WO2003055481A1

WO2003055481A1 - Inhibiteurs de fibrose des organes

Info

Publication number: WO2003055481A1
Application number: PCT/JP2002/013420
Authority: WO
Inventors: Takashi Horie; Megumi Nakajoh; Ichiro Sonaka; Sonoko Ishizaki
Original assignee: Ajinomoto Co., Inc.
Priority date: 2001-12-25
Filing date: 2002-12-24
Publication date: 2003-07-10
Also published as: JP4569106B2; US20050020656A1; EP1466602A4; JPWO2003055481A1; EP1466602A1; AU2002367129A1; US7094797B2

Description

臓器線維化抑制剤技術分野

本発明は新規臓器線維化抑制剤（腎線維化抑制剤、腌線維化抑制剤、肺線維化抑制剤、血管線維化抑制剤、皮膚線維化抑制剤、骨髒線維化抑制剤、肝線維化抑制剤等）、より詳しくはヒスチジン明を有効成分として、好ましくはシスティン及び/又はシスチンと、ヒスチジンとを有田効成分として、含有する臓器線維化抑制剤に関する。臓器の線維化を有効に抑制し、上記有効成分が全てアミノ酸の一成分であり経口投与又は経口摂取が可能であるところから、線維化に起因する各種臓器疾患用の薬剤、特に肝線維症、肝硬変等肝臓疾患用薬剤（医薬品）の形態で、また、保健機能食品、病者用食品等の飲食品に使用された形態で実施することができる。

更に、本発明は臓器線維化抑制方法（生体内の臓器線維化に起因する疾患の治療、改善、進展防止、予防等のための処置法等含む。）、前記有効成分の臓器線維化抑制剤（医薬品、飲食品等の形態を含む。）製造への使用、前記複数の有効成分を使用する場合それ等有効成分の臓器線維化抑制剤としての組み合わせ或いはそれ等の臓器線維化抑制方法への使用のための組み合わせ等に関する。

背景技術

臓器線維化抑制剤、特に肝線維症、肝硬変等肝臓疾患用薬剤として有効な薬剤

(予防、改善及び Z又は治療剤）は見当たらない。

例えば、肝硬変はウィルス性やアルコール性肝炎等の慢性肝疾患の終末像であるばかりでなく、高率に肝細胞癌に進行することから、合併症（腹水 ·浮腫、脳症、黄疸）に対する既存療法の他に、肝硬変の病因である肝線維化に対する直接的な治療法の開発が望まれている。

肝線維化はウィルスやアルコール等の外的要因若しくは自己免疫異常が関与する内的要因によって惹起される肝細胞壌死と、肝機能を維持するための肝再生とのパランスが崩れた場合に、肝臓組織を修復するためにコラーゲン等の細胞外マトリックスが過剰沈着した結果と考えられている。細胞レベルでは、肝実質細胞の障害、壊死がクッパー細胞や内皮細胞等を活性ィヒし、活性化されたクッパー細胞ゃ内皮細胞等から TN F— a、 T G F— 、 P D G Fが放出される。次に、それ等の因子が、肝線維化の主役とされている星細胞を活性化し、細胞増殖とコラ —ゲンの合成が惹起されるものと考えられている。

更に、肺、腎、滕、皮膚等の臓器においても、肝同様に、各々の臓器に存在する線維芽細胞や各臓器に特異的な間質系細胞（腎メザンギゥム細胞、膝星細胞等 ) が各種サイト力インの刺激により、増殖、細胞外マトリックスの合成異常を呈することにより、臓器線維症が引き起こされるものと考えられている。

そこで、肝線維化に対する直接的で著効を示す薬剤の開発が求められている。更に、それ以外の各種の臓器線維化に有効な薬剤の開発が同様に求められている

発明の開示

1 . 発明が解決しょうとする課題

本発明が解決しょうとする課題は、臓器線維化抑制作用、特に肝線維化抑制作用を著しく示す成分を開発し、これを使用し肝臓等各種臓器疾患用薬剤等の医薬品のみならず、保健機能食品、病者用食品等飲食品に使用した形態でも適用可能な薬剤を提供することにある。

