WO2011015188A1 - Device for storing and metering liquids and use thereof for detecting substances, particles, or cells - Google Patents
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Definitions
- solutes such as hormones and proteins
- they prove themselves to detect diffusible solutes such as hormones and proteins, which must be present in the sample at least in the nanogram range per ml. Not detectable remain with this method lower concentrations of solutes and particles and / or cells that can not diffuse because of their size in the immunochemical reaction space.
- Particles loaded with specific antibodies are successfully used for the accumulation of solutes. From large volumes, the target substance can thus be concentrated in a small reaction space. But also particles and / or cells can be specifically enriched with capture particles.
- Isolation and / or detection of the target substance takes place in a sequence of
- the liquids should be able to be spent in a reaction space of the device.
- the device should enable extensive mechanization.
- a cylinder (1) In a cylinder (1) are the liquids, each separated by a
- stamp (2) One end serves as a reaction space (3) and adjoins the first
- Liquid compartment (5) the other is closed by the punch (2) and houses the last liquid of the reaction sequence.
- This stamp is also the
- Reaction space (3) moves. As liquids can not be compressed practically, this movement is transmitted evenly to all punches (2).
- the stamps are characterized by two peculiarities. On the
- Reaction chamber (3) facing side are Sollperforationsstellen (7), on the side facing away from the reaction chamber (3) are devices that the
- Stamps are designed so that a uniform flow of liquids through the entire reaction space is made possible.
- the outflow of the used / spent liquids from the reaction space takes place with the stamp movement.
- the particles which recognize the desired target substances / particles / cells by means of suitable ligands, preferably antibodies, and bind to the particles.
- the sample (11) is introduced via the opening of the reaction space by piston pull into the reaction space.
- the sample processing takes place.
- the target substance can be visualized and semiquantified by means of an immunochemical reaction, or the target substance is transported out of the reaction space with the liquid of the last compartment for further processing.
- a plurality of target substances can be simultaneously isolated and detected in one processing step and in one device.
- Compartment size and suitable motor switching can be used to control reaction volumes and residence times.
- the processing is semi-automatable depending on the target substance.
- the use of a motor control makes the use in the device interesting in biological research, where, in spite of the use of user-friendly system solutions (kits), individual processes such as rinsing, separation by centrifuging, pipetting solutions still have to be carried out manually.
- Figure 1 shows the basic structure of the device with a reaction space and compartments for holding liquids. Compartments can be added or reduced as desired.
- reaction spaces By using particles of different sizes and sieve membranes (9) with a mesh size, which ensures a separation of the particles, several reaction spaces can be created. These are preferably prefabricated in the cylinder lock (see Figure 2).
- Figure 2 shows one way of compartment filling. The filling is done through the open cylinder, starting with fluid 1, which is on the stamp with
- Piston rod is spent. If the intended volume is filled, the next one becomes Stamp set and created by moving the piston rod, the corresponding space for filling the next compartment, which is closed by the next stamp, etc. If the intended number of compartments filled, the device by placing the cylinder lock with
- Outlet opening permanently (e.g., gluing) or temporarily closed.
- Figure 2 represents one possibility of compartment filling: fill the cylinder from the open end, starting with compartment 1 and fluid 1, inserting the piston 2 and filling with
Abstract
The invention relates to a disposable device, in which compartments for accommodating liquids are arranged, said compartments being separated by plungers. The plungers are provided with predetermined perforation points, which enable the liquids to come in contact with the target substance in a desired sequence and volume. The device is suitable for isolating and/or enriching and/or detecting substances from liquids.
Description
VORRICHTUNG ZUR AUFBEWAHRUNG UND DOSIERUNG VON FLÜSSIGKEITEN UND DEREN VERWENDUNG ZUM NACHWEIS VON STOFFEN, PARTIKELN ODER ZELLEN DEVICE FOR STORING AND DOSING LIQUIDS AND THEIR USE FOR DETECTING SUBSTANCES, PARTICLES OR CELLS
Beschreibung description
Biologische Forschung, Erkennung von Krankheiten und Krankheitserregern, Biological research, detection of diseases and pathogens,
Umweltbelastungen und Nahrungsmittel-Überwachung benötigen einfache Verfahren zur Isolierung und/oder Nachweis der Zielsubstanz. In Forschungslaboren besteht der Bedarf nach Einsparung von Arbeitszeit, in der Diagnostik nach einer sinnvollen Environmental stress and food monitoring require simple procedures for isolation and / or detection of the target substance. In research laboratories there is a need to save working time, in diagnostics for a meaningful
Ergänzung von automatengestützten Verfahren durch Schnellteste als Supplement of automated processes by rapid tests as
Entscheidungsgrundlage über notwendige medizinische Sofortmaßnahmen. Decision basis on necessary medical emergency measures.
