WO1993009755A1 - Oligosacaridos utilizables para inhibir la mitosis de astrocitos y celulas tumorales del sistema nervioso. su procedimiento de obtencion - Google Patents

Oligosacaridos utilizables para inhibir la mitosis de astrocitos y celulas tumorales del sistema nervioso. su procedimiento de obtencion Download PDF

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WO1993009755A1
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nervous system
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Fernando F. Santos Benito
Manuel Nieto Sampedro
Alfonso Fernandez-Mayoralas
Manuel Martin Lomas
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Consejo Superior Investigaciones Científicas
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07H3/00—Compounds containing only hydrogen atoms and saccharide radicals having only carbon, hydrogen, and oxygen atoms
    • C07H3/06—Oligosaccharides, i.e. having three to five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages

Definitions

  • Oligosaccharides usable to inhibit mitosis of astrocytes and tumor cells of the nervous system. Your procedure of obtaining.
  • astrocytes Death or neuronal injury is always associated with an increase in the number, size and fibrous appearance of astrocytes.
  • the transition of astrocytes from the quiescent state to the reactive state is of great clinical importance because it results in the formation of the glial scar which is one of the main problems for the functional recovery of the central nervous system.
  • the proliferation of astrocytes precedes the growth of axons and prevents their passage through the damaged area, which makes it impossible to restore synapses. Therefore, the repair of the central nervous system requires external intervention to modify the relative course of glial proliferation and axonal growth.
  • purification of the natural substances involved in the control of the division of glial cells or the synthesis of molecules similar to said natural substances is of great importance.
  • European Patent EP 0394971 (of 10/31/90) claims the use of oligosaaric containing inhibitors, of the growth of endothelial cells and angiogenesis.
  • the patent refers to compounds containing 6 to 8 saccharides in its molecule- You can also cite the European patent EP 0208623 (of 01/14/87) typed Use of poly and oligosaccharides to obtain active drugs in the pathology of connective tissues .
  • R 1 C 1 -C 8 n-alkyl, or (CH 2 ) 7 -CO 2 Me, or (CH 2 ) 7 NCBz, or aryl
  • R 1 C 1 -C 8 n-alkyl, or (CH 2 ) 7 -CO 2 Me, or (CH 2 ) 7 NCBz, or aryl
  • R 4 allyl
  • R 1 C 1 -C 8 n-aiquyl, or (CH 2 ) 7 -CO 2 Me, or (CH ⁇ NCBz, or aryl
  • R 4 allyl
  • R 1 C 1 -C 8 n-alkyl, or (CH 2 ) 7 -CO 2 Me, or (CH 2 ) 7 NCBz, or aryl
  • R 2 benzyl
  • R 1 C 1 -C 8 n-alkyl, or (CH 2 ) 7 -CO 2 Me, or (CH 2 ) 7 NCBz, or aryl
  • R 4 H
  • R 1 C 1 -C 8 n-alkyl, or (CH 2 ) 7 -CO 2 Me, or (CH 2 ) 7 NCBz, or aryl
  • R 1 C 1 -C 8 n-alkyl
  • R 1 Q-Q n-alkyl, or (CH ⁇ -CO-Me, or (CH ⁇ NCBz, or aryl
  • R 1 Q-Cg n-alkyl, or (CH ⁇ -CO ⁇ e, or (C ⁇ i ⁇ NCBz, or aryl
  • R 2 benzyl
  • R 3
  • R 1 C 1 -C 8 n-alkyl
  • R 2 benzyl
  • R 3 5 _
  • R 4 12
  • R 1 C 1 - C 8 n-aquil, or (CH 2 ) 7 -CO 2 Me, or (CH 2 ) 7 NCBz, or aryl
  • R 1 C 1 -C 8 n-alkyl, or (CH 2 ) 1 -CO 2 Me, or (CH 2 ) 7 NCBz, or aryl
  • the inhibitory activity of synthesized oligosaccharides has been investigated by analyzing their effects on the incorporation of thymidine into DNA in different cells of the nervous system during the cell division process. The results indicate that compounds of this type have a potential application as inhibitors of cell division, particularly in the control of the appearance of the glial scar and in the treatment of tumors of the nervous system.