2 . 課題を解決するための手段

本発明者等は上記課題を解決すべく、鋭意検討を進めた結果、ヒスチジン（L 一ヒスチジン、 D—ヒスチジン、 D L—ヒスチジン等）が前記臓器線維化抑制作用、特に肝線維化抑制作用を著しく示し、これを有効成分に使用すると肝臓疾患等の各種臓器疾患用薬剤等の医薬品のみならず、保健機能食品、病者用食品等飲食品に使用した形態でも適用できること、更に上記ヒスチジンに対し特にシステイン（L一システィン、 D—システィン、 D L—システィン等) 及び/又はシスチン ( L—シスチン、 D—シスチン、 D L—シスチン等) を有効成分として併用することにより、より強い線維化抑制作用を示すこと等を見出し、これ等の各種知見に基づいて本発明を完成するに到った。

即ち、本発明は、一つの形態として、ヒスチジンを有効成分として、好ましくはシスティン及び/又はシスチンと、ヒスチジンとを有効成分として含有することに特徴を有する腎線維化抑制剤、脖線維化抑制剤、肺線維化抑制剤、血管線維化抑制剤、皮膚線維化抑制剤、骨髄線維化抑制剤、肝線維化抑制剤等の臓器線維化抑制剤に存する。システィン、シスチン及びヒスチジンはそれぞれ、 L一体、 D—体、 D L—体何れも使用可能である。また、システィン、シスチン及びヒスチジンはそれぞれ、遊離体のみならず、塩の形態でも使用することができる。塩の形態には酸付加塩や塩基との塩等を挙げることができ、システィン、シスチン及びヒスチジンの医薬品又は飲食品として許容される塩を選択することが好ましレ、。システィン、シスチン及びヒスチジンに、それぞれ付加して医薬品又は飲食品として許容される塩を形成する酸としては、例えば、塩化水素、臭化水素、硫酸、リン酸等の無機酸、酢酸、乳酸、クェン酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸又はモノメチル硫酸等の有機酸が挙げられる。システィン、シスチン及びヒスチジンの医薬品又は飲食品として許容される塩基との塩の例としては、例えば、ナトリウム、カリウム、力ルシゥム等の金属の水酸化物或いは炭酸化物や、アンモユア等の無機の塩基との塩、エチレンジァミン、プロピレンジァミン、エタノーノレアミン、モノアノレキノレエタノーノレアミン、ジァノレキノレエタノーノレアミン、ジェタノールァミン、トリエタノールアミン等の有機の塩基との塩が挙げられる。この臓器線維化抑制剤の使用に関しては線維ィヒに起因する臓器の各種疾患用薬剤として使用することができる。例えば、肝臓疾患用薬剤（肝臓疾患の予防、改善及び Z又は治療等に使用する薬剤。）、特に慢性肝炎、肝硬変及び肝臓癌等医薬品の形態で使用することができるし、保健機能食品、病者用食品等飲食品に使用した形態で使用することもできる。

前記ヒスチジンを少なくとも含み、各種臓器のために線維化を抑制する作用、例えば肝線維化抑制作用を発現する薬剤（飲食品に使用した形態を含む。）は本発明に該当し、従って本発明の目的や本発明で奏する作用（効果）を阻害しない範囲で、前記システィン及び/又はシスチン等や、或いは各種必要なその他の成分等を随時配合、使用することもできる（例えば、後述の補助剤、担体等参照。

) ₀

尚、真田等は、 L—ヒスチジンを投与したラットにおいて、 D—ガラクトサミン投与による肝障害が軽減されることを報告している (Biosci. Biotechnol. Bi ochem.， vol. 63，319-322，1999年参照。；)。しかし、ヒスチジンに肝線維化等の臓器線維化抑制作用があることは示されておらず、示唆も無い。

更に、ヒスチジンについて、星細胞への直接作用による活性化抑制や、例えば肝線維化抑制作用等については検討されていない。

システィン及び/又はシスチンを併用する場合、

ンと、ヒスチジンとの含有比率（モル比率）については、遊離体換算- ン及び/又はシスチン：ヒスチジン = 1 ： 0 . 1〜1 0、好ましくは 1 ： 0 . 2 〜8、より好ましくは 1 ： 0 . 3〜6になるように各成分を配合することが望ましい。この場合、シスチンについてはシスティンのモル比に換算して算定するとよい。

