WO1993000940A1 - Appareil pour faire penetrer des medicaments dans des globules rouges - Google Patents

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WO1993000940A1
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lysis
resealing
suspension
module
washing
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PCT/FR1992/000623
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Etienne Pages
Claude Ropars
Christophe Bailleul
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Novacell
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Definitions

  • the present invention relates to a device allowing the implementation of the so-called “lysis-resealing” technique which makes it possible to incorporate active principles into red blood cells.
  • the primary compartment of a first dialysis element is continuously fed with an aqueous suspension of erythrocytes, the secondary compartment containing an aqueous solution hypotonic with respect to the suspension of erythrocytes in order to lyse erythrocytes.
  • the erythrocyte lysate is then in contact with the substance having a biological activity and in order to reseal the membrane of the erythrocytes, the osmotic and / or oncotic pressure of the erythrocyte lysate is increased after it is brought into contact with the substance having biological activity.
  • resealing is carried out in a separate container although it is possible, as described in the patent, to practice resealing using successively two dialysis coils. More precisely in this type of process, the globular pellet is obtained by centrifugation and decantation of the plasma, which is stored at 4 ° C. for treatment. The red blood cells undergo a first series of washes. The first wash in physiological serum makes it possible to obtain a globular concentrate from which the "buffy coat" (white blood cells, platelets) is eliminated. The concentrate of red blood cells is then brought into contact with IHP (inositol hexaphosphate) for example during the following two washes.
  • IHP inositol hexaphosphate
  • the red blood cell In a hypotonic environment, the red blood cell swells to a volume which can be equal to 175% of its initial value (ROPARS et Coll., 1986). It is at this stage that pores of a few hundred angstroms appear. There is then an exchange between the extra-cellular and intra-cellular media, in particular for the substance to be internalized. After addition of a hypertonic solution in the hemolysate, the isotonicity is restored, the pores close and trap the IHP for example in the red blood cell. This is followed by an incubation phase in a regenerative solution, necessary for charged red blood cells to find the same permeability characteristics as those of initial red blood cells. After resealing, the red blood cells undergo a second series of washes. The first two washes use a physiological saline solution: they make it possible to eliminate unresealed red blood cells.
  • the red blood cells are then returned to autologous plasma at a physiological hematoc ⁇ te allowing the transfusion.
  • the transformed blood unit is made up of red blood cells with improved oxyphonic properties, the morphological and physiological characteristics of which are close to unprocessed red blood cells.
  • the implementation of the lysis-resealing process allows the incorporation of a large number of active principles into red blood cells, which can be reinjected into the same patient or into different patients.
  • the incorporation of IHP into erythrocytes makes it possible to modify the affinity constant of hemoglobin for oxygen.
  • the present invention relates to a device intended to allow the incorporation of one or more substances with biological activity in red blood cells by the lysis-resealing technique, characterized in that it comprises
  • a lysis and resealing unit consisting of a lysis module at a temperature below 10 ° C and a resealing module at a temperature above 20 ° C, all of the elements of the lysis unit and resealing coming into contact with the erythrocyte suspension being designed for single use. It should be understood that "designed for single use”, even if the elements are intended to be reused, they will only be after sterilization and / or viral inactivation but will be designed as single-use elements, that is to say that can easily be set up and dismantled and of low cost.
  • the lysis module A is constituted
  • a removable assembly preferably for single use, comprising a dialysis cartridge (9) capable of being fixed on the inlet of the lysis buffer to supply one of the compartments, the other compartment of the cartridge being connected at the venous end to a container (6) intended for warming up the suspension of erythro ⁇ cytes, and at the arterial end to a storage container (11).
  • the resealing module consists of a set of elements enabling the module to be maintained at a determined temperature 0, preferably 37 ° C., and a removable assembly, preferably for single use and comprising upstream towards the 'downstream, a container (22) intended to ensure the temperature rise of the suspension connected to a container (26) comprising a supply of resealing solution (28).
  • All of these modules include a pump allowing the entry of the erythrocyte suspension into the lysis module, a pump allowing the exit of the erythrocyte suspension from the resealing module, and an intermediate pump ensuring circulation between the lysis module and the resealing module.
  • These pumps are preferably peristaltic pumps, which avoid contact with the suspension.
  • the device also preferably comprises, in front of the resealing unit, a tube for supplying a solution of an active principle to be internalized, for example ATP (adenosine triphosphate).
  • an active principle to be internalized for example ATP (adenosine triphosphate).
  • ATP adenosine triphosphate
  • the containers intended to ensure the temperature of the suspensions are preferably plastic bags having baffles inside. These pockets, preferably elongated, are placed vertically and fed from the top and taken from the bottom.
  • the heating and cooling of the modules can be provided by a support plate, which on one side will receive the disposable elements and the other side will be in contact with a refrigeration or heating element.
  • the lysis buffer will be cooled by passage through an appropriate cooling system.
  • the dialyzer itself can be used as a heat exchanger between the blood and the lysis buffer passing through it, without the need for other devices. These heat exchanges allow a special treatment of red blood cells.
  • the various modules placed on these plates may receive a cover and a coating which will maintain temperatures preferably at 4 ° C and 37 ° C.
  • the washing element can take different forms; it will preferably be of the separator bowl type, it can also be reused to perform a washing after treatment of the suspension.
  • the washing element is, in principle, a tank having a symmetry of revolution and consisting of two envelopes in trunk of concentric cones, the separation chamber proper being the space between the two conical surfaces.
  • One of the peculiarities of the separating bowl is that it is filled at its base and at its periphery; any product introduced, if it is less dense than those already in the separation chamber, must therefore circulate against the direction of sedimentation.
  • the separate components of the introduced product are organized in concentric rings which are concentrated by the gradual decrease in their diameter, and decrease in their height by the taper of the separation chamber.
  • the different fluids circulate and go to this bowl thanks to a peristallic pump and eight pneumatic clamps.
  • An air detector, two optical sensors and two coding wheels placed, one on the axis of the pump, and the other on the axis of the centrifuge, allow the taking of information necessary for the management of the '' all the peripherals that are the pump, the centrifuge and the clamps.
  • Figure 1 is a general diagram of the disposable device;
  • Figure 2 is a diagram of the separator bowl.
  • the lysis-resealing device shown in FIG. 1 comprises a lysis unit A and a resealing unit B.