Abstract

El procedimiento para obtener los oligosacáridos comienza con la alilación de la posición 3' de β-lactosidos seguida de bencilación controlada, que conduce a compuestos perbencilados y parcialmente bencilados. Los últimos se glicosilan en la posición 3, no bencilada, con un donador de α-L-fucopiranosilo para dar trisacáridos protegidos. Estos y los β-lactósidos perbencilados se desalilan y, posteriormente, glicosilan con un donador de 2-azido-2-desoxi-α-D-galactopiranosilo para dar tetrasacáridos y trisacáridos protegidos respectivamente. La desbencilación de estos productos acompañada de la reducción del grupo azido y acetilación simultánea del grupo amino dan lugar a productos intermedios que por O-desacetilación conducen, respectivamente, a los tetrasacáridos y trisacáridos finales. Los oligosacáridos obtenidos producen, in vitro, inhibición de la mitosis de astrocitos y células tumorales del sistema nervioso y, por ello, podrían utilizarse en el control de la cicatriz glial y tratamiento de tumores del sistema nervioso.

Description

MEMORIA DESCRIPTIVA
Título
Oligosacaridos utilizables para inhibir la mitosis de astrocitos y células tumorales del sistema nervioso. Su procedimiento de obtención.
Campo de la técnica
Oligosacáridos (CO7H3) y preparaciones medicamentosas que contienen ingredientes orgánicos activos (A61K31). Introducción
La muerte o lesión neuronal está siempre asociada con un aumento en el número, tamaño y apariencia fibrosa de los astrocitos. La transición de los astrocitos del estado quiescente al estado reactivo tiene gran importancia desde el punto de vista clínico porque da lugar a la formación de la cicatriz glial que es uno de los principales problemas para la recuperación funcional del sistema nervioso central. Después de una lesión la proliferación de astrocitos precede al crecimiento de axones e impide su paso a través del área dañada, lo que hace imposible el restablecimiento de las sinapsis. Por tanto, la reparación del sistema nervioso central requiere la intervención externa para modificar el transcurso relativo de la proliferación glial y el crecimiento axonal. Así, resulta de gran importancia la purificación de las substancias naturales involucradas en el control de la división de las células gliales o la síntesis de moléculas similares a dichas substancias naturales.
En estudios recientes hemos demostrado la existencia en cerebro de rata sana de inhibidores de la mitosis de astrocitos cuyos niveles disminuyen considerablemente después de una lesión y también hemos postulado que el dominio estructural responsable de la inhibición posiblemente sea un carbohidrato complejo relacionado con los grupos sanguíneos A H o Lewis [Nieto-Sampedro, M. and Broderick, J.T. (1988) A soluble brain molecule related to epidemial growth factor receptor es a mitogen inhibitor for astrocytes. J. Neurosci. Res. 22: 28-35]. Además hemos comprobado que oligosacáridos de estructuras similares a los grupos sanguíneos son capaces de inhibir la proliferación de astrocitos in vitro.
Estado de la técnica La patente europea EP 0394971 (de 31/10/90) reivindica el uso de Inhibidores conteniendo oligosaáricos, del crecimiento de células endoteliares y angiogenesis. La patent se refiere a compuestos conteniendo de 6 a 8 sacáridos en su molécula- Puede también citars la patente europea EP 0208623 (de 14/01/87) tiulada Uso de poli y oligosacáridos par obtención de medicamentos activos en la patología de los tejidos conjuntivos.
Los compuestos objeto de la presente invención son nuevos y por consiguiente no hay nada publicado referente a su síntesis. Descripción de la invención
En esta patente se describe un procedimiento de obtención de oligosacáridos inhibidores de la mitosis de astrocitos y células tumorales del sistema nervioso, probablemente análogos de inhibidores naturales, y la investigación de su actividad inhibitoria. Se han preparado trisacáridos de fórmula general 8 y tetrasacáridos de fórmula general
13 a partir de β-lactósidos de fórmula general 1. Los intermedios comunes para la síntesis de productos de tipo 8 y 13 (compuestos de fórmula general 2) han sido los 3'-O-alil-β-lactósidos obtenidos a partir de 1 previa activación selectiva de la posición 3' con óxidos de alquil estaño y posterior alilación. La bencilación controlada de los compuestos de tipo 2 da lugar a compuestos perbencilados (3) y a productos parcialmente bencilados (4). Los compuestos de tipo 3 se han utilizado en la síntesis de los trisacáridos de tipo 8 y los compuestos de tipo 4 se han utilizado en la síntesis de los tetrasacáridos de tipo 13.
Figure imgf000004_0001
1 R1 = C1 -C8 n-alquilo, o (CH2)7-CO2Me, o (CH2)7NCBz, o arilo R2 =R3 =R4 = H
2 R1 = C1 -C8 n-alquilo, o (CH2)7-CO2Me, o (CH2)7NCBz, o arilo R2 = R3 = H, R4 = alilo
3 R1 = C1 -C8 n-aiquilo, o (CH2)7-CO2Me, o (CH^NCBz, o arilo R2 = R3 = bencilo, R4 = alilo
4 R1 = C1 -C8 n-alquilo, o (CH2)7-CO2Me, o (CH2)7NCBz, o arilo R2 = bencilo, R3 = H R4 = alilo
5 R1 = C1 -C8 n-alquilo, o (CH2)7-CO2Me, o (CH2)7NCBz, o arilo R2 = R3 = bencilo, R4 = H
6 R1 = C1 -C8 n-alquilo, o (CH2)7-CO2Me, o (CH2)7NCBz, o arilo
Figure imgf000005_0001
7 R1 = C1 -C8 n-alquilo, o
(CH2)7-CO2Me, o (CH2)7NCBz, o arilo
Figure imgf000005_0002
8 R1 = Q -Q n-alquilo, o (CH^-CO-Me, o (CH^NCBz, o arilo
Figure imgf000005_0003
9 R1 = Q -Cg n-alquilo, o (CH^-CO^e, o (Cíi^NCBz, o arilo R2 = bencilo, R 3=
R4 = alilo
Figure imgf000006_0002
10 R1 = C1 -C8 n-alquilo, o
(CH2)7-CO2Me, o (CH2)7NCBz, o arilo
R2 = bencilo, R 35_=
R4 = H
Figure imgf000006_0001
11 R1 = C1 - C8 n-alquilo, o (CH2)7-CO2Me, o (CH2)7NCBz, o arilo, R2 = bencilo,
R3 =
Figure imgf000006_0003
R4 =
Figure imgf000006_0004
12 R1 = C1 - C8 n-aIquilo, o (CH2)7-CO2Me, o (CH2)7NCBz, o arilo
R2 = H, R3 =
Figure imgf000006_0005
R4 =
Figure imgf000007_0001
13 R1 = C1 -C8 n-alquilo, o (CH2)1-CO2Me, o (CH2 )7NCBz, o arilo
R2 = H, R3 3 =
Figure imgf000007_0002
R4 =
Figure imgf000007_0003
Los compuestos de fórmula general 3 se han sometido a dasalilación para dar compuestos de tipo 5 que se han glicosilado con un donador de 2-azido-2-desoxi-α-D-galactopiranosilo dando los trisacáridos protegidos de tipo 6. La reducción del grupo azido acompañada de desbencilación con acetilación simultanea del grupo amino dio lugar a intermedios del tipo 7 que tras O-desacetilación condujeron a los trisacáridos de tipo 8.
Los compuestos de fórmula general 4 se han glicosilado con un donador de α-D-fucopiranosilo para dar los trisacáridos protegidos de tipo 9 que por desalilación han conducido a compuestos de fórmula general 10. Los compuestos de tipo 10 se han sometido a una segunda reacción de glicosilación con un donador de 2-azido-2-desoxi-α-D-galactopiranosilo para dar los tetrasacáridos protegidos de tipo 11. La desbencilación de los productos de tipo 11 con reducción concomitante del grupo azido y N-acetilación simultanea del grupo amino condujo a los intermedios de tipo 12 que por O-desacetilación dieron lugar, finalmente, a los tetrasacáridos de tipo 13.
La actividad inhibitoria de los oligosacáridos sintetizados se ha investigado analizando sus efectos sobre la incorporación de timidina al DNA en diferentes células del sistema nervioso durante el proceso de división celular. Los resultados indican que compuestos de este tipo tienen una potencial aplicación como inhibidores de la división celular, particularmente en el control de la aparición de la cicatriz glial y en el tratamiento de tumores del sistema nervioso.
Los siguientes ejemplos ilustran el proceso sintético y muestran las mediciones de actividad biológica con algunos de los productos preparados. Debe ser entendido, sin embargo, que la invención no está limitada a los reactivos y condiciones mostrados en los ejemplos.
Ejemplos
Preparación del trisacárido 8
Una mezcla de metil β-lactósido (1 con R1 = Me, 17.26 g, 45.24 mmol), óxido de dibutilestaño (14.62 g, 58.75 mmol) y tamiz molecular tipo 3Á (58 g) en acetonitrilo (975 ml) se calentó a reflujo con agitación durante 14 h. Posteriormente, se añadieron bromuro de tetrabutilamonio (7.21 g, 22.38 mmol) y bromuro de alilo (55.2 g, 0.45 mol) y se continuó la calefacción. Al cabo de 9 h se añade más bromuro de tetrabutilamonio (2.4 g, 7.5 mmol) y bromuro de alilo (19 g, 0.15 mol) y se dejó continuar la reacción durante 14 h adicionales. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró a sequedad. Al residuo se adicionó acetato de etilo y el sólido precipitado de metil 3 -alil-β-lactósido (2 con R1 = Me, 7.27 g) se filtró. El filtrado se concentró y al residuo resultante se adicionó metanol hasta aparecer un sólido cristalino que se filtró y desechó. El filtrado se evaporó a sequedad y se fraccionó en una columna de gel de sílice empleando acetato de etilo-metanol (6:1 -> 3:2) como eluyente. Se obtuvo una fracción que contiene 2 (5.82 g) que se juntó con el obtenido anteriormente. El compuesto 2 (5 g, 14 mmol) se trató con cloruro de bencilo (30 ml) en presencia de hidróxido potásico (9 g) y la mezcla se calentó a 100 °C durante 30 min. Transcurrido este tiempo, se dejó enfriar, se diluyó con cloroformo (150 ml) y se lavó sucesivamentre con agua, H2SO4 1M y agua. La disolución clorofórmica se secó (Na2SO4) y evaporó. El residuo se pasó a través de una columna de gel de sílice empleando hexano-acetato de etilo (1:0→ 4:1) como eluyente. Se obtuvo primero el compuesto 3 (R1 = Me) (4.90 g, 41%) y a continuación 4 (R1 = Me) (2.92 g, 28%).
El compuesto 3 (5 g, 5.34 mmol) se disolvió en una mezcla de acetato de etilo-etanol-ácido acético -agua (2:2:1:1, 60 ml) y se calentó a 80-90 °C con agitación en presencia de catalizador de Pd al 10% sobre carbón activo (200 mg). Al cabo de 10 h el Pd/C se filtró, se lavó con cloroformo y el filtrado y aguas de lavado se juntaron y lavaron con una disolución acuosa de NaHCO3 y, posteriormente, agua. La fase orgánica se concentró y el residuo se cromatografió en una columna de gel de sílice (hexano-acetato de etilo 5:1→ 3:1) para obtener 5 (R1 = Me) (2.61 g, 55%).