ば 2種製剤等にそれぞれを含めてセットで使用してもよい。従って、有効成分に使用する全てのアミノ酸を同一製剤或いは同一飲食品等の形態に含めて使用することもできるし、有効成分に使用するアミノ酸を二つ又はそれ以上の形態、例えば二つ又は三つの製剤及び Z又は飲食品等の形態に分離して使用することもできる。例えば、一つのアミノ酸が医薬品で、他のアミノ酸が飲食品というような形態での使用も可能である。

本発明は、別の形態として、臓器線維化抑制剤に使用することに特徴を有するシスティン及び/又はシスチンと、ヒスチジンとの組み合わせにも存する。

組み合わせる複数の有効成分を、代表的には混合状態で一つの形態、例えば合剤として使用することができる。また、システィン又はシスチンと、ヒスチジンとを、それぞれ分離した形態、例えば別形態の製剤或いは飲食品の形態で；又は

、システィン、シスチン及びヒスチジンの 3種それぞれを、若しくはその何れか 2種混合物と他の 1種とを、相互に分離した形態、例えば別形態の製剤或いは飲食品の形態で使用することもできる。

但し、システィン、シスチン及びヒスチジンは、それぞれ L一体、 D—体及び D L一体何れでもよく、また塩の形態でもよい。

一つの有効成分について非経口製剤で、他の有効成分について経口製剤であるような組み合わせや、一つが医薬製剤で、他が飲食品の形態であるような組み合わせや、一つが非経口製剤、もう一つが経口製剤、三つ目の有効成分については飲食品であるような 3種成分の組み合わせも可能である。

この発明は前記本発明の臓器線維化抑制剤を含むので、本明細書中前記本発明についての説明は全てこの発明の説明に適用される。この発明は有効成分単位で別々に医薬品として或いは飲食品として製品化されたものをも含み、それぞれ同時に摂取又は投与する前記本発明に対し、この発明においては本発明で使用する有劾成分の 1種又は 2種をそれぞれ別々の摂取又は投与形態で、また時と所を異にして摂敢又は投与できるようにしたものであり、前記本発明に対する明細書の説明を参考に、同様にこの発明を実施することができる。

尚、このようなシスティン及び/又はシスチンと、ヒスチジンとの併用による臓器線維化抑制作用についてはこれまでに報告されておらず、また示唆も無レ、。本発明は、別の形態として、ヒスチジンを、好ましくはシスティン及び/又はシスチンと、ヒスチジンとを生体内に投与することに特徴を有する臓器線維化抑制方法（臓器線維化に起因する疾患の治療、改善、進展防止、予防等のための処置法等含む。）に存する。有効成分として上記複数のアミノ酸を生体内に投与する場合、これ等複数のアミノ酸の相対的な投与時期には特に制限は無い。例えば、これ等アミノ酸を全て同時に投与することもできるし、その中の 1種のみ別個に投与したり、又は 3種を使用する場合 3種に分離して別々に時間をおいて生体内に投与することもできる。但し、ヒスチジンは L—体、 D—体及び D L—体何れでもよく、また塩の形態でもよい。システィン及びシスチンは、それぞれ L一体、 D—体及び D L—体何れでもよく、またそれぞれ塩の形態でもよい。

当該投与の形態としては、前記本発明の臓器線維化抑制剤の中から選択することができる。

本発明は、更に別の形態として、ヒスチジン、好ましくはシスティン及び Z又はシスチン、並びにヒスチジンの臓器線維化抑制剤製造への使用に存する。但し、シスディン、シスチン及びヒスチジンは、それぞれ L _体、 D—体及び D L -体何れでもよく、またそれぞれ塩の形態でもよい。

併用する場合複数の有効成分を、代表的には混合状態で一つの形態、例えば合剤として使用することができる。また、併用するシスティン及び Z又はシスチンと、ヒスチジンとをそれぞれ分離し、又は別の形態、例えば複数の医薬品製剤及び/又は飲食品等の別形態で使用してもよい。上記有効成分として使用するアミノ酸の当該臓器線維化抑制剤製造への使用形態としては、前記本発明の臓器線維化抑制剤の中から選択することができる。図面の簡単な説明

[図 1 ]

図 1は、実施例 1において、肝ハイドロキシプロリン（Hyp) 量を測定した結果を示す。

normal：無処置群；

平均値 +標準偏差 normal (N=4) 、 Control (N=7) 、 His投与群 (N=8) ； * : p < 0 . 0 5 Dunnet多重検定。