  • the lysis unit A consists of an evaporator which is in contact with a metal plate (1) made of stainless steel having the shape of the elements of the disposable kit.
  • a second refrigerated metal plate or simply an insulating material articulated on the first encloses the disposable kit in a minimum refrigerated volume. This casing thus constituted, moreover imposes on the various pockets and tubes, their maximum volume.
  • This metal plate (1) comprises two elements allowing the arrival (2) and the departure (3) of the lysis buffer, the supply system of which is not shown, but consists essentially of a pump, a circuit for refrigeration and a feed tank.
  • the part called kit to single use, of this lysis module On the plate (1) is removably attached, the part called kit to single use, of this lysis module.
  • This part is composed by moving from the blood inlet to the outlet of the treated blood: a perforator (4) followed by a PVC tubing (5) which opens into a special pocket welded in the form of a serpentine (6 ), and playing the role of heat exchanger; a coil made of a 1/8 OD INOX tube of 1 to 1.5 m could be used instead of the PVC bag in the form of a coil, for heat exchanges with the blood.
  • this exchanger is itself connected to a tube (7) which is connected by a special male luer to the arterial inlet (8) of the dialysis cartridge (9).
  • a tube (12) leads to the top of a 600 ml PVC bag (11) which serves as a buffer volume, this tube is joined by another at a "Y "(13), between the outlet of the dialyzer (10) and the" delay "pocket (11).
  • a last tube (14) leads from the bottom of this pocket to the outlet of the module.
  • the lysis buffer input of the dialyzer consists of a tube passing through a peristaltic pump and leading to an exchanger produced by a non-disposable metal coil attached to the evaporator.
  • the outlet of the dialyzer is a simple tube leading to a reservoir.
  • the elements to be cooled are therefore generally of two types, on the one hand the disposable plastic kit (PVC, polycarbonate) and the metallic reusable kit both in close contact with the temperature-regulated metal plate, and d on the other hand the fluids (blood, lysis buffer, solution of active principle) which circulate and remain in the kit in contact with which they acquire the desired temperature.
  • the lysis module also includes a pump tubing
  • this tubing is connected to the tubing (7). Two levels are therefore possible for bringing the active substance and the red blood cells into contact, before and immediately after lysis.
  • a peristaltic pump (16) which is managed by a set of controls like the other peristaltic pumps of the device, the pump (17) placed on the tubing (18) which connects to the "Y" (13) is essentially intended to purge the dialysis coil (9), this pump is like the previous one, managed by the central control unit.
  • the supply of active principle by the tubing (15) can be carried out either by hand, or by means of a pump which is not shown.
  • Resealing module B is also made up of a metal box (20), fitted with a door (not shown) which closes on a disposable kit, this metal box which, in contact with a heat source, will maintain 37 ° of the module in question.
  • the disposable kit is composed by moving from the blood inlet at 4 degrees to the outlet for the warmed blood, a tube (14) coming directly from the "4 degrees" module, and which allows the preheating of the blood. This tubing temporarily leaves the module to pass into the body of a blood pump (21), before being connected to an identical heat exchanger (22) to that used in the 4-degree module.
  • This pocket has two opposite access tubes (27 and 28), this allowing the first blood to enter, to also be the first out, it is identical to the "delay" pocket of the "4 degrees” module.
  • the supply of the resealing solution carried out via the tubing (25) and the pump (30) is also controlled like the previous peristaltic pumps to the central control unit.
  • the set of tubes of the four pockets (6) (11) (22) and (26) and the dialysis coil (9) which are the elements in contact with the suspension of red blood cells, are removably placed in the two resealing units, and can therefore be either re-sterilized, or discarded after use.
  • the temperature pockets are made of PVC, and consist of two almost rectangular and identical PVC sheets welded together in the form of a coil. This coil leads from a PVC tube (5) located on the top of the pocket, to a second (7), which is welded to the bottom of the pocket.
  • a PVC tube (5) located on the top of the pocket
  • a second (7) which is welded to the bottom of the pocket.
  • the maximum distance between the internal faces of the pocket will be imposed and of the order of a few tenths of mm. In this way, the volume of the exchanger will be small (from 10 to 20 ml) and the surface in contact with the plate (1) at 4 degrees will be maximum.
  • the dialysis cartridge (9) has a parallelepipedal housing made of rigid plastic. This box is separated into two compartments by semi-permeable membranes, each of these compartments has two inlet-outlet tubes. One of the compartments is crossed by blood, the other by the lysis buffer. The assembly of this element in the module is done in such a way that the blood circulates from the bottom upwards in order to ensure a natural purge of the blood compartment.
  • the dialysis cartridge can also be of the "hollow fiber” type, where the two compartments are formed for the blood compartment, from the interior of hollow fibers (made of semi-permeable materials) and for the lysis buffer compartment, volume outside the fibers and inside the rigid case containing these fibers.
  • the dialysis outlet buffer pocket (11) is a transfer pocket of 600 ml of maximum volume, enclosed in a volume of approximately 500 ml in which it increases in volume during its filling. It is special in that the supply and drain turbulides are both mounted on a small side of the pocket, but in opposite directions. For a vertical position of the pocket, the first blood entered (from the top) will also be the first out (from the bottom).
  • Figure 2 shows the section of the washing unit, the description of this repair bowl will not be given in detail since it is a product which may be commercially available, and which has been adapted for the present use.
  • the separator bowl (41) in principle consists of two rigid envelopes in concentric truncated cones (42) and (43).
  • the first is external (42), the second (43) placed on the same axis is included in the previous one.
  • the separation chamber (44) is the space between the two conical surfaces.
  • This bowl is provided with an injector system (45) and a collecting system (46), separated from the separation chamber by a rotating joint (47) at the top of the two truncated cones.
  • the reservoir during the separation of the cells from the introduced suspension is rotated by a centrifuge, the injector and collector system is itself held by two articulated arms in the closed position.
  • the injector (45) by its connection to a network of tubes, allows the introduction into the separator (44) of the suspension of cells to be separated, or when the bowl stops emptying the latter.
  • the collector is also connected to a network, which is reduced to a tube which joins a waste bag.
  • the solid elements of the suspension are gradually concentrated by centrifugation towards the outside of the chamber (44).
  • a detection system previously calibrated before centrifugation allows when the concentration of red blood cells has reached a determined volume, and / or when the red blood cells have been washed properly, to obtain a suspension of red blood cells having the desired characteristics.
  • the separation of the red cells is carried out during the first washing, called washing I, and allows the treatment of the blood, before the step of the reversible lysis of the red cells and their resealing.
  • Washing I carried out on a whole blood unit comprises the following stages: - deplasmatization
  • a cell suspension of approximately 40% hematocrit is prepared by adding physiological saline from an erythrocyte concentrate, this automatically and simultaneously with the introduction of the erythrocyte concentrate into the bowl, by alternating a quantity of water and blood in a proportion calculated by the machine so as to obtain 40% hematocrit.
  • the diluted pellet is introduced into the bowl described in Figure 2 until optical detection or emptiness of the pocket, a volume of about 480 cc, this at a blood pump flow of 100 cc / min (adjustable from 0 to 250 ml / min) and a speed of rotation of the centrifuge of 6000 rpm.
  • the supernatant solution is collected in a 5 liter waste bag. It is during this step that the hematocrit is empirically determined by stopping the filling of the separator at a determined level of the supernatant / cell interface (42 ml), this under precise flow and centrifugation conditions.
  • the red cells are washed by introducing a programmed volume of 9% NaCl solution into the bowl, at a variable rate, under the control of the optics of the tubing.
  • the flow rate of the pump is controlled in such a way that the liquid leaving the bowl is at a hematocrit of the order of 1%, allowing the elimination of the "buffy coat” while minimizing the loss of red blood cells.
  • This step involves the completion of deplasmatization, as well as the elimination of platelets and white blood cells.
  • the blood is now in the form of a suspension of "pure" red blood cells in the washing solution, the suspension in IHP solution is carried out, this by repeating (four times) the following manipulation: - a small volume of IHP is introduced into the bowl (of the order of
  • the bowl can be emptied into a transfer bag (150 ml / min).
  • the volume of blood to be treated is not sufficient to obtain a 72% hematocrit before leukoreduction in the separator (265 cc bowl), that is to say if the volume of red blood cells is less than 191 ml, the machine will go into alarm (air detection). The user will have in this situation the choice between three alternatives:
  • Washing I is then finished and the dialysis phase can begin.
  • Example II Lysis and resealing step
  • This lysis and resealing phase takes place after washing I and is therefore intended for a suspension of red blood cells (70%) in an IHP solution of variable volume, from this minimum 265 to approximately 1.3 liters.
  • This suspension will undergo the following operations: - lowering the temperature to 4 ° C
  • the suspension of red cells from washing I is driven by a peristaltic pump (16) through a heat exchanger (6) where its temperature drops to 4 ° C.
  • This flow rate is adjustable from 0 to 32 cc / min in steps of 1 ml / min, and determines the transit time of the blood in the dialyzer (9) for a given dead volume of the blood compartment).
  • the temperature is adjustable from 1 ° C to room temperature.
  • This pumping operation is carried out continuously until the pump inlet air detector is activated, indicating the emptiness of the blood bag to be treated. At this time, and in order to allow the emptying, even partial, of the heat exchanger, then of the dialysis cartridge, sterile air will be pumped for a fixed volume.
  • the red blood cells once cooled in the heat exchanger (suspended in the IHP solution) pass through the blood compartment of a dialyzer at the rate imposed by the programming of the user.
  • the temperature of the dialyzer is controlled (4 ° C).
  • Trans-membrane pressure is measured.
  • the flow rate of the lysis buffer pump (not shown) is regulated so as to maintain the trans-membrane pressure constant and at the desired level, from 0 to 300 mmHg.
  • the lysis buffer is itself maintained at 4 ° C by passage through a non-disposable heat exchanger.
  • the cell suspension obtained is mixed by means of the tubing (17) with a solution of ATP in a proportional manner adjustable from 1/20 th to 1/5 th (preset ratio 1/10), then left waiting for 15 minutes maximum (delay adjustable from 0 to 20 min) in the pocket (11).
  • the pump (17) is responsible for conveying the ATP solution, its flow range extends from 0 to 16 ml / min. After that, the suspension is pumped at a flow rate adjustable from 0 to 32 ml / min in steps of 1 ml / min, and brought to 37 ° C by passage through a heat exchanger.
  • the pump (21) located after the exchanger, so as to work on a portion of tubing which is not stiffened by too low a temperature. Then in proportion to the blood flow and in a ratio of 1/5 th to 1/20 th, the resealing product is mixed in the bag (26) with the blood reheated to 37 degrees after passage through the reheating bag (22).
  • a peristaltic pump is used for this purpose, (21), its flow range extends from 0 to 16 ml / min.
  • the final stage is a waiting phase for the product obtained, in order to obtain complete resealing of the red cells.
  • the red cell suspension is kept for 15 to 30 min at a temperature of 37 ° C. in the 600 ml bag (26) approximately. After that washing II can then be carried out.
  • Example III Washing of the red cells after resealing
  • the object of the second washing is to wash and resuspend in plasma the cell suspension obtained after the lysis and resealing phase.
  • the following stages compose it:
  • the suspension of cells treated by dialysis is introduced into the bowl already used for washing I at a flow rate of 100 cc / min, diluted with physiological water in a ratio of 1: 2 and a speed of rotation of the centrifuge of 5000 rpm.
  • This phase is stopped after a volume of approximately 1 1 has been introduced, or after detection of air in the supply tube of the bowl has occurred, a sign of the emptiness of the bag.
  • air detection the question is asked, either to start washing, or to wait for the availability of other blood to be washed.
  • Washing can then begin by introducing into the bowl a programmed volume of 9% NaCl solution, at a variable rate and for a centrifugation speed of 6000 rpm, under the control of the optics. the tubing.
  • the pump flow is controlled in such a way that the liquid leaving the bowl is at a maximum hematocrit of the order of
  • the centrifuge is then stopped, then restarted immediately, so as to homogenize the suspension solution of the red blood cells, before recommencing for a determined volume the introduction of physiological saline. Three washing steps with 500 ml of physiological water are thus carried out.
  • This stop and restart phase of the centrifuge is repeated a second time, but only for two stages of approximately 100 ml, the physiological saline being replaced by plasma.
  • Washes I and II can correspond to a series of cycles (one or more), a cycle corresponding to a set of phases and stages.

Abstract

La présente invention concerne un dispositif destiné à permettre l'incorporation d'une ou de plusieurs substances à activité biologique dans les globules rouges par la technique de lyse-rescellement, caractérisé en ce qu'il comporte: une unité de lavage permettant, à partir d'un sang complet ou non, l'obtention d'une suspension d'hématies; une unité de lyse et rescellement constituée d'un module de lyse (A) à une température inférieure à 10 °C et d'un module de rescellement (B) a une température supérieure à 20 °C, l'ensemble des éléments de l'unité de lyse et rescellement entrant en contact avec la suspension d'érythrocytes étant conçu pour un usage unique.

Description

APPAREIL POUR FAIRE PENETRER DES MEDICAMENTS DANS DES GLOBULES ROUGES
La présente invention concerne un dispositif permettant la mise en oeuvre de la technique dite de "lyse-rescellement" qui permet d'incorporer des principes actifs dans les globules rouges.
La technique de lyse-rescellement est décrite dans les brevets EP 1013 1 US 4752586 et US 4652449, et son principe ne sera pas redécrit en détail.
Dans la technique dite de "lyse-rescellement" on alimente en continu le compartiment primaire d'un premier élément de dialyse avec une suspension aqueuse d'érythrocytes, le compartiment secondaire contenant une solution aqueuse hypotonique par rapport à la suspension d'érythrocytes afin de lyser les érythrocytes. Le lysat d'éythrocytes est alors en contact avec la substance présentant une activité biologique et afin de resceller la membrane des érythrocytes, on augmente la pression osmotique et/ou oncotique du lysat érythrocytaire après sa mise en contact avec la substance à activité biologique.
Dans ce mode de mise en oeuvre préféré de ce procédé, le rescellement est effectué dans un récipient séparé bien qu'il soit possible, comme cela est décrit dans le brevet, de pratiquer le rescellement en utilisant successivement deux bobines de dialyse. De façon plus précise dans ce type de procédé, le culot globulaire est obtenu par centrifugation et décantation du plasma, qui est conservé à 4°C en vue du traitement. Les globules rouges subissent une première série de lavages. Le premier lavage en sérum physiologique permet d'obtenir un concentré globulaire dont le "buffy-coat" (globules blancs, plaquettes) est éliminé. Le concentré de globules rouges est alors mis en contact avec l'IHP (inositol hexaphosphate) par exemple au cours des deux lavages suivants.
En milieu hypotonique, le globule rouge gonfle jusqu'à un volume qui peut être égal à 175 % de sa valeur initiale (ROPARS et Coll., 1986). C'est à ce stade qu'apparaissent des pores de quelques centaines d'angstrôms. Il y a alors échange entre les milieux extra-cellulaire et intra-cellulaire notamment pour la substance à internaliser. Après addition d'une solution hypertonique dans l'hémolysat, l'isotonicité est restaurée, les pores se referment et emprisonnent l'IHP par exemple dans le globule rouge. Suit une phase d'incubation en solution régénératrice, nécessaire aux globules rouges chargés pour retrouver des caractéristiques de perméabilité identiques à celles de globules rouges initiaux. Après le rescellement, les globules rouges subissent une deuxième série de lavages. Les deux premiers lavages utilisent une solution de sérum physiologique : ils permettent d'éliminer les globules rouges non rescellés.
Les globules rouges sont ensuite remis en plasma autologue à un hématocπte physiologique permettant la transfusion. L'unité de sang transformée est constituée de globules rouges à propriétés oxyphoπques améliorées dont les caractéristiques morphologiques et physiologiques sont proches de globules rouges non transformés.
La mise en oeuvre du procédé de lyse-rescellement permet l'incorporation d'un grand nombre de principes actifs dans des globules rouges, lesquels peuvent être réinjectés au même patient ou à des patients différents. Par exemple l'incorporation d'IHP dans les érythrocytes, permet de modifier la constante d'affinité de l'hémoglobine pour l'oxygène. D'autres applications de ce procédé sont décrites dans les brevets cités précédemment. plus particulièrement, la présente invention concerne un dispositif destiné à permettre l'incorporation d'une ou plusieurs substances à activité biologique dans les globules rouges par la technique de lyse-rescellement, caractérisé en ce qu'il comporte
- une unité de lavage permettant, à partir d'un sang complet on non, l'obtention d'une suspension d'hématies
- une unité de lyse et rescellement constituée d'un module de lyse à une température inférieure à 10°C et d'un module de rescellement à une température supérieure à 20°C, l'ensemble des éléments de l'unité de lyse et rescellement entrant en contact avec la suspension d'érythrocytes étant conçu pour un usage unique. Il faut entendre par "conçu pour un usage unique", que même si les éléments sont destinés à être réutilisés, ils ne le seront qu'après stérilisation et/ou inactivation virale mais seront conçus comme des éléments à usage unique, c'est-à-dire pouvant aisément être mis en place et démonté et de faible coût.
Dans le dispositif de la présente invention, le module de lyse A est constitué
- d'un ensemble assurant l'acheminement d'un tampon de lyse (2) jusqu'à l'entrée de la cartouche de dialyse et l'éventuelle évacuation (3) 0 dudit tampon de lyse, ainsi que des éléments permettant le maintien du module à une température déterminée, notamment 4°C,
- d'un ensemble amovible de préférence à usage unique, comportant une cartouche de dialyse (9) susceptible d'être fixée sur l'arrivée du tampon de lyse pour alimenter l'un des compartiments, l'autre ^ compartiment de la cartouche étant relié à l'extrémité veineuse à un récipient (6) destiné à la mise en température de la suspension d'érythro¬ cytes, et à l'extrémité artérielle à un récipient de stockage (11).
Le module de rescellement est constitué d'un ensemble d'éléments permettant le maintien du module à une température 0 déterminée, de préférence 37°C, et d'un ensemble amovible, de préférence à usage unique et comportant de l'amont vers l'aval, un récipient (22) destiné à assurer la mise en température de la suspension relié à un récipient (26) comportant une amenée de solution de rescellement (28).
L'ensemble de ces modules comporte une pompe permettant ^ l'entrée de la suspension d'érythrocytes dans le module de lyse, une pompe permettant la sortie de la suspension d'érythrocytes du module de rescellement, et une pompe intermédiaire assurant la circulation entre le module de lyse et le module de rescellement. Ces pompes sont de préférence des pompes péristaltiques, qui évitent tout contact avec la 0 suspension.
5 Le dispositif comporte en outre de préférence en avant de l'unité de rescellement, une tubulure d'amenée d'une solution d'un principe actif à internaliser par exemple de l'ATP (adénosine triphosphate). Pour l'internalisation, suivant la substance à internaliser, celle-ci peut être introduite avec la suspension d'érythrocytes avant la lyse (cas de l'IHP), ou bien ajoutée après la lyse à 4°C (cas de l'ATP) . Les récipients destinés à assurer la mise en température des suspensions, sont de préférence des poches plastiques comportant des chicanes à l'intérieur. Ces poches, de préférence allongées, sont placées verticalement et alimentées par le haut et prélevées par le bas.
Le chauffage et la réfrigération des modules peuvent être assurés par une plaque support, qui sur une face recevra les éléments à usage unique et l'autre face sera en contact avec un élément de réfrigération ou de chauffage. De même, dans le cas du module de lyse, le tampon de lyse sera refroidi par passage dans un système de refroidisse¬ ment approprié.
Le dialyseur lui-même peut être utilisé comme un échangeur de chaleur entre le sang et le tampon de lyse qui y transitent, sans avoir recours à d'autres artifices. Ces échanges de chaleur permettent un traitement particulier des hématies.
Les divers modules placés sur ces plaques, dont la forme sera de préférence adaptée pour fixer les éléments amovibles, pourront recevoir un couvercle et un revêtement qui assurera le maintien des températures de préférence à 4°C et 37°C. L'élément de lavage peut revêtir différentes formes ; il sera de préférence du type bol séparateur, il pourra également être réutilisé pour effectuer un lavage après traitement de la suspension.
L'élément de lavage est, dans son principe, un réservoir ayant une symétrie de révolution et constitué de deux enveloppes en tronc de cônes concentriques, la chambre de séparation proprement dite étant l'espace compris entre les deux surfaces coniques.
Une des particularités du bol séparateur est que son remplissage se fait à sa base et à sa périphérie ; tout produit introduit, si il est moins dense que ceux qui se trouvent déjà dans la chambre de séparation, devra donc circuler à contre-sens de la sédimentation. Les composants séparés du produit introduit, s'organisent en anneaux concentriques qui se concentrent par la diminution progressive de leur diamètre, et diminution de leur hauteur par la conicité de la chambre de séparation. Les différents fluides circulent et se dirigent vers ce bol grâce à une pompe péristallique et huit clamps pneumatiques. Un détecteur d'air, deux capteurs optiques et deux roués codeuses placées, l'une sur l'axe de la pompe, et l'autre sur l'axe de la centrifugeuse, permettent la prise d'information nécessaire à la gestion de l'ensemble des périphériques que sont la pompe, la centrifugeuse et les clamps.
Des éléments aux fonctions du même type sont déjà commercialisés notamment par la société Haemonetics sur des machines V5O/PCS/CELL SAVER®, par exemple le laveur COBE 2997, les séparateurs COBE Spectra, DIDECO Vivacell, BAXTER CS 3000 et Autopheresis PC. La description ci-après représente un mode de réalisation du dispositif selon l'invention, en utilisant de préférence un séparateur de la société Haemonetics V Cτ*
La figure 1 est un schéma général du dispositif à usage unique; La figure 2 est un schéma du bol séparateur.
Le dispositif de lyse-rescellement représenté à la figure 1 comporte une unité de lyse A et une unité de rescellement B.
L'unité de lyse A est constituée d'un évaporateur se trouvant au contact d'une plaque métallique (1) en acier inox ayant la forme des éléments du kit à usage unique. L'autre côté de l'évaporateur non présenté et au contact de l'echangeur de chaleur non jetable, contient un serpentin métallique. En fonctionnement, une seconde plaque métallique réfrigérée ou bien simplement en matière isolante articulée sur la première enferme le kit à usage unique dans un volume minimal réfrigéré. Ce boîtier ainsi constitué, impose par ailleurs aux différentes poches et tubulures, leur volume maximum.
Cette plaque métallique (1) comporte deux éléments permettant l'arrivée (2) et le départ (3) du tampon de lyse, dont le système d'alimentation n'est pas représenté, mais est constitué essentiellement par une pompe, un circuit de réfrigération et un bac d'alimentation. Sur la plaque (1) se trouve fixée de manière amovible, la partie dénommée kit à usage unique, de ce module de lyse. Cette partie est composée en se déplaçant de l'entrée du sang vers la sortie du sang traité : d'un perforateur (4) suivi d'une tubulure en PVC (5) qui débouche dans une poche spéciale soudée en forme de serpentin (6), et jouant le rôle d'échangeur thermique ; un serpentin fait d'un tube INOX 1/8 OD de 1 à 1,5 m pourrait être utilisé en lieu et place de la poche PVC en forme de serpentin, pour les échanges de chaleur avec le sang. L'autre extrémité de cet échangeur est lui-même raccordé à une tubulure (7) qui se connecte par un luer mâle spécial à l'entrée artérielle (8) de la cartouche de dialyse (9). A la sortie veineuse (10) du dialyseur, une tubulure (12) mène au haut d'une poche en PVC de 600 ml (11) qui sert de volume tampon, cette tubulure est rejointe par une autre au niveau d'un "Y" (13), entre la sortie du dialyseur (10) et la poche "retard" (11). Finalement une dernière tubulure (14) conduit du bas de cette poche à la sortie du module. L'entrée tampon de lyse du dialyseur est constituée d'une tubulure passant au travers d'une pompe péristaltique et conduisant à un échangeur réalisé par un serpentin métallique non jetable accolé à l'évaporateur. La sortie du dialyseur, en ce qui concerne le liquide de dialyse est quant à elle une simple tubulure débouchant sur un réservoir. Les éléments à refroidir sont donc globalement de deux natures, d'une part le kit à usage unique en matière plastique (PVC, polycarbo- nate) et le kit réutilisable métallique tout deux au contact intime de la plaque métallique régulée en température, et d'autre part les fluides (sang, tampon de lyse, solution de principe actif) qui circulent et séjournent dans le kit au contact duquel ils acquièrent la température désirée. Le module de lyse comporte également une tubulure de pompe
(15) pour solution additive pouvant être mélangé au sang lysé à 4°C, par exemple l'ATP ou une petite molécule, cette tubulure est raccordée à la tubulure (7). Deux niveaux sont donc possibles pour la mise en présence de la substance active et des globules rouges, avant et immédiatement après la lyse.
Enfin, la circulation du sang est assurée par une pompe péristaltique (16) qui est gérée par un ensemble de commandes comme les autres pompes péristaltiques du dispositif, la pompe (17) placée sur la tubulure (18) qui se raccorde au "Y" (13) est essentiellement destinée à assurer la purge de la bobine de dialyse (9), cette pompe est comme la précédente, gérée par l'unité de commande centrale. L'apport de principe actif par la tubulure (15) peut être réalisé soit à la main, soit par l'intermédiaire d'une pompe qui n'est pas représentée.
Le module de rescellement B est lui aussi constitué d'un boîtier métallique (20), muni d'une porte non représentée se refermant sur un kit à usage unique, ce boîtier métallique qui au contact d'une source de chaleur assurera le maintien à 37° du module en cause. Le kit à usage unique est composé en se déplaçant de l'entrée du sang à 4 degrés vers la sortie du sang réchauffé, d'une tubulure (14) provenant directement du module "4 degrés", et qui permet le pré-réchauffage du sang. Cette tubulure quitte momentanément le module pour passer dans le corps d'une pompe à sang (21), avant de se raccorder à un échangeur de chaleur identique (22) à celui utilisé dans le module à 4 degrés. La tubulure (23) qui sort de l'echangeur, lui placé dans le module à 37 degrés, rejoint un "Y" (24) dont une des dérivations se termine par un perforateur mâle (25) (à connecter au flacon de rescellement). L'autre dérivation du "Y" conduit à une poche PVC de 600 ml (26). Cette poche possède deux tubulures d'accès opposées (27 et 28), cela permettant au premier sang entré, d'être aussi le premier sorti, elle est identique à la poche "retard" du module "4 degrés". Une tubulure terminée par un embout femelle (29) pour perforateur constitue la sortie de cette poche "retard.
Enfin, l'amenée de la solution de rescellement effectuée par l'intermédiaire de la tubulure (25) et de la pompe (30) est également asservie comme les pompes péristaltiques précédentes à l'unité de commande centrale. Comme on peut le constater à la lecture de cette figure, l'ensemble des tubulures des quatres poches (6) (11) (22) et (26) et la bobine de dialyse (9) qui sont les éléments en contact avec la suspension de globules rouges, sont placés de façon amovible dans les deux unités de rescellement, et peuvent être en conséquent, soit re-stéri lises, ou bien jetés après usage.
Les poches de mise en température sont en PVC, et constituées de deux feuilles quasiment rectangulaires et identiques en PVC soudées entre elles en forme de serpentin. Ce serpentin conduit d'une tubulure (5) en PVC située sur le haut de la poche, à une seconde (7), qui elle est soudée au bas de la poche. Au sein du boîtier fermé dans lequel la poche est enfermée, la distance maximale entre les faces internes de la poche sera imposée et de l'ordre de de quelques dixièmes de mm. De cette manière, le volume de l'echangeur sera faible (de 10 à 20 ml) et la surface au contact avec la plaque (1) à 4 degrés sera maximum.
La cartouche de dialyse (9) comporte un boîtier parallélipi- pédique en matière plastique rigide. Ce boîtier est séparé en deux compartiments par des membranes semi-perméables, chacun de ces compartiments possède deux tubes d'entrée-sortie. Un des compartiments est traversé par du sang, l'autre par le tampon de lyse. Le montage de cet élément dans le module est fait de telle façon que le sang circule du bas vers le haut afin d'assurer une purge naturelle du compartiment sang.
La cartouche de dialyse peut aussi être de type à "fibres creuses", où les deux compartiments sont constitués pour le compartiment sang, de l'intérieur de fibres creuses (en matériaux semi-perméables) et pour le compartiment tampon de lyse, du volume extérieur aux fibres et intérieur au boitier rigide renfermant ces fibres.
La poche tampon de sortie de dialyse (11) est une poche de transfert de 600 ml de volume maximal, enfermée dans un volume de 500 ml environ dans lequel elle augmente de volume au cours de son remplissage. Elle a ceci de spécial que la turbulure d'alimentation et celle de vidange sont montées toutes les deux sur un petit côté de la poche, mais de façon opposée. Pour une position verticale de la poche, le premier sang entré (par le haut) sera aussi le premier sorti (par le bas). La figure 2 représente la coupe de l'unité de lavage, la description de ce bol réparateur ne sera pas faite en détail puisqu'il s'agit d'un produit qui peut se trouver dans le commerce, et qui a été adapté pour la présente utilisation.
Sur la vue en coupe de la figure 2, on voit que le bol séparateur (41) est dans son principe constitué de deux enveloppes rigides en troncs de cône concentriques (42) et (43). La première est extérieure (42), la seconde (43) placée sur le même axe est incluse dans la précédente. La chambre de séparation (44) est l'espace compris entre les deux surfaces coniques. Ce bol est muni d'un système injecteur (45) et d'un système collecteur (46), séparés de la chambre de séparation par un joint tournant (47) au sommet des deux troncs de cône. Le réservoir durant la séparation des cellules de la suspension introduite est mis en rotation par une centrifugeuse, le système injecteur et collecteur est quant à lui maintenu par deux bras articulés en position fermée. L'injecteur (45) par sa connexion à un réseau de tubulures, permet l'introduction dans le séparateur (44) de la suspension de cellules à séparer, ou lors de l'arrêt du bol la vidange de ce dernier.
Le collecteur (46), quant à lui, permet le recueil des constituants séparés, qui se présentent à lui séquentiellement, poussés au dehors par la suspension introduite. Le collecteur est lui aussi connecté à un réseau, qui se réduit à une tubulure qui rejoint une poche à déchet.
Les éléments solides de la suspension sont progressivement concentrés par centrifugation vers l'extérieur de la chambre (44). Un système de détection préalablement calibré avant la centrifugation permet lorsque la concentration en globules rouges a atteint un volume déterminé, et/ou lorsque les globules rouges ont été lavés convenablement, d'obtenir une suspension de globules rouges présentant les caractéristiques souhaitées.
Les exemples ci-après sont destinés à mettre en évidence d'autres avantages et caractéristiques de la présente invention et ne la limitent en aucune manière.
Exemple 1 : Séparation des hématies du plasma
La séparation des hématies est effectuée au cours du premier lavage, appelé lavage I, et permet le traitement du sang, avant l'étape de la lyse réversible des hématies et leur rescellement.