Risikogefährdete Personen wie Allergiker benötigen einfache Teste zum Ausschluss von Allergenen. At-risk persons such as allergy sufferers need simple tests to exclude allergens.
Seit Jahrzehnten haben sich Streifenteste als Schnelltest in der Diagnostik For decades, strip tests have been used as a quick test in diagnostics
durchgesetzt. Sie bewähren sich zum Nachweis von diffundierbaren, gelösten Stoffen wie Hormone und Proteine, die in der Probe mindestens im Nanogramm-Bereich pro ml vorhanden seien müssen. Nicht nachweisbar bleiben mit diesen Verfahren niedrigere Konzentrationen von gelösten Stoffen und Partikel und/oder Zellen, die wegen ihrer Größe nicht in den immunchemischen Reaktionsraum diffundieren können. enforced. They prove themselves to detect diffusible solutes such as hormones and proteins, which must be present in the sample at least in the nanogram range per ml. Not detectable remain with this method lower concentrations of solutes and particles and / or cells that can not diffuse because of their size in the immunochemical reaction space.
Mit spezifischen Antikörpern beladene Partikel werden für die Anreicherung von gelösten Stoffen erfolgreich eingesetzt. Aus großen Volumina kann so die Zielsubstanz in einen kleinen Reaktionsraum konzentriert werden. Aber auch Partikel und/oder Zellen lassen sich spezifisch mit Fängerpartikeln anreichern. Particles loaded with specific antibodies are successfully used for the accumulation of solutes. From large volumes, the target substance can thus be concentrated in a small reaction space. But also particles and / or cells can be specifically enriched with capture particles.
Isolieren und/oder Detektieren der Zielsubstanz erfolgt in einer Abfolge von Isolation and / or detection of the target substance takes place in a sequence of
physikalischen und chemischen Reaktionen wie z.B. Waschen mit Puffer, Freisetzen der Zielsubstanz, Inkubation mit markierten Antikörpern, Waschen und
enzymchemische Detektion. Alle Reagenzien sind in Flüssigkeiten gelöst oder selbst flüssig. physical and chemical reactions such as washing with buffer, release of the target substance, incubation with labeled antibodies, washing and enzyme chemical detection. All reagents are dissolved in liquids or even liquid.
Es besteht die Aufgabe, eine Vorrichtung zu entwickeln, die alle notwendigen It is the task to develop a device that has all the necessary
Flüssigkeiten separiert voneinander und in der benötigten Folge enthält. Darüber hinaus sollen die Flüssigkeiten in einem Reaktionsraum der Vorrichtung verbracht werden können. Die Vorrichtung soll eine weitgehende Mechanisierung ermöglichen. Liquids separated from each other and contains in the required sequence. In addition, the liquids should be able to be spent in a reaction space of the device. The device should enable extensive mechanization.
Diese Aufgabe wird wie folgt gelöst: This task is solved as follows:
In einem Zylinder (1) befinden sich die Flüssigkeiten, jeweils getrennt durch einen In a cylinder (1) are the liquids, each separated by a
Stempel (2). Das eine Ende dient als Reaktionsraum (3) und grenzt an das ersteStamp (2). One end serves as a reaction space (3) and adjoins the first
Flüssigkeitskompartiment (5), das andere ist durch den Stempel (2) verschlossen und beherbergt die letzte Flüssigkeit der Reaktionsabfolge. Dieser Stempel dient auch derLiquid compartment (5), the other is closed by the punch (2) and houses the last liquid of the reaction sequence. This stamp is also the
Aufnahme der Kolbenstange (4). Pick up the piston rod (4).
