers
IL95500A (en) 1989-09-11 1997-03-18 Matrix Pharma ANTI-PROLIFERATIVE COMPOSITIONS CONTAINING TGF-b PROTEIN IN A VISCOUS MATRIX AND THEIR USE
US5126348A (en) 1989-09-26 1992-06-30 The University Of Colorado Foundation, Inc. Bioavailability enhancers
US4984594A (en) 1989-10-27 1991-01-15 Shell Oil Company Vacuum method for removing soil contamination utilizing surface electrical heating
US5009659A (en) 1989-10-30 1991-04-23 Schneider (Usa) Inc. Fiber tip atherectomy catheter
JP2911927B2 (ja) 1989-11-29 1999-06-28 株式会社町田製作所 可撓管の製造方法
US5059166A (en) 1989-12-11 1991-10-22 Medical Innovative Technologies R & D Limited Partnership Intra-arterial stent with the capability to inhibit intimal hyperplasia
US5176617A (en) 1989-12-11 1993-01-05 Medical Innovative Technologies R & D Limited Partnership Use of a stent with the capability to inhibit malignant growth in a vessel such as a biliary duct
KR920000459B1 (ko) 1989-12-13 1992-01-14 재단법인 한국화학연구소 다당류 유도체가 도포된 인공혈관과 그 제조방법
US5304121A (en) 1990-12-28 1994-04-19 Boston Scientific Corporation Drug delivery system making use of a hydrogel polymer coating
ES2067700T3 (es) 1989-12-29 1995-04-01 Med Inst Inc Cateter flexible resistente a la formacion de pliegues.
US5232911A (en) 1990-01-03 1993-08-03 Ventech Research Inc. Mixture of a non-covalent heterodimer complex and a basic amphiphatic peptide as cytotoxic agent
US5049132A (en) 1990-01-08 1991-09-17 Cordis Corporation Balloon catheter for delivering therapeutic agents
US5171812A (en) 1990-01-19 1992-12-15 Nova Pharmaceutical Corporation Polyanhydrides of oligomerized unsaturated aliphatic acids
US5175235A (en) 1990-06-04 1992-12-29 Nova Pharmaceutical Corporation Branched polyanhydrides
US5496557A (en) 1990-01-30 1996-03-05 Akzo N.V. Article for the controlled delivery of an active substance, comprising a hollow space fully enclosed by a wall and filled in full or in part with one or more active substances
ATE120377T1 (de) * 1990-02-08 1995-04-15 Howmedica Aufblasbarer dilatator.
US5199939B1 (en) 1990-02-23 1998-08-18 Michael D Dake Radioactive catheter
CA2049973C (en) 1990-02-28 2002-12-24 Rodney G. Wolff Intralumenal drug eluting prosthesis
US5545208A (en) 1990-02-28 1996-08-13 Medtronic, Inc. Intralumenal drug eluting prosthesis
US5108989A (en) 1990-04-04 1992-04-28 Genentech, Inc. Method of predisposing mammals to accelerated tissue repair
EP0526544B1 (de) 1990-04-11 1998-09-30 Brigham And Women's Hospital Therapeutische verwendung von actin-bindenden verbindungen
US5180376A (en) 1990-05-01 1993-01-19 Cathco, Inc. Non-buckling thin-walled sheath for the percutaneous insertion of intraluminal catheters
US5290271A (en) 1990-05-14 1994-03-01 Jernberg Gary R Surgical implant and method for controlled release of chemotherapeutic agents
US5199951A (en) 1990-05-17 1993-04-06 Wayne State University Method of drug application in a transporting medium to an arterial wall injured during angioplasty
WO1991017724A1 (en) 1990-05-17 1991-11-28 Harbor Medical Devices, Inc. Medical device polymer
US5166143A (en) 1990-05-31 1992-11-24 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method for preventing onset of restenosis after angioplasty employing an ace inhibitor
US5140012A (en) 1990-05-31 1992-08-18 E. R. Squibb & Sons, Inc. Method for preventing onset of restenosis after angioplasty employing pravastatin
US5731424A (en) 1990-06-11 1998-03-24 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High affinity TGFβ nucleic acid ligands and inhibitors
US5731144A (en) 1990-06-11 1998-03-24 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. High affinity TGFβ nucleic acid ligands
US5216115A (en) 1990-06-12 1993-06-01 Rutgers, The State University Of New Jersey Polyarylate containing derivatives of the natural amino acid L-tyrosine
WO1991019529A1 (en) 1990-06-15 1991-12-26 Cortrak Medical, Inc. Drug delivery apparatus and method
US5064435A (en) 1990-06-28 1991-11-12 Schneider (Usa) Inc. Self-expanding prosthesis having stable axial length
US5401730A (en) 1990-07-06 1995-03-28 The Hope Heart Institute Method for reducing platelet aggregation
DE4022956A1 (de) 1990-07-19 1992-02-06 Sebastian Dr Freudenberg Endoluminalschiene
ATE130517T1 (de) 1990-08-08 1995-12-15 Takeda Chemical Industries Ltd Intravaskulär embolisierendes mittel mit gehalt an einem die angiogenesis hemmenden stoff.
US5189046A (en) 1990-08-14 1993-02-23 Nova Pharmaceutical Corporation Protein kinase C modulators
US5189212A (en) 1990-09-07 1993-02-23 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Triarylethylene carboxylic acids with estrogenic activity
US5163952A (en) 1990-09-14 1992-11-17 Michael Froix Expandable polymeric stent with memory and delivery apparatus and method
US5258020A (en) 1990-09-14 1993-11-02 Michael Froix Method of using expandable polymeric stent with memory
US5639738A (en) 1992-02-20 1997-06-17 Hyal Pharmaceutical Corporation Treatment of basal cell carcinoma and actinic keratosis employing hyaluronic acid and NSAIDs
US5219548A (en) 1990-10-01 1993-06-15 Board Of Regents, The University Of Texas System High affinity halogenated-tamoxifen derivatives and uses thereof
US5238714A (en) 1990-10-02 1993-08-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Efficient microcapsule preparation and method of use
US5222971A (en) 1990-10-09 1993-06-29 Scimed Life Systems, Inc. Temporary stent and methods for use and manufacture
US5053033A (en) 1990-10-10 1991-10-01 Boston Advanced Technologies, Inc. Inhibition of restenosis by ultraviolet radiation
US5180366A (en) 1990-10-10 1993-01-19 Woods W T Apparatus and method for angioplasty and for preventing re-stenosis
KR930006431B1 (ko) 1990-10-11 1993-07-16 재단법인 한국화학연구소 약물의 미세캡슐화 방법
US5486357A (en) 1990-11-08 1996-01-23 Cordis Corporation Radiofrequency plasma biocompatibility treatment of inside surfaces
ATE194169T1 (de) 1990-11-16 2000-07-15 Celtrix Pharma Beta-type ähnlicher transformierender wachstumfaktor
US5824647A (en) 1990-12-12 1998-10-20 Postlethwaite; Arnold E. Chemotactic wound healing peptides
DE69204990T2 (de) 1991-01-03 1996-05-15 Salk Inst For Biological Studi Mitotoxin zur behandlung von gefässbeschädigung.