Le lavage I réalisé sur une unité de sang complet comprend les étapes suivantes : - la déplasmatisation
- la déleucocytation
- l'élimination des plaquettes - l'ajustement de l'hématocrite
- la mise en suspension des hématies dans la solution de produit à internaliser (IHP).
- le contrôle de l'osmolarité. Ces opérations aujourd'hui manuelles, sont réalisées grâce à la présente invention de façon automatique. Lorsqu'une quantité importante de sang doit être traitée, ce lavage peut comporter plusieurs cycles.
Séquence des opérations
Une suspension cellulaire de 40 % d'hématocrite environ, est préparée par ajout de sérum physiologique à partir d'un concentré érythrocytaire, cela de façon automatique et simultanée à l'introduction du concentré érythrocytaire dans le bol, par alternance d'une quantité d'eau et de sang dans une proportion calculée par la machine de façon à obtenir 40% d'hématocrite.
Le culot dilué est introduit dans le bol décrit à la figure 2 jusqu'à détection optique ou vacuité de la poche, soit un volume d'environ 480 ce, cela à un débit de la pompe à sang de 100 cc/min (réglable de 0 à 250 ml/min) et une vitesse rotation de la centrifugeuse de 6000 t/min. La solution surnageante est recueillie dans une poche à déchets de 5 litres. C'est au cours de cette étape que l'hématocrite est empiriquement déterminé par arrêt du remplissage du séparateur à un niveau de l'interface surnageant/cellules déterminé (42 ml), cela dans des conditions de débit et de centrifugation précises.
Le lavage des hématies est effectué par l'introduction dans le bol d'un volume programmé de solution de NaCl à 9 %, cela à un débit variable, sous le contrôle de l'optique de la tubulure. Le débit de la pompe est asservi de telle manière que le liquide quittant le bol soit à un hématocrite de l'ordre de 1%, permettant l'élimination du "buffy coat" tout en minimisant la perte de globules rouges. Cette étape concerne l'achèvement de la déplasmatisation, ainsi que l'élimination des plaquettes et des globules blancs. Le sang étant maintenant sous forme d'une suspension de globules rouges "purs" dans la solution de lavage, la mise en suspension en solution d'IHP est réalisée, cela par la répétition (quatre fois) de la manipulation suivante : - un petit volume d'IHP est introduit dans le bol (de l'ordre de
50 ml à 38 m /1 d'IHP), ce qui déplace la solution de lavage vers la poche à déchets, puis la centrifugeuse est arrêtée de façon à homogénéiser l'IHP dans la solution de suspension des globules rouges, immédiatement suivi d'une remise en marche de la centrifugeuse et d'une attente d'une minute environ pour obtenir une sédimentation correcte.
Lorsque le nombre de lavages souhaités est atteint, la vidange du bol dans une poche de transfert (150 ml/min) peut alors intervenir. Dans le cas ou le volume de sang à traiter ne suffit pas à l'obtention d'un hématocrite de 72 % avant déleucocytation dans le séparateur (bol de 265 ce), c'est-à-dire si le volume d'hématies est inférieur à 191 ml, la machine se mettra en alarme (détection d'air). L'utilisateur aura dans cette situation le choix entre trois alternatives :
- continuer le lavage avec un hématocrite anormal
- connecter une autre unité et continuer normalement le remplissage du bol
- si aucun autre sang que celui déjà en IHP n'est disponible on utilise celui-ci pour achever le remplissage du bol à 72 % d'hématocrite. Le lavage peut alors s'achever comme précédemment décrit.
Le lavage I est alors terminé et la phase de dialyse peut commencer.
Exemple II : Etape de lyse et rescellement
Cette phase de lyse et rescellement intervient après le lavage I et s'adresse donc à une suspension d'hématies (70 %) dans une solution d'IHP de volume variable, de 265 ce minimum à 1,3 litre environ. Cette suspension subira les opérations suivantes : - abaissement de la température à 4°C
- passage dans le dialyseur
- mélange avec une solution d'ATP
- attente à 4 degrés durant 10 minutes environ
- réchauffement à 37°C
- mélange à la solution de rescellement
- attente du lavage II à 37°C de 30 minutes environ.
Séquence des opérations
La suspension d'hématies provenant du lavage I est entraînée par une pompe péristaltique (16) au travers d'un échangeur de chaleur (6) où sa température s'abaisse à 4°C. Ce débit est réglable de 0 à 32 cc/min au pas de 1 ml/min, et détermine le temps de transit du sang dans le dialyseur (9) pour un volume mort donné du compartiment sang). La température quant à elle est réglable de 1°C à la température ambiante. Cette opération de pompage est menée de façon ininterrompue jusqu'à ce que le détecteur d'air d'entrée de pompe soit activé, indiquant la vacuité de la poche de sang à traiter. A ce moment là, et afin de permettre la vidange, même partielle, de l'echangeur de chaleur, puis de la cartouche de dialyse, de l'air stérile sera pompé pour un volume fixe.
Les globules rouges, une fois refroidis dans l'echangeur de chaleur (en suspension dans la solution d'IHP) traversent le compartiment sang d'un dialyseur au débit imposé par la programmation de l'utilisateur. La température du dialyseur est contrôlée (4°C). La pression trans-membra- naire est mesurée. Le débit de la pompe à tampon de lyse (non représentée) est régulé de manière à maintenir la pression trans-membra- naire constante et au niveau désiré, de 0 à 300 mmHg. Le tampon de lyse est lui-même maintenu à 4°C par passage dans un échangeur de chaleur non jetable.
En sortie du dialyseur, et toujours à 4°C, la suspension cellulaire obtenue est mélangée grâce à la tubulure (17) à une solution d'ATP de façon proportionnelle réglable de 1/20 ème à 1/5 ème (rapport pré-réglé à l/10ème), puis laissée en attente pour 15 minutes maximum, (délai réglable de 0 à 20 min) dans la poche (11). La pompe (17) est chargée de l'acheminement de la solution d'ATP, sa gamme de débit s'étend de 0 à 16 ml/min. Après cela, la suspension est pompée à un débit réglable de 0 à 32 ml/min au pas de 1 ml/min, et portée à 37°C par passage dans un échangeur de chaleur. Cela est accompli par la pompe (21) située après l'echangeur, de façon à travailler sur une portion de tubulure qui ne soit pas rigidifiée par une température trop basse. Puis proportionnellement au débit sanguin et dans un rapport de 1/5 ème à 1/20 ème, le produit de rescellement est mélangé dans la poche (26) au sang réchauffé à 37 degrés après passage dans la poche de réchauffage (22). Une pompe péristaltique est utilisée à cet effet, la (21), sa gamme de débit s'étend de 0 à 16 ml/min.
