WO2006090924A1 - Block copolymer having peptide ligand - Google Patents

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WO2006090924A1
WO2006090924A1 PCT/JP2006/304202 JP2006304202W WO2006090924A1 WO 2006090924 A1 WO2006090924 A1 WO 2006090924A1 JP 2006304202 W JP2006304202 W JP 2006304202W WO 2006090924 A1 WO2006090924 A1 WO 2006090924A1
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WO
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group
block copolymer
integer
peptide
independently
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Application number
PCT/JP2006/304202
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French (fr)
Japanese (ja)
Inventor
Kazunori Kataoka
Keiji Itaka
Nobuhiro Nishiyama
Makoto Oba
Shigeto Fukushima
Naoki Kanayama
Original Assignee
The University Of Tokyo
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Publication date
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
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    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
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    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A61K47/6455—Polycationic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. for complexing nucleic acids
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates

Definitions

  • the present invention relates to a peptide block copolymer usefully used as a carrier of a drug delivery system for the purpose of therapy or diagnosis, particularly a gene delivery system for the purpose of gene therapy, and more specifically, targeting to a carrier.
  • the present invention relates to a block copolymer having a peptide ligand that imparts properties and a method for producing the same. Background technology
  • imparting target directivity to a target site or cell is important in various aspects such as enhancing therapeutic effects, reducing side effects, and improving diagnostic accuracy.
  • the safety of gene delivery systems for gene therapy has been feared due to the successive accidents of viral vectors that have been used as gene vectors in recent years, and the creation of non-viral vectors with safety features is expected. Has been.
  • non-viral gene delivery systems have problems such as low gene transfer efficiency, and further performance improvements are necessary to reach the clinically required gene expression level.
  • approaches from various angles have been made.
  • One of them is the introduction of molecules having specific affinity with the target cells, such as antibodies and ligands, into the vector, and the gene expression by the cells. Studies have been made to increase the amount of uptake.
  • PEG polyethylene glycol
  • Reion complex (hereinafter also referred to as PIC) has been reported to form micelles and be useful as a gene carrier (K. Kakizawa, K. Kataoka, Block copolymer micelles lor delivery of gene and related compounds,
  • a target molecule such as a ligand may be bound to the end of PEGG.
  • PEGG polyethylene glycol monopoly (dimethylaminoethyl methacrylate)
  • £ 0—? ⁇ Tomii polyethylene glycol monopoly (dimethylaminoethyl methacrylate)
  • reaction a method is used in which the acetal at the end of PEG is converted to an aldehyde by acid treatment, mixed with a lactose derivative having an amino group at the end to form a Schiff base, and then reduced.
  • this is a reaction that can be performed because the side chain of PAMA is a tertiary amine, and in a system having a primary amine such as polylysine, it cannot be applied because it reacts with an aldehyde.
  • polylysine is inevitably used, the ligand is first bound in a state where the amino group is protected. However, if acid or alkali is used after deprotection, the peptide ligand is inactivated.
  • the problem to be solved by the present invention is to provide a drug carrier imparted with a target directivity, particularly a gene carrier, introduce a peptide ligand by a simple operation, and cause side reactions and inactivation as much as possible. There is no way to provide a way.
  • the present inventors succeeded in introducing a ligand having a target function for recognizing a specific cell to the end of the block copolymer by a simple operation, Furthermore, in gene transfer experiments into cells having a receptor for the ligand, it was found that gene expression was greatly improved, and the present invention was completed.
  • the present inventors firstly made a polyamino acid-derived segment as a carrier by deprotection or derivatization while retaining the acetal group at the end of the uncharged segment of the block copolymer.
  • the block copolymer and the peptide having a cysteine end are mixed in an acidic solution, and the conversion of the acetyl group to the aldehyde group and the binding of the ligand are carried out simultaneously.
  • side reactions such as aldol condensation can be suppressed, and under acidic conditions, even if primary amines are present in the polyamino acid-derived segment, they are protonated and do not react with aldehydes.
  • the cysteine reaction is irreversible, and we found that a stable bond can be obtained without performing reduction or other operations.
  • the present invention has been completed.
  • a block copolymer having an uncharged segment and a polyamino acid-derived segment, wherein the terminal end of the uncharged segment is an acetal group. Is done.
  • the uncharged segment is preferably polyethylene dalycol or a derivative thereof.
  • the polyamino acid-derived segment is preferably a polycation, and includes one or more selected from the group consisting of polylysine, polylysine derivatives, polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof, or
  • the polyamino acid-derived segment is selected from the group consisting of polylysine, polylysine derivatives, and salts thereof, and the group consisting of polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof It is more preferable that one or more of these be included.
  • the block copolymer is preferably represented by the following formula (1).
  • R ia and R ib are each independently the same or different, and may be a C i to C 10 alkyl group which may have a substituent, L represents a linking group, Y Represents a segment derived from polyamino acid, R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, 1 is an integer of 1 to 5, and m is 5 to 20 or 0 0 0 Is an integer.
  • R la and R lb are preferably independent of each other and the same or different and each is a methyl group or an ethyl group.
  • one L and one are one (CH 2 ) a- NH-[where a is :! It is an integer of ⁇ 5. It is preferable that it is what is shown by these.
  • R 2 is preferably a hydrogen atom or an acetyl group.
  • 1 is preferably 2.
  • one Y— may be represented by the following formula (Y 1) or a salt thereof.
  • R3 independently of each other, is a hydrogen atom or a protecting group, provided that at least one is a hydrogen atom, wherein the protecting group is an acidic group within the protecting group of the amino group.
  • ⁇ is an integer from 2 to 5,000.
  • 1 ⁇ - may be represented by the following formula ( ⁇ 2) or a salt thereof.
  • R4 independently of each other, is a methylene group or an ethylene group
  • R 5 s independently of each other, are a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, wherein at least one of R 5 is an amine compound residue, and n is 2 to 5,000.
  • X is an integer between 0 and 5, 000, but not greater than n.
  • one Y— may be represented by the following formula (Y 3) or a salt thereof.
  • each R 3 independently of one another is a hydrogen atom or a protecting group, wherein the protecting group is a protecting group of an amino group that can be deprotected without acidic conditions, R 4 is each independently a methylene group or ethylene group, and R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, provided that at least R 3 One is a hydrogen atom, at least one of R 5 is an amine compound residue, or both, n is an integer from 2 to 5, 00, and X is 0 to 4 , 9 9 is an integer of 9 and y is :!
  • the method includes a deprotection reaction in which part or all of R 3 ′ is eliminated from the block copolymer represented by the following formula (3):
  • R la and R ib are each independently the same or different, and may be a C i to C 10 alkyl group which may have a substituent, L represents a linking group, R 2 is water Represents an elementary atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, R 3 ′ is a protecting group that can be deprotected without being subjected to acidic conditions, 1 is an integer of 1 to 5, and m is 5 to 20 , 00 0 and n is an integer from 2 to 5,000. ]
  • Ria, Rib, L, R2, 1, m, n have the above-mentioned meanings.
  • R3 is their respective independently of one another, are the same protecting group with a hydrogen atom or R 3 ', provided that one at least of the R 3 is a hydrogen atom.
  • the second embodiment of the present invention includes a conversion reaction that converts a part or all of the side chain benzyl ester of the block copolymer represented by the following formula (5) by aminolysis.
  • Rla and Rib are each independently the same or different, and may be a Ci to Ci 0 alkyl group which may have a substituent, L represents a linking group, and R 2 represents Each represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group; R 4 independently represents a methylene group or an ethylene group; 1 is an integer of 1 to 5; m is 5 to 20 , 000, and
  • n is an integer from 2 to 5,000.
  • a method for producing a block copolymer represented by the following formula (4) or a salt thereof is provided.
  • R la , R lb , L, R 2, R 4, 1, m and n have the above-mentioned meanings.
  • R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, provided that at least one of R 5 is an amine compound residue, and X is an integer of 0 to 5,000 , But not greater than n. ]
  • R la and R lb are each independently the same or different and each may be a Ci to C io alkyl group which may have a substituent
  • L represents a linking group
  • R 2 Represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group
  • R 3 ′ is a protecting group that can be deprotected without being subjected to acidic conditions
  • R 4 s are each independently a methylene group Or an ethylene group
  • 1 is an integer of 1 to 5
  • m is an integer of 5 to 20 and 0 0
  • n is an integer of 2 to 5 and 0 0
  • y is 1 to 4
  • 9 9 An integer of 9 9 and smaller than n.
  • R 3 is each independently a hydrogen atom or the same protecting group as R 3 '
  • R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group,' or an amine compound residue.
  • at least one of R 3 is a hydrogen atom, or at least one of R 5 is It is an amine compound residue or both
  • X is an integer from 0 to 4,999, provided that x + y is not greater than n.
  • R 3 is preferably a trifluoroacetyl group.
  • R 4 is preferably a methylene group.
  • R la and R ib are each independently the same or different and are preferably a methyl group or an ethyl group.
  • 1 L 1 is 1 (CH 2 ) a- NH-[wherein, a is an integer of 1 to 5. It is preferable that it is what is shown by these.
  • R 2 is preferably a hydrogen atom or a acetyl group. Further, 1 is preferably 2.
  • the uncharged segment is preferably polyethylene dalycol or a derivative thereof.
  • the polyamino acid-derived segment contains one or more selected from the group consisting of polylysine, polylysine derivatives, polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof, or Amino acid-derived segments consist of polylysine, polylysine derivatives, and their salts. And at least one selected from the group consisting of polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof.
  • the peptide block copolymer is preferably represented by the following formula (8).
  • A represents a peptide ligand
  • L represents a linking group
  • Y represents a segment derived from polyamino acid
  • R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group.
  • 1 is an integer from 1 to 5
  • m is an integer from 5 to 20,000.
  • A is preferably a peptide having 1 to 200 amino acid residues
  • A is a peptide capable of specifically binding to integrin. More preferably, A is cyclo (L-ArgG1y-L-AspDPheLLys) -Z [wherein Z represents an amino acid residue. It is more preferable that it is what is shown by these.
  • 1 L— is 1 (CH 2 ) a-NH 2 [wherein a is an integer of 1 to 5. It is preferable that it is what is shown by these.
  • R 2 is preferably a hydrogen atom or a acetyl group.
  • 1 is preferably 2.
  • —Y— may be represented by the following formula (Y 1).
  • R3 independently of each other, are a hydrogen atom or a protecting group, and at least one is a hydrogen atom, wherein the protecting group is an acidic condition among the protecting groups of the amino group.
  • N is an integer from 2 to 5,000.
  • one Y— may be represented by the following formula (Y2).
  • R 4 s are each independently a methylene group or an ethylene group, and R 5 s are each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, provided that At least one of R 5 is an amine compound residue, n is an integer from 2 to 5,000, and X is an integer from 0 to 5,000, but not greater than n. ]
  • 1′Y— may be represented by the following formula (Y3).
  • Y3 One y — ( Y3)
  • each R 3 independently of one another represents a hydrogen atom or a protecting group, wherein the protecting group is a protecting group of an amino group that can be deprotected without acidic conditions, and R 4 is each independently a methylene group or ethylene group, and R 5 is each independently a hydroxyl group, benzyloxy group, or amine compound residue, provided that at least one of R 3 One is a hydrogen atom, at least one of R 5 is an amine compound residue, or both, n is an integer from 2 to 5, 0 0 0, and X is 0 to 4, 9 9 is an integer of 9 and y :! It is an integer of ⁇ 4, 9 99, where y is smaller than n and x + y is not larger than n.
  • R 4 is preferably a methylene group.
  • a polymer having an acetal end and a peptide having a cysteine end are mixed in an acidic solution without previously converting the acetal into aldehyde.
  • a method for introducing a peptide ligand into a molecule is provided.
  • the polymer having an acetal end may be polyethylene glycol or a derivative thereof, the high molecule having an acetal end may be a polycation, and further has an acetal end.
  • the polymer may be a block copolymer or graft copolymer of polyethylene dallicol and polycation, and the polymer having an acetal end may be polyethylene.
  • the copolymer may be a block copolymer or a graft copolymer of polyglycol with a polyamino acid or a derivative thereof, or a salt thereof.
  • A represents a ligand peptide
  • L represents a linking group
  • R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group
  • m is an integer from 5 to 20,000.
  • Ria and Rib are each a Ci Cw alkyl group which is independent of each other and is the same or different and may have a substituent. ]
  • A is preferably a peptide having 1 to 200 amino acid residues, and A is more preferably a peptide capable of specifically binding to integrin.
  • A is cyclo (L-Arg_G1yL-AspDPheLLys) -Z [wherein Z represents an amino acid residue. It is more preferable that it is what is shown by these.
  • —L— is 1 (CH 2 ) a-NH 1 [wherein, a is an integer of 1 to 5. It is preferable that it is what is shown by these.
  • R 2 is preferably a hydrogen atom or a acetyl group.
  • 1 is preferably 2 ′.
  • —Y— may be represented by the following formula (Y 1) or a salt thereof.
  • R 3 s are each independently a hydrogen atom or a protecting group, provided that at least one is a hydrogen atom, wherein the protecting group is an acidic condition among the protecting groups of the amino group.
  • N is an integer of 2 to 5, 0 0 0. ]
  • one Y— may be represented by the following formula (Y 2) or a salt thereof.
  • R 4 s are each independently a methylene group or an ethylene group, and R 5 s are each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, provided that At least one of R 5 is an amine compound residue, n is an integer from 2 to 5, 0 0 0, and X is an integer from 0 to 5, 0 0 0, but not greater than n Shall. ]
  • one Y— may be represented by the following formula (Y 3) or a salt thereof.
  • each R 3 independently of one another is a hydrogen atom or a protecting group, wherein the protecting group is a protecting group of an amino group that can be deprotected without acidic conditions, R 4 is each independently a methylene group or ethylene group, and R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, provided that at least R 3 One is a hydrogen atom, or at least one of R 5 is a force containing an amine compound residue, or both, n is an integer from 2 to 5, 00, and X is from 0 to It is an integer of 4, 9 9 9, and y is an integer of 1 to 4, 9 9 9, where y is smaller than n and x + y is not larger than n. ]
  • R 4 is preferably a methylene group.
  • a peptide block copolymer according to the third aspect of the present invention, or a peptide block copolymer obtained by the method according to the fifth aspect of the present invention, and a nucleic acid or a chargeable property A polyion complex characterized by comprising a protein is provided.
  • the nucleic acid is selected from the group consisting of a gene used for gene therapy, a gene encoding a protein, a DNA fragment, an RNA fragment, an antisense DNA, and a double-stranded oligonucleic acid. It is preferable.
  • the polyion complex of the present invention has a form of a polymer micelle having a core part and a shell part, and the core part is a nucleic acid or a charged substance.
  • a polyion complex characterized in that a poly (ethylene glycol) segment in a peptide block copolymer is mainly present in the shell part, and a peptide ligand is present in the vicinity of the surface layer of the polymer micelle. Preferably there is.
  • a peptide block copolymer according to the third aspect of the present invention or a peptide block copolymer obtained by the method according to the fifth aspect of the present invention, and a drug or fine particles.
  • a composite is provided, characterized in that it comprises.
  • the composite has a form of a polymer micelle having a core part and a seal part, and the core part encloses a drug or fine particles, and the shell part contains a peptide. It is preferably a complex characterized in that the polyethylene glycol segment in the block copolymer is mainly present and a peptide ligand is present in the vicinity of the surface layer of the polymer micelle.
  • a pharmaceutical composition comprising the polyion complex according to the sixth aspect of the present invention or the complex according to the seventh aspect of the present invention.
  • FIG. 1 is a diagram showing 1 H-NMR data of acetal-PEG-PLL (TFA).
  • FIG. 2 is a diagram showing ⁇ -NMR data of Acetal-PEG-PLL.
  • FIG. 3 is a diagram showing -NMR data of a mouth opening (RGDffO-PEG-PLL).
  • FIG. 4 shows luciferase gene expression using a cyclo (RGDfK) -PEG-PLL / pDNA complex.
  • FIG. 5 is a graph showing the evaluation results of the number of receptors on the surface of HeLa cells.
  • the uncharged segment may be, for example, a polyalkylene glycol such as polyethylene glycol or polypropylene glycol, a polyalkylene oxide, a polysaccharide, a polyacrylamide, or a polysubstituted acrylamide.
  • a polyalkylene glycol such as polyethylene glycol or polypropylene glycol
  • a polyalkylene oxide such as polyethylene glycol or polypropylene glycol
  • a polyalkylene oxide such as polyethylene glycol or polypropylene glycol
  • a polyalkylene oxide such as polyethylene glycol or polypropylene glycol
  • a polyalkylene oxide such as polyethylene glycol or polypropylene glycol
  • a polyalkylene oxide such as polyethylene glycol or polypropylene glycol
  • a polyalkylene oxide such as polyethylene glycol or polypropylene glycol
  • a polyalkylene oxide such as polyethylene glycol or polypropylene glycol
  • a polyalkylene oxide
  • the weight average molecular weight of the uncharged segment is preferably from 1, 0 00 to 2 0 0, 0 0 0, and from 5, 0 0 0 to 2 0, 0 0 0 More preferably it is.
  • polyethylene glycol or a derivative thereof is preferably used as the non-chargeable segment from the viewpoint of imparting biocompatibility to the carrier.
  • the polyamino acid-derived segment is preferably poly-force thione, and examples thereof include polylysine, polylysine derivatives, polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, or salts thereof. be able to.
  • the polyamino acid-derived segment can easily synthesize polycations of various structures, can control the molecular weight and molecular weight distribution, and can also have a plurality of functions.
  • the acetal groups Rla and Rib at the end of the uncharged segment are not particularly limited, but the acetal does not change when neutral and is converted to aldehyde when acidic. It is preferable to have the following stability.
  • R la and R ib are, for example, C i to C io (C i-io) alkyl groups which are independent of each other and are the same or different and may have a substituent.
  • the “r C wo alkyl group” may be cyclic or acyclic, and may be linear or branched.
  • d-ioalkyl include methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, n-hexyl and the like.
  • a substituent such as halogen may be introduced.
  • jetyl acetal or dimethyl acetal is often used as the acetal group at the end of the uncharged segment.
  • the block copolymer is preferably one represented by the following formula (1).
  • Rla and Rib are each independently the same or different, and are Ci to Ci 0 alkyl groups which may have a substituent.
  • R la and R lb are preferably a methyl group or an ethyl group.
  • L represents a linking group
  • 1 L 1 is a structure derived from the terminal structure of the PEG derivative or the like used, but 1 (CH 2 ) a-NH— [wherein a is an integer of 1 to 5 It is. And a is more preferably 2 or 3.
  • R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group.
  • the “protecting group” include Cl-6 alkylcarbonyl group, preferably a acetyl group.
  • examples of the “hydrophobic group” include derivatives such as benzene, naphthalene, anthracene and pyrene.
  • Examples of the “polymerizable group” include a methacryloyl group and an atalyloyl group. Such polymerizable groups When the block copolymer represented by the formula (1) has, these copolymers can be used as a so-called macromer. For example, after forming a polyion complex micelle described later, another comonomer is used as necessary. It can also be bridged via these polymerizable groups.
  • Examples of methods for introducing these protecting groups, hydrophobic groups, and polymerizable groups into the end of the copolymer include conventional methods such as methods using acid halides, methods using acid anhydrides, and methods using active esters. The method used in is mentioned.
  • R 2 is preferably a hydrogen atom or a acetyl group.
  • 1 is an integer of 1-5, and it is preferable that it is 2.
  • m is an integer of 5 to 20 and 0 0 0, preferably 2 0 to 5 and 0 0 0, and more preferably 1 0 0 to 5 0 0 .
  • Y represents a segment derived from a polyamino acid.
  • 1 Y— may be represented by the following formula (Y 1) or a salt thereof.
  • R 3 s are each independently a hydrogen atom or a protecting group, provided that at least one is a hydrogen atom.
  • the protecting group is a protecting group of an amino group that can be deprotected without being subjected to acidic conditions, and is preferably a trifluoroacetyl group.
  • the total of R 3 is preferably 85% or more, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and particularly preferably 100% is a hydrogen atom.
  • n is an integer of 2 to 5,000, preferably 5 to 1,000, and more preferably 10 to 200.
  • One Y— may be a salt of the above formula (Y 1).
  • C ⁇ , Br-, I-, (1/2 S0 4 )-, NO3—, (I / 2 CO3) —, (1/3 PO4) — , CH 3 CO_ ⁇ -, CFsCOO-, CH 3 S0 3 - , CF 3 S_ ⁇ 3 - in a first aspect of the like can be mentioned are t present invention, the formula (1) in one Y- is represented by the following formula ( Y2) or a salt thereof may be used.
  • I-( ⁇ 2) In the above formula ( ⁇ ⁇ 2), each repeating unit is shown in the order specified for convenience of description: Each repeating unit can exist randomly.
  • R 4 s are each independently a methylene group or an ethylene group.
  • the methylene group corresponds to a polyaspartic acid derivative
  • the ethylene group corresponds to a polyglutamic acid derivative.
  • aminolysis proceeds quantitatively under mild conditions.
  • R 4 is more preferably a methylene group, that is, a polyaspartic acid derivative.
  • R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, provided that at least one of R 5 is an amine compound residue.
  • amine compound residue means a general formula —NH— (CH 2 ) b—
  • b is an integer of 1 to 5, and preferably 2 or 3.
  • examples of the substituent that can be X include the substituents shown below, but are not limited thereto.
  • X 2 represents a hydrogen atom, a d-6 alkyl group or an amino d-6 alkyl group.
  • R 7a is a hydrogen atom or a methyl group
  • R 8 a benzylidene Okishikarubo is commonly used as a protecting group for a hydrogen atom or an amino group - Le group (.
  • ⁇ group amino group - Le group
  • Boc group tert -Butoxycarbonyl group
  • a protecting group such as a til group or a trifluoroacetyl group
  • d 1 is an integer of 1 to 5, preferably 2 or 3
  • e 1 is an integer of 1 to 5, preferably 1 to 3 It is an integer.
  • R? B and R 7 c are a hydrogen atom or a methyl group
  • R 8 b is a Z group, a B oc group or a acetyl group which are usually used as a protective group for a hydrogen atom or an amino group.
  • a protecting group such as a trifluoroacetyl group
  • d 2 and d 3 are each independently an integer of 1 to 5
  • e 2 and e 3 are each independently an integer of 1 to 5.
  • 85% or more of the total of R 5 is preferably an amin compound residue, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and particularly preferably 100% is an amine compound residue. It is a group.
  • n is an integer of 2 to 5,000, preferably 5 to 1,000, and more preferably 10 to 200.
  • X is an integer of 0 to 5,000, but not greater than n.
  • One Y— may be a salt of the above formula (Y2).
  • the salt forming salt is C l-, B r-, I-, (l / 2 SO + 4 )-, N0 3- , (1 2 CO 3 )-, (1/3 P0 4 ) —, CH 3 COO—, CF 3 COO—, CH 3 S 0 3 ⁇ CF 3 SO 3 — and the like.
  • one Y— may be represented by the following formula (Y3) or a salt thereof.
  • each repeating unit in the above formula (Y3) is shown in the order specified for convenience of description, each repeating unit can be present at random. .
  • R 3 s are each independently a hydrogen atom or a protecting group, where the protecting group can be deprotected without being subjected to acidic conditions in the protecting group of the amino group. And is preferably a trifluoroacetyl group.
  • R 4 s are each independently a methylene group or an ethylene group.
  • R 5 s are each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue.
  • At least one of R 3 is a hydrogen atom, at least one of R 5 is an amine compound residue, or both.
  • 85% or more of the total of R 3 is preferably a hydrogen atom, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and particularly preferably 100% is a hydrogen atom.
  • preferably 85% or more of the total of R 5 is an amine compound residue, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and particularly preferably 100% is the amine compound residue. It is a group.
  • n is an integer of 2 to 5,000, preferably 5 to 1,000, and more preferably 10 to 200.
  • X is an integer from 0 to 4,999 and y is :! It is an integer of ⁇ 4,999, where y is smaller than n and x + y is not larger than n: 1 Y— may be a salt of the above formula (Y3).
  • one aspect of the second embodiment of the present invention includes a deprotection reaction in which a part or all of R 3 ′ is eliminated from the block copolymer represented by the following formula (3).
  • a method for producing a block copolymer represented by the formula (2) or a salt thereof is provided.
  • R 1, Rlb, R 2 , L 1 , i, m and n are the same as those in the first embodiment of the present invention. It is the same as described in the case of 1).
  • R 3 ′ is a protecting group that can be deprotected without using acidic conditions, and is preferably a trifluoroacetyl group.
  • each R 3 independently of one another is a hydrogen atom or the same protecting group as R 3 ′, provided that at least one of R 3 is a hydrogen atom.
  • preferably 85% or more of the total of R 3 is a hydrogen atom, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and particularly preferably 100%.
  • the produced block copolymer may form a salt thereof.
  • the counter ions forming the salt include C 1, Br 1, I 1, (1/2 S0 4) 1, NO 3 ⁇ (1/2 C0 3 )-, (1/3 P 0 4 ) CH 3 COO, C F3COO—, CH3SO3 ”, CF3SO3— and the like.
  • an alkali solution is added to a solution of the block copolymer represented by the above formula (3) to form a block represented by the following formula (3). Part or all of R 3 'is eliminated from the copolymer.
  • the method for producing the block copolymer represented by the above formula (3) is not particularly limited, but as one method, for example, an acetal group at one terminal is used. PEG derivative having an amino group at the other end and blocking by polymerizing lysine N-carboxylic acid anhydride (NCA) protected with R 3 , using the amino terminus as an initiator A method for synthesizing a copolymer can be mentioned. '
  • examples of the alkaline solution to be used include sodium hydroxide solution, hydroxylated lithium solution, ammonia solution, hydrazine solution, Examples include triethylamine solution, sodium carbonate solution, and carbonated lithium solution.
  • the amount of the alkaline solution used is preferably an excess amount relative to the protecting group in the block copolymer represented by the above formula (3).
  • the reaction is preferably carried out in a temperature range of 0 ° C to 100 ° C, more preferably a temperature range of 20 ° C to 80 ° C, especially Preferably it is performed at 30 ° C to 70 ° C.
  • the pressure may be, for example, normal pressure.
  • the reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but it is usually 2 hours to 2 days.
  • the solvent is preferably a solvent capable of dissolving both the block copolymer represented by the above formula (3) and the alkyl group used.
  • a solvent an aliphatic or aromatic organic solvent, water, or a mixed solvent thereof is used, and a lower alcohol solvent such as methanol, acetonitrile, dioxane, or a mixed solvent thereof with water can be preferably used.
  • the second embodiment of the present invention comprises a conversion reaction that converts a part or all of the side chain benzyl ester of the block copolymer represented by the following formula (5) by aminolysis.
  • a method for producing a block copolymer represented by the following formula (4) or a salt thereof is provided. Conversion reaction
  • Ria, Rib, R 2 , R R5, L, 1, m, n and x are not particularly limited in the first embodiment of the present invention. This is the same as explained when Y — is the above formula (Y2).
  • preferably 85% or more of the total R 5 is an amine compound residue, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and particularly preferably 100%. Is an amine compound residue.
  • the produced block copolymer may form a salt thereof.
  • an amine compound (NH 2 — (CH 2 ) bX) is added to the block copolymer solution represented by the above formula (5) and stirred. Then, a part or all of the side chain benzyl ester of the block copolymer represented by the following formula (5) is converted by aminolysis d
  • the method for producing the block copolymer represented by the above formula (5) is not particularly limited, but one method is, for example, that an acetal group is present at one end.
  • N-force rubonic acid anhydride of polyaspartic acid and / or polyglutamic acid protected with benzyloxy group using the amino terminus as an initiator ) Is synthesized to synthesize a block copolymer.
  • the amount of the amine compound may be an excess amount with respect to the benzyl ester of the block copolymer represented by the above formula (5) unless otherwise specified.
  • 10 to 50 equivalents are usually used.
  • the reaction is preferably performed in a temperature range of 0 ° C to 80 ° C, more preferably in a temperature range of 30 ° C to 50 ° C. Is called.
  • the pressure may be normal pressure, for example.
  • the reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but it is usually 2 hours to 2 days.
  • the solvent is preferably a solvent that can dissolve both the block copolymer represented by the above formula (5) and the amine compound.
  • the solvent an aliphatic or aromatic organic solvent is used, and N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, tetrahydrofuran, dichloromethane, and black mouth form are preferably used. Further, it is preferable that the solvent used contains as little water as possible.
  • a pH region for example, 6 to 6
  • a modification in which a part or all of the side chain benzyl ester of the block copolymer represented by the following formula (7) is converted by aminolysis is converted by aminolysis.
  • R la , R lb , L, R 2 , R 4 , R 5, 1, m, n, x, y are the same as those in the first aspect of the present invention.
  • one Y— is the same as described above in the case of the formula (Y 3).
  • R 3 and R 3 ′ are the same as those described in the one aspect of the second embodiment of the present invention.
  • a total of R 3 preferably 85% or more is a hydrogen atom, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, particularly preferably 1 0 0% is a hydrogen atom.
  • the total of R 5 preferably 85% or more is an amine compound residue, more preferably 95% or more, more preferably 98% or more, particularly preferably 100% is an amine compound residue.
  • the produced block copolymer may form a salt thereof.
  • C is the counter ion that forms the salt, ⁇ ⁇ , (1Z2 S0 4 )-, N0 3- , (l / 2 C0 3 ) "(1/3 P0 4 )-, CH 3 CO O, CF 3 COO, CH 3 S0 3 —, CF 3 S 0 3 "and the like.
  • the block copolymer represented by the above formula (7) is first subjected to a conversion reaction by aminolysis, and then to a deprotection reaction.
  • the method for producing the block copolymer represented by the above formula (7) is not particularly limited, but as one method, for example, an acetal group is formed at one end.
  • NCA N-force rubonic acid anhydride
  • preferable conditions for the deprotection reaction are the same as those described above in the one aspect of the second embodiment of the present invention.
  • a pH region in which the acetal is not changed after the conversion reaction and deprotection reaction by aminolysis for example, It is preferable that all or a part of the amino group is made into a proton by dialysis in 6-8).
  • a peptide block copolymer having an uncharged segment and a segment derived from a polyamino acid, the terminal of the uncharged segment is a peptide having a weight average molecular weight of 50 to 20,000.
  • a peptide block copolymer, a ligand is provided.
  • the description of the uncharged segment and the segment derived from the polyamino acid is the same as that described in the first aspect of the present invention.
  • the peptide block copolymer is preferably represented by the following formula (8).
  • L, Y, R 2 , 1 and m are the same as those described in the first embodiment of the present invention.
  • A represents a peptide ligand.
  • the peptide ligand has a weight average molecular weight of 50 to 20 and 0 0, preferably 1 0 to 1 0 and 0 0 0, more preferably 1 5 0 to 3 and 0 0 0 preferable.
  • A is preferably a peptide having 1 to 200 amino acid residues, and preferably a peptide having 1 to 100 amino acid residues. More preferably, the peptide has 1 to 30 amino acid residues.
  • A specifically binds to an integrin involved in angiogenesis, intimal thickening, and malignant tumor growth from the point of view of specifically recognizing a diseased cell.
  • A is a peptide (L 1 A rg -G 1 y -LA sp—D—Pe—L—L ys) -Z [wherein Z is an arbitrary Represents an amino acid residue. It is more preferable that it is what is shown by these.
  • an arbitrary amino acid residue a natural amino acid and an unnatural amino acid can be mentioned.
  • a polymer having an acetal terminal and a peptide having a cysteine terminal are mixed in an acidic solution without previously converting the acetal into aldehyde.
  • a method for introducing a peptide ligand into a peptide is provided.
  • the polymer having an acetal end may be polyethylene glycol or a derivative thereof, and the high molecule having an acetal end may be a polycation, or has an acetal end.
  • the polymer may be a block copolymer or a graft copolymer of polyethylene dallicol and polycation, and the polymer having an acetal end is polyethylene glycol, polyamino acid or a derivative thereof, or their It may be a block copolymer or a graft copolymer with a salt.
  • An example of the method for introducing a peptide ligand according to the fourth aspect of the present invention is a method for producing a peptide block copolymer according to the fifth aspect of the present invention. That is, in the fifth aspect of the present invention, a method for producing a peptide block copolymer represented by the following formula (8), which comprises a block copolymer represented by the following formula (1) and the following formula (9): A method for producing a peptide block copolymer is provided, which comprises reacting the peptide with : CH (CH 2 ),
  • R la , R lb , L, Y, R 2 , 1 and m are the same as those described in the first embodiment of the present invention.
  • a solution of the peptide represented by the above formula (9) is added to the block copolymer represented by the above formula (1) and reacted.
  • the amount of the peptide represented by the above formula (9) used is preferably 1 to 30 times equivalent to the block copolymer represented by the above formula (1), It is more preferably 3 to 20 times equivalent, and even more preferably 7 to 10 times equivalent.
  • the reaction is preferably performed in a temperature range of 10 ° C to 50 ° C, more preferably 15 ° (: to a temperature range of 35 ° C, particularly preferably room temperature.
  • the pressure is preferably normal pressure, for example.
  • the reaction time is preferably 3 hours to 10 days, more preferably 3 days to 7 days, and particularly preferably about 6 days.
  • an acidic buffer solution is preferred as the solvent used as the solution of the peptide represented by the formula (9).
  • Solvent is pH 3.0-p
  • An acetate buffer solution of H 6.0 is used, and an acetate buffer solution of pH 4.0 is preferable.
  • a peptide block copolymer according to the third aspect of the present invention, or a peptide block copolymer obtained by the method according to the fifth aspect of the present invention, and a nucleic acid or a charged protein A polyion complex comprising:
  • the nucleic acid is selected from the group consisting of a gene used for gene therapy, a gene encoding a protein, a DNA fragment, an RNA fragment, an antisense DNA, and a double-stranded oligonucleic acid. It is preferable that
  • the polyion complex has a form of a polymer micelle having a core portion and a shell portion, and the core portion encloses a nucleic acid or a charged protein, and the shell portion includes
  • the polyion complex is preferably characterized in that the polyethylene glycol segment in the peptide block copolymer is mainly present, and the peptide ligand is present in the vicinity of the surface layer of the polymer micelle.
  • the mixing ratio of the nucleic acid and the peptide block copolymer is represented by the ratio (N / P ratio) between the phosphate group in the nucleic acid molecule and the cation in the peptide block copolymer. be able to.
  • the N / P ratio is an amount defined by the following formula. Unless otherwise noted, the N / P ratio refers to this amount.
  • N / P ratio [total number of cations in peptide block copolymer in solution]
  • the N / P ratio is not limited as long as a polyion complex can be formed, and varies depending on the properties of the non-charged segment or the polyamino acid-derived segment contained in the block copolymer.
  • N / P ratio in the sixth embodiment of the present invention can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • a peptide block copolymer according to the third aspect of the present invention or a peptide block copolymer obtained by the method according to the fifth aspect of the present invention, and a drug or fine particles.
  • a composite is provided, characterized in that it comprises.
  • examples of the drug include adriamycin, daunomycin, cisplatin, carpoplatin, methotrexate, mitomycin 0, taxol, camptothecin, retinoic acid and other anticancer agents, antiviral agents, and anti-inflammatory agents. Can be mentioned.
  • examples of the fine particles include inorganic fine particles such as silica, metal fine particles such as gold colloid and iron colloid, and organic and polymer fine particles such as dendrimer and gel.
  • the composite has a form of a polymer micelle having a core part and a shell part, and the core part encloses a drug or fine particles, and a peptide is contained in the shell part. It is preferably a complex characterized in that the polyethylene glycol segment in the block copolymer is mainly present and a peptide ligand is present in the vicinity of the surface layer of the polymer micelle.
  • the polyion complex or complex is obtained by mixing a peptide block copolymer and a nucleic acid, a charged protein, a drug, or a fine particle in an appropriate solution. can get. Furthermore, operations such as dialysis, agitation, dilution, concentration, sonication, temperature control, pH control, ionic strength control, and addition of organic solvent can be added as appropriate. In addition, nucleic acids used, charged proteins If the quality, drug, or microparticles, and the polyion complex or complex containing them are stable under acidic conditions, a block copolymer at the end of the acetal is used to form a polyion complex or complex. It is also possible to conduct a ligand introduction reaction after the reaction.
  • a pharmaceutical composition comprising the polyion complex according to the sixth aspect of the present invention or the complex according to the seventh aspect of the present invention.
  • the pharmaceutical composition according to the eighth aspect of the present invention contains the polyion complex complex complex obtained as described above, it can be used as a pharmaceutical composition for treatment and diagnosis.
  • a person skilled in the art can appropriately set the amounts of the nucleic acid, the charged tank, the drug, and the fine particles contained in the pharmaceutical composition according to the eighth aspect of the present invention.
  • the dosage form include injection, and in addition to systemic administration such as normal intravenous and intraarterial administration, it can be locally administered into muscles, joints, subcutaneous, intracutaneous and the like. It is also possible to adopt a dosage form using a catheter. In this case, it may be a powder which is usually provided in the form of a unit dose ampoule or a multi-dose container and redissolved in a suitable carrier, for example, pyrogen-free sterilized water. In addition, these dosage forms may contain additives generally used in pharmaceutical preparations.
  • the dosage, dosage form, and administration schedule can be arbitrarily set according to the purpose.
  • the present invention will be described more specifically with reference to examples. However, the present invention is not limited to the examples.
  • NMR spectrum was measured using JEOL EX300. Measurement conditions are as follows. 'Acetal-PEG-PLL (TFA): Solvent DMSO_d6, 80 ° C Acetal-PEG-PLL Solvent D 2 0, 80 ° C
  • Acetanore-PEG-PLL (TFA) 500 mg was dissolved in 40 mL of methanol, 4 mL of 1N sodium hydroxide solution was added, and the mixture was reacted at 40 ° C. for 1 day. Place the reaction solution in a dialysis tube with a molecular weight cut off of 12,000, dialyz with 150 mM NaCl-pH 7.4 phosphate buffer solution as the external solution, collect the dialysis membrane solution, freeze-dry it, and acetal-PEG-PLL 498 mg was obtained as a white solid. iH-NMR data are shown in FIG.
  • the complex of the mouthpiece (RGDfK)-PEG-PLL and the plasmid DNA (pDNA) encoding the luciferase gene is the same as the N / P ratio of cyclo (RGDfK)-PEG-PLL solution and pDNA solution the day before transfection.
  • the mixture was mixed and left at rest for a while.
  • a PEG-PLL and pDNA complex was prepared in the same manner.
  • the N / P ratio here is defined by the following equation.
  • N / P ratio [total number of cations in the block copolymer in solution]
  • the HeLa cells can be squeezed at any time.
  • FITC-labeled antibody v A FITC-labeled antibody (hereinafter referred to as “FITC-labeled antibody v” 33J, respectively) in which antibodies against each of the vj33 integrin, avi35 integrin and mouse IgG were labeled with FITC in advance (manufactured by Cosmo Bio Inc.) “FITC labeled ⁇ 5” and “FITC labeled IgG”) were prepared.
  • HeLa cells were detached by trypsinization and washed twice with PBS solution.
  • HeLa 106 cells after washing the 2 g of FITC Hyoshikyi ⁇ alpha v] 33, were suspended in DMEM medium Loo / ⁇ L, and allowed to stand for one hour on ice in the dark. The cells were then washed 3 times with chilled DMEM medium and collected, and the number of receptor 3 integrins distributed on the cell surface was measured and evaluated using a flow cytometer.
  • the peptide block copolymer of the present invention since a carrier function for recognizing a specific cell is mounted on the carrier, the retention time at the target site of the carrier is extended, and the uptake of the specific cell is promoted. Is possible.

Abstract

Disclosed is a drug carrier having a target-directive property, specifically a gene carrier. A peptide block copolymer having an uncharged segment and a segment derived from a polyamino acid, the uncharged segment having a terminal end comprising a peptide ligand having a weight average molecular weight of 50 to 20,000.

Description

明 細 書 ぺプチドリガンドを有するブロック共重合体 技術分野  Description Block copolymer having peptide ligand Technical Field
本発明は、 治療又は診断を目的としたドラッグデリバリーシステム、 特に遺伝 子治療を目的とした遺伝子デリバリーシステムのキヤリア一として有用に使用さ れるペプチドブロック共重合体に関し、 より詳しくは、 キャリアーへ標的指向性 を付与する、 ぺプチドリガンドを有するプロック共重合体およびその製造方法に 関する。 . 背景技術  The present invention relates to a peptide block copolymer usefully used as a carrier of a drug delivery system for the purpose of therapy or diagnosis, particularly a gene delivery system for the purpose of gene therapy, and more specifically, targeting to a carrier. The present invention relates to a block copolymer having a peptide ligand that imparts properties and a method for producing the same. Background technology
ドラッグデリバリ一システムにおいて、 目的とする部位又は細胞への標的指向 性を付与することは、 治療効果の増強、 副作用の低減、 診断精度の向上等様々な 面で重要である。 遺伝子治療を目的とした遺伝子デリバリーシステムについては、 近年遺伝子ベクターとして使用されてきたウィルスベクターの相次ぐ事故により その安全性が危惧されており、 安^:性を具備した非ウィルスベクターの創製が期 待されている。 しかしながら現状では、 非ウィルス性遺伝子デリバリーシステム は低い遺伝子導入効率などの問題を抱えており、 臨床上必要となる遺伝子発現レ ベルに達するためにはさらなる性能の改善が必要となってくる。 そのために様々 な角度からのアプローチがなされているが、 その中の一つとして、 抗体、 リガン ド等の目的とする細胞と特異的親和性を有する分子をベクターに導入し、 細胞に よる遺伝子の取り込み量を増大させるという検討がなされている。  In a drug delivery system, imparting target directivity to a target site or cell is important in various aspects such as enhancing therapeutic effects, reducing side effects, and improving diagnostic accuracy. The safety of gene delivery systems for gene therapy has been feared due to the successive accidents of viral vectors that have been used as gene vectors in recent years, and the creation of non-viral vectors with safety features is expected. Has been. At present, however, non-viral gene delivery systems have problems such as low gene transfer efficiency, and further performance improvements are necessary to reach the clinically required gene expression level. To this end, approaches from various angles have been made. One of them is the introduction of molecules having specific affinity with the target cells, such as antibodies and ligands, into the vector, and the gene expression by the cells. Studies have been made to increase the amount of uptake.
本発明者のグループは、 ポリエチレングリコール （以下、 P E Gともレヽう。 ) 一ポリカチオンブロック共重合体が、 種々の核酸類と静電的な相互作用によりポ リイオンコンプレックス （以下、 P I Cともいう。 ） ミセルを形成し、 遺伝子キ ャリア一として有用であることを報告している （K. Kakizawa, K. Kataoka, Block copolymer micelles lor delivery of gene and related compounds, The present inventor's group is that polyethylene glycol (hereinafter also referred to as PEG) monopolycation block copolymer is polymerized by electrostatic interaction with various nucleic acids. Reion complex (hereinafter also referred to as PIC) has been reported to form micelles and be useful as a gene carrier (K. Kakizawa, K. Kataoka, Block copolymer micelles lor delivery of gene and related compounds,
Advanced Drug Delivery Reviews, 54 (2002) 203—222.) 。 この P I Cミセルに 標的指向性を付与するには、 P E Gの末端にリガンド等の標的分子を結合すれば よい。 例えば、 ポリエチレングリコール一ポリ (ジメチルァミノェチルメタクリ レート） （以下、 ？£ 0—？ ^ ともぃぅ。 ） ブロック共重合体の P E Gの末 端にラクトースリガンドを導入した系を報告している （D. Wakebayashi, N. Nishiyama, Y. Yamasaki, K. Itaka, N. Kanayama, A. Harada, Y. Nagasaki, K. Kataoka, Lactose-conjugated polyion complex micelles incorporating plasmid DNA as a targetable gene vector system: their preparation and gene Advanced Drug Delivery Reviews, 54 (2002) 203-222.). In order to confer the target directivity to the P IC micelle, a target molecule such as a ligand may be bound to the end of PEGG. For example, polyethylene glycol monopoly (dimethylaminoethyl methacrylate) (hereinafter referred to as “£ 0—? ^ Tomii”) A system in which a lactose ligand is introduced at the end of PEG of a block copolymer has been reported. (D. Wakebayashi, N. Nishiyama, Y. Yamasaki, K. Itaka, N. Kanayama, A. Harada, Y. Nagasaki, K. Kataoka, Lactose-conjugated polyion complex micelles incorporating plasmid DNA as a targetable gene vector system: their preparation and gene
transfecting efficiency against cultured HepG2 cells, J. Control. Rel" 95 transfecting efficiency against cultured HepG2 cells, J. Control. Rel "95
(2004) 653-664.) 。 (2004) 653-664.).
反応としては、 P E Gの末端のァセタールを酸処理によりアルデヒドに変換し、 末端にアミノ基を有するラクトース誘導体と混合し、 シッフ塩基を形成させ、 そ れを還元するという方法を取っている。 しかしながら、 これは P AMAの側鎖が 三級ァミンであるがゆえにできる反応であり、 ポリリジン等の一級アミンを有す る系では、 アルデヒドと反応してしまうため適用できない。 必然的にポリリジン を用いる場合にはァミノ基が保護された状態で先にリガンドを結合させることに なるが、 その後脱保護をする際に酸またはアルカリを用いると、 ペプチドリガン ドの場合は失活する危険性が高い。 さらに、 P E Gの末端をアルデヒドに変換す ると、 アルドール縮合により二量化が起こる場合もあり、 リガンドの定量的な導 入が困難となること、 シッフ塩基形成は可逆的な平衡反応なので、 還元しなけれ ば安定な結合を形成できず、 反応操作が煩雑になること等の問題もある。 結局、 従来の方法では、 様々な構造のポリマーに対し、 様々なリガンドを導入する方法 として適用するには限界があった。 発明の開示 As the reaction, a method is used in which the acetal at the end of PEG is converted to an aldehyde by acid treatment, mixed with a lactose derivative having an amino group at the end to form a Schiff base, and then reduced. However, this is a reaction that can be performed because the side chain of PAMA is a tertiary amine, and in a system having a primary amine such as polylysine, it cannot be applied because it reacts with an aldehyde. When polylysine is inevitably used, the ligand is first bound in a state where the amino group is protected. However, if acid or alkali is used after deprotection, the peptide ligand is inactivated. There is a high risk of Furthermore, if the PEG end is converted to an aldehyde, dimerization may occur due to aldol condensation, which makes it difficult to quantitatively introduce the ligand, and Schiff base formation is a reversible equilibrium reaction. Otherwise, there is a problem that a stable bond cannot be formed and the reaction operation becomes complicated. After all, The conventional method has a limit to the application of various ligands to polymers with various structures. Disclosure of the invention
本発明が解決しようとする課題は、 標的指向性が付与されたドラッグキャリア 一、 特に遺伝子キャリアーの提供を目的とし、 簡便な操作でペプチドリガンドを 導入し、 且つ、 副反応や失活を極力起こさない方法を提供することにある。  The problem to be solved by the present invention is to provide a drug carrier imparted with a target directivity, particularly a gene carrier, introduce a peptide ligand by a simple operation, and cause side reactions and inactivation as much as possible. There is no way to provide a way.
本発明者らは、 上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、 特定の細胞を 認識する標的機能を有するリガンドを、 プロック共重合体の末端に簡便な操作で 導入することに成功し、 さらに、 そのリガンドに対するレセプターを有する細胞 への遺伝子導入実験において、 遺伝子発現が大幅に向上することを見出し、 本発 明を完成するに至った。  As a result of earnest research to solve the above problems, the present inventors succeeded in introducing a ligand having a target function for recognizing a specific cell to the end of the block copolymer by a simple operation, Furthermore, in gene transfer experiments into cells having a receptor for the ligand, it was found that gene expression was greatly improved, and the present invention was completed.
詳しくは、 本発明者らは、 ブロック共重合体の非荷電性セグメントの末 のァ セタール基を保持したまま、 ポリアミノ酸由来のセグメントを脱保護もしくは誘 導体化によりキャリア一として使用できる形にまず変換し、 続いて、 そのブロッ ク共重合体とシスティン末端を有するぺプチドとを酸性溶液中で混合し、 ァセタ ール基のアルデヒド基への変換とリガンドの結合を同時進行的に行うことにより、 アルドール縮合等の副反応を抑制できることを見出し、 また、 酸性条件において は、 ポリアミノ酸由来のセグメントに一級ァミンが存在していてもプロトンィ匕し ているのでアルデヒドとは反応せず、 さらにアルデヒドとシスティンの反応は不 可逆的であり、 還元等の操作を行うことなく安定な結合が得られることを見出し て、 本発明を完成させた。  Specifically, the present inventors firstly made a polyamino acid-derived segment as a carrier by deprotection or derivatization while retaining the acetal group at the end of the uncharged segment of the block copolymer. Next, the block copolymer and the peptide having a cysteine end are mixed in an acidic solution, and the conversion of the acetyl group to the aldehyde group and the binding of the ligand are carried out simultaneously. It has been found that side reactions such as aldol condensation can be suppressed, and under acidic conditions, even if primary amines are present in the polyamino acid-derived segment, they are protonated and do not react with aldehydes. The cysteine reaction is irreversible, and we found that a stable bond can be obtained without performing reduction or other operations. The present invention has been completed.
すなわち、 本発明の第 1態様では、 非荷電性セグメントと、 ポリアミノ酸由来 のセグメントとを有するプロック共重合体であって、 非荷電性セグメントの末端 がァセタール基である、 ブロック共重合体が提供される。 本発明の第 1態様において、 非荷電性セグメントはポリエチレンダリコール又 はその誘導体であることが好ましい。 また、 ポリアミノ酸由来のセグメントはポ リカチオンであることが好ましく、 ポリ リジン、 ポリリジン誘導体、 ポリアスパ ラギン酸誘導体、 ポリグルタミン酸誘導体、 及び、 それらの塩からなる群より選 ばれる 1種以上を含むか、 あるいは、 ポリアミノ酸由来のセグメントは、 ポリ リ ジン、 ポリリジン誘導体、 及び、 それらの塩からなる群より選ばれる 1種と、 ポ リアスパラギン酸誘導体、 ポリグルタミン酸誘導体、 及び、 それらの塩からなる 群より選ばれる 1種以上とを含むことがより好ましい。 That is, according to the first aspect of the present invention, there is provided a block copolymer having an uncharged segment and a polyamino acid-derived segment, wherein the terminal end of the uncharged segment is an acetal group. Is done. In the first embodiment of the present invention, the uncharged segment is preferably polyethylene dalycol or a derivative thereof. The polyamino acid-derived segment is preferably a polycation, and includes one or more selected from the group consisting of polylysine, polylysine derivatives, polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof, or The polyamino acid-derived segment is selected from the group consisting of polylysine, polylysine derivatives, and salts thereof, and the group consisting of polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof It is more preferable that one or more of these be included.
本発明の第 1態様において、 ブロック共重合体は下記式 （1 ) で示されるもの であることが好ましい。
Figure imgf000006_0001
In the first embodiment of the present invention, the block copolymer is preferably represented by the following formula (1).
Figure imgf000006_0001
[式中、 R ia及ぴ R ibは、 それぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 置換 基を有していてもよい C i〜C 10アルキル基であり、 Lは連結基を表し、 Yは、 ポ リアミノ酸由来のセグメントを表し、 R2は水素原子、 保護基、 疎水性基または 重合性基を表し、 1は 1〜5の整数であり、 mは 5〜2 0， 0 0 0の整数である。 本発明の第 1態様において、 前記'式 （1 ) 中、 Rla及ぴ R lbは、 それぞれ、 互 いに独立し、 同一または異なって、 メチル基またはェチル基であることが好まし い。 また、 前記式 （1 ) 中、 一L一が、 一 （C H2) a- N H - [式中、 aは:！〜 5の整数である。 ] で示されるものであることが好ましい。 [In the formula, R ia and R ib are each independently the same or different, and may be a C i to C 10 alkyl group which may have a substituent, L represents a linking group, Y Represents a segment derived from polyamino acid, R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, 1 is an integer of 1 to 5, and m is 5 to 20 or 0 0 0 Is an integer. In the first embodiment of the present invention, in the formula (1), R la and R lb are preferably independent of each other and the same or different and each is a methyl group or an ethyl group. In the above formula (1), one L and one are one (CH 2 ) a- NH-[where a is :! It is an integer of ~ 5. It is preferable that it is what is shown by these.
本発明の第 1態様において、 前記式 （1 ) 中、 R2が、 水素原子またはァセチ ル基であることが好ましい。 また、 前記式 （1 ) 中、 1が 2であることが好まし い„ 本発明の第 1態様において、 前記式 （1) 中、 一Y—は、 下記式 （Y 1) また はその塩で示されるものであってもよい。 一
Figure imgf000007_0001
In the first embodiment of the present invention, in the formula (1), R 2 is preferably a hydrogen atom or an acetyl group. In the formula (1), 1 is preferably 2. In the first embodiment of the present invention, in the formula (1), one Y— may be represented by the following formula (Y 1) or a salt thereof. one
Figure imgf000007_0001
[式中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基であり、 但し、 少なくとも 1つは水素原子であり、 ここで保護基とは、 ァミノ基の保護基の中で 酸性条件にすることなく脱保護できるものであり、 ηは 2〜5, 000の整数で ある。 ] [In the formula, R3, independently of each other, is a hydrogen atom or a protecting group, provided that at least one is a hydrogen atom, wherein the protecting group is an acidic group within the protecting group of the amino group. And η is an integer from 2 to 5,000. ]
本発明の第 1態様において、 前記式 （1) 中、 一 Υ—は、 下記式 （Υ2) また はそれらの塩で示されるものであってもよレ、。  In the first embodiment of the present invention, in the formula (1), 1Υ- may be represented by the following formula (Υ2) or a salt thereof.
Figure imgf000007_0002
Figure imgf000007_0002
[式中、 R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基であり、 [Wherein R4, independently of each other, is a methylene group or an ethylene group,
R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 アミン化 合物残基であり、 伹し、 R5の少なくとも 1っはァミン化合物残基であり、 nは 2〜5, 000の整数であり、 Xは 0〜5,. 000の整数であるが、 nより大き くないものとする。 ] 本発明の第 1態様において、 前記式 （1 ) 中、 一 Y—は、 下記式 （Y 3 ) また はそれらの塩で示されるものであってもよい。 R 5 s , independently of each other, are a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, wherein at least one of R 5 is an amine compound residue, and n is 2 to 5,000. X is an integer between 0 and 5, 000, but not greater than n. ] In the first embodiment of the present invention, in the formula (1), one Y— may be represented by the following formula (Y 3) or a salt thereof.
― -
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000008_0001
[式中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基であり、 ここで 保護基とは、 ァミノ基の保護基の中で酸性条件にすることなく脱保護できるもの であり、 R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基であり、 R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 アミン化 合物残基であり、 但し、 R3の少なくとも 1つは水素原子であるか、 R5の少なく とも 1っはァミン化合物残基であるか、 又はその両方であり、 nは 2〜5， 0 0 0の整数であり、 Xは 0〜4 , 9 9 9の整数であり、 yは:！〜 4， 9 9 9の整数 であり、 伹し、 yは nよりも小さく、 x + yは nより大きくないものとする。 ] 本発明の第 2態様の一側面では、 下記式 （3 ) で示されるブロック共重合体か ら R3'の一部または全部を脱離させる脱保護反応を含むことを特徴とする、 [In the formula, each R 3 independently of one another is a hydrogen atom or a protecting group, wherein the protecting group is a protecting group of an amino group that can be deprotected without acidic conditions, R 4 is each independently a methylene group or ethylene group, and R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, provided that at least R 3 One is a hydrogen atom, at least one of R 5 is an amine compound residue, or both, n is an integer from 2 to 5, 00, and X is 0 to 4 , 9 9 is an integer of 9 and y is :! It is an integer of ~ 4, 9 9 9, and it is assumed that y is smaller than n and x + y is not larger than n. In one aspect of the second embodiment of the present invention, the method includes a deprotection reaction in which part or all of R 3 ′ is eliminated from the block copolymer represented by the following formula (3):
n一 R2
Figure imgf000008_0002
[式中、 R la及ぴ R ibは、 それぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 置換 基を有していてもよい C i~ C 10アルキル基であり、 Lは連結基を表し、 R2は水 素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R3'は、 酸性条件にすること なく脱保護できる保護基であり、 1は 1〜5の整数であり、 mは 5〜20, 00 0の整数であり、 nは 2〜5， 000の整数である。 ] n one R 2
Figure imgf000008_0002
[Wherein, R la and R ib are each independently the same or different, and may be a C i to C 10 alkyl group which may have a substituent, L represents a linking group, R 2 is water Represents an elementary atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, R 3 ′ is a protecting group that can be deprotected without being subjected to acidic conditions, 1 is an integer of 1 to 5, and m is 5 to 20 , 00 0 and n is an integer from 2 to 5,000. ]
下記式 （2) またはその塩で示されるブロック共重合体を製造する方法が提供 される。 n-R2 (2)
Figure imgf000009_0001
A method for producing a block copolymer represented by the following formula (2) or a salt thereof is provided. nR 2 (2)
Figure imgf000009_0001
[式中、 Ria、 Rib、 L、 R2、 1、 m、 nは上記の意味を有する。 R3は、 それ ぞれ互いに独立して、 水素原子又は R3'と同じ保護基であり、 但し、 R3の少なく とも 1つは水素原子である。 ] [Wherein Ria, Rib, L, R2, 1, m, n have the above-mentioned meanings. R3 is their respective independently of one another, are the same protecting group with a hydrogen atom or R 3 ', provided that one at least of the R 3 is a hydrogen atom. ]
本発明の第 2態様の他の側面では、 下記式 （5) で示されるプロック共重合体 の側鎖べンジルエステルの一部または全部をァミノリシスにより変換する変換反 応を含むことを特徴とする、  In another aspect of the second embodiment of the present invention, it includes a conversion reaction that converts a part or all of the side chain benzyl ester of the block copolymer represented by the following formula (5) by aminolysis.
n一 R2 (5) n one R2 (5)
Figure imgf000009_0002
[式中、 Rla及び Ribは、 それぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 置換 基を有していてもよい Ci〜Ci0アルキル基であり、 Lは、 連結基を表し、 R2は、 水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R4は、 それぞれ互いに独 立して、 メチレン基またはエチレン基を表し、 1は 1〜5の整数であり、 mは 5 〜20， 000の整数であり、
Figure imgf000009_0002
[Wherein, Rla and Rib are each independently the same or different, and may be a Ci to Ci 0 alkyl group which may have a substituent, L represents a linking group, and R 2 represents Each represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group; R 4 independently represents a methylene group or an ethylene group; 1 is an integer of 1 to 5; m is 5 to 20 , 000, and
nは 2〜5， 000の整数である。 ]  n is an integer from 2 to 5,000. ]
下記式 （4) またはそれらの塩で示されるブロック共重合体を製造する方法が 提供される。 η_χ - ( COR4 CH H) χ - R2 (4)
Figure imgf000010_0001
[式中、 Rla、 Rlb、 L、 R2、 R4、 1、 m、 nは上記の意味を有する。 R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 ァミン化合物残基 であり、 但し、 R5の少なくとも 1っはァミン化合物残基であり、 Xは 0〜5, 0 00の整数であるが、 nより大きくないものとする。 ] A method for producing a block copolymer represented by the following formula (4) or a salt thereof is provided. η_ χ - (COR 4 CH H ) χ - R 2 (4)
Figure imgf000010_0001
[Wherein R la , R lb , L, R 2, R 4, 1, m and n have the above-mentioned meanings. R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, provided that at least one of R 5 is an amine compound residue, and X is an integer of 0 to 5,000 , But not greater than n. ]
本発明の第 2態様のその他の側面では、 下記式 （7) で示されるプロック共重 合体の側鎖べンジルエステルの一部または全部をァミノリシスにより変換する変 換反応と、 R 3'の一部または全部を脱離させる脱保護反応とを含むことを特徴と する、 ( 7) In another aspect of the second embodiment of the present invention, a conversion reaction in which part or all of the side chain benzyl ester of the block copolymer represented by the following formula (7) is converted by aminolysis, and a part of R 3 ′ Or a deprotection reaction that eliminates the whole, (7)
Figure imgf000011_0001
Figure imgf000011_0001
[式中、 R la及び R lbは、 それぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 置換 基を有していてもよい C i〜C ioアルキル基であり、 Lは連結基を表し、 R2は、 水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R3'は、 酸性条件にするこ となく脱保護できる保護基であり、 R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン 基またはエチレン基であり、 1は 1〜5の整数であり、 mは 5〜2 0， 0 0 0の 整数であり、 nは 2〜5， 0 0 0の整数であり、 yは 1〜4， 9 9 9の整数であ り、 伹し、 nよりも小さレヽ。 ] ' [Wherein, R la and R lb are each independently the same or different and each may be a Ci to C io alkyl group which may have a substituent, L represents a linking group, R 2 Represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, R 3 ′ is a protecting group that can be deprotected without being subjected to acidic conditions, and R 4 s are each independently a methylene group Or an ethylene group, 1 is an integer of 1 to 5, m is an integer of 5 to 20 and 0 0 0, n is an integer of 2 to 5 and 0 0 0, and y is 1 to 4 , 9 9 An integer of 9 9 and smaller than n. ] '
下記式 （6 ) またはそれらの塩で示されるブロック共重合体を製造する方法が 提供される。 „一 R2 ( 6)
Figure imgf000011_0002
A method for producing a block copolymer represented by the following formula (6) or a salt thereof is provided. „One R 2 (6)
Figure imgf000011_0002
[式中、 Ria、 Rib、 L、 R 2、 R 4、 1、 m、 n、 yは上記の意味を有する。 R 3 は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は R3'と同じ保護基であり、 R5は、 そ れぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、'又は、 ァミン化合物残基で あり、 但し、 R3の少なくとも 1つは水素原子であるか、 R5の少なくとも 1つは ァミン化合物残基であるか、 またはその両方であり、 Xは 0〜4， 9 9 9の整数 であり、 但し、 x + yは nより大きくないものとする。 ] [Wherein Ria, Rib, L , R2, R4, 1, m , n, y have the above meanings. R 3 is each independently a hydrogen atom or the same protecting group as R 3 ', and R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group,' or an amine compound residue. However, at least one of R 3 is a hydrogen atom, or at least one of R 5 is It is an amine compound residue or both, and X is an integer from 0 to 4,999, provided that x + y is not greater than n. ]
本発明の第 2態様の一側面およびその他の側面において、 R3，はトリフルォロ ァセチル基であることが好ましい。 In one aspect and the other aspect of the second embodiment of the present invention, R 3 is preferably a trifluoroacetyl group.
本発明の第 2態様の他の側面およびその他の側面において、 R4はメチレン基 であることが好ましい。 In another aspect and the other aspect of the second embodiment of the present invention, R 4 is preferably a methylene group.
本発明の第 2態様において、 変換反応、 及び/又は、 脱保護反応の後、 ァセタ ールを変化させない p H領域において透析を行うことにより、 ァミノ基のすべて 又は一部をプロ トン化させることが好ましい。  In the second embodiment of the present invention, after the conversion reaction and / or the deprotection reaction, all or a part of the amino group is made into a proton by performing dialysis in the pH region that does not change the acetal. Is preferred.
本発明の第 2態様において、 R la及び R ibは、 それぞれ、 互いに独立し、 同一 または異なって、 メチル基またはェチル基であることが好ましい。 また、 一 L一 は、 一 （C H2) a- N H - [式中、 aは 1〜5の整数である。 ] で示されるもの であることが好ましい。 また、 R2は、 水素原子またはァセチル基であることが 好ましい。 また、 1が 2であることが好ましい。 In the second embodiment of the present invention, R la and R ib are each independently the same or different and are preferably a methyl group or an ethyl group. In addition, 1 L 1 is 1 (CH 2 ) a- NH-[wherein, a is an integer of 1 to 5. It is preferable that it is what is shown by these. R 2 is preferably a hydrogen atom or a acetyl group. Further, 1 is preferably 2.
本発明の第 3態様では、 非荷電性セグメントと、 ポリアミノ酸由来のセグメン トとを有するぺプチドブロック共重合体であって、 非荷電性セグメントの末端が 重量平均分子量 5 0〜2 0， 0 0 0のぺプチドリガンドである、 ぺプチドプロッ ク共重合体が提供される。  In the third aspect of the present invention, a peptide block copolymer having an uncharged segment and a segment derived from a polyamino acid, wherein the end of the uncharged segment has a weight average molecular weight of 50 to 20, Peptide block copolymers, which are 0 peptide ligands, are provided.
本発明の第 3態様において、 非荷電性セグメントはポリエチレンダリコールま たはその誘導体であることが好ましい。  In the third embodiment of the present invention, the uncharged segment is preferably polyethylene dalycol or a derivative thereof.
本発明の第 3態様において、 ポリアミノ酸由来のセグメントは、 ポリリジン、 ポリリジン誘導体、 ポリアスパラギン酸誘導体、 ポリグルタミン酸誘導体、 及び、 それらの塩からなる群より選ばれる 1種以上を含むか、 あるいは、 ポリアミノ酸 由来のセグメントは、 ポリリジン、 ポリリジン誘導体、 及ぴ、 それらの塩からな る群より選ばれる 1種と、 ポリアスパラギン酸誘導体、 ポリグルタミン酸誘導体、 及び、 それらの塩からなる群より選ばれる 1種以上とを含むことが好ましい。 本発明の第 3態様において、 ペプチドブロック共重合体は下記式 （8) で示さ れるものであることが好ましい。 In the third embodiment of the present invention, the polyamino acid-derived segment contains one or more selected from the group consisting of polylysine, polylysine derivatives, polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof, or Amino acid-derived segments consist of polylysine, polylysine derivatives, and their salts. And at least one selected from the group consisting of polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof. In the third embodiment of the present invention, the peptide block copolymer is preferably represented by the following formula (8).
Figure imgf000013_0001
Figure imgf000013_0001
[式中、 Aは、 ペプチドリガンドを表し、 Lは、 連結基を表し、 Yは、. ポリアミ ノ酸由来のセグメントを表し、 R2は、 水素原子、保護基、 疎水性基又は重合性基 を表し、 1は、 1〜5の整数であり、 mは、 5〜20, 000の整数である。 ] 本発明の第 3態様において、 Aは、 1個〜 200個のアミノ酸残基を有するぺ プチドであることが好ましく、 Aは、 インテグリンと特異的に結合することがで きるペプチドであることがより好ましく、 Aは、 シクロ （L- Ar g-G 1 y- L- A s p-D-P h e-L-L y s ) - Z [式中、 Zは、 任意にアミノ酸残基を表す。 ] で示されるものであることがさらに好ましい。 [Wherein, A represents a peptide ligand, L represents a linking group, Y represents a segment derived from polyamino acid, R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group. 1 is an integer from 1 to 5, and m is an integer from 5 to 20,000. In the third embodiment of the present invention, A is preferably a peptide having 1 to 200 amino acid residues, and A is a peptide capable of specifically binding to integrin. More preferably, A is cyclo (L-ArgG1y-L-AspDPheLLys) -Z [wherein Z represents an amino acid residue. It is more preferable that it is what is shown by these.
本発明の第 3態様において、 前記式 （8) 中、 一 L—は、 一 （CH2) a-NH - [式中、 aは 1〜5の整数である。 ] で示されるものであることが好ましい。 また、 前記式 （8) 中、 R2は、 水素原子またはァセチル基であることが好まし い。 また、 前記式 （8) 中、 1は 2であることが好ましい。 In the third embodiment of the present invention, in the formula (8), 1 L— is 1 (CH 2 ) a-NH 2 [wherein a is an integer of 1 to 5. It is preferable that it is what is shown by these. In the formula (8), R 2 is preferably a hydrogen atom or a acetyl group. In the formula (8), 1 is preferably 2.
本発明の第 3態様において、 前記式 （8) 中、 — Y—は、 下記式 （Y 1) で示 されるものであってもよレ、。 一
Figure imgf000014_0001
In the third aspect of the present invention, in the formula (8), —Y— may be represented by the following formula (Y 1). one
Figure imgf000014_0001
[式中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基であり、 伹し、 少なくとも 1つは水素原子であり、 ここで保護基とはァミノ基の保護基の中で酸 性条件にすることなく脱保護できるものであり、 nは 2〜5, 000の整数であ る。 ] . [Wherein, R3, independently of each other, are a hydrogen atom or a protecting group, and at least one is a hydrogen atom, wherein the protecting group is an acidic condition among the protecting groups of the amino group. N is an integer from 2 to 5,000. ].
本発明の第 3態様において、 前記式 （8) 中、 一 Y—は、 下記式 （Y2) で示 さ; るものであってもよレ、。 一 χ— In the third embodiment of the present invention, in the formula (8), one Y— may be represented by the following formula (Y2). One χ —
（Y2) (Y2)
Figure imgf000014_0002
Figure imgf000014_0002
[式中、 R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基であり、 R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 アミン化 合物残基であり、 但し、 R5の少なくとも 1っはァミン化合物残基であり、 nは 2〜5, 000の整数であり、 Xは 0〜5， 000の整数であるが、 nより大き くないものとする。 ] [Wherein, R 4 s are each independently a methylene group or an ethylene group, and R 5 s are each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, provided that At least one of R 5 is an amine compound residue, n is an integer from 2 to 5,000, and X is an integer from 0 to 5,000, but not greater than n. ]
本発明の第 3態様において、 前記式 （8) 中、 一 'Y—は、 下記式 （Y3) で示 されるものであってもよい。 一 y— (Y3)
Figure imgf000015_0001
In the third aspect of the present invention, in the formula (8), 1′Y— may be represented by the following formula (Y3). One y — ( Y3)
Figure imgf000015_0001
[式中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基であり、 ここで 保護基とはァミノ基の保護基の中で酸性条件にすることなく脱保護できるもので あり、 R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基であり、 R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 アミン化 合物残基であり、 但し、 R3の少なくとも 1つは水素原子である力、 R5の少なく とも 1っはァミン化合物残基であるか、 またはその両方であり、 nは 2〜5， 0 0 0の整数であり、 Xは 0〜4 , 9 9 9の整数であり、 yは：！〜 4 , 9 9 9の整 数であり、 但し、 yは nよりも小さく x + yは nより大きくないものとする。 ] 本発明の第 3態様において、 R4はメチレン基であることが好ましい。 [In the formula, each R 3 independently of one another represents a hydrogen atom or a protecting group, wherein the protecting group is a protecting group of an amino group that can be deprotected without acidic conditions, and R 4 is each independently a methylene group or ethylene group, and R 5 is each independently a hydroxyl group, benzyloxy group, or amine compound residue, provided that at least one of R 3 One is a hydrogen atom, at least one of R 5 is an amine compound residue, or both, n is an integer from 2 to 5, 0 0 0, and X is 0 to 4, 9 9 is an integer of 9 and y :! It is an integer of ~ 4, 9 99, where y is smaller than n and x + y is not larger than n. In the third embodiment of the present invention, R 4 is preferably a methylene group.
本発明の第 4態様では、 ァセタールをあらかじめアルデヒ ドに変換することを せずに、 ァセタール末端を有する高分子とシスティン末端を有するぺプチドとを 酸性溶液中で混合することを特徴とする、 高分子へのぺプチドリガンド導入方法 が提供される。  According to a fourth aspect of the present invention, a polymer having an acetal end and a peptide having a cysteine end are mixed in an acidic solution without previously converting the acetal into aldehyde. A method for introducing a peptide ligand into a molecule is provided.
本発明の第 4態様において、 ァセタール末端を有する高分子は、 ポリエチレン グリコールまたはその誘導体であってもよく、 また、 ァセタール末端を有する高 分子はポリカチオンであってもよく、 さらに、 ァセタール末端を有する高分子は、 ポリエチレンダリコールとポリカチオンとのブロック共重合体またはグラフト共 重合体であってもよく、 さらに、 ァセタール末端を有する高分子は、 ポリエチレ ングリコールと、 ポリアミノ酸もしくはその誘導体、 またはそれらの塩とのプロ ック共重合体またはグラフト共重合体であってもよい。 In the fourth embodiment of the present invention, the polymer having an acetal end may be polyethylene glycol or a derivative thereof, the high molecule having an acetal end may be a polycation, and further has an acetal end. The polymer may be a block copolymer or graft copolymer of polyethylene dallicol and polycation, and the polymer having an acetal end may be polyethylene. The copolymer may be a block copolymer or a graft copolymer of polyglycol with a polyamino acid or a derivative thereof, or a salt thereof.
本発明の第 5態様では、 下記式 （8) で示されるペプチドブロック共重合体の 製造方法であって、  According to a fifth aspect of the present invention, there is provided a method for producing a peptide block copolymer represented by the following formula (8):
Figure imgf000016_0001
Figure imgf000016_0001
[式中、 Aはリガンドペプチドを表し、 Lは連結基を表し、 Yは、 ポリアミノ酸 由来のセグメントを表し、 R2は、 水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基 を表し、 1は、 1〜5の整数であり、 mは 5〜20, 000の整数である。 ] 下記式 （1) で示されるブロック共重合体と、 (CH2) )— 0— (Gli H。0 — L一 Y— R2 (1)
Figure imgf000016_0002
[Wherein, A represents a ligand peptide, L represents a linking group, Y represents a segment derived from polyamino acid, R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group, 1 Is an integer from 1 to 5, and m is an integer from 5 to 20,000. ] A block copolymer represented by the following formula (1), and (CH 2 )) — 0— (Gli H. 0 — L 1 Y — R 2 (1)
Figure imgf000016_0002
[式中、 L、 Y、 R2、 1及び mは、 上記の意味を有する。 Ria及び Ribは、 それ ぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 置換基を有していてもよい Ci Cw アルキル基である。 ] [Wherein L, Y, R 2 , 1 and m have the above-mentioned meanings. Ria and Rib are each a Ci Cw alkyl group which is independent of each other and is the same or different and may have a substituent. ]
下記式 （9) で示されるペプチドと The peptide represented by the following formula (9)
Figure imgf000017_0001
Figure imgf000017_0001
[式中、 Aは、 上記の意味を有する。 ] [Wherein A has the above-mentioned meaning. ]
を反応させることを特徴とする、 ぺプチドブロック共重合体の製造方法が提供さ れる。 ， There is provided a process for producing a peptide block copolymer characterized by reacting ,
本発明の第 5態様において、 Aは、 1個〜 200個のアミノ酸残基を有するぺ プチドであることが好ましく、 Aは、 インテグリンと特異的に結合することがで きるペプチドであることがより好ましく、 Aは、 シクロ （L- A r g_G 1 y-L- A s p-D-P h e-L-L y s ) -Z [式中、 Zは、 任意にアミノ酸残基を表す。 ] で示されるものであることがさらに好ましい。  In the fifth embodiment of the present invention, A is preferably a peptide having 1 to 200 amino acid residues, and A is more preferably a peptide capable of specifically binding to integrin. Preferably, A is cyclo (L-Arg_G1yL-AspDPheLLys) -Z [wherein Z represents an amino acid residue. It is more preferable that it is what is shown by these.
本発明の第 5態様において、 前記式 （8) 中、 — L—は、 一 （CH2) a-NH 一 [式中、 aは 1〜5の整数である。 ] で示されるものであることが好ましい。 また、 前記式 （8) 中、 R2は、 水素原子またはァセチル基であることが好まし い。 また、 前記式 （8) 中、 1は 2'であることが好ましい。 In the fifth embodiment of the present invention, in the formula (8), —L— is 1 (CH 2 ) a-NH 1 [wherein, a is an integer of 1 to 5. It is preferable that it is what is shown by these. In the formula (8), R 2 is preferably a hydrogen atom or a acetyl group. In the formula (8), 1 is preferably 2 ′.
本発明の第 5態様において、 前記式 （8) 中、 — Y—は、 下記式 （Y 1) また はその塩で示されるものであってもよい。
Figure imgf000018_0001
In the fifth aspect of the present invention, in the formula (8), —Y— may be represented by the following formula (Y 1) or a salt thereof.
Figure imgf000018_0001
[式中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基であり、 但し、 少なくとも 1つは水素原子であり、 ここで保護基とは、 ァミノ基の保護基の中で 酸性条件にすることなく脱保護できるものであり、 nは 2〜5， 0 0 0の整数で ある。 ] [Wherein R 3 s are each independently a hydrogen atom or a protecting group, provided that at least one is a hydrogen atom, wherein the protecting group is an acidic condition among the protecting groups of the amino group. N is an integer of 2 to 5, 0 0 0. ]
本発明の第 5態様において、 前記式 （8 ) 中、 一 Y—は、 下記式 （Y 2 ) また はそれらの塩で示されるものであってもよい。  In the fifth aspect of the present invention, in the formula (8), one Y— may be represented by the following formula (Y 2) or a salt thereof.
- (CO -(CO
Figure imgf000018_0002
Figure imgf000018_0002
[式中、 R 4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基であり、 R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 アミン化 合物残基であり、 但し、 R5の少なぐとも 1っはァミン化合物残基であり、 nは 2〜5， 0 0 0の整数であり、 Xは 0〜5， 0 0 0の整数であるが、 nより大き くないものとする。 ] [Wherein, R 4 s are each independently a methylene group or an ethylene group, and R 5 s are each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, provided that At least one of R 5 is an amine compound residue, n is an integer from 2 to 5, 0 0 0, and X is an integer from 0 to 5, 0 0 0, but not greater than n Shall. ]
本発明の第 5態様において、 前記式 （8 ) 中、 一 Y—は、 下記式 （Y 3 ) また はそれらの塩で示されるものであってもよい。 ― (C In the fifth aspect of the present invention, in the formula (8), one Y— may be represented by the following formula (Y 3) or a salt thereof. ― (C
Figure imgf000019_0001
Figure imgf000019_0001
[式中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基であり、 ここで 保護基とは、 ァミノ基の保護基の中で酸性条件にすることなく脱保護できるもの であり、 R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基であり、 R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 アミン化 合物残基であり、 但し、 R 3の少なくとも 1つは水素原子であるか、 R5の少なく とも 1っはァミン化合物残基を含むものである力、 またはその両方であり、 nは 2〜5， 0 0 0の整数であり、 Xは 0〜4 , 9 9 9の整数であり、 yは 1〜4， 9 9 9の整数であり、 但し、 yは nよりも小さく、 x + yは nより大きくないも のとする。 ] [In the formula, each R 3 independently of one another is a hydrogen atom or a protecting group, wherein the protecting group is a protecting group of an amino group that can be deprotected without acidic conditions, R 4 is each independently a methylene group or ethylene group, and R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, provided that at least R 3 One is a hydrogen atom, or at least one of R 5 is a force containing an amine compound residue, or both, n is an integer from 2 to 5, 00, and X is from 0 to It is an integer of 4, 9 9 9, and y is an integer of 1 to 4, 9 9 9, where y is smaller than n and x + y is not larger than n. ]
本発明の第 5態様において、 R4はメチレン基であることが好ましい。 In the fifth embodiment of the present invention, R 4 is preferably a methylene group.
本発明の第 6態様では、 本発明の第 3態様にかかるぺプチドブロック共重合体、 又は、 本発明の第 5態様にかかる方法により得られたぺプチドブロック共重合体 と、 核酸または荷電性タンパク質とを含むことを特徴とする、 ポリイオンコンプ レックスが提供される。  In a sixth aspect of the present invention, a peptide block copolymer according to the third aspect of the present invention, or a peptide block copolymer obtained by the method according to the fifth aspect of the present invention, and a nucleic acid or a chargeable property A polyion complex characterized by comprising a protein is provided.
本発明の第 6態様において、 前記核酸は、 遺伝子治療に用いられる遺伝子、 タ ンパク質をコードする遺伝子、 D N A断片、 R N A断片、 アンチセンス D N A、 及び、 2本鎖オリゴ核酸からなる群より選ばれることが好ましい。  In the sixth embodiment of the present invention, the nucleic acid is selected from the group consisting of a gene used for gene therapy, a gene encoding a protein, a DNA fragment, an RNA fragment, an antisense DNA, and a double-stranded oligonucleic acid. It is preferable.
本発明の第 6態様において、 本発明のポリイオンコンプレックスは、 コア部と シェル部とを備えた高分子ミセルの形態を有し、 前記コア部は、 核酸または荷電 性タンパク質を内包し、 前記シェル部に、 ペプチドブロック共重合体中のポリェ チレンダリコールセグメントが主として存在し、 前記高分子ミセルの表層付近に ぺプチドリガンドが存在することを特徴とするポリイオンコンプレックスである ことが好ましい。 In the sixth aspect of the present invention, the polyion complex of the present invention has a form of a polymer micelle having a core part and a shell part, and the core part is a nucleic acid or a charged substance. A polyion complex characterized in that a poly (ethylene glycol) segment in a peptide block copolymer is mainly present in the shell part, and a peptide ligand is present in the vicinity of the surface layer of the polymer micelle. Preferably there is.
本発明の第 7態様では、 本発明の第 3態様にかかるペプチドブロック共重合体、 又は、 本発明の第 5態様にかかる方法により得られたぺプチドブロック共重合体 と、 薬剤又は微粒子とを含むことを特徴とする、 複合体が提供される。  According to a seventh aspect of the present invention, there is provided a peptide block copolymer according to the third aspect of the present invention, or a peptide block copolymer obtained by the method according to the fifth aspect of the present invention, and a drug or fine particles. A composite is provided, characterized in that it comprises.
本発明の第 7態様において、 複合体は、 コア部とシヱル部とを備えた高分子ミ セルの形態を有し、 前記コア部は、 薬剤または微粒子を内包し、 前記シェル部に、 ぺプチドブロック共重合体中のポリエチレングリコールセグメントが主として存 在し、 前記高分子ミセルの表層付近にぺプチドリガンドが存在することを特徴と する、 複合体であることが好ましい。  In the seventh aspect of the present invention, the composite has a form of a polymer micelle having a core part and a seal part, and the core part encloses a drug or fine particles, and the shell part contains a peptide. It is preferably a complex characterized in that the polyethylene glycol segment in the block copolymer is mainly present and a peptide ligand is present in the vicinity of the surface layer of the polymer micelle.
本発明の第 8態様では、 本発明の第 6態様にかかるポリイオンコンプレックス、 又は、 本発明の第 7態様にかかる複合体を含むことを特徴とする、 医薬組成物が 提供される。 図面の簡単な説明  According to an eighth aspect of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition comprising the polyion complex according to the sixth aspect of the present invention or the complex according to the seventh aspect of the present invention. Brief Description of Drawings
図 1は、 ァセタール- PEG- PLL(TFA)の1 H- NMRデータを示す図である。 FIG. 1 is a diagram showing 1 H-NMR data of acetal-PEG-PLL (TFA).
図 2は、 ァセタール- PEG- PLLの Ή- NMRデータを示す図である。  FIG. 2 is a diagram showing Ή-NMR data of Acetal-PEG-PLL.
図 3は、 シク口 (RGDffO- PEG-PLLの - NMRデータを示す図である。  FIG. 3 is a diagram showing -NMR data of a mouth opening (RGDffO-PEG-PLL).
図 4は、 シクロ (RGDfK)- PEG- PLL/pDNA コンプレックスを用いたルシフエ ラーゼ遺伝子発現を示す図である。  FIG. 4 shows luciferase gene expression using a cyclo (RGDfK) -PEG-PLL / pDNA complex.
図 5は、 HeLa細胞表面のレセプター数の評価結果を示す図である。 発明を実施するための最良の形態 以下、 本発明の検出方法について詳しく説明するが、 本発明の範囲はこれらの 説明に拘束されることはなく、 以下の例示以外についても、 本発明の趣旨を損な わない範囲で適宜変更し実施し得る。 FIG. 5 is a graph showing the evaluation results of the number of receptors on the surface of HeLa cells. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the detection method of the present invention will be described in detail. However, the scope of the present invention is not limited to these explanations, and modifications other than the following examples may be made as appropriate without departing from the spirit of the present invention. Can be implemented.
なお、 本明細書は、 本願優先権主張の基礎となる特願 2 0 0 5— 0 5 4 2 6 0 号明細書の全体を包含する。 また、 本明細書において引用された全ての先行技術 文献、 並びに公開公報、 特許公報及びその他の特許文献は、 参照として本明細書 に糸且み入れられる。 本発明の第 1態様では、 非荷電性セグメントと、 ポリアミノ酸由来のセグメン トとを有するプロック共重合体であって、 非荷電性セグメントの末端がァセター ル基である、 ブロック共重合体が提供される。
Figure imgf000021_0001
本発明の第 1態様において、 非荷電性セグメントとしては、 例えば、 ポリェチ レングリコール、 ポリプロピレングリコーノレ等のポリアルキレングリコーノレ、 ポ リアルキレンォキシド、 ポリサッカライ ド、 ポリアクリルアミ ド、 ポリ置換ァク リルァミ ド、 ポリメタタリルァミ ド、 ポリ置換メタクリルアミ ド、 ポリビニルビ ロリ ドン、 ポリビ-ルアルコール、 ポリアクリル酸エステル、 ポリメタクリル酸 エステル、 非荷電性ポリアミノ酸、 又はそれらの誘導体由来の各種の重合体、 セ グメント等がある。 Note that this specification includes the entire specification of Japanese Patent Application No. 2 0 0 5-0 5 4 2 60 which is the basis for claiming priority of the present application. In addition, all prior art documents cited in this specification, as well as published publications, patent publications and other patent documents are incorporated herein by reference. In the first aspect of the present invention, there is provided a block copolymer having an uncharged segment and a polyamino acid-derived segment, wherein the terminal end of the uncharged segment is a cetal group. Is done.
Figure imgf000021_0001
In the first embodiment of the present invention, the uncharged segment may be, for example, a polyalkylene glycol such as polyethylene glycol or polypropylene glycol, a polyalkylene oxide, a polysaccharide, a polyacrylamide, or a polysubstituted acrylamide. , Various polymers derived from polymetathalamide, polysubstituted methacrylamide, polyvinyl pyrrolidone, polyvinyl alcohol, polyacrylic acid ester, polymethacrylic acid ester, uncharged polyamino acid, or derivatives thereof, There are segments.
本発明の第 1態様において、 非荷電性セグメントの重量平均分子量は、 1， 0 0 0〜2 0 0， 0 0 0であることが好ましく、 5 , 0 0 0〜2 0， 0 0 0である ことが更に好ましい。 本発明の第 1態様において、 キヤリァ一に生体適合性を付与するという観点か ら、 非荷電性セグメントとしてポリエチレングリコール又はその誘導体を使用す ることが好ましい。 In the first embodiment of the present invention, the weight average molecular weight of the uncharged segment is preferably from 1, 0 00 to 2 0 0, 0 0 0, and from 5, 0 0 0 to 2 0, 0 0 0 More preferably it is. In the first embodiment of the present invention, polyethylene glycol or a derivative thereof is preferably used as the non-chargeable segment from the viewpoint of imparting biocompatibility to the carrier.
本発明の第 1態様において、 ポリアミノ酸由来のセグメントとしては、 ポリ力 チオンであることが好ましく、 例えば、 ポリ リジン、 ポリ リジン誘導体、 ポリア スパラギン酸誘導体、 ポリグルタミン酸誘導体、 又は、 それらの塩を挙げること ができる。  In the first aspect of the present invention, the polyamino acid-derived segment is preferably poly-force thione, and examples thereof include polylysine, polylysine derivatives, polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, or salts thereof. be able to.
本発明の第 1態様において、 ポリアミノ酸由来のセグメントは、 様々な構造の ポリカチオンを容易に合成でき、 分子量及び分子量分布の制御も可能で、 複数の 機能を併せ持たせることもできるという観点から、 ポリリジン、 ポリ .リジン誘導 体、 ポリアスパラギン酸誘導体、 ポリグルタミン酸誘導体、 及び、 それらの塩か らなる群より選ばれる 1種以上を含むか、 あるいは、 ポリ リジン、 ポリリジン誘 導体、 及び、 それらの塩からなる群より選ばれる 1種と、 ポリアスパラギン酸誘 導体、 ポリグルタミン酸誘導体、 及ぴ、 それらの塩からなる群より選ばれる 1種 以上とを含むことが好ましい。  In the first embodiment of the present invention, the polyamino acid-derived segment can easily synthesize polycations of various structures, can control the molecular weight and molecular weight distribution, and can also have a plurality of functions. , Polylysine, poly.lysine derivatives, polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and one or more selected from the group consisting of these salts, or polylysine, polylysine derivatives, and their It is preferable to include one selected from the group consisting of salts and one or more selected from the group consisting of polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof.
本発明の第 1態様において、 非荷電性セグメントの末端のァセタール基 R la、 R ibとしては、 特に制限はないが、 ァセタールが中性では変化せず、 酸性ではァ ルデヒ ドに変換される程度の安定性を有していることが好ましい。  In the first embodiment of the present invention, the acetal groups Rla and Rib at the end of the uncharged segment are not particularly limited, but the acetal does not change when neutral and is converted to aldehyde when acidic. It is preferable to have the following stability.
R la、 R ibとしては、 例えば、 それぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 置換基を有していてもよい C i〜C io ( C i-io) アルキル基である。  R la and R ib are, for example, C i to C io (C i-io) alkyl groups which are independent of each other and are the same or different and may have a substituent.
本明細書において、 r C woアルキル基」 は、 環式であっても非環式であって もよく、 また、 直鎖であっても分枝であってもよい。 d-ioアルキルとしては、 メチル、 ェチル、 n-プロピル、 iso-プロピル、 n-プチル、 sec-プチル、 tert -ブ チル、 n -ペンチル、 n -へキシル等が挙げられる。 また、 ハロゲン等の置換基が 導入されていてもよい。 本発明の第 1態様において、 非荷電性セグメントの末端のァセタール基として は、 一般的には、 ジェチルァセタール、 又はジメチルァセタールがよく用いられ る。 In the present specification, the “r C wo alkyl group” may be cyclic or acyclic, and may be linear or branched. Examples of d-ioalkyl include methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, n-hexyl and the like. In addition, a substituent such as halogen may be introduced. In the first embodiment of the present invention, as the acetal group at the end of the uncharged segment, in general, jetyl acetal or dimethyl acetal is often used.
本発明の第 1態様において、 ブロック共重合体は下記式 （1) で示されるもの であることが好ましい。  In the first embodiment of the present invention, the block copolymer is preferably one represented by the following formula (1).
(CH2) ,-Ο- (CH CH O)m-L-Y-R2 (1)
Figure imgf000023_0001
上記式 （1) 中、 Rla及び Ribは、 それぞれ、 互いに独立し、 同一ま.たは異な つて、 置換基を有していてもよい Ci〜Ci0アルキル基である。 (CH 2 ), -Ο- (CH CH O) m -LYR 2 (1)
Figure imgf000023_0001
In the above formula (1), Rla and Rib are each independently the same or different, and are Ci to Ci 0 alkyl groups which may have a substituent.
Rla及ぴ Rlbで示される 「Ci〜Cioアルキル基」 についての説明は上述したと おりである。 The explanation of the “Ci to Cio alkyl group” represented by R la and R lb is as described above.
本発明の第 1態様において、 Rla及ぴ Rlbは、 メチル基又はェチル基であるこ とが好ましい。 In the first embodiment of the present invention, R la and R lb are preferably a methyl group or an ethyl group.
上記式 （1) 中、 Lは連結基を表す。  In the above formula (1), L represents a linking group.
本発明の第 1態様において、 一 L一は、 用いた PEG誘導体等の末端構造に由 来する構造となるが、 一 （CH2) a-NH- [式中、 aは 1〜5の整数である。 ] で示されるものであることが好ましく、 aは、 2又は 3であることがより好ま しい。 In the first embodiment of the present invention, 1 L 1 is a structure derived from the terminal structure of the PEG derivative or the like used, but 1 (CH 2 ) a-NH— [wherein a is an integer of 1 to 5 It is. And a is more preferably 2 or 3.
上記式 （1) 中、 R2は水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表す。 本発明の第 1態様において、 「保護基」 としては、 Cl-6アルキルカルボニル基 が挙げられ、 好ましくはァセチル基である。 「疎水性基」 としては、 ベンゼン、 ナフタレン、 アントラセン、 ピレン等の誘導体が挙げられる。 「重合性基」 とし ては、 メタクリロイル基、 アタリロイル基が挙げられる。 かような重合性基を上 記式 （1 ) のブロック共重合体が有する場合には、 これらの共重合体は、 所謂、 マクロマ一として使用でき、 例えば、 後述するポリイオンコンプレックスミセル を形成した後、 必要により他のコモノマーを用い、 これらの重合性基を介して架 橋させることもできる。 In the above formula (1), R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group. In the first embodiment of the present invention, examples of the “protecting group” include Cl-6 alkylcarbonyl group, preferably a acetyl group. Examples of the “hydrophobic group” include derivatives such as benzene, naphthalene, anthracene and pyrene. Examples of the “polymerizable group” include a methacryloyl group and an atalyloyl group. Such polymerizable groups When the block copolymer represented by the formula (1) has, these copolymers can be used as a so-called macromer. For example, after forming a polyion complex micelle described later, another comonomer is used as necessary. It can also be bridged via these polymerizable groups.
これらの保護基、 疎水性基、 重合性基を共重合体の末端に導入する方法として は、 酸ハロゲン化物を用いる方法、 酸無水物を用いる方法、 活性エステルを用い る方法等、 通常の合成で用いられている手法が挙げられる。  Examples of methods for introducing these protecting groups, hydrophobic groups, and polymerizable groups into the end of the copolymer include conventional methods such as methods using acid halides, methods using acid anhydrides, and methods using active esters. The method used in is mentioned.
本発明の第 1態様において、 R2は水素原子またはァセチル基であることが好 ましい。 In the first embodiment of the present invention, R 2 is preferably a hydrogen atom or a acetyl group.
上記式 （1 ) 中、 1は 1〜5の整数であり、 2であることが好ましい。  In said formula (1), 1 is an integer of 1-5, and it is preferable that it is 2.
上記式 （1 ) 中、 mは 5〜2 0， 0 0 0の整数であり、 2 0〜5， 0 0 0であ ることが好ましく、 1 0 0〜5 0 0であることがより好ましい。  In the above formula (1), m is an integer of 5 to 20 and 0 0 0, preferably 2 0 to 5 and 0 0 0, and more preferably 1 0 0 to 5 0 0 .
上記式 （1 ) 中、 Yは、 ポリアミノ酸由来のセグメントを表す。  In the above formula (1), Y represents a segment derived from a polyamino acid.
本発明の第 1態様において、 前記式 （1 ) 中、 一 Y—は、 下記式 （Y 1 ) また はその塩で示されるものであってもよレ、。 一
Figure imgf000024_0001
上記式 （Y l ) 中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基で あり、 但し、 少なくとも 1つは水素原子である。 In the first embodiment of the present invention, in the formula (1), 1 Y— may be represented by the following formula (Y 1) or a salt thereof. one
Figure imgf000024_0001
In the above formula (Y l), R 3 s are each independently a hydrogen atom or a protecting group, provided that at least one is a hydrogen atom.
ここで保護基とは、 ァミノ基の保護基の中で酸性条件にすることなく脱保護で きるものであり、 トリフルォロアセチル基であることが好ましい。 上記式 （Y 1 ) 中、 R3の合計の、 好ましくは 85 %以上が水素原子であり、 より好ましくは 95 %以上、 更に好ましくは 98 %以上、 特に好ましくは 100 %が水素原子である。 Here, the protecting group is a protecting group of an amino group that can be deprotected without being subjected to acidic conditions, and is preferably a trifluoroacetyl group. In the above formula (Y 1), the total of R 3 is preferably 85% or more, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and particularly preferably 100% is a hydrogen atom.
上記式 （Y 1 ) 中、 nは 2〜 5 , 000の整数であり、 5〜1， 000である ことが好ましく、 10〜200であることがより好ましい。  In the above formula (Y 1), n is an integer of 2 to 5,000, preferably 5 to 1,000, and more preferably 10 to 200.
一 Y—は、 上記式 （Y 1) の塩であってもよい。 この場合塩を形成する対ィォ ンとしては C厂、 B r―、 I―、 (1/2 S〇4)-、 NO3—、 （I/2 CO3)—、 ( 1 / 3 PO4)—、 CH3CO〇—、 CFsCOO—、 CH3S03—、 CF3S〇3— 等が挙げられる t 本発明の第 1態様において、 前記式 （1) 中、 一Y—は、 下記式 （Y2) また はそれらの塩で示されるものであってもよい。 一 - (Υ2)
Figure imgf000025_0001
上記式 （Υ2) における各繰り返し単位は記載の便宜上特定した順で示してい るが： 各繰り返し単位はランダムに存在することができる。 One Y— may be a salt of the above formula (Y 1). In this case, C 厂, Br-, I-, (1/2 S0 4 )-, NO3—, (I / 2 CO3) —, (1/3 PO4) — , CH 3 CO_〇-, CFsCOO-, CH 3 S0 3 - , CF 3 S_〇 3 - in a first aspect of the like can be mentioned are t present invention, the formula (1) in one Y- is represented by the following formula ( Y2) or a salt thereof may be used. I-(Υ2)
Figure imgf000025_0001
In the above formula (上 記 2), each repeating unit is shown in the order specified for convenience of description: Each repeating unit can exist randomly.
上記式 （Υ2) 中、 R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはェチ レン基である。 メチレン基の場合はポリアスパラギン酸誘導体に、 エチレン基の 場合はポリグルタミン酸誘導体に対応する。 本発明の第 2態様の他の側面におい て説明するように、 本発明の第 1態様にかかるブロック共重合体を製造する一形 態において、 アミノリシスが温和な条件で定量的に進行することから、 R4はメ チレン基、 すなわちポリアスパラギン酸誘導体であることがより好ましい。 上記式 （Y2) 中、 R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキ シ基、 又は、 ァミン化合物残基であり、 但し、 R5の少なくとも 1っはァミン化 合物残基である。 In the above formula (Υ2), R 4 s are each independently a methylene group or an ethylene group. The methylene group corresponds to a polyaspartic acid derivative, and the ethylene group corresponds to a polyglutamic acid derivative. As described in another aspect of the second embodiment of the present invention, in one embodiment of producing the block copolymer according to the first embodiment of the present invention, aminolysis proceeds quantitatively under mild conditions. R 4 is more preferably a methylene group, that is, a polyaspartic acid derivative. In the above formula (Y2), R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue, provided that at least one of R 5 is an amine compound residue.
本明細書において、 「ァミン化合物残基」 とは、 一般式— NH— (CH2) b—In the present specification, the “amine compound residue” means a general formula —NH— (CH 2 ) b—
Xで表される残基をいう。 The residue represented by X.
上記式中、 bは、 1〜5の整数であり、 2又は 3であることが好ましい。 上記式中、 Xとなり得る置換基の例としては、 下記に示される置換基が挙げら れるが、 これに限定されるものではない。  In the above formula, b is an integer of 1 to 5, and preferably 2 or 3. In the above formula, examples of the substituent that can be X include the substituents shown below, but are not limited thereto.
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000026_0001
[式中、 X2は、 水素原子または d-6アルキル基もしくはアミノ d-6アルキル基 である。 ] [Wherein X 2 represents a hydrogen atom, a d-6 alkyl group or an amino d-6 alkyl group. ]
一 (CH2) f-NH2 (CH 2 ) f-NH 2
[式中、 f は 0から 15の整数である。 ]  [Where f is an integer from 0 to 15. ]
一 （NR7a (CH2) dl) el— NHR8a (NR 7a (CH 2 ) dl) el— NHR8a
[式中、 R7aは水素原子またはメチル基であり、 R8aは水素原子またはアミノ基 の保護基として通常用いられているベンジ ォキシカルボ-ル基 （以下、 Ζ基と もいう。 ） 、 tert-ブトキシカルボニル基 （以下、 B o c基ともいう。 ） 、 ァセ チル基、 トリフルォロアセチル基等の保護基であり、 d 1は 1〜5の整数であり、 好ましくは 2又は 3であり、 e 1は 1〜 5の整数であり、 好ましくは 1〜 3の整 数である。 ] Wherein, R 7a is a hydrogen atom or a methyl group, R 8 a benzylidene Okishikarubo is commonly used as a protecting group for a hydrogen atom or an amino group - Le group (. Hereinafter also referred to as Ζ group), tert -Butoxycarbonyl group (hereinafter also referred to as Boc group), A protecting group such as a til group or a trifluoroacetyl group, d 1 is an integer of 1 to 5, preferably 2 or 3, and e 1 is an integer of 1 to 5, preferably 1 to 3 It is an integer. ]
一 N (CH3) 2 1 N (CH 3 ) 2
一 N (CH2CH3) 2 1 N (CH 2 CH 3 ) 2
一 （NR7b (CH2) d2) e2一 （NR7c (CH2) d3) e3一 NHRSb One (NR 7 b (CH 2) d 2) e2 one (NR7c (CH 2) d3) e3 one NHRSb
[式中、 R?b及ぴ R7cは、 水素原子またはメチル基であり、 R8bは水素原子また はァミノ基の保護基として通常用いられている Z基、 B o c基、 ァセチル基、 ト リフルォロアセチル基等の保護基であり、 d 2及び d 3はそれぞれ独立して 1〜 5の整数であり、 e 2及び e 3はそれぞれ独立して 1〜5の整数である。 ] [Wherein, R? B and R 7 c are a hydrogen atom or a methyl group, and R 8 b is a Z group, a B oc group or a acetyl group which are usually used as a protective group for a hydrogen atom or an amino group. , A protecting group such as a trifluoroacetyl group, d 2 and d 3 are each independently an integer of 1 to 5, and e 2 and e 3 are each independently an integer of 1 to 5. ]
Figure imgf000027_0001
Figure imgf000027_0001
[式中、 gは 0〜 1 5の整数である。 ]  [Wherein g is an integer of 0 to 15; ]
上記式 （Y2) 中、 R5の合計の、 好ましくは 85%以上がァミン化合物残基 であり、 より好ましくは 95%以上、 更に好ましくは 98%以上、 特に好ましく は 1 00 %がァミン化合物残基である。 In the above formula (Y2), 85% or more of the total of R 5 is preferably an amin compound residue, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and particularly preferably 100% is an amine compound residue. It is a group.
上記式 （Y2) 中、 nは 2〜5, 000の整数であり、 5〜1, 000である ことが好ましく、 1 0〜200であることがより好ましい。  In the above formula (Y2), n is an integer of 2 to 5,000, preferably 5 to 1,000, and more preferably 10 to 200.
上記式 （Y2) 中、 Xは 0〜5, 000の整数であるが、 nより大きくないも のとする。  In the above formula (Y2), X is an integer of 0 to 5,000, but not greater than n.
一 Y—は、 上記式 （Y2) の塩であってもよい。 'この場合塩を形成する対ィォ ンとしては C l-、 B r―、 I -、 （l/2 SO+4)-、 N03 -、 （1ノ 2 CO3) -、 （1/3 P04)—、 CH3COO—、 CF3CO〇-、 CH3S 03\ CF3S〇3— 等が挙げられる。 本発明の第 1態様において、 前記式 （1) 中、 一 Y—は、 下記式 （Y3) また はそれらの塩で示されるものであってもよレ、。 One Y— may be a salt of the above formula (Y2). 'In this case, the salt forming salt is C l-, B r-, I-, (l / 2 SO + 4 )-, N0 3- , (1 2 CO 3 )-, (1/3 P0 4 ) —, CH 3 COO—, CF 3 COO—, CH 3 S 0 3 \ CF 3 SO 3 — and the like. In the first embodiment of the present invention, in the formula (1), one Y— may be represented by the following formula (Y3) or a salt thereof.
(Y3)
Figure imgf000028_0001
上記式 （Y3) における各繰り返し単位は記載の便宜上特定した順で示してい るが、 各繰り返し単位はランダムに存在することができる。 . (Y3)
Figure imgf000028_0001
Although each repeating unit in the above formula (Y3) is shown in the order specified for convenience of description, each repeating unit can be present at random. .
上記式 （Y3) 中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基で あり、 ここで保護基とは、 ァミノ基の保護基の中で酸性条件にすることなく脱保 護できるものであり、 トリフルォロアセチル基であることが好ましい。 In the above formula (Y3), R 3 s are each independently a hydrogen atom or a protecting group, where the protecting group can be deprotected without being subjected to acidic conditions in the protecting group of the amino group. And is preferably a trifluoroacetyl group.
上記式 （Y3) 中、 R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはェチ レン基である。 In the above formula (Y3), R 4 s are each independently a methylene group or an ethylene group.
上記式 （Y3) 中、 R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキ シ基、 又は、 ァミン化合物残基である。 In the above formula (Y3), R 5 s are each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue.
ここで、 ァミン化合物残基についての説明は、 上記式 （Y2) において説明し たのと同様である。 '  Here, the explanation of the amine compound residue is the same as that explained in the above formula (Y2). '
伹し、 R3の少なくとも 1つは水素原子であるか、 R5の少なくとも 1つはアミ ン化合物残基であるか、 またはその両方である。 At least one of R 3 is a hydrogen atom, at least one of R 5 is an amine compound residue, or both.
上記式 （Y3) 中、 R3の合計の、 好ましくは 85%以上が水素原子であり、 より好ましくは 95 %以上、 更に好ましくは 98 %以上、 特に好ましくは 100 %が水素原子である。 上記式 （Y 3 ) 中、 R5の合計の、 好ましくは 85 %以上がァミン化合物残基 であり、 より好ましくは 95%以上、 更に好ましくは 98%以上、 特に好ましく は 100 %がアミン化合物残基である。 In the above formula (Y3), 85% or more of the total of R 3 is preferably a hydrogen atom, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and particularly preferably 100% is a hydrogen atom. In the above formula (Y 3), preferably 85% or more of the total of R 5 is an amine compound residue, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and particularly preferably 100% is the amine compound residue. It is a group.
上記式 （Y 3) 中、 nは 2〜5, 000の整数であり、 5〜1 , 000である ことが好ましく、 1 0〜200であることがより好ましい。  In the above formula (Y 3), n is an integer of 2 to 5,000, preferably 5 to 1,000, and more preferably 10 to 200.
上記式 （Y 3) 中、 Xは 0〜4, 999の整数であり、 yは:！〜 4, 999の 整数であり、 但し、 yは nよりも小さく、 x + yは nより大きくないものとする: 一 Y—は、 上記式 （Y3) の塩であってもよい。 この場合塩を形成する対ィォ ンとしては C 1―、 B r一、 I―、 (1 / 2 S〇4)—、 NO 3一、 (1/ 2 C03) -、 (1/3 P〇4)—、 CH3COO—、 CF3COO_、 CH3S〇3—、 C F 3 S 03—等が挙げられる。 本発明の第 2態様では、 本発明の第 1態様にかかるブロック共重合体を製造す る三つの形態が提供される。 In the above formula (Y 3), X is an integer from 0 to 4,999 and y is :! It is an integer of ˜4,999, where y is smaller than n and x + y is not larger than n: 1 Y— may be a salt of the above formula (Y3). In this case, C 1-, Br 1, I-, (1/2 S04)-, NO 3 1, (1/2 C0 3 )-, (1/3) P_rei_4) -, CH 3 COO-, CF 3 COO _, CH 3 S_〇 3 -, CF 3 S 0 3 - and the like. In the second aspect of the present invention, three modes for producing the block copolymer according to the first aspect of the present invention are provided.
すなわち、 本発明の第 2態様の一側面では、 下記式 （3) で示されるブロック 共重合体から R 3'の一部または全部を脱離させる脱保護反応を含むことを特徴と する、 下記式 （2) またはその塩で示されるブロック共重合体を製造する方法が 提供される。 (3) That is, one aspect of the second embodiment of the present invention includes a deprotection reaction in which a part or all of R 3 ′ is eliminated from the block copolymer represented by the following formula (3). A method for producing a block copolymer represented by the formula (2) or a salt thereof is provided. (3)
n— R2 (2)
Figure imgf000029_0001
本発明の第 2態様の一側面において、 上記反応式中、 R 、 Rlb、 R2、 L、 i、 m及び nについては、 本発明の第 1態様において、 特に一 Y—が上記式 （Y 1) である場合に説明したのと同様である。 n— R2 (2)
Figure imgf000029_0001
In one aspect of the second embodiment of the present invention, in the above reaction formula, R 1, Rlb, R 2 , L 1 , i, m and n are the same as those in the first embodiment of the present invention. It is the same as described in the case of 1).
本発明の第 2態様の一側面において、 R3'は、 酸性条件にすることなく脱保護 できる保護基であり、 トリフルォロアセチル基であることが好ましい。 In one aspect of the second embodiment of the present invention, R 3 ′ is a protecting group that can be deprotected without using acidic conditions, and is preferably a trifluoroacetyl group.
本発明の第 2態様の一側面において、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素 原子又は R3'と同じ保護基であり、 但し、 R3の少なくとも 1つは水素原子である。 本発明の第 2態様の一側面において、 R3の合計の、 好ましくは 8 5%以上が 水素原子であり、 より好ましくは 9 5%以上、 更に好ましくは 9 8%以上、 特に 好ましくは 1 00 %が水素原子である。 In one aspect of the second embodiment of the present invention, each R 3 independently of one another is a hydrogen atom or the same protecting group as R 3 ′, provided that at least one of R 3 is a hydrogen atom. In one aspect of the second embodiment of the present invention, preferably 85% or more of the total of R 3 is a hydrogen atom, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and particularly preferably 100%. % Is a hydrogen atom.
本発明の第 2態様の一側面において、 生成されるブロック共重合体は、 その塩 を形成していてもよい。 この場合塩を形成する対イオンとしては C 1一、 B r一、 I一、 (1/2 S〇4)一、 NO 3\ (1/2 C03)-、 (1/3 P 04) CH3COO一、 C F3COO—、 CH3SO3", CF3SO3— 等が挙げられる。 In one aspect of the second embodiment of the present invention, the produced block copolymer may form a salt thereof. In this case, the counter ions forming the salt include C 1, Br 1, I 1, (1/2 S0 4) 1, NO 3 \ (1/2 C0 3 )-, (1/3 P 0 4 ) CH 3 COO, C F3COO—, CH3SO3 ”, CF3SO3— and the like.
本発明の第 2態様の一側面において、 典型的には、 上記式 （3) で示されるブ ロック共重合体の溶液に、 アルカリ溶液を加えて、 下記式 （3) で示されるブロ ック共重合体から R 3'の一部または全部を脱離させる。 In one aspect of the second embodiment of the present invention, typically, an alkali solution is added to a solution of the block copolymer represented by the above formula (3) to form a block represented by the following formula (3). Part or all of R 3 'is eliminated from the copolymer.
本発明の第 2態様の一側面において、 上記式 （3) で示されるブロック共重合 体の製造方法は特に限定されるものではないが、 一つの方法として、 例えば、 一 方の末端にァセタール基を有し、 他方の末端にアミノ基を有する PEG誘導体を 用いて、 そのアミノ末端を開始剤として、 R3，で保護されたリジンの N—カルボ ン酸無水物 （NCA) を重合させてブロック共重合体を合成する方法が挙げられ る。 ' In one aspect of the second embodiment of the present invention, the method for producing the block copolymer represented by the above formula (3) is not particularly limited, but as one method, for example, an acetal group at one terminal is used. PEG derivative having an amino group at the other end and blocking by polymerizing lysine N-carboxylic acid anhydride (NCA) protected with R 3 , using the amino terminus as an initiator A method for synthesizing a copolymer can be mentioned. '
本発明の第 2態様の一側面において、 使用するアルカリ溶液としては、 例えば、 水酸化ナトリゥム溶液、 水酸化力リゥム溶液、 アンモニア溶液、 ヒドラジン溶液、 トリェチルァミン溶液、 炭酸ナトリゥム溶液、 炭酸力リゥム溶液を挙げることが できる。 In one aspect of the second embodiment of the present invention, examples of the alkaline solution to be used include sodium hydroxide solution, hydroxylated lithium solution, ammonia solution, hydrazine solution, Examples include triethylamine solution, sodium carbonate solution, and carbonated lithium solution.
本発明の第 2態様の一側面において、 使用するアルカリ溶液の量は、 上記式 （ 3 ) で示されるブロック共重合体中の保護基に対して、 過剰量であることが好ま しい。  In one aspect of the second embodiment of the present invention, the amount of the alkaline solution used is preferably an excess amount relative to the protecting group in the block copolymer represented by the above formula (3).
本発明の第 2態様の一側面において、 反応は、 好ましくは 0 °C〜1 0 0 °Cの温 度範囲で行われ、 より好ましくは 2 0 °C〜8 0 °Cの温度範囲、 特に好ましくは 3 0 °C〜 7 0 °Cで行われる。  In one aspect of the second embodiment of the present invention, the reaction is preferably carried out in a temperature range of 0 ° C to 100 ° C, more preferably a temperature range of 20 ° C to 80 ° C, especially Preferably it is performed at 30 ° C to 70 ° C.
本発明の第 2態様の一側面において、 圧力は、 例えば、 常圧であってもよい。 本発明の第 2態様の一側面において、 反応時間は、 反応が充分に進行する時間 であれば特に限定されないが、 通常 2時間〜 2日間である。  In one aspect of the second embodiment of the present invention, the pressure may be, for example, normal pressure. In one aspect of the second embodiment of the present invention, the reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but it is usually 2 hours to 2 days.
本発明の第 2態様の一側面において、 溶媒としては、 上記式 （3 ) で示される プロック共重合体、 及び使用するアル力リの両方を溶解することができる溶媒が 好ましい。 溶媒は、 脂肪族又は芳香族の有機溶媒、 水、 又はそれらの混合溶媒が 用いられ、 メタノール等の低級アルコール溶媒、 ァセトニトリル、 ジォキサン、 またはそれらと水の混合溶媒が好ましく使用できる。  In one aspect of the second embodiment of the present invention, the solvent is preferably a solvent capable of dissolving both the block copolymer represented by the above formula (3) and the alkyl group used. As the solvent, an aliphatic or aromatic organic solvent, water, or a mixed solvent thereof is used, and a lower alcohol solvent such as methanol, acetonitrile, dioxane, or a mixed solvent thereof with water can be preferably used.
本発明の第 2態様の一側面において、 ブロック共重合体の溶解性や機能を低下 させないという観点から、 R3'の一部または全部を脱離させる脱保護反応の後、 ァセタールを変化させない P H領域'（例えば、 6〜8 ) において透析を行うこと により、 ァミノ基のすべて又は一部をプロトン化させることが好ましい。 In one aspect of the second aspect of the present invention, from the viewpoint not to reduce the solubility and functionality of the block copolymer, after the deprotection reaction desorbing a part or all of R 3 ', it does not change the Asetaru P It is preferable to protonate all or part of the amino group by performing dialysis in the H region '(for example, 6 to 8).
本発明の第 2態様の他の側面では、 下記式 （5 ) で示されるブロック共重合体 の側鎖べンジルエステルの一部または全部をァミノリシスにより変換する変換反 応を含むことを特徴とする、 下記式 （4 ) またはそれらの塩で示されるブロック 共重合体を製造する方法が提供される。 換反応 In another aspect of the second embodiment of the present invention, it comprises a conversion reaction that converts a part or all of the side chain benzyl ester of the block copolymer represented by the following formula (5) by aminolysis. A method for producing a block copolymer represented by the following formula (4) or a salt thereof is provided. Conversion reaction
- R2 (4)
Figure imgf000032_0001
-R 2 (4)
Figure imgf000032_0001
本発明の第 2態様の他の側面において、 上記反応式中、 Ria、 Rib、 R2、 R R5、 L、 1、 m、 n及ぴ xについては、 本発明の第 1態様において、 特に一 Y —が上記式 （Y2) である場合に説明したのと同様である。 In another aspect of the second embodiment of the present invention, in the above reaction formula, Ria, Rib, R 2 , R R5, L, 1, m, n and x are not particularly limited in the first embodiment of the present invention. This is the same as explained when Y — is the above formula (Y2).
本発明の第 2態様の他の側面において、 R5の合計の、 好ましくは 85%以上 がアミン化合物残基であり、 より好ましくは 95 %以上、 更に好ましくは 98 % 以上、 特に好ましくは 100 %がァミン化合物残基である。 In another aspect of the second embodiment of the present invention, preferably 85% or more of the total R 5 is an amine compound residue, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, and particularly preferably 100%. Is an amine compound residue.
本発明の第 2態様の他の側面において、 生成されるブロック共重合体は、 その 塩を形成していてもよい。 この場合塩を形成する対イオンとしては C 1—、 B r -、 I—、 （1/2 S04)—、 N03-、 (1/2 C03) (1/3 P 04)\ CH3COO—、 C F3COO\ CH3S03—、 CF3SO3" 等が挙げられる。 In another aspect of the second embodiment of the present invention, the produced block copolymer may form a salt thereof. In this case, C 1—, B r-, I—, (1/2 S0 4 ) —, N0 3- , (1/2 C0 3 ) (1/3 P 0 4 ) \ CH 3 COO—, CF 3 COO \ CH 3 S0 3 —, CF3SO3 "and the like.
本発明の第 2態様の他の側面において、 典型的には、 上記式 （5) で示される ブロック共重合体の溶液に、 ァミン化合物 （NH2— (CH2) b-X) を加えて攪 拌し、 下記式 （5) で示されるブロック共重合体の側鎖べンジルエステルの一部 または全部をアミノリシスにより変換する d 本発明の第 2態様の他の側面において、 上記式 （5 ) で示されるブロック共重 合体の製造方法は特に限定されるものではないが、 一つの方法として、 例えば、 一方の末端にァセタール基を有し、 他方の末端にアミノ基を有する P E G誘導体 を用いて、 そのアミノ末端を開始剤として、 ベンジルォキシ基で保護されたポリ ァスパラギン酸及び/又はポリグルタミン酸の N—力ルボン酸無水物 （N C A) を重合させてブロック共重合体を合成する方法が挙げられる。 In another aspect of the second embodiment of the present invention, typically, an amine compound (NH 2 — (CH 2 ) bX) is added to the block copolymer solution represented by the above formula (5) and stirred. Then, a part or all of the side chain benzyl ester of the block copolymer represented by the following formula (5) is converted by aminolysis d In another aspect of the second embodiment of the present invention, the method for producing the block copolymer represented by the above formula (5) is not particularly limited, but one method is, for example, that an acetal group is present at one end. PEG derivative having an amino group at the other end and N-force rubonic acid anhydride (NCA) of polyaspartic acid and / or polyglutamic acid protected with benzyloxy group using the amino terminus as an initiator ) Is synthesized to synthesize a block copolymer.
本発明の第 2態様の他の側面において、 ァミン化合物の量は、 上記式 （5 ) で 示されるブロック共重合体のベンジルェステルに対して、 特に理由のない限り過 剰量であることが好ましく、 通常 1 0〜5 0倍当量を用いる。  In another aspect of the second embodiment of the present invention, the amount of the amine compound may be an excess amount with respect to the benzyl ester of the block copolymer represented by the above formula (5) unless otherwise specified. Preferably, 10 to 50 equivalents are usually used.
本発明の第 2態様の他の側面において、 反応は、 好ましくは 0 °C〜8 0 °Cの温 度範囲で行われ、 より好ましくは 3 0 °C〜 5 0 °Cの温度範囲で行われる。 圧力は、 例えば、 常圧であってもよい。 反応時間は、 反応が充分に進行する時間であれば 特に限定されないが、 通常 2時間〜 2日間である。  In another aspect of the second embodiment of the present invention, the reaction is preferably performed in a temperature range of 0 ° C to 80 ° C, more preferably in a temperature range of 30 ° C to 50 ° C. Is called. The pressure may be normal pressure, for example. The reaction time is not particularly limited as long as the reaction proceeds sufficiently, but it is usually 2 hours to 2 days.
本発明の第 2態様の他の側面において、 溶媒としては、 上記式 （5 ) で示され' るブロック共重合体、 及ぴァミン化合物の両方を溶解することができる溶媒が好 ましい。 溶媒は、 脂肪族又は芳香族の有機溶媒が用いられ、 N， N—ジメチルホ ルムアミ ド、 N， N—ジメチルァセトアミ ド、 テトラヒ ドロフラン、 ジクロロメ タン、 クロ口ホルムが好ましく用いられる。 又、 使用する溶媒は極力水を含まな いことが好ましい。  In another aspect of the second embodiment of the present invention, the solvent is preferably a solvent that can dissolve both the block copolymer represented by the above formula (5) and the amine compound. As the solvent, an aliphatic or aromatic organic solvent is used, and N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, tetrahydrofuran, dichloromethane, and black mouth form are preferably used. Further, it is preferable that the solvent used contains as little water as possible.
本発明の第 2態様の他の側面において、 プロック共重合体の溶解性や機能を低 下させないという観点から、 アミノリシスによる変換反応の後、 ァセタールを変 ィ匕させない p H領域 （例えば、 6〜8 ) において透析を行うことにより、 ァミノ 基のすべて又は一部をプロトン化させることが好ましい。  In another aspect of the second embodiment of the present invention, from the viewpoint of not reducing the solubility or function of the block copolymer, a pH region (for example, 6 to 6) that does not change the acetal after the conversion reaction by aminolysis. It is preferable to protonate all or part of the amino group by performing dialysis in 8).
本発明の第 2態様のその他の側面では、 下記式 （7 ) で示されるブロック共重 合体の側鎖べンジルエステルの一部または全部をァミノリシスにより変換する変 換反応と、 R3'の一部または全部を脱離させる脱保護反応とを含むことを特徴と する、 下記式 （6 ) またはそれらの塩で示されるブロック共重合体を製造する方 法が提供される。 In another aspect of the second embodiment of the present invention, a modification in which a part or all of the side chain benzyl ester of the block copolymer represented by the following formula (7) is converted by aminolysis. A method for producing a block copolymer represented by the following formula (6) or a salt thereof, characterized by comprising a conversion reaction and a deprotection reaction that eliminates part or all of R 3 ′. Provided.
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本発明の第 2態様のその他の側面において、 上記反応式中、 R la、 R lb、 L、 R2、 R4、 R5、 1、 m、 n、 x、 yについては、 本発明の第 1態様において、 特 に一 Y—が上記式 （Y 3 ) である場合に説明したのと同様である。 In another aspect of the second embodiment of the present invention, in the above reaction formula, R la , R lb , L, R 2 , R 4 , R 5, 1, m, n, x, y are the same as those in the first aspect of the present invention. In the embodiment, in particular, one Y— is the same as described above in the case of the formula (Y 3).
本発明の第 2態様のその他の側面において、 上記反応式中、 R3及び R3'につい ては、 本発明の第 2態様の一側面において説明したのと同様である。 In the other aspect of the second embodiment of the present invention, in the above reaction formula, R 3 and R 3 ′ are the same as those described in the one aspect of the second embodiment of the present invention.
本発明の第 2態様のその他の側面において、 R 3の合計の、 好ましくは 8 5 % 以上が水素原子であり、 より好ましくは 9 5 %以上、 更に好ましくは 9 8 %以上、 特に好ましくは 1 0 0 %が水素原子である。 In another aspect of the second embodiment of the present invention, a total of R 3 , preferably 85% or more is a hydrogen atom, more preferably 95% or more, still more preferably 98% or more, particularly preferably 1 0 0% is a hydrogen atom.
本発明の第 2態様のその他の側面において、 R5の合計の、 好ましくは 8 5 % 以上がァミン化合物残基であり、 より好ましくは 9 5 %以上、 更に好ましくは 9 8 %以上、 特に好ましくは 1 0 0 %がァミン化合物残基である。 In another aspect of the second embodiment of the present invention, the total of R 5 , preferably 85% or more is an amine compound residue, more preferably 95% or more, more preferably 98% or more, particularly preferably 100% is an amine compound residue.
本発明の第 2態様のその他の側面において、 生成されるブロック共重合体は、 その塩を形成していてもよい。 この場合塩を形成する対イオンとしては C じ、 τ 厂、 （1Z2 S04) -、 N03-、 (l/2 C03)" (1/3 P04) -、 CH3CO O一、 CF3COO一、 CH3S03—、 C F3S 03" 等が挙げられる。 In another aspect of the second embodiment of the present invention, the produced block copolymer may form a salt thereof. In this case, C is the counter ion that forms the salt, τ 厂, (1Z2 S0 4 )-, N0 3- , (l / 2 C0 3 ) "(1/3 P0 4 )-, CH 3 CO O, CF 3 COO, CH 3 S0 3 —, CF 3 S 0 3 "and the like.
本発明の第 2態様のその他の側面において、 典型的には、 上記式 （7) で示さ れるブロック共重合体に対して、 まずアミノリシスによる変換反応を行い、 その 後に脱保護反応を行う。  In another aspect of the second embodiment of the present invention, typically, the block copolymer represented by the above formula (7) is first subjected to a conversion reaction by aminolysis, and then to a deprotection reaction.
本発明の第 2態様の他の側面において、 上記式 （7) で示されるブロック共重 合体の製造方法は特に限定されるものではないが、 一つの方法として、 例えば、 一方の末端にァセタール基を有し、 他方の末端にアミノ基を有する PEG誘導体 を用いて、 そのアミノ末端を開始剤として、 ベンジルォキシ基で保護されたポリ ァスパラギン酸及び/又はポリグルタミン酸の N—力ルボン酸無水物 （NCA) を重合させ、 次いで、 R3'で保護されたリジンの N—カルボン酸無水物 （NCA ) を重合させてプロック共重合体を合成する方法が挙げられる。 In another aspect of the second embodiment of the present invention, the method for producing the block copolymer represented by the above formula (7) is not particularly limited, but as one method, for example, an acetal group is formed at one end. PEG derivative having an amino group at the other end and N-force rubonic acid anhydride (NCA) of polyaspartic acid and / or polyglutamic acid protected with benzyloxy group using the amino terminus as an initiator ), And then a lysine N-carboxylic acid anhydride (NCA) protected with R 3 'is synthesized to synthesize a block copolymer.
本発明の第 2態様のその他の側面において、 ァミノリシスによる変換反応の好 ましい条件は、 上記、 本発明の第 2態様の他の側面において説明したのと同様で ある。  In other aspects of the second embodiment of the present invention, preferred conditions for the conversion reaction by aminolysis are the same as those described above in the other aspects of the second embodiment of the present invention.
本発明の第 2態様のその他の側面において、 脱保護反応の好ましい条件は、 上 記、 本発明の第 2態様の一側面において説明したのと同様である。  In other aspects of the second embodiment of the present invention, preferable conditions for the deprotection reaction are the same as those described above in the one aspect of the second embodiment of the present invention.
本発明の第 2態様のその他の側面において、 プロック共重合体の溶解性や機能 を低下させないという観点から、 アミノリシスによる変換反応およぴ脱保護反応 の後、 ァセタールを変化させない pH領域 （例えば、 6〜8) において透析を行 うことにより、 ァミノ基のすべて又は一部をプロ トン化させることが好ましい。 本発明の第 3態様では、 非荷電性セグメントと、 ポリアミノ酸由来のセグメン トとを有するぺプチドプロック共重合体であって、 非荷電性セグメントの末端が 重量平均分子量 50〜20， 000のぺプチドリガンドである、 ぺプチドプロッ ク共重合体が提供される。 本発明の第 3態様において、 非荷電性セグメント、 及び、 ポリアミノ酸由来の セグメントについての説明は、 本発明の第 1態様において説明したのと同様であ る。 In another aspect of the second embodiment of the present invention, from the viewpoint of not reducing the solubility and function of the block copolymer, a pH region in which the acetal is not changed after the conversion reaction and deprotection reaction by aminolysis (for example, It is preferable that all or a part of the amino group is made into a proton by dialysis in 6-8). In the third aspect of the present invention, a peptide block copolymer having an uncharged segment and a segment derived from a polyamino acid, the terminal of the uncharged segment is a peptide having a weight average molecular weight of 50 to 20,000. A peptide block copolymer, a ligand, is provided. In the third aspect of the present invention, the description of the uncharged segment and the segment derived from the polyamino acid is the same as that described in the first aspect of the present invention.
本発明の第 3態様において、 ペプチドプロック共重合体は下記式 （8 ) で示さ れるものであることが好ましい。  In the third embodiment of the present invention, the peptide block copolymer is preferably represented by the following formula (8).
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上記式 （8 ) 中、 L、 Y、 R2、 1及び mについての説明は、 本発明の第 1態 様において説明したのと同様である。 In the above formula (8), L, Y, R 2 , 1 and m are the same as those described in the first embodiment of the present invention.
上記式 （8 ) 中、 Aは、 ペプチドリガンドを表す。 ペプチドリガンドは、 重量 平均分子量 5 0〜2 0， 0 0 0であり、 1 0 0〜1 0 , 0 0 0であることが好ま しく、 1 5 0〜3 , 0 0 0であることがより好ましい。  In the above formula (8), A represents a peptide ligand. The peptide ligand has a weight average molecular weight of 50 to 20 and 0 0, preferably 1 0 to 1 0 and 0 0 0, more preferably 1 5 0 to 3 and 0 0 0 preferable.
本発明の第 3態様において、 Aは、 1個〜 2 0 0個のアミノ酸残基を有するぺ プチドであることが好ましく、 1〜1 0 0のアミノ酸残基を有するペプチドであ ることが好ましく、 1〜3 0のアミノ酸残基を有するペプチドであることがより 好ましい。  In the third embodiment of the present invention, A is preferably a peptide having 1 to 200 amino acid residues, and preferably a peptide having 1 to 100 amino acid residues. More preferably, the peptide has 1 to 30 amino acid residues.
本発明の第 3態様において、 Aは、 疾患部分の細胞を特異的に認識するといつ た観点から、 血管新生や内膜肥厚、 悪性腫瘍の増殖に関与しているインテグリン と特異的に結合することができるペプチドであることがより好ましく、 Aは、 シ ク口 （L一 A r g -G 1 y -L-A s p— D— P e— L— L y s ) - Z [式中、 Zは、 任意にアミノ酸残基を表す。 ] で示されるものであることがさらに好ましい。 ここで、 任意のアミノ酸残基としては、 天然アミノ酸及び非天然アミノ酸をあ げることができる。 In the third embodiment of the present invention, A specifically binds to an integrin involved in angiogenesis, intimal thickening, and malignant tumor growth from the point of view of specifically recognizing a diseased cell. It is more preferable that A is a peptide (L 1 A rg -G 1 y -LA sp—D—Pe—L—L ys) -Z [wherein Z is an arbitrary Represents an amino acid residue. It is more preferable that it is what is shown by these. Here, as an arbitrary amino acid residue, a natural amino acid and an unnatural amino acid can be mentioned.
本発明の第 4態様では、 ァセタールをあらかじめアルデヒ ドに変換することを せずに、 ァセタール末端を有する高分子とシスティン末端を有するペプチドとを 酸性溶液中で混合することを特徴とする、 高分子へのペプチドリガンド導入方法 が提供される。  According to a fourth aspect of the present invention, a polymer having an acetal terminal and a peptide having a cysteine terminal are mixed in an acidic solution without previously converting the acetal into aldehyde. A method for introducing a peptide ligand into a peptide is provided.
本発明の第 4態様にかかるぺプチドリガンド導入方法によれば、 N末端にシス ティン残基を有するぺプチドであれば導入可能であるという理由から、 多種多様 のぺプチドを導入することが可能となる。  According to the method for introducing a peptide ligand according to the fourth aspect of the present invention, it is possible to introduce a wide variety of peptides because a peptide having a cysteine residue at the N-terminus can be introduced. It becomes.
本発明の第 4態様において、 ァセタール末端を有する高分子は、 ポリエチレン グリコールまたはその誘導体であってもよく、 また、 ァセタール末端を有する高 分子はポリカチオンであってもよく、 また、 ァセタール末端を有する高分子は、 ポリエチレンダリコールとポリカチオンとのプロック共重合体またはグラフト共 重合体であってもよく、 また、 ァセタール末端を有する高分子は、 ポリエチレン グリコールと、 ポリアミノ酸もしくはその誘導体、 またはそれらの塩とのブロッ ク共重合体またはグラフト共重合体であってもよい。  In the fourth embodiment of the present invention, the polymer having an acetal end may be polyethylene glycol or a derivative thereof, and the high molecule having an acetal end may be a polycation, or has an acetal end. The polymer may be a block copolymer or a graft copolymer of polyethylene dallicol and polycation, and the polymer having an acetal end is polyethylene glycol, polyamino acid or a derivative thereof, or their It may be a block copolymer or a graft copolymer with a salt.
本発明の第 4態様にかかるぺプチドリガンド導入方法の一形態として、 本発明 の第 5態様にかかるぺプチドプロック共重合体の製造方法を挙げることができる。 すなわち、 本発明の第 5態様では、' 下記式 （8 ) で示されるペプチドブロック 共重合体の製造方法であって、 下記式 （1 ) で示されるブロック共重合体と、 下 記式 （9 ) で示されるペプチドとを反応させることを特徴とする、 ペプチドプロ ック共重合体の製造方法が提供される。 ： CH(CH2) , An example of the method for introducing a peptide ligand according to the fourth aspect of the present invention is a method for producing a peptide block copolymer according to the fifth aspect of the present invention. That is, in the fifth aspect of the present invention, a method for producing a peptide block copolymer represented by the following formula (8), which comprises a block copolymer represented by the following formula (1) and the following formula (9): A method for producing a peptide block copolymer is provided, which comprises reacting the peptide with : CH (CH 2 ),
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上記反応式中、 Rla、 Rlb、 L、 Y、 R2、 1及び mについての説明は、 本発明 の第 1態様において説明したのと同様である。 In the above reaction formula, R la , R lb , L, Y, R 2 , 1 and m are the same as those described in the first embodiment of the present invention.
上記反応式中、 Aについての説明は、 本発明の第 3態様において説明したのと 同様である。 ，  In the above reaction formula, the explanation for A is the same as that explained in the third embodiment of the present invention. ,
本発明の第 5態様において、 典型的には、 上記式 （1) で示されるブロック共 重合体に、 上記式 （9) で示されるペプチドの溶液を加えて反応させる。  In the fifth embodiment of the present invention, typically, a solution of the peptide represented by the above formula (9) is added to the block copolymer represented by the above formula (1) and reacted.
本発明の第 5態様において、 使用する上記式 （9) で示されるペプチドの量は、 上記式 （1) で示されるブロック共重合体に対して、 1〜30倍当量であること が好ましく、 3〜20倍当量であることがより好ましく、 7〜10倍当量である ことがさらに好ましい。  In the fifth embodiment of the present invention, the amount of the peptide represented by the above formula (9) used is preferably 1 to 30 times equivalent to the block copolymer represented by the above formula (1), It is more preferably 3 to 20 times equivalent, and even more preferably 7 to 10 times equivalent.
本発明の第 5態様において、 反応は、 好ましくは 10°C〜50°Cの温度範囲で 行われ、 より好ましくは 15° (：〜 35 °Cの温度範囲、 特に好ましくは室温で行わ れる。  In the fifth embodiment of the present invention, the reaction is preferably performed in a temperature range of 10 ° C to 50 ° C, more preferably 15 ° (: to a temperature range of 35 ° C, particularly preferably room temperature.
本発明の第 5態様において、 圧力は、 例えば、 常圧であることが好ましい。 本発明の第 5態様において、 反応時間は、 3時間〜 10日であることが好まし く、 3日〜 7日であることがより好ましく、 約 6日であることが特に好ましい。 本発明の第 5態様において、 上記式 （9) で示されるペプチドの溶液として使 用する溶媒としては、 酸性バッファー溶液が好ましレ、。 溶媒は、 pH3. 0〜p H 6 . 0の酢酸バッファー溶液が用いられ、 p H 4 . 0の酢酸バッファー溶液で あることが好ましい。 In the fifth aspect of the present invention, the pressure is preferably normal pressure, for example. In the fifth embodiment of the present invention, the reaction time is preferably 3 hours to 10 days, more preferably 3 days to 7 days, and particularly preferably about 6 days. In the fifth embodiment of the present invention, an acidic buffer solution is preferred as the solvent used as the solution of the peptide represented by the formula (9). Solvent is pH 3.0-p An acetate buffer solution of H 6.0 is used, and an acetate buffer solution of pH 4.0 is preferable.
本発明の第 6態様では、 本発明の第 3態様にかかるペプチドプロック共重合体、 又は、 本発明の第 5態様にかかる方法により得られたぺプチドブロック共重合体 と、 核酸または荷電性タンパク質とを含むことを特徴とする、 ポリイオンコンプ レックスが提供される。  In a sixth aspect of the present invention, a peptide block copolymer according to the third aspect of the present invention, or a peptide block copolymer obtained by the method according to the fifth aspect of the present invention, and a nucleic acid or a charged protein A polyion complex is provided, comprising:
本発明の第 6態様において、 前記核酸が、 遺伝子治療に用いられる遺伝子、 タ ンパク質をコードする遺伝子、 D NA断片、 R N A断片、 アンチセンス D N A、 及び、 2本鎖オリゴ核酸からなる群より選ばれることが好ましい。  In the sixth embodiment of the present invention, the nucleic acid is selected from the group consisting of a gene used for gene therapy, a gene encoding a protein, a DNA fragment, an RNA fragment, an antisense DNA, and a double-stranded oligonucleic acid. It is preferable that
本発明の第 6態様において、 ポリイオンコンプレックスは、 コア部とシェル部 とを備えた高分子ミセルの形態を有し、 前記コア部は、 核酸または荷電性タンパ ク質を内包し、 前記シェル部に、 ペプチドブロック共重合体中のポリエチレング リコールセグメントが主として存在し、 前記高分子ミセルの表層付近にぺプチド リガンドが存在することを特徴とするポリイオンコンプレックスであることが好 ましい。  In the sixth aspect of the present invention, the polyion complex has a form of a polymer micelle having a core portion and a shell portion, and the core portion encloses a nucleic acid or a charged protein, and the shell portion includes The polyion complex is preferably characterized in that the polyethylene glycol segment in the peptide block copolymer is mainly present, and the peptide ligand is present in the vicinity of the surface layer of the polymer micelle.
本発明の第 6態様において、 核酸とぺプチドブロック共重合体との混合比は、 核酸分子内のリン酸基とぺプチドブロック共重合体中のカチオンとの比率 （N/P 比） で表すことができる。 N/P比とは、 次式によって定義される量であり、 以後 断りの無い限り、 N/P比とはこの量のことを指す。  In the sixth embodiment of the present invention, the mixing ratio of the nucleic acid and the peptide block copolymer is represented by the ratio (N / P ratio) between the phosphate group in the nucleic acid molecule and the cation in the peptide block copolymer. be able to. The N / P ratio is an amount defined by the following formula. Unless otherwise noted, the N / P ratio refers to this amount.
N/P比 = 〔溶液中のペプチドプロック共重合体中のカチオンの総数〕 N / P ratio = [total number of cations in peptide block copolymer in solution]
/ 〔溶液中の核酸中のヌクレオチドの総数〕 本発明の第 6態様において、 N/P比は、 ポリイオンコンプレックスを形成でき る限り限定されず、 プロック共重合体に含まれる非荷電性セグメント又はポリア ミノ酸由来のセグメントの性質によって異なる。 / [Total number of nucleotides in nucleic acid in solution] In the sixth embodiment of the present invention, the N / P ratio is not limited as long as a polyion complex can be formed, and varies depending on the properties of the non-charged segment or the polyamino acid-derived segment contained in the block copolymer.
本発明の第 6態¾における適当な N/P比は、 当業者であれば、 適宜選択するこ とができる。  An appropriate N / P ratio in the sixth embodiment of the present invention can be appropriately selected by those skilled in the art.
本発明の第 7態様では、 本発明の第 3態様にかかるぺプチドブロック共重合体、 又は、 本発明の第 5態様にかかる方法により得られたぺプチドプロック共重合体 と、 薬剤又は微粒子とを含むことを特徴とする、 複合体が提供される。  According to a seventh aspect of the present invention, there is provided a peptide block copolymer according to the third aspect of the present invention, or a peptide block copolymer obtained by the method according to the fifth aspect of the present invention, and a drug or fine particles. A composite is provided, characterized in that it comprises.
本発明の第 7態様において、 薬剤としては、 例えば、 アドリアマイシン、 ダウ ノマイシン、 シスプラチン、 カルポプラチン、 メ ト トレキセート、 マイ トマイシ ン0、 タキソール、 カンプトテシン、 レチノイン酸等の抗癌剤、 抗ウィルス剤、 抗炎症剤を挙げることができる。  In the seventh embodiment of the present invention, examples of the drug include adriamycin, daunomycin, cisplatin, carpoplatin, methotrexate, mitomycin 0, taxol, camptothecin, retinoic acid and other anticancer agents, antiviral agents, and anti-inflammatory agents. Can be mentioned.
本発明の第 7態様において、 微粒子としては、 シリカ等の無機微粒子、 金コロ イ ド、 鉄コロイド等の金属微粒子、 デンドリマー、 ゲル等の有機、 高分子微粒子 を挙げることができる。  In the seventh embodiment of the present invention, examples of the fine particles include inorganic fine particles such as silica, metal fine particles such as gold colloid and iron colloid, and organic and polymer fine particles such as dendrimer and gel.
本発明の第 7態様において、 複合体は、 コア部とシェル部とを備えた高分子ミ セルの形態を有し、 前記コア部は、 薬剤または微粒子を内包し、 前記シェル部に、 ぺプチドブロック共重合体中のポリエチレングリコールセグメントが主として存 在し、 前記高分子ミセルの表層付近にぺプチドリガンドが存在することを特徴と する、 複合体であることが好ましい。  In the seventh aspect of the present invention, the composite has a form of a polymer micelle having a core part and a shell part, and the core part encloses a drug or fine particles, and a peptide is contained in the shell part. It is preferably a complex characterized in that the polyethylene glycol segment in the block copolymer is mainly present and a peptide ligand is present in the vicinity of the surface layer of the polymer micelle.
本発明の第 6態様及ぴ第 7態様において、 ポリイオンコンプレックス、 又は複 合体は、 ペプチドプロック共重合体と核酸、 荷電性タンパク質、 薬剤、 又は微粒 子とを、 適当な溶液中で混合することにより得られる。 さらに、 透析、 攪拌、 希 釈、 濃縮、 超音波処理、 温度制御、 pH制御、 イオン強度制御、 有機溶媒の添カロ 等の操作を適宜付加することができる。 さらに、 使用する核酸、 荷電性タンパク 質、 薬剤、 又は微粒子、 及びそれらを含んだボリイオンコンプレックス、 又は複 合体が、 酸性条件下で安定であるならば、 ァセタール末端のブロック共重合体を 用いて、 ポリイオンコンプレックス、 又は複合体を形成させた後に、 リガンド導 入反応を行うことも可能である。 In the sixth aspect and the seventh aspect of the present invention, the polyion complex or complex is obtained by mixing a peptide block copolymer and a nucleic acid, a charged protein, a drug, or a fine particle in an appropriate solution. can get. Furthermore, operations such as dialysis, agitation, dilution, concentration, sonication, temperature control, pH control, ionic strength control, and addition of organic solvent can be added as appropriate. In addition, nucleic acids used, charged proteins If the quality, drug, or microparticles, and the polyion complex or complex containing them are stable under acidic conditions, a block copolymer at the end of the acetal is used to form a polyion complex or complex. It is also possible to conduct a ligand introduction reaction after the reaction.
本発明の第 8態様では、 本発明の第 6態様にかかるポリイオンコンプレックス、 又は、 本発明の第 7態様にかかる複合体を含む、 医薬組成物が提供される。  According to an eighth aspect of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition comprising the polyion complex according to the sixth aspect of the present invention or the complex according to the seventh aspect of the present invention.
本発明の第 8態様にかかる医薬組成物は、 上記のように得られるポリイオンコ ンプレッタスおょぴ複合体を含むため、 治療及び診断を目的とした医薬組成物と して使用することができる。  Since the pharmaceutical composition according to the eighth aspect of the present invention contains the polyion complex complex complex obtained as described above, it can be used as a pharmaceutical composition for treatment and diagnosis.
本発明の第 8態様における医薬組成物に含まれる核酸、 荷電性タン ク質、 薬 剤、 微粒子の量は、 当業者であれば適宜設定することができる。 投与形態として は、 例えば注射が挙げられ、 通常の静脈内、 動脈内等の全身投与のほか、 筋肉、 関節内、 皮下、 皮内等に局所投与することができる。 さらに、 カテーテルを用い た投与形態を採用することも可能である。 この場合、 通常は単位投与量アンプル 又は多投与量容器の形態で提供され、 使用する際に適当な担体、 例えばパイロジ ェンフリーの滅菌水で再溶解させる粉体であってもよい。 また、 これらの剤形に 対し、 製剤上一般に使用される添加剤を含有させることもできる。 その投与量、 投与形態、 投与スケジュールは、 目的により任意に設定することができる。 以下、 実施例により本発明をさらに具体的に説明する。 但し、 本発明は実施例 に限定されるものではない。  A person skilled in the art can appropriately set the amounts of the nucleic acid, the charged tank, the drug, and the fine particles contained in the pharmaceutical composition according to the eighth aspect of the present invention. Examples of the dosage form include injection, and in addition to systemic administration such as normal intravenous and intraarterial administration, it can be locally administered into muscles, joints, subcutaneous, intracutaneous and the like. It is also possible to adopt a dosage form using a catheter. In this case, it may be a powder which is usually provided in the form of a unit dose ampoule or a multi-dose container and redissolved in a suitable carrier, for example, pyrogen-free sterilized water. In addition, these dosage forms may contain additives generally used in pharmaceutical preparations. The dosage, dosage form, and administration schedule can be arbitrarily set according to the purpose. Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples. However, the present invention is not limited to the examples.
なお、 NMRスぺクトルは、 JEOL EX300を用いて測定した。 測定条件以下 の通りである。 ' ァセタール- PEG- PLL(TFA)： 溶媒 DMSO_d6、 80°C ァセタール- PEG- PLL 溶媒 D20、 80°C The NMR spectrum was measured using JEOL EX300. Measurement conditions are as follows. 'Acetal-PEG-PLL (TFA): Solvent DMSO_d6, 80 ° C Acetal-PEG-PLL Solvent D 2 0, 80 ° C
c(RGD£ )-PEG-PLL： 溶媒 D20、 80°C c (RGD £) -PEG-PLL: Solvent D 2 0, 80 ° C
〔実施例 1〕 Example 1
口ック共重合体の合成  Synthesis of Mouth Coc Copolymer
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(1) ァセタール- PEG-PLL(TFA)の合成 (1) Synthesis of Acetal-PEG-PLL (TFA)
平均分子量 12,000のァセタール- PEG-NH2 2.00gを N，N -ジメチルホルムァミ (DMF) 30mLに溶解し、 ε -トリフルォロアセチル -L-リジン- Ν-カルボン酸無 水物 （Lys(TFA)- NCA) 3.57gを DMF 5mLと塩化メチレン 25mLの混合溶媒に 溶解して加え、 40°Cで 2日間重合反応を行った。 反応溶液を酢酸ェチル：へキサン = 4:6溶液 l,000mLに滴下し、 白色沈殿を濾過により回収してァセタール- PEG - PLL(TFA) 4.08gを得た。 Ή- NMRによる解析から PLL(TFA)部分の重合度は 72 であった。 iH- NMRデータを図 1に示す。 Dissolve 2.00 g of acetal-PEG-NH2 with an average molecular weight of 12,000 in 30 mL of N, N-dimethylformamide (DMF), without ε-trifluoroacetyl-L-lysine-Ν-carboxylic acid Water (Lys (TFA) -NCA) 3.57 g was dissolved in a mixed solvent of 5 mL of DMF and 25 mL of methylene chloride and added, and the polymerization reaction was carried out at 40 ° C for 2 days. The reaction solution was added dropwise to 1,000 mL of ethyl acetate: hexane = 4: 6 solution, and the white precipitate was collected by filtration to obtain 4.08 g of acetal-PEG-PLL (TFA).重合 -NMR analysis showed that the degree of polymerization of the PLL (TFA) moiety was 72. iH-NMR data is shown in FIG.
(2) ァセターノレ - PEG - PLLの合成 (2) Synthesis of Acetanol-PEG-PLL
ァセタ一ノレ- PEG- PLL(TFA) 500mgをメタノール 40mLに溶解し、 1N水酸化 ナトリゥム溶液 4mLを加え 40°Cで 1日間反応させた。 反応溶液を分画分子量 12,000の透析チューブに入れ、 150 mM NaCl-pH 7.4リン酸緩衝溶液を外液とし て透析を行い、 透析膜内液を回収、 凍結乾燥することでァセタール- PEG - PLL 498mgを白色固体として得た。 iH-NMRデータを図 2に示す。  Acetanore-PEG-PLL (TFA) (500 mg) was dissolved in 40 mL of methanol, 4 mL of 1N sodium hydroxide solution was added, and the mixture was reacted at 40 ° C. for 1 day. Place the reaction solution in a dialysis tube with a molecular weight cut off of 12,000, dialyz with 150 mM NaCl-pH 7.4 phosphate buffer solution as the external solution, collect the dialysis membrane solution, freeze-dry it, and acetal-PEG-PLL 498 mg Was obtained as a white solid. iH-NMR data are shown in FIG.
(3) シクロ（RGDf )-PEG- PLLの合成 (3) Synthesis of cyclo (RGDf) -PEG- PLL
ァセタール- PEG- PLL 300mgにシクロ（RGDf )- XC (R= L -アルギェン、 G= グリシン、 D= L -ァスパラギン酸、 f= D -フエ二ルァラニン、 K二 L -リジン、 X= 6-アミノカプロイツク酸、 C= L -システィン） 7.4mgを pH 4.0酢酸バッファー 溶液 4mLに溶解させて加え、 室温で 6日間反応させた。 反応溶液を分画分子量 12,000の透析チューブに入れ、 150 mM NaCl-pH 7.4リン酸緩衝溶液を外液とし て透析を行い、 透析膜内液を回収、 凍結乾燥することでシクロ (RGDf )_PEG- PLL 26.6mgを白色固体として得た。 - NMRによる解析からシクロ（RGDfK)ぺ プチドの導入率は 66%であった。 H- NMRデータを図 3に示す。  Acetal-PEG-PLL 300mg Cyclo (RGDf) -XC (R = L-Argyen, G = Glycine, D = L-Aspartic acid, f = D-Phenyralalanin, K-L-Lysine, X = 6-Amino 7.4 mg of caproic acid, C = L-cysteine) was added after dissolving in 4 mL of pH 4.0 acetate buffer solution and reacted at room temperature for 6 days. Put the reaction solution in a dialysis tube with a molecular weight cut off of 12,000, dialyze with 150 mM NaCl-pH 7.4 phosphate buffer solution as the external solution, collect the dialysis membrane solution, and freeze-dry it to cyclo (RGDf) _PEG- 26.6 mg of PLL was obtained as a white solid. -From the analysis by NMR, the introduction ratio of cyclo (RGDfK) peptide was 66%. The H-NMR data is shown in FIG.
〔実施例 2〕 Example 2
細胞実験 (1) 材料および方法 Cell experiment (1) Materials and methods
シク口 (RGDfK) - PEG - PLLとルシフェラーゼ遺伝子をコードしたプラスミ ド DNA (pDNA)とのコンプレックスは、 トランスフエクションの前日にシクロ (RGDfK) - PEG-PLL溶液と pDNA溶液を N/P比 2で混合し、 一晚静置することに より行った。 PEG- PLLと pDNAのコンプレックスも、 同様の方法で調製した。 ここでいう N/P比とは次式によって定義される。  The complex of the mouthpiece (RGDfK)-PEG-PLL and the plasmid DNA (pDNA) encoding the luciferase gene is the same as the N / P ratio of cyclo (RGDfK)-PEG-PLL solution and pDNA solution the day before transfection. The mixture was mixed and left at rest for a while. A PEG-PLL and pDNA complex was prepared in the same manner. The N / P ratio here is defined by the following equation.
N/P比 = 〔溶液中のブロック共重合体中のカチオンの総数〕 N / P ratio = [total number of cations in the block copolymer in solution]
Z 〔溶液中の pDNAのヌクレオチドの総数〕 . 細胞の準備として、 HeLa細胞を 24 wellディッシュに 2.5xl04cells I well捲き、 10%血清入り DMEM中で 24時間インキュベートした後、 実験に用いた。 培地を 再度 10%血清入り DMEMに交換し、 調製した各コンプレックスを培地中に滴下 することによってトランスフエクシヨンを行った。 pDNAの量として 1 pg / well 投与した。 各所定の時間インキュベーションした後、 培地を再び 10%血清入り DMEMに交換し、 総時間 48時間になるようにインキュベーションを行い、 ルシ フェラーゼ遺伝子発現を定量した。 (2) 結果 As Z [total number of pDNA nucleotides in solution]. Preparation of cells, HeLa cells were plated 2.5xl0 4 cells I well into 24 well dishes and incubated for 24 hours with 10% serum-containing DMEM in, used in the experiment. The medium was replaced with 10% serum-containing DMEM again, and each prepared complex was dropped into the medium for transfection. The amount of pDNA was 1 pg / well. After incubation for each predetermined time, the medium was replaced with DMEM containing 10% serum again, and incubation was performed for a total time of 48 hours to quantify luciferase gene expression. (2) Results
図 4に示すように、 HeLa細胞においていずれの時間においてもシク口  As shown in Figure 4, the HeLa cells can be squeezed at any time.
(RGDfK)ぺプチドによる遺伝子導入効率の上昇が確認された。 HeLa細胞にはシ クロ (RGDfK)ぺプチドを認識する a V β 3インテグ'リンが発現していることから、 シク口 (RGDfK)ぺプチドをミセルの表層に導入することで細胞認識機能が付与さ れていることがわかった。 このシステムを利用して、 α V ]3 3およぴひ V 5ィ ンテグリンを過剰に発現している細胞を標的とした遺伝子デリバリーシステムの 創製が可能であると考えられる。 The increase in gene transfer efficiency by (RGDfK) peptide was confirmed. HeLa cells express a V β 3 integrin that recognizes the cyclo (RGDfK) peptide, so that the cell recognition function can be added by introducing the chrysanthemum (RGDfK) peptide into the surface of the micelle. I found out that Using this system, α V] 3 3 and Hihi V 5 It is considered possible to create a gene delivery system targeting cells that overexpress ntegrin.
〔実施例 3〕 Example 3
HeLa細胞表面のレセプター (αν/33ィンテグリン等) 数の評価 (1) 方法  Evaluation of HeLa cell surface receptors (αν / 33integrin etc.) (1) Method
予め、 ひ vj33インテグリン、 avi35インテグリン 及び マウス IgG の各々に 対する抗体が FITCで標識された、 市販 (コスモ'バイオ社製) の FITC標識化抗 体 （以下、それぞれ 「FITC標識化ひ v]33J 、 「FITC標識化 ανβ 5」 及び 「FITC 標識化 IgG」 と言う。 ） を用意した。  A FITC-labeled antibody (hereinafter referred to as “FITC-labeled antibody v” 33J, respectively) in which antibodies against each of the vj33 integrin, avi35 integrin and mouse IgG were labeled with FITC in advance (manufactured by Cosmo Bio Inc.) “FITC labeled ανβ 5” and “FITC labeled IgG”) were prepared.
HeLa細胞をトリプシン処理して剥がし、 PBS溶液で 2度洗浄した。  HeLa cells were detached by trypsinization and washed twice with PBS solution.
洗浄後の HeLa細胞 106個と、 2 gの FITC標識ィ匕 α v ]33を、 lOO/^Lの DMEM 培地中で懸濁し、 遮光して氷上で 1時間静置した。 その後、 細胞を冷やした DMEM培地で 3度洗浄して回収し、 フローサイトメーターにより細胞表面に分布 するレセプター 3インテグリン） の数を測定し、 評価した。 And HeLa 106 cells after washing, the 2 g of FITC Hyoshikyi匕alpha v] 33, were suspended in DMEM medium Loo / ^ L, and allowed to stand for one hour on ice in the dark. The cells were then washed 3 times with chilled DMEM medium and collected, and the number of receptor 3 integrins distributed on the cell surface was measured and evaluated using a flow cytometer.
別途、 FITC標識ィ匕 αν 3の代わりに、 FITC標識化 又は FITC標識化 IgGを用いた以外は、 上記と同様にして、 数の測定および評価を行った。 (2) 結果、 考察  Separately, the number was measured and evaluated in the same manner as above except that FITC-labeled or FITC-labeled IgG was used instead of FITC-labeled αα3. (2) Results and discussion
FITC標識ィ匕 ανβ 3及び FITC標識化 a v ]35を用いた実験の結果と、 FITC標識 化 IgGを用いたコントロール実験の結果との比較により、 HeLa細胞では、 aV/S 3インテグリンが多く発現していることが分かった。 また、 ひ ν]35インテグリン はさらに過剰に発現していることも分かった。 Results of experiments using FITC Hyoshikyi匕Arufanyubeta 3 and FITC-labeled av] 35, by comparison with the results of control experiments using FITC-labeled IgG, in HeLa cells, a V / S 3 integrin is highly expressed I found out that It was also found that [v] 35 integrin is overexpressed.
このことは、 図 4 (実施例 2) で示したトランスフエクシヨンの結果、 すなわ ち 「シク口（RGDf )ぺプチドを導入したコンプレツクスミセルでは発現効率が有 意に上昇する」 という結果を支持するものであった。 シクロ（RGDfK)ペプチドの 導入は、 a v j3 3インテグリン又は o; V i3 5ィンテグリンを特異的に認識するシス テムを可能とするものであることが分かった。 産業上の利用可能性 This is the result of the transformation shown in Figure 4 (Example 2). In other words, it supported the result that the expression efficiency is significantly increased in complex micelles that have been introduced with RGDf peptide. The introduction of the cyclo (RGDfK) peptide was found to enable a system that specifically recognizes av j3 3 integrin or o; V i3 5 integrin. Industrial applicability
本発明のぺプチドブロック共重合体によれば、 特定の細胞を認識する標的機能 がキヤリァ一に搭載されるため、 キヤリァ一の標的部位における保持時間を延長 し、 特定の細胞での取り込みの促進が可能となる。  According to the peptide block copolymer of the present invention, since a carrier function for recognizing a specific cell is mounted on the carrier, the retention time at the target site of the carrier is extended, and the uptake of the specific cell is promoted. Is possible.

Claims

請 求 の 範 囲 The scope of the claims
1 . 非荷電性セグメントと、 ポリアミノ酸由来のセグメントとを有するブロック 共重合体であって、 非荷電性セグメントの末端がァセタール基である、 ブ 口ック共重合体。 1. A block copolymer having an uncharged segment and a segment derived from a polyamino acid, wherein the end of the uncharged segment is an acetal group.
2 . 非荷電性セグメントがポリエチレングリコール又はその誘導体である、 請求 項 1に記載のプロック共重合体。  2. The block copolymer according to claim 1, wherein the non-chargeable segment is polyethylene glycol or a derivative thereof.
3 . ポリアミノ酸由来のセグメントがポリカチオンである、 請求項 1又は 2に記 載のプロック共重合体。  3. The block copolymer according to claim 1 or 2, wherein the polyamino acid-derived segment is a polycation.
4 . ポリアミノ酸由来のセグメントが、 ポリ リジン、 ポリ リジン誘導体、 ポリア スパラギン酸誘導体、 ポリグルタミン酸誘導体、 及ぴ、 それらの塩からな る群より選ばれる 1種以上を含む、 請求項 1〜 3のいずれか 1項に記載の プロック共重合体。 4. The segment derived from polyamino acid comprises one or more selected from the group consisting of polylysine, polylysine derivatives, polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof. The block copolymer according to any one of the above.
5 . ポリアミノ酸由来のセグメントが、 ポリ リジン、 ポリ リジン誘導体、 及び、 それらの塩からなる群より選ばれる 1種と、 ポリアスパラギン酸誘導体、 ポリグルタミン酸誘導体、 及び、 それらの塩からなる群より選ばれる 1種 以上とを含むものである、 請求項 4に記載のブロック共重合体。  5. A segment derived from polyamino acid is selected from the group consisting of polylysine, polylysine derivatives, and salts thereof, and a group consisting of polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof The block copolymer according to claim 4, wherein the block copolymer comprises at least one selected from the group consisting of:
6 . ポリアミノ酸由来のセグメントが、 ポリ （ ε —トリフルォロアセチル一L一 リジン) を含む、 請求項 1〜 5のいずれか 1項に記載のブロック共重合体。 7 . ブロック共重合体が下記式 （1 ) で示されるものである、 請求項 2に記載の プロック共重合体。  6. The block copolymer according to any one of claims 1 to 5, wherein the polyamino acid-derived segment comprises poly (ε-trifluoroacetyl-L-lysine). 7. The block copolymer according to claim 2, wherein the block copolymer is represented by the following formula (1).
(CH2) , -0- (GH2CH20) m—し一 Y— R2 (1 )
Figure imgf000047_0001
[式中、 Rla及ぴ Ribは、 それぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 置換基を有していてもよい Ci〜C10アルキル基であり、 (CH 2 ), -0- (GH 2 CH 2 0) m — Shiichi Y— R 2 (1)
Figure imgf000047_0001
[Wherein, Rla and Rib are each independently of each other, the same or different, and each may be a Ci to C 10 alkyl group optionally having a substituent,
Lは連結基を表し、  L represents a linking group,
Yは、 ポリアミノ酸由来のセグメントを表し、  Y represents a segment derived from polyamino acid,
R2は水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group,
1は 1〜 5の整数であり、  1 is an integer from 1 to 5,
mは 5〜20, 000の整数である。 ]  m is an integer from 5 to 20,000. ]
8. Ria及び Ribが、 それぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 メチル基 またはェチル基である、 請求項 7に記載のブロック共重合体。 8. The block copolymer according to claim 7, wherein Ria and Rib are each independently the same or different and are a methyl group or an ethyl group.
9. 前記式 （1) 中、 一 L—が、 一 （CH2) a-NH- [式中、 aは：！.〜 5.の整 数である。 ] で示されるものである、 請求項 7又は 8に記載のブロック共 重合体。 9. In the formula (1), one L— is one (CH 2 ) a-NH- [where a is:! It is an integer from 5 to 5. ] The block copolymer of Claim 7 or 8 which is shown by these.
10. 前記式 （1) 中、 R2が、 水素原子またはァセチル基である、 請求項 7〜 9のいずれか 1項に記載のブロック共重合体。 10. The block copolymer according to any one of claims 7 to 9, wherein, in the formula (1), R 2 is a hydrogen atom or a acetyl group.
1 1. 前記式 （1) 中、 1が 2である、 請求項 7〜1 0のいずれか 1項に記載の ブロック共重合体。 1 1. The block copolymer according to any one of claims 7 to 10, wherein 1 is 2 in the formula (1).
1 2. 前記式 （1) 中、 一 Y—が、 下記式 （Y 1) またはその塩で示されるもの である、 請求項 7〜1 1のいずれか 1項に記載のブロック共重合体。 一
Figure imgf000048_0001
[式中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基であり、 但 し、 少なくとも 1つは水素原子であり、 ここで保護基とは、 ァミノ基の保護 基の中で酸性条件にすることなく脱保護できるものであり、 1 2. The block copolymer according to any one of claims 7 to 11, wherein in the formula (1), one Y— is represented by the following formula (Y 1) or a salt thereof. one
Figure imgf000048_0001
[Wherein, R3 are each independently a hydrogen atom or a protecting group, provided that at least one is a hydrogen atom, wherein the protecting group is an acidic condition among the protecting groups of the amino group. Can be deprotected without
nは 2〜5， 000の整数である。 ]  n is an integer from 2 to 5,000. ]
13. 前記式 （1) 中、 一 Y—が、 下記式 （Y2) またはそれらの塩で示される ものである、 請求項 7〜1 1のいずれか 1項に記載のブロック共重合体。 13. The block copolymer according to any one of claims 7 to 11, wherein in the formula (1), one Y— is represented by the following formula (Y2) or a salt thereof.
-
Figure imgf000049_0001
-
Figure imgf000049_0001
[式中、 R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基で あり、 [Wherein R 4 s , independently of each other, are a methylene group or an ethylene group,
R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 ァ ミン化合物残基であり、 R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue,
但し、 R5の少なくとも 1っはァミン化合物残基であり、 Provided that at least one of R 5 is an amine compound residue,
ηは 2〜5, 000の整数であり、  η is an integer from 2 to 5,000,
Xは 0〜5, 000の整数である力 ηより大きくないものとする。 ] 14. 前記式 （1) 中、 一 Y—が、 卞記式 （Y3) またはそれらの塩で示される ものである、 請求項 7〜1 1のいずれか 1項に記載のブロック共重合体。 H) x― (COCHNH) y— (†H2) 4 X is assumed not to be larger than the force η which is an integer of 0 to 5,000. 14. The block copolymer according to any one of claims 7 to 11, wherein, in the formula (1), one Y— is represented by the following formula (Y3) or a salt thereof: . H) x ― (COCHNH) y — († H 2 ) 4
隱 3 隱3
Figure imgf000050_0001
Figure imgf000050_0001
[式中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基であり、 こ こで保護基とは、 ァミノ基の保護基の中で酸性条件にすることなく脱保護で きるものであり、 [In the formula, each R 3 independently represents a hydrogen atom or a protecting group, and the protecting group is a protecting group of an amino group that can be deprotected without using acidic conditions. Yes,
R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基であり、R 4 s are each independently a methylene group or an ethylene group,
R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 ァ ミン化合物残基であり、 R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue,
但し、 R3の少なくとも 1つは水素原子である力、 R5の少なくとも 1つは ァミン化合物残基であるか、 またはその両方であり、 Provided that at least one of R 3 is a force that is a hydrogen atom, at least one of R 5 is an amine compound residue, or both,
nは 2〜5， 0 0 0の整数であり、  n is an integer from 2 to 5, 0 0 0,
Xは 0〜4 , 9 9 9の整数であり、  X is an integer from 0 to 4, 9 9 9,
yは 1〜4 , 9 9 9の整数であり、  y is an integer from 1 to 4, 9 9 9,
伹し、 yは nよりも小さく、 x + yは nより大きくないものとする。 ]5 . 下記式 （3 ) で示されるブロック共重合体から R3'の一部または全部を脱 離させる脱保護反応を含むことを特徴とする、 Let us assume that y is less than n and x + y is not greater than n. ] 5. A deprotection reaction for removing a part or all of R 3 'from the block copolymer represented by the following formula (3):
CH( CH2) - O- ( CH CH20) m - n - 2 ( 3)
Figure imgf000050_0002
[式中、 Rla及び Ribは、 それぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 置換基を有していてもよい Ci〜C10アルキル基であり、 CH (CH 2 )-O- (CH CH 2 0) m - n - 2 (3)
Figure imgf000050_0002
[Wherein, Rla and Rib are each independently of each other, the same or different, and Ci to C 10 alkyl group optionally having a substituent,
Lは連結基を表し、  L represents a linking group,
R2は水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group,
R3'は、 酸性条件にすることなく脱保護できる保護基であり、 R 3 ′ is a protecting group that can be deprotected without acidic conditions,
1は 1〜5の整数であり、  1 is an integer from 1 to 5,
mは 5〜20, 000の整数であり、  m is an integer from 5 to 20,000,
nは 2〜5, 000の整数である。 ]  n is an integer from 2 to 5,000. ]
下記式 （2) またはその塩で示されるプロック共重合体を製造する方法。 n— R2 (2)
Figure imgf000051_0001
A method for producing a block copolymer represented by the following formula (2) or a salt thereof. n— R 2 (2)
Figure imgf000051_0001
[式中、 Ria、 Rib、 L、 R2、 1、 m、 nは上記の意味を有する。  [Wherein Ria, Rib, L, R2, 1, m, n have the above-mentioned meanings.
R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は R3'と同じ保護基であり、 伹し、 R 3の少なくとも 1つは水素原子である。 ]R3 are each, independently of one another, are the same protecting group with a hydrogen atom or R 3 ', and伹, at least one of R 3 is a hydrogen atom. ]
6. 下記式 （5) で示されるブロック共重合体の側鎖べンジルエステルの一部 または全部をァミノリシスにより変換する変換反応を含むことを特徴とす る、 6. It includes a conversion reaction in which part or all of the side chain benzyl ester of the block copolymer represented by the following formula (5) is converted by aminolysis.
n -R2 (5) n -R2 (5)
Figure imgf000052_0001
Figure imgf000052_0001
[式中、 Rla及び Ribは、 それぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 置換基を有していてもよい Ci〜Cl0アルキル基であり、 [Wherein, Rla and Rib are each independently the same or different, and are Ci to Cl 0 alkyl groups optionally having a substituent,
Lは、 連結基を表し、  L represents a linking group,
R2は、 水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group,
R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基を表し、R 4 each independently represents a methylene group or an ethylene group,
1は:！〜 5の整数であり、 1! Is an integer of ~ 5,
mは 5〜20， 000の整数であり、  m is an integer from 5 to 20,000,
nは 2〜5, 000の整数である。 ]  n is an integer from 2 to 5,000. ]
下記式 （4) またはそれらの塩で示されるブロック共重合体を製造する方 A method for producing a block copolymer represented by the following formula (4) or a salt thereof:
..- 2 (4)
Figure imgf000052_0002
..- 2 (4)
Figure imgf000052_0002
[式中、 R 、 Rib、 L、 R2、 R4、 1、 m、 nは上記の意味を有する。 R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 了 ミン化合物残基であり、 [Wherein R 1, Rib, L, R 2, R 4, 1, m and n have the above-mentioned meanings. R5, independently of each other, is a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue,
但し、 R5の少なくとも 1っはァミン化合物残基であり、 Provided that at least one of R 5 is an amine compound residue,
Xは 0〜5, 000の整数である力、 nより大きくないものとする。 ] 1 7. 下記式 （7) で示されるブロック共重合体の側鎖べンジルエステルの一部 または全部をァミノリシスにより変換する変換反応と、 R3'の一部または全 部を脱離させる脱保護反応とを含むことを特徴とする、 R2 (7)
Figure imgf000053_0001
X is a force that is an integer from 0 to 5,000, not greater than n. ] 1 7. Conversion reaction in which part or all of the side chain benzyl ester of the block copolymer represented by the following formula (7) is converted by aminolysis, and deprotection to eliminate part or all of R 3 ' R 2 (7), characterized in that it comprises a reaction
Figure imgf000053_0001
[式中、 Rla及び Ribは、 それぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 置換基を有していてもよい Ci〜Ci0アルキル基であり、 [Wherein, Rla and Rib are each independently the same or different, and are Ci to Ci 0 alkyl groups optionally having a substituent,
Lは連結基を表し、  L represents a linking group,
R2は、 水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group,
R3'は、 酸性条件にすることな'く脱保護できる保護基であり、 R 3 'is a protecting group that can be deprotected without acidic conditions,
R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基であり、 1は：！〜 5の整数であり、 Each R 4 independently of one another is a methylene group or an ethylene group; Is an integer of ~ 5,
mは 5〜20， 000の整数であり、  m is an integer from 5 to 20,000,
ηは 2〜5, 000の整数であり、  η is an integer from 2 to 5,000,
yは:！〜 4, 999の整数であり、 但し、 nよりも小さレヽ。 ] 下記式 （6) またはそれらの塩で示されるブロック共重合体を製造する方 法。 m - L- ( COCHNH) n_x_y - ( COR* CHm) χ -(COCHNH)y- R2 (6)
Figure imgf000054_0001
y :! It is an integer of ~ 4,999, but less than n. ] A method for producing a block copolymer represented by the following formula (6) or a salt thereof. m - L- (COCHNH) n _ x _ y - (COR * CHm) χ - (COCHNH) y - R 2 (6)
Figure imgf000054_0001
[式中、 Ria、 Rib、 L、 R2、 R4、 1、 m、 n、 yは上記の意味を有する。 R3は、 それぞれ互いに独立して、水素原子又は R3'と同じ保護基であり、 R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 了 ミン化合物残基であり、 . [Wherein Ria, Rib, L, R 2 , R 4 , 1, m, n, y have the above meanings. R3 are each, independently of one another, are the same protecting group with a hydrogen atom or R 3 ', R 5 are each independently of the other hydroxyl, Benjiruokishi group, or a completion amine compound residue.