[図 2 ]

図 2は、実施例 2において、血小板由来増殖因子刺激による星細胞の DN A合成能を測定した結果を示す。

平均値士標準偏差（N=3) ； * ： p < 0 . 0 5 T検定。

[図 3 ] 図 3は、実施例 3において、血小板由来増殖因子刺激による星細胞の DN A合成能を測定した結果を示す。

平均値 +標準偏差（N=3) ； * ： p<0. 05 T検定。

[図 4]

図 4は、実施例 4において、血小板由来増殖因子刺激による星細胞の DNA合成能を測定した結果を示す（ラット肝星細胞 PDGF刺激 DNA合成能に対する C y s及び H i sの配合効果）。

平均値 +標準偏差（N=3) ； * ： pく 0. 05 T検定。

[図 5]

図 5は、実施例 5において、細胞への B r d U取り込み量の測定結果を示す。図 5 a ： PD G F添カ卩；図 5 b ： F C S添加。

平均値 +標準偏差（N=3) ； * ： p<0. 05 T検定。

[図 6]

図 6は、実施例 6において、細胞への B r dU取り込み量の測定結果を示す（ FCS添加）。

平均値 +標準偏差（N=3) ； * ： p<0. 05 T検定。発明の実施の形態

以下、本発明の実施の形態について説明する。

(臓器線維化抑制剤）

本発明の薬剤においては，各種臓器の線維化を抑制する作用、好ましくは肝線維化抑制作用を付与するために有効成分に、ヒスチジンを使用し、好ましくはシスティン及び/又はシスチンと、ヒスチジンとを使用し、医薬品の形態や飲食品に使用した形態で実施することができる。

適用の対象としては、肝臓に関しては、肝線維化抑制作用を利用してウィルス性、アルコール性等の慢性肝炎、その他の肝炎（非アルコール性脂肪性肝炎（NA SH) 等）、肝線維症、肝硬変、及び肝臓癌等、肝臓疾患を予防、改善及び/又は治療する動物、特にヒト（肝臓疾患患者等）であり、またその作用を利用して飲食品、飼料等を通じて肝臓の働きを強化、維持することを期待する健常者、家畜等である。

腎臓に関しては、その線維化抑制作用を利用して、糖尿病性腎症、糸球体腎炎、腎硬化症等、腎線維化を示す腎疾患を予防、改善及び/又は治療する動物、特にヒト（腎疾患患者等）であり、またその作用を利用して、飲食品、飼料等を通じて腎臓の働きを強化、維持することを期待する健常者、家畜等である。

脖臓に関しては、その線維化抑制作用を利用して. 脖線維症等、勝疾患を予防、改善及び/又は治療する動物、特にヒト（縢疾患患者等）であり、またその作用を利用して、飲食品、飼料等を通じて脖臓の働きを強化、維持することを期待する健常者、家畜等である。

肺に関しては、その線維化抑制作用を利用して、肺線維症等、肺疾患を予防、改善及び Z又は治療する動物、特にヒト（肺疾患患者等）であり、またその作用を利用して、飲食品、飼料等を通じて肺臓の働きを強化、維持することを期待する健常者、家畜等である。

血管に関しては、その線維化抑制作用を利用して. 動脈硬化症、 P T C A施行やシャント挿入等、血管再開処置後の再挟窄等の線維性血管変性疾患を予防、改善及び/又は治療する動物、特にヒト（血管変性疾患患者等）であり、またその作用を利用して、飲食品、飼料等を通じて血管の働きを強化、維持することを期待する健常者、家畜等である。

皮膚、骨髄又はその他の臓器に対しては、その線維化抑制作用を利用して、例えば、強皮症、ケロイド、骨髄線維症、全身性硬化症等の疾患を予防、改善及び /又は治療する動物、特にヒト（線維性臓器変性疾患患者等）であり、またその作用を利用して、飲食品、飼料等を通じて該当する臓器の働きを強化、維持することを期待する健常者、家畜等である。

システィン、シスチン及びヒスチジンを使用する場合の入手経路について、調製する場合その調製法は特に困難は無く、何れも従来技術に基づいて容易に行うことができるし、それ等の L—体、 D—体、 D L—体については市販品が存在するので、これ等を購入使用するのが簡便である。システィン、シスチン及びヒスチジンを塩の形態で使用する場合には、従来から知られている造塩工程を利用して遊離体から目的とする塩（医薬品又は飲食品として許容される塩）を容易に調製することができる。前記の通り各種の塩、例えば、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、クェン酸塩、ナトリウム塩、ジエタノールァミン塩等を挙げることができる。

本発明で使用する前記有効成分を各種の薬剤、例えば肝臓疾患用薬剤として使用する場合、製剤の形態には特に制限は無く、経口剤でも非経口剤（注射剤）でもよい。飲食品に使用する場合、通常は経口摂取となるが、経口ではない特別（経管等）の摂取手段も考えられる。本発明で使用する全有効成分を同時に含む製剤の形態でも、また前述の如く有効成分のそれぞれを別々の製剤に調製することもできる。

有効成分の使用量については、例えば肝臓疾患用薬剤（医薬品製剤）に使用する場合、例えば患者の症状やその程度、剤形の種類等により適宜選択すればよい。ヒスチジンを投与するとき、経口投与の場合で通常、ヒスチジンの遊離体換算で 1日当たり好ましくは 1 0 m g〜5 0 g程度、より好ましくは 1 0 0 m g〜2 0 g程度、更に好ましくは 1〜1 0 g程度使用することができる。また、静脈等への注射剤として使用する場合、前記経口投与用製剤に使用する場合の前記有効成分使用量の二十分の一〜二分の一程度の使用量で十分である。一方、システィン及び/又はシスチンと、ヒスチジンとを併用投与するとき、経口投与の場合で通常、システィンとヒスチジンとの 1 ： 0 . 1〜1 0 (モル比、遊離体換算）の混合組成の場合、遊離体換算で 1日当たり好ましくは 1 0 m g〜5 0 g程度、より好ましくは 1 0 0 m g〜2 0 g程度、更に好ましくは 1〜1 0 g程度使用することができる。また、静脈等への注射剤として使用する場合、前記経口投与用製剤に使用する場合の前記有効成分使用量の二十分の一〜二分の一程度の使用量で十分である。尚、シスチンをシスティンに代えて、又はシスティンと共に使用する場合、前記システィンの使用量を参考に対応する使用量を容易に選択することができる。当然のことながら、ヒスチジン単独投与の場合に比較して、ヒスチジン等との併用投与の場合にはより効果が高いので、より少ない投与量で前者の場合と同一の効果を上げることができる。

上記有効成分の使用量に関し、勿論、重篤な場合には更に増量することもできる。投与の回数、時期については、数日に 1回でも、また 1日 1回でも可能であるが、通常は 1日当たり数回、例えば 2〜4回に分けて、好ましくは食後に投与される。

一方、飲食品に使用する場合、上記経口投与量を基準にその有効成分の飲食品中への配合量を決めることができる。

製剤の調製については、薬理学的に許容し得る各種の製剤用物質（補助剤等として）を含むこともできる。製剤用物質は製剤の剤形により適宜選択することができる力 s、例えば、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壌剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶ィ匕剤等を挙げることができる。更に、製剤用物質を具体的に例示すると、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンュトール及びその他の糖類、タノレク、牛乳蛋白、ゼラチン、澱粉、セルロース及びその誘導体、動物及び植物油、ポリエチレングリコール、及び溶剤、例えば滅菌水及び一価又は多価アルコール、例えばグリセ口ールを挙げることができる。

本発明の薬剤は、前述の如く公知の又は将来開発される様々な医薬製剤の形態、例えば、経口投与、経腸投与、経皮的投与、吸入投与等各種の投与形態に調製することができる。本発明の薬剤をこれら様々な医薬製剤の形態に調製するためには公知の又は将来開発される方法を適宜採用することができる。

これ等様々な医薬製剤の形態として、例えば適当な固形又は液状の製剤形態、例えば顆粒、粉剤、被覆錠剤、錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、ジュース、懸濁液、乳濁液、滴下剤、注射用溶液、活性物質の放出を延長する製剤等を挙げることができる。

以上に例示した製剤形態にある本発明の薬剤には、薬効を奏するに有効な量の前記成分 (L一ヒスチジン、並びに併用する場合 L一システィン/ L—シスチン及び L一ヒスチジン等）を含有すべきことは当然のことである。