Mit dem Druck auf die Kolbenstange (4) wird der Stempel (2) in Richtung With the pressure on the piston rod (4), the punch (2) in the direction
Reaktionsraum (3) bewegt. Da sich Flüssigkeiten praktisch nicht komprimieren lassen, wird diese Bewegung gleichmäßig auf alle Stempel (2) übertragen. Reaction space (3) moves. As liquids can not be compressed practically, this movement is transmitted evenly to all punches (2).
Die Stempel zeichnen sich durch zwei Besonderheiten aus. Auf der dem The stamps are characterized by two peculiarities. On the
Reaktionsraum (3) zugewandten Seite befinden sich Sollperforationsstellen (7), auf der dem Reaktionsraum (3) abgewandten Seite befinden sich Vorrichtungen, die die Reaction chamber (3) facing side are Sollperforationsstellen (7), on the side facing away from the reaction chamber (3) are devices that the
Perforationsstellen durchtrennen und so einen Flüssigkeitsstrom in Richtung Sever perforation points and so a liquid flow in the direction
Reaktionsraum (3) ermöglichen. Nach der Entleerung dieses Kompartiments (5) perforiert der Stempel (2) des vorherigen Kompartiments (5)den Nächsten usw. Allow reaction space (3). After emptying this compartment (5), the stamp (2) of the previous compartment (5) perforates the next, etc.
Die Oberfläche versehen mit Durchtrittsöffnungen (6) und Perforationsstellen der The surface provided with passages (6) and perforation of the
Stempel sind so gestaltet, dass ein gleichmäßiger Fluss der Flüssigkeiten durch den gesamten Reaktionsraum ermöglicht wird. Stamps are designed so that a uniform flow of liquids through the entire reaction space is made possible.
Um die Flüssigkeit des ersten Kompartiments in den Reaktionsraum zu fördern, liegt ein In order to promote the liquid of the first compartment in the reaction space, lies a
Siebstempel mit der Perforationsvorrichtung (8) unmittelbar auf dem Reaktionsraum (3).Siebstempel with the perforation device (8) directly on the reaction chamber (3).
Der Abfluss der verwendeten/verbrauchten Flüssigkeiten aus dem Reaktionsraum erfolgt mit der Stempelbewegung.
Im Reaktionsraum befinden sich die Partikel, die die gewünschten Zielsubstanzen/- partikel/-zellen mittels geeigneter Liganden, vorzugsweise Antikörper erkennen und an die Partikel binden. Die Probe (11) wird über die Öffnung des Reaktionsraumes durch Kolbenzug in den Reaktionsraum verbracht. The outflow of the used / spent liquids from the reaction space takes place with the stamp movement. In the reaction space are the particles which recognize the desired target substances / particles / cells by means of suitable ligands, preferably antibodies, and bind to the particles. The sample (11) is introduced via the opening of the reaction space by piston pull into the reaction space.
Im Reaktionsraum erfolgt die Probenbearbeitung. Die Zielsubstanz kann mittels einer immunchemischen Reaktion sichtbar gemacht und semiquantifiziert werden oder die Zielsubstanz wird mit der Flüssigkeit des letzten Kompartiments zur weitern Be- oder Verarbeitung aus dem Reaktionsraum befördert. In the reaction chamber the sample processing takes place. The target substance can be visualized and semiquantified by means of an immunochemical reaction, or the target substance is transported out of the reaction space with the liquid of the last compartment for further processing.
Durch die Verwendung von Siebstempel unterschiedlicher Poren-/Maschengröße und Partikel definierter Größe können in einem Bearbeitungsgang und in einer Vorrichtung mehrere Zielsubstanzen zeitgleich isoliert und detektiert werden. Through the use of screen stamps of different pore / mesh size and particles of defined size, a plurality of target substances can be simultaneously isolated and detected in one processing step and in one device.
