DE69720811T2

DE69720811T2 - L-Ribavirin und dessen Verwendung

Info

Publication number: DE69720811T2
Application number: DE69720811T
Authority: DE
Inventors: Kandasamy Ramasamy; Robert Tam; Devron Averett
Original assignee: Ribapharm Inc
Current assignee: Valeant Research and Development
Priority date: 1996-10-16
Filing date: 1997-10-15
Publication date: 2004-03-11
Anticipated expiration: 2017-10-16
Also published as: KR100398923B1; DE69721339D1; EP1027359A4; WO1998016186A3; US20020095033A1; RU2001132536A; CA2267279A1; EP1027359B9; AU4986797A; NO991785D0; JP2003176296A; NZ334915A; ES2195125T3; RU2188828C2; NO313417B1; UA63915C2; WO1998016186A2; CZ120699A3; US6573248B2; US6552183B1

Description

Bereich der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft den Bereich der L-Nukleoside.
Hintergrund der Erfindung
In den letzten Jahrzehnten wurden signifikante Anstrengungen unternommen, die darauf verwandt wurden, mögliche Verwendungen der D-Nukleosidanaloga als antivirale Agenzien zu untersuchen. Diese Arbeit hat zum Teil Früchte getragen und eine Reihe von Nukleosidanaloga, einschließlich der HIV reverse Transkriptase Inhibitoren (AZT, ddI, ddC, d4T und 3TC), werden zur Zeit als antivirale Arzneimittel vermarktet.
Nukleosidanaloga wurden zudem für die Verwendung als Modulatoren des Immunsystems untersucht (Bennet, P. A. et al., J. Med. Chem., 36, 635, 1993), jedoch erneut mit nicht völlig zufriedenstellenden Ergebnissen. Beispielweise wurden Guanosinanaloga, wie z. B. 8-Bromo-, 8-Mercapto-, 7-Methyl-8-oxoguanosin (Goodman, M. G. Immunopharmacology, 21, 51–68, 1991) und 7-Thia-8-oxoguanosin (Nagahara, K., J. Med. Chem., 33, 407–415, 1990; U.S. Pat. Nr. 5,041,426) über Jahre, in Bezug auf deren Fähigkeit das Immunsystem zu aktivieren, studiert. Diese Derivate des Guanosins zeigen eine hervorragende antivirale und/oder Antitumoraktivität in vivo. Diese C₈-substituierten Guanosine waren jedoch nicht in der Lage, T-Zellen zu aktivieren (Sharma, B. S. et al., Clin. Exp. Metastasis, 9, 429–439, 1991). Es wurde herausgefunden, dass das Gleiche auf 6-Arylpyrimidinone zutrifft (Wierenga, W., Ann. N. Y. Acad. Sci., 685, 296–300, 1993). In einer anderen Forschungsarbeit wurde eine Reihe von 3-Deazapurin-Nukleosiden synthetisiert und als das Immunsystem modulierende Agenzien bewertet. Das US Patent Nr. 4,309,419 beschreibt die Verwendung von 3-Deazaadenosin als Inhibitor des Immunsystems.
Das β-D-Nukleosid β-2'-Deoxy-3-deazaguanosin (U.S. Pat. Nr. 4,950,647) zeigt das kräftigste immunstärkende Potential hinsichtlich der aktivierten T-Zellantwort. Die entzündungshemmende und die die Immunantwort unterdrückende Aktivität wurden zudem für bestimmte 2'-Deoxynukleoside offenbart (EPA Anmeldung 0 038 569). Diese Verbindungen unterliegen jedoch in vivo leicht der metabolischen Spaltung ihrer Glykosylbindung, die deren biologisches Potential wirkungsvoll inaktiviert. Die im US Patent Nr. 4,148,888 offenbarten Adenosinderivate werden zudem in vivo durch Deaminaseenzyme katabolisiert. In noch einer anderen Forschungsarbeit scheint Levamisol, ein thymomimetisches Immunstimulans (Hadden et al., Immunol. Today, 14, 275-280, 1993) auf die Linie der T-Zellabstammung in einer Weise einzuwirken, die Thymushormonen ähnlich ist. Tucaresol (Reitz et al., Nature, 377, 71–75, 1995), ein anderes Stimulans der T-Zellen, wird jetzt klinischen Versuchen unterzogen. In noch jüngerer Zeit wurde eine 6-substituierte Purinverknüpfer-Aminosäure (Zacharie et al, J. Med. Chem., 40, 2883–2894, 1997) als vielversprechendes Immunstimulans beschrieben, welches auf jene Krankheitszustände gerichtet werden kann, die eine gesteigerte CTL- oder Th1-Typ Antwort erfordern.
Ein mögliches Ziel der Immunmodulation schließt die Stimulation oder die Unterdrückung der Th1 und Th2 Lymphokine ein. Die Zellen vom Typ I (Th1) produzieren Interleukin 2 (IL-2), den Tumornekrosefaktor (TNFα) und Interferon-gamma (IFNγ) und diese sind primär für die zellvermittelte Immunität verantwortlich, wie z. B. der Hypersensitivität des verzögerten Typus und die antivirale Immunität. Die Zellen vom Typ 2 (Th2) produzieren die Interleukine IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 und IL-13 und sind primär in der Unterstützung humoraler Immunantworten involviert, wie z. B. jenen, die in Antwort auf Allergene beobachtet werden, z. B. das Isotyp-Umschalten der IgE und IgG4 Antikörper (Mosmann, Annu. Rev. Immunol., 7, 145–173, 1989). Es wurde gezeigt, dass Guanosinanaloga verschiedene Wirkungen bei den Lymphokinen IL-1, IL-6, IFNα und TNFα (indirekt) in vitro (Goodman, Int. J. Immunopharmacol., 10, 579–88, 1988) und in vivo (Smee et al., Antiviral. Res., 15, 229, 1991) hervorrufen. Die Fähigkeit der D-Guanosinanaloga, wie z. B. 7-Thio-8-oxoguanosin, die Typ I oder Typ 2 Cytokine unmittelbar in T-Zellen zu modulieren, war jedoch nicht wirkungsvoll oder wurde nicht beschrieben.
Signifikanterweise wurde der Großteil der Forschungsarbeit zu kleinen Molekülen auf die Synthese und die Bewertung von D-Nukleosiden gerichtet. Dieser schließt Ribavirin ein (Witkowski, J. T. et al., J. Med. Chem., 15, 1150, 1972) , AZT (De Clercq, E., Adv. Drug Res., 17, 1, 1988), DDI (Yarchoan, R. et al., Science (Washington, D.C.), 245, 412, 1989), DDC (Mitsuya, H. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 83, 1911, 1986), d4T (Mansuri, M. M. et al., J. Med. Chem , 32, 461, 1989) and 3TC (Doong, S. L. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 88, 8495–8599, 1991). In dieser Handvoll therapeutischer Agenzien enthält nur 3TC eine nicht natürliche modifizierte L-Ribosegruppe, das Enantiomer der natürlichen D-Ribose.