それ以外の成分を使用する場合でも、これ等に基づき或いは知られている製剤技術を利用して、また各種の剤形に応じて必要な製剤を調製することができる。一方、飲食品への用途についても前記経口用薬剤その他の説明を参考にして容易に実施することができる。

本発明の臓器線維化抑制剤で使用する有効成分をそれぞれ別々に製品化（医薬品製剤、飲食品等）する場合や有効成分の 2種混合物と 1種成分とで別々に製品化する場合（本発明の前記組み合わせ）にも、前記説明を基に同様に実施することができる。

(その他の発明）

前記の通り本発明は、それぞれ別の形態として、

(ィ）臓器線維化抑制剤に使用することに特徴を有するシスティン及び/又はヒスチジンとの組み合わせ、或レ、は臓器線維化抑制剤としてのシスヒスチジンとの組み合わせ；

(口）ヒスチジンを、好ましくはシスティン及び/又はシスチンと、ヒスチジンとを生体内に投与することに特徴を有する臓器線維化抑制方法（臓器線維化に起因する疾患の治療、改善、進展防止、予防等のための処置法等含む。）；

(ノ、 ) ヒスチジンの、好ましくはシスティン及び z又はシスチン、並びにヒスチジンの臓器線維化抑制剤製造への使用；等

にも存する。

これ等の発明については、何れも前記本発明の臓器線維化抑制剤についての説明や、後述の実施例等に基づいて、また必要により従来から知られている技術を参考にすることにより、容易に実施をすることができる。好適な実施の形態

以下に、実施例及び比較例を示して本発明を詳細に説明するが、本発明はこれ等の実施例に限定されるものではない。

(実施例 1 )

9週齢 S D系雄性ラットに 1 0 mg/kgのジメチルニトロソァミン（DMN) を週 3 回腹腔内に 3週間投与して肝線維ィ匕を惹起した。市販飼料又は、被験物として L 一ヒスチジン（His) を、それぞれ 0 . 2、 0 . 5、 1 . 0、及び 2 . 0 %添カロした実験食を、 DMN投与開始日より供餌した。 DMN投与開始 2 1日目に肝臓を採取し、肝線維化の指標として肝臓中ハイドロキシプロリン（Hyp) 量をアミノ酸分析機を用いて測定した。この結果を図 1に示した。この図 1から明らかなように、 DMNの投与によりおよそ 6倍に増加した肝臓中の H y pは、 H i sの経口投与により有意に減少した。

(実施例 2 )

ウィスター（Wistar) 系雄性ラット肝より、プロナーゼ E、コラーゲナーゼ肝灌流法にて星細胞を単離 ·培養し、 8 _ 1 4日目の星細胞を 1 0 %ゥシ胎児血清

(FCS) 含有培地で一晩培養後、 0 . 1 % F C S含有培地に交換し更に 4 8時間培養した。その後、被検物質として L一ヒスチジンを 1〜3 OmMになるように添加し、更に、血小板由来増殖因子（PDGF) を終濃度 2 5 n_g/mlとなるように加え、 2 4時間星細胞を培養した。培養終了 6時間前にプロモデォキシゥリジン（Br dU) を培養系に加え、培養終了後、細胞への B r d U取り込み量を E L I S A法

(enzyme-linked immunosorbent assay法ノで則疋'し 7こ。コントローノレとして培地中に P D G F (終濃度 25ng/ml) のみを添加した。コントロールの B r d U取り込みを 1 0 0 %としたときの各群の値を図 2に示した。その結果、 L-ヒスチジンは P D G Fによる星細胞の D N A合成を用量依存的に強く抑制した。

(実施例 3 )

実施例 2と同様の方法により、 L一ヒスチジンと D _ヒスチジン (それぞれ、 30mM) の星細胞 DNA合成に対する効果を比較した。コントロール群の B r d U 取り込みを 1 0 0 %としたときの各群の値を図 3に示した。その結果、 L-ヒスチジン及び D-ヒスチジン共に P D G Fによる星細胞の D N A合成を強く抑制し、その抑制は同程度であった。

(実施例 4 )