US5102402A (en) 1991-01-04 1992-04-07 Medtronic, Inc. Releasable coatings on balloon catheters
US5399363A (en) 1991-01-25 1995-03-21 Eastman Kodak Company Surface modified anticancer nanoparticles
US5145684A (en) 1991-01-25 1992-09-08 Sterling Drug Inc. Surface modified drug nanoparticles
CA2060067A1 (en) 1991-01-28 1992-07-29 Lilip Lau Stent delivery system
US5378475A (en) 1991-02-21 1995-01-03 University Of Kentucky Research Foundation Sustained release drug delivery devices
AU1579092A (en) 1991-02-27 1992-10-06 Nova Pharmaceutical Corporation Anti-infective and anti-inflammatory releasing systems for medical devices
US5332576A (en) 1991-02-27 1994-07-26 Noven Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for topical administration of pharmaceutically active agents
US5171217A (en) 1991-02-28 1992-12-15 Indiana University Foundation Method for delivery of smooth muscle cell inhibitors
US5280016A (en) 1991-03-29 1994-01-18 Glycomed Incorporated Non-anticoagulant heparin derivatives
US5116864A (en) 1991-04-09 1992-05-26 Indiana University Foundation Method for preventing restenosis following reconfiguration of body vessels
JPH04312526A (ja) 1991-04-09 1992-11-04 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd 骨疾患治療剤
IT1247527B (it) 1991-04-24 1994-12-17 Medea Res Srl Agente antiarteriosclerotico, sua preparazione ed uso
US5147332A (en) 1991-05-17 1992-09-15 C.R. Bard, Inc. Multi-valve catheter for improved reliability
US5286497A (en) 1991-05-20 1994-02-15 Carderm Capital L.P. Diltiazem formulation
US5458568A (en) 1991-05-24 1995-10-17 Cortrak Medical, Inc. Porous balloon for selective dilatation and drug delivery
GB9111439D0 (en) 1991-05-28 1991-07-17 Thrombosis Res Inst Inhibition of vascular smooth muscle cell proliferation
GB9112267D0 (en) 1991-06-07 1991-07-24 Biocompatibles Ltd Polymeric coating
US5213576A (en) 1991-06-11 1993-05-25 Cordis Corporation Therapeutic porous balloon catheter
TW257762B (de) 1991-06-14 1995-09-21 Nippon Chemicals Pharmaceutical Co Ltd
US5229495A (en) 1991-06-18 1993-07-20 Ludwig Institute For Cancer Research Substantially pure receptor like TGF-β 1 binding molecules and uses thereof
US5216126A (en) 1991-06-19 1993-06-01 Genentech, Inc. Receptor polypeptides and their production and uses
JP3446214B2 (ja) 1991-06-21 2003-09-16 ライオン株式会社 液状透明口腔用組成物
CA2079205C (en) 1992-09-25 1998-02-10 Rudolf Edgar Falk Use of hyaluronic acid and forms to prevent arterial restenosis
US5990095A (en) 1991-07-03 1999-11-23 Hyal Pharmaceutical Corporation Use of hyaluronic acid and forms to prevent arterial restenosis
US6022866A (en) 1991-07-03 2000-02-08 Hyal Pharmaceutical Corporation Use of hyaluronic acid and forms to prevent arterial restenosis
FR2679230B1 (fr) 1991-07-16 1993-11-19 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux derives d'analogues du taxol, leur preparation et les compositions qui les contiennent.
CA2074304C (en) 1991-08-02 1996-11-26 Cyril J. Schweich, Jr. Drug delivery catheter
US5356433A (en) 1991-08-13 1994-10-18 Cordis Corporation Biocompatible metal surfaces
US5166191A (en) 1991-08-19 1992-11-24 Genentech, Inc. Use of relaxin in cardiovascular therapy
US5185260A (en) 1991-08-29 1993-02-09 The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy Method for distinguishing normal and transformed cells using G1 kinase inhibitors
US6515009B1 (en) 1991-09-27 2003-02-04 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US5811447A (en) 1993-01-28 1998-09-22 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
WO1993006792A1 (en) * 1991-10-04 1993-04-15 Scimed Life Systems, Inc. Biodegradable drug delivery vascular stent
US5500013A (en) 1991-10-04 1996-03-19 Scimed Life Systems, Inc. Biodegradable drug delivery vascular stent
US5464450A (en) 1991-10-04 1995-11-07 Scimed Lifesystems Inc. Biodegradable drug delivery vascular stent
CA2380683C (en) 1991-10-28 2006-08-08 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Expandable stents and method for making same
AU2738392A (en) 1991-11-11 1993-05-13 Ciba-Geigy Ag Novel hybrid transforming growth factors
JPH07500843A (ja) 1991-11-11 1995-01-26 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティー オブ ペンシルバニア 再狭窄を抑制する方法
US5304325A (en) 1991-11-13 1994-04-19 Hemagen/Pfc Emulsions containing alkyl- or alkylglycerophosphoryl choline surfactants and methods of use
US5270047A (en) 1991-11-21 1993-12-14 Kauffman Raymond F Local delivery of dipyridamole for the treatment of proliferative diseases
US5238950A (en) 1991-12-17 1993-08-24 Schering Corporation Inhibitors of platelet-derived growth factor
CA2125888C (en) 1992-01-06 2002-08-27 Harry B. Demopoulos Pharmaceutically active antioxidant containing composition and the method of its use to prevent and treat restenosis following angioplasty
CA2086642C (en) * 1992-01-09 2004-06-15 Randall E. Morris Method of treating hyperproliferative vascular disease
US5516781A (en) 1992-01-09 1996-05-14 American Home Products Corporation Method of treating restenosis with rapamycin
JPH05255084A (ja) 1992-01-17 1993-10-05 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd 経皮的冠動脈形成術後の再狭窄抑制剤
JPH07503154A (ja) 1992-01-21 1995-04-06 エス・アール・アイ・インターナシヨナル 微細化ポリペプチド薬剤の改良調製方法
US5280109A (en) 1992-01-27 1994-01-18 Ludwig Institute For Cancer Research Isolated, large latent complexes of TGF-β2 and TGF-β3, and new binding protein for latent form TGF-β1, TGF-β2 and TGF-β3 LTBP-2
CA2087132A1 (en) 1992-01-31 1993-08-01 Michael S. Williams Stent capable of attachment within a body lumen
US5444164A (en) 1992-02-05 1995-08-22 Bristol-Myers Squibb Company TGF-β induced gene
WO1993017668A1 (en) * 1992-03-12 1993-09-16 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Controlled release acth containing microspheres
AU3920693A (en) 1992-03-18 1993-10-21 General Hospital Corporation, The Four novel receptors of the TGF-beta receptor family
US5571166A (en) 1992-03-19 1996-11-05 Medtronic, Inc. Method of making an intraluminal stent
US5599352A (en) 1992-03-19 1997-02-04 Medtronic, Inc. Method of making a drug eluting stent
DE69326631T2 (de) 1992-03-19 2000-06-08 Medtronic Inc Intraluminales Erweiterungsgerät
US5591224A (en) 1992-03-19 1997-01-07 Medtronic, Inc. Bioelastomeric stent
US5510077A (en) 1992-03-19 1996-04-23 Dinh; Thomas Q. Method of making an intraluminal stent
US5282823A (en) 1992-03-19 1994-02-01 Medtronic, Inc. Intravascular radially expandable stent
GB9207437D0 (en) 1992-04-03 1992-05-20 Orion Yhtymae Oy Topical administration of toremifene and its metabolites
AU670937B2 (en) 1992-04-28 1996-08-08 Wyeth Method of treating hyperproliferative vascular disease
US5288711A (en) 1992-04-28 1994-02-22 American Home Products Corporation Method of treating hyperproliferative vascular disease
DE4214215A1 (de) 1992-04-30 1993-11-04 Behringwerke Ag Verwendung von inhibitoren von plasminogenaktivatoren zur behandlung von entzuendungen
WO1993024476A1 (en) 1992-06-04 1993-12-09 Clover Consolidated, Limited Water-soluble polymeric carriers for drug delivery
US5383928A (en) * 1992-06-10 1995-01-24 Emory University Stent sheath for local drug delivery
EP0575955B1 (de) 1992-06-22 1999-09-15 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Verfahren zur Herstellung von Staurosporin-Derivaten
JP3297469B2 (ja) 1992-06-23 2002-07-02 出光興産株式会社 電子写真感光体
DE4222380A1 (de) 1992-07-08 1994-01-13 Ernst Peter Prof Dr M Strecker In den Körper eines Patienten perkutan implantierbare Endoprothese
US5767079A (en) 1992-07-08 1998-06-16 Celtrix Pharmaceuticals, Inc. Method of treating ophthalmic disorders using TGF -β
US5283257A (en) 1992-07-10 1994-02-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of treating hyperproliferative vascular disease
TW366342B (en) 1992-07-28 1999-08-11 Lilly Co Eli The use of 2-phenyl-3-aroylbenzothiophenes in inhibiting bone loss
CA2142185A1 (en) 1992-08-10 1994-02-17 David I. Gwynne Inhibitors of cell proliferation, their preparation and use
AU673543B2 (en) 1992-08-12 1996-11-14 Bio-Technology General Corporation Method of inhibiting cell proliferation using apolipoprotein E
US5460807A (en) 1992-08-19 1995-10-24 Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. Antiproliferative oligomers
US5650447A (en) 1992-08-24 1997-07-22 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Nitric oxide-releasing polymers to treat restenosis and related disorders
US5405919A (en) 1992-08-24 1995-04-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health And Human Services Polymer-bound nitric oxide/nucleophile adduct compositions, pharmaceutical compositions and methods of treating biological disorders
US6200558B1 (en) 1993-09-14 2001-03-13 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Biopolymer-bound nitric oxide-releasing compositions, pharmaceutical compositions incorporating same and methods of treating biological disorders using same
US5632981A (en) 1992-08-24 1997-05-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Biopolymer-bound nitric oxide-releasing compositions, pharmaceutical compositions incorporating same and methods of treating biological disorders using same
US5525357A (en) 1992-08-24 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polymer-bound nitric oxide/nucleophile adduct compositions, pharmaceutical compositions incorporating same and methods of treating biological disorders using same
US5821234A (en) 1992-09-10 1998-10-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Inhibition of proliferation of vascular smooth muscle cell
JP2617407B2 (ja) 1992-09-14 1997-06-04 キッセイ薬品工業株式会社 血管内膜細胞過剰増殖疾患の予防および治療剤
US5817625A (en) 1992-09-21 1998-10-06 Oncogene Science, Inc. Methods of prevention of oral mucositis with transforming growth factor beta
US6251920B1 (en) 1993-05-13 2001-06-26 Neorx Corporation Prevention and treatment of cardiovascular pathologies
US6306421B1 (en) 1992-09-25 2001-10-23 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US5770609A (en) 1993-01-28 1998-06-23 Neorx Corporation Prevention and treatment of cardiovascular pathologies
EP0752885B1 (de) 1992-09-25 2003-07-09 Neorx Corporation Therapeutischer inhibitor der vaskulären glatten muskelzellen
US5302584A (en) 1992-10-13 1994-04-12 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
US5411967A (en) 1992-10-13 1995-05-02 American Home Products Corporation Carbamates of rapamycin
AU669256B2 (en) 1992-10-29 1996-05-30 Celtrix Pharmaceuticals, Inc. Uses of TGF-beta receptor fragment as a therapeutic agent
EP0597593A1 (de) 1992-10-30 1994-05-18 Medtronic, Inc. Gerinnungsbeständige Gegenstände
US5449382A (en) 1992-11-04 1995-09-12 Dayton; Michael P. Minimally invasive bioactivated endoprosthesis for vessel repair
US5578075B1 (en) 1992-11-04 2000-02-08 Daynke Res Inc Minimally invasive bioactivated endoprosthesis for vessel repair
US5346702A (en) 1992-12-04 1994-09-13 Sterling Winthrop Inc. Use of non-ionic cloud point modifiers to minimize nanoparticle aggregation during sterilization
US5342348A (en) * 1992-12-04 1994-08-30 Kaplan Aaron V Method and device for treating and enlarging body lumens
EP0604022A1 (de) * 1992-12-22 1994-06-29 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Mehrschichtiges resorbierbares Stent und Verfahren zu dessen Herstellung
US5443458A (en) 1992-12-22 1995-08-22 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Multilayered biodegradable stent and method of manufacture
GB2273873A (en) 1992-12-23 1994-07-06 Univ Sheffield Treatment of psoriasis
US5354774A (en) 1992-12-24 1994-10-11 Yale University Inhibition of smooth muscle cell proliferation by 8-methoxypsoralen photoactivated by visible light
US5393527A (en) 1993-01-04 1995-02-28 Becton, Dickinson And Company Stabilized microspheres and methods of preparation
KR100316205B1 (ko) 1993-01-07 2002-04-24 아브람 엠. 골드핑거 평활근세포의증식을조절하기위한c-myc의안티센스억제
US5419760A (en) 1993-01-08 1995-05-30 Pdt Systems, Inc. Medicament dispensing stent for prevention of restenosis of a blood vessel
US5429634A (en) 1993-09-09 1995-07-04 Pdt Systems Biogenic implant for drug delivery and method
AU675505B2 (en) * 1993-01-08 1997-02-06 Miravant Systems, Inc. Medicament dispensing stents
US5420243A (en) 1993-01-26 1995-05-30 Celtrix Pharmaceuticals, Inc. Biologically active TGF-β2 peptides
US5981568A (en) 1993-01-28 1999-11-09 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US6663881B2 (en) 1993-01-28 2003-12-16 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
US5595722A (en) 1993-01-28 1997-01-21 Neorx Corporation Method for identifying an agent which increases TGF-beta levels
US6491938B2 (en) 1993-05-13 2002-12-10 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
EP2298310A3 (de) 1993-01-28 2011-04-06 Boston Scientific Limited Therapeutische Inhibitoren der Zellen der glatten Gefässmuskulatur
AU6171194A (en) 1993-02-05 1994-08-29 Affymax Technologies N.V. Receptor-binding antiproliferative peptides
WO1994017817A1 (en) 1993-02-12 1994-08-18 Corvas International, Inc. Inhibitors of thrombosis
US5252579A (en) 1993-02-16 1993-10-12 American Home Products Corporation Macrocyclic immunomodulators
DE4401554A1 (de) 1993-02-16 1994-08-18 Freund Andreas Präparat zur Therapie und Prophylaxe von Erkrankungen, die bei Imbalancen von Plasmalipiden auftreten
US5358959A (en) 1993-02-18 1994-10-25 President And Fellows Of Harvard University Methods for treating arteriosclerosis
US5512591A (en) 1993-02-18 1996-04-30 President And Fellows Of Harvard College Treatments for diseases characterized by neovascularization
US5358844A (en) 1993-02-18 1994-10-25 Brigham And Women's Hospital, Inc. Preservation of blood platelets
US5362478A (en) 1993-03-26 1994-11-08 Vivorx Pharmaceuticals, Inc. Magnetic resonance imaging with fluorocarbons encapsulated in a cross-linked polymeric shell
US5391378A (en) 1993-02-22 1995-02-21 Elizabeth-Hata International, Inc. Two-part medicinal tablet and method of manufacture
US5441734A (en) 1993-02-25 1995-08-15 Schering Corporation Metal-interferon-alpha crystals
US5308862A (en) 1993-03-05 1994-05-03 Boehringer Mannheim Pharmaceuticals Corporation - Smithkline Beecham Corp., Ltd. Partnership No. 1 Use of, and method of treatment using, carbazolyl-(4)-oxypropanolamine compounds for inhibition of smooth muscle cell proliferation
WO1994020096A1 (en) 1993-03-05 1994-09-15 Boehringer Mannheim Pharmaceuticals Corporation - Smithkline Beckman Corporation Limited Method of employing carbazolyl-(4)-oxypropanolamine compounds for inhibition of smooth muscle cell proliferation
US5451603A (en) 1993-03-11 1995-09-19 Zymogenetics, Inc. 3,4-diarylchromans for treatment of dermatitis
US5280040A (en) 1993-03-11 1994-01-18 Zymogenetics, Inc. Methods for reducing bone loss using centchroman derivatives
EP0689465A1 (de) 1993-03-18 1996-01-03 Cedars-Sinai Medical Center Polymerbeschichtung mit arzneimitteln fuer bioprothesen
US5482949A (en) 1993-03-19 1996-01-09 Eli Lilly And Company Sulfonate derivatives of 3-aroylbenzo[b]thiophenes
WO1994021679A1 (en) 1993-03-25 1994-09-29 Merck & Co., Inc. Inhibitor of vascular endothelial cell growth factor
US5474563A (en) 1993-03-25 1995-12-12 Myler; Richard Cardiovascular stent and retrieval apparatus
US5607463A (en) 1993-03-30 1997-03-04 Medtronic, Inc. Intravascular medical device
WO1994022436A1 (en) 1993-03-31 1994-10-13 George Cooper, Iv A method for treating abnormal cardiac contraction
EP0619314A1 (de) * 1993-04-09 1994-10-12 Eli Lilly And Company 4-Phenyl-4H-Naphtho 2,1-b pyran Derivate und ihre Verwendung als Arzneimittel
US5523092A (en) 1993-04-14 1996-06-04 Emory University Device for local drug delivery and methods for using the same
US5399352A (en) 1993-04-14 1995-03-21 Emory University Device for local drug delivery and methods for using the same
DK0621015T3 (da) 1993-04-23 1998-12-21 Schneider Europ Gmbh Stent men et dæklag af et elastisk materiale samt en fremgangsmåde til anbringelse af dette lag på stenten
US5504091A (en) 1993-04-23 1996-04-02 American Home Products Corporation Biotin esters of rapamycin
US5464650A (en) 1993-04-26 1995-11-07 Medtronic, Inc. Intravascular stent and method
US5824048A (en) 1993-04-26 1998-10-20 Medtronic, Inc. Method for delivering a therapeutic substance to a body lumen
SE9301422D0 (sv) 1993-04-28 1993-04-28 Kabi Pharmacia Ab Method and means for inhibiting posterior capsule opacification
CA2161776C (en) 1993-04-28 2005-12-20 Chandrashekhar P. Pathak Apparatus and methods for intraluminal photothermoforming
ES2131083T3 (es) 1993-05-03 1999-07-16 Physion Srl Nuevas formulaciones de morfina para su utilizacion por administracion iontoforetica.
ATE401911T1 (de) * 1993-05-13 2008-08-15 Poniard Pharmaceuticals Inc Ein inhibitor für glatte gefässmuskelzellen für therapeutische nutzung
WO1994026303A1 (en) 1993-05-13 1994-11-24 Neorx Corporation Prevention and treatment of pathologies associated with abnormally proliferative smooth muscle cells
US5478860A (en) 1993-06-04 1995-12-26 Inex Pharmaceuticals Corp. Stable microemulsions for hydrophobic compound delivery
US5342926A (en) 1993-06-08 1994-08-30 The Regents Of The University Of California Analogs of cytochalasin B as radiopharmaceuticals for nuclear imaging of trans-membrane glucose transport
JPH08511530A (ja) 1993-06-11 1996-12-03 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リーランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ 内因性酸化窒素生成又は活性の調節による血管変性疾患の治療
US5445941A (en) 1993-06-21 1995-08-29 Eli Lilly And Company Method for screening anti-osteoporosis agents
IL109990A (en) 1993-06-21 1999-06-20 Lilly Co Eli Materials and methods for screening anti-osteoporosis agents
DE4320896A1 (de) 1993-06-24 1995-01-05 Denecke Rainer Dr Med Vet Präparat zur Therapie und Prophylaxe von Demenz-Erkrankungen
IL110052A (en) 1993-06-24 2001-04-30 Lilly Co Eli Pharmaceutical preparations containing derivatives of benzothiophene used as hypoglycemic compounds
DE4320898A1 (de) 1993-06-24 1995-01-05 Denecke Rainer Dr Med Vet Präparat zur Therapie und Prophylaxe von Erkrankungen, die bei Imbalancen von Plasmalipiden auftreten
ATE502664T1 (de) 1993-07-19 2011-04-15 Angiotech Pharm Inc Herstellungsmethode eines stents mit anti- angiogener zusammensetzung
US5994341A (en) 1993-07-19 1999-11-30 Angiogenesis Technologies, Inc. Anti-angiogenic Compositions and methods for the treatment of arthritis
EG20321A (en) * 1993-07-21 1998-10-31 Otsuka Pharma Co Ltd Medical material and process for producing the same
TW303299B (de) 1993-07-22 1997-04-21 Lilly Co Eli
US5453492A (en) 1993-07-28 1995-09-26 La Jolla Cancer Research Foundation 60 kDa transforming growth factor-β-binding protein and its use to detect or purify TGF-β
US5422362A (en) 1993-07-29 1995-06-06 Quadra Logic Technologies, Inc. Method to inhibit restenosis
EP0711158B2 (de) 1993-07-29 2008-07-23 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Verfahren zur behandlung atherosklerose oder restenose mit hilfe eines mikrotubulusstabilisators
US5387680A (en) 1993-08-10 1995-02-07 American Home Products Corporation C-22 ring stabilized rapamycin derivatives
US5354801A (en) 1993-08-12 1994-10-11 Cytec Technology Corp. Process for producing small polymer phase droplet microemulsions by multistep aqueous phase addition
CA2129288C (en) 1993-08-17 2000-05-16 Jerzy Golik Phosphonooxymethyl esters of taxane derivatives
US5441947A (en) 1993-08-25 1995-08-15 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting vascular restenosis
US5380299A (en) 1993-08-30 1995-01-10 Med Institute, Inc. Thrombolytic treated intravascular medical device
GB9318844D0 (en) 1993-09-10 1993-10-27 Esselte Letraset Ltd Nibb units for pens
US6087479A (en) 1993-09-17 2000-07-11 Nitromed, Inc. Localized use of nitric oxide-adducts to prevent internal tissue damage
US5324739A (en) 1993-10-07 1994-06-28 State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of Oregon State University Compound exhibiting antiproliferative activity against cells
US5457116A (en) 1993-10-15 1995-10-10 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting uterine fibrosis
US5391557A (en) 1993-10-15 1995-02-21 Eli Lilly And Company Methods for the treatment of peri-menopausal syndrome
US6133242A (en) 1993-10-15 2000-10-17 Thomas Jefferson Univerisity Inhibition of extracellular matrix synthesis by antisense compounds directed to nuclear proto-oncogenes
US5461065A (en) 1993-10-15 1995-10-24 Eli Lilly And Company Methods for inhibiting endometriosis
US5482950A (en) 1993-10-15 1996-01-09 Eli Lilly And Company Methods for lowering serum cholesterol
UA32427C2 (uk) 1993-10-15 2000-12-15 Елі Ліллі Енд Компані Застосування бензотіофенів або їх фармацевтично прийнятних солей або сольватів для інгібування ангіогенезу і/або ангіогенних захворювань
US5418252A (en) 1993-10-15 1995-05-23 Eli Lilly And Company Method for inhibiting cartilage degradation
US5457113A (en) 1993-10-15 1995-10-10 Eli Lilly And Company Methods for inhibiting vascular smooth muscle cell proliferation and restinosis
US5441964A (en) 1993-10-15 1995-08-15 Eli Lilly And Company Methods for inhibiting bone loss using substituted benzothiophene
US5462966A (en) 1993-10-15 1995-10-31 Carter-Wallace Inc. Methods for the prevention and control of cellular damage resulting from coronary artery occlusion-reperfusion
WO1995010989A1 (en) 1993-10-19 1995-04-27 Scimed Life Systems, Inc. Intravascular stent pump
US5411988A (en) 1993-10-27 1995-05-02 Bockow; Barry I. Compositions and methods for inhibiting inflammation and adhesion formation
CA2117967A1 (en) 1993-10-27 1995-04-28 Thomas W. Sander Tissue repair device and apparatus and method for fabricating same
US5480904A (en) 1993-10-28 1996-01-02 Eli Lilly And Company Methods for inhibiting uterine fibrosis
US5436243A (en) 1993-11-17 1995-07-25 Research Triangle Institute Duke University Aminoanthraquinone derivatives to combat multidrug resistance