Nach der Zulassung von 3TC durch die FDA wurde berichtet, dass eine Reihe von Nukleosiden mit nicht natürlicher L-Konfiguration potente chemotherapeutische Agenzien gegen den Immunabwehrschwächevirus (HIV), Hepatitis B Virus (HBV) und bestimmte Formen von Krebs sind. Diese schließen (-)-β-L-1-[2-(Hydroxymethyl)-1,3-oxathiolan-4-yl]-5-fluorocytosin (FTC; Furman, P. A., et al., Antimicrob. Agents Chemother., 36, 2686–2692, 1992), (-)-β-L-2',3'-Dideoxypentofuranosyl-5-flurocytosin (L-FddC; Gosselin, G., et al., Antimicrob. Agents Chemother., 38, 1292–1297, 1994), (-)-β-L-1-[2-(Hydroxymethyl)-1,3-oxathiolan-4-yl]cytosin [(-)-OddC; Grove, K. L., et al., Cancer Res., 55, 3008–3011, 1995], 2',3'- Dideoxy-β-L-cystidin (β-L-ddC; Lin, T. S., et al., J. Med. Chem., 37, 798–803, 1994), 2'-Fluoro-5-methyl-β-Larabinofuranosyluracil (L-FMAU; U.S. Pat. Nr. 5,567,688), 2',3'-Dideoxy-2',3'-didehydro-β-L-cystidin (β-L-d4C; Lin, T. S., et al., J. Med. Chem., 39, 1757–1759, 1996), 2',3'-Dideoxy-2',3'-didehydro-β-L-5-fluorocystidin (β-L-Fd4C; Lin, T. S., et al, J. Med. Chem., 39, 1757–1759, 1996), L-Cyclopentyl-carbozyklische Nukleoside (Wang, P., et al., Tetrahedron Lett., 38, 4207–4210, 1997) und eine Vielzahl von 9-(2'-Deoxy-2'-fluoro-β-L-arabinofuranosyl)purin Nukleosiden (Ma, T. et al., J. Med. Chem., 40, 2750–2754, 1997) ein.
Über andere Forschungsarbeiten an L-Nukleosiden wurde ebenfalls berichtet. Zum Beispiel beschreibt das US Patent Nr. 5,009,698 die Synthese und die Verwendung von L-Adenosin zum Stimulieren des Wachstums einer Pflanze. WO 92/08727 beschreibt bestimmte L-2'-Deoxyuridine und ihre Verwendung zur Behandlung von Viren. Spadari, S., et al., J. Med. Chem., 35, 4214–4220, 1992, beschreibt die Synthese bestimmter L-β-Nukleoside, die zur Behandlung viraler Infektionen, einschließlich der Herpes Simplex Virus Typ I, anwendbar sind. Das US Patent Nr. 5,559,101 beschreibt die Synthese von α- und β-L-Ribofuranosylnukleosiden, die Verfahren zu deren Herstellung, eine pharmazeutische Zusammensetzung, die diese enthält, und ein Verfahren zur Verwendung dieser zur Behandlung verschiedener Krankheiten in Säugern. Ein deutsches Patent ( DE 195 18 216 ) beschreibt die Synthese von 2'-Fluoro-2'-deoxy-L-β-arabinofuranosylpyrimidin Nukleosiden. Die U.S. Patente Nr. 5,565,438 und 5,567,688 beschreiben die Synthese und den Nutzen von L-FMAU. Das WO Patent 95/20595 beschreibt die Synthese von 2'-Deoxy-2'-fluoro-L-β-arbinofuranosylpurin und Pyrimidinnukleosiden und ein Verfahren zur Behandlung von HBV oder EBV. Das U.S. Patent Nr. 5,567,.689 beschreibt Verfahren zur Erhöhung der Uridin-Spiegel mit L-Nukleosiden. Das WO Patent 96/28170 beschreibt ein Verfahren zum Verringerung der Toxizität von D-Nukleoside durch gemeinsame Verabreichung einer wirksamen Menge von L-Nukleosidverbindungen.
Während einige der bekannten L-Nukleoside starke antivirale Aktivität mit niedrigeren Toxizitätsprofilen als ihre D-Pendants zeigten, wurde signifikanterweise für keine dieser L-Nukleosidverbindungen gezeigt, dass es immunmodulierende Eigenschaften besitzt. Überdies gibt es zur Zeit keine wirksame Behandlung zur Modulation des Immunsystems, bei der Lymphokinprofile (Th1 und Th2 Untergruppen) einbezogen wurden.
Es verbleibt somit ein Bedarf für L-Nukleosidanaloga, besonders ein Bedarf für L-Nukleosidanaloga, welche das Immunsystem modulieren und insbesondere für L-Nukleosidanaloga, welche spezifisch Th1 und Th2 modulieren.
Kurze Beschreibung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung ist auf 1-β-L-Ribofuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxamid (L-Ribavirin) gerichtet, das die folgende Strukur aufweist:
In einem anderen Aspekt der Erfindung umfasst eine pharmazeutische Zusammensetzung eine therapeutisch wirksame Menge von L-Ribavirin oder einen pharmazeutisch akzeptablen Ester oder Salz davon, die mit mindestens einem pharmazeutisch akzeptablen Träger vermischt ist.
In noch einem anderen Aspekt der Erfindung wird L-Ribavirin in der Behandlung eines Zustandes, welcher positiv auf die Verabreichung der Verbindung anspricht und gemäß einem Formulierungsprotokoll, das die positive Antwort erzielt, verwendet. Neben anderen Dingen wird in Betracht gezogen, dass L-Ribavirin zur Behandlung einer Infektion, einer Infestation, von Krebs oder eines Tumors oder einer Autoimmunerkrankung verwendet werden kann.
Kurze Beschreibung der Figuren
Die 1 ist eine schematische Darstellung der chemischen Syntheseschritte, die zur Herstellung von L-Ribavirin, wie in dem nachfolgenden Beispielabschnitt, verwendet werden können.
Die 2– 3 sind graphische Darstellungen der Wirkung von D-Ribavirin und L-Ribavirin auf die IL-2-, TNFα-, IFN-γ-, IL-4- und IL-5-Spiegel von aktivierten T-Zellen.
Die 4 ist eine graphische Darstellung, die eine andere Gruppe von Experimenten beschreibt, in der die Wirkungen von L-Ribavirin auf die inflammatorische Antwort des Ohres auf Dinitrofluorobenzen bestimmt wurden.
Detaillierte Beschreibung
Dort wo die folgenden Ausdrücke in dieser Beschreibung verwendet werden, werden sie, wie nachstehend definiert, verwendet.
Der Ausdruck „Nukleosid" bezieht sich auf eine Verbindung, die aus einer Pentose oder einer modifizierten Pentosegruppe zusammengesetzt ist, die mit einer spezifischen Position eines Heterozyklus oder mit der natürlichen Position eines Purins (9-Position) oder Pyrimidins (1-Position) oder mit der äquivalenten Position in einem Analogon verknüpft ist.