Una mezcla de 5 (1.5 g, 1.67 mmol), cianuro mercúrico (2.41 g, 9.53 mmol), bromuro mercúrico (3.48 g, 9.65 mmol) y tamiz molecular tipo 4 Á en diclorometano (85 ml), se agitó a temperatura ambiente bajo atmósfera de argón durnate 1 h. Al cabo de este tiempo, se adicionó bromuro de 3,4,6-tri-O-acetil-2-azido-2-desoxi-α-D-galactopiranosilo (0.77 g, 1.95 mmol) disuelto en diclorometano (5 ml) y se continuó la agitación. Pasadas 13 y 22 horas se adicionó más bromuro de galactopiranosilo (0.85 g, en cada adición) y la reacción se dejó estar durante 60 h, tras lo cual se filtró y el filtrado se lavó sucesivamente con disoluciones acuosas de Nal al 10%, NaHCO3 saturada y agua. La fase orgánica se secó (Na2SO4) y evaporó. El simpo resultante se pasó a través de una columna de gel de sílice (hexano-acetato de etilo 3:1 -> 7:4) para dar lugar a 6 (R1 = Me) (1.7 g, 87%) como un simpo. [a]D +61.22 (c = 0.7, cloroformo).
El compuesto 6 (1.75 g, 1.45 mmol) disuelto en etanol (100 ml) en presencia de anhídrido acético (2 ml) se hidrogenó empleando catalizador de paladio sobre carbón activo
(1 g) durante 4 días. La suspensión se filtró sobre celita y el filtrado se concentró a sequedad para dar un simpo que se purificó sobre una columna de gel de sílice (cloroformo-metanol 8:1). Se obtuvo 7 (R1 = Me) (0.75 g, 75%). P.f. 149-151 °C, [a]D +94.02 (c = 0.6, metanol). Este compuesto se disolvió en una solución 0.1 M de metóxido sódico en metanol (4 ml) a temperatura ambiente, se dejó estar durante 30 min y a continuación se trató con amberlita IR-120 (H+) hasta neutralidad, se filtró y se concentró a sequedad para dar el trisacárido 8 (R1 = Me) (0.54 g, 95%), como un sólido. P.f. 293-298 °C, [a]D +124.5º (c = 0.5, agua).
Preparación del tetrasacárido 13
Una mezcla de 4 (R1 = Me) (2.94 g, 3.48 mmol) (obtenido de la bencilación de 2), bromuro mercúrico (0.4 g, 1.11 mmol), tamiz molecular 4Å (5.7 g) en diclorometano (40 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Pasado este tiempo, se adicionó bromuro de 2,3,4-tri-O-bencil-a-L-fucopiranosilo (2.4 g, 4.83 mmol) disuelto en diclorometano (40 ml) lentamente durante 5 h y se continuo la agitación durante 1 h adicional, tras lo cual, la mezcla de reacción se filtró sobre celita, se lavó sucesivamente con disoluciones acuosas de KI al 10%, NaHCO3 saturada y agua. La fase orgánica se secó (Na2SO4) y evaporó a sequedad. El residuo simposo se pasó a través de una columna de gel de sílice (hexano-acetato de etilo 5:1) para obtener 9 (R1 = Me) (3.94 g, 84%) como un simpo. [a]D -40.3a (c = 0.7, cloroformo).