WO1995013830A1 (en) 1993-11-17 1995-05-26 Massachusetts Institute Of Technology Method for inhibiting angiogenesis using heparinase
US5393772A (en) 1993-11-24 1995-02-28 Boehringer Mannheim Pharmaceuticals Corporation Use of, and method of treatment using, hydroxycarbazole compounds for inhibition of smooth muscle migration and proliferation
HU213407B (en) 1993-12-09 1997-06-30 Egyt Gyogyszervegyeszeti Gyar Process for producing tablet with diffusive-osmotic release
US5593987A (en) 1993-12-21 1997-01-14 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting breast disorders
US5447941A (en) 1993-12-21 1995-09-05 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting pulmonary hypertensive diseases with raloxifene and related benzothiophenes
US5441965A (en) 1993-12-21 1995-08-15 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting thrombin
US6417198B1 (en) 1993-12-21 2002-07-09 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting CNS problems in post-menopausal women
US5451590A (en) 1993-12-21 1995-09-19 Eli Lilly & Co. Methods of inhibiting sexual precocity
US5439923A (en) 1993-12-21 1995-08-08 Eli Lilly And Company Method of inhibiting seborrhea and acne
US5708009A (en) 1993-12-21 1998-01-13 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting myeloperoxidase activity
US5389670A (en) 1993-12-21 1995-02-14 Eli Lilly Company Methods of inhibiting the symptoms of premenstrual syndrome/late luteal phase dysphoric disorder
US5451589A (en) 1993-12-21 1995-09-19 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting ovarian dysgenesis, delayed puberty, or sexual infantilism
US5446053A (en) 1993-12-21 1995-08-29 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting dysfunctional uterine bleeding
US5439931A (en) 1993-12-21 1995-08-08 Eli Lilly And Company Method for increasing libido in post-menopausal women
US5461064A (en) 1993-12-21 1995-10-24 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting atrophy of the skin and vagina
US5492927A (en) 1993-12-21 1996-02-20 Eli Lilly And Company Non-peptide tachykinin receptor antagonists to treat allergy
US5534526A (en) 1993-12-21 1996-07-09 Eli Lilly And Company Methods for inhibiting vasomotor symptoms and attending psychological disturbances surrounding post-menopausal syndrome
EP0664121B1 (de) 1993-12-21 2001-10-31 Eli Lilly And Company Verwendung von Raloxifen und dessen Analogen zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Atherosklerose und ischämischer Herzerkrankungen
US5574047A (en) 1993-12-21 1996-11-12 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting imperfect tissue repair
US5462950A (en) 1993-12-21 1995-10-31 Eli Lilly And Company Methods of treating menstrual symptoms and compositions therefore
US5552415A (en) 1993-12-21 1996-09-03 Eli Lilly And Company Method of inhibiting Alzheimer's Disease
US5462949A (en) 1993-12-21 1995-10-31 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting fertility in women
US5441966A (en) 1993-12-21 1995-08-15 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting Turner's syndrome
US5521198A (en) 1993-12-21 1996-05-28 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting autoimmune diseases
US5519042A (en) 1994-01-13 1996-05-21 Hoechst Aktiengesellschaft Method of treating hyperproliferative vascular disease
US5591753A (en) 1994-01-28 1997-01-07 Eli Lilly And Company Combination treatment for osteoporosis
US5407955A (en) 1994-02-18 1995-04-18 Eli Lilly And Company Methods for lowering serum cholesterol and inhibiting smooth muscle cell proliferation, restenosis, endometriosis, and uterine fibroid disease
CA2143263C (en) 1994-03-02 2002-01-08 Kerry John Hartauer Orally administrable raloxifene formulations
US5478847A (en) 1994-03-02 1995-12-26 Eli Lilly And Company Methods of use for inhibiting bone loss and lowering serum cholesterol
US5484772A (en) 1994-03-04 1996-01-16 Eli Lilly And Company Antithrombotic agents
US5451414A (en) 1994-03-15 1995-09-19 Heritage Environmental Services, Inc. Micronutrient supplement
US6461381B2 (en) 1994-03-17 2002-10-08 Medinol, Ltd. Flexible expandable stent
US5733303A (en) * 1994-03-17 1998-03-31 Medinol Ltd. Flexible expandable stent
US5843120A (en) 1994-03-17 1998-12-01 Medinol Ltd. Flexible-expandable stent
US5525610A (en) 1994-03-31 1996-06-11 American Home Products Corporation 42-Epi-rapamycin and pharmaceutical compositions thereof
CA2145614A1 (en) 1994-03-31 1995-10-01 Jeffrey A. Dodge Intermediates and processes for preparing benzothiophene compounds
US5362718A (en) 1994-04-18 1994-11-08 American Home Products Corporation Rapamycin hydroxyesters
US5681835A (en) 1994-04-25 1997-10-28 Glaxo Wellcome Inc. Non-steroidal ligands for the estrogen receptor
US5426123A (en) 1994-05-11 1995-06-20 Eli Lilly And Company Method for lowering serum cholesterol with 1,1,2-triphenylbut-1-ene derivatives
US5384332A (en) 1994-05-11 1995-01-24 Eli Lilly And Company Methods for inhibiting aortal smooth muscle cell proliferation and restenosis with 1,1,2-triphenylbut-1-ene derivatives
US5455275A (en) 1994-05-11 1995-10-03 Eli Lilly And Company Methods for inhibiting endometriosis and uterine fibroid disease with 1,1,2-triphenylbut-1-ene derivatives
US5470883A (en) 1994-05-23 1995-11-28 Stromberg; Brent V. Method of treating peripheral vasoconstriction with tamoxifen citrate