ウィスター（Wistar) 系雄性ラット肝より、プロナーゼ E、コラーゲナーゼ肝灌流法にて星細胞を単離 '培養し、 8— 1 4日目の星細胞を 1 0 %ゥシ胎児血清 (FCS) 含有培地で一晩培養後、 0 . 1 % F C S含有培地に交換し更に 4 8時間培養した。その後、被検物質として L—システィン、 L一ヒスチジン或いは L一システィンと L—ヒスチジンの組成物を添加し、更に、血小板由来増殖因子（PD GF) を終濃度 25ng/mlとなるように加え、 24時間星細胞を培養した。培養終了 6時間前にプロモデォキシゥリジン（BrdU) を培養系に加え、培養終了後、細胞への B r dU取り込み量を EL I SA法 (enzyme -丄 inked immunosorbent assa y法）で測定した。コントロールとして培地中に PDGF (終濃度 25ng/ml) のみを添加した。コントロールの B r dU取り込みを 100%としたときの各群の値を図 4に示した。この結果から、 L一システィン、或いは L-ヒスチジンそれぞれ単独の場合に比較して、 L—システィン及び L—ヒスチジンの組成物は PDG Fによる星細胞の DN A合成を強く抑制していることが理解される。

(実施例 5 )

ヒト正常肺線維芽細胞（HLF- 1細胞）を 10%ゥシ胎児血清 (FCS) 含有培地でー晚培養後、 0. 1 % F C S含有培地に交換し更に 24時間培養した。その後、被検物質として L—ヒスチジン（His) を 10又は 3 OmMになるように添カロし、更に、血小板由来増殖因子（PDGF) を終濃度 25ng/ml或いは FCSを終濃度 5 %となるように加え、 24時間 HLF- 1細胞を培養した。培養終了 6時間前にプロモデォキシゥリジン（BrdU) を培養系に加え、培養終了後、細胞への B r d U取り込み量を EL I SA法 (enzyme— linked immunosorbent assay法ノで ί則疋'しに。コントロールとして培地中に PDGF (終濃度 25ng/ml) 或いは FCS (終濃度 5%) のみを添加した。コントロールの B r dU取り込みを 100%としたときの各群の値を図 5に示した。その結果から、 L一ヒスチジンは PDGF或いは F C Sによるヒト正常肺線維芽細胞の DN A合成を強く抑制することが分かった

(実施例 6 )

ヒト腎メザンギゥム細胞を 10%ゥシ胎児血清 (FCS) 含有培地で一晩培養後、 0. 1%FCS含有培地に交換し更に 24時間培養した。その後、被検物質として L—ヒスチジン (His) を 10又は 30 ηιΜになるように添カロし、更に、 FC Sを終濃度 5 %となるように加え、 24時間メザンギゥム細胞を培養した。培養終了 6時間前にプロモデォキシゥリジン（BrdU) を培養系に加え、培養終了後、細胞への B r d U取り込み量を E L I S A法 (enzyme-linked immunosorbent as say法）で測定した。コント口ールとして培地中に 5 % F C Sのみを添加した。コントロールの B r d U取り込みを 1 0 0 %としたときの各群の値を図 6に示した。その結果から、 L -ヒスチジンは F C Sによるヒト腎メザンギゥム細胞の D N A合成を強く抑制することが分かった。発明の効果

本発明においては、ヒスチジンを有効成分として、好ましくはシスティン及び /又はシスチンと、ヒスチジンとを有効成分として含有する優れた、臓器線維化抑制剤、特に肝線維化抑制剤を提供し、例えば慢性肝炎、肝線維症、肝硬変及び肝臓癌等肝臓疾患用の薬剤（医薬品）の形態で使用できる外に、食品の分野でも、特に有効成分のアミノ酸に L—体を使用する場合保健機能食品、病者用食品等飲食品に使用した形態でも適用することができる。

ヒスチジンは、特に好ましくはシスティン及び Z又はシスチンとの併用により、臓器線維化、特に肝線維化抑制作用を著しく示し、故にヒスチジンを、また併用する場合両者を同時に又は別々に、医薬品の形態や飲食品に使用した形態で目的とする有効成分として使用することができる。

本発明によれば、有効成分を併用する場合更にシスティン及び/又はシスチンと、ヒスチジンとがそれぞれ分離した形態、例えば別形態の製剤或いは飲食品の形態で；又は、システィン、シスチン及びヒスチジンの 3種それぞれが、若しくはその 2種混合物と他の 1種とが相互に分離した形態、例えば別形態の製剤或いは飲食品の形態でも提供することができる。