El compuesto 9 (3.57 g, 2.83 mmol) disuelto en acetato de etilo (28 ml) y etanol 95% (140 ml), se trató con ácido p-toiuensulfónico (0.28 g) y catalizador de paladio sobre carbón activado (0.52 g). La mezcla se calentó a 80⍛C con agitación durante 1 h y 30 min, pasado este tiempo se filtró sobre celita, se adicionó trietilamina (0.5 ml) y se evaporó. El simpo resultante se cromatografió sobre una columna de gel de sílice (hexano-acetato de etilo 4:1) dando lugar a 10 (R1 = Me) (2.24 g, 65%), [a]D -40.8a (c = 0.6, cloroformo).
Una mezcla de 10 (2.12 g, 1.73 mmol), cianuro mercúrico (2.1 g, 8.31 mmol), bromuro mercúrico (3.04 g, 8.43 mmol), tamiz molecular 4Á (11.4 g) en diclorometano (76 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h, tras la cual, se añadió una disolución de bromuro de 3,4,6-tri-O-acetil-2-azido-2-desoxi-α-D-galactopiranosilo (2 g, 5.07 mmol) disuelto en diclorometano (40 ml) y se continuó la agitación. AI cabo de 20, 30, 52 y 76 h se adicionó más bromuro de galactopiranosilo (0.4, 0.43, 0.23 y 0.2 g respectivamente) y, después de 92 h, más Hg(CN)2 y HgBr2 (1.05 y 1.52 g, respectivamente). Pasadas 120 h, la mezcla de reacción se filtró sobre celita, se lavó con disoluciones acuosas de KI al 10%, NaHCO3 saturada y agua. La solución orgánica se evaporó a sequedad y el residuo se pas a través de una columna de gel de sílice (hexano-acetato de etilo 3:1 -> 7:4). Se obtuvo 1 (R1 = Me) (2.22 g), impurificado con el bromuro de galactopiranosilo, que se utilizó en l siguiente etapa. Esta fracción (2.17 g) se disolvió en etanol absoluto (100 ml) conteniend anhídrido acético (1.5 ml) y se trató con hidrógeno en presencia de catalizador de paladi sobre carbón activo (0.5 g) durante 60 h. La suspensión se filtró sobre celita y se evaporó sequedad. El residuo se fraccionó en columna de gel de sílice (cloroformo-metanol 6:1) y se obtuvo 12 (R1 = Me) (0.86 g, 74%) como un sólido. P.f. 162-167⍛C, [α]D +28.2° (c = 0.9, metanol).
El compuesto 12 (0.81 g, 0.97 mmol) se trató con una disolución 0.1M de metóxido sódico en metanol (150 ml) durante 30 min. La mezcla de reacción se neutralizó con amberlita IR-120 (H+) y se evaporó. Se obtiene 13 (R1 = Me) (0.69 g, 100%), como un sólido. P.f. 165-167⍛C, [α]D +33.8⍛ (c = 0.4, agua).
Actividad biológica de los compuestos 8 y 13
La inhibición de la mitosis producida por los oligosacaridos sintetizados se comprobó in vitro midiendo la incorporación de timidina tritiada [Nieto-Sampedro, M. (1987) Astrocyte mitogenic activity in aged normal and alzheimer's human brain. Neurobiol. Aging. 8: 249-252] en cultivos de astrocitos preparados según el método de McCarthy y de Vellis [McCarthy, K.D. and de Vellis, J. (1980) Preparation of sepárate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue. J. Cell. Biol. 85: 890-902] y en cultivos de células tumorales del sistema nervioso. Las tablas 1 y 2 recogen los ejemplos concretos de las inhibiciones producidas por los compuestos 8 y 13 a diferentes concentraciones sobre astrocitos y las lineas celulares A7 (glioma), N2A y N1E 115 (neuroblastomas).
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000012_0002

Claims

REIVINDICACIONES
1. Oligosacáridos útiles para inhibir la mitosis de astrocitos y células tumorales del sistema nervioso de fórmula general
Figure imgf000013_0001
donde
R1 = C1- C8 n-alquilo, ó (CH2)7-CO2Me, ó (CH2)7NCBz, o arilo
R2 = H, ó bencilo
R3 = H, ó bencilo ó
Figure imgf000013_0002
Figure imgf000013_0003
ó
R4 = H, ó alilo, ó
Figure imgf000013_0004
Figure imgf000013_0006
Figure imgf000013_0005
ó ó
2. Procedimiento de obtención de oligosacáridos de fórmula según reivindicación 1, caracterizado porque en la primera etapa de la reacción, unos β-lactósidos de fórmula general β-D- Gal-(1→4)-β-D-Glc-R(Gal = galactosa, Glc = glucosa, R = C1 - C8 n-alquilo ó (CH2)7- CO2Me ó (CH2)7NCBz o arilo) se alilan selectivamente en la posición 3'. Los 3 -O- alil β-lactósidos resultantes se bencϊlan controladamente en la segunda etapa para dar dos tipos diferentes de productos, unos totalmente bencilados que se utilizan en la preparación de trisacáridos de fórmula general α-D-GalNAc-(1→3)-β-D-Gal-(1→4)-β-D-Glc-R (GalNAc = N-acetilgalactosamina), otros parcialmente bencilados, posición 3 no bencilada, que se utilizan en la preparación de los tetrasacáridos de fórmula general α-D-GalNAc- (1→3)-β-D-Gal-(1→4)-[α-L-Fuc-(1→3)]-β-D-Glc-R(Fuc = fucosa). Los β-lactósidos totalmente bencilados se somenten en la tercera etapa a una desalilación y, en la cuarta etapa, a una α-glicosilación estereoselectiva de la posición 3' con un donador de 2-azido-2- desoxi-α-D-galactopiranósilo para dar los trisacáridos de fórmula general α-D-GalN3- (1→3)-ß-D-Gal-(1→4)-β-D-Glc-R protegidos (GalN3 = 2-azido-2-desoxi-galactosa). Estos trisacáridos, en la quinta y sexta etapas se reducen, desbencilan, N-acetiian y O-desacetilan para dar los trisacáridos de fórmula general α-D-GalNAc-(1→3)-β-D-Gal-(1→4)- ß-D-Glc-R. Los β-lactósidos no bencilados en la posición 3 se someten en la séptima etapa a una α-glicosilación estereoselectiva para dar los trisacáridos β-D-Gal-(1→4)-[α-L-Fuc- (1→3)]-β-D-Glc-R protegidos. En la octava etapa estos trisacáridos se desalilan y en la novena etapa se α-glicosilan estereoselectivamente con un donador de 2-azido-2-desoxi-α- D-galactopiranósido para dar los tetrasacáridos α-D-GalN3-(1→3)-β-D-Gal-(1→4)-[α- L-Fuc-(1→3)]-β-D-Glc-R protegidos. Estos últimos compuestos se desbencilan, reducen y N-acetilan en la décima etapa y por O-desacetilación en la undécima etapa conducen a los tetrasacáridos de fórmula general α-D-GalNAc-(1→3)-β-D-Gal-(1→4)-[α-L-Fuc- (1→3)]-β-D-Glc-R.
3. Un procedimiento según reivindicación 2 caracterizado porque en la primera etapa la posición 3' de β-lactósidos, preferentemente metilß-lactósido, se alila selectivamente con un haluro de alilo, preferentemente bromuro de alilo, en acetonitrilo previa activación con óxidos de alquil estaño en presencia de tamiz molecular.
4. Un procedimiento según reivindicación 2 caracterizado porque en la segunda etapa 3'-0-alil β-lactósidos se protegen controladamente empleando un haluro de bencilo, preferentemente cloruro de bencilo, en presencia de una base, como hidróxido potásico, a una temperatura de 100⍛C.
5. Un procedimiento según reivindicación 2 caracterizado porque en la tercera etapa tiene lugar una desalilación del 3-0-alil β-lactósido bencilado, disuelto previamente en un azeotropo, calentando entre 80-90⍛C y en presencia de catalizadores de rodio, iridio, o paladio sobre carbón activo.
6. Un procedimiento según reivindicación 2 caracterizado porque en la cuarta etapa se lleva a cabo una α-glicosilación empleando un haluro o un tricloroacetimidato de 3,4,6-tri-O¬
-acil-2-azido-2-desoxi-D-galactopiranosilo en presencia de ácidos de Lewis, particularmente trifluomro de boro eterato o triflato de trimetil sililo.
7. Un procedimiento según reivindicación 2 caracterizado porque en la quinta etapa la desbencilación y reducción simultaneas del grupo azido y la acetilación de la amina resultante se realiza utilizando hidrógeno en presencia de un catalizador de paladio sobre carbón activo y anhídrido acético.
8. Un procedimiento según reivindicación 2 caracterizado porque en la sexta etapa se realiza una O-desacetilación con metóxido sódico en metanol, en presencia de una resina cambiadora, para la obtención del trisacárido correspondiente.
9. Un procedimiento según reivindicación 2 caracterizado porque en la séptima etapa se lleva a cabo una α-fucosilación selectiva empleando un haluro o un tricloroacetimidato de 2,3,4-tri-O-bencil fucopiranosilo en presencia de un catalizador de plata o mercurio o de un ácido de Lewis, particularmente trifluomro de boro eterato o triflato de trimetil sililo.
10. Un procedimiento según reivindicación 2 caracterizado porque en la octava etapa la desalilación de los trisacáridos se realiza empleando un catalizador de rodio, iridio, o paladio sobre carbón activo, en presencia de ácido p-toluensulfónico.
11. Un procedimiento según reivindicación 2 caracterizado porque en la novena etapa la glicosilación se lleva a cabo empleando un haluro, preferentemente bromuro mercúrico, o un tricloroacetimidato de3,4,6-tri-O-acil-2-azido-2-desoxi-D-galactopiranosiio,enpresencia de un catalizador de mercurio o de plata, o en presencia de un ácido de Lewis, particularmente trifluomro de boro eterato o triflato de trimetíl sililo.
12. Un procedimiento según reivindicación 2 caracterizado porque en la décima etapa la desbencilación y reducción simultánea del grupo azido y la acetilación de la amina resultante se realiza utilizando hidrógeno en presencia de un catalizador de paladio y anhídrido acético.
13. Un procedimiento según reivindicación 2 caracterizado porque en la undécima etapa se realiza una O-desacetilación con metóxido sódico en metanol, en presencia de amberlita, para la obtención del tetrasacárido correspondiente.
14. Oligosacáridos de fórmula según la reivindicación 1 y obtenidos según procedimiento de reivindicaciones 2 a 13, con radicales específicos
R1=CH3
R2=H
R3=H
R4=
Figure imgf000016_0001
para su aplicación como inhibidores en el tratamiento de tumores del sistema nervioso y en el control de la cicatriz glial, caracterizados porque han demostrado actividad inhibidora, in vitro, de la mitosis de astrocitos y células tumorales del sistema nervioso de la rata, medida en tanto por ciento sobre la incorporación de timidina al DNA respecto al control del 72.1% al 9.6%, para concentraciones micromolares de 1000.0 a 62.5.
15. Oligosacáridos de fórmula según reivindicación 1 y obtenidos según procedimiento de reivindicaciones 2 a 13, con radicales específicos
R1=CH3
R2=H
R3=
Figure imgf000017_0002
para su aplicación como inhibidores en el tratamiento de tumores del sistema nervioso y en el control de la cicatriz glial, caracterizados porque han demostrado actividad inhibidora, in vitro, de la mitosis de astrocitos y células tumorales del sistema nervioso de la rata, medida en tanto por ciento sobre la incorporación de timidina al DNA respecto al control del 100.0% al 4.1%, para concentraciones micromolares de 1000.0 a 15.6.
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