L'ultime étape est une phase d'attente du produit obtenu, afin d'obtenir le rescellement complet des hématies. La suspension d'hématies est maintenue de 15 à 30 mn à la température de 37°C dans la poche de 600 ml (26) environ. Après cela le lavage II peut alors être réalisé.
Exemple III : Lavage des hématies après rescellement
L'objet du deuxième lavage est de laver et resuspendre dans du plasma la suspension cellulaire obtenue après la phase de lyse et rescellement. Les étapes suivantes le composent :
- remplissage du bol et élimination de la solution resuspen¬ dant les hématies, cette solution contenant essentiellement de l'IHP, de l'ATP et de l'hémoglobine libre.
- élimination des stromas de cellules. - mise en suspension des hématies traitées dans une solution de conservation, du plasma ou une solution de macromolécules de synthèse.
Séquence des opérations.
La suspension de cellules traitées par dialyse est introduite dans le bol déjà utilisé pour le lavage I à un débit de 100 cc/min, diluée par de l'eau physiologique dans un rapport de 1:2 et une vitesse de rotation de la centrifugeuse de 5000 trs/min. Cette phase est arrêtée après qu'un volume de 1 1 environ ait été introduit, ou qu'une détection d'air dans la tubulure d'alimentation du bol se soit produite, signe de la vacuité de la poche. Dans le cas d'une détection d'air la question est posée, soit de commencer le lavage, soit d'attendre la disponibilité d'autre sang à laver.
Le lavage peut alors commencer par l'introduction dans le bol d'un volume programmé de solution de NaCl à 9%, cela à un débit variable et pour une vitesse de centrifugation de 6000 trs/min, sous le contrôle de l'optique de la tubulure. Le débit de la pompe est asservi de telle manière que le liquide quittant le bol soit à un hématocrite maximum de l'ordre de
1%, permettant l'élimination des stromas de cellules tout en minimisant la perte de globules rouges. Cette phase élimine une partie de l'hémoglobine libre, sans toutefois que celle qui se trouve entre les hématies ne soit réellement affectée.
La centrifugeuse est alors arrêtée, puis remise en marche aussitôt, de façon à homogénéiser la solution de suspension des globules rouges, avant de recommencer pour un volume déterminé l'introduction de sérum physiologique. Trois étapes de lavage avec 500 ml d'eau physiologique sont ainsi réalisées.
Cette phase d'arrêt et redémarrage de la centrifugeuse est répétée une seconde fois, mais seulement pour deux étapes de 100 ml environ, le sérum physiologique étant remplacé par du plasma.
L'arrêt de la centrifugeuse intervient alors et la vidange du bol est réalisée vers une poche de transfert à un débit de 150 ml/min.
Les lavages I et II peuvent correspondre à un enchaînement de cycles (un ou plus), un cycle correspondant à un ensemble de phases et d'étapes.

Claims

REVENDICATIONS
1. Dispositif destiné à permettre l'incorporation d'une ou de plusieurs substances à activité biologique dans les globules rouges par la technique de lyse-rescellement, caractérisé en ce qu'il comporte
- une unité de lavage permettant, à partir d'un sang complet ou non, l'obtention d'une suspension d'hématies
- une unité de lyse et rescellement constituée d'un module de lyse à une température inférieure à 10°C et d'un module de rescellement à une température supérieure à 20°C, l'ensemble des éléments de l'unité de lyse et rescellement entrant en contact avec la suspension d'érythrocytes étant conçu pour un usage unique.
2. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que le module de lyse est constitué - d'un ensemble assurant l'acheminement d'un tampon de lyse jusqu'à l'entrée de la cartouche de dialyse et l'éventuelle évacuation dudit tampon de lyse, ainsi que des éléments permettant le maintien du module à une température déterminée, notamment 4°C,
- d'un ensemble amovible de préférence à usage unique, comportant une cartouche de dialyse susceptible d'être fixée sur l'arrivée du tampon de lyse pour alimenter l'un des compartiments, l'autre compartiment de la cartouche étant relié à l'extrémité veineuse à un récipient destiné à la mise en température de la suspension d'érythrocytes, et à l'extrémité artérielle à un récipient de stockage. 3. Dispositif selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que le module de rescellement est constitué d'un ensemble d'éléments permettant le maintien du module à une température déterminée, de préférence 37°C, et d'un ensemble amovible, de préférence à usage unique et comportant de l'amont vers l'aval, un récipient destiné à assurer la mise en température de la suspension reliée à un récipient comportant une amenée de solution de rescellement. 4. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que une pompe péristaltique est disposée afin d'acheminer la suspension traitée de la sortie du module de lyse à l'entrée du module de rescellement. 5. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le dispositif comporte en outre deux pompes péristaltiques qui assurent l'entrée de la suspension d'érythrocytes à traiter dans le module de lyse et la sortie du module de rescellement.
6. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que les récipients des différents modules sont des poches en matière plastique.
7. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que le récipient destiné à la mise en température de la suspension d'érythrocytes est une poche à chicane. g. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que les poches sont disposées verticalement et sont alimentées par le haut, et prélevées par le bas.
9. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que la cartouche de dialyse est alimentée par le bas, par la suspension d'érythrocytes.
10. Dispositif selon l'une des revendictions 1 à 9, caractérisé en ce que l'unité de lavage est constituée par un bol de décantation.
11. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que le dispositif comporte des moyens permettant le lavage de la suspension d'érythrocytes après rescellement.
12. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisé en ce que le moyen de lavage de la suspension après rescellement est le même que le moyen de lavage avant l'étape de lyse.
13. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce qu'il comporte dans le module de lyse des moyens d'amenée d'une solution dans le circuit.
14. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisé en ce que le dispositif comporte des moyens de purge des circuits. 15. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisé en ce que chaque module est isolé thermiquement.
16. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 15, caractérisé en ce que les éléments permettant le maintien des modules sont constitués par une plaque métallique permettant sur une face, la fixation des éléments amovibles, et en contact sur l'autre face avec un circuit de réfrigération ou de chauffage respectivement.
17. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 16, caractérisé en ce qt^il est construit autour d'un séparateur du type V5O/PCS/CELL SAVER V-*** ou de tout autre type de séparateur.
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