更に、本発明は、臓器線維化抑制方法（生体内の臓器線維化に起因する疾患の治療、改善、進展防止、予防等のための処置法等含む。）、前記有効成分の臓器線維化抑制剤（医薬品、飲食品等の形態を含む。）製造への使用、前記複数の有効成分を使用する場合それ等有効成分の臓器線維化抑制剤としての組み合わせ或いはそれ等の臓器線維化抑制方法への使用のための組み合わせ等をも提供する。従って、本発明は医薬品、食品分野等において広く実施することができ、故に工業的に極めて有用である。

Claims

請求の範囲

1 . ヒスチジンを有効成分として含有することを特徴とする臓器線維化抑制剤。

但し、ヒスチジンは L一体、 D—体及び D L—体何れでもよく、また塩の形態でもよい。

2 . 更に、システィン及び又はシスチンを有効成分として含有する請求の範囲 1記載の臓器線維化抑制剤。

但し、システィン及びシスチンは、それぞれ L一体、 D—体及び D L—体何れでもよく、またそれぞれ塩の形態でもよい。

3 . 腎線維化抑制剤、膝線維化抑制剤、肺線維化抑制剤、血管線維化抑制剤、皮膚線維化抑制剤、骨髄線維化抑制剤及び肝線維化抑制剤の何れかである請求の範囲 1又は 2記載の臓器線維化抑制剤。

4 . 干線維化抑制剤である請求の範囲 1又は 2記載の臓器線維化抑制剤。

5 . 肝臓疾患用薬剤の形態にある請求の範囲 4記載の臓器線維化抑制剤。

6 . 当該肝臓疾患用薬剤が慢性肝炎、肝線維症、肝硬変、肝臓癌、及び NASH の少なくとも 1種用である請求の範囲 5記載の臓器線維化抑制剤。

7 . 飲食品に使用した形態にある請求の範囲 1又は 2記載の臓器線維化抑制剤。

8 . 経口用又は非経口用である請求の範囲 1又は 2記載の臓器線維化抑制剤

9 . システィン及び/又はシスチンと、ヒスチジンとの含有比率 (モル比率 ) が遊離体換算でシスティン及び/又はシスチン：ヒスチジン = 1 ： 0 . 1〜1 0である請求の範囲 2記載の臓器線維化抑制剤。

尚、シスチンについてはシスティンのモル比に換算して算定する。

1 0 . 臓器線維化抑制剤に使用することを特徴とするシスティン及び/又はシスチンと、ヒスチジンとの組み合わせ。

但し、システィン、シスチン及びヒスチジンは、それぞれ L—体、 D—体及び D L—体何れでもよく、またそれぞれ塩の形態でもよい。

1 1 . システィン又はシスチンと、ヒスチジンとがそれぞれ分離した形態にあり；又は、システィン、シスチン及びヒスチジンの 3種それぞれが、若しくはその 2種混合物と他の 1種とが相互に分離した形態にある請求の範囲 1 0記載の組み合わせ。

1 2 . ヒスチジンを生体内に投与することを特徴とする臓器線維化抑制方法伹し、ヒスチジンは L—体、 D—体及び D L—体何れでもよく、また塩の形態でもよい。

1 3 . システィン及び/又はシスチンを当該生体内に投与する請求の範囲 1 2記載の方法。

但し、システィン及びシスチンは、それぞれ L—体、 D—体及び D L—体何れでもよく、またそれぞれ塩の形態でもよい。

1 4 . 当該投与の形態が請求の範囲 1〜 9何れか記載の臓器線維化抑制剤の形態にある請求の範囲 1 2又は 1 3記載の方法。

1 5 . ヒスチジンの臓器線維化抑制剤製造への使用。

1 6 . システィン及び/又はシスチン、並びにヒスチジンの臓器線維化抑制剤製造への使用。

伹し、システィン、シスチン及びヒスチジンは、それぞれ L—体、 D—体及び D L一体何れでもよく、またそれぞれ塩の形態でもよレ、。

システィン及び/又はシスチンと、ヒスチジンとをそれぞれ相互に分離した形態で使用してもよい。

1 7 . 当該臓器線維化抑制剤製造への使用形態が請求の範囲 1〜 9何れか記載の臓器線維化抑制剤の形態にある請求の範囲 1 5又は 1 6記載の使用。