Über Kompartimentsgröße und geeignete Motorenschaltung (bzw. manuell) lassen sich Reaktionsvolumina und Verweilzeiten steuern. Über eine geeignete Vorrichtung und Programmschaltung ist die Bearbeitung je nach Zielsubstanz semi-automatisierbar. Die Verwendung einer Motorsteuerung macht den Einsatz in der Vorrichtung in der biologischen Forschung interessant, wo trotz des Einsatzes von anwenderfreundlichen Systemlösungen (Kits) noch immer einzelne Prozesse wie Spülen, Abtrennen durch Zentrifugieren, Lösungen pipettieren manuell durchgeführt werden müssen. Compartment size and suitable motor switching (or manual) can be used to control reaction volumes and residence times. By means of a suitable device and program switching, the processing is semi-automatable depending on the target substance. The use of a motor control makes the use in the device interesting in biological research, where, in spite of the use of user-friendly system solutions (kits), individual processes such as rinsing, separation by centrifuging, pipetting solutions still have to be carried out manually.
In der Abbildung 1 ist der prinzipielle Aufbau der Vorrichtung mit einem Reaktionsraum und Kompartimenten zur Aufnahme von Flüssigkeiten dargestellt. Kompartimente können beliebig zugefügt oder reduziert werden. Figure 1 shows the basic structure of the device with a reaction space and compartments for holding liquids. Compartments can be added or reduced as desired.
Durch die Verwendung von Partikeln unterschiedlicher Größe und Siebmembranen (9) mit einer Maschenweite, die eine Trennung der Partikel gewährleistet, können mehrere Reaktionsräume geschaffen werden. Diese sind vorzugsweise im Zylinderverschluss vorgefertigt (siehe Abbildung 2). By using particles of different sizes and sieve membranes (9) with a mesh size, which ensures a separation of the particles, several reaction spaces can be created. These are preferably prefabricated in the cylinder lock (see Figure 2).
Die Abbildung 2 stellt eine Möglichkeit der Kompartiment-Füllung dar. Das Füllen erfolgt über den offenen Zylinder, beginnend mit Flüssigkeit 1 , die auf die Stempel mit Figure 2 shows one way of compartment filling. The filling is done through the open cylinder, starting with fluid 1, which is on the stamp with
Kolbenstange verbracht wird. Ist das vorgesehene Volumen eingefüllt, wird der nächste
Stempel aufgesetzt und durch Bewegen der Kolbenstange der entsprechende Raum zum Füllen des nächsten Kompartimentes geschaffen, das durch den nächsten Stempel verschlossen wird, usw. Ist die vorgesehene Anzahl von Kompartimenten gefüllt, wird die Vorrichtung durch Aufsetzen des Zylinderverschlusses mit Piston rod is spent. If the intended volume is filled, the next one becomes Stamp set and created by moving the piston rod, the corresponding space for filling the next compartment, which is closed by the next stamp, etc. If the intended number of compartments filled, the device by placing the cylinder lock with
Auslauföffnung permanent (z.B. Verkleben) oder temporär verschlossen. Outlet opening permanently (e.g., gluing) or temporarily closed.
Weitere Möglichkeiten des Füllens der Kompartimente, so z.B. durch seitliche Öffnungen oder vom entgegen gesetzten Ende sind durch den Fachmann einfach ingenieurtechnisch umzusetzen. Other ways of filling the compartments, e.g. through lateral openings or from the opposite end are easy to implement by the skilled artisan.
Anwendungsmöglichkeiten sind: Possible applications are:
Anwendung für die Forschung zur Isolieren von Zellen, Proteine und/oder Application for research to isolate cells, proteins and / or
Nukleinsäuren. Nucleic acids.
Schnellteste für die Krankheitsdiagnostik über Substanzen, die herkömmlich angereichert werden müssen. Quick tests for disease diagnosis of substances that need to be enriched conventionally.
Schnellteste für den direkten Erregernachweis in Körperflüssigkeiten. Quick tests for direct pathogen detection in body fluids.
Schnellteste zum Nachweis von Tumorzellen in Blut, Se- und Exkreten. Quick tests for the detection of tumor cells in blood, secretions and excretions.
Schnellteste zur Bestimmung des zellulären Immunstatus. Quick tests to determine the cellular immune status.
Schnellteste zum Allergennachweis in Lebensmitteln und der Umwelt. Quick tests for allergen detection in food and the environment.