但し、 R3の少なくとも 1つは水素原子である力 R5の少なくとも 1つは ァミン化合物残基であるか、 またはその両方であり、 Provided that at least one of R 3 is a hydrogen atom and at least one of R 5 is an amine compound residue or both,
Xは 0〜4, 999の整数であり、 X is an integer from 0 to 4,999,
έ - ι  έ-ι
但し、 x + yは nより大きくないものとする。 ] ί  However, x + y is not larger than n. ] ί
18. R3'がトリフルォロアセチル基である、 請求項 15又は 17に記載の製造 方法。 18. The production method according to claim 15 or 17, wherein R 3 'is a trifluoroacetyl group.
19. R4がメチレン基である請求項 16又は 17に記載の製造方法。 19. The production method according to claim 16 or 17, wherein R 4 is a methylene group.
20. 変換反応、 及び/又は、 脱保護反応の後、 ァセタールを変化させない pH 領域において透析を行うことにより、 ァミノ基のすべて又は一部をプロト ン化させることを特徴とする請求項 15〜19のいずれか 1項に記載の製 造方法。  20. After conversion reaction and / or deprotection reaction, all or part of the amino group is protonated by dialysis in a pH range that does not change the acetal. The manufacturing method according to any one of the above.
21. Ria及び Ribが、 それぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 メチル 基またはェチル基である、 請求項 15〜20のいずれか 1項に記載の製造 方法。 21. The production method according to any one of claims 15 to 20, wherein Ria and Rib are each independently the same or different and are a methyl group or an ethyl group.
2 2 . — L—が、 一 （C H2) a- N H - [式中、 aは 1〜5の整数である。 ] で 示されるものである、 請求項 1 5〜2 1のいずれか 1項に記載の製造方法。 2 3 . R2が、 水素原子またはァセチル基である、 請求項 1 5〜2 2のいずれか 1項に記載の'製造方法。 2 2. — L— is one (CH 2 ) a- NH-[wherein, a is an integer of 1 to 5. The production method according to any one of claims 15 to 21, wherein the production method is as follows. 23. The production method according to any one of claims 15 to 22, wherein R 2 is a hydrogen atom or a acetyl group.
2 4 . 1が 2である、 請求項 1 5〜 2 3のいずれか 1項に記載の製造方法。 The manufacturing method according to any one of claims 15 to 23, wherein 24.1 is 2.
2 5 . 非荷電性セグメントと、 ポリアミノ酸由来のセグメントとを有するぺプチ ドブロック共重合体であって、 非荷電性セグメントの末端が重量平均分子 量 5 0〜2 0 , 0 0 0のペプチドリガンドである、 ペプチドブロック共重 合体。  25. A peptide block copolymer having an uncharged segment and a segment derived from a polyamino acid, wherein the terminal of the uncharged segment has a weight average molecular weight of 50 to 20, 0 0 0 A peptide block copolymer that is a ligand.
2 6 . 非荷電性セグメントがポリエチレングリコールまたはその誘導体である、 請求項 2 5に記載のぺプチドブロック共重合体。 26. The peptide block copolymer according to claim 25, wherein the non-chargeable segment is polyethylene glycol or a derivative thereof.
2 7 . ポリアミノ酸由来のセグメントが、 ポリリジン、 ポリ リジン誘導体、 ポリ ァスパラギン酸誘導体、 ポリグルタミン酸誘導体、 及ぴ、 それらの塩から なる群より選ばれる 1種以上を含む、 請求項 2 5又は 2 6に記載のぺプチ ドブロック共重合体。 27. The segment derived from polyamino acid comprises one or more selected from the group consisting of polylysine, polylysine derivatives, polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof. The peptide block copolymer described in 1.
2 8 . ポリアミノ酸由来のセグメントが、 ポリリジン、 ポリリジン誘導体、 及び、 それらの塩からなる群より選ばれる 1種と、 ポリアスパラギン酸誘導体、 ポリグルタミン酸誘導体、 及び、 それらの塩からなる群より選ばれる 1種 以上とを含む、 請求項 2 7に記載のぺプチドブロック共重合体。  28. The polyamino acid-derived segment is selected from the group consisting of polylysine, polylysine derivatives, and salts thereof, and the group consisting of polyaspartic acid derivatives, polyglutamic acid derivatives, and salts thereof The peptide block copolymer according to claim 27, comprising at least one kind.
2 9 . ペプチドプロック共重合体が下記式 （8 ) で示されるものである、 請求項 2 5に記載のぺプチドブロック共重合体。 CH(CH2)广 0— (CH2CH2Q)m 29. The peptide block copolymer according to claim 25, wherein the peptide block copolymer is represented by the following formula (8). CH (CH 2 ) 广 0— (CH 2 CH 2 Q) m
[式中、 Aは、 ペプチドリガンドを表し、 [Wherein A represents a peptide ligand,
Lは、 連結基を表し、  L represents a linking group,
Yは、 ポリアミノ酸由来のセグメントを表し、  Y represents a segment derived from polyamino acid,
R2は、 水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group,
1は、 ：！〜 5の整数であり、 .  1:! Is an integer of ~ 5.
mは、 5〜20， 000の整数である。 ]  m is an integer of 5 to 20,000. ]
30. Aが、 1個〜 200個のアミノ酸残基を有するペプチドである、 請求項 2 9に記載のぺプチドブロック共重合体。 30. The peptide block copolymer according to claim 29, wherein A is a peptide having 1 to 200 amino acid residues.
3 1. Aが、 インテグリンと特異的に結合することができるペプチドである、 請 求項 29又は 30に記載のぺプチドブロック共重合体。 3 1. The peptide block copolymer according to claim 29 or 30, wherein A is a peptide capable of specifically binding to integrin.
32. Aが、 シク口 （L— A r g— G 1 y— L— A s p— D— P h e-L-L y s ) 一 Z [式中、 Zは、 任意にアミノ酸残基を表す。 ] で示されるものである、 請 求項 29に記載のぺプチドブロック共重合体。 32. A is a mouthpiece (L—A r g—G 1 y—L—A s p—D—P h e-L-L y s) i Z [wherein Z represents an amino acid residue. ] The peptide block copolymer of Claim 29 which is shown by these.
33. 前記式 （8) 中、 一L—が、 ― （CH2) a_NH_ [式中、 aは 1〜5の 整数である。 ] で示されるものである、 請求項 29〜32のいずれか 1項 に記載のぺプチドブロック共重合体。 33. In the formula (8), one L— is — (CH 2 ) a _NH_ [wherein a is an integer of 1 to 5. ] The peptide block copolymer of any one of Claims 29-32 which is shown by these.
34. 前記式 （8) 中、 R2が、 水素原子またはァセチル基である、 請求項 29 〜 33のいずれか 1項に記載のぺプチドブロック共重合体。 34. The peptide block copolymer according to any one of claims 29 to 33, wherein, in the formula (8), R 2 is a hydrogen atom or a acetyl group.
35. 前記式 （8) 中、 1が 2である、 請求項 29〜34のいずれか 1項に記載 のぺプチドブロック共重合体。 35. The peptide block copolymer according to any one of claims 29 to 34, wherein 1 is 2 in the formula (8).
36. 前記式 （8) 中、 一 Y—が、 下記式 （Y 1) で示されるものである、 請求 項 29〜 35のいずれか 1項に記載のぺプチドブロック共重合体。 36. The peptide block copolymer according to any one of claims 29 to 35, wherein in the formula (8), one Y— is represented by the following formula (Y 1).
Figure imgf000057_0001
Figure imgf000057_0001
[式中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基であり ·、 伹 し、 少なくとも 1つは水素原子であり、 ここで保護基とはァミノ基の保護基 の中で酸性条件にすることなく脱保護できるものであり、 ， [In the formula, R3, independently of each other, is a hydrogen atom or a protecting group, and at least one is a hydrogen atom, wherein the protecting group is an acidic condition in the protecting group of an amino group. It can be deprotected without making,
nは 2〜5, 000の整数である。 ]  n is an integer from 2 to 5,000. ]
37. 前記式 （8) 中、 一 Y—が、 下記式 （Y2) で示されるものである、 請求 項 29〜 35のいずれか 1項に記載のぺプチドブロック共重合体。 一 (C 37. The peptide block copolymer according to any one of claims 29 to 35, wherein in the formula (8), one Y— is represented by the following formula (Y2). One (C
Figure imgf000057_0002
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[式中、 R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基で あり、 [Wherein R4, independently of each other, is a methylene group or an ethylene group,
R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 ァ ミン化合物残基であり、 R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue,
但し、 R5の少なくとも 1っはァミン化合物残基であり、 Provided that at least one of R 5 is an amine compound residue,
nは 2〜5, 000の整数であり、  n is an integer from 2 to 5,000,
Xは 0〜5, 000の整数である力 nより大きくないものとする。 ] Let X not be greater than a force n that is an integer between 0 and 5,000. ]
3 8 . 前記式 （8 ) 中、 一 Y—が、 下記式 （Y 3 ) で示されるものである、 請 項 2 9〜3 5のいずれか 1項に記載のペプチドブロック共重合体。 一 3 8. The peptide block copolymer according to any one of claims 29 to 35, wherein in the formula (8), one Y— is represented by the following formula (Y 3). One
Figure imgf000058_0001
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[式中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基であり'、 こ こで保護基とはァミノ基の保護基の中で酸性条件にすることなく脱保護でき るものであり、 . [In the formula, each R 3 independently of one another is a hydrogen atom or a protecting group ', wherein the protecting group is a protecting group of an amino group that can be deprotected without acidic conditions. Yes,.
R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基であり、 R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 了 ミン化合物残基であり、 Each of R 4 independently represents a methylene group or ethylene group; and each of R 5 independently of each other represents a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue,
但し、 R3の少なくとも 1つは水素原子であるか、 R5の少なくとも 1つは ァミン化合物残基であるか、 またはその両方であり、 Provided that at least one of R 3 is a hydrogen atom, at least one of R 5 is an amine compound residue, or both,
nは 2〜5 , 0 0 0の整数であり、  n is an integer from 2 to 5, 0 0 0,
Xは 0〜4， 9 9 9の整数であり、  X is an integer from 0 to 4, 9 9 9,
yは:！〜 4 , 9 9 9の整数であり、  y :! ~ 4, 9 9 is an integer of 9,
但し、 yは nよりも小さく、 x + yは nより大きくないものとする。 ] However, y is smaller than n and x + y is not larger than n. ]
3 9 . R4がメチレン基である、 請求項 3 7又は 3 8に記載のペプチドブロック 共重合体。 3 9. R 4 is a methylene group, the peptide block copolymer according to claim 3 7 or 3 8.
4 0 . ァセタールをあらかじめアルデヒドに変換することをせずに、 ァセタール 末端を有する高分子とシスティン末端を有する'ぺプチドとを酸性溶液中で 混合することを特徴とする、 高分子へのペプチドリガンド導入方法。 ァセタール末端を有する高分子が、 ポリエチレングリコールまたはその誘 導体である、 請求項 4 0に記載の方法。40. A peptide ligand to a polymer, characterized by mixing a polymer having an acetal end and a peptide having a cysteine end in an acidic solution without previously converting the acetal into an aldehyde. Introduction method. The method according to claim 40, wherein the polymer having an acetal end is polyethylene glycol or an derivative thereof.
. ァセタール末端を有する高分子がポリカチオンである、 請求項 4 0に記载 の方法。The method according to claim 40, wherein the polymer having an acetal end is a polycation.
. ァセタール末端を有する高分子が、 ポリエチレングリコールとポリカチォ ンとのプロック共重合体またはグラフト共重合体である、 請求項 4 0に記 载の方法。The method according to claim 40, wherein the polymer having an acetal end is a block copolymer or a graft copolymer of polyethylene glycol and polycation.
. ァセタール末端を有する高分子が、 ポリエチレングリコールと、 ポリアミ ノ酸もしくはその誘導体、 またはそれらの塩とのブロック共重合体または グラフト共重合体である、 請求項 4 0に記載の方法。 ，The method according to claim 40, wherein the polymer having an acetal terminal is a block copolymer or a graft copolymer of polyethylene glycol and polyamino acid or a derivative thereof, or a salt thereof. ,
. 下記式 （8 ) で示されるペプチドブロック共重合体の製造方法であって、 A method for producing a peptide block copolymer represented by the following formula (8):
Figure imgf000059_0001
Figure imgf000059_0001
[式中、 Aはリガンドペプチドを表し、 [Wherein A represents a ligand peptide,
Lは連結基を表し、  L represents a linking group,
Yは、 ポリアミノ酸由来のセグメントを表し、  Y represents a segment derived from polyamino acid,
R2は、 水素原子、 保護基、 疎水性基または重合性基を表し、 R 2 represents a hydrogen atom, a protecting group, a hydrophobic group or a polymerizable group,
1は、 1〜 5の整数であり、  1 is an integer from 1 to 5,
0 0 0の整数である。 ]  It is an integer of 0 0 0. ]
下記式 （1 ) で示されるブロック共重合体と、 (CH2) ,-Ο- (GH2GH20)m—し一Y—R2 (1)
Figure imgf000060_0001
A block copolymer represented by the following formula (1): (CH 2 ), -Ο- (GH 2 GH 2 0) m — Shiichi Y—R 2 (1)
Figure imgf000060_0001
[式中、 L、 Y、 R2、 1及び mは、 上記の意味を有する。 [Wherein L, Y, R 2 , 1 and m have the above-mentioned meanings.
Ria及び Ribは、 それぞれ、 互いに独立し、 同一または異なって、 置換基を 有していてもよい Ci〜Cioアルキル基である。 ]  Ria and Rib are each a Ci to Cio alkyl group which is independent of each other and is the same or different and may have a substituent. ]
下記式 （9) で示されるペプチドと  The peptide represented by the following formula (9)
Figure imgf000060_0002
Figure imgf000060_0002
[式中、 Aは、 上記の意味を有する。 ] [Wherein A has the above-mentioned meaning. ]
を反応させることを特徴とする、 ぺプチドブロック共重合体の製造方法。 46. Aが、 1個〜 200個のアミノ酸残基を有するペプチドである、 請求項 4 5に記載の方法。  A process for producing a peptide block copolymer. 46. The method according to claim 45, wherein A is a peptide having 1 to 200 amino acid residues.
47. Aが、 インテグリンと特異的に結合することができるペプチドである、 請 求項 45又は 46に記載の方法。  47. The method according to claim 45 or 46, wherein A is a peptide capable of specifically binding to integrin.
48. Aが、 シクロ （L— A r g-G 1 y— L— A s p_D— P h e_L— Ly s) - Z [式中、 Zは、 任意にアミノ酸残基を表す。 ] で示されるものである、 請 求項 45に記載の方法。 48. A is cyclo (L—A rg-G 1 y—L—A s p —D—P h e —L — Ly s) − Z [wherein Z represents an amino acid residue. 46. The method according to claim 45, wherein:
49. 前記式 （8) 中、 一L一が、 一 （CH2) a-NH- [式中、 aは 1〜5の 整数である。 ] で示されるものである、 請求項 45〜48のいずれか 1項 に記載の方法。 49. In the above formula (8), one L is one (CH 2 ) a-NH- [wherein, a is an integer of 1 to 5. 49. The method according to any one of claims 45 to 48, wherein:
50. 前記式 （8) 中、 R2が、 水素原子またはァセチル基である、 請求項 4550. In the formula (8), R 2 is a hydrogen atom or a acetyl group.
〜 49のいずれか 1項に記載の方法。 50. The method according to any one of to 49.
5 1. 前記式 （8) 中、 1が 2である、 請求項 45〜50のいずれか 1項に記載 の方法。 5 1. The method according to any one of claims 45 to 50, wherein 1 is 2 in the formula (8).
52. 前記式 （8) 中、 一 Y—が、 下記式 （Y1) またはその塩で示されるもの である、 請求項 45〜5 1のいずれか 1項に記載の方法。 52. The method according to any one of claims 45 to 51, wherein, in the formula (8), one Y— is represented by the following formula (Y1) or a salt thereof.
Figure imgf000061_0001
Figure imgf000061_0001
[式中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基であり、 伹 し、 少なくとも 1つは水素原子であり、 ここで保護基とは、 ァミノ基の保護 基の中で酸性条件にすることなく脱保護できるものであり、 [Wherein R 3 s are each independently a hydrogen atom or a protecting group, and at least one is a hydrogen atom, wherein the protecting group is an acid among the protecting groups of the amino group. It can be deprotected without any conditions.
nは 2〜5, 000の整数である。 ]  n is an integer from 2 to 5,000. ]
53. 前記式 （8) 中、 一 Y_が、 下記式 （Υ2) またはそれらの塩で示される ものである、 請求項 45〜5 1のいずれか 1項に記載の方法。 53. The method according to any one of claims 45 to 51, wherein in the formula (8), one Y_ is represented by the following formula (Υ2) or a salt thereof.
Figure imgf000061_0002
[式中、 R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基で あり、 R 5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、 又は、 ァ ミン化合物残基であり、
Figure imgf000061_0002
[Wherein R 4 s , independently of each other, are a methylene group or an ethylene group, R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue,
但し、 R5の少なくとも 1っはァミン化合物残基であり、 Provided that at least one of R 5 is an amine compound residue,
nは 2〜5 , 0 0 0の整数であり、  n is an integer from 2 to 5, 0 0 0,
Xは 0〜5 , 0 0 0の整数である力 nより大きくないものとする。 ] 前記式 （8 ) 中、 一 Y—が、 下記式 （Y 3 ) またはそれらの塩で示される ものである、 請求項 4 5〜5 1のいずれか 1項に記載の方法。 一  X is assumed not to be larger than a force n which is an integer of 0 to 5 and 0 0 0. The method according to any one of claims 45 to 51, wherein in the formula (8), one Y— is represented by the following formula (Y 3) or a salt thereof. One
Figure imgf000062_0001
Figure imgf000062_0001
[式中、 R3は、 それぞれ互いに独立して、 水素原子又は保護基であり、 こ こで保護基とは、 ァミノ基の保護基の中で酸性条件にすることなく脱保護で きるものであり、 [In the formula, each R 3 independently represents a hydrogen atom or a protecting group, and the protecting group is a protecting group of an amino group that can be deprotected without using acidic conditions. Yes,
R4は、 それぞれ互いに独立して、 メチレン基またはエチレン基であり、R 4 s are each independently a methylene group or an ethylene group,
R5は、 それぞれ互いに独立して、 水酸基、 ベンジルォキシ基、，又は、 了 ミン化合物残基であり、 R 5 is each independently a hydroxyl group, a benzyloxy group, or an amine compound residue,
但し、 R3の少なくとも 1つは水素原子であるか、 R5の少なくとも 1つは ァミン化合物残基を含むものであるか、 またはその両方であり、 Provided that at least one of R 3 is a hydrogen atom, at least one of R 5 includes an amine compound residue, or both,
nは 2〜5 , 0 0 0の整数であり、  n is an integer from 2 to 5, 0 0 0,
Xは 0〜4， 9 9 9の整数であり、  X is an integer from 0 to 4, 9 9 9,
yは：！〜 4， 9 9 9の整数であり、 .  y :! ~ 4, 9 9 is an integer of 9.
但し、 yは nよりも小さく、 x + yは nより大きくないものとする。 ] However, y is smaller than n and x + y is not larger than n. ]
5 5 . R4がメチレン基である請求項 5 3又は 5 4に記載の方法。 5. The method according to claim 53, wherein R 4 is a methylene group.
5 6 . 請求項 2 5〜 3 9のいずれか 1項に記載のぺプチドブロック共重合体、 又 は、 請求項 4 5〜 5 5のいずれか 1項に記載された方法により得られたぺ プチドブロック共重合体と、 核酸または荷電性タンパク質とを含むことを 特徴とする、 ポリイオンコンプレックス。 5 6. A peptide block copolymer according to any one of claims 25 to 39, or a peptide obtained by the method according to any one of claims 45 to 55. A polyion complex comprising a peptide block copolymer and a nucleic acid or a charged protein.
5 7 . 前記核酸が、 遺伝子治療に用いられる遺伝子、 タンパク質をコードする遺 伝子、 D N A断片、 R N A断片、 アンチセンス D N A、 及び、 2本鎖オリ ゴ核酸からなる群より選ばれる少なくとも 1つである、 請求項 5 6記載の ポリイオンコンプレックス。  5 7. The nucleic acid is at least one selected from the group consisting of a gene used in gene therapy, a gene encoding a protein, a DNA fragment, an RNA fragment, an antisense DNA, and a double-stranded oligonucleic acid. The polyion complex according to claim 56.
5 8 . 請求項 5 6又は 5 7に記載のポリイオンコンプレックスであって、 5 8. The polyion complex according to claim 56 or 57,
コァ部とシェル部とを備えた高分子ミセルの形態を有し、  It has the form of a polymer micelle with a core part and a shell part,
前記コア部は、 核酸または荷電性タンパク質を内包し、  The core part contains a nucleic acid or a charged protein,
前記シヱル部に、 ペプチドブロック共重合体中のポリエチレンダリコー ルセグメントが主として存在し、  In the seal part, there is mainly a polyethylene darcol segment in the peptide block copolymer,
前記高分子ミセルの表層付近にぺプチドリガンドが存在する  Peptide ligand is present near the surface of the polymer micelle
ことを特徴とする、 ポリイオンコンプレックス。  A polyion complex characterized by that.
5 9 . 請求項 2 5〜 3 9のいずれか 1項に記載のペプチドブロック共重合体、 又 は、 請求項 4 5〜 5 5のいずれか 1項に記載された方法により得られたぺ プチドブロック共重合体と、 薬剤又は微粒子とを含むことを特徴とする、 複合体。  5 9. The peptide block copolymer according to any one of claims 25 to 39, or the peptide obtained by the method according to any one of claims 45 to 55. A composite comprising a block copolymer and a drug or fine particles.
6 0 . 請求項 5 9に記載の複合体であって、  6 0. The composite of claim 59,
コァ部とシェル部とを備えた高分子ミセルの形態を有し、  It has the form of a polymer micelle with a core part and a shell part,
前記コア部は、 薬剤または微粒子を内包し、 '  The core part contains a drug or fine particles, and
前記シェル部に、 ペプチドブロック共重合体中のポリエチレングリコー ルセグメントが主として存在し、 前記高分子ミセルの表層付近にぺプチドリガンドが存在する In the shell part, the polyethylene glycol segment in the peptide block copolymer is mainly present, Peptide ligand is present near the surface of the polymer micelle
ことを特徴とする、 複合体。A complex characterized by that.
. 請求項 5 6〜 5 8のいずれか 1項に記載のポリイオンコンプレックス、 又 は、 請求項 5 9又は 6 0に記載の複合体を含むことを特徴とする、 医薬組 成物。 A pharmaceutical composition comprising the polyion complex according to any one of claims 5 to 58 or the complex according to claim 59 or 60.
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