US5580898A (en) 1994-05-24 1996-12-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of stabilizing microtubules
US5656450A (en) 1994-05-27 1997-08-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Activation of latent transforming growth factor β by matrix vesicles
JPH07316192A (ja) 1994-05-27 1995-12-05 Hoechst Japan Ltd L−リシル−グリシル−l−ヒスチジンおよびこれを含有する創傷治療剤
US5424331A (en) 1994-06-10 1995-06-13 Bio-Virus Research Incorporated Pharmaceutical compositions and dietary soybean food products for the prevention of osteoporosis
US5466810A (en) 1994-06-10 1995-11-14 Eli Lilly And Company 2-amino-3-aroyl-benzo[β]thiophenes and methods for preparing and using same to produce 6-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-3-[4-(2-aminoethoxy)-benzoyl]benzo[β]thiophenes
US5629077A (en) 1994-06-27 1997-05-13 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Biodegradable mesh and film stent
US6492106B1 (en) 1994-06-27 2002-12-10 The Johns Hopkins University Mammalian proteins that bind to FKBP12 in a rapamycin-dependent fashion
US6476200B1 (en) 1994-06-27 2002-11-05 The Johns Hopkins University Mammalian proteins that bind to FKBP12 in a rapamycin-dependent fashion
US5441986A (en) 1994-07-19 1995-08-15 Pfizer Inc. Estrogen agonists as remedies for prostate and cardiovascular diseases
US5496828A (en) 1994-08-22 1996-03-05 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting ulcerative mucositis
US5434166A (en) 1994-08-22 1995-07-18 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting demyelinating and desmyelinating diseases
US5491159A (en) 1994-08-30 1996-02-13 American Home Products Corporation 2-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxy-phenyl)-oxazoles as anti-atherosclerotic agents
US5731436A (en) 1994-08-31 1998-03-24 Eli Lilly And Company Process for preparing benzoic acid derivative intermediates and benzothiophene pharmaceutical agents
US5660873A (en) 1994-09-09 1997-08-26 Bioseal, Limited Liability Corporaton Coating intraluminal stents
US7501441B1 (en) 1994-09-20 2009-03-10 Eli Lilly And Company Naphthyl compounds, intermediates, processes, compositions, and methods
US5492921A (en) 1994-09-20 1996-02-20 Eli Lilly And Company Benzothiophene compounds, compositions, and methods for inhibiting aortal smooth muscle proliferation
US5649977A (en) 1994-09-22 1997-07-22 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Metal reinforced polymer stent
US5583153A (en) 1994-10-06 1996-12-10 Regents Of The University Of California Use of taxol in the treatment of rheumatoid arthritis
US5643580A (en) 1994-10-17 1997-07-01 Surface Genesis, Inc. Biocompatible coating, medical device using the same and methods
US5521191A (en) 1994-10-17 1996-05-28 Washington University Method for treatment of arterial stenosis
US5516807A (en) 1994-10-25 1996-05-14 Warner-Lambert Company Method for treating vascular proliferative disorders following balloon angioplasty
US5498775A (en) 1994-11-07 1996-03-12 American Home Products Corporation Polyanionic benzylglycosides as inhibitors of smooth muscle cell proliferation
US5563145A (en) 1994-12-07 1996-10-08 American Home Products Corporation Rapamycin 42-oximes and hydroxylamines
CA2163837C (en) 1994-12-13 1999-07-20 Robert K. Perrone Crystalline paclitaxel hydrates
US5637113A (en) 1994-12-13 1997-06-10 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Polymer film for wrapping a stent structure
US5700559A (en) 1994-12-16 1997-12-23 Advanced Surface Technology Durable hydrophilic surface coatings
US5489587A (en) 1995-01-20 1996-02-06 Eli Lilly And Company Benzofurans used to inhibit bone loss
US5571808A (en) 1995-01-31 1996-11-05 Eli Lilly And Company Method for treating smoking-related bone loss
US5484808A (en) 1995-02-09 1996-01-16 Eli Lilly And Company Methods of inhibiting cell-cell adhesion
US5510357A (en) 1995-02-28 1996-04-23 Eli Lilly And Company Benzothiophene compounds as anti-estrogenic agents
US5605696A (en) 1995-03-30 1997-02-25 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Drug loaded polymeric material and method of manufacture
US5563054A (en) 1995-03-31 1996-10-08 Eli Lilly And Company Process for preparation of benzo[B]thiophene glucuronides
US6099562A (en) 1996-06-13 2000-08-08 Schneider (Usa) Inc. Drug coating with topcoat
US6120536A (en) 1995-04-19 2000-09-19 Schneider (Usa) Inc. Medical devices with long term non-thrombogenic coatings
AU4952096A (en) 1995-04-19 1996-11-07 Schneider (Usa) Inc. Drug release coated stent
US20020091433A1 (en) 1995-04-19 2002-07-11 Ni Ding Drug release coated stent
US5837313A (en) 1995-04-19 1998-11-17 Schneider (Usa) Inc Drug release stent coating process
US5688855A (en) 1995-05-01 1997-11-18 S.K.Y. Polymers, Inc. Thin film hydrophilic coatings
US5622975A (en) 1995-06-01 1997-04-22 Eli Lilly And Company Methods for inhibiting vascular smooth muscle cell migration
US5639274A (en) 1995-06-02 1997-06-17 Fischell; Robert E. Integrated catheter system for balloon angioplasty and stent delivery
US5609629A (en) 1995-06-07 1997-03-11 Med Institute, Inc. Coated implantable medical device
CA2178541C (en) 1995-06-07 2009-11-24 Neal E. Fearnot Implantable medical device
US5877224A (en) 1995-07-28 1999-03-02 Rutgers, The State University Of New Jersey Polymeric drug formulations