Schnellteste zur Abwehr von Gefahren (z.B. Bioterrorismus)
Quick tests to ward off dangers (eg bioterrorism)
Legende zu den Abbildungen: Legend to the pictures:
Abbildung 1: prinzipieller Aufbau der Vorrichtung Figure 1: basic structure of the device
1. Zylinder 1st cylinder
2. frei bewegliche Stempel 2. free moving stamp
3. Reaktionsraum 3rd reaction room
4. Kolbenstange 4. piston rod
5. Kompartiment mit Flüssigkeit 5. compartment with liquid
6. Durchtrittsöffnungen 6. passages
7. Membran/Soll-Perforations-Verschluss 7. Membrane / nominal perforation closure
8. Perforationsvorrichtung 8. perforation device
9. Siebmembran 9. sieve membrane
10. aktivierte feste Träger 10. activated solid carriers
11. Probe 11. Sample
Abbildung 2: stellt eine Möglichkeit der Kompartiment-Füllung dar : Füllen des Zylinders vom offenen Ende, beginnend mit Kompartiment 1 und Flüssigkeit 1 , Einsetzen des Stempel 2 und Füllen mit Figure 2: represents one possibility of compartment filling: fill the cylinder from the open end, starting with compartment 1 and fluid 1, inserting the piston 2 and filling with
Flüssigkeit 2, Einsetzen des Stempels 3 und Füllen mit Flüssigkeit 3 usw.
Liquid 2, insertion of the punch 3 and filling with liquid 3, etc.
Claims
1. Vorrichtung zur getrennten Aufbewahrung und Dosierung von Flüssigkeiten bestehend aus 1. Device for the separate storage and dosage of liquids consisting of
a. Zylinder zur Aufnahme der Flüssigkeiten a. Cylinder for holding the liquids
b. frei beweglichen Stempeln, die die Flüssigkeiten voneinander trennen c. einen Reaktionsraum zur Aufnahme fester Träger an einem Zylinderende. d. feste Träger b. freely moving punches separating liquids from each other c. a reaction space for receiving solid supports at a cylinder end. d. solid carriers
e. eine Kolbenstange am/im anderen Zylinderende zur Antriebs-Übertragung auf den ersten Stempel. e. a piston rod at / in the other cylinder end for drive transmission to the first punch.
2. Vorrichtung nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Stempel mit Soll-Perforationsstellen versehen sind. 2. Device according to claim 1, characterized in that the punches are provided with nominal perforation points.
3. Vorrichtung nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Stempel an der dem Reaktionsraum abgewandten Seite mit Vorrichtungen versehen sind, die die Sollperforationsstellen des folgenden Stempels perforieren kann um die Flüssigkeit dieses Kompartimentes in den Reaktionsraum zu entleeren. 3. Apparatus according to claim 1 and 2, characterized in that the stamp are provided on the side facing away from the reaction space with devices which can perforate the desired perforation points of the following stamp to empty the liquid of this compartment into the reaction space.
4. Vorrichtung nach Anspruch 1-3, dadurch gekennzeichnet, dass der 4. Apparatus according to claim 1-3, characterized in that the
Reaktionsraum zur Aufnahme von festen Trägern dient, an dem die Zielsubstanz aus der Probe gebunden wird. Reaction space for receiving solid carriers used, where the target substance is bound from the sample.
5. Vorrichtung nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass die festen Träger jede geometrische Form haben können, bevorzugt jedoch Partikel zur 5. The device according to claim 4, characterized in that the solid support may have any geometric shape, but preferably particles for
Anwendung kommen. Application come.
6. Vorrichtung nach Anspruch 4 und 5, dadurch gekennzeichnet, dass an die 6. Apparatus according to claim 4 and 5, characterized in that to the
Oberfläche der festen Träger kovalent oder adsorptiv Liganden gebunden sind, die die Zielsubstanz erkennen und binden. Surface of the solid support covalently or adsorptively bound ligands that recognize and bind the target substance.
7. Vorrichtung nach Anspruch 4-6, dadurch gekennzeichnet, dass die Liganden vorzugsweise Antikörper sind. 7. Device according to claim 4-6, characterized in that the ligands are preferably antibodies.
8. Vorrichtung nach Anspruch 1-7, dadurch gekennzeichnet, dass der 8. Apparatus according to claim 1-7, characterized in that the
Reaktionsraum durch Siebmembranen begrenzt wird, deren Porenweite am Zylinderende kleiner ist als der jeweilige Durchmesser der verwendeten Partikel. Reaction space is limited by sieve membranes whose pore size at the cylinder end is smaller than the respective diameter of the particles used.