Der Ausdruck „Nukleotid" bezieht sich auf einen Phosphatester, der an der 5'-Position eines Nukleosides substituiert ist.
Der Ausdruck „Heterozyklus" bezieht sich auf ein monovalentes gesättigtes oder ungesättigtes carbozyklisches Radikal mit mindestens einem Heteroatom, wie z. B. N, O oder S, wobei gegebenenfalls innerhalb des Ringes jede verfügbare Position unabhängig mit z. B. Hydroxy-, Oxo-, Amino-, Imino-, niederem Alkyl, Bromo-, Chloro- und/oder Cyano- substituiert sein kann. Innerhalb dieser Klasse von Substituenten sind Purine, Pyrimidine eingeschlossen.
Der Ausdruck „Purin" bezieht sich auf stickstoffhaltige bizyklische Heterozyklen.
Der Ausdruck „Pyrimidine" bezieht sich auf stickstoffhaltige monozyklische Heterozyklen.
Der Ausdruck „D-Nukleoside", der in der vorliegenden Erfindung verwendet wird, beschreibt die Nukleosidverbindungen, die eine D-Ribosezuckergruppe (z. B. Adenosin) besitzen.
Der Ausdruck „L-Nukleoside", der in der vorliegenden. Erfindung verwendet wird, beschreibt die Nukleosidverbindungen, die eine L-Ribosezuckergruppe besitzen.
Der Ausdruck „L-Konfiguration" wird durchgehend in der vorliegenden Erfindung zur Beschreibung der chemischen Konfiguration der Ribofuranosylgruppe der Verbindungen, welche mit den Nukleobasen verknüpft ist, verwendet. Die L-Konfiguration der Zuckergruppe der Verbindungen der vorliegenden Erfindung steht im Gegensatz zur D-Konfiguration der Ribosezuckergruppen der natürlich vorkommenden Nukleoside, wie z. B. Cytidin, Adenosin, Thymidin, Guanosin und Uridin.
Der Ausdruck („C-Nukleoside") wird durchgehend in der Beschreibung zum Beschreiben des Typs der Verknüpfung verwendet, welche zwischen der Ribosezuckergruppe und der heterozyklischen Base ausgebildet ist. In C-Nukleosiden hat die Verknüpfung ihren Ursprung in der C-1 Position der Ribosezuckergruppe und fügt sich an den Kohlenstoff der heterozyklischen Base an. Die Verknüpfung, die in C-Nukleosiden ausgebildet ist, ist vom Kohlenstoff-Kohlenstoff-Typ.
Der Ausdruck „N-Nukleoside" wird durchgehend in der Beschreibung zum Beschreiben des Typs der Verknüpfung verwendet, welche zwischen der Ribosezuckergruppe und der heterozyklischen Base ausgebildet ist. In N-Nukleosiden hat die Verknüpfung ihren Ursprung in der C-1 Position der Ribosezuckergruppe und fügt sich an den Stickstoff der heterozyklischen Base an. Die Verknüpfung, die in N-Nukleosiden ausgebildet ist, ist vom Kohlenstoff-Stickstoff-Typ.
Der Ausdruck „Schutzgruppe" bezieht sich auf eine chemische Gruppe, welche an ein Sauerstoff- oder ein Stickstoffatom angefügt wird, um deren weitere Reaktion während des Verlaufs der Derivatisierung der anderen Gruppen in dem Molekül, in welchem der Sauerstoff oder der Stickstoff gelegen ist, zu verhindern. Eine große Vielzahl von Sauerstoff- und Stickstoffschutzgruppen sind dem Fachmann der organischen Synthese bekannt.
Der Ausdruck „niederes Alkyl" bezieht sich auf Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, t-Butyl, i-Butyl oder n-Hexyl. Dieser Ausdruck ist weiter exemplarisch für eine zyklische, verzweigte oder gerade Kette von einem bis sechs Kohlenstoffatomen.
Der Ausdruck „Aryl" bezieht sich auf ein monovalentes ungesättigtes aromatisches carbozyklisches Radikal mit einem einzelnen Ring (z. B. Phenyl) oder zwei kondensierten Ringen (z. B. Naphthyl), welche gegebenenfalls mit Hydroxyl-, niederem Alkyl, Chloro- und/oder Cyano- substituiert sein können.
Der Ausdruck „Heterozyklus" bezieht sich auf ein monovalentes gesättigtes oder ungesättigtes carbozyklisches Radikal mit mindestens einem Heteroatom, wie z. B. N, O, S, Se oder P, wobei innerhalb des Ringes gegebenenfalls jede verfügbare Position unabhängig mit z. B. Hydroxy-, Oxo-, Amino-, Imino-, niederem Alkyl, Bromo-, Chloro- und/oder Cyano- substituiert oder nicht substituiert sein kann.
Der Ausdruck „monozyklisch" bezieht sich auf ein monovalentes gesättigtes carbozyklisches Radikal mit mindestens einem Heteroatom, wie z. B. O, N, S, Se oder P, wobei innerhalb des Ringes gegebenenfalls jede verfügbare Position unabhängig mit einer Zuckergruppe oder einer anderen Gruppe, wie Bromo-, Chloro- und/oder Cyano- substituiert sein kann, so dass das monozyklische Ringsystem schließlich aromatisiert [z. B. Thymidin, 1-(2'-Deoxy- -D-erythro-pentofuranosyl)thymin].
Der Ausdruck „Immunmodulatoren" bezieht sich auf natürliche oder synthetische Produkte, die in der Lage sind, das normale oder aberrante Immunsystem durch Stimulation oder Suppression zu modifizieren.
Der Ausdruck „wirksame Menge" bezieht sich auf die Menge von L-Ribavirin, welche die Immunfunktion auf normale Spiegel zurückführt oder die Immunfunktion über normale Spiegel steigert, um eine Infektion zu eliminieren.
L-Ribavirin hat multiple asymmetrische Zentren. Demzufolge kann es entweder in optisch aktiver Form oder als ein racemisches Gemisch hergestellt werden. Der Umfang der Erfindung, wie beschrieben und beansprucht, schließt die individuellen optischen Isomere und nicht-racemischen Gemische davon, wie auch die racemischen Formen des L-Ribavirins ein.
Die Ausdrücke „α" und „β" kennzeichnen die spezifische stereochemische Konfiguration eines Substituenten an einem asymmetrischen Kohlenstoffatom in einer chemischen Struktur, wie gezeichnet. Das hier beschriebene L-Ribavirin ist in der L-Furanosyl-Konfiguration.
Der Ausdruck „Enantiomere" bezieht sich auf ein Paar von Stereoisomeren, welche nicht übereinanderlegbare Spiegelbilder voneinander sind. Ein Gemisch eines Paares von Enantiomeren in einem 1 : 1 Verhältnis ist ein „racemisches" Gemisch.
Der Ausdruck „Isomere" bezieht sich auf unterschiedliche Verbindungen, die die gleiche Formel aufweisen. „Stereoisomere" sind Isomere, die sich lediglich in der Art der räumlichen Anordnung der Atome unterscheiden.
„Pharmazeutisch akzeptable Salze" können beliebige Salze sein, die von anorganischen und organischen Säuren oder Basen abgeleitet sind.
Ribavirin (1-β-D-Ribafuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxamid) ist ein monozyklisches synthetisches D-Nukleosid, welches nachgewiesene Aktivität gegen eine Reihe viraler Erkrankungen aufweist (Huffman et al., Antimicrob. Agents Chemother., 3, 235, 1975; Sidwell et al., Science, 177, 705, 1972) und gegenwärtig klinischen Versuchen in Kombination mit γ-Interferon für die Behandlung des Hepatitis C Virus unterzogen wird. In den vergangenen zwei Jahrzehnten wurde eine Reihe von Ribavirin D-Nukleosidanaloga erforscht und viele von diesen zeigen außergewöhnliche antivirale und Antitumoraktivitäten.
Es wurde jedoch über keine Arbeit zur Synthese von L-Isomeren von Ribavirinanaloga und deren biologische Aktivität berichtet. In einer Einkristall-Röntgenuntersuchung ähnelt Ribavirin strukturell dem Guanosin (Prusiner et al., Nature, 244, 166, 1973). Wegen der Ähnlichkeit des Ribavirins mit Guanosin erwarteten wir, dass die Ribavirin Nukleosidanaloga zusätzlich zur antiviralen Aktivität eine ähnliche oder überlegene immunmodulierende Aktivität wie die Guanosinanaloga zeigen sollten (Robins et al, US 5,041,426 ).
Verwendungen
Es ist vorgesehen, dass das L-Ribavirin der vorliegenden Erfindung verwendet wird, um eine große Vielzahl von Zuständen zu behandeln und zwar jeglichen Zustandes, welcher positiv auf die Verabreichung von L-Ribavirin anspricht. Unter anderem ist spezifisch vorgesehen, dass das L-Ribavirin der Erfindung zur Behandlung einer Infektion, einer Infestation, von Krebs oder Tumoren oder einer Autoimmunerkrankung verwendet werden kann.
Die zur Behandlung mit dem L-Ribavirin der vorliegenden Erfindung vorgesehenen Infektionen schließen Respiratory Syncytial Virus (RSV), Hepatitis B Virus (HBV), Hepatitis C Virus (HCV), Herpes Simplex Typ 1 und 2, Herpes genitalis, Herpes keratitis, Herpes encephalitis, Herpes zoster, humaner Immunabwehrschwächevirus (HIV), Influenza A Virus, Hantann Virus (hämorrhagisches Fieber), humaner Papillomavirus (HPV), Masern und Pilz ein.
Die zur Behandlung mit dem L-Ribavirin der vorliegenden Erfindung vorgesehenen Infestationen schließen Protozoen-Infestationen, wie auch Helminthen- oder andere parasitische Infestationen ein.
Die zur Behandlung vorgesehenen Krebsformen oder Tumore schließen jene ein, die durch ein Virus verursacht werden und die Wirkung kann die Inhibierung der Transformation der virusinfizierten Zellen in ein neoplastisches Stadium, die Inhibierung der Ausbreitung der Viren von transformierten Zellen auf andere normale Zellen und/oder den Wachstumsstopp der virustransformierten Zellen umfassen.
Die zur Behandlung vorgesehenen Autoimmun- und anderen Erkrankungen schließen Arthritis, Psoriasis, Darmerkrankung, juvenile Diabetes, Lupus, multiple Sklerose, Gicht und Gichtarthritis, rheumatische Arthritis, Abstoßung eines Transplantats, Allergie und Asthma ein.
Noch weitere vorgesehene Verwendungen des L-Ribavirins gemäß der vorliegenden Erfindung schließen die Verwendung als Intermediate in der chemischen Synthese von anderen Nukleosid- oder Nukleotidanaloga ein, welche wiederum als therapeutische Agenzien oder zu anderen Zwecken nützlich sind.
In noch einem anderen Aspekt umfasst ein Verfahren zur Behandlung eines Säugers das Verabreichen einer therapeutisch und/oder prophylaktisch wirksamen Menge eines Pharmazeutikums, welches das L-Ribavirin der vorliegenden Erfindung enthält. In diesem Aspekt kann die Wirkung die Modulierung eines Teils des Immunsystems eines Säugers betreffen, insbesondere die Modulierung der Lymphokinprofile von Th1 und Th2. Falls die Modulierung der Th1 und Th2 Lymphokine erfolgt, ist vorgesehen, dass die Modulierung die Stimulierung sowohl von Th1 als auch von Th2, die Suppression sowohl von Th1 als auch von Th2, die Stimulierung entweder von Th1 oder von Th2 und die Suppression des anderen oder eine bimodale Modulierung einschließen kann, in welcher eine Wirkung auf die Th1/Th2 Spiegel (wie z. B. eine allgemeine Suppression) bei einer niedrigen Konzentration erfolgt, während eine andere Wirkung (wie z. B. die Stimulierung entweder von Th1 oder von Th2 und die Suppression des anderen) bei einer höheren Konzentration erfolgt.
Im allgemeinen sind die bevorzugtesten Verwendungen gemäß der vorliegenden Erfindung jene, in welchen das L-Ribavirin von vergleichsweise geringer Zytotoxizität auf die Nicht-Zielwirtszellen ist und vergleichsweise wirksamer gegen das Ziel ist. In dieser Hinsicht kann es zudem vorteilhaft sein, dass die L-Nukleoside eine erhöhe Stabilität gegenüber D-Nukleosiden aufweisen können, die zu einer besseren Pharmakokinetik führen könnte. Dieses Ergebnis kann erreicht werden, da die L-Nukleoside nicht durch Enzyme erkannt werden können und deshalb längere Halbwertszeiten aufweisen können.
Es ist vorgesehen, dass das L-Ribavirin gemäß der vorliegenden Erfindung in einer geeigneten pharmazeutischen Formulierung und gemäß einem geeigneten Protokoll verabreicht wird. Die Verabreichung kann somit oral, parenteral (einschließlich subkutaner Injektionen, intravenös, intramuskulär, durch intrasternale Injektion oder Infusionstechniken), durch einen Inhalationsspray oder rektal, topisch usw. und in Formulierungen von Dosiseinheiten, die konventionelle nicht toxische pharmazeutisch akzeptable Träger, Hilfsstoffe und Bindemittel enthalten, erfolgen.
Beispielsweise wird vorgesehen, dass L-Ribavirin gemäß der vorliegenden Erfindung als Beimischung mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger formuliert werden kann. Zum Beispiel kann L-Ribavirin der vorliegenden Erfindung oral als pharmazeutisch akzeptable Salze verabreicht werden. Da das L-Ribavirin der vorliegenden Erfindung wasserlöslich ist, kann es intravenös in physiologischer Kochsalzlösung (z. B. auf einen pH von etwa 7.2–7.5 gepuffert) verabreicht werden. Herkömmliche Puffer, wie z. B. Phosphate, Bicarbonate oder Citrate können für diesen Zweck verwendet werden. Natürlich kann der Durchschnittsfachmann die Formulierungen innerhalb der Lehren der Patentschrift modifizieren, um zahlreiche Formulierungen für eine spezielle Art der Verabreichung bereitzustellen, ohne die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung instabil zu machen oder ihre therapeutische Wirkung zu beeinträchtigen. Insbesondere kann die Modifikation des L-Ribavirins, um es z. B. in Wasser oder einem anderen Bindemittel löslicher zu machen, leicht durch geringfügige Modifikationen (Salzformulierung, Veresterung, etc.) erreicht werden, die ohne weiteres im Durchschnittsfachwissen vorhanden sind. Es ist ebenfalls ein Bestandteil des Durchschnittsfachwissens, die Art der Verabreichung und das Regime der Dosierung von L-Ribavirin zu modifizieren, um dessen Pharmakokinetik auf eine maximal günstige Wirkung in den Patienten auszurichten.
In bestimmten pharmazeutischen Dosierungsformen wird die Form des Pro-Pharmakon des L-Ribavirins, insbesondere einschließlich acylierter (acetylierter oder anderer) Derivate, Pyridinester und verschiedener Salzformen des L-Ribavirins bevorzugt. Der Durchschnittsfachmann wird erkennen, wie leicht das L-Ribavirin zu den Formen des Pro-Pharmakon zu modifizieren ist, um die Abgabe der aktiven Verbindungen an einer Zielstelle innerhalb des Wirtsorganismus oder des Patienten zu erleichtern. Der Durchschnittsfachmann wird zudem einen Vorteil aus den günstigen pharmakokinetischen Parametern der Formen des Pro-Pharmakon, wo anwendbar, bei der Abgabe des L-Ribavirins an eine Zielstelle innerhalb des Wirtsorganismus oder des Patienten ziehen, um deren gewünschte Wirkung zu maximieren.
Zusätzlich kann L-Ribavirin gemäß der vorliegenden Erfindung allein oder in Kombination mit anderen Agenzien zur Behandlung der obigen Infektionen oder Zustände verabreicht werden. Die Kombinationstherapien gemäß der vorliegenden Erfindung umfassen die Verabreichung von L-Ribavirin oder eines funktionellen Derivates davon und mindestens einem anderen pharmazeutisch aktiven Inhaltsstoff. Der aktive Inhaltsstoff (e) und pharmazeutisch aktive Agenzien können getrennt oder zusammen verabreicht werden, und falls diese getrennt verabreicht werden, kann dies gleichzeitig oder getrennt in beliebiger Reihenfolge erfolgen. Die Mengen des aktiven Inhaltsstoffes(en) und des pharmazeutisch aktiven Agens(zien) und die relative zeitliche Koordinierung der Verabreichung wird so ausgewählt, um die gewünschte kombinierte therapeutische Wirkung zu erzielen. Bevorzugt beinhaltet die Kombinationstherapie die Verabreichung des L-Ribavirins der vorliegenden Erfindung oder eines physiologisch funktionellen Derivates davon und eines der Agenzien, die nachfolgend hier erwähnt werden.
Beispiele derartiger weiterer therapeutischer Agenzien schließen Agenzien ein, die wirksam in der Modulierung des Immunsystems oder assoziierter Zustände sind, wie z. B. AZT, 3TC, 8-substituierte Guanosinanaloga, 2',3'-Dideoxynukleoside, Interleukin II, Interferone, wie z. B. γ-Interferon, Tucaresol, Levamisol, Isoprinosin und Cyclolignane. Das L-Ribavirin gemäß der vorliegenden Erfindung kann zur Erhöhung der biologischen Aktivität bestimmter Agenzien gemäß der vorliegenden Erfindung durch Verminderung des Metabolismus oder der Inaktivierung anderer Verbindungen wirksam sein und wird als solche für diese beabsichtigte Wirkung zusammen verabreicht.
Hinsichtlich der Dosierung wird der Durchschnittsfachmann erkennen, dass eine therapeutisch wirksame Menge mit der zu behandelnden Infektion oder dem zu behandelnden Zustand, dessen Ernsthaftigkeit, dem angewandten Behandlungsregime, der Pharmakokinetik des verwendeten Agens sowie dem behandelten Patienten (Tier oder Mensch) variieren wird. Wirksame Dosierungen können von 1 mg/kg des Körpergewichts oder weniger bis zu 25 mg/kg des Körpergewichts oder mehr reichen. Im allgemeinen reicht eine therapeutisch wirksame Menge der vorliegenden Verbindung in einer Dosierungsform gewöhnlich von etwas weniger als etwa 1 mg/kg bis etwa 25 mg/kg des Patienten, in Abhängigkeit vom zu behandelnden Zustand oder der zu behandelnden Infektion und der Art der Verabreichung aus. Dieser Dosisbereich ergibt im allgemeinen wirksame Spiegel an Blutkonzentrationen der aktiven Verbindung, die von etwa 0,04 bis etwa 100 μg/cc des Blutes in dem Patienten reichen. Es ist jedoch vorgesehen, dass ein geeignetes Regime durch Verabreichen einer kleinen Menge und dem anschließenden Steigern der Menge, bis entweder die Nebenwirkungen unzulässig nachteilig werden oder die beabsichtigte Wirkung erreicht ist, entwickelt wird.
Die Verabreichung der aktiven Verbindung kann von der kontinuierlichen (intravenöser Tropf) bis zu mehreren oralen Verabreichungen pro Tag (z. B. Q. I. D.) reichen und kann neben anderen Arten der Verabreichung die orale, topische, parenterale, intramuskuläre, intravenöse, subkutane, transdermale (welche ein Agens zur Penetrationsverstärkung einschließen kann), buccale und die Verabreichung über Zäpfchen einschließen.
Zum Herstellen der pharmazeutischen Zusammensetzungen gemäß der vorliegenden Erfindung wird bevorzugt eine therapeutisch wirksame Menge des L-Ribavirins gemäß der vorliegenden Erfindung innig mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger gemäß den herkömmlichen pharmazeutischen Vermischungstechniken zum Herstellen einer Dosis vermischt. Ein Träger kann eine große Vielzahl von Formen, in Abhängigkeit von der für die Verabreichung gewünschten Herstellungsform, z. B. oral oder parenteral, annehmen. Bei der Herstellung pharmazeutischer Zusammensetzungen in oralen Dosierungsform kann jedes übliche pharmazeutische Medium verwendet werden. Für flüssige orale Präparationen, wie z. B. Suspensionen, Elixiere und Lösungen, können somit geeignete Träger und Zusatzstoffe, einschließlich Wasser, Glykole, Öle, Alkohole, Geschmacksstoffe, Konservierungsmittel, Farbstoffe und dergleichen verwendet werden. Für feste orale Präparationen, wie z. B. Puder, Tabletten, Kapseln und für feste Präparationen, wie z. B. Zäpfchen, können geeignete Träger und Zusatzstoffe, einschließlich Stärken, Zuckerträger, wie z. B. Dextrose, Mannitol, Lactose und verwandte Träger, Verdünnungsmittel, Granulierungsmittel, Schmierstoffe, Binder, Disintegrationsmittel und dergleichen verwendet werden. Falls gewünscht, können die Tabletten oder Kapseln mittels Standardverfahren magensaftresistent überzogen oder zur fortgesetzten Freisetzung sein.
Für parenterale Formulierungen wird der Träger gewöhnlich steriles Wasser oder eine wässrige Natriumchlorid-Lösung umfassen, obwohl andere Inhaltsstoffe, einschließlich jener, welche die Dispersion unterstützen, eingeschlossen sein können. Falls steriles Wasser verwendet wird und steril gehalten werden muss, müssen die Zusammensetzungen und Träger natürlich auch sterilisiert sein. Injizierbare Suspensionen können zudem präpariert werden, wobei geeignete flüssige Träger, Suspensionsmittel und dergleichen verwendet werden können.
Testergebnisse
In vitro und in vivo-Tests mit L-Ribavirin wurden durchgeführt und die Ergebnisse werden nachfolgend beschrieben.
In einer ersten Serie von Experimenten wurden periphere mononukleäre Blutzellen (PBMCs) aus dem Leukozytenfilm nach einer Ficoll-Hypaque-Dichtegradientenzentrifugation von 60 ml Blut gesunder Spender isoliert. Die T-Zellen wurden anschließend aus den PBMCs unter Verwendung des T-Zell-spezifischen Lymphokwik-Lymphozytenisolierungsreagenz (LK-25T, One Lambda, Canoga Park, CA) gereinigt. Eine durchschnittliche Ausbeute von 40–60 × 10⁶ T-Zellen wurde anschließend über Nacht bei 37°C in 20–30 ml RPMI-AP5 (RPMI-1640 Medium (ICN, Costa Mesa, CA), das 20 mM HEPES Puffer, pH 7.4, 5% autologes Plasma, 1% L-Glutamin, 1% Penicillin/Streptomycin und 0,05 2-Mercaptoethanol enthält) inkubiert, zum Entfernen jeglicher kontaminierender adhärenter Zellen. In allen Experimenten wurden die T-Zellen mit RPMI-AP5 gewaschen und anschließend in 96-Loch-Mikrotiterplatten in einer Zellkonzentration von 1 × 10⁶ Zellen/ml ausplattiert.
Die T-Zellen wurden durch Zugabe von 500 ng Ionomycin und 10 ng Phorbol-l2-myristat 13-acetat (PMA) (Calbiochem, La Jolla, CA) aktiviert und 48–72 Stunden bei 37°C inkubiert. Die PMA/Ionomycin-aktivierten T-Zellen wurden entweder mit 0,5– 50 μM Ribavirin (D-Ribavirin) oder L-Ribavirin oder mit 250– 10000 U/ml antiviralem Kontroll-Interferon-alpha (Accurate, Westbury, NY) unmittelbar nach der Aktivierung und 24 Stunden später erneut behandelt. Die T-Zellen von jeder Platte wurden für die Immunfluoreszenz-Analyse verwendet und die Überstände wurden für extrazelluläre Cytokin-Messungen verwendet. Nach der Aktivierung wurden 900 μl Zellüberstand von jeder Mikroplatte in eine andere Mikroplatte für die Analyse der zellvermittelten Cytokin-Produktion transferiert. Die Zellen werden anschließend in Immunfluoreszenz-Analysen hinsichtlich der intrazellulären Cytokinspiegel und der Cytokin-Rezeptorexpression verwendet.
Die Zell-vermittelten humanen Cytokin-Konzentrationen wurden in den Zellüberständen von jeder Mikroplatte bestimmt. Die Aktivierungs-induzierten Veränderungen der Interleukin-2 (IL-2) Spiegel wurden unter Verwendung eines kommerziell erhältlichen ELISA-Kits (R & D Systems Quantikine Kit, Minneapolis, MN) oder mittels eines Bioassays unter Verwendung der IL-2 abhängigen Zelllinie CTLL-2 (ATCC, Rockville, MD) bestimmt. Die Aktivierungs-induzierten Veränderungen der Interleukin-4 (IL-4), Tumornekrosefaktor (TNFα), Interleukin-8 (IL-8) (R & D Systems (Quantikine Kit, Minneapolis, MN) und Interferon-gamma (IFN-γ) (Endogen, Cambridge, MA) Spiegel wurden unter Verwendung von ELISA Kits bestimmt. Alle ELISA Ergebnisse wurden in pg/ml ausgedrückt und der CTLL-2 Bioassay in Counts pro Minute, was den IL-2 abhängigen zellulären Einbau von ³H-Thymidin (ICN, Costa Mesa, CA) durch CTLL-2 Zellen darstellt.
Der Vergleich der Wirkungen des D-Ribavirins und des L-Ribavirins (ausgedrückt als Prozent der aktivierten Kontrolle) auf die IL-2, TNFα, IFN-γ, IL-4 und IL-5 Spiegel ist in den 2 und 3 dargestellt.
In einer anderen Gruppe von Experimenten wurden die Wirkungen des L-Ribavirins auf die inflammatorische Antwort des Ohres auf Dinitrofluorobenzen bestimmt. Die Ergebnisse jener Experimente werden in 4 gezeigt.
Synthese
Das L-Ribavirin gemäß der vorliegenden Erfindung kann gemäß den synthetischen Verfahren hergestellt werden, welche im einzelnen dem Durchschnittsfachmann gut bekannt sind. Im allgemeinen wird L-Ribavirin gemäß der vorliegenden Erfindung durch Kondensieren einer geeigneten Nukleosid-Base mit dem notwendigen Zucker-Synthon synthetisiert, um das geschützte L-Nukleosid zu ergeben, welches nach weiterer Manipulation und Entschützen der Hydroxylschutzgruppen des Zuckers schließlich das Nukleosidanalogon mit der gewünschten Ribofuranosylgruppe in der L-Konfiguration ergibt.
Während der chemischen Synthese des L-Ribavirins gemäß der vorliegenden Erfindung ist der Durchschnittsfachmann in der Lage, die vorliegende Erfindung ohne ungebührendes Experimentieren zu praktizieren. Insbesondere erkennt der Durchschnittsfachmann die verschiedenen Schritte, welche ausgeführt werden sollten, um einen bestimmten Substituenten an der gewünschten Position der Base oder einen Substituenten an der gewünschten Position an der Zuckergruppe einzuführen. Zusätzlich werden chemische Schritte, welche unternommen werden, um die funktionellen Gruppen zu schützen, wie unter anderem z. B. die Hydroxyl- oder Amino-Gruppen, als auch zum Entschützen der gleichen funktionellen Gruppen, unter den Umständen der Synthese als geeignet erkannt werden.
Die Erfindung wird weiterhin durch die Bezugnahme auf die folgenden Beispiele definiert, welche zum Veranschaulichen und nicht als einschränkend gedacht sind. Es wird vom Durchschnittsfachmann verstanden werden, dass diese Beispiele in keiner Weise einschränkend sind, und dass Abweichungen im Detail möglich sind, ohne dass vom Geist und vom Umfang der vorliegenden Erfindung abgewichen wird.
Das L-Ribavirin der vorliegenden Erfindung kann in Übereinstimmung mit im Stand der Technik gut bekannten Verfahren hergestellt werden. Insbesondere ist das folgende Syntheseschema nützlich.
Schema 1: Synthese von L-Ribavirin-Vorläufern
Triazol-L-ribofuranosyl Nukleoside wurden durch das Säurekatalysierte Fusionsverfahren (Sato, T., et al., Nippon Kagaku Zasshi, 81, 1440, 1960) hergestellt. Demgemäss wurden die Triazole (1) mit 1,2,3,5-Tetra-O-acetyl-L-ribose (2) und eine katalytische Menge von Bis(p-Nitrophenyl)phosphate vermischt und bei 160–165°C für 30 min unter reduziertem Druck erhitzt, um die erforderlichen Nukleoside bereitzustellen, welche nach weiterem Entschützen den L-Ribavirin-Vorläufer (3) ergaben.
Schema 1
Die erforderliche 1,2,3,5-Tetra-O-acetyl-L-ribose wurde hergestellt, wie in Beispiel 2 gezeigt. Die heteromonozyklischen Basen sind kommerziell von Aldrich, Fluka, ICN, Acros, Alfa, Lancaster und TCI America erhältlich oder wurden durch das Nacharbeiten der publizierten Verfahren hergestellt, welche über Literaturveröffentlichungen verfügbar sind (Robins, R. K., et al., Nucleosides & Nucleotides, 13, 17–76, 1994).
Weiterhin sind substituierte Zucker, wie z. B. 1-Bromo-2-deoxy-2-fluoro-3,6-O-benzoyl-L-arabinofuranose (Ma, T., et al., J. Med. Chem., 39, 2835–2843, 1996) und andere modifizierte Zucker in der L-Konfiguration aus U.S. Pat. Nr. 5,473,063; WO 96/13512; wo 96/13498; wo 96/22778; wo 95/20595; U.S. 5,473,063; U.S. 5,567,688; Walczak, K., et al., Monatsh. für Chemie, 123, 349–354, 1992; Wengel, J., et al., J. Org. Chem., 56, 3591–3594, 1991; Genu-Dellac, C., et al., Tetrahedron Letts., 32, 79–82, 1991 und Czernecki, S., et al., Synthesis, 783, 1991 bekannt. Zusätzlich wird die Herstellung modifizierter Zucker und von Nukleosiden in der D-Konfiguration in U.S. Pat. Nr. 5,192,749; WO 94/22890, Uteza, V., et al., Tetrahedron, 49, 8579–8588, 1993; Thrane, H., et al., Tetrahedron, 51, 10389–10903, 1995; Yoshimura, Y., et al., Nucleosides & Nucleotides, 14, 427–429, 1993; Lawrence, A. J., et al., J. Org. Chem., 61, 9213–9222, 1996; Ichikawa, S., et al., J. Org. Chem., 62, 1368–1375, 1997; EP 0 457 326 A1 ; U.S. Pat. Nr. 3,910,885; WO 96/13498 und Karpeisky, M. Y., et al., Nucleic Acids Res. Symposium Series, 9, 157, 1981 beschrieben. Durch die Anwendung der synthetischen Verfahren (Schemata), die in diesen Artikeln für die Herstellung von D-Nukleosiden beschrieben wurden, könnten zudem die entsprechenden modifizierten L-Nukleoside erhalten werden.
Das L-Ribavirin der Erfindung kann unter Verwendung der Lehren der hier bereitgestellten Schemata, wie auch der spezifischen Beispiele und weiterer nachstehend dargelegter Schemata synthetisiert werden. Zusätzlich zu den hier bereitgestellten Lehren wird der Fachmann ohne weiteres verstehen, wie das L-Ribavirin der vorliegenden Erfindung hergestellt werden kann unter Anwendung gut bekannter Techniken, wie z. B. jener, die in Nucleic Acid Chemistry, Improved and New Synthetic Procedures, Methods and Techniques, herausgegeben von Leroy B. Townsend und R. Stuart Tipson, John Wiley & Sons, New York (1978–1991); Chemistry of Nucleosides and Nucleotides, herausgegeben von Leroy B. Townsend, New York, Plenum Press (1988–1994) und Nucleosides and Nucleotides as Antitumor and Antiviral Agents, herausgegeben von Chung K. Chu und David C. Baker, New York, Plenum Press (1993) beschrieben sind. Geeignete Verfahren zur Erzeugung von Substitutionen innerhalb der Zuckergruppe des vorliegend beanspruchten L-Ribavirins sind dem Fachmann bekannt und werden in verschiedenen Veröffentlichungen beschrieben, einschließlich den U.S. Pat. Nr. 5,559,101; U.S. Pat. Nr. 5,192,749; U.S. Pat. Nr. 5,192,749; U.S. Pat. Nr. 5,473,063; U.S. Pat. Nr. 5,565,438. Geeignete Verfahren zur Erzeugung verschiedener heterozyklischer Verbindungen und der Substitution an diesen werden in Chemistry of Nucleosides and Nucleotides, herausgegeben von Leroy B. Townsend, New York, Plenum Press, 2, 161–398 (1991) und Chemistry of Nucleosides and in Nucleotides, herausgegeben von Leroy B. Townsend, New York, Plenum Press, 3, 1–535 (1994) bereitgestellt.
Beispiele
Die Erfindung kann weiter durch die Bezugnahme auf die folgenden, nachstehenden Beispiele verstanden werden, wobei die Bezugszeichen der Verbindungen in Fettschrift den gleichen durchnummerierten Bezugszeichen in 1 entsprechen.
Beispiel 1
1-O-Methyl-2,3,5-tri-O-acetyl-β-L-ribofuranose (4)
L-Ribose (15,0 g, 100 mmol) wurde in trockenem Methanol (200 ml) aufgelöst und auf 0°C abgekühlt. Zu dieser kalten, gerührten Lösung wurde H₂SO₄ (2 ml) langsam hinzugefügt und das Reaktionsgemisch unterhalb von 20°C für 12 Stunden unter Argon-Atmosphäre gerührt. Trockenes Pyridin (75 ml) wurde hinzugefügt und zur Trockene eingedampft. Trockenes Pyridin (100 ml) wurde hinzugefügt und unter reduziertem Druck zu einem öligen Rückstand eingedampft. Dieser Rest wurde in trockenem Pyridin (150 ml) aufgelöst und mit Essigsäureanhydrid (50 ml) bei 0°C unter Argon-Atmosphäre behandelt, TEA (41 ml) wurde hinzugefügt, die Reaktion wurde bei 0°C für eine Stunde und bei Raumtemperatur für 36 Stunden gerührt, zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde in Wasser (200 ml) aufgelöst, festes NaHCO₃ wurde langsam hinzugefügt, um den pH der Lösung auf 7 einzustellen. Das wässrige Gemisch wurde mit CH₂Cl₂ (250 ml) extrahiert, mit Wasser (150 ml) und Kochsalzlösung (100 ml) gewaschen, getrocknet und auf konzentriert. Der ölige Rückstand wurde durch ein Bett aus Silikagel (200 g) filtriert, mit CH₂Cl₂: EtOAc (8 : 2, 1000 ml) gewaschen. Das Filtrat wurde eindampft und das Öl wurde als solches für die nächste Reaktion verwendet.
Beispiel 2
1,2,3,5-Tetra-O-acetyl-β-L-ribofuranose (2)
Der Sirup (4) (29,0 g, 100 mmol) aus der obigen Reaktion wurde zusammen mit trockenem Toluen (2 × 100 ml) eindampft und über Nacht unter festem NaOH bei Raumtemperatur in vacuo getrocknet. Der getrocknete Sirup wurde in Eisessig (150 ml) aufgelöst und auf 0°C unter Argon-Atmosphäre abgekühlt. Zu dieser kalten Lösung wurde Essigsäureanhydrid (35 ml), gefolgt von H₂SO₄ (10 ml), sehr langsam über einen Zeitraum von 15 Minuten hinzugefügt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt und unter Rühren in Eis (200 g) gegossen. Das Gemisch wurde mit CHCl₃ (2 × 200 ml) extrahiert und der organische Extrakt wurde mit Wasser (200 ml), sat. NaHCO₃ (200 ml) und Kochsalzlösung (150 ml) gewaschen, über wasserfreiem Na₂SO₄ getrocknet und zur Trockene eingedampft. Die 30 g Sirup (94%), welche erhalten wurden, wurden als hinreichend rein für die Glykosylierungsreaktionen befunden.
Beispiel 3
Methyl-1-(2,3,5-tri-O-acetyl-β-L-ribofuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxylat (5)
Ein Gemisch aus Methyl-1,2,4-triazol-3-carboxylat (0,64 g, 5 mmol), 1,2,3,5-Tetra-O-acetyl- -L-ribofuranose (2) (1,5 g, 4,72 mmol) und Bis(p-nitrophenyl)phosphat (20 mg) wurde in einem birnenförmigen Kolben gegeben und in ein vorgeheiztes Ölbad bei (160–165°C) gegeben. Der Kolben wurde mit einer Wasserabsaugvorrichtung verbunden und unter Rühren bei 160- 165°C (Ölbad-Temperatur) unter reduziertem Druck für 25 min gehalten. Das Reaktionsgemisch wurde entfernt, abgekühlt und mit EtOAc (150 ml) und sat. NaHCO₃ (100 ml) verdünnt. Das Produkt wurde mit EtOAc extrahiert. Der organische Extrakt wurde mit Wasser (100 ml) und Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen, getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der erhaltene Rückstand wurde mittels einer Flash-Silikagelsäule unter Verwendung von CHCl₃ ? EtOAc als Elutionsmittel gereinigt. Die reinen Fraktionen wurden gesammelt und zur Trockene eingedampft, um 1,2 g (66%) an reinem Produkt zu ergeben: 'H NMR (CDCl₃) δ 2. 10 (3s, 9H, 3 COCH₃), 3.98 (s, 3H, OCH₃), 4.22 (m, 1H), 4.46 (m, 2H), 5.54 (t, 1H), 5.76(m, 1H), 6.04 (d, 1H, C₁ H), und 8.38 (s, 1H, C₃H). Anal. berechnet für C₁₅H₁₉N₃O₉ (385.22) : C, 46.75; H, 4.97; N, 10.91. Gefunden: C, 46.82; H, 4.57; N = 10.71.
Beispiel 4
1-β-L-Ribofuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxamid (6)
Das Substrat (5) (1,1 g) wurde in CH₃OH/NH₃ bei 0°C aufgelöst und in eine Stahlbombe gegeben. Die Bombe wurde verschlossen und bei Raumtemperatur für 18 Stunden gerührt. Die Stahlbombe wurde abgekühlt, geöffnet und zur Trockene eingedampft. Es wurde versucht, den Rückstand mit wenig Ethanol zu kristallisieren. Das Produkt kristallisierte, jedoch absorbierten die Kristalle bei der Filtration erneut Wasser und wurden zu einer Paste. Die Kristallisation wurde mehrmals wiederholt. Schließlich kristallisierte es aus einem Methanol/Ethanol-Gemisch. Die farblosen Kristalle wurden abfiltriert, mit Methanol gewaschen und in vacuo getrocknet. Das Filtrat wurde erneut eingedampft, welches beim Stehenlassen weitere Kristalle ergab. Gesamtausbeute 0,5 g (72%); mp: 177–179°C; [a]_D = +38.33 (c 3 mg/ml H₂O); D-Form von Ribavirin [a]_D = –36.0 (c 3. 0 mg/ml H₂O); ^'H NMR (Me₂SO-d₆) δ 3.46 (m, 1H, C₅ H), 3.60 (m, 1H, C₅ H), 3.92 (g, 1H, C₄ H), 4.12 (q, 1H), 4.34 (g, 1H), 4.88 (t, 1H, C₅ OH), 5.20 (d, 1H), 5.58 (d, 1H), 5.80 (d, 1H, C₁ H), 7.60 (bs, 1H, NH) und 8.82 (s, 1H, C₃ H). Anal. berechnet für C₈H₁₂N₄O₅ (244.20) : C, 39.34; H, 4.95; N, 22.94. Gefunden: C, 39.23; H, 4.97; N, 22.91.

Claims

Die Verbindung L-Ribavirin (1-β-L-Ribofuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxamid), welche die Strukturformel aufweist:
Die Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei die Verbindung ein α-Nukleosid und β-Nukleosid umfasst.
Pharmazeutische Zusammensetzung, welche die Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 2 umfasst oder einen pharmazeutisch annehmbaren Ester oder ein Salz davon, gemischt mit zumindest einem pharmazeutisch annehmbaren Trägerstoff.
Verwendung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 2 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung eines inflammatorischen medizinischen Zustands, der positiv auf die Verabreichung der Zusammensetzung anspricht.
Verwendung gemäß Anspruch 4, wobei der medizinische Zustand aus der Gruppe bestehend aus Infektion, Infestation, Neoplasma und Autoimmunerkrankung ausgewählt wird.
Verwendung der Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 2 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Modulation der Th1- und Th2-Aktivitäten in einem Patienten.