US5726186A (en) 1995-09-08 1998-03-10 Eli Lilly And Company Pentacyclic compounds, intermediates, processes, compositions, and methods
US6001622A (en) 1995-12-21 1999-12-14 Sunnybrook Health Science Centre Integrin-linked kinase and its use
US5722984A (en) 1996-01-16 1998-03-03 Iso Stent, Inc. Antithrombogenic radioactive coating for an intravascular stent
US6783543B2 (en) 2000-06-05 2004-08-31 Scimed Life Systems, Inc. Intravascular stent with increasing coating retaining capacity
US5797898A (en) 1996-07-02 1998-08-25 Massachusetts Institute Of Technology Microchip drug delivery devices
US6086910A (en) 1997-09-19 2000-07-11 The Howard Foundation Food supplements
US5980972A (en) 1996-12-20 1999-11-09 Schneider (Usa) Inc Method of applying drug-release coatings
US5863285A (en) 1997-01-30 1999-01-26 Cordis Corporation Balloon catheter with radioactive means
US5994388A (en) 1997-03-18 1999-11-30 The Children's Medical Center Corporation Cytochalasin and isoindolinone derivatives as inhibitors of angiogenesis
US5824054A (en) 1997-03-18 1998-10-20 Endotex Interventional Systems, Inc. Coiled sheet graft stent and methods of making and use
BR9808109A (pt) 1997-03-31 2000-03-08 Neorx Corp Inibidor terapêutico de células vasculares da musculatura lisa
US5779732A (en) 1997-03-31 1998-07-14 Medtronic, Inc. Method and apparatus for implanting a film with an exandable stent
US5948639A (en) 1997-04-10 1999-09-07 Millennium Pharmaceuticals, Inc. TGF-β pathway genes
US5879697A (en) 1997-04-30 1999-03-09 Schneider Usa Inc Drug-releasing coatings for medical devices
US5976067A (en) 1997-05-28 1999-11-02 Ablation Technologies, Inc. Combination radioactive and temperature self-regulating thermal seed implant for treating tumors
US6106454A (en) 1997-06-17 2000-08-22 Medtronic, Inc. Medical device for delivering localized radiation
US6203536B1 (en) 1997-06-17 2001-03-20 Medtronic, Inc. Medical device for delivering a therapeutic substance and method therefor
US6110483A (en) 1997-06-23 2000-08-29 Sts Biopolymers, Inc. Adherent, flexible hydrogel and medicated coatings
US6309414B1 (en) 1997-11-04 2001-10-30 Sorin Biomedica Cardio S.P.A. Angioplasty stents
SE9704401D0 (sv) 1997-11-28 1997-11-28 Astra Ab Matrix pellets for greasy, oily or sticky drug substances
KR100228188B1 (ko) 1997-12-24 1999-11-01 김성년 방사성 스텐트 및 그의 제조방법
AU2209599A (en) 1997-12-31 1999-07-19 Pharmasonics, Inc. Methods and systems for the inhibition of vascular hyperplasia
US6241762B1 (en) 1998-03-30 2001-06-05 Conor Medsystems, Inc. Expandable medical device with ductile hinges
US6099499A (en) 1998-04-28 2000-08-08 Medtronic, Inc. Device for in vivo radiation delivery and method for delivery
US6013099A (en) 1998-04-29 2000-01-11 Medtronic, Inc. Medical device for delivering a water-insoluble therapeutic salt or substance
US6093142A (en) 1998-04-30 2000-07-25 Medtronic Inc. Device for in vivo radiation delivery and method for delivery
US6129757A (en) 1998-05-18 2000-10-10 Scimed Life Systems Implantable members for receiving therapeutically useful compositions
US6168619B1 (en) 1998-10-16 2001-01-02 Quanam Medical Corporation Intravascular stent having a coaxial polymer member and end sleeves
US6198016B1 (en) 1998-12-01 2001-03-06 3M Innovative Properties Company Wet skin adhesive article
CA2383423A1 (en) 1999-09-17 2001-03-22 Whitehead Institute For Biomedical Research Reverse transfection method
WO2001035928A1 (en) 1999-11-17 2001-05-25 Microchips, Inc. Microfabricated devices for the delivery of molecules into a carrier fluid
US6491617B1 (en) 1999-12-30 2002-12-10 St. Jude Medical, Inc. Medical devices that resist restenosis
US6395326B1 (en) 2000-05-31 2002-05-28 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Apparatus and method for depositing a coating onto a surface of a prosthesis
US6764507B2 (en) 2000-10-16 2004-07-20 Conor Medsystems, Inc. Expandable medical device with improved spatial distribution
US6656216B1 (en) 2001-06-29 2003-12-02 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Composite stent with regioselective material
US6497647B1 (en) 2001-07-18 2002-12-24 Ati Medical, Inc. Radiation and thermal energy source
US20030065377A1 (en) 2001-09-28 2003-04-03 Davila Luis A. Coated medical devices
US20040236416A1 (en) 2003-05-20 2004-11-25 Robert Falotico Increased biocompatibility of implantable medical devices

Also Published As

Publication number Publication date
CA2212537C (en) 2006-12-19
ATE321573T1 (de) 2006-04-15
US8158670B2 (en) 2012-04-17
WO1996025176A1 (en) 1996-08-22
US20020040064A1 (en) 2002-04-04
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DE69635968D1 (de) 2006-05-18
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CA2559392A1 (en) 1996-08-22
JP2007075623A (ja) 2007-03-29
US6599928B2 (en) 2003-07-29
CA2212537A1 (en) 1996-08-22
US20070148207A1 (en) 2007-06-28
ES2217306T3 (es) 2004-11-01
US20070134314A1 (en) 2007-06-14
EP1669091A2 (de) 2006-06-14
EP0809515B1 (de) 2004-04-28
DE69632310D1 (de) 2004-06-03
DE69635968T2 (de) 2007-01-25
US20120195951A1 (en) 2012-08-02
US8097642B2 (en) 2012-01-17
US6515009B1 (en) 2003-02-04
AU4985196A (en) 1996-09-04
US20110300221A1 (en) 2011-12-08
JPH11500635A (ja) 1999-01-19
US6171609B1 (en) 2001-01-09
EP1407786B1 (de) 2006-03-29
EP0809515A1 (de) 1997-12-03
EP1669091A3 (de) 2009-06-17

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