9. Vorrichtung nach Anspruch 1-8, dadurch gekennzeichnet, dass durch mehrere Siebmembranen unterschiedlicher Maschenweite und Größen/Form-definierte feste Träger mehrere Reaktionsräume geschaffen werden. 9. Apparatus according to claim 1-8, characterized in that several reaction chambers are created by a plurality of sieve membranes of different mesh size and size / shape-defined solid support.
10. Vorrichtung nach Anspruch 1-9, dadurch gekennzeichnet, dass der Siebstempel der den Reaktionsraum begrenzt mit Vorrichtungen versehen ist, die die 10. The device according to claim 1-9, characterized in that the sieve temple of the reaction space is limited provided with devices that the
Sollperforationsstellen des nächsten Stempels öffnen können. Can open desired perforation points of the next stamp.
11. Vorrichtung nach Anspruch 1-10, dadurch gekennzeichnet, dass die Anordnung der verwendeten Flüssigkeiten in den Kompartimenten vom Reaktionsraum in Richtung Kolbenstange der Reihenfolge entspricht, die auch notwendig ist, wenn die Probenbehandlung in herkömmlichen Probenbehältern ausgeführt wird. 11. The device according to claim 1-10, characterized in that the arrangement of the liquids used in the compartments from the reaction space in the direction of the piston rod corresponds to the order which is also necessary when the sample treatment is carried out in conventional sample containers.
12. Vorrichtung nach Anspruch 1-11 , dadurch gekennzeichnet, dass das Füllen der Kompartimente vorzugsweise durch ein offenes Zylinderende erfolgt. 12. The device according to claim 1-11, characterized in that the filling of the compartments is preferably carried out by an open cylinder end.
13. Vorrichtung nach Anspruch 1-12, dadurch gekennzeichnet, dass der Zylinder zum besseren Befüllen der Kompartimente mit den Lösungen und der Probe eine seitliche Öffnung aufweisen kann. 13. The device according to claim 1-12, characterized in that the cylinder for better filling of the compartments with the solutions and the sample may have a lateral opening.
14. Vorrichtung nach Anspruch 1-13, dadurch gekennzeichnet, dass die seitliche Öffnung mit einem Rückschlagventil ausgestattet ist. 14. The apparatus according to claim 1-13, characterized in that the lateral opening is equipped with a check valve.
15. Verwendung der Vorrichtung gemäß Anspruch 1-14 zum Isolieren und/oder Anreichern und/oder Nachweis von Stoffen aus Flüssigkeiten. 15. Use of the device according to claim 1-14 for isolating and / or enriching and / or detection of substances from liquids.
16. Verwendung der Vorrichtung nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, dass die Stoffe Toxine, Proteine, Nukleinsäuren, Immunkomplexe, Zellorganelle, Viren, Bakterien, Protozoen, Parasiten, somatische Zellen sind. 16. Use of the device according to claim 15, characterized in that the substances are toxins, proteins, nucleic acids, immune complexes, cell organelles, viruses, bacteria, protozoa, parasites, somatic cells.
17. Verwendung nach Anspruch 15 und 16, dadurch gekennzeichnet, dass die Stoffe am festen Träger mittels bekannter, bevorzugt immunchemischer Reaktionen nachgewiesen werden. 17. Use according to claim 15 and 16, characterized in that the substances are detected on the solid support by means of known, preferably immunochemical reactions.
18. Verwendung nach Anspruch 15 und 16, dadurch gekennzeichnet, dass die Stoffe am festen Träger oder durch bekannte Reaktionen abgelöst außerhalb der Vorrichtung weiter bearbeitet werden. 18. Use according to claim 15 and 16, characterized in that the substances are processed on the solid support or detached by known reactions outside the device on.
Applications Claiming Priority (2)
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Country Status (1)
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- 2010-08-04 WO PCT/DE2010/000913 patent/WO2011015188A1/en active Application Filing
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Legal Events
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121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 10757014 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
122 | Ep: pct application non-entry in european phase |
Ref document number: 10757014 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |